TRNG I HC TY NGUYN KHOA Y DC --------------------

BO CO THC HNH L SINH

Gio vin hng dn: Sinh vin:

TS.Hong Vn Hu Hong Khnh Ho Nguyn Vn Tnh Mai Th Hng Vn

Lp : YK09 C (Nhm 1) klk, ngy 27 thng 05 nm 2010

BI 1:XC NH BN T BO HNG CU I.Yu cu: Phn bit cc loi mi trng ngoi Phn ng ca t bo hng cu vi cc loi mi trng trn Xc nh thnh phn no ca t bo hng cu lm cho n thay i hnh dng Xc nh c nng bn bng cch no II.L thuyt Cu trc mng t bo hng cu ging cc loi mng sinh cht khc gm 3 lp kp. Ngoi ra b mt bn trong ca mng t bo hng cu c tn ti mng li spectrin c ngun gc l cc protein dng si c trng lng l 200.000 220.000 daltol

Hnh 1.1 Mng li spectrin rng buc vi cc si actin ngn Nh c mng li ny m t bo hng cu c th thay i hnh dng (co trn hay dui di) gip chng i qua cc mao mch nh. Hnh 1.2 T bo hng cu qua cc mao mch nh

i vi t bo hng cu gi hoc nhng t bo hng cu b thoi ha chc nng th kh nng co b suy gim v vy chng lt qua cc mao mch kim sot ri b tiu hy lch. S thay i ca cc loi t bo hng cu ph thuc vo mi trng ngoi. C 3 loi mi trng ngoi: + u trng: T bo hng cu b teo li + ng trng: T bo hng cu bn vng + Nhc trng: T bo hng cu trng ln ti mt nng no th mng t bo khng cn kh nng gi vng b v v gii phng cht ni bo gi l hin tng huyt tiu

Hnh 1.3 Cc t bo trong mu

Hnh 1.4 Hin tng huyt tiu

Nhim v thc hnh: Xc nh nng nhc trng ln nht bng bao nhiu cha gy ra hin tng huyt tiu th nng chnh l nng bn. III.Ha cht v dng c ng nghim, pipette, my ly tm Dung dch NaCl 1%, nc ct, mu chng ng IV. Cch tin hnh Pha 10 dung dch vi 10 nng khc nhau thay i t 0% n 0,9%, th tch ca mi ng nghim l 10 ml ng nghim 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 NaCl 1% 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 Nc ct 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 C% 0% 0,1% 0,2% 0,3% 0,4% 0,5% 0,6% 0,7% 0,8% 0,9% V(ml) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 Th vo mi ng nghim mt git hng cu o nh ng 2 ln ri c nh trong 30 pht em ly tm vi tc 2500 vng/pht trong 5 pht Ly ra c kt qu V. Kt qu, gii thch Cc ng t 1 n 6 c mu t m ti nht dn. Nguyn nhn: do nng NaCl trong mi trng nhiu hn so vi trong t bo hng cu lm cho nc i vo lm th tch t bo tng, chng trng phng ln ri b v ra, v gii phng cc cht ra ngoi mi trng gy ra hin tng huyt tiu. Lng nc i vo cc ng nghim gim dn t ng 1 n ng 6 (v nng NaCl tng dn t ng 1 n ng 6 v th tch mi ng nghim khng i) nn cc t bo trong ng 1 b v nhiu nht lm cho dung dch c mu m nht. Ngc li ng 6 tuy nc i t mi trng vo trong t bo nhng cha gy ra hin tng huyt tiu tc l t bo hng cu trng ln ti mc ti a nhng cha v. Nng nhc trng ln nht cha gy ra hin tng huyt tiu l 0,6% Cc ng 7,8 hng cu khng b v ra lng xung y dung dch trong sut dn

ng 9: dung dch thu c trong sut, lng nc i ra v i vo t bo l nh nhau, do c s cn bng nng NaCl trong v ngoi mng t bo. Dung dch thu c trong ng 9 l dung dch ng trng.

BI 2: XC NH HM LNG ALBUMIN, GLOBULIN, PROTEIN TNG S TRONG HUYT THANH BNG PHNG PHP KHC X K I .Mc ch th nghim Xc nh hm lng Albumin v Globulin c trong huyt thanh,t xc nh h s tng quan K II.C s l thuyt Thnh phn ch yu ca mu ngi bao gm: Hng cu, hp cht v c v cc cht Khi hng cu lng to thnh huyt thanh gm: cc cht v c, hu c, proteinalbumin, protein globulin.

