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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MEDICA


ESPECIALIDAD LABORATORIO CLNICO Y ANATOMA
PATOLGICA
ASIGNATURA
Histoqumica Bsica
DOCENTE
Lic. T.M. Walter Lpez Lpez
ALUMNAS
Zary Charmely Ziga Armendriz
Erika Lorena Quito Velarde
SEMESTRE
III
CUSCO PER
2011
COLORACIONES
ESPECIALES
COLORACIONES
ESPECIALES
PRESENTACION
El presente trabajo de investigacin
contiene
los principales mtodos de
Coloraciones
Especiales para fibras reticulares,
elsticas y
colgenas.
Todos estos componentes tienen
estructuras que solo se podrn
diferenciar con
INTRODUCCION
El colgeno es una protena y es el componente principal del
tejido conectivo fibroso (tendones),
tambin se encuentra en la piel, cartlago y ligamentos; es
inelstico pero tiene gran resistencia a
la traccin.
Las fibras elsticas son ms delgadas que las colgenas y
carecen de estriaciones. El componente
principal de las fibras elsticas es una protena amorfa llamada
elastina, rodeada de micro
filamentos de una glicoprotena llamada fibrilina.
Las fibras reticulares estn constituidas fundamentalmente por
COLORACIONES
ESPECIALES
Colorean los componentes del tejido colectivamente a travs del
uso de colorantes y por reacciones
qumicas semiespecficas (hongos, bacterias, bandas musculares,
colgeno, detalles intra e intercelulares). Las ms usadas son:
W Teido directo: El tejido es empapado y penetrado por el
colorante y no cambia la estructura del tejido.
W Teido indirecto: La reaccin es indirecta y depende del uso
de intermediario de un mordiente, usualmente un metal
pesado.
W Teido fsico: El colorante se sita fsicamente (solubiliza) en
los elementos de la clula.
W Teido qumico: El colorante se combina con la sustancia
celular afn y forma una substancia nueva y la reaccin es
generalmente irreversible.
W Mordientes: Substancia que ayuda a ligar los colorantes al
tejido para asegurar una accin o reaccin especifica.
FIBRAS
COLAGENAS
El colgeno es una molcula proteica que forma fibras,
secretadas por las clulas del tejido
conjuntivo como los fibroblastos, son flexibles, pero ofrecen
gran resistencia a la traccin.
En el tejido seo adulto y en la crnea se disponen en lminas
delgadas y superpuestas, paralelas
entre s, mientras las fibras forman ngulo recto con las de las
capas adyacentes. Las clulas
interactan con la matriz extracelular tanto mecnica como
qumicamente, lo que produce notables
efectos sobre la arquitectura tisular.
El tipo ms comn se denomina colgeno tipo I, estas forman
haces de fibras de 0,5 a 20 m de
Coloracin Tricrmico
de Masson
Tincin especial que permite visualizar las fibras de colgeno tipo I
que forman fibras gruesas o haces.
Fundamento: Se tien las secciones con un tinte cido tal como
escarlata de Biebrich. Todos los elementos
del tejido tales como citoplasma, msculo y colgeno se unirn a los
tintes cidos, entonces se tratan con
cido fosfotngstico y/o fosfomolbdico permiten que la escarlata de
Biebrich difunda del colgeno pero no
del citoplasma. Estos cidos tienen numerosos grupos cidos que
probablemente acten como medio de
unin entre el colgeno y el azul de la anilina (probablemente el pH de
la solucin
fosfotngstico/fosfomolbdico tambin aumente la coloracin y ayude
al colgeno en la difusin o el retiro
de los colorantes).
Reactivos
Solucin de hematoxilina frrica de Weigert.
Solucin de escarlata de Biebrich - fucsina cida:
- 90,0 ml de escarlata de Biebrich al 1% en agua destilada.
- 9,0 ml de fucsina cida al 1% en solucin acuosa.
- 1,0 ml de cido actico glacial.
Solucin acuosa de cido fosfomolbdico (utilizar cido fosfotngstico en la
misma proporcin, si se va a teir con verde luz):
- 5,0 g de cido fosfomolbdico.
- 200,0 ml de agua destilada.
Solucin de azul de anilina:
- 2,5 g de azul de anilina.
- 2,0 ml de cido actico glacial.
