Buletinul AM. tiinele vieii. Nr.

3(324) 2014

Microbiologia i Biotehnologia

MICROBIOLOGIA I BIOTEHNOLOGIA
EFECTELE UNDELOR MILIMETRICE ASUPRA
MULTIPLICRII, VIABILITII I CARACTERELOR MORFOCULTURALE ALE TULPINII DE LEVURI
SACCHAROMYCES CEREVISIAE CNMN-Y-18
Fulga Ludmila
Institutul de Microbiologie i Biotehnologie al Academiei de tiine a Moldovei
Rezumat

Sunt prezentate rezultatele cercetrilor aciunii undelor milimetrice asupra multiplicrii

populaiei de levuri, viabilitii i caracterelor morfo-culturale ale tulpinii Saccharomyces
cerevisiae CNMN-Y-18. Experimental s-a stabilit, c efectul aciunii undelor milimetrice
depinde de lungimea de und i durata de iradiere. A fost remarcat caracterul stimulator
al undelor milimetrice asupra procesului de multiplicare a celulelor levuriene i indicilor
viabilitii culturii.
Cuvinte cheie: Saccharomyces cerevisiae, multiplicare, viabilitate, caractere morfoculturale, unde milimetrice
Depus la redacie 15 octombrie 2014
--------------------------------------------------------------------------------------------------------Adresa pentru coresponden: Fulga Ludmila, Institutul de Microbiologie i Biotehnologie
al Academiei de tiine a Moldovei, str. Academiei, 1, MD-2028, Chiinu, Republica
Moldova, tel.+373(22)73-80-13; e-mail: fulgaludmila@gmail.com

143

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(324) 2014

Microbiologia i Biotehnologia

Introducere
Interferena radiaiei electromagnetice n diapazon milimetric cu obiectele biologice
este demonstrat de numeroase rezultate ale cercetrilor tiinifice n domeniu. Efectul
pozitiv al undelor milimetrice a fost stabilit la organisme cu diferit nivel de organizare,
fiind utilizate pe larg n medicin, veterinrie, biotehnologie etc. Cercetrile n aceast
direcie au demonstrat, c sub aciunea undelor milimetrice au loc modificri ale
caracterului activitii vitale a microorganismelor, acestea influeneaz asupra diviziunii
celulare, sintezei enzimelor, vitezei de cretere i acumulrii biomasei, pot contribui la
transformri morfologice i modificarea proprietilor biologice a microorganismelor
[2, 12, 15, 24-25].
Datorit fenomenelor neliniare la interaciunea oscilaiilor dipol i legturii acestora
cu undele elastice, are loc tranziia sistemului ntr-o stare metastabil cu un singur tip
de oscilaii, trecnd n starea fundamental, are loc formarea unui dipol colectiv gigant,
ce reprezint o stare coerent a obiectului biologic [19, 23].
Un domeniu relativ nou de aplicare a undelor milimetrice este biotehnologia.
Organismele monocelulare au servit n calitate de primele modele biologice pentru
studierea efectelor de aciune a radiaiei milimetrice. Ulterior, ca obiecte experimentale
au fost selectate celulele vii i constituenii structurali ale acestora [6-7, 10, 13, 21].
Sunt efectuate cercetri de evaluare a aciunii undelor milimetrice asupra
microorganismelor, n particular asupra viabilitii i activitii metabolice a bacteriei
E. coli, n urma crora s-a constatat c efectul biologic depinde de durata, frecvena i
intensitatea radiaiei emise [5, 14].
Efect stimulator al undelor milimetrice a fost stabilit la variate specii de alge, levuri
i fungi. n cadrul experienelor cu cianobacteriile Spirulina platensis i microalgele
Platymonas viridis, obiecte biotehnologice importante, a fost identificat un efect de
intensificare esenial a proceselor fotosintetice i excreie abundent n mediul de
cultur a compuilor biologic activi [22, 26]. La unele tulpini de levuri din genul
Saccharomyces a fost demonstrat posibilitatea reducerii duratei ciclului de dezvoltare
i sporirea randamentului de biomas celular [4, 16, 20]. n experimentele de estimare
a aciunii undelor milimetrice asupra Saccharomyces cerevisiae, s-au definit modificri
ale particularitilor fiziologice i mbuntirea indicilor tehnologici [8, 11, 17].
Astfel, cercetrile asupra celulelor izolate i organismelor monocelulare reprezint
una din direciile de studiere a verigilor primare de reacionare a organismelor vii
la aciunea undelor electromagnetice n diapazon milimetric. Preparatele celulare
servesc ca modele sistemice potrivite pentru studierea efectelor biologice ale undelor
milimetrice, deoarece acestea i pstreaz funciile fiziologice i sunt uor accesibile
pentru diverse manipulri biochimice, simplific mult analiza rezultatelor i permit
posibilitatea de dozimetrie exact a iradierii.
Prin urmare, scopul cercetrilor a constat n evaluarea efectelor undelor milimetrice
asupra multiplicrii, viabilitii i caracterelor morfo-culturale ale tulpinii de levuri
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-18.
Material i metode
Obiectul de studiu, medii de cultur, condiii de cultivare. A fost utilizat tulpina de
levuri Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-18 - productoare de manani, depozitat
n colecia Laboratorului Biotehnologia Levurilor i n Colecia de Microorganisme