Hnh 2.1 Nhn albumin huyt thanh

Hnh 2.3 Globulin

C nhiu phng php xc nh Phng php khc x k l phng php dng xc nh chit xut ca dung dch Khc x k l mt h thng quang hc gm thu knh v lng knh. Khi nh sng qua lng knh s xy ra hin tng phn x, khc x nh sng.V vy khc x k hot ng da trn hin tng phn x ton phn, iu chnh gc ti sao cho thu c hin tng phn x ton phn v khi xc nh c gc phn x ton ton phn th xc nh c chit sut ri suy ra c hm lng phn trm ca cc cht. Cch o chit sut: Nh dung dch vo gia 2 lng knh mt vi git dung dch cn o iu chnh gc quay lng knh sao cho trong th trng quan st thy 2 vng sng ti r nt Mt nhn vo th trng ca knh c 2 min sng ti. S dng c iu khin chnh sao cho ranh gii khng b nha ri a ranh gii ti im gia ca vch ch X ri c gi tr chit sut th trng quan st s 2 Sau quan st trn th trng th 2 c 2 thang o. S ch ca thang o chnh l chit sut ca dung dch em o.

Hnh 2.3 Th trng c 2 min sng ti Hnh 2.4 Th trng c thang o III.Dng c Khc x k. My li tm. 5 ng nghim c nh s t 1n 5. Dung dch acid axetic 0,04N,dung dch (NH4)2SO4 bo ho ,nc ct. Dung dch huyt thanh.

Hnh 2.4. Khc x k Hnh 2.5. My ly tm IV.Cch tin hnh Cho ho cht vo cc ng nghim sau o chit sut ca dung dch thu c ng thi o chit sut ca dung dch huyt thanh v nc ct c th nh sau : ng nghim 1: Cho 1ml huyt thanh + 1ml acid axetic lc u em un si cch thu trong 30 giy, ri ly ra ngui .Sau li tm 10 pht vi 2500 vng/pht s thu c dch trong sut khng cha globulin, do globulin tc dng vi acid axetic to kt ta. em o chit sut ca dung dch trong sut, k hiu n1. ng nghim 2: Cho 1ml huyt thanh + 1ml (NH4)2SO4 bo ha lc u s thy kt ta trng. Sau li tm 3000 vng/pht trong 30 pht. Thu c dch trong sut khng cha Albumin, v (NH4)2SO4 lm Albumin kt ta .em o chit sut, k hiu n2

Hnh 4.5: 2: ng

ng 1: Huyt thanh, ng (NH4)2SO4 nghim 3: Cho 1ml acid axetic 0,04N +1ml nc ct lc u s thu c dung dch acid axetic 0,02N. em o chit sut, k hiu n3 ng nghim 4: Cho 1ml (NH4)2SO4 bo ho +1ml nc ct thu c dung dch na bo ho. em o chit sut, k hiu n4 o chit sut ca nc ct, k hiu n5 o chit sut dung dch huyt thanh, k hiu n6 Ta c cc cng thc sau:
Hm lng Albumin(%): Hm lng Globulin(%):

A G
A G

2(n 2 n4 ) 2(n1 n3 ) 0,00177 n6 [n5 + 2(n2 n4 )] = 0,00229

(1) (2)

H s tng quan

(3)

V. Kt qu : Di y l chit sut ca dung dch thu c sau 3 ln o v chit sut trung bnh sau 3 ln o. ng Ln o Ln 1 Ln 2 Ln 3 Trung bnh ng1 (n1) 1,3530 1,3560 1,3500 1,3530 ng2 (n2) 1,3890 1,3890 1,3900 1,3890 ng3 (n3) 1,3450 1,3440 1,3440 1,3440 ng4 (n4) 1,3790 1,3800 1,3780 1,3790 ng5 (n5) 1,3450 1,3470 1,3450 1,3456 ng6 (n6) 1,3706 1,3640 1,3670 1,3672

- p dng cng thc (1) ta c: A(%) =

2(n 2 n4 ) 2(n1 n3 ) 2(1.3890 1.3790) 2(1.3530 1.3440) = = 1,1299 % 0,00177 0,00177 n6 [n5 + 2(n2 n4 )] 1.3672 [1.3456 + 2(1.389 1.379)] = = 0.6987% 0,00229 0,00229