- 98,0 ml de agua destilada.
Solucin de verde luz al 2% (alternativa al azul):
- 2,0 g de verde luz SF amarillento.
- 99,0 ml de agua destilada.
- 1,0 ml de cido actico glacial.
Solucin diferenciadora: solucin acuosa de cido actico glacial al 1%.
Procedimiento
Desparafinar e hidratar.
En material fijado en soluciones de formaldehdo o alcohlicas
se recomienda hacer un mordentaje previo con lquido de Bouin
durante 1 hora a 56-60 C o toda la noche a temperatura
ambiente.
Enfriar y lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color
amarillo.
Teir con hematoxilina frrica por 10 minutos. Lavar en agua
corriente por 10 minutos.
Lavar en agua destilada.
Teir con la solucin de escarlata-fucsina cida por 2-5 minutos.
Lavar en agua destilada.
Tratar con la solucin de cido fosfomolbdico-fosfotngstico
por 10-15 minutos si se va a colorear con la solucin de azul de
anilina, o en la solucin acuosa de cido fosfotngstico al 5%
por 15 minutos si se desea teir con verde luz.
Teir con solucin de azul de anilina 15 minutos o con solucin
de verde luz por 5 minutos.
Lavar en agua destilada.
Anlisis de resultados
W Fibras de colgeno Azul.
W Estructuras oxidadas +
citoplasma Rojo.
Se teirn de rojo la queratina,
los glbulos rojos y el tejido
muscular.
W Ncleo celular Negro, marrn.
Tricrmico de
Gomori en un paso
Mtodo idneo para teir fibrina, tejido muscular y
citoplasmas. Sin embargo, por su
pH cido (2.5 y 2.7) se presenta como una tincin
incompleta y difusa del
componente fibrilar ms fino (membrana basal y finas
fibras reticulares).
Fundamento: Esta tcnica combina un colorante
plasmtico y un colorante de fibras
conectivas (verde luz/azul de anilina) en una solucin de
cido fosfotngstico y cido
actico glacial. El tratamiento previo de las secciones con
solucin de Bouin caliente
intensifica la tincin.
El cido fosfotngstico favorece la coloracin roja de
msculo y citoplasmas, las
Reactivos
Solucin de Bouin: tras la
fijacin, se debe lavar la
muestra en abundante alcohol
de 70 hasta la decoloracin de
la misma para asegurar la total
eliminacin del cido pcrico.
Solucin tricrmica:
- 0,6 g de cromotropo
2R.
- 0,3 g de verde luz
- 1,0 ml de cido actico
glacial.
- 100,0 ml de agua
destilada.
- 0,8 g de cido
fosfotngstico.
Solucin verde luz (el verde luz
puede ser sustituido por el azul
de anilina):
- 5,0 g de verde luz.
actico al 0,5%.
Solucin diaria de
hematoxilina frrica de
Weigert:
Solucin matriz A:
- 1,0 g de hematoxilina
de Weigert en - -100 ,0
ml de etanol al 95%.
Solucin matriz B:
- 4,0 g de cloruro frrico
al 29%.
- 95 ml de agua
destilada.
- 1,0 ml de cido
clorhdrico
concentrado.
Se deben utilizar a partes
iguales cada una de las
soluciones matrices. La solucin
diaria de la hematoxilina de
Weigert puede reutilizarse
Procedimiento
Desparafinar e hidratar.
Realizar mordentaje en lquido de Bouin durante 1 hora a 56 C o
24 horas a T ambiente.
Lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo.
Teir con hematoxilina de Weigert por 10-13 minutos.
Realizar un lavado prolongado con agua corriente.
Teir con la solucin tricrmica por 15 minutos.
Diferenciar en la solucin de cido actico al 0,5% por 15
segundos (se puede utilizar tambin cido actico al 1%)
Si las secciones son muy rojas, se diferenciar con una solucin
de cido actico al 1%, a la cual se le agregarn 0,7 gr de cido
fosfotngstico.
Lavar en agua destilada.
Teir con la solucin de verde luz por 20 o 30 segundos.
Deshidratar con alcoholes, aclarar con xileno y montar.
Anlisis de resultados
W Fibras musculares, fibrina y
citoplasma Rojo.
