P. 1
vi sinh vat

vi sinh vat

|Views: 729|Likes:
Được xuất bản bởitohru679

More info:

Published by: tohru679 on Oct 30, 2011
Bản quyền:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

04/05/2013

pdf

text

original

20

Chương 2

Cấu trúc và chức năng của tế bào vi sinh vật
I. Sinh vật nhân sơ
1. Các phương pháp và kỹ thuật nghiên cứu 1.1. Phương pháp quan sát tế bào Nhờ kính hiển vi quang học (kính hiển vi thường) với độ phóng đại 1500 - 2000 lần, đặc biệt nhờ kính hiển vi điện tử thường (TEM) và kính hiển vi điện tử quét (SEM) mà khoa học có thể thấy được tế bào, cấu trúc siêu hiển vi của vi khuẩn với đường kính khoảng 1μm. - Quan sát vi sinh vật trên tiêu bản sống: vi sinh vật ở giữa lam và lamella, nhuộm mực nho để thấy rõ màng nhầy (capsule), đây là phương pháp hay dùng cho những vi sinh vật nuôi cấy trên môi trường lỏng với kính hiển vi thường, quan sát được khả năng vận động của chúng.
Bảng 2.1: Một số phương pháp nhuộm màu và nguyên tắc sử dụng
Phươg pháp nhuộm màu +Nhuộm đơn (xanh methylene, carbolfuchsin, tinh thể tím, safranin…) +Nhuộm phân ly - Gram - Ziehl - Nielsen Nguyên tắc sử dụng Dung dịch rượu hoặc nước của các kiềm, dùng để quan sát hình dạng vi sinh vật, cách sắp xếp tế bào Với các phản ứng khác nhau với thuộc nhuộm có thể phân biệt được chúng Chia các vi khuẩn thành 2 nhóm lớn: Gram dương giữ màu tinh thể tím, Gram âm mất màu khi tẩy do đó sẽ nhuộm màu phụ hồng safranin Dùng để phân biệt các loài Mycobacterium và một số loài Nocardia. Vi khuẩn acid nhuộm với carbolfuchsin và xử lý với dung dịch rượu acid, vẫn giữ màu đỏ. Vi khuẩn không acid sẽ mất màu do đó sẽ nhuộm màu phụ là xanh methylene. Dùng để phát hiện sự có mặt của màng nhày, bởi vì polysaccharide màng nhầy không bắt màu thuốc nhuộm bao quanh tế bào vi khuẩn nhuộm màu tử Sử dụng để phát hiện bào tử vi khuẩn. khi dùng thuốc nhuộm lục malachite với tiêu bản có đun nóng, thuốc nhuộm sẽ thâm nhập vào nội bào tử và làm chúng nhuộm màu lục, khi bổ sung bằng đỏ safranin sẽ làm phần bao quang bào tử nhuộm màu đỏ hồng. Dùng để phát hiện tiên mao ở vi khuẩn, sử dụng thuốc làm phồng tiên mao rồi sau đó nhuộm bằng carbolfuchsin

+Nhuộm đặc biệt - Nhuộm âm (negative) -Nhuộm nội (endospore) -Nhuộm (flagella) tiên bào

mao

21

- Quan sát vi sinh vật trên tiêu bản cố định và nhuộm màu: Phương pháp nhuộm Gram và Ziehl - Nielsen cho phép nhận biết 2 nhóm vi khuẩn Gram dương va Gram âm, hình dạng của bào tử, các vật thể ẩn nhập như hạt dự trữ polyphosphate (hạt dị nhiễm sắc, hạt volutin), các giọt mỡ, glycogen… Những tiêu bản cố định này được quan sát ở bội giác lớn X 90 hoặc X 100 (bội giác dùng dầu, vật kính có vòng đen). Tham gia vào cơ chế nhuộm màu có cấu trúc của thành tế bào và bản chất các hợp chất của sinh chất khác nhau ở hai loại vi khuẩn. Để quan sát những cấu trúc siêu hiển vi người ta dùng kính hiển vi điện tử TEM và SEM, có thể thấy được những cấu tạo rất nhỏ với độ lớn vài nanometre. Những vi khuẩn Gram+ có mối liên hệ chủng loại phát sinh gần gũi nhau, ở đây người ta chia thành hai nhóm phụ: nhóm có hàm lượng (G + X)% cao hơn 50% như các Actinomycetales, Corynebacterium, Cellulomonas… và nhóm có (G + X)% thấp hơn 50% như Clostridium, Bacillus, Staphylococcus,… Những vi khuẩn Gram- có mối quan hệ chủng loại phát sinh cách xa nhau và ở đây người ta phân ra rất nhiều nhóm phụ.
Bảng 2.2: Một số tính Gram âm Tính chất Phản ứng với hóa chất nhuộm Gram chất khác biệt giữa vi khuẩn Gram dương và

Gram dương Gram âm giữ màu tinh thể tím, mất màu tím khi tẩy do đó tế bào có màu rửa, nhuộm màu phụ tím hoặc tía đỏ safranin hay Fuchsin Lớp peptidoglucan dày, nhiều lớp mỏng, chỉ có một lớp có không có Acid techoic Lớp phía ngoài thành không có có Lớp lipopolysaccharide rất ít hoặc không có nhiều, hàm lượng cao Hàm lượng lipid và thấp (vi khuẩn acid có cao (tạo thành lớp lớp lipid mỏng liên kết ngoài thành) lipoprotein với peptidoglucan) Cấu trúc gốc tiên mao hai vòng ổ đĩa gốc bốn vòng ổ đĩa gốc Tạo độc tố chủ yếu là ngoại độc chủ yếu là nội độc tố tố (exotoxins) (endotoxins) Chống chịu với tác nhân khả năng chống chịu khả năng chống chịu vật lý cao thấp Mẫn cảm với lysozyme rất mẫn cảm, dễ bị tan ít mẫn cảm (cần phải với enzyme này xử lý để phá lớp màng ngoài của peptidoglucan) Mẫn cảm với Penicillin và cao thấp sulfonamide

22

Mẫn cảm với Streptomycine, Chloramphenicol, Tetracycline Kết hợp với thuốc nhuộm kiềm Mẫn cảm với các chất tẩy anionic Chống chịu với muối Natri Chống chịu với khô hạn

thấp

cao

cao, chặt chẽ cao cao cao

thấp, lỏng lẻo thấp thấp thấp

1.2. Phương pháp tách ly các thành phần của tế bào Khi cần nghiên cứu các thành phần riêng biệt của tế bào, người ta phải tách ly các thành phần này nhờ siêu âm, enzyme làm tan thành, các kháng sinh tác động vào thành, dùng áp suất thẩm thấu gây co nguyên sinh, dùng sức ép cơ học, dùng siêu li tâm hoặc li tâm trong đường gradient… Nhờ các máy đo quang phổ (Spectrophotometer) chúng ta biết rõ ràng và nhanh chóng số lượng tế bào trong dịch huyền phù. Nhờ phương pháp sắc ký giấy hoặc sắc ký cột chúng ta có thể thu được các hợp chất riêng biệt. 2. Hình dạng vi khuẩn và vi khuẩn cổ Hình dạng vi khuẩn khác nhau giữa loài này và loài khác, đối với những vi khuẩn đa hình (polymorphysme) thì hình dạng có thể khác nhau trong các giai đoạn sống khác nhau của chu kỳ sinh trưởng. Những hình dạng chính của vi khuẩn: - Cầu khuẩn (Coccus): Khi phân chia theo một phương và dính nhau ta có song cầu khuẩn (Diplococcus), hoặc liên cầu khuẩn (Streptococcus), phân chia hai phương và dính với nhau ta có tứ cầu khuẩn (Tetracoccus), phân chia 3 phương và dính nhau ta có bát cầu khuẩn (Sarcina) hoặc phân chia theo nhiều phương ta có tụ cầu khuẩn (Staphylococcus). - Trực khuẩn: bao gồm trực khuẩn không sinh bào tử (như E.coli…) và trực khuẩn sinh bào tử như Bacillus, Clostridium với kích thước khoảng 2-3 x 1μm. - Xoắn khuẩn: Spirillum, Campylobacter, xoắn thể với các vòng khác nhau: Spirochaeta, Leptospira với kích thước 1 x 5-500μm. - Xạ khuẩn: gồm những vi khuẩn thuộc bộ Actinomycetales trong đó có các giống quan trọng như Streptomyces, Micromonospora…, có kích thước 1-2 x 100-500μm.

23

Hình 2.1: Các nhóm hình thái chính của vi khuẩn

- Vi sinh vật hình sao như giống Stella và vi sinh vật hình vuông như giống Haloarcula, một loại "vi khuẩn" ưa mặn thuộc vi sinh vật cổ.

24

3. Sơ đồ cấu tạo tế bào vi khuẩn Nhờ kính hiển vi điện tử khoa học đã biết rất rõ các tổ chức dưới mức tế bào của vi khuẩn như lớp màng nhầy, thành tế bào, màng sinh chất, chất nguyên sinh và các thành phần quan trọng khác.

Hình 2.2: Mô hình và sơ đồ cấu trúc tế bào vi khuẩn

1. Thành tế bào, 2. Màng sinh chất, 3. Thể nhân, 4. Mexosome, 5. Chất dự trữ, 6. Sinh chất, 7. Bào tử, 8. Tiên mao, 9. Khuẩn mao, 10. Khuẩn mao giới tính, 11. Bao nhầy, 12. Tầng dịch nhầy, 13. Ribosome, 14. Thể ẩn nhập, 15. Plasmid. 3.1. Màng nhầy (capsule) Nhiều vi khuẩn được bao bọc bên ngoài bàng một lớp màng nhầy có bản chất hóa học là polysaccharide của một loại gốc đường (homopolysaccharide) hoặc của nhiều gốc đường khác nhau (heteropolysaccharide), ở một số vi khuẩn trong vỏ này còn chứa một ít lipoprotein. Khi làm khô, người ta xác định được 90 - 98% trọng lượng của màng nhầy là nước. Màng nhầy có tác dụng hạn chế khả năng thực bào, do đó tăng cường độc lực đối với vi khuẩn gây bệnh, do cấu trúc hóa học của màng nhầy là polysaccharide và ít lipoprotein nên có liên quan đến tính kháng nguyên của vi khuẩn gây bệnh. Mặt khác, khi môi trường nghèo chất dinh dưỡng màng nhầy có thể cung cấp một phần các chất sống cho tế bào, trong trường hợp đó màng nhầy teo đi. Một khuẩn lạc gồm các vi khuẩn có màng nhầy nhìn thấy dạng nhẵn bóng - dạng S (smooth), còn khuẩn lạc gồm các vi khuẩn ít hay không hình thành màng nhầy sẽ có dạng nhăn

thì màng nhầy rất dầy và tạo ra khuẩn lạc nhầy nhớt . đối với những vi khuẩn trong điều kiện môi trường quá dư thừa carbon. 3.2. Diplococcus pneumoniae (gây bệnh viêm màng phổi) chỉ hình thành màng nhầy khi xâm nhập vào cơ thể người và động vật. Thành tế bào của các vi sinh vật cổ rất khác biệt với thành tế bào của vi khuẩn và hoàn toàn khác với cơ thể nhân chuẩn.30% trọng lượng khô của tế bào. Thành tế bào vi khuẩn Gram dương dày 150 . người ta có thể thu được lớp thành tế bào khá tinh khiết. Đối với vi khuẩn. như ở rảnh các nhà máy đường….dạng R (rough). nhánh có thành tế bào mỏng là các vi khuẩn Gram âm và nhóm tiêu giảm. Thành tế bào Ngày nay khoa học đã biết khá rõ về thành tế bào các cơ thể nhân sơ.800A0 Còn ở vi khuẩn Gram âm lớp thành murein mỏng hơn: từ 50 . anthracis (vi khuẩn gây bệnh nhiệt than) chỉ hình thành màng nhầy trong môi trường có protein động vật. Có những vi khuẩn chỉ hình thành màng nhầy trong các điều kiện nhất định. kiểu trao đổi chất… mà ta có thể xếp chúng vào hai giới: vi sinh vật cổ với loại thành tế bào đặc biệt và kiểu trao đổi chất khác thường và vi khuẩn với ba nhánh tiến hóa: nhánh có thành tế bào dày là các vi khuẩn Gram dương.25 nheo .dạng M (mucoid).78% trọng lượng khô của tế bào. hoặc đưa tế bào vào môi trường ưu trương để gây co nguyên sinh… rồi sau đó qua siêu ly tâm. khi thủy phân glucopeptid ta sẽ đựoc 2 hợp chất với số phân tử . thành tế bào chiếm khoảng 20 .1 mm hoắc ép dịch huyền phù qua màng có lỗ nhỏ hơn đường kính tế bào. mucopeptid. Muốn quan sát màng nhầy người ta làm tiêu bản âm với mực nho hoặc nhuộm đơn bằng thuốc nhuộm kiềm.2μm (nghĩa là không nhìn thấy trên kính hiển vi thường. Glucopeptid (hay còn gọi là peptidoglucan. ví dụ Bac. đặc biệt ở Corynebacterium diphteria thành tế bào chiếm tới 76 . Những màng nhầy như vậy được gọi là những màng nhầy lớn (macrocapsule) còn những màng nhầy nhỏ hơn 0. mà chỉ nhìn thấy trên TEM hay SEM) được gọi là màng nhầy nhỏ (microcapsule). Dựa vào sự nghiên cứu cấu trúc phân tử của thành tế bào. Nhờ các phương pháp tách ly tế bào như lắc dịch huyền phù vi khuẩn với các hạt thủy tinh có đường kính 0. murein) là khung rắn chắc giữ vững hình dạng vi khuẩn. Ví dụ ở nhà máy đường thường gặp Leuconostoc mesenteroides có nhiều màng nhầy dày gấp 20 lần chiều ngang của tế bào vi khuẩn. Hợp chất cơ bản của thành tế bào vi khuẩn là hai chất dị cao phân tử (heteropolyme): glucopeptid và acid teichoid.180A0. không có hay thành tế bào rất mỏng.

Thành tế bào vi khuẩn có chức năng quan trọng là giữ hình dạng ổn định của tế bào . tham gia vào quá trình nhuộm Gram. Acid diamin này ở Sta. aureus là lizin.3: Mô hình cấu trúc thành tế bào vi khuẩn Gram(+) và Gram(-) . Trong thành tế bào vi khuẩn còn có một loại hợp chất đặc biệt đó là acid teichoic. tham gia vào việc duy trì áp suất thẩm thấu.coli là acid L – diaminpimelic (ADP). Acid teichoic liên kết với acid muramic qua mạch phosphodieste. ở E. phần lớn chúng là những cơ thể đa hình như các dạng PPLO. trong thành phần của N.26 Gram như nhau là: N-acetyl glucosamin và acid N. Mollicustes. tạo ra mạng lưới chằng chịt như tổ ong. do đó mà hình thành một mạng lưới murein chắc chắn. Các gốc N. chúng liên kết với nhau qua liên kết 1. Enzyme lysozim cắt liên kết glucozid giữa C1 còn lại của acid Nacetyl muramic và C4 còn lại của N-acetyl glucosamin (liên kết ß – 1.. Đối với nhóm vi khuẩn tiêu giảm thành tế bào (Mycoplasmatales. glutamic và 1 acid diamin.acetyl muramic.4 ß glucozid.L. 1 D.. Mycoplasma (vi khuẩn nhỏ nhất có thể nuôi cấy trên môi trường).alanin. Tenericutes) người ta không tìm thấy hợp chất murein. ở vi khuẩn Gram âm hiện chưa tìm thấy hợp chất này.acetyl muramic liên kết với nhau qua dây nối peptid. Vi khuẩn Gr+ Vi khuẩn Gr- Hình 2. hợp chất thấy nhiều ở vi khuẩn Gram dương (có thể chiểm tới 50% trọng lượng khô của thành). những vi khuẩn này không có thành rắn chắc cho nên chúng có thể thay đổi hình dạng. Acid teichoic có hai loại ribiteichoic và glycerin teichoic.acetyl muramic có mặt của các acid amin với trọng lượng phân tử Gram: 2 D.4). các acid diamin này có thể kết hợp với mạch peptid của chuỗi bên. sư phân bào.

…màng sinh chất thể hiện như một màng vật lý cho đi qua theo quy luật vật lý học. urea. Nó lựa chọn cho đi qua cả các phân tử chất hữu cơ loại nhỏ đồng thời ngăn cản các hợp chất phân tử lớn. nằm ngay dưới lớp thành hoặc các lớp màng ngoài. Đối với các phân tử có kích thước lớn quan trọng đối với tế bào và ưa nước thì màng cho đi qua theo cơ chế khuếch tán theo nồng độ chất hòa tan. chức năng hô hấp… Chức năng chủ yếu của màng sinh chất là tấm bình phong ngăn trở dòng các chất ra cũng như cho đi qua các hợp chất từ phía ngoài vào.3. nhờ đó mà cơ thể tập trung vào trong các hợp chất cần thiết cho tế bào. chính cách sắp xếp này có lợi nhất cho chức năng vận chuyển các chất (đưa các dòng proton nhờ các enzyme). trong đó có các hệ permease. màng ty thể.chiếm khoảng 30 . protein (gồm rất nhiều hệ enzyme.27 3. trong suốt trong khi các lớp protein bên ngoài có màu đậm tối. . có thể là khuếch tán thụ động từ nồng độ cao đến nồng độ thấp hoặc khuếch tán tích cực chủ động nhờ các enzyme vận chuyển permease. thành phần protein này có thể chiếm tới 60 . Khoa học gọi nó là màng cơ sở vì có cấu tạo giống hầu hết các màng trong tế bào như màng nhân. Đối với các phân tử bé kị nước như O2. H2 hoặc các phân tử có cực nhưng không tích điện như H2O. các nguyên tố có lợi cho quá trình trao đổi chất. N2O.70%) và một ít hợp chất glucid. CO2. Nó đảm bảo tế bào hấp thụ được các chất dinh dưỡng. màng bào tương… Phân tích hóa sinh cho thấy màng sinh chất gồm 3 loại phân tử: lipid (chủ yếu ở dạng phospholipid . N2.Các phospholipid có thể là phosphatidiglycerol và/hoặc là phosphatidylethanolamin. lục lạp. nó bao bọc toàn bộ khối chất nguyên sinh. Các phân tử phospholipid có đầu ưa nước (hydrophyle) gồm có choline . CH4. màng lưới nội chất.phosphate và glycerol còn đuôi kỵ nước (hydrophone) là các phân tử acid béo.40%). lớp màng này dưới kính hiển vi đối pha là lớp có độ dày khoảng 7. Do cấu trúc các phân tử phospholipid như trên nên chúng phải sắp xếp các đuôi kỵ nước với nhau và đầu ưa nước quay ra phía ngoài và phía trong sinh chất. Màng sinh chất Màng sinh chất của vi khuẩn và các vi sinh vật cổ có thể thấy được nhờ co nguyên sinh.5nm. Các phospholipid dưới kính hiển vi điện tử gồm 2 lớp nằm ở giữa.

4. khi giảm nồng độ Mg2+ của dung dịch sẽ tách ra thành 2 tiểu phần trong siêu li tâm: tiểu phần lớn (50S) và tiểu phần be (30S). ví dụ khi phân tử glucose đi vào đã được phosphoryl hóa và giải phóng vào bên trong màng tế bào là hợp chất glucoso .90% là nước.30nm. * RNA và Ribosome Một tế bào vi khuẩn chứa trung bình khoảng 18. Ở các cơ thể nhân chuẩn. pha thứ 2 là pha huyền phù gồm các hạt nucleoprotein. lepxinaminopeptidase. màng sinh chất là nơi định vị của nhiều enzyme tham gia tổng hợp ATP. Hệ keo của sinh chất bao gồm 2 pha: pha thứ nhất là dung dịch muối khoáng và các hợp chất hòa tan có bản chất là lipoproteid. Ngoài RNA và protein. Nước ở trạng thái kết hợp (chiếm phần nhỏ) thường liên kết trong các vi cấu trúc như protein. chất nguyên sinh có cấu tạo đồng nhất và bắt màu giống nhau. Sinh chất và Ribosome Sinh chất của cơ thể nhân sơ gồm có 80 .000 ribosome. lipid và hydratcarbon. bắt màu không đồng đều và có tính chiết quang khác nhau.2. ribosome có thể còn chứa một lượng nhỏ lipid và enzyme ribonuclease. 3. Khi trưởng thành. trọng lượng phân tử 3.10-3 cm/giây trong siêu li tâm) với đương kính từ 10 . không bào khí làm cho sinh chất có dạng huyền phù lổn nhổn. Để nghiên cứu sinh chất. Các ribosome chứa phần chủ yếu là RNA (63%) và phần kia là protein (37%). galactosidase và một ít chất khoáng giàu Mg và nghèo Ca.106 daltons. . Phần còn lại của sinh chất là lipoproteid (chiếm 10 20%).phosphate. Khi còn non. lipid và nhiều loại hạt có kích thước rất khác nhau. Mỗi ribosome. trong chất nguyên sinh xuất hiện các vật thể ẩn nhập. người ta dùng siêu li tâm cao tốc để tách chất nguyên sinh và các cấu trúc siêu hiển vi riêng ra. hạt 70S (S là chữ đầu của Sverberg . các enzyme này có mặt trong ty thể. Các chuỗi hô hấp của màng sinh chất của vi khuẩn và vi sinh vật cổ làm chức năng tương tự như màng trong của ty thể.protein và protein protein.7. tiểu phần lớn liên kết với tiểu phần bé bàng mối liên kết trung gian RNA . Sinh chất của vi khuẩn có pH bình thường là 7 . nước có thể ở trạng thái tự do (chiếm phần lớn) làm nhiệm vụ hòa tan các chất và tạo nên dung dịch keo với các chất cao phân tử.28 Có một cách vận chuyển khác là do sự thay đổi vị trí các nhóm chức năng. Màng sinh chất chứa các enzyme sinh tổng hợp kiểm soát các khâu kết thúc tổng hợp lipid của màng và các hợp chất kiến tạo thành tế bào. đang sinh trưởng. Cuối cùng.