- p dng cng thc (2) ta c: G(%) =

p dng cng thc (3) K

A G

1.1299 0.6987

= 1.6171

Vy: A(%) = 1,1299 %, G(%) = 0,6987 %, K = 1.6171

BI 3:XC NH P SUT THM THU CA HUYT THANH BNG PHNG PHP PAGIERAST I. Yu cu : Nm c vai tr v ngha p sut thm thu trong c th sinh vt Nm c bn cht p sut thm thu l g? Nm c phng php bagirest xc nh p sut thm thu ca huyt thanh. II. C s l thuyt :

 i vi h thng sng, khuch tn v thm thu gi vai tr quan trng trong qu trnh trao i cht, c bit c th ngi, duy tr p sut thm thu keo ng vai tr trong vic iu tit trong mu. Ngoi ra cn c qu trnh trong vic bi tit cc cht cn b gy nn lc ha thm thc y qu trnh sinh tng hp ATP,l mt qu trnh sinh nng lng quan trng v ch yu c th sinh vt. Gi tr ca p sut thm thu thay i ty theo tng i tng sinh vt. nhng ng vt bc thp gi tr p sut thm thu thay i ty nng cc cht mi trng xung quanh. ng vt bc cao p sut thm thu t thay i,ch dao ng trong mt khong nh. V d: p sut thm thu ca huyt thanh trong c th ngi thay i trong khong 7,2 7,4 atm. Thng thng dao ng trong khong 7,35 atm. III.Bn cht : Do nng phn t cc cht ha tan gy nn, c xc nh bi s cc tiu phn (ion, phn t) c trong dung dch . V vy gi tr p sut thm thu ph thuc nng : P = CRT p sut thm thu ph thuc s lng cc tiu phn trong dung dch. iu kin quan st c hin tng thm thu: phi c s chnh lch v nng cc cht ha tan trong hai pha. mt dung dch xc nh no ,lun c mt p sut hi bo ha nng cht ha tan cng ln p sut hi bo ha cng cao. Trong thc t c th o p sut thm thu bng phng php gin tip da trn nguyn tc v s ph thuc ca p sut hi vo b mt ca dung dch c nng khc nhau. Dung dch no c p sut thm thu cao th nng ca p sut hi trn b mt cng ln. Da vo nguyn tc ny, Pagierast xy dng phng php xc nh p sut thm thu da vo s di chuyn ca bt kh gia hai cht lng c nng khc nhau. IV. Dng c : Knh hin vi Huyt thanh

Hnh 5.1. Knh hin vi quang hc a ng h n cn, Nn ng nghim (mao qun) Nc ct Dung dch NaCl 1% Lam knh V. Tin hnh :

Hnh 5.2. Huyt tng (plasma, phn mu vng)

Chun b dung dch kim tra : pha cc dung dch c nng 0,3 - 0,7 chun b tiu bn xoay knh : Ly 3ml dung dch huyt thanh ra da ng h, sau dng a 2 rt 1 trong cc dung dch kim tra, ly 1 mao qun cm nghing cht lng dng ln gia mao qun, ly ra, quay ngc. Khi cch u kia khong 0.5mm, nhng vo cht lng nghin cu, dung dch s y dung dch kim tra v v tr c v to bt kh gia, t mao qun ln lam knh, dng nn t trn ngn la n cn cho nn nng chy v dn kn 2 u mao qun, s thu c 1 tiu bn, sau quan st bng knh hin vi. Bt kh s chuyn ng v pha dung dch c nng thp (nhn di knh hin vi s ngc vi thc t) VI. Kt qu : o Ti 0,3%: bt kh di chuyn sang huyt tng. o Ti 0.4%: bt kh di chuyn sang huyt tng. o Ti 0,5%: bt kh khng di chuyn. o Ti 0,6%: bt kh di chuyn sang NaCl. o Ti 0,7%: bt kh di chuyn sang NaCl. Nng o c khi bt kh cn bng l C% = 0,5%. Chuyn i 0.5% dung dch NaCl ra nng mol:

CM =

Phn t NaCl phn ly thnh 2 ion. Do : Gi tr p sut thm thu : P = 2 x 0.0855 x 0.082 x (273 + 34) = 4.3047 atm

10.D C % . M

10.1.0, 5 = 0.0855 = 58, 5

m ol

Bi 4:XC NH NNG LNG HOT HA CA QU TRNH CO BP TIM CH TCH RI

I/ C s l thuyt Nh ta bit, mt phn ng xy ra th nguyn t, phn t tham gia phn ng phi tin li gn vi nhau to ra mt cu hnh khng gian mi. Tuy nhin khi ti mt khong cch xc nh th gia cc nguyn t, phn t xut hin lc y culng lm cn tr qu trnh hnh thnh phn t mi.Vy cn phi cung cp nng lng cho chng. Nng lng ti thiu cn phi cung cp cho cc ngun t, phn t thng c lc y culng c gi l nng lng hot ha (Ehh).

