Meat and meat products - Enumeration of Brochothrix thermosphacta - Colony-count technique
HA NQI- 2002
,
_. ,__. i
Li:Jinoidau
TCVN 7139 : 2002 hoan toan tlJong dlfong vOi ISO 13722: 1996;
TCVN 7139 : 2002 do Ban ky thuat tieu chuan TCVN/TC/F8 Th]t va san pham thit bien soan, Tong cue Tieu chuan £)0 Ilfdng Chat Ilfc,1ng de nqn], B(> Khoa hoc va C6ng ngh$ ban hanh.
A ~ _
TIEU CHUAN v i e r NAM
TCVN 7139 : 2002
Thjt va san ph&m thit - D;nh htQng Brochothrix thermosphacta - Ky "huc)t dem khu&n lac
Meat Q' .d meat produces - E .imeretion of Brochothrix thermosphacta - COlony-count technique
1 Pharn vi ap dl:lng
Tleu chuan nay qui dinh phironq phap dinh ILf~ng Brochothrix thermosphacta c6 trong tat ca cac loai thlt va san pham thlt ke ca ca thit gia cam, bang ky thuat dem khuan lac.
2 lieu chu&n vi~n din
TCVN 6404 : 1998 (ISO 7218) Vi sinh vat trong truro pham va trong thirc an gia sue - Nguyen tac chung ve kiem tra vi sinh vat.
TCVN 6507 : 1999 (ISO 6887 : 1983) Vi sinh v~t hoc - HLfang dan chung ve chuan b] cac dung dich pha loang de kiem tra vi sinh vat.
TCVN 4833 - 2 : 2002 (ISO 3100 - 2 : 1988) Thit va san pham thit - Lay mau va chuan bl rnau thLtPhan 2 : Chuan b] mau thLt de kiem tra vi sinh vat.
3 £>jnh nghia
Trang tieu chuan nay ap dunq djnh nghTa sau
3.1 Brochothrix thermosphacta : Vi khuan gram dLfong tao thanh cac khuan lac oxidaza am tfnh d~c tn.tng tren m6i trLfdng d~c chon IQc [thach streptomixin sunfatltali axetatl actidion (ST AA)] trong cac dieu kien thLt q.. dint": .a tieu chuan nay.
3
TCVN 7139 : 2002
4 Nguyen tac
4.1 Cay mot 1L1<;mg rnau thLr qui dinh neu san pham danq long hoac mot 1L1~ng huyen phu ban dau neu san pham danq khac IEm be mat m6i trL1ang nu6i cay d~c chon 19C dlfl1g trong cac dTa Petri.
DL1di cac dieu kien tL10ng nr, chuan b] cac dTa khac SLr dunq cac dung dich pha loang thap phan cua mau thLr hoac cua huyen phu ban dau.
4.2 U cac dTa d nhiet d(> tlr 22°C den 25°C trong khoang 48 h ± 4 h. 4.3 Lay cac khuan lac de thLr kh~ng djnh.
4.4 TCt s6 khuan lac da dL1~C thLr kh~ng djnh, tinh 1L1~ng Brochothrix thermosphacta co trong mot mililit. hoac trong mot gam rnau tlr s6 khuan lac thu diroc tren cac dTa d cac rrurc pha loang diroc chon sao cho ket qua tin cay nhat (xem 9.3).
5 Djch pha loang, moi tn.ti1ng'nuoicay va thuoc thlt'
5.1 Khai quat
Ve thuc hanh phonq thLr nghi$m hi$n hanh, xem TCVN 6404 : 1998 (ISO 7218).
5.2 Djch pha loang
Xem TCVN 6507 : 1999 (ISO 6887).
5.3 Moi trllOng d~c chon IQc: Thach streptomixin sunfatltali axetatlactidion (STAA) (xem tai Ii$u tham khao [2]).
Hoa tan cac thanh phan tren hoac m6i tnronq hoan chinh kh6 trong ruroc bang each dun soi. Chlnh pH sao cho sau khi khlr trunq pH la 7,0 d 25°C.
Khlrtrung m6i tnronq trong noi hap ap lL,Ie (6.1) 15 phut de d 121 DC.
5.3.2 Dung dich streptomixin sunfat
5.3.2.1 Thanh phan
i Streptomixin sunfat
1,0 9
i NL1dc
100 ml
5.3.2.2 Chuan bj
Hoa tan streptomixin sunfat trong ruroc. Loc de khlr tnmq.