W Colgeno, cartlago, mucinas y
membranas
basales Verde.
W Ncleos Azul negruzco.
FIBRAS
RETICULARES
Estn constituidas fundamentalmente por
colgeno de tipo III. Son
ms delgadas 0,1 a 1,5 m, ms glicosiladas.
No se colorean en los cortes de H-E. Se tien al
MO con tcnicas
argnticas en donde aparecen en color negro,
mientras que las colgenas
se tien de marrn.
Son sintetizada por las clulas del msculo liso,
fibroblastos, gla y su
funcin es la de sostn de los rganos
expandibles. Forman el armazn
Mtodo de Manuel
Solucin de nitrato de uranio al 1%.
- 1,0 g de nitrato de uranilo.
- 100 ml de agua destilada.
Solucin de plata amoniacal.
- 100,0 g de nitrato de plata.
- 1000,0 ml de agua destilada.
Separar 70 ml de la solucin de
nitrato de plata y
a los 930 ml agregar 60,0 ml de
hidrxido de amonio
al 28%; luego agregar lentamente
los 70 ml restantes hasta que la
solucin aparezca ligeramente
turbia (puede ser conservada en
refrigerador por varios meses).
40%.
- 99 ml de agua destilada.
Solucin de tiohiposulfato de sodio
al 5%.
- 5,0 g de tiohiposulfato de
sodio.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin de rojo ncleo resistente
(Kernechtrot).
- 0,1 g de rojo ncleo
resistente.
- 100,0 ml de solucin de
sulfato de aluminio
al 5%.
Llevar a hervor lento, enfriar,
Procedimiento
Desparafinar e hidratar.
Sensibilizar con la solucin de nitrato de uranio por 2 minutos.
Sumergir rpidamente en agua corriente.
Impregnar con la solucin de plata amoniacal por 1 minuto.
Lavar con agua corriente, sumergir 2 3 veces rpidamente
hasta que el precipitado blanco desaparezca del agua.
Revelar con la solucin de formalina por 1 minuto.
Lavar con agua corriente.
Matizar con la solucin de cloruro de oro por 1 minuto.
Lavar con agua corriente.
Reducir en la solucin de tiohiposulfato de sodio por 1 minuto.
Lavar con agua corriente.
Contrastar con la solucin de rojo ncleo resistente por 5
minutos.
Enjuagar con agua destilada (3 veces).
Deshidratar y aclarar con de alcohol etlico al 95%, alcohol
etlico absoluto y xileno (2 cambios cada uno por 2 minutos
cada uno).
Anlisis de
resultados
WFibras reticulares
Negro.
WNcleos y fondo
Rojo.
Mtodo de Snook
Solucin de permanganato de potasio
al 0.25%.
- 0,25 g de permanganato de
potasio.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin de acido oxlico al 5%.
- 5,0 g de acido oxlico.
-100,0 ml de agua destilada.
Solucin de nitrato de uranio al 1%.
- 1,0 g de nitrato de uranilo.
- 100 ml de agua destilada.
Solucin de nitrato de plata al 5%.
- 5,0 g de nitrato de plata.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin de hidrxido de sodio al
10%.
- 10,0 g de hidrxido de sodio.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin de plata amoniacal de
Snook.
amonio concentrado, gota a gota
hasta que la solucin se aclare y se
vean unos pocos grnulos en el fondo,
filtrar y usar inmediatamente.
Solucin de formalina al 1%.
- 1,0 ml de formaldehido al
40%.
- 99 ml de agua destilada.
Solucin de cloruro de oro al 1%
(solucin matriz).
- 1 ampolla de 1,0 ml de
cloruro de oro.
- 99,0 ml de agua destilada.
Solucin de tiohiposulfato de sodio al
5%.
- 5,0 g de tiohiposulfato de
sodio.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin de rojo ncleo resistente
(Kernechtrot).
- 0,1 g de rojo ncleo
Procedimiento
Desparafinar e hidratar.
Oxidar con la solucin de permanganato de potasio por 5 minutos.
Lavar con agua corriente.
Colocar en la solucin de acido oxlico hasta que las secciones se aclaren.
Lavar con agua corriente y luego colocar en agua destilada.
Colocar en la solucin mordiente de nitrato de uranio por 5 minutos.
Lavar con agua corriente.