Các vi khuẩn Chromatium. vi khuẩn tích lũy dần các chất dự trữ hữu cơ và vô cơ. 3. đường kính có thể đạt tới 0.protein. Trong khi sinh trưởng. Ribosome là cơ quan tổng hợp protein của tế bào. hợp chất này nhuộm các chất đang trung hợp (polymer) không phân nhánh của glucose (tinh bột) thành màu xanh thẩm và các hydratcarbon phân nhánh (glucogen) thành đỏ nâu. Chúng bắt màu với thuốc nhuộm kiềm như xanh methylene. các chất dự trữ này đạt đến kích thước nhất định thì hình thành nên hạt dự trữ (vật thể ẩn nhập) có thể thấy dưới kính hiển vi. có thể tan trong nước nóng 800C. . .hydroxy butyrate… Các hạt dự trữ carbon dễ dàng nhìn thấy khi nhuộm bằng dung dịch có iod. đây là một sự khác biệt nữa giữa các vi sinh vật cổ và vi khuẩn. Các chất dự trữ carbon o vi khuẩn thường thấy là glycogen. chlorofor. Một trong các yếu tố đó là EF-2 thường thấy ở các vi sinh vật cổ và cơ thể nhân chuẩn. trong dung dịch kiềm hoặc dung dịch NaCl 5%. nhưng không thấy ở vi khuẩn.10% tổng số ribosome) ở dạng liên kết với RNAm đòi hỏi phải có sự tham gia của nhiều yếu tố làm dài chuỗi polypeptide. Các hợp chất poly-βhydroxy butyrate được nhuộm màu bởi Soudan đen như màu các giọt mỡ.3μm. Các site này gọi là site "P" (như peptidyl) và "A" (như aminoacyl).29 Sự tổ hợp của tiểu phần lớn vào tiểu phần nhỏ bởi liên kết bên trong ribosome. ester. nhưng chỉ có một số nhỏ ribosome (khoảng 5 . tinh bột. ở đây có 2 site (chốt) đặc biệt có vai trò quan trọng trong quá trình dịch mã (translation) từ chuỗi RNA sang protein. Các hạt volutin có dạng hình tròn. Các vi khuẩn oxy hóa sắt có thể tích lũy sắt trong sinh chất dưới dạng Fe3O4. xanh toluidine thành màu đỏ tía trong khi sinh chất của vi khuẩn lại có màu xanh. liên kết RNA . Kích thước và số lượng các hạt này tùy thuộc vào loài vi khuẩn và điều kiện nuôi cấy chúng. Beggiatoa có thể tích lũy lưu huỳnh bên trong tế bào do oxy hóa H2S giải phóng ra S. trong tế bào vi khuẩn xuất hiện những hạt có độ lớn và thành phần hóa học khác nhau. .Các hạt dị nhiễm sắc (metachomatic granulation) hay hạt volutin được tìm thấy lần đầu ở xoắn khuẩn Spirillum volutans. Các hạt dự trữ ở vi khuẩn Ở cuối pha trưởng thành. poly-β.5. Hạt volutin là những hạt dự trữ polyphosphate vô cơ. các yếu tố này thay đổi vị trí phiên âm của histidine (cho diphtamide) làm mẫn cảm với độc tố diphteria. trong dung dịch HCl 1N…không tan trong rượu.

6.Tinh thể diệt côn trùng thường thấy ở một số loài vi khuẩn sinh bào tử như Bacillus thuringiensis. ở tảo và thực vật là diệp lục tố (chlorophyll) trong khi ở vi khuẩn quang hợp là các sắc tố gần với chlorophyll mà người ta gọi là khuẩn diệp lục tố (bacteriochlorophyll). vi khuẩn oxy hóa lưu huỳng như Thiobacillus. vi khuẩn nitrat hóa. có đường kính khoảng 50 .Dẫn xuất sắc tố pyrolic đỏ ở Serratia marcescens. .Vitamine K2 (hợp chất quinon) ở Bacillus subtilis và Bacillus cereus. sắc tố có hoạt tính kháng sinh. Mặt khác bản chất của các sắc tố quang hợp cũng khác biệt. chúng ta có thể gặp các sắc tố sau: . violaceine ở Chromobacterium violaceum. aeruginosa.7. 3. xanthophyll và sarcinaxanthine (carotenoid) là loại sắc tố đỏ ở Sarcina. ở một số vi khuẩn màu tía. Bacillus dechrolimus.Sắc tố pyocyanine xanh pyoverdine xanh lục huỳng quang ở P.Pyocyanine. tinh thể này xuất hiện khi hình thành bào tử. . Ngoài ra.Sắc tố carotenoid chống tia tử ngoại ở Corynebacterium.100nm. 3. . chúng có bản chất là protein và ngày nay được dùng để diệt sâu hại. vi khuẩn tía và vi khuẩn lục. . sắc tố gần giống với sắc tố võng mạc mắt.Một số sắc tố tạo thành màu đặc trưng của khuẩn lạc như zeaxanthine (carotenoid). đó là những hạt ribulose diphosphat carboxylase (hay carboxydis mutase) được bao bọc bởi sự gấp nếp của màng sinh chất.Các hạt carboxysome thường thấy ở Cyanobacteria. Không bào khí Đây là một loại túi chứa đầy khí thường gặp ở nhiều loài thuộc 3 nhóm vi khuẩn quang hợp: vi khuẩn lam (Cyanobacteria). sắc tố vàng ở Staphylococcus aureus. Halobacterium halobium (cơ thể sống trong môi trường mặn) có chứa bacteriorhodopsine ở màng sinh chất. Không bào khí giúp vi khuẩn quang hợp trôi lơ lửng trong nước và nổi lên mặt nước. . . Các thể mang màu và sắc tố Ở vi khuẩn quang hợp cơ quan thực hiện quá trình quang hợp là các thể mang màu (chromatophores) (ở tảo và thực vật là lục lạp chlorophaste) vì cấu trúc siêu hiển vi của các thể mang màu khác với lục lạp. .30 .

Sự có mặt của các protein trên làm cho cấu trúc thứ cấp DNA của E.Archaea) đã tìm thấy histone. những nghiên cứu gần đây cho thấy ở Thermoplasma (một loại vi sinh vật cổ .8. Vòng DNA xoắn kép của vi khuẩn thường được gọi là thể nhiễm sắc vi khuẩn hay genophore. đó là những protein kiềm. Mặc dù chỉ có một thể nhiễm sắc đối với một tế bào vi khuẩn. Chiều dài của nó trong tế bào E. Chất nhân của vi khuẩn không có màng bọc. xúc tác bổ sung desoxyribonucleotide vào đầu của chuỗi DNA.106 pb.coli đo được là 1mm.1000 lần chiều dài của vi khuẩn.108 đối với Mycoplasma. Vòng thể nhiễm sắc được định vị tại một điểm trên màng sinh chất lúc sắp phân chia. tức là gấp 500 .106 pb (cặp base nitơ) với trọng lượng phân tử vào khoảng 3. nhưng trong môi trường nuôi cấy liên tục khi có sự sinh sản nhanh. mỗi vòng nhỏ có khoảng 400 cặp base nitơ. Những nghiên cứu trên kính hiển vi điện tử cho thấy genophore của vi khuẩn có nhiều vòng. đó là hợp chất chứa thông tin di truyền chủ yếu của tế bào. Khong thấy protein histone kiểu tế bào nhân chuẩn mà chỉ có các polyamine như specmidin và specmine làm chức năng củng cố ổn định DNA. những protein liên kết DNA này có chức năng điều hòa không đặc hiệu trong quá trình sao mã. Chất nhân của vi khuẩn DNA của tế bào vi khuẩn chiếm khoảng 1 .Ở E. .Ba loại DNA polymerase đã được chiết từ E.2% trọng lượng khô của chúng. Tuy nhiên. 1. nhiều vòng tạo thành búi xoắn. coli vững chắc hơn.31 3. có thể dẫn tới sự có mặt của 2 thậm chí 4 thể nhiễm sắc trong một tế bào vi khuẩn đang phân chia. + H1 và HLP1.5.109 dalton (4.coli có 50 búi xoắn và có gần 500 vòng trong một búi. coli: + DNA polymerase I: làm chức năng khôi phục. sửa chữa bổ sung. điều đó giải thích tại sao chuỗi DNA của vi khuẩn dài tới 1mm và gồm khoảng 5. Ở E. . coli đã tìm thấy ít nhất là 4 loại protein liên kết với DNA. bền nhiệt nên rất gần gũi với histone của các sinh vật nhân chuẩn: + Hu được hình thành bởi 2 tiểu phần α và β (nhị phân protein ProteinII) nên rất gần với histone H2B. + H gần giống với histone H2A. hình dạng rất khác nhau và chỉ có 1 sợi gồm 2 mạch DNA. Phản ứng chỉ xảy ra khi DNA đã được đinh vị ở màng sinh chất.109 đối với Acholeplasma). . Độ lớn DNA vào khoảng 5.

9.32 + DNA polymerase II có hoạt tính ngoài nhân. cắt bỏ một đoạn của mạch trong DNA xoắn kép.Các DNA-ligase xúc tác hình thành các đầu nối 2 mạch DNA . + DNA polymerase III là loại có hoạt tính nhất trong 3 loại polymerase. các plasmid. + Hàn các đoạn DNA trong quá trình tái tổ hợp di truyền. Các enzyme tháo mạch của chuỗi xoắn kép làm cho các mạch DNA trong chuỗi xoắn kép được tách ra để nhân lên. các yếu tố "diệt". . tụ cầu khuẩn . Đấy là cơ chế nhân đôi DNA bảo đảm tính di truyền của các thế hệ vi khuẩn. Bằng phương pháp phóng xạ tự ghi (autoradiogragh) khoa học cỏ thể chụp được quá trình nhân lên của nhiễm sắc thể ở E. tế bào vi khuẩn (và một số loài nấm men) có thể chứa các yếu tố di truyền ngoài thể nhiễm sắc. các trực khuẩn đường ruột và vi khuẩn Gram âm. từ hai mạch làm khuôn tổng hợp hai mạch mới bổ sung để tạo thành hai chuỗi DNA xoắn kép hoàn toàn giống nhau. + Tham gia vào quá trình nhân DNA cùng với DNA polymerase. Plasmid Ngoài các gen nằm trong genophore ra. lục lạp (nếu có). chúng có thể tự nhân lên. 3. + Đóng và tạo thành vòng các phân tử DNA xoắn kép mạch thẳng. nó cần thiết cho hoạt động của RNAm. ví dụ chỉ số Chargaff của Micrococcus luteus là 4 và của Clostridium perfringens là 0. số lượng adenine bằng số lượng thymine và số lượng guanine bằng số lượng cytosine. Tỷ lệ (G+X)/(A+T) là một chỉ số sinh hóa quan trọng giúp phân loại đến giống và loài trong phân loại sinh hóa (Chemotaxonomy). DNA của cơ thể có cấu tạo đặc trưng. Khái niệm vật chất di truyền ngoài thể nhiễm sắc bao gồm DNA của các ty thể. DNA-ligase có thể thực hiện các chức năng sau: + Sửa chữa. Lederberg đã gọi chúng là plasmid để chỉ tính chất độc lập của chúng với các gen nằm trên thể nhiễm sắc.coli và nhiều cơ thể nhân sơ khác.cầu phosphodiester giữa nhóm hydroxyl 3' ở đầu mạch và nhóm phosphate 5' ở đầu mạch kia. Các thông tin di truyền từ DNA được sao mã (transcription) sang mRNA và sau đó được dịch mã (translation) thành chuỗi polypeptide hay enzyme. coli.34. Vì vậy mà năm 1952. các yếu tố giới tính. một số prophage… Khoa học đã xác định plasmid có ở rất nhiều loài vi khuẩn như E.

chúng đem lại cho tế bào nhiều đặc tính chọn lọc quý giá như có thêm khả năng phân giải một số hợp chất. trong trương hợp cùng nhân lên. Có những plasmid có thể chuyển từ tế bào cho sang tế bào nhận nhờ tiếp hợp (tiếp hợp được). nhưng không có nghĩa sự nhân lên của plasmid phụ thuộc vào sự nhân lên của tế bào. Tn2571 (23000bp) chống chịu Chloramphenicol.tự cắt đứt trước của DNA). Tần số của sự chuyển vị (Transposition) cũng như tần số của các đột biến tự phát ngẫu nhiên (10-5 . hiếm thấy 2 mạch thẳng.33 Staphylococcus aureus. coli như IS 1 (768bp) và IS 2 (1327bp). Tn681 (2100bp) sinh độc tố ruột.1500bp) thường chỉ mã hóa sự chuyển vị (transposition) (tạo ra các site . có thể có một hoặc nhiều bản sao cùng loại ngay trong một tế bào vi khuẩn. Một số plasmid (ví dụ yếu tố giới tính F) có thể xâm nhập vào thể nhiễm sắc ở vị trí đặc biệt có trật tự nucleotide bổ trợ với đoạn nucleotide trên plasmid. Các gen vận động này có thể di chuyển trong nôi bộ một thể nhiễm sắc hoặc giưa các thể nhiễm sắc. các yếu tố gia nhập (yếu tố điền vào . số lượng bản sao và sự phân chia đồng đều các bản sao cho hai tế bào con.coli như Tn5 (5700bp) chống chịu Kanamycine.IS) là đoạn nucleotide nhỏ (700 .10-7). Các yếu tố di truyền vận động (Transposon .Tn) là những đoạn nucleotide dài hơn (vài ngàn đến vài vạn bp) mã hóa khả năng thay đổi tính chất (như chống chịu) thường định vị bên cạnh IS. Các plasmid không phải là yếu tố nhất thiết phải có đối với sự sống tế bào. chống chịu với nhiệt độ bất lợi. Các plasmid qua tụ cầu khuẩn Staphylococcus chỉ có thể chuyển sang tế bào nhận nhờ tải nạp. các chất dinh dưỡng… Các plasmid có thể ở trạng thái cài vào thể nhiễm sắc. chắc phải có cơ chế kiểm soát đảm bảo đồng thời sự nhân lên. Các plasmid có thể tăng lên hoặc giảm đi khi có yếu tố bất lợi như nhiệt độ. những site như vậy gọi là những yếu tố gia nhập (IS). Các yếu tố Tn thấy ở E. chống chịu với các kháng sinh… Thường thì các plasmid nhân lên khi tế bào nhân lên hay tế bào tiếp hợp. có khả năng tiếp hợp hoặc không tiếp hợp. có khả năng tự nhân lên độc lập với tế bào và chúng được phân sang các tế bào con khi nhân lên cùng với sự nhân lên của tế bào. nhưng khi có mặt. có kích thước nhỏ (bằng khoảng 1/100 thể nhiễm sắc của vi khuẩn. những IS này gồm khoảng 1000bp và thấy ở E. ngược lại có plasmid không tiếp hợp được. kháng sinh. cho đến nay cơ chế này còn chưa sáng tỏ. xạ khuẩn Streptomyces coelicolor và ở Rhizobium melitoli… Plasmid là phân tử DNA vòng kín 2 mạch. . Tn3 (4597bp) chống chịu Ampicillin. gần giống một prophage). nằm ngoài thể nhiễm sắc. Như vậy. thuốc màu.

Loại nhung mao phổ thông phân bố với số lượng lớn trên bề mặt tế bào vi khuẩn (vài trăm).10. nhung mao loai II có vai trò quan trọng trong quá trình tiếp hợp (conjugation) giữa 2 tế bào vi khuẩn. tiêm mao (Cils) và nhung mao (Pili) Tiên mao thường thấy ở Vibrio. Số lượng tiên mao có thể từ 1 . trong vi sinh học người ta thường dùng tiên mao và tiêm mao với cùng một nghĩa. loại nhung mao này ngắn hơn nhung mao giới tính (loại II có thể dài tới 10μm). Mặc dù vậy.25nm ở Vibrio và Pseudomonas). acid aspartic. thường có xung quanh tế bào Gram âm và ít thấy ở tế bào vi khuẩn Gram dương.4. trong khi tiêm mao chuyển động như que gạt. acid glutamic và tyrosine). khi vi khuẩn di động tiên mao xoáy vào nước hoặc môi trường lỏng (có thể tới 100 vòng trong 1 giây). khoảng 1 . Tiên mao có cấu tạo từ một loại protein gần với Keratin mà người ta gọi là flagelline. kháng nguyên ứng nhiệt). Trong số các sợi (tiêm mao và nhung mao) trên bề mặt tế bào vi khuẩn thì tiên mao được nghiên cứu kỹ hơn và người ta chia chúng làm 2 nhóm phân bố: phân bố ở cực (polaire) và phân bố xung quanh (peritriche). Spirillum và nhiều loài vi khuẩn Gram âm. Tiên mao (Flagelles). Sự chuyển động của tế bào vi khuẩn có thể đạt tới 10μm/s (tức là trong 1 giây vi khuẩn có thể đi được khoảng cách dài gấp 10 lần nó) nên đòi hỏi một năng lượng rất lớn (khoảng 2% năng lượng trao đổi chất của tế bào). số lượng nhung mao giới tính rất ít. chúng khác với nhung mao (pili) là những sợi mảnh và ngắn hơn nhiều. Một tiên mao có chiều dài từ 6 . protein có trọng lượng phân tử khoảng 40. những protein này có tính kháng nguyên (H.34 3.000 (trong đó có các acid amin chủ yếu là arginine.30μm và đường kính 10 30nm (12nm ở Proteus. Bộ máy xoay tiên mao ở gốc nằm trong màng sinh . Khi tiên mao ngắn thì người ta thường gọi là tiêm mao.30 sợi tùy thuộc vào loài vi khuẩn. ở đầu cùng có chổ phình ra. lysine. Người ta chia nhung mao (pili hoặc fimbria) làm 2 loại: loại nhung mao phổ thông (Type I) và loại nhung mao giới tính (Type II). 20 . người ta cho rằng loại nhung mao này có liên quan đến tính chất kết dinh máu của vi khuẩn. Tiên mao giúp cho vi khuẩn chuyển động.

bào tử túi (ascospores) hay bào tử đảm (basidiospores) ở nhiều loài nấm.Đơn mao ở cực (Monotriche polaire hay parapolaire) đặc trưng cho nhiều loài Vibrio hoặc chùm mao ở cực (Lophotriche) đặc trung cho nhiều loài Pseudomonas. hoặc do có sự thay đổi đột ngột các điều kiện sinh trưởng có khả năng hình thành bào tử ở bên trong tế bào. Cách sắp xếp tiên mao là một tiêu chuẩn trong phân loại hình thái (Morphology taxonomy) vi khuẩn: . Sporosarcina. Những vi khuẩn có khả năng hình thành nội bào tử gồm nhiều loài thuộc các giống Bacillus. . hợp chất này giúp cho bào tử bền nhiệt. ví dụ Bac. anthracis có thể sống tiềm sinh trong nhiều năm. Thermoactinomyces.Lưỡng cực (Amphitriche hay Cephalotriche) có thể chùm mao ở lưỡng cực như các loài Spirillum. hợp chất này có thể chiếm tới 10 .N-succinylglutamic không có trong tế bào sinh dưỡng và chỉ được tổng hợp khi hình thành bào tử.15% trọng lượng khô của bào tử. Vai trò của hợp chất dipicolinate calcium làm cho bào tử chống chịu được nhiệt độ cao. Nội bào tử vi khuẩn (Endospores) Một số vi khuẩn ở cuối giai đoạn sinh trưởng. Mỗi tế bào vi khuẩn chỉ tạo một nội bào tử nên loại bào tử này không phải là bào tử sinh sản. khi thí nghiệm người ta đã thay calcium bằng strontium thì khả năng chịu nhiệt của bào tử thu được kém đi. tế bào có thể mất đi đến 70% nước. ngay giai đoạn đầu khi hình thành vách ngăn DNA mới với một ít nguyên sinh chất. khi chất dinh dưỡng ở môi trường cạn kiệt và chất qua trao đổi độc hại quá nhiều. Sporolactobacillus. Khi hình thành bào tử. Một hợp chất khác của vỏ bào tử mới tìm thấy là acid L. chúng là những bào tử sinh sản vô tính hay hữu tính. khác với các loại đính bào tử (conidiospores). Một số vi khuẩn khi hình thành bào tử có thể tồn tại rất lâu trong tự nhiên. Desulfotomaculum. Vỏ bào tử đặc trưng bằng sự có mặt của acid dipicolinic (dưới dạng dipicolinate calcium).35 chất và thành tế bào gồm 2 vành khuyên. vành trong gồm 16 đơn phần protein có thể dịch chuyển rất nhanh nhờ dòng proton (H+) đi vào. Chromatium và Thiospirillum. Clostridium.11. Trong một số chất độc tế bào vi khuẩn bị chết rất nhanh nhưng bào tử có thể tồn tại được khá lâu. được gọi là nội bào tử (endospores).Chu mao (Peritriche) hay tiên mao sắp xếp xung quanh thân tế bào vi khuẩn đặc trưng cho nhiều loài Prote 3. . ví dụ trong phenol có thể vẫn sống trong 15 ngày. trong HgCl2 1% tồn tại .

có trị số % mol Guanine và Xytozin rất cao (69 . sợi có thể phân nhánh.2μm (nhỏ hơn nhiều so với đường kính sợi nấm 7 . Xạ khuẩn cũng giống như vi khuẩn là chưa có nhân được bao bọc bằng màng. Sợi mang bào tử có những hình dạng khác nhau tùy theo loài: thẳng-lượn sóng (Retiflexibilis). tải nạp và biến nạp. loại vi khuẩn này cũng chưa có giới tính. nứt vỏ và mọc ra. hình lăng trụ hoặc hình cầu với đường kính khoảng 1. vòng (Retinaculiaperti)… đoạn tận cùng của cuống mang bào tử bằng phương pháp cắt khúc (segmentation) hay kết đoạn (fragmentation) mà hình thành nên chuỗi bào tử. Màng bào tử xạ khuẩn có thể nhẵn (smooth). gai (spiny). tóc (hairy). xạ khuẩn cũng bị phage tấn công và gọi là Actinophage. đường kính sợi khoảng 1.77% (G + X) trong DNA). nghĩa là chưa có sự phân hóa thành tế bào đực. nếp nhăn (rugose)… tùy thuộc vào loài xạ khuẩn. Xạ khuẩn cũng có quá trình sinh sản phân bào theo kiểu amitose (phân bào không tơ). Nhưng xạ khuẩn rất gần với nấm về hình dạng hệ sợi phát triển trong cơ chất như bộ "rễ" hấp thụ chất dinh dưỡng. thường gặp chúng trong đất và nước.5μm. quá trình mọc mầm gồm 3 giai đoạn chủ yếu: hoạt hóa. một giống đã khai thác được khoảng 50% số kháng sinh hiện biết.36 trong 2 ngày. thành tế bào xạ khuẩn khong chứa cellulose hay chitine mà chứa hợp chất điển hình của vi khuẩn là glucopeptide. Xạ khuẩn và vi khuẩn nội bào Những vi khuẩn thuộc bộ Actinomycetales (nhóm bậc thấp và bậc cao) là những vi khuẩn có hình sợi Gram dương. Thời gian để hình thành bào tử khác nhau tùy loài (từ vài giờ đến 20 giờ). Streptomyces là một giống xạ khuẩn bậc cao được Waksman và Henrici đặt tên năm 1943. xoắn (Spirales) hoặc có móc. Bào tử xạ khuẩn (Arthrospores bào tử đốt) hình bầu dục.9μm). hệ sợi mặt có chất tạo nên khung của khuẩn lạc và hệ sợi khí sinh tận cùng bằng những cuống mang bào tử. muốn quan sát được bào tử người ta dùng phương pháp nhuộm đơn hoặc kép. bào tử sẽ có hàng loạt thay đổi tích cực và mọc mầm. cái và có thể hình thành hợp tử từng phần nhờ tiếp hợp. Những tiểu tiết này có thể thay đổi theo quy luật trên môi trường nuôi cấy. thường thì xạ khuẩn có tiểu tiết . Trên đầu sợi khí sinh của Streptomyces hình thành cuống bào tử và chuỗi bào tử. Khi đưa bào tử vào môi trường thuận lợi để phát triển. 4. Chúng có vị trí tiến hóa cao trong số các giống thuộc vi khuẩn Gram dương. khối u (warty). Xạ khuẩn sinh sản vô tính bằng bào tử. Đó là những loài thuộc giống Streptomyces.

