BÁO CÁO TIӆU LUҰN:

VI KHUҬN
BACILLUS CEREUS

m
NӜI DUNG

m
 đҫu  ӟ
Ӌ



 

һ

Ӈ



 



ҩ





ҩ

Ӌ

ӝ

ӕ 

ơ
Ӄ 
ӝ

ӕ

ӟ
Ӌ


Ӆ ӝ

ӕ 6


ơ
Ӄ 
Ӌ



!ươ
! !
"

ӏ

#ươ
! !
Ӆ
ӕ

#ươ
! !
Ӌ
ҥ

 GIӞI THIӊU 6



A o

$ 
 
%ươ

A ӝ

ӟ

 

A p
&!'
fii

A |ӟ!
&
 '
£ illi

A ӝ &(% '
6 ill l

A ͕ Ëf ily) 6 ill  

A 
& '



r

A |(
&!
 '
  

 GIӞI THIӊU 6



Trong chi này, ngoài loài cereus, còn có mӝt sӕ loài khác
như:

‡ 6cillusco ul
s

‡ 6cillussubtilis

‡ 6cillusthuri
ie
sis

‡ 6cillus
tto

‡ Pe
ibcilluslrve
l
 GIӞI THIӊU 6


A ¦
cháthi͏
 utiê

tro
tc
hi͍c
th͹cẖvào


A 6cilluscereus là loài vi
khu n hiӃu khí

A Bào tӱ dҥng hình ovan

6cilluscereus trên kính hiӇn vi
A có khҧ năng sinh nha bào
Ô
 GIӞI THIӊU 6


6




6



  

[
 GIӞI THIӊU 6


6





   
6
 
 

 
 
 

 



 


 
6
 

ó
 ¦
¦Iӆ BA
ILLUS
US

A Troc khu n Gr+

A Tҥo nӝi bào tӱ

A Kích thưӟc 0.5-1.5 x 2-4 ȝm

A Không tҥo giáp mô, không có

khҧ năng di đӝng

A NhiӋt đӝ tӕi thích: 35-400

A pH tӕi thích: 4.5-9.3 ô hình cҩu tҥo B.cereus

!
 ¦
¦Iӆ BA
ILLUS
US

A Trên T NA hay TSA sau 24 giӡ tҥo khóm lӟn, nhăn

nheo, xù xì

A Trên T BA tҥo dung huyӃt rӝng

A Trên T 
 (annitol gg
olk olymixin): khóm

hӗng chung quanh có vòng sáng

A Trên T ossel (thҥch cereus selective agar): khóm to

hӗng chung quanh có vòng sáng «
R
 TÍNH
HҨT SINH HÓA 6


A Trên môi trưӡng đưӡng: lên

men glucose trong điӅu kiӋn
hiӃu khí và kӏ khí, không lên
men mantose

A Khӱ nitrat thành nitrit

A hân giҧi Tyroxin

A
atalase (+),
itrate (+)

m
 TÍNH
HҨT GÂ
¦Ӝ

i khu n Bacillus cereus phân bӕ nhiӅu trong to nhiên,

nhiӉm vào các loҥi thӭc ăn qua đêm hay trӳ lҥnh lâu,
thưӡng gây ngӝ đӝc thoc ph m

mm
 ¦ C TӔ
A 6



A hát hiӋn đҫu tiên các vӅ các mҫm bӋnh gây ngӝ đӝc thoc ph m
do vk bccereus là tӯ năm 1949 khi Hauge đã phân lұp mүu tӯ
xӕt vani sau khi có mӝt ca ngӝ đӝc thoc ph m gây tiêu chҧy tҥi
bӋnh viӋn Oslo, Norway. Xӕt vani đưӧc nҩu trưӟc khi tiêu thө
và bҧo quҧn nhiӋt đӝ phòng cho đӃn khi sӱ dөng. ¦Ӈ khҷng đӏnh
B. cerus là nguyên nhân gây ngӝ đӝc, Hauge đã phát triӇn mүu
phân lұp đӃn nӗng đӝ khoҧng 4x106 ml-1 và cho vào 200ml
cocktail. Sau khi uӕng13h, ông cҧm thҩy đau bөng và đi tiêu ra
nhiӅu nưӟc, triӋu chӭng này dai dҷng khoҧng 8h. m
 ¦ C TӔ
A 6