Colocar en la solucin de plata amoniacal por 1 minuto.
Sumergir en agua corriente.
Colocar en la solucin de formalina al 1% por 1 minuto.
Lavar con agua corriente.
Colocar en la solucin con cloruro de oro por 1 minuto, hasta que las
secciones aparezcan de un color negro grisceo.
Lavar con agua corriente.
Colocar en la solucin de tiohiposulfato de sodio por 30 segundos a 1 minuto.
Lavar con agua corriente.
Contrastar con la solucin de rojo ncleo resistente por 54 minutos.
Enjuagar con agua destilada.
Deshidratar y aclarar con alcohol etlico al 95%, alcohol etlico absoluto y
xileno (2 cambios cada uno por 2 minutos cada uno).
Anlisis de
resultados
WFibras reticulares
Gris a negro.
WFondo Rosado.
Mtodo de Wilder
Solucin de acido fosfomolibdico al
10%.
Solucin de nitrato de uranio al 1%.
- 1,0 g de nitrato de uranilo.
- 100 ml de agua destilada.
Solucin de nitrato de plata al 10.2%.
- 10.2 g de nitrato de plata.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin de hidrxido de sodio al
3.1%.
- 3.1 g de hidrxido de sodio.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin de plata amoniacal.
- 5,0 ml de solucin de nitrato de
plata.
Solucin reductora.
- 50,0 ml de agua destilada.
- 0,5 ml de formalina neutra al 40%.
- 1,5 ml de nitrato de uranio al 1%.
Solucin de cloruro de oro al 2%.
- 20,0 ml de solucin matriz de
cloruro de oro al 1%.
- 80,0 ml de agua destilada.
Solucin de tiohiposulfato de sodio al
5%.
- 5,0 g de tiohiposulfato de
sodio.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin de rojo ncleo resistente
(Kernechtrot).
- 0,1 g de rojo ncleo resistente.
- 100,0 ml de solucin de sulfato
de aluminio al 5%.
Procedimiento
Desparafinar e hidratar.
Oxidar con la solucin de acido fosfomolibdico por 1 minuto.
Enjuagar con agua corriente hasta que todos los trazos de la solucin amarilla
desaparezca completamente.
Colocar en la solucin de nitrato de uranio por 1 minuto.
Enjuagar con agua destilada de 10 a 20 minutos.
Colocar en la solucin de plata amoniacal por 1 minuto.
Sumergir rpidamente en alcohol al 95%.
Colocar en la solucin reductora por 1 minuto.
Lavar con agua destilada.
Matizar con la solucin de cloruro de oro por 1 minuto.
Lavar con agua destilada.
Colocar en la solucin de tiohiposulfato de sodio por 1 minuto.
Lavar con agua corriente.
Contrastar con la solucin de rojo ncleo resistente por 5 minutos.
Enjuagar bien con agua destilada.
Deshidratar y aclarar con alcohol etlico al 95%, alcohol etlico absoluto y
xileno (2 cambios cada uno por 2 minutos cada uno).
Montar con un medio resinoso.
Anlisis de
resultados
WFibras reticulares
Negro.
WColgeno Rosa.
WOtros elementos
Rojo.
FIBRAS ELSTICAS
Las fibras elsticas se estiran fcilmente y recuperan su longitud
original cuando la fuerza
deformante ha desaparecido.
El principal componente de las fibras elsticas es la elastina,
material proteico muy insoluble, las
microfibrillas tienen como principal componente una
glicoprotena llamada fibrilina, rica en
aminocidos hidroflicos y que contiene residuos de cistina los
cuales pueden formar puente
Disulfuro (estabilizando la estructura de las microfibrillas). En las
fibras elsticas juegan un rol
estructural, formando una especie de vaina alrededor de la
elastina, permitiendo as la formacin de
estructuras fibrilares elsticas.
Coloracin de Verhoeff
Solucin de hematoxilina
alcohlica al 10%.
- 10,0 g de hematoxilina.
- 100,0 ml de alcohol
absoluto.
Solucin de cloruro frrico al
10%.
- 10,0 g de cloruro frrico.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin de yodo de Verhoeff.
- 2,0 g de yodo.
- 4,0 g de yoduro de potasio.
- 100,0 ml de agua destilada.