kích thước của chúng rất nhỏ (0.45μm) vì thế trong một thời gian dài trước đây người ta coi chúng là một loại virus (virus kiềm tính Van Royen). chính vì vậy mà ủy ban quốc tế về phân loại xạ khuẩn (ISP) đã nêu ra các môi trường chuẩn và phương pháp chung để phân loại nhóm vi sinh vật này.Mycoplasma thuộc họ Mycoplasmaceae. là những vi khuẩn ký sinh bắt buộc. Những nghiên cứu gần đây về nhiệt độ và pH tối ưu của vi khuẩn ưa nhiệt và Archaea cho phép chia vi sinh vật cổ thánh 2 nhóm: Crenarchaeota và Euryarchaeota. được Woese R. tiết niệu .Rickettsia là một giống của Rickettsiaceae. . Đây là những vi khuẩn thuộc Tenerecutes.sinh dục. Nhóm Crenarchaeota là những vi sinh vật cổ kị khí bắt buộc. Thermophiles anaerobies stricts). thành tế bào cũng có hợp chất đặc trưng của thành tế bào vi khuẩn.0. Những vi khuẩn này cũng có 2 loại acid nucleic. bất động.Freundt. đây là vi khuẩn ký sinh nội bào. 5. Hiện nay khoa học đã mô tả được khoảng 600 loài xạ khuẩn bậc cao này. ký sinh ở động vật có xương. Trong bộ Mycoplasmales có các dạng vi khuẩn Mycoplasma dạng L và PPLO. đó là lớp vi khuẩn tiêu giảm thành.0. trong động vật có xương sống chúng không tạo ra ATP riêng mà sử dụng ATP của vật chủ. .3 .R. chúng là tác nhân gây các bệnh hô hấp. thuộc bộ Chlamydiales. thân mềm dễ biến hình. trên môi trường có đạm vô cơ và glucose các bào tử dễ biểu hiện các tiểu tiết rõ nhất. ưa nhiệt và ưa acid (Thermoacidophiles. và Woese C. Gram âm và có nhiều điểm giống Rickettsia.1 . Vi sinh vật cổ (Archaea) Các vi sinh vật cổ mà trước đây gọi là các vi khuẩn cổ (Archaeobacteria) là nhóm cơ thể nhân sơ có sớm nhất (khoảng 4 tỷ năm trước đây).37 có thể có màng nhẵn trên môi trường có nguồn nitơ hữu cơ. Rickettsiales. có 3 nhóm (Tribus): Rickettsiae. tách ra thành một nhánh tiến hóa riêng. . Những cơ thể còn lại hiện nay thường sống trong các điều kiện khác thường.Chlamydia là một giống của Chlamydiaceae.3μm) vì vậy chúng dễ qua màng lọc vi khuẩn. Ehrlichiae và Wolbachiae với 2 giống chủ yếu là Rickettsia và Coxiella. 1955). màu sắc này cũng có thể biến đổi khi nuôi cấy trên môi trường khác nhau. sinh sản bằng cách chia đôi khi ở trong tế bào động vật. lớp Mollicutes. Màu sắc của khuẩn lạc và hệ sợi khí sinh cũng rất khác nhau tùy theo nhóm Streptomyces. Chúng là những vi khuẩn không có thành tế bào. . vi khuẩn có kích thước nhỏ nhất khoa học hiện biết (0. họ độc nhất của bộ Mycoplasmales (đôi khi là Mycoplasmatales .

coli). Chính những đặc điểm đó đã giúp cho vi sinh vật cổ sống trong những điều kiện khác thường: nhiệt độ cao (có loài sống được ở 2500C) dưới 265 atm. đây có lẽ là nhánh cổ xưa nhất. có pseudouracil ở vị trí uracil trong RNAt. ester của acid béo mạch không thẳng và glycerol. sự phân nhánh của chuỗi dang ether (-O-) mà không phải dạng ester (-CO-O-) (lipide ether-phytanyl). sinh methane (methanogenes) và một vài loài kị khí ưa nhiệt. protein.3: So sánh một số tính chất giữa vi khuẩn và vi sinh vật cổ Tính chất Bacteria Archaea Thành phần thành tế bào Murein Pseudomurein. có coenzyme đặc biệt (M). ở đáy.38 Nhóm Euryarchaeota là những vi sinh vật cổ ưa mặn. chống chịu với lysozyme… Có 3 nhóm sinh lý và sinh thái quan trọng là: * Các cơ thể sinh methane (methanogenes). aster isopranyl Hình dạng tế bào có loại + (hoặc không) hình vuông và dẹt Nội bào tử (endospore) + (hoặc không) Pseudouridine hoặc Chất "ở nhánh" của RNAt Ribothymidine L. kị khí. ribosome loại cơ thể nhân sơ. có intron. Bảng 2.RNA loại + nhân chuẩn Có coenzyme đặc biệt + Nhiệt độ sinh trưởng tối đa 900C 1100C Có quang hợp phức tạp Có thể Có thể sinh methane + Chu trình Calvin được sử Có thể dụng khi cố định CO2 Những vi sinh vật cổ (số liệu chủ yếu dựa trên methanogenes) là những đơn bào nhỏ khoảng 1μm có thành tế bào gồm những hợp chất đặc biệt (thay vì murein ở đây có acid talosaminuronic. thymine trong vòng bên của RNAt. chất nhân phân tán trong sinh chất với lượng nhỏ (chỉ bằng khoảng 1/3 so với chất nhân của E.methylpseudouridine Hình thành chất kích thích + methyonyl RNAt Các intron trong gen + Có Polymerase . một số loài tìm thấy trong . ở các lớp nước sâu. ete béo. polysaccharide Lipid của màng Glycerol. không có dihydrouracil. hầu như không có sự ổn định về quinon và cytochrome. acid Glycerol. DNA của chúng giàu hàm lượng G + X (mối liên kết 3 hydrrogen). có nhiều liên kết muối và hydro trong protein.

Methanopyrales có loài Methanopyrus sp. có các loài: Methanobacterium ivanovii. . . barkeri. thermoautotrophicum.4 KJ/mol) CH3COOH → CH4 + CO2 (ΔG10 = -32. M. M. acetivorans. thermolithotrophicus. M. M. .Methanomicrobiales.5 KJ/mol) HCOOH + 3H2 → CH4 + 2H2O CH3OH + H2 → CH4 + H2O (ΔG10 = -112. Sự biển đổi từ CO2 thành CH4 được biết ở vi sinh vật cổ có 4 giai đoạn: + 2H 2H+ 2H+ 2H+ 2e2e2e2eCO2 HCOOH HCHO CH3OH CH4 acid formic H2O formandehyde methanol H2 O Trong khi đó.Methanosarcinales. thermophila. Methanothrix sp. Những cơ thể sinh methane có thể thực hiện những cơ chế khác nhau tùy theo loài (hầu hết là cơ thể kị khí bắt buộc): CO2 + 4H2 → CH4 + 2H2O (ΔG10 = -135. gồm có 5 bộ: . M. . quá trình oxy hóa methane ở cơ thể dinh dưỡng methane (methanotrophes) được thực hiện theo cơ chế như sau: CO2 CH4 2H+ H CH3OH PQQ HCHO HCOOH CO2 PQQH2 NAD+ NAD+H+ NAD+ NAD+H+2eCơ thể đồng hóa . fervidus.Methanobacteriales. M. M. M. vannielii.Methanococcales.39 đường tiêu hóa của động vật nhai lại. Phân loại cơ thể sinh methane dựa chủ yếu vào khả năng và cơ chế sinh methane của chúng. sociabilis. có các loài Methanococcus voltae. M. smithii. có các loài Methanosarcina mazeii. có loài Methanomicrococcus sp.5 KJ/mol) CH3NH2 + H2 → CH4 + NH3 (CH3)2S + 2H2 → 2CH4 + H2S Người ta cho rằng những cơ thể sinh methane cùng với cơ thể dinh dưỡng methane (methanotrophes) đã làm tuần hoàn nguyên tử carbon trong thời kỳ khí quyển không có hoặc rất ít oxy.

Ví dụ: Sulfolobus acidocaldaricus có nhiệt độ sinh trưởng tối đa là 900C và tối ưu là 750C. ưa acid (Thermoacidophiles). ở các mỏ muối). hợp chất liên kết trong màng sinh chất chứ không phải là khuẩn diệp lục tố (bacteriochlorophyll). chúng là những cơ thể hiếu khí hoặc hiếu kị khí. quá trình quang hợp ở đây khá đặc bieet nhờ Bacteriorhodopsine. kị khí không bắt buộc . Vi khuẩn có bao (Trichome). Spirochaete 6. Bảng 2. Những cơ thể này sống trong môi trường có nồng độ muối cao (ở biển.5. Thermoplasma acidophilum có nhiệt độ sinh trưởng tối đa là 650C và tối ưu là 600C. ở pH tối ưu là 2. tên siêu giới đã được đề xuất) Tên định loại Nhóm cơ thể + Siêu giói nhân sơ (Super Cơ thể nhân chưa có màng kingdom procaryote) A. hấp thu chất dinh dưỡng chủ yếu là do chênh lệch gradient nồng độ muối tạo ra. Khoa học định loại này bao gồm 3 lĩnh vực khác nhau: Classification (xếp loại). Vi khuẩn dính kết và vi khuẩn có chồi 5.nước nóng. 6. Taxonomy là khoa học nghiên cứu sự đa dạng của vi sinh vật và mối liên hệ vốn có tồn tại giữa chúng. ở pH tối ưu là 1. 1984.5. Vi khuẩn Gram âm. là những cơ thể sống ở nguồn đất . Myxobacteria 3.4. Bảng định loại các nhóm lớn cơ thể nhân sơ (Dựa chủ yếu vào Gergey's Manual. Nomenclature (đặt tên) và Identification (nhận biết). 4. Ngành I: Gracilicutes Cơ thể nhân sơ có thành đặc trưng vi khuẩn Gram âm Lớp 1: Scotobacteria 1. Vi khuẩn Gram âm.40 * Các cơ thể ưa mặn (halophiles) như Haloarcula. hiếu khí và vi hiếu khí 7. vì vậy để nhận biết và sử dụng chúng ta cần phải đặt tên cho nó và phải phân loại chúng. Giới vi khuẩn (Kingdom Cơ thể có thành tế bào với hợp chất murein Bacteria) I. ở vùng núi lửa. * Các cơ thể ưa nhiệt. Vi khuẩn hóa dưỡng vô cơ (Chimiolithotrophes) 2. Halobacterium. Nguyên tắc phân loại cơ thể nhân sơ Cơ thể nhân sơ ngày càng được phát hiện nhiều hơn.

trong đó chỉ số Jaccard là dễ hiểu và thông dụng nhất trong nghiên cứu đại cương. Ví dụ tên của trực khuẩn cỏ khô là Bacillus subtilis. một từ latin chỉ giống và từ kế tiếp chỉ loài. Vi khuẩn Gram+. Vi khuẩn Gram âm. kiểu sinh lý rất đặc biệt. kị khí bắt buộc 9. Đã từng chiếm đa số trên hành tinh cách đây 3 tỷ năm về trước. Halophiles và Thermoacidophiles… Sự xếp loại (Classification) thiết lập các nhóm định loại (các taxon) căn cứ vào những tieu chuẩn hình thái và phân tử cấu tạo tế bào. . Giới sinh vật cổ (Kingdom Archaea) Mendosicutes Lớp 1: Archaea Cơ thể nhân sơ không có thành. Sự đặt tên (Nomenclature) là đưa ra một tên cho một nhóm. SAB = hệ số giống nhau giữa A và B nS+ SAB = nS+ = số các đặc điểm giống nhau nS+ + nd nd = số các đặc điểm khác nhau. Phân loại học vi khuẩn ngày nay sử dung phương pháp định loại hình thái (Taxonomy phenetic). Mycoplasmes B. Ngành III: Tenericutes 15. hiện nay chỉ còn lại vài nhóm: Methanogens. Vi khuẩn tia và chỉ (Actinomycetales) (xạ khuẩn) III. Vi khuẩn quang dưỡng không thải oxy (Onoxyphotobacteria) Lớp 3: Vi khuẩn quang hợp thải 11. Cyanobacteria oxy (Oxyphotobacteria) II. Vi khuẩn Gram+. phương pháp này sử dụng một lượng lớn các tính trạng và so sánh các tính chất để rút ra sự giống nhau giữa hai cá thể. Sự nhận biết (Identification) chỉ định các loài nghiên cứu vào một trong các loại (các taxon) đã mô tả. Ngành II: Firmicute Cơ thể nhân sơ có thành vi khuẩn gram dương Lớp 1: Fimibacteria 12. sinh bào tử Lớp 2: Thallobacteria 14. không sinh bào tử 13.41 8. hay sử dụng phương pháp định loại số (Taxonomy numeric). hoặc có thành với hợp chất đặc trưng Pseudomurein. một cá thể theo nguyên tắc của Linaeus gồm 2 từ. Rickettsia và Chlamydia Lớp 2: Vi khuẩn quang hợp 10.

DNA là một tiêu chuẩn bắt buộc để phân tích vị tría các loài vi khuẩn. cho đến nay các loài của họ vi khuẩn đường ruột Enterobacteriaceae đã cho lai với nhau và thiết lập được mối liên hệ chủng loại phát sinh giữa chúng. . 3 tiêu chuẩn được sử dụng ở đây là chỉ số (G + X)% (hệ số Chargaff).42 Vi khuẩn học còn sử dụng phương pháp định loại di truyền (Taxonomy genetic).souche): là từ thông dụng trong kỹ thuật thực hành. Chính nhờ phân tích 16sRNAt mà hình thành một hướng định loại mới .Loài (species): tập hợp những cá thể giống nhau về hình dạng.Họ (familia): tập hợp các giống có một số đặc điểm chung.Giống (genus): tập hợp các vi khuẩn trong bảng xếp loại dưới họ. Theo Woese (1981) trật tự nucleotide trong 16sRNAt là một chỉ số quan trọng xác định sự gần gũi của hợp chất protein và từ đó quy định mối quan hệ chủng loại phát sinh giữa các nhóm vi khuẩn. số lượng và trật tự các nucleotide trong 16sRNAt và 5sRNAt. Các phương pháp định loại sinh hóa (chimiotaxonomy) ngày nay đã được sử dụng rộng rãi. đó là taaoj hợp những cá thể có được do sự cấy chuyền từ một khuẩn lạc vi khuẩn. . có thể sinh sản bình thường giữa chúng và thường không có khả năng này với các cá thể thuộc loài khác. Các mức đơn vị phân loại dùng trong vi sinh vật học là: Clone → biotype → species → genus → familia → order → classe → division → kingdom . Các vi sinh vật cổ có hợp chất thành đặc trưng là pseudomurein. . .định loại chủng loại phát sinh (polygenetic taxonomy). hợp chất đặc trưng này không thấy ở nhóm vi khuẩn tiêu giảm thành Mycoplasmes và ở các vi sinh vật cổ. dạng có được từ tuyển chọn các dòng.Chủng (nòi . . tử số lai DNA . trên loài. như các hợp chất polymer của thành tế bào vi khuẩn (bao gồm vi khuẩn Gram dương. Gram âm và Cyanobacteria) là peptidogulcan (murein). cách sống.Dòng tế bào (clone): là một quần thể vi khuẩn (hay vi sinh vật) có được từ một tế bào bố mẹ ban đầu nhờ sự phân chia vô tính.Dạng (biotype): một nhóm cá thể có chung đặc điểm di truyền tuyển chọn và những đặ điểm chủ yếu. tập hợp các loài rất gần nhau. đây là đơn vị hay dùng trong công nghệ vi sinh. .DNA. trong đó acid muramic được thay bằng acid talosaminuromic. nhờ đó có thể tách các vi sinh vật cổ ra khỏi vi khuẩn và chứng minh nó là nhánh tiến hoa độc lập khác xa xạ khuẩn. chỉ số lai DNA .

động vật) và khác xa với cơ thể nhân sơ nên từ lâu đã được xếp thành một giới riêng đó là giới nấm (Kingdom Fungi). Yeasts) Nấm men là nhóm nấm cơ thể đơn bào. bao gồm vi khuẩn trong một số bộ gần nhau. Có 3 danh từ thường dùng để chỉ nấm là: nấm men (Levures.43 . bao gồm một số họ gần nhau nằm dưới lớp.Nấm sợi hay nấm mốc.Ngành (division): tập hợp các vi khuẩn ở một số lớp có chung một số đặc điểm cơ bản. giữa quá trình này có thể sinh sản hữu tính. có những loại nấm men sinh các sắc tố đặc trưng như đỏ. Nấm men có hình trứng.Chu trình ưu thế lưỡng bội như loài Saccharomycodes ludgyzii. nhân chuẩn. .Nấm đơn bào hay nấm men. Trên môi trường sống.10μm. . kiểu trao đổi chất và hệ enzyme khác biệt với các cơ thể nhân chuẩn khác (thực vật. .Chu trình đơn bội . Nấm men có thể thuộc về 3 lớp nấm là nấm túi (Ascomycetes). Vi sinh vật nhân chuẩn. bao gồm hai nhóm: .Chu trình ưu thế đơn bội như ở loài Schizosaccharomyces octosporus. vi nấm được hiểu là các nấm có cơ thể hiển vi. Vi nấm Các cơ thể nấm với cấu tạo thành tế bào. .lưỡng bội như loài Saccharomyces cerevisiae. Trong số 75.000 loài nấm hiện biết thì có hơn 500 loài nấm men thuộc khoảng 50 giống. nấm đảm (Basidiomycetes) và nấm bất toàn (Deuteromycetes). nấm mốc (Moisissures) và nấm lớn hay nấm có quả thể. Trong vi sinh vật học.1. 1. vàng… Nấm men sinh sản vô tính bằng đâm chồi hoặc phân chồi. Yeasts). . Nấm men có 3 dạng chu trình sinh học: .Lớp (class): một nhánh trong bảng xếp loại vi khuẩn. hiển vi.Bộ (order): một nhánh trong bảng xếp loại vi khuẩn. II. . quả dưa chuột đứng riêng lẻ hoặc tập hợp thành sợi dễ gẵy. 1. Nhờ kính hiển vi điện tử khoa học đã thấy có sự khác nhau về thời gian hình thành thoi vô sắc trong sinh sản vô tính ở nấm men phân đôi và nấm men đâm chồi. Nấm men (Levures. kích thước tế bào từ 7 .

Cùng với sự tiến hóa về nhân và cơ chế phân chia nhân (nhân có màng. G2 và M như sinh vật nhân chuẩn. Ở nấm men đâm chồi có các pha G1 và S bình thường. Thành tế bào nấm có đến 80% . Trong khi màng nhân chưa được phát tán. kị khí so với nhánh tiến hóa phát triển của các cơ thể nhân chuẩn hiếu khí. sau đó mới hình thành vách ngăn tạo thành hai tế bào riêng. So sánh cấu tạo tế bào nấm men và tế bào vi khuẩn ta thấy có sự tiến hóa nhảy vọt từ cơ thể nhân sơ chuyển thành cơ thể nhân chuẩn. Con đường tiến hóa hình thành ty thể trong các cơ thể nhân chuẩn hiếu khí được thúc đẩy nhanh hơn khi hàm lượng oxy trong khí quyển tăng lên. Ngoài những cấu tạo đặc biệt của nấm men so với vi khuẩn. lục lạp (ở cơ thể nhân chuẩn quang hợp)… Nghiên cứu các đặc điểm của cơ quan tử ta thấy rất nhiều điểm giống cơ thể nhân sơ như DNA mạch vòng (DNA nhân mạch thẳng). đó là tế bào nhân chuẩn hiếu khí mang ty thể như ngày nay. không có ty thể. ribosome 70 S (trong tế bào là 80S) và phân bào trực phân trong khi tế bào phân bào gián phân. không có protein histone (thể nhiễm sắc trong nhân có histone). phân bào có tơ…) ở cơ thể nhân chuẩn xuất hiện nhiều cơ quan tử không thấy ở các cơ thể nhân sơ như ty thể. thành tế bào của nấm cũng là một nét rất đặc trưng. những tế bào nhân chuẩn mang trong mình vi khuẩn hiếu khí nội cộng sinh. Mặt khác. Cơ chế tách các thể nhiễm sắc ở phân bào có tơ của nấm men là nhờ các thoi vô sắc mà các thể nhiễm sắc trượt về hai đầu được diễn ra trong nhân. khoa học còn tìm thấy một ít loài động vật nguyên sinh như Microsporidia và Giardia là những đơn bào nhân chuẩn kị khí còn lại cho đến nay. các thể nhiễm sắc con được hình thành vẫn đính lên màng sinh chất và chỉ được tách ra nhờ sự phát triển và phân vách của màng. sau những thời kỳ nội cộng sinh kéo dài. Trong khi ở phân bào vô tơ của các vi khuẩn. các thoi vo sắc của mitose được hình thành trong nhân và thể nhiễm sắc được đưa về hai cực. Người ta cho rằng một con đường tiến hóa để hình thành ty thể trong tế bào nhân chuẩn là do sự tiếp xúc của các vi khuẩn nội cộng sinh (endosymbiotic bacteria). S. có sự chuyển gen từ vi khuẩn vào nhân và chỉ còn lại một số gen tự trị trong ty thể.44 Nấm men nhân đôi thì trong chu kỳ phân bào cũng có các giai đoạn G1. nhưng thoi vô sắc ở đây được hình thành rất sớm ngay cuối pha S làm cho pha G2 không bình thường (ngắn lại) và trong khi chưa hình thành hai nhân thành tế bào đã bắt đầu gấp lại. những cơ thể này đại diện cho một nhánh tiến hóa tiêu giảm không ty thể của các cơ thể nhân chuẩn. có các thể nhiễm sắc.