144

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(324) 2014

Microbiologia i Biotehnologia

Nepatogene a Institutului de Microbiologie i Biotehnologie al Academiei de tiine

a Moldovei [18]. n calitate de mediu de cultur s-a utilizat mediul YPD lichid i
agarizat: extract de levuri - 1%, pepton - 2%, glucoz - 2% [1].
Ca generator de unde milimetrice a fost utilizat dispozitivul model KB-, RS232, 2007 (Fed. Rus), cu lungimile de und 4,9; 5,6; 7,1 mm, oferit cu amabilitate de
ctre colaboratorii Institutului de Inginerie Electronic i Nanotehnologii ,,D. Ghiu,, al
AM. Aparatul este certificat i permis spre utilizare n practica medical.
Cultura de levuri a fost crescut pe mediul lichid YPD timp de 24-48 ore la
temperatura de 250C. Fiecare prob experimental a fost identic dup volum i numrul
de celule cu proba martor. Dup iradiere celulele de levuri au fost inoculate pe mediul
lichid YPD i crescute n condiii similare cu martorul.
Pentru iradiere, cutiile Petri cu 5 ml inocul se aranjeaz la distana de 0,5 cm de
la senzorul generatorului. Durata tratrii culturilor de levuri a constituit: 10, 20, 30
minute.
Cultivarea submers s-a efectuat n vase Erlenmayer cu capacitate de 1,0 litru, pe
agitator cu viteza de rotaie 200 rpm., la temperatura de 250C. Prelevarea probelor
pentru cercetare s-a efectuat dup 6, 24, 48 ore de cultivare n profunzime.
Metode de realizare a cercetrilor. Numrul de celule crescute pe mediul lichid
a fost determinat colorimetric la lungimea de und 540 nm [8]. Caracterele morfoculturale ale levurilor au fost studiate conform [3, 9]. Coloniile dezvoltate pe mediul
solid au fost caracterizate n corespundere cu descrierile [16]. Examinarea morfologiei
celulelor s-a efectuat prin microscopia culturilor vii i fixate, la microscop cu contrast
Biolar, ocular WF16x (obiectiv 40x/0,65) dup 6, 24 i 48 ore de la momentul
incubrii levurii.
Prelucrarea statistic a rezultatelor s-a efectuat computerizat cu utilizarea
programului Excel, cu calcularea erorilor standard pentru valorile relative i medii i
pragului de semnificaie p<0,05.
Rezultate i discuii
Cercetrile aciunii undelor milimetrice asupra populaiei levuriene au demonstrat
caracterul neunivoc al acestora. Astfel, o stimulare a multiplicrii celulelor s-a stabilit
n variantele tratate timp de 20 minute (=5,6 mm), numrul celulelor sporind cu 72%
fa de martorul neiradiat (Fig. 1(b)).
Ulterior, s-a estimat influena undelor milimetrice asupra Saccharomyces cerevisiae
CNMNY-18 conform criteriului viabilitii culturii. Viabilitatea celulelor levuriene
a fost analizat prin numrarea coloniilor pe cutii Petri cu mediu YPD agarizat
(3-5 replici).
n urma rezultatelor obinute, s-a stabilit c efectul biologic al undelor milimetrice
depinde de lungimea de und i durata de iradiere. Efect stimulator maximal asupra
viabilitii celulelor, fixat dup 24 h cultivare, a fost nregistrat n probele tratate cu
unde milimetrice cu =5,6 mm (durata de iradiere 20 minute), numrul crora crete cu
40,55% fa de proba martor (Fig. 2 (b)).
Deci, analiza influenei undelor milimetrice asupra a doi indici importani n
dezvoltarea levurii (proliferarea i viabilitatea), ne demonstreaz c cultura de
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-18 reacioneaz pozitiv la lungimea de und
=5,6 mm, expus timp de 10-20 minute.