S ph thuc ca tc phn ng vo nhit c th hin qua biu thc ton hc Arenius.

Ehh RT

KT = P Z exp(

(1)

Trong : P : h s lp th (biu th cu hnh khng gian ca cc nguyn t, phn t) Z : h s va chm R : hng s kh T : nhit tuyt i Ngoi ra, ta cn biu thc lin h Vanhoff: Q10 = T (1) v (2) rt ra phng trnh ca Ehh
KT +10 KT

(2)

E 10 Ehh Ehh 10 Ehh exp hh exp Q10 = RT R (T + 10) Q10 = RT (T + 10) ln Q10 = RT (T + 10) RT (T + 10) ln Ehh = 10 Q Ehh = 0,46 RT(T+10) lg Q10

II/ Tin hnh ch trn bn m, dng dao hoc ko m rng lng ngc ch, tip tc cn thn g b mng bao tim. Xc nh ch ng mch tri, ch ng mch phi v tnh mch mu xanh pha di. Dng ch ct cht ng mch ch phi, ri n tnh mch v dng ch di ct cht ng mch ch tri hi xa tim. Ko cng si ch ng mch ch tri, dng dao m 1 ng dc. Dng ng thng tim lun thng vo ng mch ch tri v vo tm tht tri (nu c th vy ht mu trong tim th tt). Dng ch d khong 15cm ct cht pha di ch l thng c ng thng tim. Cn thn d b tim, tch ri tim ra khi c th (yu cu tim vn p 1 cch bnh thng).

 a tim vo trong bnh cn nui. cch b mt dung dch ringer khong 1cm. Ch sau 1 pht, dng ng h bm gi tnh tn s co bp ca tim. a ton b bnh m vo trong nc h nhit xung 10 oC tng ng vi thi gian ngm l 3 pht. Sau a ra ngoi tnh tn s co bp ca tim( mi ln tnh thi gian cn thc hin 3 ln)

Kt qu : Sau 3 ln o ta c bng gi tr tn s K nh sau : T+ 10=296 K T = 2860K

0

Ln 1 60 42

Ln 2 60 42

Ln 3 57 42

Trung bnh 59 42

KT +10 53 p dng cng thc (1)Q10 = KT = 23

p dng cng thc (2)Ehh = 0,46.(T+10)T.lgQ10

53 = 0,46.(273+13).(273+23).lg 23 = 14.118 (kcal/mol)

Vy nng lng hot ho ca qu trnh co bp tim ch tch ri l: 14.118 (kcal/mol).

BI 5: XC NH TNH THM MT CHIU CA DA CH Mng t bo l 1 h thng m, v vy m chng c kh nng trao i cc cht t trong ra ngoi v ngc li, dng thi o thi cc chat cn b ra ngoi mi trng. Da ch l mt trong nhng i tng kim tra tnh thm 1 chiu. I/ C s l thuyt: Da ch cu to t 2 lp: Lp ngoi : l t bo biu m c cu to t 3 8 lp t bo, lp ngoi cng lp mng cutin, c ngun gc tuyn nhy ca da ch Lp th 2 l lp t bo sng, lp th 3 l lp t bo hnh trn xp tha nhau, nh to nn khong gian bo Lp th 4: l lp t bo hnh lng tr, c nhn l hnh ovan, sp xp 1 cch xt nhau.