Bảng 2. phần còn lại là protein có thể đến 10 20%. Blastomycetales . làm pho mát.45 là polysaccharide mang tính kháng nguyên. Các polymer của thành tế bào có thay đổi chút ít phụ thuộc vào từng nhóm nấm. chúng tạo thành 3 lớp của thành tế bào nấm men. làm rượu vang. trong đó các hợp chất mannan. Riêng sản xuất bánh mỳ hằng năm thế giới đã tiêu thụ 1. nấu rượu. sản xuất sinh khối để chế protein (trong nấm men có thể chứa đến 40% đạm của trọng lượng khô). glucan và chitine là rất quan trọng.7 triệu tấn nấm men bánh mỳ.5: Bảng phân nhóm đơn giản các nấm men Lớp (Classes) Bộ Họ Saccharomycetaceae Họ phụ Schizosaccharum vcetoideae Nadsonioideae Lipomycetoideae Saccharomycetoideae Giống Schizosaccharomyces Hanseniaspora Lipomyces Debaryomyces Hansenula Kluyveromyces Pichia Sacharomyces Coccidiascus Filobasidium Leucospiridium Sirobasidium Tremalla Cryptococcoideae Nấm túi (Ascomycetes) Endomycetales Spermophthoraceae Filobasidiaceae Leuvures Sirobasidiaceae Tremellaceae Cryptococcaceae Nấm bất toàn Nấm đảm (Deuteromy-cetes) (Basidiomycetes) Ustilagi -nales Tremellales Rhodotoruloideae Trichospororoideae Sporobolomycetaceae Brettanomyces Candida Cryptococcus Torulopsis Rhodotorula Trichosporon Sporobolomyces Nấm men chiếm một vị trí đặc biệt trong công nghiệp thực phẩm: làm nở bột mì. trong đó gần một nữa là mannoprotein.

P. khi cộng sinh với tảo đơn bào hoặc tập hợp đơn bào thì hình thành địa y (Lichens).46 1.6: Bảng phân loại đơn giản một số giống nấm mốc Ngành Amastigomycota Ngành phụ Zygomycotina (Zygomycetes) Ascomycotina Lớp Zygomycetes Plectomycetes Pyenomycetes Hemiascomycetes Basidiomycotina (Basidiomycetes) Hemibasidiomycetes Bộ Mucorales Eurotiales Spahaeriales Endomycetales (nấm men) Urenidales Ustilaginales Giống Mucor Rhizopus Emericella (A. Những loài nấm sợi không vách ngăn thuộc về các nấm bậc thấp như Oomycetes . Chúng thường có những enzyme phân giải rất mạnh như hệ enzyme phân giải cellulose. nidulans) Neurospora (N. grassa) Eremothecium Puccinia Ustilago Candida Geotrichum Aspergillus (A.2. Nhiều nấm sống hoại sinh sử dụng rác thải hữu cơ động vật và thực vật hoặc phá hoại thức ăn. nước chấm. sản xuất kháng sinh. flavus. Một số nấm ký sinh trên động vật và thực vật gây nên các bệnh nấm rất khó chữa. nấm sợi là những cơ thể dị dưỡng. tạo các enzyme… Bảng 2. Deuteromycetes) hoặc hình ống trong đó sợi có nhiều nhân mà người ta gọi là sợi cộng bào (coenocytis). Nấm mốc Nấm mốc là loại nấm sợi điển hình. camenbertii. một số sống cộng sinh với thực vật. phân giải pectin. lipase… Con người từ lâu đã biết sử dụng mặt có lợi của nấm mốc trong việc chế tương. A. niger) Penicillium P. Cũng như nấm men. vật dụng hằng ngày. các enzyme amylase. roquefortii) Deuteromycotina (Deuteromycetes) Hyphomycetes (dạng nấm men = Blastomycetes) Hyphomycetes Moniliales Sợi nấm có thể có vách ngăn như các lớp nấm bậc cao (Ascomycetes. protease. Basidiomycetes. P. votatum.

sợi cơ chất tạo thành khung của khuẩn lạc và sợi khí sinh mang các cuống bào tử (sợi khí sinh . trong khi phần lớn chu trình phát triển ở dạng sợi mốc. có thể phân nhánh hoặc không. nhiều loài gây bệnh cho cá. Các cuống mang bào tử phát triển từ một loại sợi khí sinh. trên đầu cuống bào tử có thể hình thành túi mang bào tử (Mucor. sau đó nhờ giảm nhiễm mà hình thành các túi bào tử với các bào tử túi. Các nấm bậc cao như loài Aspergillus và Penicillium có thể hình thành cầu tiếp hợp giữa hai tế bào của hai sợi (+ và -). đó là hiện tượng sinh sản cận tính. Đôi khi các bào tử được hình thành bằng cách phân đốt của sợi (Geo trichum) mà người ta gọi là bào tử đốt (athrospore). mốc sương khoai tây đất. hoặc do sự hợp nhất hai nhân trong sợi cộng bào (coenocytis) để hình thành hợp tử. Một bào tử khi rơi vào môi trường thuận lợi sẽ nảy mầm và tạo thành khuẩn lạc gồm hệ sợi phát triển sâu vào cơ chất để hút thức ăn (sợi cơ chất . Rhizopus) với các bào tử túi sinh sản vô tính hoặc trên đầu cuống bào tử bằng phương pháp đâm chồi mà sinh ra các bào tử đính (conidie hay conidiospore). * Tổng quát về nấm: Bảng 2. Giai đoạn sợi lưỡng nhân (một tế bào có 2 nhân) tồn tại khá lâu. quả thể nhìn thấy được bằng mắt thường. phân giải chất hữu cơ thực vật Zygomycetes coenocytic bào tử túi.47 và Zygomycetes. Rhizopus . đôi khi bào tử đính (conidia) Zygospora (bào tử tiếp hợp) Mucor. chỉ ở giai đoạn hình thành đảm mới có tế bào có nhân là 2n. Các bào tử hữu tính được hình thành nhờ quá trình hữu tính kết hợp các tế bào đực và cái (các giao tử) hoặc các sợi khác giới tính. Ở các loài nấm đảm quá trình hợp nhân xảy ra muộn hơn so với quá trình hợp chất nguyên sinh. Các vách ngăn không ngăn cách hoàn toàn giữa các tế bào của sợi mà chúng thường liên hệ với nhau qua lỗ vách.7: Các lớp nấm thường gặp Lớp nấm Oomycetes Loại sợi không có vách ngăn (coenocytic) Bào tử vô tính bào tử chuyển động Bào tử hữu tính Oospora Nới chính sống Ví dụ Allomyces thủy sinh.SM). các cuống sinh bào tử có thể tập hợp lại thành thừng hay khoang đính bào tử (pycnide).AM) Các nấm bậc thấp có thể sinh ra các động bào tử một roi (chytridiomycetes) hoặc hai roi (Oomycetes) trong chu trình sinh sản của mình. Ở các nấm đảm (Basidiomycetes) quá trình hình thành đảm và các bào tử đảm là giai đoạn cuối cùng.

nhân nhĩ (Tremella)…đang trở thành đối tượng chủ yếu trong công nghệ nuôi trồng nấm ăn. cấu tạo bào tử và một số tính trạng sinh lý sinh hóa. bào tử mầm (Blastospore) Bào tử túi Saccharomyces. một số đơn bào đính bào tử (đâm chồi) bào tử túi (ascospore) đất. Trychophyton. bào tử đốt (arthrospora) Bảng 2. nấm hương (Lentinus). Phân loại nấm mốc chủ yếu dựa vào các tính trạng hình thái: cấu tạo sợi mang bào tử. một số đơn bào có vách ngăn. mộc nhĩ (Auricularia). có roi. nấm rơm (Volvariella volvacea). (đâm chồi) conidia bào tử đảm (basidiospore) chưa thấy Deuteromycetes bào tử đính. Penicillium Mucor. Rhizopus Coccidioides Candida Kiểu bào tử Bào tử vô tính (động bào tử) Zoospores) Đính bào tử (Conidiospore) Tính chất Bào tử đơn.8 bào tử trong một túi Phát triển ở tận cùng của đảm (thường 4 bào tử) Bào tử lớn được hình thành trong một thành dày (bào tử hữu tính) Bào tử phát triển trong Oogonium (nguyên bào trứng) Bào tử túi vô tính (Sporangiospores) Bào tử đốt (Arthrospores) Bào tử dây (Chlamydospore).8: Các kiểu bào tử nấm Ví dụ giống nấm Saprolegnia Aspergillus. được hình thành bằng phân đôi hay chồi giống nấm men Được hình thành trong túi (bào tử hữu tính). chuyên động Bào tử đơn hoặc tập hợp thành chuỗi được hình thành trên cuống bào tử (Conidiospore) Bào tử được hình thành trong túi (bào tử vô tính) Bào tử được hình thành bằng cách chia đốt các sợi khí sinh Thành dày. . phân giải chất hữu cơ thực vật đất. một số đơn bào có vách ngăn. Neurospora Agaricus Rhizopus Saprolegnia Bào tử đảm (Basidiospores) Bào tử tiếp hợp (Zygospores) Bào tử noãn (Oospore) Các loài nấm đảm ăn được như các giống nấm mỡ (Agaricus bisporus). thường 4 . thực vật và trên cơ thể động vật Neurospora.48 Ascomycetes có vách ngăn. phân giải chất hữu cơ thực vật đất. Morchella Agaricus. Epidermophyton Basidiomycetes Uredospora. bào tử đơn. Amanita Candida. Saccharomyces.

thành tế bào chủ yếu là cellulose Đơn bào có 1 roi (một số có 2 3 roi). như các tập đoàn Volvox. Những tảo này sinh sản bằng cách phân chia những tế bào lạ ở giữa hoặc bằng cách rụng tế bào ở đầu cùng (Sphacelaria. Ectocarpus…). chúng sinh sản hữu tính bằng tiếp hợp đẳng giao (hai giao tử bằng nhau) hoặc dị giao (hai giao tử khác nhau). phía ngoài có 2 roi làm chức năng di động cho cả tập đoàn. Các sắc tố quang hợp và hỗ trợ ở các nhóm tảo khác nhau thì khác nhau. Các vi tảo thường gặp hơn là các cơ thể đa bào hoặc tập hợp đơn bào. Diatoxanthine a và c β . Diadinoxanthine.9: Sắc tố và một số tính chất của các nhóm tảo khác nhau Ngành tảo Chrysophy Euglenoph Chlorophy ta (tảo vàng. chất dự trữ là tinh bột. không có thành tế bào Phần lớp là đơn bào. hoặc không có roi như Chlorella (tảo lục). phía trong tế bào mất roi làm chức năng quang hợp. Neoxanthine β Một số tính chất Tế bào 2 roi. Peridium và Euglena (tảo mắt). silica a và b Lutein. yta (tảo mắt) ta (tảo lục) tảo silic) Diệp lục a và b Carote -noid α và một ít β Oxycaroten Lutein. phía trong mất roi) và Volvox (tập hợp đơn bào. Neoxanthine. Violaxanthine Astaxanthine. Scenendesmus (thuộc nhóm Archethalle) hoặc phức tạp hơn có bộ phận đính bám và bộ phận dựng đứng như các sợi mảnh phân nhánh hoặc không (có thể có vách ngăn tạo thành các tế bào tương đối độc lập hoặc không có vách ngăn như một ống cộng bào (coenocytic). sinh sản vo tính bằng chia đôi hoặc sinh sản hữu tính. phía ngoài còn có 2 roi. hô hấp) là một ví dụ rõ nét chứng minh sự tiến hóa từ tổ chức đơn bào lên tổ chức đa bào phân hóa thô sơ. có thể có roi như Clamydomonas. Bảng 2. Fucoxanthine. Gonium (tập hợp đơn bào 2 roi). chất dự trữ là dầu và lecucosin với silic. Pediastrum.2 roi. hoặc tập hợp đơn bào. Vi tảo Vi tảo là tảo hiển vi có sắc tố quang hợp. sinh sản vô tính bằng chia đôi hoặc hữu tính. thành tế bào thấm pectin. Diatomia (tảo cát). sinh sản vô tính hoặc hữu tính. Vi tảo đơn giản nhất là cơ thể đơn bào. Zeaxanthine. Bốn giống tảo lục là Clamydomonas (đơn bào 2 roi). chất dự trữ là mỡ và loại tinh bột paramylon. hiện nay người ta đã biết 6 nhóm tảo với các sắc tố đã được nghiên cứu tương đối kỹ. một số nhỏ dạng sợi có 1 .49 2. Pandorina (tập hợp đơn bào.

một số nhỏ quang dưỡng. kích thước lớn. kích thước lớn. Ciliophora hay cilie (roi ngắn . nhánh Opalinata (cũng có tài liệu hợp nhất Rhizopodes và Flagelles vào dạng Rhizoflagelles). Lutein.50 Phaeophyta (tảo Pyrophyta nâu) (Tảo lửa.000 loài được mô tả. sinh sản vô tính bằng phân đôi. 3. Diatoxanthine. Động vật đơn bào Toàn bộ động vật được chia làm hai mức độ tổ chức: động vật đơn bào (Protozoa) và động vật đa bào (Metazoa) (theo phân giới truyền thống thì đó là hai giới phụ). chất dự trữ là tinh bột. Với hơn 30. sinh sản vô tính bằng Neoxanthine. chất dự trữ là tinh bột. 4. Động vật đơn bào (đôi khi người ta gộp vào nhóm này cả những động vật hiển vi dạng sợi nhiều nhân) là những cơ thể đơn bào nhân chuẩn. Phycoerythrine. Cnidospora (ký sinh trên động vật có xương và không xương). Những động vật đơn bào đầu tiên đã được Leeuwenhoek A. Sporzoa (ký sinh trên động vật. α và β a và d β . và nhiều tác giả khác.cils. sinh sản vô tính bằng động bào tử. nhiều động vật đơn bào có vai trò quan trọng ở các lớp bùn hoạt tính tại các trạm lọc nước thải. Sarcomastigophora với các nhánh Sarcodina hay Rhizopodes (Rhizopodes và Actinopodes). 2. bất động. giao tử. thành tế bào có cellulosse và acid alginic Phycocyanine. Peridinine Tucoxanthine. nhánh Mastigophora hay Flagelles.V phát hiện ra ngay từ thế kỷ XVII nhưng được nghiên cứu vào thế kỷ XVIII bởi Joblot L. có hai loại nhân: nhân to và nhân bé). chất dự trữ là Laminarian. một hoặc nhiều vật chủ). Lutein. Theo hệ thống phân loại hiên nay thì động vật dơn bào được chia làm 4 nhóm: 1. thường dinh dưỡng hữu cơ. Xanthophylls Đơn bào 2 roi ở bên. tảo giáp) a và c Dinoxanthine. thành tế bào là cellulosse β Rhodophyta (tảo đỏ) Đa bào. Hầu hết đa bào. Violaxanthine thành sinh chất chủ yếu là cellulosse a và c 3. bào tử. Diadinoxanthine. sinh sản hữu tính bằng giao tử chuyển động. động vật đơn bào sống ở đất và nước. sinh sản hữu tính bằng Zeaxanthine. hai roi khác biệt ở bên.

Balantidium ngang. Amoeba. ký sinh động vật. giả túc.7. bò.6 gần trung trung tính tính chất Nhóm Mastigophora .5 . thực tính chất hấp thụ pháp thu hấp thụ hấp thụ bào số đông nhận thức ăn Tính chất phân bào vô bào tử hữu sắc tố quang chuyển động đặc trưng tơ (trực phân) tính và vô hợp và sắc tố tính hỗ trợ Thành tế Murein Hemicellulose cellulose không có hoặc bào và chitine lipoproteid pH tối ưu 6.11: So sánh một số tính chất của các nhóm vi sinh vật Tính chất Vi khuẩn Nấm Tảo Động vật đơn Ghi chú bào Loại tế nhân sơ nhân chuẩn nhân chuẩn nhân chuẩn bào Kiểu dinh hóa dị dưỡng hóa dị dưỡng quang tự hóa dị dưỡng tính chất dưỡng (một số quang hữu cơ dưỡng hữu cơ số đông dưỡng) Đa bào. ký sinh trên động vật Entamoeba Sporozoa Thường bất động. một đơn bào. tập riêng lẻ. nhân động vật nhai lại lớn và nhân bé làm chức năng khác nhau.51 Bảng 2. xương.5. bệnh sốt rét cơn đôi. chia động vật chân đốt. Leishmania Sarcodina Dạng amip. chia đôi. bọ. sợi đơn bào. Nước ngọt và mặn. ký sinh Trypanosoma. tập vách hợp sợi và hợp xếp tế bào số hình thành không ngăn và sợi có bắt đầu hình tập hợp vách ngăn thành mô Phương quang hợp. Paramecium.10: Một số nhóm động vật đơn bào và tính chất của chúng Một số tính chất Nơi sống Ví dụ Một hoặc nhiều roi Nước ngọt. (flagella). chia đôi ký sinh trên động vật. đơn bào đa bào (trừ một số đơn đơn bào đơn bào nấm men) bào và một số đa bào Cách sắp riêng lẻ. ký sinh Toxoplasma Ciliophora Nhiều roi ngắn (tiêm Nước ngọt và mặn. hấp thụ. tế bào có thể trên động vật Giardia. mỗi tế bào trong dạ con của thường có 2 nhân. một số Ký sinh sơ cấp trên Plasmodium (gây có thể trườn. mao-cilia). không roi. Sau đây là so sánh một số tính chất của các nhóm vi sinh vật Bảng 2.8 . chia dọc. sâu tác nhân truyền bệnh Malaria).5 3. Cnidophora Hình thành chuỗi bào tử Ký sinh trên động vật Nosema gây bệnh nhờ sợi phình ra và cắt có xương và không tầm gai (Pebrina) khúc.

7. Nội bào tử. sợi cộng bào. 5. nội bào tử. Nói rõ vai trò của thành trong hoạt động sống và trong phương pháp nhuộm Gram. Cấu tạo thành tế bào nấm. 12. Plasmid ở cơ thể nhân sơ. Vẽ sơ đồ cấu tạo màng sinh chất của vi khuẩn. Nguyên tắc và phương pháp phân loại vi sinh vật. bào tử đảm. Các chu trình sinh học của nấm men. 9. 4. ứng dụng của chúng trong công nghệ vi sinh. 14. cấu tạo của chúng và khả năng nhuộm màu. 17. cấu tạo và nhuộm màu. vai trò và chức năng. So sánh cấu tạo thành tế bào vi khuẩn và vi sinh vật cổ. bào tử túi. 11. 3. Động vật đơn bào.000 (chỉ tính động vật đơn bào) số đông tính chất số đông Câu hỏi ôn tập chương 2 1. 15. 18. cấu tạo và chức năng các loại. cấu tạo tế bào và thành tế bào. bào tử đính. Màng nhầy và tiên mao. trong đó ghi rõ các cấu tạo bắt buộc phải có và cấu tạo không thường xuyên phụ thuộc vào nhóm vi khuẩn. 2. 13. . 16. 6. đại diện nấm mốc. tảo đơn bào và động vật đơn bào. Định nghĩa và cho ví dụ các khái niệm sau: bào tử vô tính. nói rõ chức năng vận chuyển các chất qua màng. cấu tạo đặc trưng khác với vi khuẩn. Bản chất của các vật thể ẩn nhập. sợi hai nhân. nấm. Vẽ sơ đồ cấu tạo tế bào vi khuẩn. Nêu một số ví dụ vi khuẩn sinh bào tử và không sinh bào tử. Chất nhân của vi khuẩn.000 (tất cả giới nấm) tính hiếu khí tinh bột 15. Các nhóm tảo. 10.000 (chỉ tính tảo đơn bào) hiếu khí glucogen và nhiều loại polysaccharide 30.52 Nhu cầu O2 Chất dự trữ chính Số loài hiện biết kị khí đến hiếu khí các loại polysaccharide 4000 hiếu khí glucogen 80. Vẽ sơ đồ cấu tạo tế bào nấm men. sợi nấm có vách ngăn. bào tử hữu tính. Nêu một số nấm có lợi và gây hại. So sánh tổng quát sự khác biệt của vi khuẩn. những phát hiện mới trong vấn đề genophore của cơ thể nhân sơ. 8.

Cho nên mặc dù một số virus có enzyme riêng cuả mình nhưng virus chỉ có thể nhân lên . Là dạng sống không có hoạt tính trao đổi chất. Virus không có ribosome hoạt động hoặc không có bộ máy tổng hợp protein. Hình 3. parainfluenza. có thể ở dạng thẳng hoặc khép kín. quai bị. wart-.Đối xứng xoắn: [C] khảm thuốc lá. [F] dại.Đối xứng hỗn hợp:[G] poxvirus. có thể là DNA hoặc RNA. Genome phân đoạn hoặc không phân đoạn. [D] cúm.1: Hình thái của một số virus 1. chuỗi đơn hoặc chuỗi kép. [B] herpet. Đặc điểm của virus Kích thước nhỏ. 2. rota-. adeno-.53 Chương 3 Các khái niệm cơ bản về virus Virus là các tác nhân rất nhỏ có thể gây bệnh ở mọi cơ thể sống. Do cấu tạo rất đơn giản nên muốn nhân lên chúng bắt buộc phải ký sinh trong tế bào và nhờ bộ máy tổng hợp của tế bào.[E] sởi. Virus có kích thước rất nhỏ từ 10nm đến 300nm trong khi kích thước của vi khuẩn khoảng 1000nm và kích thước của hồng cầu là 7500nm. [H] phage T chẵn • Genome virus chỉ chứa một loại acid nucleic. Vì vậy virus chỉ có thể quan sát được trên kính hiển vi điện tử.Đối xứng đa diện: [A] polio-. 3. I.

Cấu trúc virus Virus có cấu tạo rất đơn giản. Vỏ protein được gọi là capsid. tức genome nằm ở phía trong còn phía ngoài được bao bọc bởi vỏ protein. II.2. mỗi mặt hình đa diện là tam giác đều. . Đỉnh do 5 cạnh hợp thành. Capsid và acid nucleic được gọi là nucleocapsid. Hình 3. hợp lại thành nucleocapsid. Nucleocapsid được bao bọc bởi lớp vỏ ngoài (lipoprotein) với các gai. Capsid được cấu tạo bởi các đơn vị hình thái là capsome. A. Sơ đồ của virus hình que với cấu trúc đối xứng xoắn (virus khảm thuốc lá). vỏ là capsome là protein.54 trong tế bào sống. Cấu trúc cơ bản của virion Lõi là acid nucleic. điều khiển bộ máy tổng hợp của tế bào phục vụ cho mình để tạo thành các hạt virus mới. Mỗi cạnh chứa 3 capsomer B. Capsomer sắp xếp xoắn xung quanh sợi acid nucleic dạng xoắn ốc.Sơ đồ virus đa diện đơn giản nhất. Protome có thể là monome (chỉ có một phân tử protein) hoặc polyme (nhiều phân tử protein). Capsome lại được cấu tạo bởi các đơn vị cấu trúc là protome. bao gồm lõi là acid nucleic. vỏ protein bảo vệ genome khỏi sự tác động của các yếu tố môi trường ví dụ như nuclease trong máu.

