CROMATOGRAFA DE CAPA DELGADA Y COLUMNA

Loboa Norma, cdigo: 0828020 Orejuela Richard, cdigo: 0829894 Laboratorio de Qumica Orgnica I-Q. Universidad del Valle. Departamento de Qumica

DATOS, CLCULOS Y RESULTADOS Cromatografa de columna: Peso Almina: 2.02g La mezcla de tientes era de color verde cuando se verti a la columna de cromatografa, pero al adicionarle disolvente (etanol), la mezcla se separ en dos sustancias de colores diferentes (azul y amarillo). La primera sustancia que baj fue la azul adicionando etanol mientras que la solucin amarilla qued en la parte superior de la almina (fase estacionaria), la solucin amarilla baj por la columna utilizando como disolvente agua.
Tabla 1: Soluciones recolectadas en la cromatografa de columna.
FASE ESTACIO NARIA

OBSERVACIONES. -TUBO # 1: El disolvente EtOH, se recolecta en este tubo ya que no haba nada que arrastrar.

FASE MVIL EtOH EtOH Tubo 2: Sln. azul Agua Tubo 3:

Sln. amarilla

Fuente: Los autores. Figura 2. Tubo # 1 con EtOH.

Agua Tubo 4: Sln.

incolora

CC
2.02g de Almina

Tubo 1:
Sln. incolora

-TUBO# 2: En este procedimiento se le adicion 3 gotas de la mezcla de tintes y en este tubo se recolect una sustancia de color azul correspondiente al azul de metileno proveniente de la descomposicin de la mezcla de tintes utilizada.

Fuente: Los autores

Fuente: Los autores. Figura 1. Fracciones obtenidas mediante CC

Fuente: Los autores Figura 3. Tubo # 2 con azul de metilno.

-TUBO# 3: La solucin obtenida es amarilla correspondiente al naranja de metilo proveniente de la mezcla de tintes utilizada.

Tabla 3: Distancias recorridas para la Placa 1-10 (etanol-agua).

Disolvente Tinte puro Mezcla 1 Mezcla 2 Tubo # 2 Tubo # 3

Fuente: Los autores

Distancia recorrida (cm) 4.0 0.0 0.0 3.9 0.0 0.0

Fuente: Los autores Figura 4. Tubo # 3 con naranja de metilo.

-TUBO# 4: Por ltimo Se recolecto el componente incoloro correspondiente al disolvente utilizado, en este caso Agua.
Fuente: Los autores Figura 6. Placa de cromatografa.

Para calcular la movilidad relativa se utiliz siguiente ecuacin: Rf =

Fuente: Los autores Figura 4. Tubo # 4 con agua. Tabla 4: Factores de retencin de la mezcla de tintes y las sustancias obtenidas en al cromatografa de columna frente a disolventes compuestos por agua y etanol.

Cromatografa de capa delgada:

Tabla 2: Distancias recorridas para la Placa 10-1 (etanol-agua).

SOLVENTE

Disolvente Tinte puro Mezcla 1 Mezcla 2 Tubo # 2 Tubo # 3

Fuente: Los autores

Distancia recorrida (cm) 4.5 0.6 0.5 4.3 0.3 0.0

10:1 EtOH:H2O CCD 1:10 EtOH:H2O

SUSTANCIA Tinte puro Mezcla de tintes Mezcla 2 Tubo #2 Tubo #3 Tinte puro Mezcla de tintes Mezcla 2 Tubo #2 Tubo #3

Rf 0.13 0.11 0.96 0.07 0.00 0.00 0.00 0.97 0.00 0.00

Fuente: Los autores

Referencia de las placas cromatogrficas: Slica gel 60 F254 Marca: Merck

Fuente: Los autores Figura 5. Cromatografa de capa delgada.

ANLISIS DE RESULTADOS Para esta prctica se emplearon dos tipos de tcnicas cromatogrficas para la separacin de mezclas e identificacin de sustancias, las cuales son cromatografa de columna y cromatografa de capa delgada. Estos mtodos involucran la transferencia reversible de un compuesto que est adsorbido en una fase estacionaria (adsorbente) a una fase mvil (disolvente) [2] que fluye a travs de la fase estacionaria. La separacin surge de las interacciones mutuas de componentes de una muestra, disolvente y adsorbente. El adsorbente est presente en un gran exceso, con una gran superficie y con sitios polares capaces de unir reversiblemente pequeas concentraciones de sustancias por un proceso esencialmente electrosttico. El disolvente compite con los componentes de la muestra por los sitios de unin. Estos componentes son desplazados reversible y continuamente en la direccin del flujo del disolvente. El proceso descrito puede escribirse como un equilibrio competitivo en donde hay una particin de los componentes entre la fase estacionaria y la fase mvil:

hidratacin y de la polaridad del disolvente).