Solucin colorante diaria de
fibras
elsticas de Verhoeff.
- 25,0 ml de hematoxilina
10%.
Mezclar bien y luego agregar 25,0
ml de solucin de
yodo de Verhoeff.
Solucin diferenciante de
cloruro frrico al 2%.
- 20,0 ml de cloruro frrico
al 10%.
- 80,0 ml de agua destilada.
Solucin de Van Gieson.
- 5,0 ml de solucin de
fucsina acida al 1%.
- 95,0 ml de solucin
saturada de cido pcrico.
Solucin de tiohiposulfato de
sodio al 5%.
- 5,0 g de tiohiposulfato de
sodio.
Procedimiento
Desparafinar e hidratar.
Teir con la solucin colorante diaria de fibras elsticas
por 15 minutos.
Lavar con agua tibia corriente por 20 minutos.
Colocar en agua destilada.
Diferenciar con la solucin de cloruro frrico al 2%,
observar microscpicamente (las fibras elsticas aparecen
bien definidas de color negro y el fondo es gris).
Colocar en la solucin de tiohiposulfato de sodio por 1
minuto.
Lavar con agua durante 5 minutos.
Colocar en agua destilada.
Contrastar con la solucin de Van Gieson por 1 minuto.
Deshidratar y aclarar con alcohol etlico al 95%, alcohol
etlico absoluto y xileno (2 veces cada uno).
Montar con un medio resinoso.
Anlisis de
resultados
W Fibras elsticas Negro.
W Ncleos Negro.
W Colgeno Rojo.
W Otras estructuras
Amarillo.
PATOLOGIAS
La patologa de las fibras elsticas tiene
caractersticas nicas en la piel.
A veces es parte de un proceso complejo que
afecta otras estructuras
celulares y extracelulares.
W Elastosis solar: Masas amorfas, fibras
enruladas, engrosadas, hiperplasia, relacin
inversa con el colgeno, fibrocitos activados.
La acumulacin de fibras elsticas anormales
en la elastosis solar se debe ms a una
disminucin en la degradacin que a un
Engrosamiento cutneo.
Aspecto creo.
Arrugas.
WMilium coloide:
Ppulas traslcidas amarillentas,
mltiples.
1-3 mm.
Manos-cuello-cara.
WLiquen Esclero Atrfico:
Fundamentalmente raza blanca.
Incidencia familiar.
Ppulas y placas blanquecinas.
Epitelio como papel de celofn,
atrofia.
Erosiones y prpura.
Liquenificacin,
hiperqueratosis y escamas.
20% lesiones extra genitales
(tronco y brazos).
Inflamatoria.
Ppula o placa blanquecina.
Atrofia.
Hiperqueratosis folicular.
La enfermedad vascular del colgeno ocurre
cuando los problemas con
el sistema inmunitario afectan el colgeno.
W Espondilitis anquilosante: Es una
enfermedad crnica que causa inflamacin de
las articulaciones entre las vrtebras de la
columna y las articulaciones entre la columna
y la pelvis. Esta enfermedad finalmente hace
que las vrtebras afectadas se fusionen.
W Esclerodermia: Es una enfermedad
generalizada del tejido conjuntivo que
involucra cambios en la piel, los vasos
W Dermatomiositis: Es un tipo de miopata
inflamatoria, una enfermedad muscular
caracterizada por inflamacin y erupcin en la
piel.
W Escorbuto: Avitaminosis causada por un
dficit de vitamina C (cido ascrbico) en la
dieta que causa una disminucin en la sntesis
de hidroxiprolina y sta proporciona tomos
adicionales capaces de formar puentes de
hidrgeno que estabilizan la triple hlice de
colgeno.
CONCLUSIONES
En el Laboratorio de Anatoma
Patolgica todos los pasos a seguir son
fundamentales para un buen diagnstico
del espcimen y una parte importante es
la coloracin.
Debemos tener en cuenta que tipo de
muestra tenemos y que coloracin seria la
mas adecuada.
En el momento de la coloracin debemos
tener cautela con los tiempos y control de
BIBLIOGRAFA
Diccionario Medico Teide Segunda
Edicin, 1992, Barcelona.
Manual de Mtodos Histotecnolgicos,
1992, Estados Unidos.
Wikipedia.com
Medline Plus.com

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