5.3.3 Dung djch actidion
Canh bao - Actidion va tali axetat la cac chat dQc. Khi lam vi~c vdi cac hoa chat va cac dung djch cua chung phai thl/c hi~n cac qui trinh thich hqp ~ tranh b] nhi€tm sang ngtlCli thl/c hi~n va moi tn.ti:lng.
5.3.3.1 Thanh phan
,
I Actidion (xycloheximit)
I NL1dC
150 9 I 90 mil
5.3.3.2 Chuan b]
Hoa tan actidion trong mroc. L9C de khlr trunq.
5.3.4 Dung dich tali axetat
5.3.4.1 Thanh phan
I Tali axetat I NL1dC
250 9 100 ml
5.3.4.1 Chuan bj
Hoa tan tali axetat trong rnroc. L9C de khlr trunq,
5
TCVN 7139 : 2002
5.3.5 Moi tnrang hoan chinh
5.3.5.1 Thanh phan
M6i trLfdng co Sd (5.3.1)
900 mil I
Dung dich streptomixin sunfat (5.3.2)
50 ml
Dung dich actidion (5.3.3)
.; 20 ml
Dung dich tali axetat (5.3.4)
5.3.5.2 Chui'n b]
Lam tan chay m6i trLfdng co Sd ve lam ngu(>i tren noi each thuy (6.9) d nhi~t d(> 4rc. DLfOi cac dieu ki~n v6 trung, lam am cac phan dung dich khac (5.3.2, 5.3.3 va 5.3.4) den 4rc trong noi each thuy. Cho cac ILf<;,ng the tich qui dinh (5.3.5.1) cua cac dung dich vao m6i trLfdng co Sd da ngu(>i, lac deu giU'a cac Ian them.
5.3.6 Chui'n b] cac dia thach d~ dem
R6t tu 15 ml den 20 ml m6i trLfdng hoan chlnn (5.3.5) vao cac rna Petri v6 trung (6.4). De yen cho d~cl~i.
Cac rna nay c6 the diroc bao quan tnroc khi dLf<;'c lam kh6 1 tuan d nhi~t d(> tLr ODC den 5DC.
Ngay tnroc khi SU dunq, lam kh6 cac rna thach, tot nhat la md nap ra va I~t ngLf<;1c rna thach xuong dLfOi, d~t vao tll (6.2) de d nhiet d9 tLr 37 DC den 50 DC, cho den khi cac gi9t mroc da bien khoi mat cua m6i tnronq. Sau do kh6ng lam kh6 them mia. Cac rna thach cOng c6 the dLf<;'C lam kh6 trong tll say 30 phut voi rna dLf<;'C md mot rura nap hoac de qua dem voi nap rna van d~y nguyen.
Cac rna thach da dLf<;1c chufln b] c6 ban san. Bao quan va su dl:mg cac rna nay theo chi dan cua nha san xuat.
5.4 Thuoc thlr oxidaza
5.4.1 Thanh phan
N, N, N', N' - Tetrametyl-p-phenylenediamin dihidroclorua i .
i-Nti& cat
1,0 9 100 ml
5.4.2 Chui'n bj
Hoa tan thuoc thu trong mroc lanh, Thuoc thLt phai diroc chuan bi ngay tnroc khi sLt dunq.
C6 the su dl:mg cac rna hoac cac que cay ban san. Khi d6 su dunq theo chi dan cua nha san xuat.
6
TCVN 7139 : 2002
6 Thiet b], dl;lng cu
Slt dunq cac thiet b], dl,lng cu phbng thlt nqhiem vi sinh thong thvong va dac c.et la cac dung cu sau :
6.1 Thiet b] khlt trung kho (tu say) hoac thiet b] khlt trunq ltdt (noi hap ap hrc).
Xem TCVN 6404: 1998 (ISO 7218).
6.2 Tu am hoac tu say. thong qio doi luu, cc the duy tri diroc nhiet d¢ W 3rC :!: 1°C den 50°C ± 1 °C
6.3 Tu am, co kha nang heat d9n9 d nhiet d9 tLt 22°C ± 1 °C den 25°C ± 1°C.
6.4 Dia Petri: bang thuy tinh hoac chat deo, dvong kfnh W 90 mm den 100 mm.
6.5 Pipet chia dQ xci het (blow-out), co mi$ng xa rong, dung tich danh dinh 10 ml va 1 ml, diroc chia vach 0,1 ml.
6.6 Bau cao su, hoac loai thiet b] khac thieh hop de Slt dunq voi pipet ehia do.
6.7 Chai hoac binh cay co dung tich thich hep.
6.8 Que g«lt, bang thuy tinh, dai 20 cm va co dvong kfnh khoanq 3,5 mm va chieu dai 20 cm, mot dau duoc uon cong tao cac gap dai khoanq 3 em va dau mut duoc lam nhan bang nhi$t.
