PRCTICA N 08- DETERMINACIN DE CIDO RICO EN SANGRE

I.- MARCO TERICO:

ACIDO URICO:
El cido rico es un compuesto
orgnico de carbono, nitrgeno, oxgeno e hidrgeno.
Su frmula qumica es C5H4N4O3. Es el producto del
desecho terminal del metabolismo purinico. Las dos
purinas, adenina y guanina, se encuentran en el
organismo principalmente como componentes de los
cidos nucleicos, cido ribonucleico (ARN) y cido
desoxirribonucleico (ADN). Normalmente existen dos
fuentes de purinas, las que se obtienen por la hidrlisis de los cidos nucleicos
ingeridos o por los endgenos. El cido rico 2-6-8-trioxipurina, se forman por la
oxidacin enzimtica de la adenina y guanina.

Valores normales de cido rico en sangre :ideal menor a 6 mg% .
Mujeres : hasta 5.5 mg%.
Hombres : hasta 6.5mg%

Clnica y Lesiones por cido rico Alto :
Un ataque agudo de gota, pie hinchado, rojizo y doloroso y en la vejez artritis crnica
tofcea(destruccin) impotencia y complicaciones. La gota en una alteracin
hereditaria del cido rico que se caracteriza por episodios artrticos agudos, y con el
tiempo, por la formacin de depsitos de cristales en varios tejidos.
Dos mecanismos son responsables : una superproduccin de cido rico, y un
mecanismos anormal de eliminacin renal que pueden actuar independiente o en
forma conjunta. A menudo no se diagnostica la gota en sus estadios tempranos, antes
de que aparezcan los cambios destructivos de la gota tofosa crnica. Su aparicin se
caracteriza por ataques agudos de dolor articular con intervalos de bienestar
completo. Estos intervalos se van acortando hasta que se llega a una artritis
deformante persistente. La artritis aguda anuncia la enfermedad, aunque
ocasionalmente un clico nefrtico puede ser la manifestacin inicial. Ataca la
articulacin metatarsofalngica del primer dedo del pie, empeine del pie, tobillo, taln,
rodilla y mano.
Gota crnica :se presenta despus de periodos variables y se caracteriza por cambios
irreversibles y deformantes de los espacios, cpsulas, tendones y bolsas articulares.
Generalmente se encuentran tofos en las estructuras cartilaginosas y los tejidos
subcutneos.
Los tofos (inflaciones nodulares): pueden aparecer en las orejas, codos, muecas,
rodillas, articulaciones de los pies. Son acumulo de cristales de cido rico y lleva a
destruccin articular. Puede depositarse en los riones y ocasionar nefritis intersticial
que puede originarinsuficiencia renal y clculos renales, sobre todo cuando alcanza
niveles superiores de 8 a 10mg%. mantenidos por largo tiempo.
La artritis gotosa no se correlaciona con el grado de hiperuricemia, ni se
presenta en las personas normales en quienes se eleva el cido rico en forma
artificial, al parecer existe una presencia evanescente de un producto del metabolismo
de las purinas que no ha sido identificado hasta la fecha.

Factores que ayudan a elevar el cido rico :
Aumenta por varios mecanismo: por defecto enzimticos, por destruccin celular
(casos cncer) traumas y por el metabolismo de protenas(purinas). Muy poco por
alimentacin.
El alcohol en cualquiera de sus tipos impide su eliminacin, por ello la gota es ms
fre- cuente en alcoholizados.
Tomar caf en exceso (mayor de 2 tcitas)
Consumir muchas caloras.
Exceso de grasas saturadas y purinas
. Someterse a periodos de ayuno.
Falta de ingesta de lquidos.
Consumo crnico de aspirina y diurticos tiazidicos.



Metabolismo del cido rico :
Eliminamos 750 mg. diarios de cido rico,
de los cuales 500 mg. son eliminados por
va renal y 250 mg. por las heces. Todo
exceso de esta cantidad permite su
acumulacin. Los humanos no disponemos
de uricasa, nica enzima que destruye el
cido rico, sin embargo se ha descrito una
uricolisis a nivel intestinal. Se ha visto
hiperuricemias asintomticas frecuentes en
familias de pacientes gotosos.
El defecto en el metabolismo de cido rico
se debe probablemente a un solo gen
autosmico dominante ya que la gota
clnica se presentaen un porcentaje
pequeo de heterocigotos. En las mujeres la
gota clnica es ms rara antes dela
menopausia, mientras que en hombre aparece con ms frecuencia entre el tercero y
cuarto decenio. No existen bases para el concepto tan generalizado de que la gota se
presenta comnmente en personas que beben vino en exceso o en aquellas que
acostumbran ingerir una alimentacin abundante. La acumulacin de cido rico en
pacientes con gota puede realizarse a travs de varios mecanismos posibles: se ha
excluido la ingestin aumentada de cidos nucleicos en la dieta; se ha descartado
como causa primaria de la gota en aumento de ladegradacin constante de cido
nucleicos endgenos, como ocurre en pacientes con gota secundaria. Por lo tanto,
quedan como posibles mecanismos la sobreproduccin del cido rico a partir de las
purinas precursoras o una alteracin en los procesos de eliminacin.








