ACCION DE LAS

RADIACIONES
IONIZANTES SOBRE
LOS
MICROORGANISMOS

MICROBIOLOGIA GENERAL
BAYONA ESPINOZA VENESSA.
CONTRERAS REYNAGA KEVIN I.
HUAYHUA GIRON I. PAMELA

ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES

SOBRE LOS MICROORGANISMOS
I.

CONCEPTOS GENERALES SOBRE RADIACIONES

Qu es la radiacin?
La radiacin no es otra cosa que la emisin, propagacin y transferencia de
energa en cualquier medio en forma de ondas electromagnticas o partculas.

Tipos de radiacin
La mayora de las radiaciones son de origen electromagntico.

Cmo se caracteriza una radiacin electromagntica?

La energa que transporta una radiacin electromagntica se desplaza mediante
ondas. Esta energa no es continua, sino que se transmite agrupada en
pequeos "cuantos" de energa llamados fotones. La onda se compone de un
campo elctrico oscilante, asociado a un campo magntico tambin oscilante, y
ambos son perpendiculares a la direccin de propagacin.
Las ondas electromagnticas se caracterizan por
fundamentales: Longitud de onda, Frecuencia y Energa:

tres

parmetros

Longitud de onda (): Es la distancia entre las crestas de dos ondas

consecutivas, y se mide en unidades de longitud (m). La amplitud de la onda
depende de la potencia radiante de la fuente emisora.
Frecuencia ( o f): Es el nmero de veces que oscila una onda en un segundo y
se mide en ciclos/segundo o hercios (Hz).
Energa (E): La energa transportada por una radiacin electromagntica se
puede medir en Julios (J), aunque ms frecuentemente se mide en
electronvoltios (eV). El electronvoltio representa la energa cintica que adquiere
un electrn cuando es acelerado por una diferencia de potencial de 1 voltio.
Equivale a 1,602176462 10-19 J.
La frecuencia es directamente proporcional a la energa que transporta una
radiacin, segn la ecuacin: E = h.f, (donde h es la constante de Planck =
6,6310-34 J/s).

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Las diferentes radiaciones electromagnticas tienen diferentes energas e

interaccionan con la materia de forma distinta segn esta energa.
En el siguiente esquema se muestran los distintos tipos de radiaciones
electromagnticas ordenadas por energa. Es lo que se conoce como espectro
electromagntico. Seguro que muchas de estas radiaciones te son familiares.

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Las radiaciones electromagnticas se clasifican en dos grandes grupos en

funcin de su energa, o dicho de otra manera en funcin del tipo de cambios
que provocan en los tomos con los que interaccionan:
Radiaciones ionizantes: Corresponden a las radiaciones de mayor energa
(menor longitud de onda) dentro del espectro electromagntico. Tienen energa
suficiente como para arrancar electrones de los tomos con los que
interaccionan, es decir, para producir ionizaciones.
Radiaciones no ionizantes: Estas radiaciones no tienen suficiente energa para
producir ionizaciones en los tomos con los que interaccionan y de ah su
nombre.
De todas las radiaciones electromagnticas mostradas en el esquema anterior
(espectro electromagntico) slo los rayos X y los rayos gamma tienen suficiente
energa como para producir fenmenos de ionizacin en los tomos, es decir son
radiaciones ionizantes. El resto de las radiaciones electromagnticas (ondas de
radio, microondas, rayos infrarrojos, luz visible, rayos ultravioleta)
son radiaciones no ionizantes.

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Radiaciones ionizantes
Como se ha comentado anteriormente, las radiaciones ionizantes son aquellas
que tienen suficiente energa para arrancar un electrn del tomo cuando
interaccionan con l, este fenmeno es conocido como ionizacin, de ah la
denominacin de este tipo de radiaciones.
En otros temas del apartado "Teora sobre las radiaciones" vas a encontrar ms
informacin sobre distintos aspectos de las radiaciones ionizantes, cmo, por
ejemplo, sus unidades de medida, los efectos biolgicos perjudiciales que
pueden producir, cmo podemos protegernos de dichos efectos, etc. Por eso, en
este tema slo te damos conceptos bsicos sobre ellas.
Si queremos comprender qu son las radiaciones ionizantes, tenemos que
adentrarnos en la unidad ms pequea de un elemento qumico que mantiene
su identidad o sus propiedades y que no es posible dividir mediante procesos
qumicos: EL TOMO.
El tomo est formado por un ncleo, compuesto a su vez por protones y
neutrones y por una corteza que lo rodea, en la cual se encuentran
los electrones. Las partculas subatmicas que componen el tomo no pueden
existir aisladamente salvo en condiciones muy especiales.
Los ncleos inestables, con exceso de energa, siempre tienden a estabilizarse,
por lo que tarde o temprano liberan el exceso de energa, sufriendo una
transformacin (o desintegracin). As pues, durante la transformacin se libera
una gran cantidad de energa en forma de radiaciones ionizantes, conocindose
a este fenmeno con el nombre de radiactividad.
Lgicamente cada ncleo inestable emitir su exceso de energa de forma
diferente, es decir producir distintos tipos de radiaciones ionizantes (alfa, beta
y/o gamma). Tambin hay que tener en cuenta el grado de inestabilidad, es decir
el nmero de neutrones en exceso o en defecto respecto al nmero de protones
en el ncleo, ya que cuanto ms se aleje el nmero de neutrones de la
configuracin estable, ms intensa ser la tensin y mayor la velocidad con la
que el ncleo liberar el exceso de energa.

Las radiaciones ionizantes son de tres tipos:

Partculas alfa . Son ncleos de helio (formados por dos protones y dos
neutrones). Las partculas alfa son las radiaciones ionizantes con mayor masa,
por lo que su capacidad de penetracin en la materia es limitada, no pudiendo
atravesar una hoja de papel o la piel de nuestro cuerpo. Las partculas alfa son
muy energticas.

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Partculas beta . Son electrones o positrones y poseen una masa mucho

menor que las partculas alfa, por lo que tienen mayor capacidad para penetrar
en la materia. Una partcula beta puede atravesar una hoja de papel, pero ser
detenida por una fina lmina de metal o metacrilato y por la ropa. Son menos
energticas que las partculas alfa.
Rayos gamma . Son radiaciones electromagnticas, por lo que no tienen masa
ni carga, lo que les hace tener un gran poder de penetracin en la materia. Para
detenerlas es necesaria una capa gruesa de plomo o una pared de hormign.
Los rayos gamma y los rayos X tienen las mismas propiedades, diferencindose
nicamente en su origen. Mientras que los rayos gamma se producen en el
ncleo del tomo, los rayos X proceden de las capas externas del tomo, donde
se encuentran los electrones.
Existe un cuarto tipo de radiacin ionizante, los neutrones, si bien hay que saber
que stos no son ionizantes por s mismos, es decir cuando interaccionan con la
materia no arrancan electrones. Sin embargo, cuando chocan con un ncleo
atmico pueden activarlo o hacer que ste emita una partcula cargada o un
rayo gamma, por lo que son ionizantes de forma indirecta. Los neutrones son las
radiaciones ionizantes con mayor capacidad de penetracin, por lo que para
detenerlos hace falta una gruesa pared de hormign, agua ligera y/o pesada,
grafito, berilio y/o boro-10.

II.