Cac que g<;1t m.'. Dang nrura vo trunq Slt dunq mot Ian cOng co the dV<;:le sCI' dunq.
6.9 Noi each thuy, co kha nang duy tri d 47°C == 2°C.
6.10 Thiet b] dem khu~n lac, co nen den diroc chieu sang va co may dem di$n tLt s6 hoac co h9C.
6.11 pH-met, co d9 chinh xac den ± 0,1 don vi pH d 25°C.
6.12 Que cay yang btmg platin, hoac dOa thuy tinh hoac chat dec dvong kfnh khoang 3 mm.
7 Lay mau
Dieu quan tronq la phbng thLt nghi$m phai nhan dVt;lc dung rnau dai dien va kh6ng b] hu hong hoac giam chat Ivgng trong su6t qua trinh van chuyen hoac bao quan.
Viec lay rnau kh6ng qui dinh trong tieu chuan nay. Nen lay mau theo qui dinh trong TCVN 4833 - 1 : 2002 (ISO 3100-1).
7
TCVN 7139 : 2002
8 Chu~n b] mau thlr
Chuan bi rnau thir d<::li dien theo TCVN 4833 - 2 : 2002 (ISO 3100 - 2). Kiem tra rnau da diroc xLr Iy truce canq scm canq tot. Neu can, co the bao quan rnau d nhiet d9 tu 0 °C den + 2°C, nhLfng khonq qua 24 h.
9 Cach tien hanh
9.1 Phan mau thlt, huyen phu ban dau va cac dung dlch pha loang
Xem TCVN 4833 - 2: 2002 (ISO 3100 - 2) va TCVN 6507: 1999 (ISO 6887: 1983).
9.2 Cay va u
9.2.1 Dung pipet vo trunq (6.5) chuyen sang hai dia thach (5.3.6), mOi dia 0,1 ml mau thLr neu san pharn danq long hoac huyen phu ban dau neu S~1n pharn d danq khac. l.ap lai qui trlnh nay vdi cac d9 pha loanq thap phan tiep theo.
9.2.2 Dung que g<::lt rnau (6.8) de dan deu chat long tren be mat dia thach canq nhanh canq tot rna khong cham que qat mau VaG canh cua dia. 80i voi moi dia sLr dunq mot que qat rnau mdi. De cac dia duoc d$y nap trong khoanq 15 min d nhiet d9 moi tnronq binh thLfong de chat long hut bam VaG thach.
9.2.3 t.at ngLf~c cac dia d§ chuan bi (9.2.2) va u trong tu am (6.3) trong vonq 48 h ± 4 h d nhi$t d9 W 22°C den 25°C .
.,.' _?
9.3 Oem khuan lac
Sau khi ket thuc thoi gian u qui dinh (9.2.3), dem cac khuan lac d~c tnmq tren cac dia va gilt lai cac dia chua W 15 khuan lac den 300 khuan lac, bang dunq cu dem khuan lac (6.10). Cac khuan lac diflc trLfng bong, tron hoac cac khuan lac moe vonq tron co dLfong kfnh 0,75 mm hoac Idn hem, co rnau trang nhat va chunq am tfnh oxidaza (9.4).
9.4 Thlr khing dinh
Pseudomonas co th~ moe tren thach STAA (5.3). Chung khac voi B. Thermosphacta bdi phep thLr oxidaza nhLf sau :
Lam am manh giay loc bang thuoc thLr oxidaza (5.4). Dung que cay vonq platin hoac dGa thuy tinh hoac dGa bang chat dec (6.12) (que cay vonq bang niken/crom cho ket qua dLfC1ng sai) lay rnau cac chat cay vi khuan thu diroc W dia thach TSAA va d~t len giay loc da diroc lam am. Cac khuan lac oxidaza dLfC1ng tfnh xuat hien rnau do tla trong vong 15 s. Brochothrix thermophacta ta cac khuan lac oxidaza am tfnh.
8
TCVN 7139 : 2002
10 Bi.r;u th] ket qua
10.1 So dem brochothrix thermophacta
10.1.1 Neu it nhat 113 80% cac khuan lac dtroc chon da dtroc thLr khitng dinh (9.4), thi so ILf<;lng Brochothrix thermophacta 113 so dem diroc trong 9.3.
10.1.2 Trong cac trLfdng hop khac, tfnh so ILf<;lng Brochothrix thermophacta nr phan tram Brochothrix thermophacta thu diroc trong 9.3 da diroc thLr khitng dinh (9.4).