II.-OBJETIVOS
Determinar la cantidad de cido rico en sangre de nuestros compaeros en
nuestro saln

III.-MATERIALES Y REACTIVOS
3.1 Materiales
Tubos de ensayos
Gradilla
MicroPipetas
Espectrofotometro
Centrifugadora









3.2 Reactivos
Kick para analizar acido urico en sangre






IV.-PARTE EXPERIMENTAL:
























Pedimos voluntarios para que
donen sangre, para dicho anlisis
Extraemos aproximadamente
2mL de sangre
A la sangre extrada dejamos
reposar por 5 minutos aprox.
Luego llevamos a la
centrifugadora por 3 min.
Una vez centrifugada la muestra, aadimos
1mL del reactivo (calibrador)
Despus llevamos al espectrofotmetro y
anotamos los datos de absorbancia para su
posterior anlisis




V.- RESULTADOS:
ABSORVANCIA
BLANCO 0.053
ESTANDAR 0.608
TUBO 0.137

VI.- CLCULOS:






TUBO :

= 2.25%

El valor normal de acido urico en mujeres es de 2 % - 6 %, por eso concluimos que la
sangre estudiada se encuentra dentro de los valores normales.








Frmula General
VI.- CONCLUSIONES:
Se determin las concentraciones de acidourico en sangre de 5 personas, las
cuales no estn en el rango deseable, por lo que estos anlisis se hacen en
ayunas.

CUESTIONARIO

1) Explique a que se debe la coloracin azul que se obtiene al final de la
reaccin, ocurrida en la determinacin de cido rico.

El mtodo qumico clsico para la determinacin de cido rico se basa en la reduccin del cido
fosfotungstico por el cido rico para formar un complejo defosfotungstato azul. El mtodo no es
especfico para cido rico debido a que otros agentes reductores presentes en el suero o plasma
tambin producen un complejo de fosfotungstatoazul.En 1980, Fossati y col. (3) describieron un
procedimiento para el anlisis de cido rico utilizando uricasa, la cual produce perxido de
hidrgeno a partir de cido rico. El perxido de hidrgeno reacciona entonces con un compuesto
fenlico para producir un colorante rojo que puede medirse espectrofotomtricamente en el rango
visible. El procedimiento es ms especfico y el compuesto fenlicosulfonato de 3,5-dicloro-2-
hidroxibenceno (DHBS) aumenta la sensibilidad debido al alto coeficiente de absorbancia del
colorante quinoneimina producido. Este procedimiento de cido rico es una modificacin del de
Fossati

2) Enumere las causas de un incremento elevado de cido rico, no debidas
a una patologa.

1.Sobrepeso

El aumento de peso se asocia directamente al aumento de los niveles de cido rico. La obesidad
favorece que aumente la produccin y tambin disminuye la excrecin. Por el contrario, disminuir el
peso favorece la disminucin del cido rico

2. Cerveza y otros licores
Antes de dejar de comerse la ensalada, lo primero que debe de hacer es dejar las latas de cerveza. El
consumo de cerveza y otros licores, es lo que tiene mayor efecto en los niveles de cido rico.

Con solo el equivalente a una cerveza de 350 ml o 30 ml de otros licores, el riesgo de aumentarse el
cido rico se puede hasta casi duplicar. As que definitivamente si ha presentado el cido rico alto,
decirle adis la cerveza y otros licores debe ser lo primero en su lista. Sin embargo, no necesita
abstenerse por completo del alcohol. El vino no tiene ningn efecto en los niveles de cido rico, as
que una buena estrategia puede ser cambiar la cerveza por una copa de vino. Por supuesto, con
moderacin, lo cual equivale a una copa de vino al da para mujeres y dos copas para los hombres (1
copa = 150 ml).

3. Carnes rojas, pescado y mariscos.
La cantidad de protena total de la dieta no tiene efecto en los niveles de cido rico, pero s la fuente
de protena. La carne roja y el pescado son los nicos que s van a favorecer el aumento. Reducir el
consumo de stos es una de las principales acciones a tomar para prevenir la hiperuricemia y gota.
La carne roja adems es la principal fuente de grasa saturada en la dieta, la cual se asocia a resistencia
a insulina y enfermedad del corazn, por lo que definitivamente es mejor que la eviten, en especial
los embutidos derivados del cerdo (jamn, mortadela, salchichn, tocineta, etc.).El pescado es la
mejor fuente en la dieta de omega - 3, los cidos grasos protectores del corazn, pero
desafortunadamente si usted tiene el cido rico alto ms bien puede resultar contraproducente. Lo
que se recomienda es que en lugar de consumir pescado, consuma suplementos de los aceites de
pescado y aumente sus fuentes vegetales de omega - 3. Para proteccin se recomienda un
suplemento que le aporte 1 gramo de omega - 3 al da. La mayora de los suplementos en el mercado
aportan por cpsula 300 mg de omega - 3 y 1 gramo total de aceite, por lo que debera de consumir 3
cpsulas al da. Las mejores fuentes vegetales de omega - 3 son la linaza y las nueces. Estas ltimas
tambin han demostrado beneficios en ayudar a controlar los niveles de azcar en sangre, eso s
deben consumirse con moderacin, ya que son altas en caloras, unas dos cucharadas al da es lo que
se recomienda. De linaza tambin se recomienda el consumo de dos cucharadas al da de la semilla
molida, ya que as es como el cuerpo mejor la aprovecha.