A ¦ӝc tӕ gây tiêu chҧy (Diarrhoed toxin): i khu n sҧn sinh đӝc tӕ trên
thӏt , rau quҧ, gia vӏ. Bҧn chҩt là mӝt loҥi protein gây hӫy hoҥi biӇu bì
và niêm mҥc ruӝt, gây tiêu chҧy có thӇ nguy hiӇm đӃn tính mҥng.
A ¦ӝc tӕ gây nôn mӱa emetic toxin: i khu n nhiӉm trong gҥo, cơm
nguӝi, đұu các loҥi. Bҧn chҩt đӝc tӕ là phospholipit có tính әn đӏnh cao
không bӏ phân hӫy nhiӋt đӝ cao và dӏch dҥ dày.
A Ngoài ra vi khu n còn có enzyme hemolyzin là mӝt protein gây đӝc
mҥnh có thӇ gây chӃt ngưӡi. ¦ӝc tӕ này có thӇ trung hòa b i
cholesterol trong huyӃt thanh nhưng nó đã góp phҫn cho so phát triӇn
cӫa vi khu n
A 6cilluscereus có thӇ gây ra so nhiӉm trùng và nhiӉm đӝc khác nhau
như: nhiӉm trùng máu, viêm màng não, và nhiӉm trùng mҳt.
mr
 TRIӊU CHӬNG TRÚNG ¦ C
A Thӭc ăn chӭa mұt đӝ vi khu n: 105 vi khu n/g thoc ph m đӫ
gây đӝc.
A BiӇu hiӋn: đau bөng, buӗn nôn và nôn sau 1-5 giӡ ăn phҧi
thoc ph m nhiӉm vi khu n. BӋnh có thӇ kéo dài 24 giӡ.
A hòng: không ăn thӭc ăn đӇ nguӝi qua đêm, thӭc ăn luôn
hâm nóng trên 800
trưӟc khi ăn

ml
 TRIӊU CHӬNG TRÚNG ¦ C

A ÷(
 
ӝ

ӕ !
m

!


¦
 
 

    

      
! "!
#$
 )*+
'
%
&'
(% ' (% '

mÔ


Hӂ SINH ¦Ӝ
TӔ

ӝ

ӕ ) 

ҧ
mm
һ

Ӈ

ӫ
Ӌ
*
ӱ



ҩ

ӫ
Ӌ

ӭ


*
ӱ
%(
6
C

  þ   đ Mô 
i  i͍ đ l 6
 105 - 108 £  ͹
p ̱ K ͙i l
 đ ͙
12 - 32 Ǎ
 ͙ đ
  i 
  ͹ p ̱ Ë25 ² 300C)

ͥi  ͯ £͏ ½ đ͇ 5
K   ͥi i    £͏ 6 - 24

i͏  ͱ 6͛ ô ô ͵
 i  ͹ p ̱  ͥ ̿p  þ C
 þ  i   iê
 ͙ p ͧ m[


Hӂ SINH ¦Ӝ
TӔ
metic Syndrome

Bҧng 1-1 ¦һc điӇm cӫa bӋnh nôn mӱa và tính chҩt cӫa triӋu chӭng gây
nôn mӱa do 6
ereus
A Tê
cͯct͙
ereulide
A
þutrúccͯ
hu͟ieu lll]
A Kh͙il

hâ
t͵
A i
hhá
th͋Khô

o
e)
A Ho t
si
hh͕ctrê

ͥi ây
ô

A

!u

h̵
cHT3
A
ytotoxic"o
A Ho t
trê
t͇bàoHHo t
hô
bào
A Kh

ch͓u
hi͏t#hútͧ#

A $
hh ͧ
cͯs͹hâ
 iirotei
Khô

A i͏cs
si
hrct͙
h th͇
ào
ot
ow
%butrobbly mó
e
&yticlly)