Gill lai cac rna crura khong qua 300 khuan lac dac trtlng 0 hai d9 pha loang lien tiep. Can sLr dunq mot trong cac rna nay chua it han 15 khuan lac dac tnrnq
Tinh so ILf<;lng Brochothrix thermophacta trong mot gam hoac mot mililit san pharn, N, tuy tltng trLfdng hop, theo cong tmrc sau :
.11/ = I,a
V(nj + OJn, )d
trong d6
_La 113 tong cac khuan lac dac trLfng dem diroc tren tat ca cac rna diroc gill lai d hai d9 pha loang lien tiep, c6 (t nhat mot rna chira 15 khuan lac:
v 113 th~ tfch mau cay dLf<;lC sLr dunq tren moi rna;
n, la 56 rna dLf<;lC gill lai d d9 pha loang dau tien: n2 la 56 rna dLf<;lC gill lai 0 d9 pha loang thU hai;
d la h$ 56 pha loang tLfang ling voi d9 pha loang trnr nhat.
Lam tron cac ket qua tfnh dLf<;lC den hai chir 56 c6 nghia. Nhu v~y, neu chir 56 sau cunq nho han 5 thi $6 dCrng tnroc so d6 khong b] thay doi, con neu chir 56 sau cunq ta 5 hoac Ion han 5 thi tang 56 dllng truce len m9t don vi. Lam tron tiep theo cho den khi thu dLf<;lC hai chll 56 ~6 nghia.
Lay ket qua la 56 ILf<;lng Brochothrix thermophacta trong mot mililit (san pharn danq long) hoac trong mot gam (san pham danq khac), dLf<;lC bi~u th] btmg 56 tLt 1,0 den 9,9 nhan voi luy thua tLfang ling cua 10.
THiDV
ss dem Brochothrix thermophacta 0 nhiet d9 tLt 22 DC den 25 DC cho cac ket qua sau :
- j d6 pha loanq thu hai gilt 19i : 13 khuan 19C va 8 khuan 19C dac tnrnq.
81+97+1"'+8 "'01
- . j =---=9136
(J.1[~ + (0.11 ~)], J 01 0.022
Lam tron ket qua nhL1 qui dinh tren ta co 9 100 hoac 9,1 x 103 Brochothrix thermophacta trong mot rnililit hoac m6t gam san pham.
10.2.2 Udc tinh cac so hlc;mg nho khuan lac
"Jeu c6 hai dia cua mau thLt goc (san pharn danq long) hoac huyen phu ban dau (san pham d dane khac) crura WOden 15 khuan 19c, thl bao cao ket qua nhL1 sau:
8i~u thi ket qua nhu sau :
- it han 15 Brochothrix thermophacta trong mot rnililit (san pham dang long), hoac
- it han 15 x1!d Brochothrix thermophacta trong mot gam (san pham danq khac).
trong do d la h$ so pha loanq cua huyen phu ban dau,
Neu tren hai dTa rnau thLt goc (san pham d9ng long) hoac huyen phu ban dau (san pham danq khac) kh6ng co bat ky mot khuan 19c di3c trLfllg nao thl bi~u th! ket qua nhu sau :
- it han 1 Brochothrix thermophacta trong mot mililit (san pham d~ng long):
- it han 1/d Brochothrix thermophacta trong mot gam (san pham danq khac).
trong do d la h$ so pha loang cua huyen phu ban dau.
Khoang tin cay cua phL1cmg phap nay dao d6ng W -7% den 8% doi voi 300 khuan lac va W - 29% den 41 % doi vOi 15 khuan lac.
12 Baa cao thlt nghi~m
Bao cao thLt nghiem phai chi ra phL10ng phap da SLt dunq ve ket qua thLt nghi$m thu dL1<;1c.
COng phai de cap den tat ca cac chi tiet thao tac khong qui dinh trong tieu chuan nay, cung voi cac chi !iet bat thL1dng khac co th~ anh hL1dng toi ket qua.
Bao cao thLt nghiem cOng phai gam rnoi thong tin can thiet d~ nhan biet day du ve rnau thLt.
TCVN 7139 : 2002
Phu Il}c A
(tham khao)
Tal li~u tham khao
[1] TCVN 4833 - 1 : 2002 (ISO 3100 - 1 : 1991) Thit va san pham th!t - Lay mau va chuan b] rnau thLr - Phan 1 : Lay rnau.
[2] GARDNER, G.A., J. Appl. Bact., 29 (3), 1966, pp. 455-460.