145

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(324) 2014

Microbiologia i Biotehnologia

Figura
1.
Efectul
undelor
milimetrice asupra multiplicrii celulelor
Saccharomyces cerevisiae CNMNY-18.

Figura
2.
Efectul
undelor
milimetrice asupra viabilitii celulelor
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y18.
C

Ulterior, obiectivul de cercetare a constat n examinarea caracterelor morfologice

i culturale ale tulpinii supus iradierii cu unde milimetrice la diferite lungimi de und.
Pentru caracterizarea proprietilor morfo-culturale a celulelor i a coloniilor, din
probele martor i cele experimentale ale levurii cultivate pe mediul YPD, s-au preluat
mostre dup 6, 24 i 48 ore de cultivare n profunzime. Din caracterele morfologice
ale celulelor putem meniona att pentru martor, ct i pentru celulele iradiate cu unde

146

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(324) 2014

Microbiologia i Biotehnologia

milimetrice, celule ovale sau sferice, cu nmugurire unipolar, dimensiunile celulelor

variaz de la 3-5m (Fig. 3).

a) Martor

b) - 4,9 mm

c) - 5,6 mm
d) - 7,1 mm
Figura 3. Morfologia celulelor Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-18 expuse aciunii
undelor milimetrice la diferite lungimi de und (16x40).

Din caracteristicile culturale menionm stabilitatea tipului de respiraie aerob,

formarea ascelor persistente direct din celula diploid, 4 ascospori neeliberai,
rotunzi (Fig. 4). n vederea stabilirii caracterelor morfologice ale coloniilor
Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-18, cultura de levuri din variantele martor i cele
iradiate a fost nsmnat pe mediul solid YPD. Cercetrile au demonstrat, c undele
milimetrice cu lungimile de und examinate, nu produc modificri semnificative asupra
caracterelor morfologice ale coloniilor tulpinii de levuri Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-18. Comun pentru toate variantele experimentale cultivate dup 6, 24 i 48
ore de la momentul iradierii sunt: formarea coloniilor de culoare alb, cu suprafaa
lucioas, neted, bombat, diametrul coloniilor 4 - 6 mm (Fig. 5).
Din rezultatele obinute, putem concluziona despre lipsa efectului al acestora
asupra caracterelor morfo-culturale ale urmtoarelor generaii de levuri.
Prin urmare, cercetrile au demonstrat c undele milimetrice nu influeneaz
caracterele morfo-culturale ale tulpinii de levuri Saccharomyces cerevisiae
CNMN-Y-18.

147

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(324) 2014

Microbiologia i Biotehnologia

Figura 4. Ascospori neeliberai

la
Saccharomyces
cerevisiae
CNMN-Y-18 expus aciunii
undelor milimetrice (dup 48 ore
de cultivare) (16x40).

a) Martor

b) - 4,9 mm

c) - 5,6 mm
d) - 7,1 mm
Figura 5. Morfologia coloniilor Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-18 expus
aciunii undelor milimetrice la diferite lungimi de und (16x40).

Concluzii
1. Undele milimetrice pot fi utilizate ca unul din factorii de reglare a procesului
de multiplicare a Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-18. Efect stimulator maximal
asupra capacitii de nmulire s-a stabilit la lungimea de und 5,6 mm, numrul
celulelor fiind cu 72% mai mare fa de martorul neiradiat.
2. Sporirea indicilor viabilitii culturii, cu circa 41% n raport cu martorul, are
loc la tratarea tulpinii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-18 cu unde milimetrice la
lungimea de und 5,6 mm i durata de iradiere 20 minute.
3. Rezultatele obinute pot fi valorificate n elaborarea procedeelor de stimulare

148

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(324) 2014

Microbiologia i Biotehnologia

a procesului de multiplicare a tulpinii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-18 cu