Hӂ SINH ¦Ӝ
TӔ
A
ereulide (polypeptide) là tên cӫa mӝt
đӝc tӕ quan trӑng gây ra triӋu chӭng nôn
mӱa do Bacillus cereus sҧn sinh ra. Bài
báo này nghiên cӭu vӅ quá trình sinh tәng
hӧp đӝc tӕ doa trên so bҩt thưӡng cӫa
depsipeptide tӯ 13
liӋt kê ra trên 3 loҥi
tiӅn L- amino acid (alin, Alanin, Leuzin)
trên môi trưӡng tәng hӧp trung gian. So
phân tích này đưӧc thoc hiӋn doa vào mӭc
cҩu tҥo phân tӱ cӫa amino hay oxy acid
qua N và SI ± S cӫa phương pháp
quang phә trên cereulide và sҧn ph m
thӫy phân là các dipeptide cӫa nó. So hӧp
nhҩt cӫa 13
là chiӃm đӃn 95% trong O-
al, O-Leu và L-al, trong khi đó chӍ có
40% 13
là kӃt hӧp trong D-Ala cӫa
m!

ereulide.


Hӂ SINH ¦Ӝ
TӔ
Diarrheal Syndrome
- Ӣ Na-Uy, hai lҫn bӝc phát đã xҧy ra vӟi rҩt nhiӅu ngưӡi sau khi ăn thӏt
hҫm vӟi khoai tây và rau. LiӅu lưӧng gây bӋnh xҩp xӍ 104 ± 105. Lҫn đҫu
tiên bùng phát (1992), 17 ± 24 ngưӡi bӏ ngӝ đӝc, 3 trong sӕ các bӋnh nhân
phҧi nhұp viӋn tӯ 1 ± 3 tuҫn, triӋu chӭng bҳt đҫu nһng 3 bӋnh nhân này
khá muӝn (>24h). Lҫn thӭ hai, bӋnh bùng phát vào tháng 2 năm 1995.
- TriӋu chӭng tiêu chҧy do ít nhҩt hai loҥi đӝc tӕ đưӡng ruӝt sҧn sinh ra
trong suӕt quá trình sinh trư ng cӫa B.cereus trong ruӝt non. So hình thành
đӝc tӕ đưӡng ruӝt đҫy đӫ trong thoc ph m đӇ dүn đӃn ngӝ đӝc vӅ lý thuyӃt
mà nói là có thӇ, nhưng đӕi vӟi thoc ph m phөc vө cho con ngưӡi thì đây là
điӅu không thӇ chҩp nhұn. ¦iӅu này xҧy ra khi, sӕ lưӧng B.cereus tӗn tҥi
trong thoc ph m thҩp nhҩt là 106/g hoһc /ml và lưӧng lӟn cӫa đӝc tӕ đưӡng
ruӝt phҧi đưӧc hình thành đӇ chӕng chӏu đưӧc vӟi pH cӫa dҥ dày và enzyme
mR
proteolytic cӫa tá tràng.


Hӂ SINH ¦Ӝ
TӔ
u  
÷%(

ҧ
m
һ

Ӈ
Ӌ
+

ҧ


 