FUENTES DE RADIACIONES

Las radiaciones ionizantes de origen natural

La radiacin ionizante forma parte de nuestra vida cotidiana, ya que es un
agente natural con el que convivimos. Es ms, como dijo Eric J.Hall, Profesor de
la Universidad de Columbia (Nueva York): "La vida en la tierra se ha desarrollado
en presencia de radiacin. No es nada nuevo, inventado por el hombre. La
radiacin siempre ha estado aqu".
La radiacin ionizante natural (o de fondo) puede tener orgenes muy diversos:
los rayos csmicos, la tierra, el cuerpo humano o el aire que respiramos.
Alguna vez te ha cado encima un rayo de partculas de alta energa?
Esta clase de lluvia de partculas de alta energa se produce cuando rayos
csmicos energticos golpean la parte superior de la atmsfera terrestre.

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Los rayos csmicos se descubrieron en 1912 por el fsico austriaco Vctor Franz
Hess. Ahora se sabe que la mayora de los rayos csmicos son, en realidad,
ncleos atmicos de hidrgeno, helio o elementos pesados. La mayor parte de
los rayos csmicos de menor energa provienen del Sol, pero se desconoce el
origen de los rayos csmicos de muy alta energa.
Cuando los rayos csmicos interaccionan en la atmsfera terrestre con
elementos estables, se producen los denominados radionclidos cosmognicos.
Estos radionclidos son el carbono-14 (C-14), el tritio (H-3) y el berilio-7 (Be-7).
La radiacin csmica es la fuente principal de estos radionclidos en la Tierra.
La atmsfera terrestre atena la radiacin csmica, as que cuanto ms aire
haya entre nosotros y el espacio exterior ms protegidos estaremos. Por tanto,
la exposicin a la radiacin csmica depende, entre otros factores, de la altitud a
la que nos encontremos. As, durante los vuelos en aviones comerciales
recibimos ms radiacin csmica que en la superficie de la tierra. La cantidad de
radiacin csmica aumenta aproximadamente al doble cada 6.000 pies de
altitud (o cada 1.800 metros, ya que 1 pie equivale a aproximadamente 0,3
metros). La latitud tambin influye en la radiacin csmica que recibimos, ya
que el campo magntico terrestre desva la radiacin, de tal manera, que la
dosis es menor en el Ecuador que en los Polos.
El aire que respiramos es naturalmente radiactivo
El aire que respiramos contiene un gas radiactivo llamado radn, el cual se
produce cuando hay una desintegracin del elemento radiactivo uranio, que se
encuentra en la corteza terrestre. El radn es un gas invisible, inodoro, inspido,
7 veces ms pesado que el aire. Cuando el radn escapa al aire libre se dispersa
rpidamente y sus concentraciones son bajas. Sin embargo, cuando entra en un
edificio, a travs del suelo o de los propios muros, la concentracin aumenta a
menos que el edificio sea adecuadamente ventilado.
Los materiales radiactivos naturales existentes en la corteza terrestre son
absorbidos por las plantas y los animales y se disuelven en el agua. Por tanto los
alimentos y lquidos que ingerimos contienen cantidades variables, aunque
pequeas, de istopos radiactivos.
Algunos alimentos contienen ms radiactividad que otros y las personas que
toman grandes cantidades de ellos pueden recibir por tanto mayor dosis. Estos
alimentos incluyen nueces de Brasil, t, caf y pan. Esto no significa que deban
evitarse estos alimentos ya que la dosis resultante es muy pequea y no hay
evidencia de riesgo para la salud. En realidad una dieta basada en una
radiactividad mnima representara un riesgo mucho mayor debido a una
nutricin inadecuada.
Los principales radionclidos en nuestro organismo son el carbono 14 (C-14), el
tritio (H-3), y el potasio 40 (K-40). El K-40 aporta una dosis de radiacin de unos
0,2 mSv/ao.

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Las radiaciones ionizantes de origen artificial

A la radiacin ionizante de origen natural, anteriormente mencionada, se le ha
sumado la radiacin ionizante artificial que el ser humano aprendi a producir
para satisfacer sus necesidades e intereses. Ambas radiaciones, natural y
artificial, se comportan de la misma forma.
Las radiaciones ionizantes tienen muchas aplicaciones beneficiosas para el
hombre en reas tan distintas como la medicina, la conservacin del medio
ambiente, la industria, agroalimentacin, la erradicacin de plagas de insectos y
la produccin de energa. Estas aplicaciones de las radiaciones ionizantes son
descritas con ms detalle en otros temas de esta unidad didctica.
Las fuentes artificiales de radiaciones ionizantes pueden ser controladas ms
eficazmente que las fuentes naturales y de este control se encarga la proteccin
radiolgica.

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El descubrimiento de las radiaciones ionizantes artificiales

A finales de 1930 los experimentos ms comunes en fsica nuclear en Europa
consistan en poner en contacto una sustancia radiactiva y otra inerte (no
radiactiva) y estudiar lo que suceda. Dos investigadores alemanes, Walter Bothe
y Herbert Becker, bombardearon un fragmento de berilio con partculas alfa
procedentes de una fuente de radio, observando que se produca una radiacin
muy penetrante, capaz de atravesar 2 cm de plomo.
Muchos investigadores, entre ellos Frderic e Irne Joliot-Curie, pensaron que se
trataba de una nueva clase de radiacin gamma. A principios de 1932 el
matrimonio Joliot comenz a trabajar con una fuente de polonio (elemento

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descubierto por los padres de Irene, Marie y Pierre Curie). En sus experimentos
irradiaban aluminio con las partculas alfa de su fuente de polonio y observaron
que se produca una radiacin muy penetrante y de vida larga, que no se poda
explicar con los conocimientos de entonces. Dicha radiacin se detectaba an
despus de suprimir la fuente emisora de partculas alfa y su intensidad
disminua siguiendo una ley exponencial. Haban realizado uno de los
descubrimientos ms importantes de la ciencia: el de la radiactividad artificial.

La Academia de Ciencias de Suecia otorg el premio Nobel de qumica a Frderic

e Irne Joliot-Curie el 12 de diciembre de 1935 por sus trabajos sobre la sntesis
de elementos radiactivos.

III.

CLASES DE EFECTOS DE LAS RADIACIONES

Son muchas las posibles clasificaciones que se podran realizar sobre los efectos
de las radiaciones ionizantes. Sin embargo, nos vamos a referir aqu a aquella
que ms frecuentemente se utiliza en proteccin radiolgica y que hace
referencia a la transmisin celular de los efectos y a su relacin con la dosis.
En primer lugar, los efectos pueden clasificarse en:
Somticos y genticos: en funcin de si son inducidos sobre las clulas de la
lnea somtica o germinal. El dao somtico se manifiesta durante la vida
del individuo irradiado, mientras que los efectos genticos son inducidos sobre

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su descendencia. Los efectos somticos se dividen a su vez en inmediatos y

tardos, en funcin del tiempo transcurrido desde su irradiacin.
A su vez y en funcin de la incidencia que tiene la radiacin sobre los efectos,
stos se clasifican en deterministas y en estocsticos.
La Comisin Internacional de Proteccin Radiolgica, publicacin 60, 1990,
define los efectos estocsticos como aqullos para los cuales la probabilidad de
que un efecto ocurra, ms que su severidad, es funcin de la dosis, sin umbral.
Los efectos deterministas son aquellos para los cuales la severidad del efecto
vara con la dosis, siendo necesario un valor umbral).
Los efectos estocsticos se pueden presentar tanto en el individuo expuesto
(efectos estocsticos somticos, como sera en caso de la carcinognesis), como
tambin en la descendencia (efectos estocsticos hereditarios).
Al igual que en la irradiacin de clulas no germinales, las clulas germinales
irradiadas pueden experimentar efectos deterministas (esterilidad); efectos que
evidentemente no son hereditarios y por lo tanto no hemos de identificar los
efectos producidos por la irradiacin de las gnadas con los efectos genticos.
Clasificacin de los tipos de efectos biolgicos estocsticos/deterministas y
somticos/genticos:

Efectos hereditarios
Efectos somticos

Los efectos somticos inmediatos: aparecen en la persona irradiada en un

margen de tiempo que va desde unos das hasta unas pocas semanas despus
de la exposicin. Se trata de efectos deterministas y se pueden manifestar en un
tejido concreto o sobre el cuerpo considerado como un todo, bajo un sndrome
de
denominacin
especfica
(por
ejemplo,
sndrome
hematolgico,
gastrointestinal, etc.), y su severidad vara considerablemente con la dosis, tipo
de energa de la radiacin, as como la parte del cuerpo irradiada. Para estos
efectos somticos inmediatos, se supone que existe en cierta medida, un
proceso de recuperacin celular como, por ejemplo, en el caso de la fibrosis
pulmonar debida a una dosis excesiva de radiacin o los eritemas de la piel.
Los efectos somticos tardos: son aqullos que ocurren al azar dentro de
una poblacin de individuos irradiados. Son, por tanto, estocsticos, no siendo
posible en ningn caso, establecer para ellos una relacin dosis-efecto
individual. La relacin entre la induccin de una malignidad (leucemia, tumor,
etc.) y la dosis, slo podemos establecerla sobre grandes grupos de poblacin

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irradiada, como un incremento en la probabilidad de que ocurra una enfermedad

determinada por encima de su incidencia natural.
Decimos que son tardos cuando el efecto se manifiesta entre 10 y 40 aos
despus de la exposicin. Por ejemplo, es frecuente encontrar perodos de
latencia de 20-26 aos para cnceres inducidos por radiacin y de 10-15 aos en
el caso de leucemias.
Los efectos genticos afectan a la descendencia. Pueden aparecer en la primera
generacin, en cuyo caso el dao se dice que es dominante. Ms
frecuentemente el efecto se manifiesta en individuos de las generaciones
sucesivas (enfermedades hereditarias, defectos mentales, anormalidades del
esqueleto, etc.). Son efectos estocsticos, puesto que dependen de la
probabilidad de que una clula germinal con una mutacin relevante, tome parte
en la reproduccin.

IV.
4.1

EFECTOS DE LAS RADIACIONES IONIZANTES Y SUS

APLICACIONES
EFECTO DE LAS RADIACIONES IONIZANTES1

En general, los microorganismos son ms resistentes a las radiaciones ionizantes

que los seres superiores. Por ejemplo la dosis de reduccin decimal para las
endoesporas de ciertas especies de clostridium es de 2000 3000 GY y las
clulas vegetativas de la bacteria Deinococcus Radiodurans es de 2200 GY. Las
fuentes de radiaciones ionizantes son los aparatos de rayos X, los rayos y los
radioistopos como el Co60 o el Cs137.
Los efectos de las radiaciones ionizantes son letales, tanto directos como
indirectos, as como mutagnicos. Los efectos letales directos se logran a altas
dosis de radiacin, mientras que los letales indirectos y mutagnicos se
consiguen a menores dosis.
1.Efecto letal directo:
Por impacto de cuantos de radiacin ionizante sobre alguna molcula esencial
para la vida, que es el ADN (ya que obviamente es absolutamente esencial y
suministra una sola copia de la mayora de los genes bacterianos). Los daos al
ADN son, principalmente: roturas en ambas cadenas, y entrecruzamiento entre
dichas cadenas, que no puedan repararse.

2.

Efecto mutagnico:

1 http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/13agfisicos.htm#_Toc59451635

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Deriva de la produccin de daos menores al ADN que pueden repararse por

mecanismos propensos a error.

3.

Efecto letal indirecto:

Este tipo de efecto es el ms importante, y deriva de la radiolisis del agua, que

genera hidrgeno naciente (H) y radical hidroxilo (OH). El radical hidroxilo
reacciona fcilmente con macromolculas, sobre todo con ADN, provocando
roturas en ambas cadenas, lo cual se traduce en efectos de letalidad. Si,
adems, la bacteria est expuesta al oxgeno mientras se la est irradiando, el
efecto es an ms intenso, debido a que el O2 reacciona con los radicales libres,
originando cadenas de reacciones de autooxidacin, muy destructivas, y
promoviendo la formacin de perxidos y epxidos, asimismo letales.
H + O2

HO2

HO2

H2O2 + O2

4.2

APLICACIONES DE LAS RADIACIONES IONIZANTES

A.

Material farmacutico (antibiticos, hormonas, etc.)

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B.
Material mdico-quirrgico (guantes de cirujano, suturas de nylon, jeringas
desechables, agujas, bistures, catteres, prtesis, etc.)

C.
Alimentos envasados (aunque en algunos pases an sigue abierta la
polmica por parte de ciertos grupos sobre la seguridad de este tratamiento 2

Bacillus Thuringiensis

V.

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA INACTIVACION MICROBIANA

Son muchos los parmetros que determinan la resistencia microbiana a las

radiaciones ionizantes; estos factores pueden clasificarse en dos grandes
grupos: aquellos dependientes del genotipo microbiano, y aquellos dependientes
del ambiente.
Dado que en la mayora de las investigaciones publicadas se han utilizado como
medios de tratamiento alimentos concretos, y solo ocasionalmente medios
simples de laboratorio, resulta difcil discernir el efecto real de cada uno de los
factores implicados. Es por ello que trataremos de forma general la influencia de
los distintos factores en la sensibilidad microbiana a las radiaciones.

A.FACTORES DEPENDIENTES DEL MICROORGANISMO.3

Dentro de estos factores, el tipo de microorganismo y la fase de crecimiento son
las principales variables que pueden determinar la sensibilidad microbiana a las
2 http://www.gastronomiaycia.com/2008/04/27/bacterias-para-conservar-losalimentos/

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radiaciones ionizantes. En lo referente al tipo de microorganismo, podemos

concluir, como se ha comentado anteriormente, que la resistencia a las
radiaciones disminuye conforme aumenta la complejidad gentica del
organismo. As, los virus, debido al menor contenido en ADN, su menor tamao y
su bajo contenido en agua, son los ms resistentes, seguidos de las bacterias,
mohos y levaduras. Dentro de las bacterias, las clulas vegetativas son entre 10
y 50 veces ms sensibles que los esporos, posiblemente debido a que el
contenido acuoso del protoplasto es mucho ms elevado (un 70% en las clulas
vegetativas y menos de un 10% en los esporos). As, Deinococcus radiodurans
muestra una resistencia incluso mayor que los esporos bacterianos,
seguramente debido a que ha desarrollado un complejo mecanismo de
reparacin del ADN. Los enzimas de reparacin del ADN de esta especie actan
a gran velocidad prcticamente desde el mismo instante en el que se producen
los daos, y adems poseen entre 4 y 10 copias de su propio genoma
asegurando, de este modo, la integridad de alguna de las copias tras el
tratamiento. Afortunadamente la supervivencia de esta especie bacteriana al
tratamiento no parece tener ningn significado desde el punto de vista de la
salud pblica y adems no es responsable del deterioro de los alimentos.

