Universidad de Chile

Facultad de Medicina
Curso Histopatologa 2007

Tincin Histolgica
Tutora: TM Solange Zapata
Residente: Dr Jorge Chamorro Ruiz
3 de Mayo del 2007

Tcnica Histolgica
Fijacin
Deshidratacin
Aclaramiento
Inclusin
Corte
Tincin
Montaje

Seminario Anterior

Tincin y Montaje

Corte
Desparafinado Rehidratacin
Tincin
Deshidratacin
Montaje
Cubreobjetos:

funciones

Proteccin del tejido

refraccin de luz polarizada

Colorantes

Por qu
muestra?

colorear

una

Los diversos elementos de

los
tejidos
poseen
prcticamente el mismo
ndice de refraccin, lo que
hace que el reconocimiento
de distintas estructuras sea
una tarea difcil.

Definicin de Colorante

Un colorante es un cuerpo coloreado que

puede comunicar su color a otro cuerpo.
La coloracin es la propiedad que tienen ciertos
cuerpos de ejercer una absorcin selectiva
sobre la luz. Dicho de otra manera un cuerpo se
ve de tal color porque trasmite por transparencia
o por difusin las radiaciones complementarias
de las que l absorbe.

Tipos de Colorantes

Colorantes que diferencian los componentes

cidos y bsicos de la clula.

Colorantes especializados que distinguen los

componentes
fibrosos
de
la
matriz
extracelular.

Sales metlicas que se precipitan en los tejidos

y forman depsitos de metales en ellos.

Tipos de Coloraciones

Directas: se producen por inmersin en el bao

colorante.

Indirectas: en este tipo de coloracin, el

colorante no puede actuar directamente, el
objeto a colorear debe ser tratado de antemano
por otra sustancia que lo prepare para admitir el
colorante, esta se llama mordiente.

Fundamentos Qumicos de la
Coloracin

Clasificacin colorantes segn afinidad:

Colorantes

nucleares o bsicos: su componente

colorante activo es una base coloreada que se
combina con los cidos nucleicos.
Colorantes citoplasmticos o cidos: su componente
activo es un cido coloreado que se combina con el
citoplasma.
Colorantes neutros, tanto el cido como la base son
coloreadas.

Colorantes bsicos
ANILINA+ Cl

Los colorantes bsicos reaccionan con los

GRUPOS ANINICOS de los componentes
texturales, que son los grupos fosfato de los
cidos nucleicos (ADN y RNA), los grupos
SULFATO de los glucosaminoglucanos y los
GRUPOS CARBOXILO de las protenas. La
reaccin de estos grupos vara segn el pH.

Colorantes cidos
Na+ ANILINA

Los colorantes cidos se unen primariamente a

los componentes texturales por medio de enlaces
electrostticos de manera similar pero opuesta a
la de los colorantes bsicos. Las anilinas cidas
reaccionan con grupos catinicos, como los
grupos amino ionizados de las protenas.

Entonces:

Elementos que se tian

con colorantes bsicos
(ej. Hematoxilina) son
basfilos:

La Heterocromatina y los
Nucleolos por los grupos
Fosfato ionizados.
Ergatoplasma por grupos
Fosfato ionizados.
Matriz del Cartlago por
grupos Sulfato ionizados

Elementos que se tian

con colorantes cidos (ej.
Eosina) son acidfilos:

La mayor parte del

citoplasma no especializado.
Filamentos Citoplasmticos.
Fibras extracelulares. Todos
estos debidos a grupos
Amino ionizados.

Metacromasia

Fenmeno por el cual un colorante cambia de color

tras reaccionar con un componente textural.
Se debe a que en tejidos con altas concentraciones de
POLIANIONES, la molcula del colorante se
polimeriza entre si y sus propiedades de absorcin
son diferentes de las propiedades de las molculas
individuales.

Cromtropos: Glucosaminoglucanos
sulfatados, nucleoprotenas, cartlago,
grnulos de los mastocitos. El cristal
violeta tambin genera metacromasia
al teir amiloide
Azul de Toluidina tie grnulos mastocito prpura

Tincin (coloracin) de cortes

Diferentes
componentes
celulares y tisulares
poseen diferentes
afinidades tintoriales.

Tincin (coloracin) de cortes

Hematoxilina-Eosina
Tcnica de tincin ms usada.
Hematoxilina:

Colorante natural.
Propiedades similares a las anilinas
bsicas.
Tie todas las estructuras celulares,
pero principalmente el ncleo
(Histonas).

Eosina:

Colorante cido.
Accin es la de una anilina cida.
Tie ppalmente citoplasma celular.

Cortes de piel
Tincin
Hematoxilina-Eosina

Tcnica de Tincin H/E

Tincin con hematoxilina.

Lavado con abundante agua.

Aplicar Borato de Potasio.

Cambia el color generado por la hematoxilina del morado al

azul.

Aumenta el contraste de color.

Tcnica Tincin H/E II

Diferenciacin:

Azuleamiento:

Eliminacin selectiva del exceso de colorante.

Se obtiene pasando el corte por un bao de alcohol cido.
Resalta ncleos.

La tincin queda de color rojizo se vira a azul intenso

Sumerge la placa en agua corriente alcalina o carbonato de
litio al 1% en agua.