ӫ


$ 


 
һ


|Ӆ

Ӊ

































m,-.
(һ

.
ӝ

ӕ ưӧ

ҧ





















(
ӝ
(
|(ҥ
ӝ

ӕ #( 
ӡ
$/
ӫ Ӌ







































0
1 m2
3(ҧ
ӡ
 
 
Ӌ

















m
1 4
Ӌ

ӭ






















 
ө
% 
%ҷ5


+
Ӆ
ưӟ
5
Ӎ
(ҧ
ӗ
* 


Hӂ SINH ¦Ӝ
TӔ

A Bào tӱ cӫa B. cereus tӯ mô tҧ đҫu tiên trên (phҫn giӟi thiӋu

chung) là đưӧc phân biӋt đӇ cho thҩy rҵng chúng có khҧ năng
bám vào các tӃ bào
aco-2 (trên các tӃ bào biӇu mô cӫa ngưӡi).
Sau khi bám vào, các bào tӱ này nҧy mҫm mӝt cách nhanh chóng
(trong vòng 1h), hình thành tӃ bào B. cereus sinh dưӥng trên đӍnh
cӫa các tӃ bào biӇu mô, tiӃp đó là sҧn sinh ra đӝc tӕ, nӃu đӝc tӕ
này xuҩt hiӋn trong đưӡng ruӝt, đӝc tӕ đưӡng ruӝt sӁ tұp trung
khoanh vùng vùng ngoҥi biên cӫa ӕng ruӝt sӁ tăng cao hơn
trong lumen và vì vұy gây nên mӕi nguy lӟn hơn và gây bӋnh
mӝt cách trҫm trӑng. ӝt điӅu có thӇ xҧy ra đӕi vӟi cơ chӃ này là
thӡi gian ӫ bӋnh sӁ lâu hơn như đã quan sát.
m


HƯNG H X
¦NH
-
ác phương pháp truyӅn thӕng:
A hương pháp đӃm khu n lҥc

A hương pháp N

-
ác phương pháp hiӋn đҥi:

A hương pháp LA

A hương pháp LISA

A hương pháp 



 üHƯƠNG üHÁü
TRUYӄN THӔNG

r
Ưu & nhưӧc điӇm
- Ưu điӇm:
A Không phҧi đҫu tư dөng cө, thiӃt bӏ đҳt tiӅn

- Nhưӧc điӇm:
A ¦ӝ nhҥy không cao

A
êu cҫu kӻ năng thao tác

A Tӕn nhiӅu hóa chҩt

A Thӡi gian phân tích lâu

A Tӕn nhiӅu nhân công

l
Các đһc tính cӫa Bacillus nhóm 1
Loài

¦һc tính B.cereus B.thuringiensis B.mycoides B.anthracis B.megaterium

Gram +(a) + + + +
Catalase + + + + +
Di đӝng +/-(b) +/- -(c) - +/-
Khӱ nitrate + + + + -(d)
ühân hӫy tyrosine + + +/- -(d) +/-
Kháng lysozyme + + + + -
ühҧn ӭng vӟi lòng đӓ trӭng + + + + -
Lên men glucose + + + + -
ühҧn ӭng Vü + + + + -
Sinh acid tӯ manitol - - - - +
Ô
Tan máu (cӯu) + + + -(d) -
ühương pháp truyӅn thӕng
ühương pháp đӃm khuҭn lҥc



¦,+-$

ü


  


  
 

[
  !   
Cách tính kӃt quҧ:
Mұt đӝ (CFU/ml)=AixDi/V

" ! # $

%
&"
 '(
)"& *  +, - #.' '/.'0
%12

ó
ühương pháp truyên thӕng
ühương pháp MüN

 '( /.''

3

R 4!56 7ü

: ; 
<=+ ü>r ':$ll!

: ;  ? /@ A

7
   B

  !8 9  

!

!#C ü
Các thӱ nghiӋm phân biӋt các loài Bacillus nhóm 1

A Thӱ nghiӋm tính di đӝng: hҫu hӃt các chӫng 6
–

B.thuringgiensis là di đӝng, 6  

, 6 

 không di đӝng

A Sӵ hình thành rӉ giҧ: 6
không tҥo cҩu trúc rӉ giҧ, 6 


tҥo cҩu trúc rӉ giҧ

A Thӱ nghiӋm làm tan máu: 6
làm tan máu mҥnh, tҥo vùng tan
máu hoàn toàn (ȕ) 2-4µm, 6  


 và 6 

cũng làm tan
máu, B.anthracis thưӡng không làm tan máu trong 24h

A Sӵ tҥo đӝc tӕ protein dҥng tinh thӇ:6  



 tҥo tinh thӇ đӝc tӕ,
R
6
và các 6

 khác không tҥo tinh thӇ đӝc tӕ
 Tiêu chu n vi sinh cho phép trong thoc ph m ,
Bӝ y tӃ 4/1998

1!
 2 345+

45$6/
 0$7
".$/
 0$ 6 !