FASE DE CRECIMIENTO
La organizacin estructural del ADN determina la sensibilidad a las radiaciones
ionizantes; as, las clulas bacterianas que estn dividindose activamente y en
las que el ADN est totalmente desplegado, son ms sensibles que aquellas que
se encuentran en la fase de latencia o en la estacionaria de crecimiento.
B.EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES4

3 http://www.catedu.es/ctamagazine/index.php?
option=com_content&view=article&id=372&catid=61%3Amarzo-2008
4 http://www.catedu.es/ctamagazine/index.php?
option=com_content&view=article&id=372&catid=61%3Amarzo-2008

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La sensibilidad de los microorganismos a las radiaciones ionizantes tambin

depende de las condiciones medioambientales, como la naturaleza del medio de
tratamiento, la temperatura del producto, la atmsfera que rodea al alimento y
la existencia de conservantes qumicos.
Naturaleza del medio de tratamiento En general, la radio resistencia de los
microorganismos en los alimentos suele ser entre 2 y 3 veces mayor que en los
medios de laboratorio (tampones); adems, el efecto protector es tanto mayor
cuanto mayor es el contenido proteico. Este ltimo efecto se ha asociado con la
conocida capacidad de las protenas para secuestrar los radicales libres
producidos por la radiolisis del agua.
Desde un punto de vista prctico, es importante recordar que la naturaleza
fsico-qumica del alimento ejerce una notable influencia en la resistencia
microbiana y que, por tanto, es muy recomendable determinar los parmetros
de tratamiento en el propio alimento que pretendemos conservar por irradiacin.
Este aspecto tiene especial importancia en alimentos deshidratados donde, al
minimizarse la radiolisis del agua, la resistencia microbiana puede llegar a
aumentar hasta 10 veces.
Temperatura del producto
De forma similar a lo que sucede en los productos deshidratados, la menor
disponibilidad de agua en los alimentos congelados minimiza los efectos
indirectos de las radiaciones ionizantes. Es por ello que la resistencia microbiana
a estos tratamientos es mayor a temperaturas de congelacin. Por ejemplo, se
ha observado que el valor D para Campylobacter jejuni en carne picada es de
0,32 k Gy a -30 0C, de 0,16 a 0-5 0C y de 0,17 a 30 0C. Estos resultados
demuestran adems que es el estado de las molculas de agua, ms que la
temperatura en s misma, lo que determina la sensibilidad de los
microorganismos a las radiaciones ionizantes. Sin embargo, esto ltimo solo es
cierto en el rango de 0 0C hasta temperatura ambiente aproximadamente,
dejando de cumplirse a mayores temperaturas.
En resumen, resulta fundamental conocer la eficacia de los tratamientos de
irradiacin tanto sobre los microorganismos como sobre las propiedades
organolpticas de los alimentos con el fin de conseguir el mximo grado de
inactivacin microbiana minimizando el impacto del tratamiento en las
propiedades sensoriales del alimento.
En general es preferible aplicar radiaciones ionizantes a alimentos deshidratados
o congelados que a los frescos ya que, aunque la resistencia microbiana es
mayor en estas condiciones, la velocidad de las reacciones qumicas
responsables de los posibles efectos adversos de la irradiacin en las
propiedades organolpticas de los alimentos es mucho menor.

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Composicin de la atmsfera de tratamiento

La presencia de oxgeno generalmente incrementa la sensibilidad microbiana a

las radiaciones ionizantes (hasta tres veces). La molcula de oxgeno, al poseer
electrones desapareados, puede participar en la formacin de radicales libres,
potenciando el efecto de los radicales hidroxilo sobre el ADN. Se ha demostrado
que la presencia de oxgeno potencia tambin la aparicin de radicales perxido
que son ms estables y dificultan la reparacin del dao celular.
La presencia de oxgeno durante la irradiacin puede producir ocasionalmente
cambios no deseados en las propiedades sensoriales de los alimentos, como la
oxidacin de lpidos. Para minimizar estos efectos adversos se ha sugerido la
aplicacin de los tratamientos a vaco o en atmsfera modificadas en las que la
aparicin de estas alteraciones se reduce y la sensibilidad microbiana a las
radiaciones se ve relativamente poco afectada. Por ejemplo, los valores D
para Escherichia coli tratada en carne de pollo a 4 C fueron de 0,35, 0,29, 0,27
y 0,23 k Gy cuando se utilizaron como atmsferas de tratamiento aire, un 100%
de CO2, vaco o nitrgeno, respectivamente. En la actualidad se considera que el
tratamiento combinado de radiaciones ionizantes a bajas dosis con un posterior
almacenamiento en atmsferas modificadas o a vaco es una de las estrategias
de conservacin ms adecuadas con esta tecnologa; se ha demostrado que un
tratamiento de 1,5 k Gy aplicado a carne de cerdo envasada en una atmsfera
de un 75% de N2 y un 25% de CO2 permite prolongar la vida til a 4 C entre 8 y
12 das y mejorar la calidad microbiolgica del producto.

Presencia de conservantes
La presencia de diversos conservantes qumicos, como el benzoato sdico,
sorbeto sdico, cloruro sdico, nisina, EDTA, etc. parece aumentar el efecto letal
de las radiaciones ionizantes. lvarez y col han observado que la adicin de 1 g/l
de cido srbico al huevo entero lquido permite reducir los valores D
de Salmonella enteritidis desde 0,50 hasta 0,31 k Gy. La mayor letalidad de las
radiaciones ionizantes en presencia de conservantes parece lgica si
consideramos que, independientemente de los efectos sobre el ADN, el
tratamiento produce daos sobre otras estructuras celulares, como la
membrana. Este efecto sinrgico puede ser debido a un mecanismo doble: por
una parte la presencia de radicales libres puede dificultar la reparacin de los
daos celulares; y por otra, el dao generado en las membranas celulares altera
su permeabilidad facilitando el acceso al citoplasma celular de los compuestos
hidrofbicos con actividad antimicrobiana.
En resumen, son muy diversos los factores medioambientales que pueden
condicionar la resistencia microbiana a las radiaciones ionizantes lo que, unido a
la existencia de dao celular, abre grandes posibilidades para el desarrollo de
procesos combinados sanitariamente ms seguros y tecnolgicamente ms
5http://www.catedu.es/ctamagazine/index.php?
option=com_content&view=article&id=372&catid=61%3Amarzo-2008

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

adecuados. Un conocimiento ms profundo de los mecanismos de muerte

microbiana sin duda ayudaran al diseo de nuevos y ms eficaces procesos
combinados y al desarrollo de modelos matemticos de inactivacin microbiana
de base biolgica, y por tanto ms fiables.
VI.