Nuôi cấy virus Do virus chỉ sinh sản bên trong tế bào sống nên phải có các phương pháp đặc biệt để nuôi cấy chúng. Virus có 3 kiểu cấu trúc • Cấu trúc hình khối. IV. Cấu trúc hỗn hợp vùa dạng khối vừa dạng xoắn. Vỏ ngoài có bản chất là lipoprotein chứa kháng nguyên của virus. Nucleocapsid dạng kéo dài. dẫn đến làm chết tế bào (CPE. phương pháp này vẫn được sử dụng. III. Tuy nhiên trong sản xuất một số loại vaccine. cho phát triển và dùng làm nguồn nguyên liệu để cấy virus.55 Một số virus còn chứa vỏ ngoài. Ngày nay phương pháp nuôi này đã được thay thế bởi tế bào nuôi cấy mô. Ví dụ phage có đầu dạng khối. Có 3 hệ thống chính dùng để nuôi cấy virus trong phòng thí nghiệm. Các động vật được sử dụng là chuột. bao bọc bên ngoài capsid.. Vỏ ngoài một phần bắt nguồn từ màng sinh chất của tế bào chủ khi virus chui ra ngoài theo lối nảy chồi. Hiện nay phương pháp này vẫn được dùng để phân lập một số virus. Kết quả của việc nhiễm virus là làm cho tế bào bị huỷ hoại. . • Nuôi cấy mô tế bào. Hạt virus nguyên vẹn còn được gọi là virion. • Phôi gà.. Trước đây phương pháp này được dùng phổ biến để phân lập và nghiên cứu virus.13 ngày.Cytopathic effect). Các tế bào có nguồn gốc từ các mô của người hay động vật đươc nuôi trong bình chứa môi trường nhân tạo. Capsid có cấu trúc hình khối 20 mặt tam giác đều. • Động vật thực nghiệm.Tiêm hỗn dịch nghi là có virus vào động vật và quan sát bệnh cảnh lâm sàng. thỏ. • Cấu trúc xoắn. khỉ. Các capsome sắp xếp xung quanh theo chiều xoắn của acid nucleic. ở một số virus. Một số virus có thể nhân lên trong tế bào phôi gà 6. đuôi dạng xoắn trông như con nòng nọc. • Cấu trúc phức tạp. Ảnh hưởng của virus lên tế bào Virus có thể tác động lên tế bào theo 4 cách sau: • Gây chết tế bào. vỏ ngoài có nguồn gốc từ màng nhân của tế bào. chồn. Đa số virus có cấu trúc xoắn có vỏ ngoài bao bọc nucleocapsid xoắn.

Một số virus trên bề mặt vỏ ngoài có chứa protein gây ngưng kết hồng cầu (Haemaglutinin) gắn trên bề mặt các tế bào nhiễm. Virus tồn tại bên trong tế bào ở trạng thái hoạt động tiềm ẩn nhưng không ảnh hưởng rõ rệt đến chức năng của tế bào. Bảng 3.56 • Chuyển dạng. • Nhiễm tiềm tàng.. thành các tế bào u hoặc ung thư. V. Tế bào bị nhiễm virus nhưng không chết mà chuyển từ trạng thái bình thường sang trạng thái đặc biệt. Sau đây là một số virus gây bệnh.Barr).virus. Khi thêm hồng cầu vào thì hồng cầu sẽ bị kết dính bởi các tế bào nhiễm. Phân loại virus Virus được phân loại dựa theo đặc điểm hình thái. họ phụ – virinae và chi. Uỷ ban quốc tế phân loại virus quy định: Họ virus có tiếp vị ngữ là viridae. • Gây ngưng kết hồng cầu. cơn bất sản Adeno Hepadna Papova Parvo . Virus gây bệnh chứa genome DNA Nhóm virus Pox Herpes Tên virus Variola Molluscum (u mềm) Herpes simplex Varicella zoster Cytomegalo EB ( Epstein.1. HH6 Virus adeno Viêm gan B Papiloma Virus JC B19 Tên bệnh Đậu mùa u mềm lây Herpes Thuỷ đậu zona (shingles) Nhiễm trong thoả hiệp miễn dịch Bệnh bạch cầu đơn nhân lây nhiễm Bệnh ngoại ban đột ngột Viêm họng Viêm kết mạc Viêm gan Mụn cóc Viêm chất trắng não nhiều ổ tiến triển Ban đỏ truyền nhiễm. vị trí lắp ráp.. bản chất của genome (DNA hay RNA). có hay không có vỏ ngoài.

Nhiệt độ cao: Đa số virus bị bất hoạt ở 560C trong vòng 30 phút. hoá học đến virus . hoặc ở 1000C trong vài giây. viêm thận Rota Bệnh đường tiêu hoá Viêm màng não đám rối màng Viêm màng não mạch lympho bào Virus Machupo Virus Junin Virus lassa Sốt xuất huyết Ung thư tế bào T HTLV-I.Hợp bào hô hấp Sởi Quai bị Virus corona Cúm Viêm nhiễm đường hô hấp Sởi Quai bị Gây nhiễm đường hô hấp SARS Virus dại Bệnh dại Entero Viêm não.57 Nhóm virus Orthomyxo Paramyxo Corona Rhabdo Picorna Calici Toga Flavi Bunya Reo Arena Bảng 3.small round structure virus) Alpha (virus arbo nhóm A) Viêm não Rubi Sốt xuất huyết Rubeon (sởi Đức) Flavi (virus arbo nhóm B) Viêm não Sốt xuất huyết Viêm gan C Viêm gan Một số virus arbo Viêm não Sốt xuất huyết Sốt.2.1. II U lympho Liệt AIDS HIV. Virus gây bệnh chứa genome RNA Tên virus Tên bệnh Virus cúm Á cúm. 2 Virus Marburg Sốt Marburg Virus E bola Sốt xuất huyết Ebola Retro Filo VI. bại liệt Rhino Cảm lạnh Viêm gan A Viêm gan SRSV (virus có cấu trúc dạng Viêm dạ dày. . ruột tròn nhỏ. Ảnh hưởng của tác nhân vật lý.

Khô hạn: Khả năng chịu khô hạn của virus khác nhau tuỳ loài. phẫu thuật cấy ghép hay do côn trùng hoặc động vật cắn. tiêm chích. Tuy nhiên việc nhiễm virus thường ở thể nhẹ.Xâm nhập qua da. .Bức xạ tử ngoại: Virus bị bất hoạt bởi tia tử ngoại . ete và các dung môi khác: Các virus có vỏ ngoài chứa lipid sẽ bị bất hoạt. . truyền máu. song đa số virus không bị bất hoạt bởi phenol. Hầu hết chúng gây bệnh ở thể nhẹ.58 .Ăn uống: Qua đường tiêu hoá (dạ dày. nhưng đôi khi có thể gây bệnh trầm trọng ở những người mẫn cảm bất thường.ruột) .Chlorofoc. clo. Một số virus bị bất hoạt trong quá trình làm đông lạnh hoặc tan băng.Chất khử trùng virus: Tốt nhất là dùng dung dịch hypoclorua (một chất ăn mòn) và glutaraldehyt (là chất có thể gây mẫn cảm và kích thích gây khó chịu chảy nước mắt cho người dùng).propiolacton và formaldehyd là các hoá chất được dùng để bất hoạt virus trong sản xuất vaccine. iot và H2O2. bệnh nhân tự bình phục sau một thời gian nhất định. Nhiều loại tồn tại thầm lặng trong cơ thể. cây trồng và vi sinh vật.Nhịêt độ thấp: Đa số virus bền ở nhịêt độ lạnh nên có thể bảo quản lâu ở – 700C. VII.Các chất oxi hóa và chất khử. . động vật.Bẩm sinh: Do mẹ truyền qua nhau thai sang con . Virus bị bất hoạt bởi dưới tác dụng của formaldehyt. Con đường lây nhiễm của virus vào cơ thể Virus vào cơ thể theo 4 con đường chính: . vết xước niêm mạc (qua quan hệ tình dục). β. Chúng nhân lên nhưng không gây bất kỳ triệu chứng nào. Một số do virus gây bệnh rất nặng và thường có tỷ lệ tử vong cao. VIII. còn không chứa lipid sẽ bền vững. Đa số các bệnh thường gặp ở người là do virus.Hít thở: Qua đường hô hấp . Các bệnh do virus Virus là tác nhân gây bệnh quan trọng cho người. một số bị bất hoạt nhanh ở điều kiện khô hạn . . Một số sống sót.

Vì vậy người ta thường sử dụng thuật ngữ nhân lên (nhân bản) của virus thay cho từ sinh sản. Sự nhân lên của virus có thể làm tan tế bào gọi là chu trình sinh tan hoặc có thể gắn genome của mình vào nhiễm sắc thể của tế bào. Sự hấp phụ được tăng cường khi có mặt của ion Mg2+ hoặc Ca2+ 2. Gắn thụ thể đặc hiệu của mình lên thụ thể nằm trên màng sinh chất của tế bào. rồi từ đó biểu hiện ra các dấu hiệu. Hấp phụ a. tồn tại lâu dài dưới dạng tiềm ẩn mà không là chết tế bào gọi là chu trình tiềm tan. Quá trình nhân lên của virus diễn ra theo 7 giai đoạn 1. Sự sinh sản của virus trong tế bào sẽ giết chết tế bào (tuy nhiên có trường hợp không giết tế bào). . Bệnh sinh ra do virus lan truyền trực tiếp tới các mô và cơ quan trong cơ thể.59 IX. Thông thường virus xâm nhập vào tế bào theo cơ chế ẩm bào. Tiếp đó không bào dung hợp cùng với mạng lưới nội chất để giải phóng nucleocapsid. Vì có tính đặc hiệu cao nên chỉ có virus nhất định mới gắn lên được các tế bào nhất định.Virus không có vỏ ngoài : Màng tế bào lõm vào bao lấy virus tạo không bào tạm thời. sau đó lắp ráp tạo ra các hạt virus con giống như nguyên bản.Màng tế bào lõm vào bao lấy virus cùng vỏ ngoài. Sau đó màng không bào (có nguồn gốc từ màng tế bào) dung hợp với vỏ ngoài của virus rồi đẩy nucleocapsid vào tế bào chất. X. Vỏ ngoài virus hoà với màng sinh chất mà không chui vào tế bào chất . Xâm nhập a. . . b.Virus có vỏ ngoài: Vỏ ngoài của virus dung hợp với màng sinh chất rồi đẩy nucleocapsid vào trong mà không tạo không bào. Sự xâm nhập Cơ chế gây bệnh chủ yếu của virus là sự xâm nhập. triệu chứng. . Tác động gây huỷ hoại tế bào được gọi là CPE (cytopathic effect) sẽ dẫn đến tổn thương và huỷ hoại chức năng của các mô và cơ quan. Các quá trình nhân lên của virus Virus không có hoạt tính trao đổi chất mà sử dụng bộ máy trao đổi chất của tế bào để tổng hợp các thành phần thiết yếu của mình. tạo không bào.

đẩy nucleocapsid vào tế bào. Dung hợp với màng lưới nội chất hoặc endosom tiêu hóa rồi giải phóng nucleocapsid (ví dụ virus cúm. . Cởi vỏ Enzyme tiêu hoá của tế bào từ lysosome tiến hành phân giải vỏ protein cuả virus để giải phóng acid nucleic hoặc genome vào tế bào chất.60 Hình 3. dung hợp với endosom tiêu hóa. herpes). adeno và reo). tạo không bào.Virus không có vỏ ngoài.replicative form) . 4.3: Các phương thức xâm nhập của virus vào tế bào 1-Virus có vỏ ngoài: a) Dung hợp với màng sinh chất. toga và rabdo) 2. Xâm nhập theo lối ẩm bào. tiến hành cởi vỏ và giải phúng acid nucleic (ví dụ virus polio.Tạo thành mRNA của virus hoặc phân tử dạng sao chép của genome (RF. Vỏ ngoài virus nằm trên màng sinh chất (ví dụ virus paramyxo. b) Xâm nhập theo lối ẩm bào. tạo không bào.Diễn ra theo cơ chế điều khiển phức tạp: • Kiểu phiên mã trước và sau khi sao chép acid nucleic hoàn toàn khác nhau. 3. Phiên mã .Thực hiện nhờ enzyme của tế bào hoặc của virus .

Lắp ráp . Đa số trường hợp protein capsid lắp ráp tạo thành cấu trúc . Protein không cấu trúc tìm thấy trong hạt virus. • Bản phiên mã đầu tiên thường được cắt nối (splicing) để loại bỏ các đoạn intron nằm xen giữa các exon.Genome và protein mới được tạo thành lắp ráp với nhau tạo nên hạt virus mới. một số virus RNA chứa RNA polymerase 5. nhờ đó tạo ra nhiều protein từ cùng một đoạn acid nucleic . Trong trường hợp genome là mạch đơn thì khuôn là mạch bổ sung mới tạo thành của genome mẹ.Tổng hợp acid nucleic của virus . trừ một số trường hợp đặc biệt ví dụ enzyme phiêm mã ngược có trong virus HIV hoặc virus viêm gan B chứa DNA polymerase.1.Về cơ bản mRNA của virus có những đặc điểm sau đây (nhưng cũng có thể khác): • Chứa trình tự khởi đầu • Có gắn mũ ở đầu 5’ • Ở đầu 3’ có gắn đuôi polyA 5. • Phiên mã đôi khi xảy ra theo cơ chế chồng lớp.Phần lớn quá trình sao chép được thực hiện nhờ polymerase (replicase) do virus mã hoá. Tổng hợp các thành phần của virus 5. . protein vỏ ngoài và protein trong lõi. .2.Protein khôngcấu trúc là enzyme cần cho sao chép genome. Đối với một số virus DNA thì quá trình tổng hợp được thực hiện nhờ enzyme của tế bào. 6.Genome của virus con được sao chép từ genome của virus mẹ.61 • Nhiều genome virus chứa promoter và enhancer có tác dụng kích thích quá trình phiên mã. Trong cùng một gen có nhiều điểm khởi đầu và nhiều điểm kết thúc.Protein cấu trúc là protein capsid. Tổng hợp protein của virus mRNA của virus được phiên mã trên ribosome của tế bào tạo ra 2 loại protein .

Lắp ráp có thể xảy ra trong nhân tế bào. • Dạng thẳng hoặc khép kín (đóng vòng). acid nucleic chui vào cấu trúc này rồi hàn kín lại. • Để nhân lên phải dùng một số enzyme của tế bào. .62 rỗng gọi là tiền capsid (procapsid) sau đó do chuyển động Brao. Màng sinh chất bao lấy nucleocapsid tạo vỏ ngoài. • Nhiều trường hợp virus phải có gen chồng lớp. Còn phần lớn genome RNA đơn không phân đoạn (trừ virus cúm và HIV). virus chứa genome DNA đơn thường có kích thước nhỏ. . • Có trọng lượng phân tử nhỏ. trong tế bào chất hoặc ngay sát màng sinh chất (đối với đa số virus có vỏ ngoài). 7. • Genome RNA kép tất cả đều phân đoạn (trong mỗi hạt virus có nhiều đoạn). còn ngược lại được gọi là genome (-). XI. Genome virus • Có thể là DNA hoặc RNA mà không bao giờ chứa cả hai. • Có trọng lượng phân tử lớn. • Có dạng chuỗi đơn hoặc chuỗi kép. Acid nucleic của virus có kích thước lớn. • Genome RNA đơn có trình tự nucleotit giống trình tự của mRNA thì được quy ước là genome (+).DNA). Giải phóng Virus có thể làm tan tế bào để chui ồ ạt ra ngoài hoặc đối với virus có vỏ ngoài thì chui ra từ từ theo lối nảy chồi. Acid nucleic của virus có kích thước nhỏ. • Mã hoá cho nhiều protein. • Genome của HepDNAaviridae (ví dụ virus viêm gan B) khi sao chép phải thông qua RNA trung gian (DNA – RNA. • Do dó khả năng mã hoá tạo protein hạn chế. Virus chứa genome DNA kép thường có kích thước lớn. • Mã cho nhiều enzyme cần cho quá trình nhân lên.

Các virus có genome DNA 1. Ví dụ khi được giải phóng khỏi vỏ capsid. herpes simplex. • Protein phân giải. • Protein được tổng hợp muộn hơn gọi là protein muộn. XII. Muốn nhân lên chúng phải phiên mã thành RNA (+). Ba loại protein được điều hoà tổng hợp một cách hợp lý. Virus được chia làm 6 nhóm dựa vào genome và cách thức tổng hợp mRNA. chủ yếu mã hoá cho các enzyme tham gia vào quá trình tổng hợp acid nucleic của virus. virus DNA kép Ví dụ virus vaccinia. Sau đây là vài nét đơn giản hoá quá trình nhân lên để nêu bật sự khác nhau giữa các nhóm. acid nucleic chỉ có khả năng lây nhiễm khi đã được đưa vào trong tế bào. thường là protein cấu trúc tạo capsid. còn protein cấu trúc thì phải tổng hợp một lượng lớn. • mRNA sớm: được tạo thành trước khi tổng hợp DNA virus. 1. Protein sớm là enzyme xúc tác nên chỉ cần một lượng nhỏ. vỏ ngoài và protein lõi. Protein của virus Tuỳ thuộc vào thời gian tạo thành mà protein của virus được chia làm 3 loại • Protein được tổng hợp ngay sau khi nhiễm được gọi là protein sớm tức protein không cấu trúc. Dịch mã Có 2 loại mRNA được tổng hợp .63 Khả năng gây nhiễm. adeno. • Genome của các virus chứa RNA (-) không có khả năng gây nhiễm.1. Đây là enzyme cần cho sao chép acid nucleic . papiloma. Mỗi nhóm virus có cách nhân lên riêng. Các phương thức nhân lên của virus Quá trình nhân lên của virus trong tế bào hết sức phức tạp. bản thân acid nucleic có thể tự thực hiện quá trình gây nhiễm tế bào. . bắt đầu chu trình gây nhiễm hoàn chỉnh để nhân lên. • Đối với nhiều loại virus. XIII. Nhóm 1. thường là lyzozym giúp virus giải phóng ra khỏi tế bào.

Tổng hợp protein muộn • Diễn ra sau khi tổng hợp DNA • Chủ yếu là các protein cấu trúc để tạo vỏ capsid và vỏ ngoài • Vị trí tổng hợp : Protein được tổng hợp trên ribosome trong tế bào chất . . Lắp ráp Quá trình lắp ráp genome với protein để tạo thành hạt virus mới xảy ra ở các vị trí khác nhau bên trong tế bào. Tổng hợp DNA virus . 1.Các virus có kích thước lớn hơn (ví dụ vaccinia.Tổng hợp protein sớm: Đây là các enzyme (DNA polymerase phụ thuộc DNA ) cần cho sao chép DNA.Vị trí tổng hợp: trong nhân tế bào (trừ virus pox).Các virus có kích thước nhỏ (ví dụ adeno. chủ yếu mã hoá cho các protein cấu trúc như vỏ capsid.DNA mới tạo thành • Dùng làm khuôn để tạo mRNA muộn cần cho tổng hợp protein muộn. Màng nhân trước đó đã được gắn glycoprotein do virus mã hoá tại . .64 • mRNA muộn: tạo thành sau khi tổng hợp DNA virus . Riêng virus herpes hình thành vỏ ngoài bằng cách nảy chồi qua màng nhân. Tổng hợp protein virus Quá trình gồm 2 giai đoạn tuỳ thuộc vào sự tổng hợp mRNA.2. vỏ ngoài… 1.4. . papiloma) thì sử dụng DNA polymerase của tế bào . papiloma. sau đó được vận chuyển tới vị trí lắp ráp. • Làm khuôn để tạo mạch tươngbù cần cho tổng hợp nhiều genome của virus mới.3. . herpes simplex) thì tự tổng hợp DNA polymerase riêng cho mình. .Khuôn: DNA của virus con được tổng hợp trên khuôn genome DNA của virus mẹ. 1.Trong nhân tế bào: Ví dụ virus Herpes simplex. adeno.Các enzyme Enzyme sao chép DNA chủ yếu là DNA polymerase phụ thuộc DNA.

• Tiến hành sao chép trong nhân nhờ DNA polymerase của tế bào để tạo DNA kép trung gian. mạch (+) ngắn. Genome gồm 2 mạch không bằng nhau. sau đó kết hợp với mạng lưới nội chất sần hoặc bộ máy Golgi để ra khỏi tế bào. enzyme phiên mã ngược và ribonuclease H). Genome RNA của virus có các dạng phiên mã sau đây. Virus được bao bởi màng nhân khi ra khỏi nhân. Chứa enzyme DNA polymerase. • Chỉ có một họ duy nhất là Parvoviridae. Tiếp đó RNA tiền genome liên kết với DNA polymerase và protein lõi để tạo ra hạt lõi (virus chưa hoàn chỉnh). Enzyme phiên mã ngược tiến hành chuyển RNA tiền genome thành mạch DNA (-). • Một số virus có khiếm khuyết nên muốn nhân lên cần sự hỗ trợ của các virus khác. Các virus có genome RNA. 1. Tiếp đó là hoàn thiện nucleocapsid.65 các vị trí đặc hiệu. Do vật liệu di truyền là RNA nên virus có cơ chế sao chép không giống với các cơ thể sống khác. DNA được giải phóng vào nhân. Các RNA đi ra tế bào chất để tổng hợp protein của virus như protein lõi và polymerase. sau đó hầu hết RNA tiền genome bị phân huỷ nhờ ribonuclease H. Sau khi nhiễm. . Mạch (-) dài. Enzyme này có 3 hoạt tính ( DNA polymerase. Virus có genome DNA kép đặc biệt Virus viêm gan B (HBV) có chu trình nhân lên đặc biệt và phức tạp. gọi là dạng sao chép (RF-replicative form). Nhóm 2. Phiên mã xảy ra trong nhân nhờ RNA polymerase của tế bào để tạo ra nhiều loại mRNA trong đó có RNA kích thước lớn được coi là tiền genome – một dạng trung gian để tạo genome. • Các virus chứa DNA đơn thường có genome nhỏ. . Virus DNA đơn. Chỉ một đoạn RNA được giữ lại dùng làm mồi cho DNA polymerase tổng hợp mạch DNA (+) từ khuôn DNA (-) để tạo chuỗi DNA kép.Trong tế bào chất: Ví dụ virus vaccinia nhân lên hoàn toàn trong tế bào chất tại các cụm ribosome. • RF vừa dùng làm khuôn tổng hợp DNA đơn genome vừa dùng để phiên mã tạo mRNA sau đó dịch mã tổng hợp protein . 2.5.