[2]

Fuente: Los autores. Figura 7. Montaje de la tcnica de cromatografa de columna.

El principal factor para controlar el movimiento de los diferentes compuestos en un cromatograma es la polaridad del disolvente. Una lista de los disolventes ms usados en los diferentes tipos de cromatografa, en orden de polaridad creciente, se indica en la Tabla 4. Entre ms polar sea un disolvente, ms rpido es el movimiento de los compuestos y menos [7] efectiva la separacin.
Tabla 4. Disolventes comunes para cromatografa de lquidos.

Entre ms polar sea un compuesto, ms fuertemente se adsorbe en la fase estacionaria, por lo que su migracin a lo largo de ella es menor, siendo eludo (arrastrado) ms lentamente por la fase mvil, que los compuestos menos polares. De este modo, la separacin selectiva de los componentes de una muestra, por cromatografa, se debe a las diferencias en la migracin de los componentes individuales a [3] lo largo de la fase estacionaria. La cromatografa de columna es una tcnica que consiste en adicionar la mezcla a separar sobre el borde de la fase estacionaria que en ste caso fue almina bsica, la cual fue empacada uniformemente dentro de la columna (figura.7). La distribucin de los componentes entre la fase slida y lquida es determinada, adems de por la polaridad propia de cada compuesto, por el grado de actividad del adsorbente (el cual depende principalmente del grado de
Fuente:http://www.bib.uia.mx/gsdl/docdig/didactic/IngCie nciasQuimicas/lqoa001.pdf

La cromatografa de columna se emple para separar los componentes de una mezcla de tintes de color verde aguamarina, la cual contena azul de metileno (cloruro de metilionina) un compuesto heterocclico de formula C16H18N3SCl (figura. 8) y naranja de metilo (colorante azoderivado) de formula C14H14N3NaO3S (figura. 9). Estos tintes son

polares, aunque el naranja de metilo es ms polar que el azul de metileno, debido a que el naranja de metilo tiene menos carbonos (14) que es la parte no polar y tiene grupos polares como el SO3Na y dos aminas, a diferencia del azul de metileno que tiene un grupo S y tres N, adems tiene 16 carbonos que lo hacen menos polar. Para separar esta mezcla, los solventes o fases mviles empleados, fueron agua y etanol ya que lo semejante disuelve lo semejante pues son muy polares aunque el agua es ms polar que el etanol ocasionado por la constante [3] dielctrica.

son ms fuertes que las interacciones entre el etanol y el naranja de metilo gracias a la presencia de un mayor nmero de hidrgenos disponibles para llevar a cabo el enlace, adems la interaccin entre el naranja de metilo y la fase estacionaria (almina) se hizo ms fuerte debido a la alta polaridad marcada sobre el grupo SO3 , por lo que la fase estacionaria retuvo el compuesto con mayor polaridad y el menos polar fue [5] removido por el eluyente.

Fuente: Los autores. Figura. 10: Sistema cristalino hexagonal del Al2O3 Fuente: Los autores. Figura. 8: Estructura del azul de metileno.

Fuente: Los autores. Figura. 9: Estructura del naranja de metilo.

Para la mezcla de tintes se utiliz como fase estacionaria un empaquetamiento de almina bsica Al2O3 (pH= 10), este xido de aluminio tiene un empaquetamiento caracterstico (figura. 10) y un tamao muy fino que permite que el equilibrio adsorcin-desorcin se establezca de manera rpida y se produzca una mejor resolucin en la cromatografa. Adems este compuesto permiti que los componentes de la mezcla que puedan formar enlaces de hidrogeno tengan una mayor atraccin y puedan ser retenidos para la separacin de ellos, as en el momento que se adicion la mezcla de tintes con posterior incorporacin del EtOH como primer solvente, se observ que el compuesto que se arrastraba por la columna era el azul de metileno y esto se debi a que las interacciones entre este tinte y el etanol