MECANISMOS DE INACTIVACION MICROBIANA

Es conveniente recordar que los efectos de las

radiaciones ionizantes sobre los materiales
biolgicos son la suma de su accin directa e
indirecta.
1. LA ACCIN DIRECTA

Es consecuencia de los cambios qumicos

producidos sobre las molculas como resultado
de la absorcin de la energa radiante, es decir,
como
consecuencia
de
la
ionizacin
desplazamiento de electrones de sus rbitas
habituales dando lugar a la formacin de iones,
radical libres y partculas excitadas. Esta
absorcin es, en principio, mayor cuanto mayor es el nmero de electrones de
los tomos de una molcula y, por tanto, cuanto mayor es su masa molecular. Al
ser los cidos nucleicos los componentes de mayor complejidad a nivel celular,
la posibilidad de que el material gentico sufra daos directos es muy elevada.
Es por ello que el ADN es una de las principales molculas diana de esta accin
directa. Una consecuencia es que la dosis letal de irradiacin para cada
organismo vivo disminuye a medida que aumenta la complejidad de su ADN.
2. LA ACCIN INDIRECTA:

6http://www.catedu.es/ctamagazine/index.php?
option=com_content&view=article&id=81&catid=94:artlos-del-mesarchivo&Itemid=41

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

La accin indirecta se debe a la interaccin de los

radicales libres formados por la accin directa de la
radiacin en los componentes celulares o del medio,
especialmente del agua con molculas vitales para la
supervivencia microbiana. El mecanismo de accin
indirecta es, segn
la mayora de los
autores,
el
principal
responsable de la
mayora de los
efectos biolgicos de la irradiacin. Este
efecto secundario es lgicamente mayor
cuanto mayor es el contenido acuoso del
medio tratado, dado que la irradiacin
provoca la formacin, a partir del agua, de
diferentes especies reactivas, como iones y
radicales. Adems, el oxgeno molecular
disuelto en el agua puede reaccionar con el
radical hidrgeno para formar radicales
hidroperxido, o con los electrones libres
para formar aniones superxido. De entre
todos los radicales formados, el ms
reactivo es el radical hidroxilo (OH-).

3. DAO E INACTIVACIN

La radiacin ionizante inactiva a las clulas

alterando algunas de las estructuras crticas
para su supervivencia; la mayora de las
veces el material gentico, como se ha comentado anteriormente. El dao a la
doble hlice afecta a la expresin de algunos genes y a la biosntesis de varias
enzimas que interfieren con la divisin celular, tanto en clulas procariotas como
eucariotas; por ello, la irradiacin es tan til para impedir la proliferacin de
microorganismos, como para inhibir la germinacin y ralentizar la maduracin de
ciertos vegetales. Finalmente, la supervivencia o muerte de la clula irradiada
vendr condicionada por la magnitud del dao infringido a las estructuras vitales
y a su capacidad de reparacin y/o eliminacin de las porciones daadas del
material gentico, aspecto este muy dependiente del organismo, como se ver
ms adelante.
Segn se ha indicado, el dao sobre el material gentico se produce como
consecuencia de una colisin directa de la energa radiante (fotn o electrn)
7 http://tratado.uninet.edu/c090104.html

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

con la cadena de ADN (accin directa), o como resultado de la interaccin con

una molcula adyacente agua en la mayora de los casos que, al ionizarse,
reacciona con el material gentico prximo (accin indirecta). El resultado final
de cualquiera de las dos acciones es la rotura de una o de las dos ramas de la
doble cadena de ADN. La ruptura completa de la doble hlice se cree poco
frecuente ya que para ello se requerira una orientacin muy concreta del ADN
en relacin con la fuente de radiacin, o que los radicales formados actuasen en
puntos muy prximos de ambas hebras de la doble hlice, circunstancia esta
tambin poco probable.
De los dos posibles mecanismos de accin de las radiaciones ionizantes, la
accin indirecta se considera actualmente la principal responsable de las
lesiones del ADN: las roturas del ADN se producen como consecuencia del
ataque de los radicales libres, formados por la radiolisis del agua, sobre la
desoxirribosa y especialmente sobre las bases nitrogenadas de la doble hlice.
Se cree que aproximadamente el 20% de los radicales libres actan a nivel de
los azcares del ADN sustrayendo los tomos de hidrgeno de la desoxirribosa y
el 80% restante a nivel de las bases nitrogenadas, siendo la base ms sensible
la timina, seguida de la citosina, la adenina y la guanina.
4. CINTICA DE INACTIVACIN MICROBIANA POR RADIACIONES IONIZANTES
8

Se representa en forma de grficas de supervivencia. Las lneas de supervivencia se

obtienen representando la fraccin de supervivientes, en escala logartmica, frente
a la dosis de radiacin absorbida, en escala lineal. A partir de los datos observados
se ha deducido que en la mayora de las ocasiones la lnea de supervivencia es
recta o, dicha en otras palabras, que la velocidad de inactivacin se mantiene
constante e independiente de la fraccin de supervivientes. Esta cintica puede
explicarse asumiendo que todas las clulas que componen la poblacin tienen la
misma resistencia a la irradiacin y que el dao que provocan las radiaciones se
produce al azar. En estas circunstancias las potenciales lesiones letales se
dispersarn aleatoriamente en la poblacin y por tanto cada componente de la
misma tendr idntica probabilidad de morir; es decir, que la cintica de muerte
bacteriana sigue un patrn semejante al de una reaccin de primer orden, con la
misma proporcin de muertes en el tiempo. En una grfica de supervivencia tpica,
tal como la que muestra la figura, el nmero de supervivientes desciende
exponencialmente con la dosis de radiacin absorbida (medida en kGy) a una
intensidad constante.

8http://www.catedu.es/ctamagazine/index.php?
option=com_content&view=article&id=81&catid=94:artlos-del-mesarchivo&Itemid=41

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Esta cintica exponencial permite definir un

parmetro, conocido como valor de reduccin
decimal o valor D -conceptualmente similar al
valor Dt de los tratamientos trmicos-, con el
que se puede comparar directamente la
radiorresistencia
de
diferentes
microorganismos y cuantificar la influencia de
un factor medioambiental en la sensibilidad
microbiana a las radiaciones ionizantes. El
valor D se define como la dosis de radiacin
(kGy) necesaria para reducir la poblacin
microbiana en un 90%, es decir un ciclo
logartmico decimal. El valor D es la inversa
negativa de la pendiente de la recta de
supervivencia y se calcula matemticamente
mediante la ecuacin:

Dnde:
N0: Es el nmero inicial de microorganismos
N: El nmero de supervivientes tras el tratamiento de irradiacin con una dosis d

MECANISMOS DE REPARACION DEL ADN

La reparacin del ADN bacteriano daado se produce bsicamente por dos
mecanismos bien diferenciados: el primero es un mecanismo rpido entre 1 y 2
minutos a 20-37 0C, o 10 minutos a 0 0C, independiente del medio de recuperacin y
que requiere que un enzima, la DNA polimerasa I, elimine y reemplace las bases
daadas para que posteriormente otro enzima, la polinucletido ligasa, una los
extremos de la cadena rota. El segundo mecanismo es lento 40 a 60 minutos a 37
0
C, dependiente del medio de recuperacin y que conlleva un proceso de
recombinacin utilizando el ADN de la hebra parental como patrn.
Un aspecto que hay que destacar es que, como consecuencia de los mecanismos de
reparacin, las radiaciones ionizantes pueden llegar a producir mutaciones,
especialmente cuando se produce la rotura de una sola hebra. Afortunadamente,
por el momento, nunca se ha observado que como consecuencia de las mutaciones
se haya inducido patogenicidad en bacterias no patgenas; de hecho, ms bien
parece ocurrir lo contrario. Se ha observado que algunas especies patgenas

