Phng php tch chit DNA LAO :

u bnh phm em cho vo ng phancol ly tm thng 6000 vng/ pht trong 20 pht , b nc ni thu cn khong cn khong 200 l. em votex m u bnh phm. Chun b 2 ng eppendorf cho 1 m u bnh phm . Tin hnh cc bc sau : - Ht 20 l protease + 200 l m u bnh phm vo y ng eppendorf 1,5 - Thm 200 l Buffer AL vo m u , em votex 15s. - em 560C trong 10 pht - Ly tm nh ( 8000 vng / pht trong 1 pht bng mt ly tm lnh ) loi b bt kh. - Thm 200 l cn 960 , em votex 15s. - Ht dch sang ng spin colection tube , ly tm 8000 vng /pht trong 3 pht loi b ng thu. - t ng spin sang ng thu khc , thm 500 l Buffer AW1 , em ly tm 8000 vng / pht trong 1 pht bng my ly tm lnh. Tip tc loi b ng thu. t ng spin sang ng thu khc. - Thm 500 l Buffer AW2 vo , ly tm 8000 vng / pht trong 3 pht bng my ly tm lnh. - t ng spin sang ng eppendorf 1,5 , thm 200 l Buffer AE hoc nc kh ion , yn trong 5 pht ri em ly tm 8000 vng / pht trong 1 pht bng my ly tm lnh. Loi b ng spin , DNA thu c nm trong ng eppendorf.

950C/5- (940C/30-60,70C/45-720C/45)40v - 720C/10- 40C

Mix :
Nc : 11,85 Buffer : 2,5 dNTP : 2 MgCl2 :0,5 6110 : 0,5 6110 : 0,5 1081 : 0,5 1081 :0,5

23S : 0,5 23R :0,5 Taq : 0,15 DNA :5 PHA TBE : Tris base: 27g Boric acid :13,75g EDTA : 0,5 10ml 0,14612g

Nc c t : 500ml Pha EDTA: EDTA :38,224g Nc c t : 180ml h nh p

PHA LISIS BUFFER

Tris HCl pH 5 1M : 0,5ml EDTA 0,5M : 0,5 ml SDS 10% : 1ml NaCl 6M : 1,332 ml Nc : 50ml yzoenzyme : 0,025g-1ml nc

thch 1,2 50ml T E

: 0,6 g thch agalose un cho tan thch

Th m vo 1,5 l redsafe l c cho tan ht y n p )--- ra hay c m s n lc