utilizarea n calitate de factor stimulator a undelor milimetrice.
Referine

1. Anghel I., Voica C., Toma N., Cojocaru I. Biologia i tehnologia drojdiilor. Bucureti:
Editura Tehnic, 1991, Vol. 2, 385 p.
2. Banik S., Bandyopadhyay S., Ganguly S. Bioetects of microwave a brief review.//
Bioresource Technology. 2003, Vol. 87, p. 155159.
3. Barnet J., Payne R., Varrow D. Yeasts: Characteristics and Identification. 3-rd edition,
Cambridge University Press, 2000, 1150 p.
4. Cifra M., Jelinek F., Pokorny J., Janca R., et al. Measurement of electrical oscillations
of yeast cells membrane at acoustic frequencies.// Biological Effects, Medical and Industrial
Applications of EM Field, ISMOT Proceedings. 2011, p. 303-306.
5. Cohen I., Cahan R., Shani G., Cohen E., Abramovich A. Effect of 99GHz continuous
millimeter wave electro-magnetic radiation on E. coli viability and metabolic activity.//
International Journal of Radiation Biology. 2010, Vol. 86(5), p. 390-399.
6. Cosentino K., Beneduci A., Ramundo-Orlando A., Chidichimo G. The influence of
millimeter waves on the physical properties of large and giant unilamellar vesicles.// J. Biol.
Phys. 2013, Vol. 39, p. 395410.
7. De Vita A., Croce R., Pintol I., Bisceglia B. Nonlinear interaction of electromagnetic
radiation the cell membrane level: response to stochastic fields.// Progress in Electromagnetics
Research. 2011, Vol. 33, p. 45- 67.
8. Gromozova E., Voychuk S. Influence of radiofrequency EMF on the yeast Saccharomyces
cerevisiae as model eukaryotic system.// Inst. of Microbiol. and Virology. 2005, p. 167-175.
9. Kreeger-Van Rij N.J.W. General classification of the yeasts. The yeast: A
taxonomic study. 3-rd edition, N.J.W. Kreger-Van Rij-Amsterdam, Elesevier Biomed.
Preis, 1984, 1082 p.
10. Markkanen A. Effects of lectromagnetic fields on cellular responses to agents causing
oxidative stress and DNA damage. Doctoral dissertation. Kuopio, 2009, 59 p.
11. Molodoi E. Biotehnologii de cultivare a drojdiilor i de obinere a preparatelor sterolice.
Autoreferat al tezezi de doctor. Chiinu, 2009, 23 p.
12. Pakhomov A., Akyel Y., Pakhomova O., Stuck B., Murphy M. Current state and
implications of research on biological effects of millimeter waves: a review of the literature.//
Bioelectromagnetics. 1998, Vol. 19, p. 393413.
13. Pirogova E., Vojisavljevic V., Cosic I. Biological effects of electromagnetic radiation.//
Biomedical Engineering. 2009, p. 102-105.
14. Rojavin M., Ziskin M. Effect of millimeter waves on survival of UVC-exposed
Escherichia coli.// Bioelectromagnetics. 1995, Vol. 16(3), p. 188196.
15. Rotaru A. Metamorfizarea utilizrii undelor electromagnetice milimetrice n medicin.
Mit sau realitate.// Akademos. 2008, Nr. 4(11), p. 57-59.
16. Ruiz-Gomez M., Prieto-Barcia M., Ristori-Bogajo E., Martinez-Morillo M. Static and
50 Hz magnetic fields of 0.35 and 2.45 mT have no effect on the growth of Saccharomyces
cerevisiae.// Bioelectrochemistry. 2004, Vol. 64, p. 151 155.
17. Usati A., Molodoi E., Rotaru A., Moldoveanu T. The influence of low intensity
millimetre waves on the multiplication and biosynthetic activity of Saccharomyces
carlsbergensis CNMN-Y-15 yeast.// Analele Universitii din Oradea, Fascicula Biologie. 2010,
Vol. 17(2), p. 208-212.
18. Usati A., Molodoi E., Efremova N., Chiselia N., Borisova T., Fulga L. Tulpin de
drojdii Saccharomyces cerevisiae productoare de manani.// Brevet de invenie MD 4216,
BOPI nr. 4/2013.

149

Buletinul AM. tiinele vieii. Nr. 3(324) 2014

Ecologia i Geografia

19. Vasconcellos A., Stucchi-Vannucchi F., Mascarenhas S., Luzzi R. Frohlich condensate:
emergence of synergetic dissipative structures in information processing biological and
condensed matter systems.// Information. 2012, Vol. 3, p. 601-620.
20. Vrhovac I., Reno H., Jasna F. Effect of 905 MHz microwave radiation on colony
growth of the yeast Saccharomyces cerevisiae strains FF18733, FF1481 and D7.// Radiol.
Oncol. 2010, Vol. 44(2), p. 131-134.
21. Zwirska-Korczala K., Jochem J., Adamczyk-Sowa M., et al. Effect of extremely low
frequency of electromagnetic fields on cell proliferation, antioxidative enzyme activities and
lipid peroxidation in 3T3-L1 preadipocytes- an in vitro study.// J. Physiol. Pharmacol. 2005,
Vol. 56(6), p. 101-108.
22. ., .
.// . 1996, 9-10, c. 4-10.
23. ., ., .
.//
. 2005, . 175-191.
24. ., ., .
.//
. 2012, 11, . 1-12.
25. ., .
- .//
. 2000, 1, . 23-34.
26. ., ., .

.// . 2002, 1, . 34-53.

150