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

disminuyen o incluso pierden totalmente su virulencia como consecuencia de la

mutacin. Por otra parte, la mayora de las clulas mutadas por accin de la
radiacin ionizante son ms susceptibles al estrs generado por otros factores
medioambientales; as, se ha demostrado que la irradiacin a dosis subletales -0,1
0,3 kGy, reduce hasta 5 veces la resistencia al calor de clulas del gnero
Salmonella.
Al margen de los efectos descritos sobre el material gentico, la radiacin puede
alterar tambin otros componentes y/o estructuras celulares, tales como enzimas,
componentes citoplasmticos diversos y, sobre todo, a las envolturas, cuya
permeabilidad puede alterar comprometiendo la viabilidad de la clula. As, se ha
demostrado que los radicales formados por radiolisis del agua pueden actuar sobre
los cidos grasos poliinsaturados de las membranas celulares, afectando a la
actividad de las enzimas y protenas asociadas a la membrana, ocasionando la
prdida de lquido intracelular, e incluso produciendo la ruptura de la membrana y la
posterior muerte de la clula al cabo de un cierto tiempo del tratamiento. Es decir,
las radiaciones ionizantes pueden producir distintas lesiones subletales en la clula
a muy diversos niveles, lo que puede jugar un papel fundamental en la
supervivencia de los microorganismos incluso cuando no se ha producido ningn
dao gentico irreparable. Desde un punto de vista prctico, la existencia de estos
daos subletales y su efecto sensibilizante frente a otros agentes estresantes
resultan de gran inters en la Tecnologa de los Alimentos, ya que abren la
posibilidad de desarrollar procesos combinados de conservacin. Estos procesos
sern, lgicamente, de menor intensidad y permitirn conseguir un determinado
nivel de inactivacin de la poblacin microbiana de inters, minimizando el impacto
de los tratamientos en las propiedades sensoriales del alimento.

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

VII.

EFECTOS DE LA RADIACIONES ULTRAVIOLTA

La radiacin UV se divide en tres bandas: UVA (320 a 400 nm), UVB (280 a 320),
y la UVC (200 a 280 nm). La UVA no es filtrada por la capa de ozono en el mismo
grado que la UVB y la UVC, y cantidades suficientes de la misma penetran a
travs de las nubes y de los vidrios. En un da de verano, la UVB comprende
aproximadamente el 5% de la radiacin UV, y la UVA el 95% restante. Sin
embargo la UVB es ms responsable que la UVA en producir dao biolgico, ya
que contribuye con cerca del 80% de los efectos dainos que se asocian a la
exposicin solar, la UVA slo produce el 20% restante. 9

La radiacin UV tiene un efecto letal y mutagnico, que depende de su longitud

de onda. Ello se debe a la absorcin selectiva de longitudes de onda por parte
de ciertas molculas biolgicas:

9 http://scielo.isciii.es/scielo.php?pid=S037848352006000700003&script=sci_arttext

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Las protenas tienen dos picos (es decir, mximos) de absorcin: uno a 280
nm, debido a los aminocidos aromticos (Trp, Tyr, Phe), y otro a 230 nm,
debido a los enlaces peptdicos.
El ADN y el ARN absorben a 260 nm, debido al enlace doble entre las
posiciones 4 y 5 de las bases pricas y pirimidnicas.
Los rayos UV no tienen actividad ionizante, pero provocan cambios qumicos en
las molculas absorbentes, de modo que aparecen molculas alteradas
denominadas genricamente fotoproductos. Los fotoproductos originan la
inactivacin de macromolculas, aunque, como veremos enseguida, el ADN
dispone de mecanismos para paliar o eliminar estas modificaciones
potencialmente lesivas.
Las consecuencias de inactivar protenas o ARN no se dejan sentir a efectos de
letalidad, ya que existen muchas copias de cada uno de estos tipos de
macromolculas, y se pueden volver a sintetizar. En cambio, la inactivacin del
nico cromosoma de la bacteria tiene efectos letales primarios y efectos
mutagnicos secundarios. Por lo tanto, el espectro de accin biolgica de la luz
UV equivale al de absorcin del UV por el ADN (260 nm).

a. Fotoproductos del ADN Ocasionados Por la Luz UV

Los fotoproductos generados por la luz UV en el ADN derivan principalmente de
alteraciones en las bases pirimidnicas (citosina, timina):
Los dmeros de pirimidina son los fotoproductos ms importantes en las clulas
vegetativas bacterianas. El principal es el dmero de timina (T-T), aunque
tambin se producen T-C y C-C. Como se puede observar, se trata de aductos
(uniones) entre dos pirimidinas adyacentes en la misma hebra de ADN,
mediante la creacin de un anillo de ciclobutano. Su efecto principal es la
distorsin local de la configuracin de la doble hlice, que interfiere en el normal
emparejamiento de bases complementarias; ello, a su vez, provoca una
interferencia en los procesos de replicacin y transcripcin, y secundariamente
en el crecimiento y la respiracin.

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

A dosis muy altas de rayos UV se forman tambin dmeros entre pirimidinas de

las dos cadenas, es decir, se provocan entrecruzamientos de las dos hebras que
igualmente afectan a la replicacin y a la transcripcin, aunque este tipo de
daos reviste menos significacin biolgica.
El fotoproducto de la espora es la 5-timinil-5,6-dihidrotimina, se forma en la
endospora bacteriana debido al alto grado de deshidratacin, pudiendo ejercer
igualmente efectos inactivantes. Aunque la acumulacin de fotoproductos de la
espora puede ser igual de letal que la de los dmeros de pirimidina, cuando
germina la espora se pone inmediatamente en marcha un eficiente sistema de
reparacin especfico de ese fotoproducto.10
Los hidratos de pirimidina (como la 6-hidroxi-5,6-dihidrotimina) se forman a altas
dosis de luz UV. Tienen efecto mutagnico (no letal), favoreciendo la aparicin
de transiciones T=A a C=G.
b. Mecanismos de Reparacin de los Fotoproductos
Debido al carcter esencial del ADN como molcula central informativa de los
seres vivos, la evolucin ha desarrollado una serie de mecanismos capacitados
para enfrentarse con los posibles daos ocasionados por la luz ultravioleta. Los
principales mecanismos hallados en bacterias se pueden agrupar as:
Reparacin fotoenzimtica:
Se debe a la actuacin de una enzima denominada fotoliasa o enzima
fotorreactivante, que muchas bacterias sintetizan de manera constitutiva. Las
fotoliasas reparan directamente los dmeros de pirimidina, en una reaccin que
10 http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/09esporas.htm

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

requiere luz visible de 300-500 nm de longitud de onda (luz azul). Estas enzimas
poseen dos grupos prostticos coloreados (cromforos):
-flavina reducida (FADH2)
-

una pterina.

Mecanismo
1) La primera fase del mecanismo es independiente de la luz. La fotoliasa
reconoce el dmero de pirimidina, y se une a l, formando un complejo enzimasustrato [E-S].
2) La flavina reducida (FADH2) de la fotoliasa, en presencia de luz (l=300-500),
se excita, y dona electrones al anillo de ciclobutano del dmero de pirimidina,
rompindolo, y regenerando las dos pirimidinas sin alterar.
Aunque se sabe que el segundo cromforo (la pterina) favorece la reparacin, no
est claro cul es su papel exacto.
Reparacin por escisin-resntesis
La distorsin en la doble hlice provocada por el dmero es reconocida por un
complejo proteico con actividad de endonucleasa correctora, conocido como
correndonucleasa o escinucleasa. El dao se repara indirectamente (es decir, no
se acta sobre el propio fotoproducto), sino que las bases daadas se eliminan
(se escinden) formando parte de un oligonucletido, y el hueco resultante se
rellena por resntesis reparadora de ADN.