".$ 
Œ89:;+:<&=:+:
>
?>
Œ@A 0$
>?>BC
D.: &E:<
<
 

@A 0$
>?>B+F
G
:D&
H:I
JC 
ŒK<L6M%8
DNO+C?P:$>:$Q'R
ŒSO+%/
> D;+<L6MC?*?P 

".$T
UD;(
T&NN8V+
%W
$:
T
U&>
?
 r
ŒXA<L6M%8
D'LNY+
ŒSO+%/
> :D;+Z
&<L6M 
 ӜT SӔ HÌNH ҦNH

 6 !B
6
 !B*  /
39 4!56   AD
rm
6
  4 '=!E!F C 6  
 '=!E!F C

r
  6 !  6 !
!B4!56 ' !B4!56 ü

rr
 #6Ưp
#67#
68ӊp
Ҥ8

A )
1 9#|

&B.cereus enterotoxin everse assive Latex

Agglutination '

A u)
 )|8÷
&Bacillus Diarrheal nterotoxin isual

ImmunoAssay )

A #9

rl
HƯNG H )
1 9#|
Nguyên tҳc:

A #ươ
! !
|
&  "
 ('

A #ươ
! !
9#|
&9  
# 
|  "
 ('

rÔ
HƯNG H AGGLUTINATION

Kháng thӇ
Kháng nguyên dҥng hҥt

r[
 HƯNG H LA :
BӜ KIT B
T ± LA (OXOID TST KIT)

Hҥt latex (polystyrene 0.81 µm) gҳn kháng Kháng nguyên hoà tan
thӇ đăc hiӋu  (thӓ) kháng nguyên Hҥt latex tө lҥi

ró
Bӝ Kit BCET ± RüLA (Oxoid test kit)
 m

r!
#6Ưp #67# )|8÷ :8

A p+
ҳ

!ươ
! !
)
 %;
<

rR
l
Bӝ BD - Tecra kit test

lm
)> Z
AC

l
HƯNG H
üCR

lr

Marie-Hélène Guinebretìere et al,.2002; Marcela Vyletělová, Juraj Banykó,« ).

ü 5G  Aü:H
A B.cereus 
 kit test (Takara): xét nghiӋm 2 loҥi gen
Œ
S (cereulide ± emetic toxin) cӫa B.cereus
Œ L (lecithinase ezyme gen) cӫa các loài Bacillus


0?$

XAT+X]6 6!6K


DQ?[K
'

'

\'

ll
!N
)> Z
AC

7
%

6N
'


#$
3]@7+

C^?
7_

&'
3_`7+

C\?
7a
%&6%63abb7C^?

lÔ
 &'
HIü:H 

N"X' %$
%
?

%
S"d
@c ]
1%

&+

l[
ü 5G  A HIü:H

 
"Ne 'L NY+:!:f  ( 
 Ng %/
> Z
* %Q
h ?A S"d&+ Ne %&

  5J
"N@c ]6E D>  ?- Di $P S"d$!
 D2 (
ló
%+ A T+ E N  > D> Z
A
& 9 ' ,+ P 
b
 K#
6 L


0?$

0?$

0?$

XAT+X] XAT+X] XAT+X]

S
J<[S"d' S
J<[S"d' S
J<[S"d'

1[$,j'6K 1[$,^ '6K 1[$,'6K

)2N(\  )2N(\' )2N(\ 

!N !N !N l!