. • Các enzyme RNA polymerase phụ thuộc RNA hoạt động không chính xác như polymerase phụ thuộc DNA và không có khả năng đọc sửa (proofreading). vào khoảng 10 nucleotit. Do vậy khác với virus DNA gây nhiễm ở eucaryota. • Gen mã hoá cho RNA polymerase thường là gen lớn nhất trong genome và độc lập hoàn toàn với nhân tế bào chủ trong sao chép và phiên mã. (-): mRNA được phiên mã từ genome của virus mẹ . Một số virus RNA đột biến nhanh đến nỗi chúng tạo thành và tồn tại các quần thể chứa các genome khác nhau ngay trong một vật chủ. Điều này dẫn đến 3 hệ quả: Tần số đột biến ở virus rất cao nên nếu virus có chu kỳ nhân nhanh thì sự biến đổi kháng nguyên cũng diễn ra nhanh. Việc xác định chúng ở mức độ phân tử chỉ có thể dựa vào các trình tự chiếm đa số hoặc trung bình. (+) Ví dụ virus gây bệnh bại liệt polio. vì RNA genome có trình tự nucleotid giống với trình tự của mRNA nên làm luôn chức năng của mRNA. .66 . rất nhiều virus tiến hành nhân lên hoàn toàn trong tế bào chất. Nhóm 3. Virus RNA có các đặc điểm sau: • Do tế bào chủ không có RNA polymerase phụ thuộc RNA nên enzyme này bắt buộc phải được mã hoá bởi genome virus và thường có mặt trong hạt virus trưởng thành. khoảng 10-3. gấp 3-4 lần so với virus DNA. Do nhiều đột biến có hại cho sự nhân lên của virus. Virus RNA đơn. vì thế tính độc cũng phát triển rất nhanh. (+): Genome của virus chính là mRNA. nên có tần số đột biến rất cao.RNA kép. . Điều này có được là do virus RNA thích nghi rất nhanh với sự thay đổi của điều kiện môi trường hoặc tế bào chủ. qua mỗi chu kỳ sao chép xuất hiện một đột biến.RNA đơn. Sau đây là một số ví dụ về quá trình nhân lên của virus RNA. Lúc đầu không có quá trình phiên mã.RNA đơn. nên tần số đột biến đặt ở giới hạn cao hơn kích thước genome RNA. 3. phân đoạn: mRNA của virus được phiên mã riêng từ mỗi đoạn RNA genome của mẹ sử dụng transcriptase liên kết với mỗi đoạn.10-4 base.

67 Có khả năng gây nhiễm vì genome mã hoá được cho tất cả các protein cần thiết của virus. Dạng này được tạo thành bằng cách tổng hợp RNA (-) bổ sung trên khuôn RNA (+) mẹ. đơn . • RNA polymerase phụ thuộc RNA cần cho quá trình sao chép (tế bào không có enzyme này) • Protease phân cắt peptit lớn. Dịch mã Genome RNA (+). Tổng hợp RNA của virus • Sự tạo thành genome mới xảy ra trên khuôn RNA dạng sao chép (RF).1. 3. 3. • Genome RNA (+) được tổng hợp trên khuôn RNA (-) của dạng sao chép RF Hình 3. cần cho khởi đầu sao chép. dùng làm mRNA để tổng hợp polypeptit tiền chất lớn sau đó nhờ protease phân cắt thành các phân tử nhỏ có chức năng khác nhau như: • Protein cấu trúc tạo capsid. • Protein gắn vào đầu 5' của genome (thay cho mũ) gọi là protein VPg.2.3: Chu trình đơn giản hoá quá trình nhân lên của virus RNA (-).

4. • RNA (+) mới được tổng hợp có những chức năng sau: Làm khuôn để tổng hợp nhiều RF rồi từ đó tổng hợp nhiều RNA genome.4: Chu trình đơn giản hoá quá trình nhân lên của virus RNA (+). Giải phóng Virus phá vỡ tế bào đột ngột để ồ ạt ra ngoài . đơn Đặc điểm quá trình phiên mã có thể tóm tắt như sau: . Nhóm 4.3. Lắp ráp Protein được tạo thành sau khi phân cắt polypeptit tiền chất sẽ lắp ráp với RNA genome mới trong tế bào chất để tạo ra virus mới Với virus polio thì sự nhân lên hoàn toàn xảy ra trong tế bào chất 13.68 • RNA polymerase phụ thuộc RNA tham gia tổng hợp cả RF và cả genome RNA (+) mới .4. Chu trình nhân lên được minh hoạ ở hình 3.3.4 Hình 3. Dùng làm genome cho các virus mới Dùng làm mRNA 3. (-) Ví dụ virus cúm hoặc á cúm. Virus RNA đơn.

4. RNA mới của virus được tổng hợp trong nhân tế bào. Nhóm 5. 4. Quá trình này không cần mồi. muốn tổng hợp genome RNA (-) trước hết phảI tổng hợp chuỗi RNA trung gian để làm khuôn. Hạt virus được bao vỏ ngoài khi nảy chồi qua màng sinh chất 5. Quá trình này cần có sự tham gia phiên mã cuả tế bào chủ.3. Mỗi đoạn phiên mã cho một m RNA riêng để từ đó tổng hợp thành các phân tử protein có chức năng khác nhau. Virus cúm là virus RNA nhiều đoạn. Virus RNA kép • Nhóm này bao gồm các virus Reo và Rota. Một loại có hoạt tính haemaglutinin hoặc neuraminidase và một loại có hoạt tính dung hợp hoặc tan máu. • Mỗi đoạn phiên mã cho một mRNA để tổng hợp một protein riêng. đơn. Khác với phiên mã tạo mRNA. Protein virus được tổng hợp trong tế bào chất rồi di chuyển tới bề mặt tế bào. Tiếp đó tổng hợp RNA (-) genome trên mạch khuôn trung gian.2. . 4. Protein của virus bao gồm: Enzyme transcriptase (RNA polymerase phụ thuộc RNA ). Tại đây glycoprotein vỏ ngoài cũng được gắn vào các vị trí nhất định. Genome RNA mới được vận chuyển đến bề mặt tế bào và lắp ráp với protein mới tổng hợp của virus. Tổng hợp RNA genome.1. • Tất cả các virus RNA kép đều có genome nhiều đoạn. Protein vỏ ngoài gồm 2 loại đều được gắn glucozơ (glycosyl hoá). • Virus cúm chứa genome nhiều đoạn do đó mỗi mRNA tạo thành được dùng để tổng hợp một loại protein.69 • Virus RNA (-) luôn mang theo RNA polymerase phụ thuộc RNA vì tế bào không có enzyme này. Lắp ráp Nucleocapsid của virus được lắp ráp ở màng nhân tế bào và tạo vỏ ngoài khi nảy chồi qua màng sinh chất. Tổng hợp protein. • mRNA được tổng hợp trong nhân tế bào từ genome RNA (-) của mẹ nhờ enzyme RNA polymerase phụ thuộc RNA có trong hạt virus .

6: Chu trình đơn giản hoá quá trình nhân lên của virus RNA kép (RdRp: Enzyme RNA polymerase phụ thuộc RNA) . đó cũng chính là genome (sơ đồ nhân lên được minh hoạ ở hình sau ). Hình 3. • Phiên mã thực hiện theo cơ chế bảo thủ và không đối xứng. nghĩa là chỉ tạo thành mRNA. Mỗi mRNA lại được sao một lần để tạo chuỗi RNA kép.5: Chu trình đơn giản hoá quá trình nhân lên của virus Retro (RT: Enzyme phiên mã ngược) Hình 3.70 • Hạt virus chứa RNA polymerase phụ thuộc RNA .

Protein không cấu trúc (enzyme) xúc tác để sao chép RNA thông qua sự tổng hợp RNA chuỗi âm (đối genome) (bước 5 và 6). Chứa 3 gen chính là gap (mã cho protein lõi). Mũi tên đậm thể hiện sự tổng hợp ở mức độ cao hơn. Genome là 2 phân tử RNA đơn. 6. không tạo thành các mRNA genome.Quá trình nhân lên Picorma và flavivirus 1 Đối genome RNA (-) 5 Genome RNA (+) 2 Enzyme sao chép 6 Tiền polyprotein 4 3 7 Protein cấu trúc và không cấu 8 Virus mới Hình 3. các protein cấu trúc và không cấu trúc (bước 2 và 3). gen pol mã cho polymerase phiên mã ngược (RT) và gen env mã cho protein vỏ ngoài. Quá trình sao chép tạo ra nhiều genome RNA mới phục vụ cho tổng hợp các protein của virus (bước 6 và 7) và cho lắp ráp tạo virus mới (bước 8). Sau khi xâm nhập và cởi vỏ (bước 1). (+) Rất nhiều nhưng không phải tất cả virus retro có khả năng tạo khối u. Nhóm 6. Sơ đồ nhân lên của virus RNA chuỗi dương. . Ngoài ra còn có một số gen điều hoà.71 6. RNA genome được sử dụng trực tiếp để tổng hợp các polyprotein kích thước lớn. Virus Retro chứa genome DNA đơn.7. (+). Khi nhân lên không giết chết tế bào mà có thể chuyển dạng thành tế bào ung thư. gắn với nhau ở phía đầu (dạng dime).1.

Còn mạch cDNA dùng làm khuôn tổng hợp mạch DNA bổ sung. bao gồm: Enzyme phiên mã ngược. protein lõi. • Chuyển chuỗi lai RNA/DNA thành chuỗi DNA kép. • RNA của virus phiên mã nhờ enzyme của tế bào. . Vỏ ngoài được hình thành khi virus nảy chồi qua màng sinh chất.Giai đoạn đầu • Phiên mã nhờ enzyme phiên mã ngược để tạo chuỗi lai RNA/ DNA. 6.Giai đoạn hai. 6. .2. • Bản sao RNA có 2 chức năng: vừa là m RNA để tổng hơpj protein virus.72 Gồm 2 giai đoạn: . • Cài xen phân tử DNA kép mới tổng hợp vào nhiễm sắc thể của tế bào tạo ra provirus. Lắp ráp Nucleocapsid được lắp ráp từ genome RNA mới tạo thành với protein đã di trú ra bề mặt tế bào. Enzyme RT có hoạt tính ribonuclease H phân giải mạch RNA. vừa là genome của virus mới. Tổng hợp protein mRNA được phiên mã từ DNA provirus tiến hành tổng hợp protein trên ribosome nằm trong tế bào chất. protein vỏ ngoài.3.

73 Atro. trong đó có enzyme RNA polymerase phụ thuộc RNA (RdRp) ( bước 2 và 3). Bước 10. Phân cắt nhờ protease và xử lý sau dịch mã. RdRp xúc tác để sao chép RNA. Sau khi xâm nhập và cởi vỏ (bước 1). Phân cắt nhờ protease . mRNA dưới genome (có kích thước nhỏ hơn genome) tiến hành dịch mã để tạo protein cấu trúc ( bước 7 và 8). Sơ đồ nhân lên của virus RNA dương. kèm theo tổng hợp RNA dưới genome. Bước 8. calici. Chú thích: Bước 7. toga. Dịch mã của mRNA dưới genome. RNA genome được dùng trực tiếp làm mRNA để tổng hợp protein không cấu trúc. Từ chuỗi âm làm khuôn tiến hành sao chép để tạo ra nhiều chuỗi RNA genome mới (bước 5 và 6). tổng hợp chuỗi RNA âm (đối genome) có kích thước đủ (tương đương RNA genome) ( bước 4 và 5). Genome mới tạo thành tiến hành dịch mã để tạo nhiều protein không cấu trúc (bước 9 và 10) và sau đó lắp ráp với protein cấu trúc để tạo virus mới ( bước 11). corona và arterivirus 1 Dưới genome mRNA 6 Đối genome RNA (-) 5 2 Enzyme sao chép Genome RNA (+) 7 Protein cấu trúc và tiền polyprotein 9 Tiền polyprotein không cấu trúc 4 8 3 10 Protein không cấu trúc Protein cấu trúc 11 Virus mới Hình 3.8.

74 Phabdo. tạo ra mRNA cần cho tổng hợp protein (bước 7). một phần dùng để lắp ráp với protein để tạo virus mới (bước 8). RNA tiến hành phiên mã nhờ RNA polymerase phụ thuộc RNA do virus mang theo để tạo mRNA (bước 2) cho tổng hợp protein cấu trúc và không cấu trúc (RdRp) ( bước 3). Enzyme RdRp tiến hành sao chép RNA thông qua bước trung gian là tạo RNA chuỗi dương (đối genome) (bước 4 và 5). . orthomyxo và một số bunya 1 RNA (+) đối genome 5 2 Protein capsid và RNA genome ỗ 6 mRNA 3 4 7 8 Protein cấu trúc và không cấu trúc Virus mới Hình 3. Sơ đồ nhân lên của virus RNA chuỗi đơn. Sau khi xâm nhập và cởi vỏ một phần( bước 1). paramyxo. âm .9. filo. borna. Một phần RNA genome được dùng để tiến hành phiên mã mạnh. Đối genome (chuỗi dương) được dùng làm khuôn để tổng hợp nhiều RNA genome (bước 5).

. Xâm nhập và cởi vỏ Bước 4. Lắp ráp tạo virus mới. Sau đó mRNA trong các hạt này tiến hành sao chép để tạo RNA genome chuỗi âm tham gia tạo thành RNA genome chuỗi kép (bước 5). Sơ đồ nhân lên của virus RNA chuỗi kép. sao chép (bước 8 và 9). Lắp ráp tạo hạt dưới mức virus.10. Bước 10. Các hạt dưới mức virus được tạo thành lại tiếp tục tham gia vào quá trình tổng hợp m RNA (bước 6). các đoạn RNA chuỗi kép vẫn nằm trong lõi tiến hành phiên mã nhờ enzyme RdRp gắn ở lõi để tổng hợp mRNA (bước 2) rồi từ đó tổng hợp protein (bước 3). tổng hợp protein (bước 7). Sau khi xâm nhập và cởi vỏ từng phần (bước 1).75 Virus Reo và Birna 1 mRNA trong hạt dưới mức virus 9 5 Genome RNA kép trong hạt dưới mức virus 4 8 2 6 mRNA virus 3 7 10 Protein cấu trúc và không cấu trúc Virus mới Hình 3. Các protein này lắp ráp quanh mRNA để tạo hạt dưới mức virus (bước 4). lắp ráp với protein cấu trúc để tạo thành virus mới (bước 10) Chú thích: Bước 1.

76

Virus Retro

1
DNA kép

3

cDNA (đối genome)

2

RNA genome

4
DNA cài xen (provirut)

5

RNA chưa chế biến

6
RNA virus sau chế biến

9

7

7ế 8

Các bản sao DNA kép của virus

Protein cấu trúc, không cấu trúc và protein gây ung thư

Virut mới Hình 3.11. Sơ đồ nhân lên của virus Retro.
Sau khi xâm nhập và cởi vỏ từng phần (bước 1), RNA genome được phiên mã thành cDNA (đối genome), sau đó thành DNA chuỗi kép nhờ enzyme phiên mã ngược (bước 2 và 3). Nhờ enzyme integrase, DNA của virus cài xen vào nhiễm sắc thể tế bào chủ (bước 4). Cả hai loại enzyme trên đều nằm trong lõi của virus. Nhờ RNA polymerase của tế bào, provirus phiên mã tạo RNA (bước 5) là tiền chất của mRNA (bước 6) để tổng hợp protein (bước 7) và lắp ráp tạo virus mới (bước 8).

Câu hỏi ôn tập chương 3
1.Hãy giải thích các thuật ngữ sau đây: capsome, capsid, nucleocapsid, capsid có cấu trúc xoắn, khối đa diện, virus có cấu trúc phức tạp, vỏ ngoài. 2.Virus khác với plasmit và khác với tế bào ở điểm nào. 3.Virus có thể tác động lên tế bào như thế nào ? 4.Nêu các giai đoạn nhân lên của virus.

77

5.Tại sao virus chỉ có thể nhân lên trong các tế bào nhất định ? 6.Trình bày các phương thức xâm nhập của virus vào tế bào chủ. 7.Hãy nêu các loại genome của virus, Thế nào là RNA(+), RNA().Thế nào là genome chồng lớp. 8.Dạng sao chép (RF) khác với genome ở điểm nào ? 9.Tại sao các virus RNA(-) nhất định phải mang theo enzyme RNA polymerase. 10.Hãy tóm tắt quá trình nhân lên của các virus AND đơn, AND kép,RNA(+), RNA(-).

78

Chương 4

Dinh dưỡng, sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật
I. Dinh dưỡng
Trong quá trình sống, tế bào vi sinh vật tiến hành trao đổi chất không ngừng với môi trường chung quanh. Tế bào vi sinh vật tuy rất nhỏ, nhưng vì hấp thu các chất dinh dưỡng và thải ra các sản phẩm trao đổi chất qua toàn bộ bề mặt, cho nên cường độ trao đổi chất của chúng là rất lớn. Các chất dinh dưỡng vào tế bào qua màng và được chuyển hoá để tạo thành những chất riêng biệt cần thiết cho việc xây dựng tế bào. Nhờ quá trình đồng hoá các tế bào mới có thể sinh trưởng, phát triển tăng sinh khối, đồng thời tạo ra các sản phẩm trao đổi chất. Sự biến đổi các chất dinh dưỡng bao gồm nhiều phản ứng hoá sinh khác nhau nhờ hệ enzyme theo con đường trao đổi chất, hoặc tạo ra những chất là thành phần của tế bào (quá trình đồng hoá) hoặc tạo ra năng lượng sinh học cần thiết cho hoạt động sống (quá trình dị hoá). Những chất dinh dưỡng là những hợp chất phân tử nhỏ có thể đi qua màng vào bên trong tế bào vi sinh vật và tham gia vào hai loại phản ứng sinh hoá: - Biến đổi dị hoá làm xuất hiện những sản phẩm có cấu trúc đơn giản hơn. Những biến đổi dị hoá này cung cấp cho vi sinh vật năng lượng chuyển hoá ở dạng ATP hoặc những hợp chất giàu năng lượng khác. Một số những sản phẩm dị hoá được thải đi, một số khác làm vật liệu hoặc làm tiền chất cho các phản ứng đồng hoá. - Biến đổi đồng hoá, đảm bảo sự tổng hợp của thành phần mới có cấu trúc phức tạp hơn và phân tử lượng cao hơn. Quá trình này thường được gọi là đồng hoá hoặc sinh tổng hợp. Điều kiện chủ yếu để sinh tổng hợp các thành phần tế bào vi sinh vật là cung cấp một lượng thích hợp của những hợp chất có phân tử lượng nhỏ, như các acid hữu cơ hoặc amino acid, có thể làm nguyên liệu hay tiền chất cho các phản ứng đồng hoá hay phản ứng sinh tổng hợp. Khi trong môi trường có những hợp chất - vật liệu đó thì vi sinh vật sẽ trực tiếp sử dụng. Nhưng không phải bao giờ trong môi trường cũng có sẵn những hợp chất - vật liệu cần cho quá trình sinh tổng hợp. Muốn có tế bào vi sinh vật bắt buộc phải tự sản xuất lấy bằng cách tự biến đổi những thành phần của môi trường nuôi cấy. Ở những vi sinh vật dị dưỡng sống bằng chất hữu cơ,

79

một số tiền chất được hình thành trong các phản ứng dị hoá, nó sản sinh ra ATP cùng một số lớn các hợp chất khác nhau của carbon. Các chất dinh dưỡng của vi sinh vật chủ yếu lấy ở môi trường xung quanh. Các môi trường dinh dưỡng nhân tạo cần cung cấp đầy đủ năng lượng, các vật liệu xây dựng tế bào và đảm bảo cho hiệu suất sinh tổng hợp cao. Thành phần môi trường gồm có các nguồn ăn carbon, nitơ, chất khoáng, các nguyên tố vi lượng và các chất kích thích sinh trưởng. Việc lựa chọn các nguồn dinh dưỡng và nồng độ của chúng trong môi trường phụ thuộc vào đặc tính sinh lý của từng chủng từng loài vi sinh vật và điều kiện nuôi cấy chúng.

II. Môi trường dinh dưỡng và điều kiện sinh trưởng
1. Môi trường dinh dưỡng 1.1. Nguồn thức ăn carbon Tùy nhóm vi sinh vật mà nguồn carbon được cung cấp có thể là chất vô cơ (CO2, NaHCO3 , CaCO3... ) hoặc chất hữu cơ. Giá trị dinh dưỡng và khả năng hấp thụ các nguồn thức ăn carbon khác nhau phụ thuộc vào thành phần hóa học, tính chất sinh lí của nguồn thức ăn và đặc điểm sinh lí của từng loại vi sinh vật. Hầu như không có hợp chất carbon nào mà không bị hoặc nhóm vi sinh vật này hoặc nhóm vi sinh vật khác phân giải. Không ít vi sinh vật có thể đồng hóa được cả các hợp chất carbon rất bền vững như cao su, chất dẻo, dầu mỏ, parafin, khí tự nhiên. Nhiều chất hữu cơ vì không tan được trong nước hoặc vì có khối lượng phân tử quá lớn cho nên trước khi được hấp thụ, vi sinh vật phải tiết ra các enzyme thủy phân (amylase, cellulase, pectinase, protease, lipase...) để chuyển hóa chúng thành các hợp chất dễ hấp thụ (đường, amino acid, acid béo...). Người ta thường sử dụng đường để làm nguồn thức ăn carbon khi nuôi cấy phần lớn các vi sinh vật dị dưỡng. Để nuôi cấy các loại vi sinh vật khác nhau người ta dùng các nồng độ đường không giống nhau. Với vi khuẩn, xạ khuẩn thường dùng 0,2 - 0,5% đường còn đối với nấm men, nấm sợi thường dùng 3 - 10% đường. Hầu hết vi sinh vật chỉ đồng hóa được các loại đường ở dạng đồng phân D. Nhưng phần lớn các đồng phân của đường đơn trong tự nhiên đều là thuộc loại D. Các hợp chất hữu cơ chứa cả C và N (peptone, nước thịt, nước chiết ngô, nước chiết nấm men, nước chiết đại mạch, nước chiết giá đậu...) có thể sử dụng vừa làm nguồn C vừa làm nguồn N đối với vi sinh

80

vật. Với vi sinh vật dị dưỡng, nguồn thức ăn carbon làm cả hai chức năng, nguồn dinh dưỡng và năng lượng. 1.2. Nguồn dinh dưỡng nitơ (N) Ý nghĩa chủ yếu của các chất dinh dưỡng chứa nitơ đối với vi sinh vật là cung cấp N để tạo thành các nhóm amin (-NH2) và nhóm imin (=NH) trong phân tử amino acid, các nucleotide, purine và pirimidine, trong nhiều vitamin... Nguồn nitơ dễ hấp thụ đối với vi sinh vật là NO3- và NH4+. Muối nitrate là nguồn thức ăn nitơ thích hợp đối với nhiều loại tảo, nấm sợi và xạ khuẩn nhưng ít thích hợp đối với nhiều loại nấm men và vi khuẩn. Sau khi vi sinh vật sử dụng hết gốc NO3- các ion kim loại còn lại (K+, Na+, Mg2+..) sẽ làm kiềm hóa môi trường. Để tránh hiện tượng này người ta thường sử dụng muối NH4NO3 để làm nguồn nitơ cho nhiều loại vi sinh vật. Tuy nhiên gốc NH4+ thường được hấp thụ nhanh hơn gốc NO3-. Vi sinh vật còn có khả năng đồng hóa rất tốt nitơ chứa trong các thức ăn hữu cơ. Các thức ăn này sẽ vừa là nguồn carbon vừa là nguồn nitơ cung cấp cho vi sinh vật. Vi sinh vật không có khả năng hấp thụ trực tiếp các protein cao phân tử. Rất nhiều vi sinh vật có khả năng sản sinh protease thủy phân protein thành các hợp chất phân tử thấp có khả năng xâm nhập vào tế bào vi sinh vật. Nguồn nitơ hữu cơ thường được sử dụng để nuôi cấy vi sinh vật là peptone (là chế phẩm thủy phân không triệt để của một nguồn protein nào đó) chúng khác nhau về lượng chứa các loại polypeptide và lượng chứa amino acid tự do. Ngoài ra phân tử N2 tự do cũng được một nhóm nhỏ vi sinh vật sử dụng gọi là nhóm vi sinh vật cố định nitơ (nitrogen fixing microorrganisms). Chúng có hệ enzyme nitrogenase có thể bẻ gãy nối ba của nitơ phân tử ở điều kiện nhiệt độ và áp suất bình thường. 1.3. Nguồn dinh dưỡng khoáng Khi sử dụng các môi trường thiên nhiên để nuôi cấy vi sinh vật thường không cần thiết bổ sung các nguyên tố khoáng. Trong nguyên liệu dùng để pha chế các môi trường này (khoai tây, nước thịt, sữa, huyết thanh, peptone, giá đậu...) thường có chứa đủ các nguyên tố khoáng cần thiết đối với vi sinh vật. Ngược lại, khi làm các môi trường tổng hợp (dùng nguyên liệu là hóa chất) bắt buộc phải bổ sung đủ các nguyên tố khoáng cần thiết. Những nguyên tố khoáng mà vi sinh vật đòi hỏi phải được cung cấp với liều lượng lớn được gọi là các nguyên tố đại lượng. Còn những