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Mecanismo:
1) Un complejo formado por dos subunidades de la protena UvrA y una de la
UvrB (Uvr [A2B]) se une cerca del dmero de pirimidina, usando la energa de la
hidrlisis del ATP, y merced a su actividad helicasa, desenrolla localmente la
doble hlice.
2) Se une la protena UvrC, con lo que se completa el complejo Uvr [A2BC], es
decir, la correndonucleasa, unido a la cadena daada del ADN, cerca del dmero.
3) La correndonucleasa realiza dos cortes en la cadena afectada por el dmero:
corta el 8 enlace fosfodister a la izquierda del dmero (o sea, hacia el lado 5')
respecto de la localizacin del dmero y corta el 4 o 5 enlace fosfodister a la
derecha (en direccin 3' del dmero). Por lo tanto, se produce y libera un
fragmento de unos 12 nucletidos de longitud, que incluye al dmero de
pirimidina, al mismo tiempo que se retira la escinucleasa, que se separa en sus
polipptidos constituyentes.
4) Queda, pues, un hueco de cadena sencilla en el ADN. Este hueco es ocupado
ahora por la ADN-polimerasa-I y por la ADN-helicasa-II (codificada por el gen
uvrD), que llevan a la sntesis de nuevo ADN para rellenar el hueco (por
supuesto, en sentido 5' 3'), tomando como molde la cadena intacta, y usando
como cebador (primer) el extremo 3'-OH que se haba generado en la fase
anterior.
5) Finalmente, la actuacin de la ADN-ligasa sella la cadena (regeneracin del
enlace fosfodister del lado 5').

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Reparacin por recombinacin

Cuando la ADN-polimerasa-III bacteriana (que es la enzima que normalmente
replica el cromosoma) se encuentra, en la cadena que est usando como molde,
con un dmero de pirimidina, deja de replicar esa zona, y salta unos 1000
nucletidos ms adelante para seguir la replicacin. Por lo tanto, deja un gran
hueco o mella de unos 1000 nucletidos. Esta discontinuidad (llamada mella
post-replicativa) se puede rellenar por el mecanismo de reparacin por
recombinacin general, recurriendo a la protena RecA, que verifica una
recombinacin con la hebra parental homloga intacta.

Mecanismo:
1) Numerosas unidades de protena RecA recubren la zona de cadena sencilla de
la mella posreplicativa, formando estructuras helicoidales.
2) La protena RecA promueve emparejamiento homlogo de la cadena sencilla a
la que recubre con la doble cadena hermana intacta.
3) Se produce un intercambio recproco de cadenas.
4) El extremo 3'-OH libre de la cadena daada (que merced al intercambio
recproco est ahora emparejada con la cadena complementaria procedente de
la doble hlice hermana) sirve de cebador a la ADN-polimerasa-I, que sintetiza
ADN nuevo usando como molde la cadena complementaria intacta del dplex.

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

5) Ligacin e isomerizacin espontneas, que produce la llamada estructura de

Holliday, una figura en X donde hay dos sobrecruzamientos (crossing-over)
que mantienen unidos entre s a los dos duplex.
6) Resolucin de los dos sobrecruzamientos por sendas roturas y religaciones, lo
cual genera dos dobles hlices ininterrumpidas. Como se ve en la figura, uno de
estos dplex lleva el dmero de pirimidina, y el otro es una doble cadena intacta,
aunque parte de ella contiene ADN de nueva sntesis.
Como se puede ver, el mecanismo de reparacin por recombinacin no repara
por s mismo la lesin en el ADN, pero logra reparar la mella postreplicativa,
evitando que se detenga la replicacin del cromosoma. Al final del proceso el
dmero como tal sigue sin reparar, pero ahora tendr una oportunidad de ser
reparado por algn otro mecanismo, como el de escisin-resntesis.
Reparacin de emergencia (SOS) propensa a error
Cuando la bacteria se somete a dosis elevadas de luz UV o a determinados
agentes qumicos que daan severamente el ADN, o que interfieren seriamente
con la replicacin, puede ocurrir que los sistemas de reparacin que hemos visto
hasta ahora no sean suficientes para reparar todos los daos; en estas
circunstancias se pone en marcha un nuevo mecanismo, que es inducible y que
calificamos como de emergencia, ya que tiende a salvaguardar la viabilidad de
la clula, a costa de acumular mutaciones con frecuencia elevada (y por eso lo
llamamos tambin propenso a error).

Descripcin del sistema en una clula normal (no sometida a daos al ADN):
El gen lexA posee un nivel basal de expresin, de modo que codifica la protena
LexA, que acta como represor sobre su propio gen (represin autgena), as
como sobre los genes recA, uvrA, B, C, umuDC. La represin no es total, sino que

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

se da un nivel basal de produccin de los polipptidos correspondientes a estos

genes. As, por ejemplo, el nivel de protena RecA es suficiente para efectuar los
procesos normales de recombinacin, y los niveles de UvrABC son suficientes
para reparar pequeos daos en el ADN.
Descripcin del sistema en una clula severamente daada:
Una clula seriamente afectada por un agente que daa el ADN o interfiere con
su replicacin poseer zonas de cromosoma con ADN de cadena sencilla (c.s.)
sin reparar. Pues bien, este ADN de c.s. constituye una seal de situacin de
emergencia para la protena RecA: dicha protena se une a esas regiones de c.s.,
de modo que adquiere una actividad proteasa muy especfica (para distinguir
esta actividad, usamos la nomenclatura RecA*). La protena RecA* (activada
como proteasa) induce la protelisis del represor LexA (rompindolo entre dos
aminocidos concretos hacia la mitad de la molcula). Por lo tanto, ya no hay
suficiente protena LexA intacta como para seguir reprimiendo a los genes
citados (recA, uvrABC, umuDC). Dichos genes (llamados genricamente genes
SOS) se pueden expresar ahora a altos niveles, de modo que:
Aumentan los niveles de RecA, lo que conlleva un aumento de la eficiencia
de la reparacin por recombinacin;
Aumentan los niveles de la escinucleasa (Uvr [A2BC]), lo que supone
mejorar la reparacin por escisin-resntesis;
Se expresan los genes umuDC, lo que se traduce en un aumento de la
mutagnesis. El mecanismo exacto no est claro. Se sabe que en esta situacin
de emergencia algunos dmeros de pirimidina son procesados con la
intervencin de los productos de recA y de umuD y umuC, de modo que hay una
sntesis de emergencia de ADN que acarrea la frecuente introduccin de bases
incorrectas (es decir, es un proceso de reparacin propenso a error).
De esta manera, la clula salvara su integridad en esta situacin lmite, pero a
costa de adquirir frecuentes mutaciones.
c. Aplicaciones Prcticas de la Luz UV
Mecanismo de desinfeccin UV
Dimerizacin del ADN
Los microorganismos son inactivados por la luz UV como resultado del dao
fotoqumico a sus cidos nucleicos. La radiacin UV es absorbida por los
nucletidos, los bloques constitutivos del ADN y ARN de la clula, segn la
longitud de onda, con los valores ms altos cerca de 200 y 260 nm. La UV
absorbida promueve la formacin de enlaces entre nucletidos adyacentes, con
lo que se crean molculas dobles o dmeros. Si bien la formacin de dmeros de
tiamina-tiamina son los ms comunes, tambin suelen ocurrir dmeros de
citosina-citosina, citosinatiamina, y dimerizacin del uracilo. La formacin de un
nmero suficiente de dmeros dentro de un microbio impide que ste replique su