Al finalizar la recoleccin la solucin de color azul (debido al azul de metileno), se cambi el eluyente por agua, est al poseer un momento dipolar ms grande que el EtOH, compiti con el naranja de metilo por adsorberse en los centros polares de la fase estacionaria, esto permiti un desplazamiento del tinte por las molculas de agua. Al poseer el naranja de metilo en su estructura tres tomos de oxgeno tiene la posibilidad de formar enlaces de hidrgeno con el agua. Cuando se adicion EtOH en la primera etapa, el naranja de metilo no eluy porque la fuerza entre naranja de metiloalmina fue ms fuerte que la interaccin [2] naranja de metilo - EtOH. Por otro lado, la cromatografa de capa delgada se emple para identificar las sustancias separadas de la mezcla. sta es una de las tcnicas ms comunes empleadas en un laboratorio de qumica orgnica, pues permite determinar el grado de pureza de un compuesto, comparar muestras, realizar el seguimiento de una reaccin y controlar el contenido de las fracciones obtenidas en [8] cromatografa de columna . El montaje de sta tcnica se muestra en la figura 11.

Fuente: JARAMILLO L.M. Fundamentos de la separacin y purificacin de compuestos orgnicos por mtodos de distribucin entre fases. Figura 11. Montaje de cromatografa de capa delgada. Est presente un vaso tapado y dentro de l se encuentra la mezcla de disolventes y la placa cromatogrfica.

Para llevar a cabo esta tcnica, se utiliz dos placas de cromatografa de capa fina, que tienen una capa uniforme de adsorbente slido o fase estacionaria la cual es slica. En cada una de ellas, con ayuda de un capilar, se coloc un punto de la mezcla de tintes y un punto de la solucin de tinte puro soluble en etanol. Lo mismo se hizo con los tintes obtenidos (amarillo y azul). Luego cada una de las placas se introdujeron en dos beakers diferentes que tenan una cantidad diferente de la mezcla de disolventes de elusin (etanol-agua), que se difunda por la placa para separar los componentes y as poder calcular el Rf (movilidad relativa) que es caracterstica para cada compuesto, teniendo [7] en cuenta el desplazamiento. Con esta tcnica cromatogrfica se observ que el compuesto que subi a lo largo de la placa fue el naranja de metilo y en pequeas proporciones el azul de metileno, esto se debi a que en la slica gel con su composicin (figura 12) pudo formar enlaces ms fuertes con el naranja de metilo.

Es decir, un compuesto que tenga muchos hidrgenos disponibles para formar puentes de hidrogeno, tendr una interaccin fuerte con la fase fija, en este caso el azul de metileno tiene mayor posibilidad de formar puentes de hidrogeno con la slica, adems a diferencia de la almina, la slica tiene ms oxgenos en su estructura por lo cual ser ms fcil formar el puente de hidrogeno, las propiedades absorbentes de la gel de slice se deben a los grupos hidroxilo unidos a los tomos de silicio, los cuales actan como dadores de hidrogeno formando los correspondientes enlaces puente de hidrogeno, en este caso no se necesita que la molcula sea muy polar, por el contrario se necesita que pueda formar los enlaces para mantenerse fija a pesar de que el naranja de metilo tiene la polaridad marcada sobre el grupo SO3 .; La mezcla que se utiliz para este caso fue de etanol-agua en las proporciones mostradas en la tabla 2, los dos solventes tienen polaridad marcada y gran capacidad de formar puentes de hidrogeno los cuales se forman con el naranja de metilo debido a la presencia de 3 oxgenos con [4] pares de electrones libres. Como la marca del patrn de naranja de metilo y uno de los componentes de la mezcla corri a la misma distancia, se dedujo que el tinte naranja de metilo si estaba presente en la mezcla. Se descarta que uno de los componentes de la mezcla fuera azul de metileno ya que el recorrido del patrn fue despreciable. En la segunda placa se observ que solo corri el naranja de metilo esto se debi a la gran polaridad que tiene el componente en mayor proporcin del eluyente, el cual interacciono solo con las molculas con alta polaridad. Observando los valores de Rf, parmetro que caracteriza la migracin del solvente se [5] corrobora lo mencionado anteriormente.

PREGUNTAS 1. Explique por qu y cmo se separan los compuestos de la mezcla de tintes?

Fuente: www.aldbot.com/HPLC-Analysis.htm. Figura 12: Organizacin molecular de la slica Gel.