Mg còn có vai trò quan trọng trong việc liên kết các tiểu phần ribosome với nhau. Mg là nguyên tố được vi sinh vật đòi hỏi cung cấp với lượng khá cao. flavin.. ATP. Ca đóng vai trò cầu nối trung gian giữa nhiều thành phần quan trọng của tế bào sống (như giữa ADN và protein trong nhân. . NAD. Ca mặc dầu là nguyên tố ít tham gia vào việc xây dựng nên các chất hữu cơ nhưng nó có vai trò đáng kể trong việc xây dựng các cấu trúc tinh vi của tế bào. giữa các nucleotide với nhau.. các enzyme ôxy hóa khử của chu trình Krebs. ADP. catalase. phosphoprotein.. Việc bổ sung phosphate vào các môi trường dinh dưỡng ngoài tác dụng cung cấp P còn có tác dụng tạo ra tính đệm của môi trường.. Fe là nguyên tố rất cần thiết để giúp vi sinh vật có thể tổng hợp một số enzyme loại porphiryl chứa sắt (như cytochrome.. bacteriochlorophyll).. giữa ARN và protein trong ribosome). Các hợp chất hữu cơ có chứa S ở dạng ôxy hóa thường có tác dụng độc đối với tế bào vi sinh vật. cytochrome oxydase. Mg2+ có thể hoạt hóa các enzyme như hexokinase. ti thể. một số vitamin như thiamine. các enzyme trao đổi protein. peroxydase. cystine.. thiamine.. CTP. NADP... methionine).). cysteine. chúng tham gia nhiều phản ứng enzyme có liên quan đến qúa trình phosphoryl hóa. Trong khi đó các muối sulphate vô cơ với nguyên tử S ở trạng thái ôxy hóa lại được cơ thể vi sinh vật đồng hóa rất tốt. một số vitamin (biotin.81 nguyên tố khoáng mà vi sinh vật chỉ đòi hỏi với những liều lượng rất nhỏ được gọi là các nguyên tố vi lượng.) cysteine. Phosphorus (P) bao giờ cũng chiếm tỉ lệ cao nhất trong số các nguyên tố khoáng của tế bào vi sinh vật (nhiều khi P chiếm đến 50% so với tổng số chất khoáng). Một số vi sinh vật có thể dùng cả thiosulphate làm nguồn thức ăn S.. S có mặt trong một số amino acid (cysteine. nhân. ATP .).ase. phospholipid. cystine và một tripeptide là glutation không chỉ tham gia vào cấu trúc protein mà còn có vai trò quan trọng trong các quá trình ôxy hóa khử. Lưu huỳnh (S) cũng là một nguyên tố khoáng quan trọng trong tế bào vi sinh vật. Để đảm bảo nguồn dinh dưỡng P người ta thường sử dụng các loại muối phosphate vô cơ. Ca rất cần thiết đối với việc hình thành các cấu trúc không gian ổn định của nhiều bào quan như ribosome. Mg mang tính chất một cofactor.. Một số vi sinh vật tự dưỡng quang năng còn sử dụng Fe để tổng hợp ra các sắc tố quang hợp có cấu trúc porphiryl (chlorophyll. CDP. P có mặt trong cấu tạo của nhiều thành phần quan trọng của tế bào (acid nucleic. Một số vi sinh vật khác lại đòi hỏi các thức ăn chứa S ở dạng khử (H2S. cystine. biotin. UTP. UDP... carboxylase.)..

4. K thường tồn tại ở dạng ion K+ ở mặt ngoài của cấu trúc tế bào.. 1. Hầu như không có chất nào là yếu tố sinh trưởng chung đối với tất cả các loài vi sinh vật. Nó chỉ có ý nghĩa là những chất hữu cơ cần thiết đối với hoạt động sống mà một loại vi sinh vật nào đó không tự tổng hợp được từ các chất khác. Những chất được coi là yếu tố sinh trưởng của loài vi sinh vật này hoàn toàn có thể không phải là yếu tố sinh trưởng đối với một loại vi sinh vật khác. trong số đó phải kể đến là K. K là nguyên tố chiếm tỉ lệ khá cao trong thành phần khoáng của tế bào vi sinh vật. vi sinh vật sẽ dần dần tạo ra được khả năng tự tổng hợp yếu tố sinh trưởng mà chúng cần thiết. nhất là các quá trình sinh tổng hợp. Chẳng hạn nấm mốc Mucor rouxii được chứng minh là chỉ cần biotin và . vùng ven biển hoặc trên các loại thực phẩm ướp mặn. phosphatase kiềm . Chính thông qua các ảnh hưởng này mà môi trường sống của từng loại vi sinh vật đã góp phần quyết định nhu cầu của chúng về yếu tố sinh trưởng.. Na và Cl cũng là những nguyên tố mà nhiều vi sinh vật đòi hỏi với một lượng không nhỏ. nhưng cho đến nay người ta chưa tìm thấy K tham gia vào bất kì thành phần nào của nguyên sinh chất. cũng chưa tìm thấy bất kì enzyme nào có chứa K. Đặc điểm của môi trường sống một mặt ảnh hưởng đến khả năng tổng hợp yếu tố sinh trưởng của vi sinh vật. nhưng cho tới nay người ta vẫn còn biết rất ít vai trò sinh lí của chúng.82 Zn cũng là một cofactor tham gia vào nhiều quá trình enzyme. Yếu tố sinh trưởng Đối với vi sinh vật thì yếu tố sinh trưởng là một khái niệm rất linh động. Cũng có một số nguyên tố hóa học chúng ta chưa hiểu rõ về vai trò sinh lí của chúng. Khi sống lâu dài trong các môi trường thiếu yếu tố sinh trưởng. enolase. Zn có tác dụng đáng kể trong việc hoạt hóa các enzyme như carbonanhydrase. mặt khác ảnh hưởng đến đặc điểm trao đổi chất của chúng. Cùng một loài vi sinh vật nhưng nếu nuôi cấy trong các điều kiện khác nhau cũng có thể có những nhu cầu khác nhau về yếu tố sinh trưởng. đất. K làm tăng độ ngậm nước của các hệ thống keo do đó ảnh hưởng đến các quá trình trao đổi chất. Hàm lượng Na và Cl đặc biệt cao trong tế bào vi sinh vật ưa mặn sống trong nước biển. K còn có thể tham gia vào quá trình tổng hợp một số vitamin và có ảnh hưởng đến quá trình hô hấp của tế bào vi sinh vật. pyrophosphatase. Một phần đáng kể K tồn tại ở trạng thái liên kết hóa lí không bền với protein và các thành phần khác của nguyên sinh chất.

) và yếu tố sinh học (chất kháng sinh. Cơ chế tác dụng của các yếu tố bên ngoài lên vi sinh vật Các yếu tố của môi trường bên ngoài tác dụng lên tế bào thuộc ba loại là yếu tố vật lí (độ ẩm. yếu tố hóa học (pH môi trường. Dù là yếu tố nào nhưng khi đã tác dụng bất lợi lên tế bào thì thường trước hết gây tổn hại đến các cấu trúc quan trọng cho sự sống của tế bào. Những tổn hại đó dẫn đến phá hủy chức phận hoạt động của các cấu trúc và làm chết tế bào.. tia bức xạ.) có khả . Người ta đã sử dụng thành công một số loài vi sinh vật để sản xuất ở quy mô công nghiệp một số loại vitamin tinh khiết dùng trong y học.). Mặt khác. Các điều kiện này bao gồm hàng loạt các yếu tố khác nhau. Điều kiện sinh trưởng Sinh trưởng và trao đổi chất của vi sinh vật liên quan chặt chẽ với các điều kiện của môi trường bên ngoài. áp lực. thế ôxy hóa khử. bạch cầu. Chẳng hạn việc đòi hỏi acid pantotenic của một số vi sinh vật (ví dụ vi khuẩn bạch hầu Corynebacterium diphtheriae) có thể thỏa mãn khi chỉ cần cung cấp cho chúng β . Khi nuôi cấy trong điều kiện hiếu khí.1. kháng thể).83 thiamine khi phát triển trong điều kiện kị khí.. các vitamin thông thường.alanine.. Chừng nào tế bào vi sinh vật có thể sống sót chính là do chúng đã thích ứng với yếu tố đã cho bằng những thay đổi về sinh lí hoặc di truyền. tác động qua lại với nhau. tối thích và cực đại. Phá hủy thành tế bào: một số chất như enzyme lysozyme (chứa trong lá lách. lòng trắng trứng. nhiệt độ. Đáng chú ý nhất là acid ascorbic (vitamin C)... riboflavin (vitamin B2)..alanine). các chất diệt khuẩn. chúng có thể tự tổng hợp được acid pantoic (acid pantotenic cấu tạo từ acid pantoic và β . nhiều loài vi sinh vật có khả năng tổng hợp vitamin. đuôi thực khuẩn thể. pirimidine và các dẫn xuất của chúng. 2. các acid béo và thành phần của màng tế bào. Sinh khối vi sinh vật thường chứa hầu hết các loại vitamin chủ yếu với những hàm lượng khá cao. Sự có mặt của một số chất dinh dưỡng khác có khi cũng ảnh hưởng đến nhu cầu về yếu tố sinh trưởng của vi sinh vật. Thông thường các chất được coi là yếu tố sinh trưởng đối với một loài nào đó có thể thuộc về một trong các loại sau đây: các gốc kiềm purine. 2. cyanocobalamin (vitamin B12). chúng sẽ tự tổng hợp ra được yếu tố sinh trưởng này. Tác dụng có hại của các yếu tố bên ngoài tế bào thể hiện chủ yếu ở những biến đổi sau đây: 1... Đa số các yếu tố đó đều có một đặc tính tác dụng chung biểu hiện ở ba điểm hoạt động là tối thiểu.

nhưng vẫn gây tác dụng kháng khuẩn.) là do ảnh hưởng của chúng lên các thành phần của màng tế bào chất. 2. Nếu làm lạnh tế bào đồng thời làm khô trong chân không ta có thể bảo quản được sức .. 3. Cơ chế tác dụng của các chất kháng chất trao đổi không giống nhau. chất này sẽ làm vi khuẩn mất khả năng sinh sản. gọi là các chất kháng chất trao đổi (antimetabolism). dễ hấp thụ.84 năng phân huỷ thành tế bào vi khuẩn dẫn đến tạo thành các nguyên lạp chủ yếu ở vi khuẩn Gram dương và các cầu lạp ở vi khuẩn Gram âm. các halogen . fluoride ngăn cản quá trình đường phân.Thay đổi đặc tính keo của nguyên sinh chất: các yếu tố vật lí cũng như hóa học đều có thể gây nên tác dụng này.. trong trường hợp như vậy. Các nhân tố ảnh hưởng * Các yếu tố vật lí . 2.Độ ẩm: hầu hết các quá trình sống của vi sinh vật có liên quan đến nước. Cũng có thể xếp vào nhóm các hợp chất này là rượu. dinitrophenol kìm hãm quá trình phosphoryl hoá ôxy hóa. cyanite kìm hãm cytochrome . do đó độ ẩm là một yếu tố quan trọng của môi trường. Các enzyme khác có thể bị bất hoạt khi liên kết với các yếu tố kim loại như thủy ngân. Chẳng hạn nhiệt độ cao làm biến tính protein và làm chúng đông tụ do khả năng khử nước. Chỉ một số xạ khuẩn có thể xếp vào bọn ưa khô. Kìm hãm hoạt tính: một số chất tác động vào các hệ thống sinh năng lượng của tế bào.oxydase. các hợp chất hoá trị ba của acsenic bao vây chu trình Krebs. hàng rào thẩm thấu tồn tại trong màng tế bào chất đã bị hư hại.2. Đa số vi khuẩn thuộc các sinh vật ưa nước nghĩa là chúng cần nước ở dạng tự do. phenol. quá trình sinh tổng hợp có thể bị ức chế. halogen) phá hủy các hệ thống tế bào làm tổn hại đến chức phận trao đổi chất. Tác dụng kháng khuẩn của các chất ôxy hóa và các chất khử (H2O2. Rất có thể. Hủy hoại các quá trình tổng hợp: trong sự có mặt của một số chất tương tự về mặt cấu trúc với các chất trao đổi tự nhiên. 5. 4. một số khác có thể tham gia vào phản ứng enzyme và được lắp vào sản phẩm của phản ứng nhưng sau đó không được sử dụng trong trao đổi chất với cùng mức độ như trong trường hợp của cơ chất thực. các muối mật và một số kháng sinh (polymyxin. các chất tẩy rửa tổng hợp. Các chất ôxy hóa mạnh (H2O2. Một số gắn với trung tâm hoạt động của enzyme làm cho enzyme mất hoạt tính phân hủy cơ chất. Do tác dụng lên một hoặc một chức phận sinh lí của màng tế bào. Biến đổi tính thấm của màng tế bào chất: một số chất không nhất thiết phải xâm nhập tế bào. thyroxydin. nistatin).

ta gọi . Đây là nguyên tắc của phương pháp làm đông khô vi khuẩn. hoa quả (làm mứt) vì đa số vi sinh vật rất mẫn cảm với thẩm áp cao của môi trường. Các enzyme hô hấp đặc biệt là các enzyme trong chu trình Krebs rất mẫn cảm với nhiệt độ. bị co sinh chất và có thể bị chết nếu thời gian kéo dài. Vì các phản ứng này thuộc phụ thuộc chặt chẽ vào nhiệt độ nên yếu tố nhiệt rõ ràng ảnh hưởng sâu sắc đến các quá trình sống của tế bào. Do vi khuẩn cần độ ẩm nhất định để sinh trưởng nên bằng cách phơi khô hoặc sấy khô ta có thể bảo quản được lâu dài nhiều loài sản phẩm (hoa quả khô. cà. nồng độ muối cao hơn có hại cho tế bào. Hầu hết tế bào sinh dưỡng của vi sinh vật bị chết ở nhiệt độ cao do protein bị biến tính. hoạt động của vi sinh vật bị giới hạn trong môi trường chứa nước ở dạng có thể hấp thụ. Ngược lại. . Màng tế bào chất của tế bào vi khuẩn là bán thấm do đó các hiện tượng thẩm thấu và việc điều chỉnh thẩm áp qua các hệ thống permease đều có liên quan đến màng này. Vùng này của nước nằm từ 2oC đến khoảng 100oC gọi là vùng sinh động học.80%) để bảo quản thực phẩm (muối dưa.15%) hoặc đường cao (50. ruốc thịt khô). tế bào chịu trạng thái khô sinh lí. do có thành tế bào cứng ở vi khuẩn không xảy ra ra hiện tượng vỡ sinh chất như ở tế bào thưc vật. Đa số vi khuẩn sinh trưởng tốt trong môi trường chứa ít hơn 2% muối. cá. Trong môi trường ưu trương tế bào mất khả năng rút nước và các chất dinh dưỡng hòa tan bao quanh. áp lực bên trong sẽ tăng lên.Áp lực: áp suất thẩm thấu và áp suất thủy tĩnh có thể ảnh hưởng đến cấu trúc của tế bào vi khuẩn. Nhưng cũng có một số vi khuẩn lại sinh trưởng tốt nhất trong môi trường chứa tới 30% muối. Sự chết của vi khuẩn ở nhiệt độ cao cũng có thể còn là hậu quả của sự bất hoạt hóa ARN và sự phá hoại màng tế bào chất (nói chung.85 sống của tế bào trong một thời gian dài. các acid nucleic ít mẫn cảm với nhiệt độ so với các enzyme). Trong thực tế người ta ứng dụng tác dụng co sinh chất của các nồng độ muối cao (10 . . Tuy nhiên. Nhiệt độ thấp (dưới vùng sinh động học) có thể làm bất hoạt quá trình vận chuyển các chất hòa tan qua màng tế bào chất do thay đổi cấu hình không gian của một số permease chứa trong màng hoặc ảnh hưởng đến việc hình thành và tiêu thụ ATP cần cho quá trình vận chuyển chủ động các chất dinh dưỡng.Nhiệt độ: hoạt động trao đổi chất của vi sinh vật có thể coi là kết quả của các phản ứng hóa học. khi vi khuẩn vào dung dịch nhược trương nước sẽ xâm nhập tế bào. Như đã nói trên. một hoặc hàng loạt enzyme bị bất hoạt. ướp thịt cá).

Cho nên việc xác định pH thích hợp ban đầu và duy trì pH cần thiết trong thời gian sinh trưởng của tế bào là rất quan trọng. Ánh sáng mặt trời có thể gián tiếp tác động lên tế bào do làm biến đổi môi trường. Tuỳ thuộc vào nhu cầu đối với ôxy mà người ta . * Các yếu tố hóa học .4). những biến đổi dù nhỏ trong nồng độ của chúng cũng có tác động mạnh mẽ. Các giá trị pH (cực tiểu. Acetobacter. tia X. xạ khuẩn. . một số khác ưa acid như Acetobacter acidophilus. các tế bào sinh dưỡng bị chết nhanh chóng. Nấm mốc và nấm men ưa pH acid (pH 4 . tia gamma và tia vũ trụ.Ảnh hưởng của pH môi trường: pH của môi trường có ý nghĩa quyết định đối với sinh trưởng của nhiều vi sinh vật. đây là vùng hấp thụ cực đại của acid nucleic và nucleoprotein gây dimer hóa thimine. Nhiều vi khuẩn ở biển thuộc nhóm này. Tia tử ngoại có tác dụng mạnh nhất ở bước sóng 260nm.là hai ion hoạt động lớn nhất trong tất cả các ion.6). pH môi trường không những ảnh hưởng mạnh mẽ đến sinh trưởng mà còn tác động sâu sắc đến các quá trình trao đổi chất.Các tia bức xạ: ánh sáng có thể gây ra những biến đổi và do đó có thể gây tổn thương sinh học nếu được tế bào hấp thụ. Các tia có thể gây những biến đổi hóa học là ánh sáng mặt trời. tia tử ngoại. đặc biệt trong vùng siêu âm (trên 20 kHz) có ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng của vi khuẩn. cực đại) cần cho sinh trưởng và sinh sản của vi khuẩn tương ứng với các giá trị pH trung bình cần cho hoạt động của nhiều enzyme. tối thích. nếu đưa vi khuẩn ra ánh sáng ban ngày thì vi khuẩn có thể phục hồi khả năng sinh trưởng và phân chia.Ảnh hưởng của ôxy: ôxy có vai trò hết sức quan trọng trong hoạt động sống của vi sinh vật. Thiobacillus thiooxydans (ôxy hóa lưu huỳnh thành H2SO4) có thể sinh trưởng ở pH <1. dẫn đến ức chế sự nhân đôi của ADN. Một số vi khuẩn chịu acid (vi khuẩn lactic. Các vi khuẩn nitrate hóa. Nhưng sau khi chiếu tia tử ngoại. Giới hạn pH hoạt động đối với vi sinh vật ở trong khoảng 4 . vi khuẩn phân giải urea lại ưa môi trường hơi kiềm. chúng không có khả năng phát triển ở những nồng độ đường cao.Âm thanh: sóng âm thanh. .10.0) như nhiều vi khuẩn gây bệnh (môi trường tự nhiên là máu và bạch huyết của cơ thể động vật có pH khoảng 7. Mức độ gây hại tùy thuộc vào mức năng lượng trong lượng tử ánh sáng được hấp thụ. Đa số vi khuẩn sinh trưởng tốt nhất ở pH trung tính (7. Hiện tượng này gọi là quang tái hoạt (photoreactivation).86 là các vi khuẩn ưa muối (halophilic). vi khuẩn nốt sần. . Các ion H+ và OH. Sarcina ventriculi).