4. Fructosa
El siguiente culpable de aumentar el cido rico es la fructuosa. La fructosa es el azcar principal de
las frutas, pero no son precisamente las frutas las que contribuyen al aumento de los niveles de cido
rico. El principal problema son los alimentos que traen adicionada la fructosa, los cuales de hecho se
han sealado

3) Cmo debe proceder para determinar cido rico en casos desueros
lipmicos?

El cido rico es oxidado por la uricasa en alanto El cido rico es oxidado por lauricasa en alantona
y perxido de hidrgeno. DHBS+4 amino antipirina + perxido de hidrgeno, en presencia de
peroxidasa forma un compuesto coloreado que se mide a 520 nm. La intensidad del color es
directamente proporcional a la cantidad de cido rico en la muestra.


INSTRUMENTOS
Use un espectrofotmetro o colormetro calibrado a 520 nm. (Intervalo aceptable500-540 nm.)
Para su uso en instrumentos automatizados consulte el manual de aplicaciones


SUBSTANCIAS INTERFERENTES
: Las muestras lipmicas requieren blanco de suero, la bilirrubina y el cido ascrbico pueden causar
niveles bajos falsos.

MATERIAL PROPORCIONADO
: Reactivo de uricasa y uricasa cido rico calibrador.

CONDICIONES DE LA REACCION:

Longitud de onda 520 nm.
Seleccin de filtros 500-550 nm.
Tipo de reaccin Punto final
Temperatura de incubacin 37C.
Tiempo de incubacin 5 minutos
Volumen de la muestra 0.025 ml
Volumen del reactivo 1.0 ml
Volumen total 1.025 ml
Normal bajo 1.5 mg/dl
Normal alto 7.0 mg/dl
Valor de calibrador 5.0 mg/d

PROCEDIMIENTO

Coloque 1.0 ml. del reactivo de Uricasa dentro de los tubos etiquetados como:
Blanco de reactivos, calibrador, control, muestra 1, etc.
Precaliente tubos a 37C. Por 5 minutos.
Aada 0.025 ml. de muestra a los tubos respectivos.
Incube los tubos a 37C. Por 5 minutos.
Ajuste el instrumento a cero de absorbancia a 520 nm usando blanco de reactivos.
Lea y registre los valores de absorbancia para cada muestra. NOTA: Para instrumentos de
lectura directa ajuste a cero con el blanco de reactivo y con el calibrador ajuste la mezcla del
valor del calibrador. Lea las concentraciones del problema directamente


ESTABILIDAD DE LA REACCION FINAL:
Leer las muestras 10 minutos despus de desarrollado el color.

CALIBRACION:
El calibrador del cidorico Uricasa es proporcionado. Consulte los valores asignados en la etiqueta.
No es necesario hacer curva de calibracin, la linealidad del procedimiento se extiende hasta 25
mg/dl. Valores por arriba de 25 mg/dldebern ser diluidos (1:1) con solucin salina y reensayados;
el resultado se multiplica por 2.

4) Cmo procedera para determinar cido rico utilizando UV.

El mtodo de absorcin UV de los cidos nucleicos. Introducido por Casperson en
1936.Se fundamenta en el hecho de que las bases puricas y pirimidinicas, como
consecuencia de lo0s dobles enlaces conjugados de sus anillos, absorben luz
ultravioleta en una regin que corresponde a los 260nm. Esta absorcin, depende en
parte del PH debido a las reacciones de ionizacin de las bases. Este comportamiento
de luz UV es extrapolable al ADN y al ARN.
Las protenas y algunas otras sustancias como: las bases puricas (cidorico, guanina,
etc.) y algunos derivados pirimidinicos pueden tambin absorber la luz ultravioleta en
la misma longitud de onda, pero este hecho no debe ser causa de confusin, ya que
dicha absorcin es dbil.
El ARN y el ADN absorben en la misma longitud de onda, por lo que los valores
espectrofotomtricos obtenidos suministran la cuanta global de los cidos nucleicos.
Mediante extracciones apropiadas del ARN y el ADN se conseguir discernir la
cantidad de un cido.

VII.- BIBLIOGRAFIA:
http://biosalud.saber.ula.ve/db/ssalud/edocs/articulos/Acurico.pdf
http://www.scielo.org.pe/pdf/rmh/v11n1/v11n1ao2.pdf
Devlin TM. Bioqumica. 4 ed. Barcelona. Reverte. 2004.
Lehninger. Principios de Bioqumica.4 ed. Barcelona. Omega. 2006.
Mathews CK, Van Holde KE. Bioqumica. 3a ed. Madrid. Addison Wesley. 2002