La especie que migra de ltima, lo hace porque es ms fuertemente retenida que la

otra y por tanto se retrasa durante el proceso de migracin. Los compuestos de la mezcla de tintes se separan, porque tiene diferentes velocidades de migracin y se van aislando cada vez ms, hasta completar la separacin a medida que se les pase cantidades suficientes de fase mvil a travs de la columna, hasta lograr que cada uno de los componentes individuales llegue al final para recogerlos por [3] separado. 2. Qu es la cromatografa de columna seca? Y cmo se desarrolla? Fue una tcnica descrita por Loev y Goodman, la cual consiste en rellanar una columna clsica de cromatografa con adsorbente, sin ayuda de ningn solvente, sea que en vez de usar varios volmenes de disolvente la cromatografa de columna seca finaliza cuando el solvente alcanza el fondo de la columna al usar un solo volumen de disolvente. Este mtodo ofrece algunas ventajas como el grado y la velocidad de [1] separacin. Para el montaje de la cromatografa de columna seca se inicia rellenando un columna de vidrio o preferiblemente un tubo de nylon con almina seca o slice gel seca, la adicin de este se hace sin la presencia de ningn disolvente y tratando de disminuir al mximo los espacios que puedan quedar al adicionarse el adsorbente. El tamao de la columna se escoge dependiendo de la dificultad para separar la muestra, entre ms difcil ms grande ha de ser la columna. Posteriormente se adiciona la muestra en el tope del absorbente, se adiciona el solvente eluyente hasta que este alcance el fondo de la columna resultando un cromatograma que es revelado con una lmpara de UV observando zonas del absorbente correspondiente a los compuestos separados. La columna de nylon se marca con una pluma y se corta con un cuchillo cada zona, luego se pueden extraer los compuestos contenidos en el absorbente con [1] metanol, ter o el solvente adecuado.

3. Cul es el desarrollo mltiple y el desarrollo bidimensional de la CCD? La cromatografa de capa delgada posee un poder mximo de resolucin en una regin especfica. En separaciones difciles la resolucin puede incrementarse por desarrollo mltiple. En esta tcnica despus del primer desarrollo la placa se remueve de la cmara, se deja secar y se desarrolla otra vez en el mismo solvente. Estas separaciones son ideales para compuestos [1] con Rf menores de 0,5.

Fuente: www.aldbot.com/HPLC-Analysis.htm. Figura 13. Cromatograma de desarrollo mltiple.

La cromatografa de capa delgada en dos dimensiones puede usarse para la separacin de mezclas que contienen muchos componentes con propiedades diferentes. Esta tcnica permite trabajar con un amplio rango de condiciones ya que se efectan dos desarrollos con el mismo sistema de solventes o con dos sistemas diferentes y una gran rea disponible. Este mtodo es muy til para la separacin de [1] aminocidos.

Fuente: www.aldbot.com/HPLC-Analysis.htm. Figura 14. Cromatograma bidimensional con diferentes sistemas de solventes.

dos

4. En qu consiste la CCD preparativa? Este mtodo cromatogrfico es ideal para la separacin de pequeas muestras de compuestos ligeramente no voltiles. Adems es de gran utilidad para separar

mezclas de reaccin con el objeto de obtener muestras para estudio preliminar. Tambin para la preparacin de muestras analticas puras de productos naturales donde las cantidades aisladas son muy pequeas y de [4] mezclas complejas. La muestra a separarse se deposita en una lnea delgada sobre un lado de una placa grande y se desarrolla en una direccin perpendicular a esta lnea de manera que la mezcla se resuelva en bandas o zonas que se visualizan en forma no destructiva si los compuestos no son coloreados. El absorbente que contiene las franjas se remueve del plato y luego se extrae con un solvente polar para recuperar el compuesto orgnico. El absorbente ms utilizado en la CCD preparativa es la slica gel, tambin se pueden usar los dems adsorbentes comerciales de la CCD, igualmente se usan [1] los mismos solventes. 5. Qu es una resina de intercambio aninica? Y una resina catinica? Las resinas de intercambio inico son materiales de estructura porosa e insoluble que contienen grupos reactivos que estn asociados a iones lbiles capaces de intercambiarse con los del medio que los [2] rodea. Las resinas de intercambio inico se clasificaron en dos grandes grupos, resinas catinicas y resinas aninicas, estas pueden ser resinas catinicas fuertemente o dbilmente cidas y resinas aninicas fuertemente o dbilmente bsicas. Las resinas catinicas poseen cargas negativas e interaccionan con cargas positivas, estas generalmente son utilizadas en dos formas, en forma libre del cido o forma de hidrgeno y de forma salina, la forma de hidrgeno fijara aniones y liberar una cantidad equimolecular de iones hidrogeno a la solucin, mientras que la forma sdica se absorbern los aniones y se liberar iones sodio, entre los intercambiadores catinicos se encuentran SO3H y -CH2SO3H.