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

ADN y ARN, lo que impide su reproduccin. Debido a la dependencia de la

longitud de onda para la absorcin de UV por parte del ADN, la inactivacin UV
de los microbios tambin est en funcin de la longitud de onda. La figura
presenta el espectro de accin germicida de la inactivacin de E.Coli con luz UV
(DIN, 1996). El espectro para el E. Coli alcanza su punto mximo en las
longitudes de onda cercanas a 265nm y 220nm. Es conveniente que la salida de
la lmpara de baja presin a 254nm coincida con el punto de mxima
inactivacin que se ubica cerca de 265 nm.11

Cuadro: Radiacin de energa ultravioleta necesaria para destruir hasta

en un 99.99% de los microorganismos patgenos del agua
BACTERIAS

ENERGIA
W/cm2

Bacillus
antharacis

8.700

S. enteritidis

7.600

B. Megatherium
sp.(veg)
B. Megatherium
sp.(sporas)
B. peratyphosus

2.500
5.200
6.100

B. subtilis

11.000

B. subtilis spores

22.000

Clostridium
tetani
Corynebacterium
diphtheriae
Eberthella typosa
Escherichlia coli
Micrococcus
candidus
Mycobacterium
tuberculosis
Neisseria
catarrhalis
Phytomonas
tumefaciens

OTROS
ORGANISMOS

ENERGIA
W/cm2

LEVADURA
Saccharomyces
ellipsoideus
Saccharomyces
sp.
Saccharomyces
cerevisiae
Levadura para
cerveza
Levadura para
panadera
Levadura para
repostera

13.200
1.600
13.200
660
800
13.200

22.000
6.500

ESPORAS

4.100
6.600
12.300
10.000
8.500
500

Penicillium
roqueforti
Penicillium
expansum
Mucor racemosus
A
Mucor racemosus
B
Oospora lactis

26.400
22.000
35.200
5.200
1.100

11 http://bvsper.paho.org/bvsacg/e/fulltext/simposio/ponen10.pdf

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Proteus vulgaris
Pseudomonas
aeryginosa
Pseudomonas
fluorescens

6.600
10.500
6.600

S. typhimurium

15.200

Salmonella

10.000

Sarcina lutea

26.400

Serratia
marcescens
Dysentry bacilli
Shigella
paradysenteriae
Spirillum rubrum
Staphylococcus
alous
Staphylococcus
aureus
Streptoccus
hemolyticus
Streptoccus
lactis
Streptoccus
viridans
Fuente:12

VIRUS

6.160
4.200

Bacteriophage (E.
coli)
Virus de la
influencia
Virus de la
hepatitis
Poliovirus(Poliomy
elitis)
Rotavirus

6.600
6.600
8.000
1.000
24.000

3.400
6.160

ALGAS

5.720
6.600

Chlorella vulgaris

2.000

5.500
8.800
3.800

VIII. EFECTOS DE LA LUZ VISIBLE

A diferencia de la UV, la luz visible es de baja energa, y adems, sus cuantos no
tienen efectos selectivos sobre el ADN, por lo que no sera de esperar, en
principio, que este tipo de radiacin tuviera efectos negativos sobre las
bacterias. Sin embargo, la luz visible puede ejercer un efecto negativo indirecto,
en el fenmeno de sensibilizacin fotodinmica.
La luz visible de fuerte intensidad (exposicin a pleno sol) es capaz de matar las
bacterias, debido a que ciertas molculas de stas (riboflavinas, porfirinas,
citocromos) absorben la energa de los cuantos y se excitan durante 10-6-10-8
segundos, tras lo cual reemiten la energa a otras molculas, originando
fotooxidaciones en residuos His y Trp de las protenas y en las bases de los
cidos nucleicos. Tambin se puede generar oxgeno singlete (1O2), que es un
radical muy reactivo, oxidante, que puede destruir la clula con rapidez.

12 http://www.bvsde.paho.org/bvsacg/fulltext/desinfeccion/capitulo4.pdf

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Ciertas bacterias (entre ellas las fotosintticas, y las que se propagan va area)
poseen abundantes pigmentos de tipo carotenoide que las protegen de estos
efectos fotosensibilizadores. (Los carotenoides captan la energa del oxgeno
singlete y la reenvan al estado basal, no excitado).
a. Sensibilizacin Fotodinmica Natural
Los experimentos fotodinmicos en bacterias han revelado que la envoltura
celular parece ser el componente atacado por el oxgeno singlete y la eficacia de
la desinfeccin depende principalmente de la estructura de la membrana.
Ensayos con colorantes en fase heterognea, separados fsicamente de las
bacterias objetivo por una delgada capa de aire, han puesto de manifiesto que el
sensibilizador no necesita estar unido ni penetrar en la membrana para inactivar
las clulas de forma eficaz. Se ha demostrado que las reacciones del oxgeno
singlete estn involucradas en la fotomodificacin de otras membranas como las
de los glbulos rojos, mitocondrias, microsomas y liposomas. Se han encontrado
grupos sensibles al oxgeno singlete no slo en las membranas lipdicas, sino
tambin en protenas y cidos nucleicos.
As, por ejemplo, tras una irradiacin de 5 minutos con luz de 675 nm en
presencia de una concentracin 1 M de fotosensibilizador, tiene lugar una
disminucin de hasta 45 rdenes de magnitud en la supervivencia del
Staphylococcus aureus (bacteria Gram positiva), tanto en una cepa salvaje como
en una cepa resistente a meticilina.
Se han observado diferencias entre la capacidad de desactivacin de bacterias
Gram (+) y Gram () por ciertos fotosensibilizadores, siendo este segundo tipo
bacteriano habitualmente ms resistente a la inactivacin por oxgeno singlete.
Algunos autores sugieren que la cubierta de lipopolisacridos (LPS) de las
bacterias Gram () puede ofrecer alguna proteccin frente a los efectos letales
de ciertos agentes exgenos, de forma que permitira a estas bacterias
sobrevivir en los que, de otra manera, se consideraran ambientes hostiles. Los
LPS son una barrera fsica y qumica a travs de la cual el 1O2 y los radicales
hidroxilos generados en el exterior celular deben penetrar para interaccionar con
sus dianas, como son por ejemplo ciertos componentes de la membrana y
algunos componentes citoplasmticos.
b. Sensibilizacin Fotodinmica Artificial
La terapia fotodinmica (PDT) est emergiendo como una prometedora tcnica
para el tratamiento de ciertos cnceres, infecciones localizadas y enfermedades
como la degeneracin macular, el acn y otras alteraciones de la piel. Requiere
la presencia simultnea de tres componentes: un agente fotosensibilizador, luz y

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ACCION DE LAS RADIACIONES IONIZANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

oxgeno, debido a que el oxgeno singlete es el principal agente citotxico

producido durante PDT (aunque no el nico). 13
La luz necesaria para activar la mayora de los fotosensibilizadores no puede
penetrar ms de aproximadamente un tercio de una pulgada de tejido (1
centmetro). Por esta razn, la terapia fotodinmica normalmente se usa para
tratar tumores en la piel o justo por debajo de la misma, o en el revestimiento de
rganos o cavidades internas. La terapia fotodinmica es tambin menos eficaz
para tratar tumores grandes, porque la luz no puede penetrar lo suficiente a
travs de estos tumores. La terapia fotodinmica es un tratamiento local y por lo
general no se puede usar para tratar el cncer que se ha diseminado
(metastatizado).14

13
https://www.psa.es/webesp/projects/solarsafewater/documents/libro/15_Capitulo_15.
pdf
14 http://www.cancer.gov/espanol/cancer/tratamiento/tipos/cirugia/hoja-informativaterapia-fotodinamica

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