üHƯƠNG üHÁü üCR

A ultiplex 
:

Œ Hӛn hӧp 
 có nhiӅu cһp mӗi

Œ hương pháp phát hiӋn nhanh nhiӅu đoҥn gen trong

cùng mӝt phҧn ӭng

Œ Ưu điӇm: Giҧm thӡi gian phân tích mүu

lR
 B
T-
BLA test
kit

Tecra BD
test kit
( LISA -
IA)
X]

Ô
Ôm
Ô
Ôr
Ôl
 6 ! !'M 6 M ü:H 
_&
C? S"d6&NN
%:_&
C b

%

'"a^:_&
C b'
?6' "a:_&

C@&6$
66&S
?6dj:_&
C`b
6a^j:_&
' C b

%

''6&
':
_&
C@& 6



'&
%

' "a\:_&
' C b

%

''6&
'b

ÔÔ
NHҰN XÉT:
A LISA-BD cho kӃt quҧ dương tính vӟi các dòng B.cereus có đӝc tӕ NH (Omnii &
Nduhiu, 2005; arcela yletělová, Juraj Banykó, ) vӟi đӝ nhҥy 1ng/ml dӏch thoc
ph m bӏ nhiӉm.
A B
T ± LA cho kӃt quҧ dương tính vӟi dòng có đӝc tӕ HBL, chҥy 
 kiӇm tra
có so hiӋn diӋn cӫa gen hblA (Sanjoy Das et al.,2007;antynen & Lindstrom,
1998,..), có đӝ nhҥy cao vӟi protein L2/HBL (Douglas J.Beecher et al.,1994), 2ng/ml
A 81% dòng B.cereus sinh đӝc tӕ NH, 53% dòng sinh đӝc tӕ HBL, 18% dòng cho cҧ 2
loҥi đӝc tӕ này trên tәng 96 loài (Omnii & Nduhiu, 2005)
A 65% cho kӃt quҧ dương tính vӟi Tecra test, 51% vӟi B
T-LA test (Beattie &
Williams, 1998).
A rimer BalF/Bal khuyӃch đҥi đoҥn gen 533bp đһc hiӋu cho nhóm B.cereus (Sanjoy
Das et al.,2007)

Ô[
 Thành phҫn
¦ӝc Tӕ ürotein Gen mã hoá ühương pháp phát hiӋn
đӝc tӕ
L2 hbl
BCET-RüLA test kit

Hemolytic (B.cereus enterotoxin everse

L1 hblD assive Latex Agglutination -
enterotoxin Oxoid test kit)
(HBL)
B hblA phát hiӋn protein L2/HBL

NheA nheA Tecra BDE ( ELISA - VIA)

Diarrhoel
enterotoxins Nonhemolytic Bacillus Diarrheal nterotoxin
enterotoxin NheB nheB visual immunoassay - Tecra üCR
(NH) kit test)
phát hiӋn protein NheA 45kDa
Nhe
nhe

/ NH
nterotoxin T bceT
cytK-1 cytK-1

ytoxin K
cytK-2 cytK-2
nterotoxin F entF entF
metic toxin Sperm motility test (Swensson
(
ereulide)

ereulide
es (
S)
et al.,2005;«) Ôó

Marie-Hélène Guinebretìere et al,.2002; Marcela Vyletělová, Juraj Banykó,« ).

 KӂT LUҰN

A B.cereus có 2 loҥi đӝc tӕ:

Œ Diarrhoeal enterotoxin,thӡi gian ӫ bӋnh dài 8-16h, gây ngӝ đӝc tương to loài

lostridium perfringens, bҩt hӑat 56o
/30phút, sӕng pH 4-11.
Œ metic toxin (cereulide), thӡi gian ӫ bӋnh ngҳn 1-6h , gây ngӝ đӝc tương to loài
Staphylococcus, bҩt hӑat 120o
/90ph, sӕng pH 2-11.

A hương pháp miӉn dӏch :

Œ LISA-BD dương tính vӟi đӝc tӕ NH Diarrhoel
enterotoxins
ΠB
T-LA dương tính vӟi đӝc tӕ HBL

A B.cereus phát triӇn 35-40o
.
ác thoc ph m sau khi nҩu chín đӇ nguӝi dӉ bӏ
nhiӉm b.cereus, cҫn bҧo quҧn thoc ph m trên 60o
.

Ô!
ÔR