Las resinas aninicas poseen cargas positivas e interaccionan con cargas negativas, adems tienen propiedades que dependen de la fuerza bsica de la naturaleza del grupo activo y tambin de su posicin, entre las resinas aninicos se encuentran los grupos amino, -NH2 y amino [3] sustituidos. 6. Indique algunas de las aplicaciones de la cromatografa de adsorcin en columna. La cromatografa de absorcin en la que la fase mvil es un lquido que fluye a travs de un slido por efecto de la gravedad se utiliza para concentracin de trazas, separacin de iones interferentes en anlisis clsico, separaciones de iones de caractersticas similares, separacin de componentes de una sntesis orgnica, separacin de colorantes, separacin e identificacin de hioscina y de morfina, desmineralizacin del agua, preparacin de disoluciones patrn y [6] disolucin de sustancia insolubles. CONCLUSIONES La cromatografa de capa delgada es necesaria para conocer el tipo de componentes de la mezcla, sin embargo no proporciona una separacin cuantitativa; para esta es necesaria utilizar un procedimiento complementario como es la cromatografa de columna. Por medio de los valores calculados de Rf para las dos placas analizadas, se puede identificar los componentes de una mezcla, ya que estos se comparan con los valores arrojados de las posibles sustancias que se creen que estn dentro de esta. La separacin de un tinte depende de la fuerza con la que interacta cada componente de la mezcla a separar con la fase estacionaria. En ese caso las interacciones naranja de metilo - almina son las mayores debido a la alta polaridad que las interacciones azul de metilenoalmina, por lo cual el azul de metileno se separa con mayor velocidad, quedando el naranja de metilo retenido.

 Las interacciones que ocasionaron la adsorcin fueron las fuerzas de atraccin entre las molculas de fase estacionaria y de la fase mvil (EtOH) como dipolodipolo, puentes de hidrgeno y de Van der Waals. BIBLIOGRAFA [1] JARAMILLO L.M. Fundamentos de la separacin y purificacin de compuestos orgnicos por mtodos de distribucin entre fases, Cali. Departamento de Qumica, Universidad del valle; 1987. 8486pp. [2] Gmez. A., M.; Tcnicas analticas de separacin, 1ra ed., Ed. Revert, 1988, Espaa, pp. 337, 343, 485 487, 533 [3] Galagovsky L., Qumica Orgnica: Fundamentos terico prcticos para el laboratorio. 5. Buenos Aires: editorial EUDEBA; 1996. 203-206pp. [4] Algunas aplicaciones de la Cromatografa Lquida a la investigacin de protenas [Pgina Web] http://depa.pquim.unam.mx/proteinas/estr uctura/ChrAppl.html [Consultada: 02 de diciembre de 2011, 03:45pm] [5] Desmineralizadores [Pgina Web] http://webs.ono.com/desmineralizadores/ti pos.html. [Consultada el 02 de diciembre de 2011, 04:15pm]. [6] [Pgina Web] www.aldbot.com/HPLCAnalysis.htm. [Consultada el 02 de diciembre de 2011, 04:37pm]. [7] Cromatografa en capa delgada y en papel deteccin de los componentes en mezclas [Pgina Web] http://www.bib.uia.mx/gsdl/docdig/didactic/ IngCienciasQuimicas/lqoa001.pdf. [Consultada el 02 de diciembre de 2011, 05:10pm]. [8] Tcnica y sntesis en qumica inorgnica [Pgina Web] http://books.google.com.co/books?id=QdY 3wC2EiE0C&pg=PA185&lpg=PA185&dq= por+que+el+SiO2+es+polar%3F&source= bl&ots=b5hPqLTWV3&sig=lklqx2DJWOX wharJ1nknvlirnnE&hl=es&ei=Fqu3TJ3WK

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