 Lp t bo biu m un lun pht trin thay i, chng c kh nng hp th mnh, phn ng axit yu. Lp trong: l lp m lien kt cha cc sc t mu en, chng c c im hp th yu, phn ng kim yu, c bit vi mt s cht nhum c tnh kim yu nh metylblue, da ch ch cho thm t trong ra ngoi. II/Cch tin hnh: To 2 ti da ch, mt ti ln ngc v mt ti xui, cho xanhmetylen vo 2 ti, em ngm trong dung dch sinh l, thi gian ch khong 2 ting. o v xc nh c hm lng metylblue thm qua mng bng phng php ng chun. Phng php ng chun: da vo cc nng ca cc cht bit trc, o h s hp th ( hoc h s truyn qua) bng my quang ph (thng c s dng trong ha phn tch.) sau v c th ng chun, khi bit c h s hp th ca mt dung dch bt k, ta c th xc nh c nng ca chng nh ng chun. Vi C1, 2C1, 3C1, 4C1 l cc nng tng ng vi cc h s hp th l A1, A2, A3, A4 . Ta c th nh sau:
A4

A3 A2 A1 0 C1 3C1 4C1 2C1 th biu th s lin quan gia nng v chit sut

BI 6:CC DN XUT CA HEMOGLOBIN(Hb) I.Yu cu : - Nm c cu trc v chc nng Hb. - Nm c cc dng HbO2. - Nm c dn xut Hb. II.C s l thuyt : Thnh phn chnh ca hng cu l Hb. Trong 1 t bo hng cu c khong 200 triu phn t Hb. Mt phn t Hb c th cha 9.000 nguyn t cc loi C,H,O,S,N trng lng phn t Hb l 67000 Dal Hb c cu to bi 2 thnh phn chnh : protein globin + nhm chc Hem.

Hnh 3.1. Cu trc phn t Hemoglobin v cng thc ha hc ca nhn Hem.

Hnh 3.2: Albumin + HEM Nhm chc Hem bao gm 1 nguyn t Fe++ nm gia 4 vng pyrol. Nh nguyn t ++ Fe nn t bo hng cu c kh nng thu nhn v gii phng Oxi t Phn t Hb cho cc t bo ca m. Cu trc protein globin : phc tp, cu to bi 4 chui polypeptit. Trong c 2 chui l -polypeptit v 2 chui -polypeptit, c tnh cht khc nhau. Hnh dng ca 2 chui polypeptit khi kt hp vi Oxi cng khc nhau. Chui -polypeptit khi kt hp vi oxi s b cun trn li, khi nh oxi ra, n li dui thng. Chui -polypeptit khi kt hp cng nh khi khng kt hp, hnh dng khng thay i. Oxyhemoglobin c 4 dng khc nhau: Hb4O2 Hb4O4 Hb4O6 Hb4O8 Ch c dng 4(Hb4O8) l d dng kt hp v gii phng oxi (dng bo ha oxi)

Hnh 3.2: Oxyhemoglobin

Dn xut ca n : metHemoglobin (metHb). Khi Fe++ bin i thnh Fe3+ th Hb chuyn thnh metHb: ch c kh nng kt hp m khng c kh nng gii phng oxi .v vy khi trong mu c mt lng ln MetHb th qu trnh cung cp Oxi cho cc t bo v m b suy gim gy nn hin tng thiu Oxi.

Hnh 3.3. Cu trc phn t methemoglobin. III. Dng c : 1 my ly tm, ng nghim Ha cht : K3[Fe(CN)6]:kaliferixyanua; Na2S2O3:Detionitnatri; dung dch sinh l PBS vi pH=7,2; mu chng ng. IVCch tin hnh v kt qu: - Thu nhn HbO2 : ly mu chng ng cho vo my ly tm, ly tm tc 3000 vng/pht trong 5 pht loi b huyt tng thu nhn c hng cu (hng cu lng xung, huyt tng mu vng nht ni ln).

Hnh 3.3-3.4-3.5. Mu sau khi ly tm; Ra t bo hng cu; Huyt tiu hng cu. Ly ra loi b huyt tng. Ra t bo hng cu bng dung dch PBS 3 ln bng cch em li tm 3000 vng/pht trong thi gian 5 pht. Lm huyt tiu hng cu (cho nc ct vo lc nh). Sau ly tm vi tc 3000 vng/pht trong 5 pht nhm loi b mng t bo hng cu. Thu c dch mu ti : HbO2.

Hnh 3.6. Hb02

Hnh 3.7 MetHb

-Thu nhn metHb : ly khong 3ml HbO2, sau thm vo mt vi git K3[Fe(CN)6] lc nh, thu c dung dch mu nu sm. chnh l metHb. -Thu nhn hemoglobin: ly dung dch oxyhemoglobin, th 1-2 git Na2S2O3 vo, thu c dung dch mu xanh thm, chnh l Hb. Na2S2O3 + HbO2 Hb + Na2S2O5