Eosina
Obtenemos

ncleos azules, citoplasma rosado y

colgeno y fibras musculares rosado plido.

Cubre-objeto

Una vez teido el

tejido debe ser
protegido con un
cubre-objeto.
Deshidratar
Medio de montaje

Limpieza de lminas

Anlisis de placas

TCNICAS ESPECIALES
10% biopsias

DIAGNSTICO
80-90% bp

Tinciones
Especiales

Tinciones para Amiloide

H/E

Rojo Congo
(cortes 30 m)

Tinciones para Amiloide

Birrefringencia

Bacterias

c Gram negativo: colonias bacteriana

rojas
a
d

b
a y b Gram positivos:
tincin azul

d FITE: bacilos cido

resistentes

Bacterias II

Ambas placas con tincin Ziehl Neelsen

Bacilos cido resistentes se tien rojo brillante

Calcio

Von Kossa-Azul Toluidina

Von Kossa: depsitos de calcio

Se tien caf oscuro-negro

Colgeno I: protena extracelular,

predominante en dermis, funcin estructural

bb
a

a y b Picrosirius:
Colgeno I color
amarillo-rojizo

e
e Van Gieson: colgeno I rojo

d
c y d Tricromico Masson: colgeno I verde

Colgeno III: o fibras de Reticulina, en

dermis perineural, perivascular

Impregnacin con Nitrato de Plata:

fibras de reticulina se tien negras

Eosinfilos

Tincin Giemsa, eosinfilos se ven rojos

Fibras elsticas

HE

Orcena cida de Pinkus/Giemsa:

fibras de coloracin pardo oscura

Fibrina

ambas, Tincin de Picro-Mallory: Fibrina se tie rojo claro

Tambin PAS

Hemosiderina

a Grnulos de Hemosiderina sin teir, de colora

cin amarillo-caf birrefringentes

b Ferrocianuro de Potasio de Perls: azul

Hongos

b
b PAS para Criptococo (rojo)
a
a Mucicarmin para teir Criptococo:
hongos de coloracin azul-violcea

c Tincin de PAS evidenciando

Blastomicosis

cc

Hongos II

c Tincin de Gomori para Criptococo

c
a
a PAS esporas
fungicas
b PAS
Coccidiomicosis
en ambas, hongos se
tien
rojos
b

Lpidos slo en tj fijado

en formalina + cortes
por congelacin

bb Sudan III: adipocitos rojos

a Sudan IV: adipocitos anaranjados

c

c Sudan black b: Lpidos azul-negruz

Mastocitos

ambas, Tincin con Azul de Tolu

grnulos de Mastocitos azul-pr
(metacromasia)

Mastocitos

ambas, Tincin de Giemsa, donde los grnu

Mastocitos son teidos prpura

Melanina

ambas, Tincin de Fontana Masson

pigmento melnico se tie negro

Principales
colorantes

Tricrmico de Masson

Principal Uso: Colgeno.

Tie:
Colgeno

Verde.
Ncleo, msculo y nervios
Rojo oscuro.
Citoplasma amarillo

Van Gieson

Principal Uso: Tejido

Fibroso

Tie:
Colgeno

rojo.
Ncleo azul negro
Msculos, nervios
amarillos
(+Verhoeff) fibras elsticas
negro

Fontana Masson

Principal Uso: Melanina

Tie:
Melanina

Negro.

Plata Metenamina

Principales Usos: Hongos y

Cuerpos de Donovan

Tie:
Paredes

micticas

Negros.
Cuerpos de Donovan negro

PAS

Principales Usos:
Glucgeno, MPS neutros y
Hongos, Membrana basal.

Tie:
Glucgeno

Diastasa lbil.
MPS neutros y Paredes
micticas Diastasa
resistentes.

Reaccin positiva para

glucgeno y polisacridos
neutros.

Reaccin positiva slo para

polisacridos neutros.

+ DIASTASA

Azul alcin

Principal Uso:
Mucopolisacridos
cidos

Tie
Mucopolisacridos

cidos (mucina)
Azul.

Azul de toluidina

Principal Uso:
Mucopolisacridos
cidos

Tie
Mucopolisacridos

cidos Purpura
metacrmico.

Giemsa

Principales usos: Grnulos

mastocitarios, MPS cidos,
eosinfilos, leishmanias,
mdula sea

Tie:

Grnulos mastocitarios,
Mucopolisacaridos cidos
Prpura.

Eosinfilos, leishmanias
Rojo.

Eosinfilos en mucosa
gstrica

Ferrocianuro de Potasio de Perls.

Principal Uso:
Hemosiderina

Tie:
Hemosiderina

Azul

Rojo Congo

Principal Uso:
Amiloide.

Tie
Sustancia

amiloide
Roja con luz, Verde
con luz polarizada

Von Kossa

Principal Uso: Calcio

Tie:
Calcio

Negro.

Naftol AS-D cloroacetato esterasa

Principal Uso:
Mastocitos y
Neutrfilos

Tie:
Grnulos

de
mastocitos y
neutrfilos Rojo

Orcena cida de
Pinkus/Giemsa

Principal Uso: Fibras

elsticas.

Tie:
Fibras

elsticas
Pardo oscuro.

Histopatologa es como la espada del augurio

hacen ver ms all de lo evidente