E.87 chia vi sinh vật thành các nhóm sau: + Hiếu khí bắt buộc: thuộc nhóm này là các vi sinh vật chỉ có thể sinh trưởng được khi có mặt ôxy phân tử (O2). khi có ôxy chúng sinh trưởng tốt hơn. Veillonella. quá trình phosphoryl hoá quang hợp. Fusobacterium. chiếc xuất từ thực vật. phần lớn không có hydrogenperoxidase.. dùng O2 làm thể nhận hydro cuối cùng. Butyrivibrio.. Trong tế bào của các vi sinh vật này không có SOD. xà phòng. Proteus vulgaris. + Hiếu khí không bắt buộc: thuộc nhóm này là các vi sinh vật có thể sinh trưởng được cả trong điều kiện có ôxy lẫn không có ôxy. Trong các tế bào có chứa enzyme SOD (superoxid dismutase). Có thể kể đến các loài như Saccharomyces cerevisiae. coli.. Có thể kể đến rất nhiều loài trong các chi Clostridium. nơi không có ôxy. có các quá trình lên men.. Chúng không sinh trưởng được trên môi trường đặc hoặc bán đặc khi để trong không khí hay trong không khí có chứa khoảng 10% CO2.và O2. . * Các yếu tố sinh học Trong các yếu tố sinh học ảnh hưởng có hại lên các quá trình sống của vi sinh vật cần kể đến kháng thể và kháng sinh. Có thể kể đến các loài như Vibrio cholerae. Enterobacter aerogenes. Tuyệt đại đa số vi nấm và số đông vi khuẩn thuộc nhóm này. Phần lớn nấm men và nhiều vi khuẩn thuộc nhóm này. quá trình methane hoá.. Chất kháng sinh có thể có từ nhiều nguồn gốc khác nhau như tổng hợp hoá học. Hydrogenomonas spp. halogen. Trong tế bào có chứa SOD và peroxidase. cytochrome-oxidase. alkol. Chúng cũng thông qua chuỗi hô hấp và dùng ôxy làm thể nhận hydro cuối cùng. . động vật nhưng chủ yếu là được tổng hợp từ vi sinh vật. kim loại nặng. Zymononas spp. thuốc nhuộm và các chất tẩy rửa tổng hợp của các muối ammon bậc bốn. Chúng chỉ sinh trưởng được ở lớp thể dịch sâu. H2O. Bacteroides spp. + Kỵ khí: với các vi sinh vật thuộc nhóm này sự có mặt của ôxy phân tử là có hại. chúng có chuỗi hô hấp hoàn chỉnh.để giải độc cho tế bào. catalase và peroxidase có tác dụng chuyển hoá các gốc O22. + Vi hiếu khí: thuộc nhóm này là các vi sinh vật chỉ có thể sinh trưởng được ở điều kiện áp lực ôxy rất thấp.. Desulfovibrio.Các chất diệt khuẩn (sát trùng): thường sử dụng là phenol và các dẫn xuất của phenol. Đây là các chất đặc hiệu mà ở nồng độ thấp cũng có khả năng ức chế hoặc tiêu diệt vi sinh vật một cách chọn lọc.

sử dụng ánh sáng làm nguồn năng lượng và hợp chất hữu cơ làm nguồn carbon. Thiosulfatophilum. là những vi khuẩn quang dưỡng hữu cơ. Những vi khuẩn này thiên về vi hiếu khí. Anabaena. không có khả năng phát triển với H2S là chất cho electron độc nhất. S2O32-.Các vi khuẩn quang dị dưỡng (photoheterotrophic) hay quang dưỡng hữu cơ (photoorganotrophic)..Các cơ thể quang tự dưỡng (photoautotrophic) hay quang dưỡng vô cơ (photolithotrophic) có thể chuyển năng lượng ánh sáng thành năng lượng trao đổi chất (ATP) và chất có tính khử (NADPH2).. Các vi khuẩn lưu huỳnh màu tía thuộc bộ Thiorhodobacteriales như Chromatium. những vi khuẩn này có khả năng phát triển trên môi trường muối vô cơ như nhiều loại cây xanh.Các cơ thể hóa dị dưỡng (Chemoheterotrophic) hay hóa dưỡng hữu cơ (Chemoorganotrophic) bao gồm các vi khuẩn.làm chất cho điện tử.. có khả năng liên kết đặc hiệu với các kháng nguyên để làm mất hoạt lực của kháng nguyên (xem thêm phần kháng sinh và miễn dịch ). đây là những vi khuẩn kị khí quang dưỡng vô cơ khi có mặt trong môi trường S hoặc H2S. . các loài thuộc giống Rhodospirillum. vi nấm. đây là những vi khuẩn quang dưỡng vô cơ kị khí với H2S hoặc S2O32.). Thiobacillus ôxy hóa các hợp chất khử của lưu huỳnh. Nitrosomonas ôxy hóa NH3. họ Athiorhodaceae.. NO2-. Chúng hình thành một nhóm rất hạn chế tham gia vào các chu trình vật chất sống ở trong đất và nước như Hydrogenomonas ôxy hóa hydro. chất cho electron của chúng là acetate. động vật nguyên . Fe2+. Các tảo đơn bào quang hợp không thải ôxy như các vi khuẩn lục thuộc họ Chlorobacteriaceae (Chlorobium.. . Nitrobacter ôxy hóa nitrite.88 Kháng thể là những chất có sẵn trong máu hoặc được xuất hiện khi có kháng nguyên xâm nhập vào cơ thể. III. succinate hay hydro. Năng lượng có được là nhờ ôxy hóa các hợp chất vô cơ như NH4+. đại diện là các loài vi khuẩn lam (Spirulina. . Có thể gặp những vi khuẩn quang hợp thải ôxy giống như cây xanh. H2. H2O hay H2S là chất cho điện tử. CO2 là nguồn carbon chủ yếu.. như các vi khuẩn màu tía không lưu huỳnh thuộc bộ Athiorhodobacteriales.Các vi khuẩn hóa dưỡng vô cơ (Chemolithotrophic) hay hóa tự dưỡng (Chemoautotrophic) sử dụng năng lượng được tạo thành từ các phản ứng hóa học và CO2 làm nguồn carbon. S. Các kiểu dinh dưỡng của vi sinh vật Căn cứ vào dạng năng lượng sử dụng người ta có thể chia làm các loại vi sinh vật: . Nostoc…). H2S.

các vi khuẩn tạp nhiễm vào thức ăn. muốn đánh giá sản lượng tế bào thì cần sinh khối tươi hoặc khô sau khi đã li tâm tế bào.. 2. các vi khuẩn được sử dụng trong công nghiệp để tổng hợp các chất kháng sinh. Xác định hàm lượng nitơ tổng số (phương pháp Kjelhdal) hay hàm lượng carbon tổng số (theo Vslike-Folch). đây là phương pháp rất thuận lợi. Có thế dùng phương pháp buire cải tiến hoặc phương pháp so màu khác. người ta lại tính hàm lượng protein hoặc nitơ. Sinh lí học của sự sinh trưởng 1.. Các phương pháp xác định số lượng và sinh khối vi khuẩn 1. IV. các loại vitamin. Chẳng hạn. động vật. 2. . Trong thực tế người ta thường xác định hàm lượng protein của vi khuẩn. Trong thực tế ta thường đo mật độ quang học của dịch treo. Đo độ đục của dịch treo tế bào. tạo thành CO2 hay acid. Các phương pháp trực tiếp gồm có: 1. các phương pháp này cho độ chính xác cao. Các phương pháp vi lượng dựa vào việc đo số lượng các thành phần đặc trưng của protein như threonine.1. ví dụ khi mật độ sinh khối rất nhỏ. tryptophan (theo Lowry hoặc FolinCiocalteu) cũng cho kết quả tốt. * Các phương pháp gián tiếp để đo sinh khối vi khuẩn: 1.89 sinh. Dĩ nhiên ta chỉ dùng các phương pháp này trong trường hợp không sử dụng được các phương pháp khác. muốn xác định cường độ trao đổi chất hay hoạt tính enzyme. Có thể nói xác định hàm lượng protein trong sinh khối là phương pháp thích hợp nhất vì một mặt protein là thành phần chủ yếu của chất khô. trong thực tế có thế sử dụng các phương pháp trực tiếp hoặc gián tiếp. các amino acid. Xác định sinh khối tươi hoặc sinh khối khô (phương pháp này kém chính xác). vì các chỉ số này liên quan trực tiếp với sinh trưởng. 3. trong một số trường hợp người ta cũng xác định sự khuếch tán ánh sáng. Xác định sinh khối vi khuẩn Việc chọn phương pháp để xác định sinh khối vi khuẩn tùy thuộc vào mục đính nghiên cứu. mặt khác đó là những thành phần hoạt động trong sinh khối (hầu hết protein của tế bào là enzyme). Một nhóm lớn các vi khuẩn hóa dưỡng hữu cơ là những vi sinh vật gây bệnh rất được chú ý trong Y học. Như vậy. chúng sử dụng năng lượng hóa học và một cơ chất hữu cơ làm nguồn carbon chủ yếu. Đo các chỉ số cường độ trao đổi chất như hấp thụ O2.

Sinh trưởng lũy thừa và thời gian thế hệ Sinh trưởng và phát triển là thuộc tính cơ sở của vi sinh vật. vi khuẩn tuy còn phân chia 1 . Tất nhiên điều này không đúng đối với các vi khuẩn mọc thành chuỗi. Xác định số lượng tế bào Trong trường hợp xác định số lượng tế bào sống người ta thường đếm số khuẩn lạc tạo thành bởi các vi khuẩn sống trong điều kiện sinh trưởng thuận lợi. sinh khối vi khuẩn tăng lên. Sau khi nuôi cấy người ta đếm số khuẩn lạc mọc lên. việc nghiên cứu một cá thể tế bào vi khuẩn quá nhỏ là rất khó. Tế bào mọc thành khuẩn lạc trên môi trường này không nhất thiết cũng cho xuất hiện khuẩn lạc trên môi trường khác. Với một số loại vi khuẩn khó phát triển trên môi trường thạch người ta có thể kiểm tra số lượng bằng phương pháp pha loãng liên tiếp sau đó cấy từ mỗi độ pha loãng 1ml vào từng ống đựng môi trường chỉ thị (nếu có 1 vi khuẩn đưa vào cũng đủ cho phản ứng dương tính sau khi nuôi cấy). nhưng số tế bào không thay đổi. Tuy nhiên sự tăng số lượng tế bào không phải bao giờ cũng diễn ra song song với sự tăng sinh khối. ngược lại. thành đôi hay thành đám hoặc đối với các dịch treo vi khuẩn không đồng nhất.2 lần nhưng cho 2 . vào cuối pha logarid kích thước tế bào giảm đi nhưng số tế bào vẫn còn tăng. Điều cần chú ý là khi nói về sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn tức là đề cập đến sinh trưởng và phát triển của một số lượng lớn tế bào của cùng một loại. Bởi vì. Dịch treo vi khuẩn được pha loãng và một thể tích nhất định được đưa lên môi trường thạch trong hộp Petri.90 1.4 tế bào nhỏ hơn tế bào bình thường. . trong pha mở đầu. còn phát triển (sinh sản) là sự tăng số lượng tế bào. Nếu giả dụ rằng mỗi tế bào tạo thành một khuẩn lạc thì đếm số khuẩn lạc ta sẽ đếm được số tế bào sống. khi chất dinh dưỡng trong môi trường đã cạn. Phương pháp này gọi là phương pháp số lượng có khả năng nhất (MPN = Most Probable Number). Chẳng hạn. 2.2. Hoặc có thể lọc mẫu qua màng lọc vi khuẩn rồi đặt màng lọc lên đĩa môi trường thạch để kiểm tra số khuẩn lạc mọc và suy ra mật độ vi sinh vật trong mẫu. Nếu kích thước của tế bào khá lớn có thể đếm trực tiếp trên phòng đếm (thường hay dùng các loại phòng đếm Thomas hay Goriaev). Sinh trưởng là sự tăng kích thước và khối lượng tế bào. Số khuẩn lạc cũng rất phụ thuộc vào thành phần môi trường. Có thể cấy vào 5 ống và lấy số liệu ở 3 độ pha loãng cuối (có phản ứng dương tính) rồi tra bảng để tìm ra số lượng gần đúng mật độ vi khuẩn.

protein. ARN.91 Giả sử trong một bình kín chứa một lượng lớn môi trường dinh dưỡng. Nếu thành phần môi trường hoàn toàn phù hợp với nhu cầu của tế bào vi khuẩn sẽ sinh trưởng.. khoảng thời gian giữa 2 lần phân chia liên tiếp (hoặc thời gian cần cho việc phân đôi tế bào) gọi là thời gian thế hệ và được biểu thị bằng g: (t − t1 ). Giá trị đảo nghịch của thời gian thế hệ hay là số lần phân chia sau một đơn vị thời gian (tức sau 1 giờ) gọi là hằng số tốc độ phân chia C: C= log N − log N0 n = (t2 − t1 ).) cho đến khi kích thước lớn gấp đôi và vi khuẩn sẽphân chia cho 2 tế bào. 16 tế bào… Nếu số tế bào ban đầu không phải là 1 mà là No thì sau n lần phân chia ta sẽ có số tế bào tổng cộng là N : N = N0 .2ct (6) Hằng số tốc độ phân chia C phụ thuộc vào một số điều kiện: loài vi khuẩn. tăng khối lượng và thể tích. Từ công thức (4) ta có: n = ct (5) Thay giá trị của n vào phương trình (1) ta có: N = N0. log2 ⇒ n= log(N − No) log2 (2) Giả sử vi khuẩn phân chia n lần sau thời gian t.log2 t (4) Rõ ràng thời gian thế hệ càng ngắn. vi khuẩn sinh trưởng và sinh sản càng nhanh. 2n (1) Các giá trị N và N0 có thể xác định nhờ phòng đếm hoặc tính số khuẩn lạc mọc trên môi trường đặc. ta cấy vào đó một tế bào vi khuẩn. tổng hợp các thành phần của tế bào (thành tế bào. Hai tế bào này lại tiếp tục sinh trưởng và phân chia để cho 4.log 2 t g= = (3) log N − log N 0 n Ở đây t = t2 – t1 biểu thị sự sai khác giữa thời gian đầu (t1) và thời gian cuối (t2) tính bằng giờ. ADN. 8. Sinh trưởng của vi khuẩn trong nuôi tĩnh .. 3. môi trường nuôi cấy. nhiệt độ nuôi cấy. màng tế bào chất. Còn giá trị n (số thế hệ) có thể tính nhờ logarid thập phân: logN = logN0 + n.

trước hết là các cao phân tử (protein. .. Độ dài của pha lag phụ thuộc trước hết vào tuổi của ống giống và thành phần môi trường. Trong pha lag diễn ra việc xây dựng lại các tế bào nghỉ thành các tế bào sinh trưởng logarid (hoặc sinh trưởng theo lũy thừa). enzyme. Thông thường tế bào càng già thì pha lag càng dài. Trong pha lag vi khuẩn chưa phân chia (nghĩa là chưa có khả năng sinh sản) nhưng thể tích và khối lượng tế bào tăng lên rõ rệt do quá trình tổng hợp các chất. Rõ ràng nguyên nhân của pha lag là sự khác biệt giữa các tế bào ở pha ổn định (hoặc bào tử) với các tế bào đang sinh trưởng logarid. acid nucleic.1 Đường cong sinh trưởng của vi khuẩn Quá trình sinh trưởng của tế bào vi sinh vật trong hệ kín trải qua các giai đoạn : * Pha lag (pha mở đầu = pha tiềm tàng) Pha này tính từ lúc bắt đầu nuôi cấy đến khi vi khuẩn đạt được tốc độ sinh trưởng cực đại..) diễn ra mạnh mẽ. Sự sinh trưởng trong một “hệ thống đóng” hay “hệ kín” như vậy tuân theo những quy luật bắt buộc không những đối với các cơ thể đơn bào mà cả đối với các cơ thể đa bào.1). Pha ổn định 12 10 lo g N 8 Pha tử vong Pha logarid 6 Pha lag 4 0 2 4 6 8 t( h ) Hình 4.1 Quá trình sinh trưởng Nuôi cấy tĩnh là phương pháp nuôi cấy mà trong suốt thời gian đó ta không thêm vào chất dinh dưỡng cũng không loại bỏ đi các sản phẩm cuối cùng của trao đổi chất (quần thể tế bào bị giới hạn trong một khoảng không gian nhất định). Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của logarid số lượng tế bào theo thời gian gọi là đường cong sinh trưởng (hình 4.92 3.

coli trong môi trường hỗn hợp glucose . Khi sinh trưởng tế bào sẽ đồng hóa trước tiên nguồn carbon nào mà chúng “ưa thích” nhất.2 Đường cong sinh trưởng kép E. Nếu khi cấy chuyển vi khuẩn từ môi trường nước thịt sang môi trường chứa muối ammon hoặc nitrate thì pha lag sẽ biểu hiện. Các enzyme mới này được tổng hợp nhờ sự cảm ứng của các cơ chất mới. sự thích ứng đó có liên quan đến việc tổng hợp các enzyme mới mà trước đây tế bào chưa cần. Chỉ sau khi nguồn carbon thứ nhất đã cạn thì nguồn carbon thứ hai mới có thể cảm ứng tổng hợp nên các enzyme cần trong việc chuyển hóa nó.glucose sang môi trường khoáng . Chẳng hạn Aerobacter aerogenes có thể sử dụng nguồn nitơ là amino acid. .2). muối ammon và nitrate.maltose ta sẽ thấy xuất hiện pha lag. đây là thời gian cần cho việc hình thành enzyme maltase (αglucozidase).93 Khi chuyển các tế bào đang sinh trưởng logarid vào môi trường mới khác với môi trường trước đó ta vẫn thấy có sự xuất hiện pha lag. Hình 4. Sau khi kết thúc pha log thứ nhất tế bào lại mở đầu pha lag thứ hai và tiếp tục pha log thứ hai (hình 4. Đặc trưng của hiện tượng sinh trưởng kép là đường cong sinh trưởng gồm hai pha lag và hai pha log. Hiện tượng sinh trưởng kép không chỉ hạn chế ở các nguồn carbon và năng lượng mà thấy ở các nguồn nitơ và phôtpho.sorbitol (bên trái) Aerobacter aerogenes trong môi trường hỗn hợp muối ammon và Hiện tượng sinh trưởng kép thường gặp khi nuôi cấy vi khuẩn trong môi trường chứa nguồn carbon gồm một hỗn hợp của hai chất hữu cơ khác nhau. Đồng thời cơ chất thứ nhất này đã kìm hãm các enzyme cần cho việc đồng hóa cơ chất thứ hai. Nguyên nhân của pha lag trong trường hợp này chính là sự thích ứng của vi khuẩn với điều kiện nuôi cấy mới. Ví dụ: Nếu chuyển các tế bào đang sinh trưởng logarid từ môi trường khoáng .

Nguyên nhân thứ nhất rất phức tạp và khó phân tích. * Pha ổn định (pha cân bằng) Trong pha này quần thể vi khuẩn ở trạng thái cân bằng động học. thành phần hóa học. Nguyên nhân của pha tử vong chưa thật rõ ràng. Sinh trưởng kép là hiện tượng phổ biến và có thể giải thích bằng cơ chế kiềm chế nói chung và đặc biệt bằng hiệu ứng glucose..2ct hay X= Xo. Đôi khi các tế bào bị tự phân nhờ các enzyme của bản thân.94 Nếu từ môi trường nước thịt sang môi trường chứa hỗn hợp cả hai loại muối sẽ thấy có hiện tượng sinh trưởng kép. Thực ra chưa có một qui luật chung cho pha tử vong. Cho nên khi giảm nồng độ cơ chất (trước khi cơ chất bị cạn hoàn toàn) tốc độ sinh trưởng của vi khuẩn cũng giảm. nguyên nhân thứ hai đã được nghiên cứu kĩ hơn. Sự chết của tế bào có thể nhanh hay chậm. Do đó việc chuyển từ pha log sang pha ổn định diễn ra dần dần. acid hữu cơ) và việc cạn chất dinh dưỡng (thường là chất dinh dưỡng có nồng độ thấp nhất). Do sức sống lớn bào tử bị chết chậm nhất (trong những điều kiện thích hợp như khô và nhiệt độ thấp bào tử có thể có khả năng sống vài trăm năm). Nguyên nhân tồn tại của pha ổn định rõ ràng là do sự tích lũy sản phẩm độc của trao đổi cơ chất (các loại rượu. * Pha tử vong Trong pha này số lượng tế bào có khả năng sống giảm theo lũy thừa (mặc dù số lượng tế bào tổng cộng có thể không giảm). số tế bào mới sinh ra bằng số tế bào cũ chết đi. Ở các vi khuẩn sinh bào tử quá trình phức tạp hơn do sự hình thành bào tử. nghĩa là sinh khối và số lượng tế bào tăng theo phương trình: N = No.eut Kích thước của tế bào. Chỉ sau khi hết muối ammon trong môi trường thì muối nitrate mới được sử dụng. Tốc độ sinh trưởng phụ thuộc vào nồng độ cơ chất. hoạt tính sinh lý. có liên quan đến sự tự phân hay không tự phân. * Pha logarid (pha log) Trong pha này vi khuẩn sinh trưởng và phát triển theo lũy thừa. Các ion NH4+ được đồng hoá trước đồng thời kiềm chế việc tổng hợp cảm ứng enzyme nitrate reductase.. nói chung không thay đổi theo thời gian. Tế bào ở trạng thái động học và được coi như là “những tế bào tiêu chuẩn”. nhưng có liên . Kết quả là số tế bào sống không tăng cũng không giảm.

Tốc độ tử vong của tế bào có liên quan trực tiếp đến thực tiễn vi sinh vật học và kĩ thuật. Ngoài chức phận xúc tác một số quá trình tổng hợp những enzyme nói trên chủ yếu xúc tác cho quá trình phân giải. Nồng độ chất dinh dưỡng thấp dưới mức cần thiết cho hậu quả làm giảm hoạt tính trao đổi chất.X0 Tỷ số giữa sản lượng tế bào (X) với lượng cơ chất đã được dùng (S) (tính bằng đơn vị trọng lượng) gọi là hệ số kinh tế (Y). nhưng tất cả đều nhằm làm giảm trao đổi chất đến tối thiểu chủ yếu bằng cách giảm nhiệt độ và độ ẩm 4. tính chất của các sản phẩm trao đổi chất tích lũy lại cũng ảnh hưởng đến tiến trình của pha tử vong. decarboxylase. với sản lượng cao). các amylase và protease ngoại bào. amino acid. Một số enzyme thể hiện hoạt tính xúc tác cực đại trong pha tử vong như deaminase. Ta có thể tính được sản lượng tế bào (tính bằng gam) cho 1 mol ATP đã tiêu thụ. phân hủy dần dần các chất dự trữ và cuối cùng dẫn đến sự chết của hàng loạt tế bào. vitamin. Các thông số của đường cong sinh trưởng Sản lượng tế bào được tính bằng hiệu giữa khối lượng cực đại (Xmax) và khối lượng ban đầu (X0) khi nuôi cấy vi khuẩn (tính bằng gam): X = Xmax .95 quan đến điều kiện bất lợi của môi trường. Y= X S Nếu sản lượng tính bằng gam và cơ chất đã dùng tính bằng mol thì gọi là hệ số kinh tế mol (Ym). Trong trường hợp môi trường tích lũy các acid nguyên nhân của sự chết tế bào tương đối dễ hiểu.. Hằng số tốc độ sinh trưởng của tế bào vi sinh vật trong pha log được tính theo công thức: . đó là vấn đề bảo quản các chủng vi sinh vật quan trọng về mặt lí thuyết (các chủng và các biến chủng đặc biệt) và kĩ thuật (các chủng sinh chất kháng sinh. Hệ số kinh tế mol (Ym) cho phép ta liên hệ sản lượng tế bào với số lượng ATP thu được do phân giải một lượng cơ chất nào đó. Đại lượng này gọi là hệ số năng lượng (YATP). Ngoài khả năng sống ta còn cần bảo quản cả các đặc tính di truyền của vi khuẩn với nhiều phương pháp bảo quản khác nhau. Ngoài đặc tính của bản thân chủng vi khuẩn.. Hệ số năng lượng được tính dễ dàng nếu ta biết con đường phân giải của loại cơ chất và năng lượng ATP sinh ra do sự phân giải ấy.

Cho chảy liên tục vào bình môi trường mới có thành phần không đổi. Thời gian của pha lag (T1). Đây chính là cơ sở của phương pháp nuôi cấy liên tục trong chemostas và turbidostas. mật độ vi khuẩn tăng lên còn nồng độ cơ chất giảm xuống. sinh khối đạt được không cao. 5. Dĩ nhiên trong một mức độ nào đó có thể cấy chuyền tế bào nhiều lần (qua những khoảng thời gian ngắn) vào môi trường dinh dưỡng mới. các điều kiện môi trường luôn luôn thay đổi theo thời gian. và lge = 0. Cơ sở của phương pháp nuôi liên tục: giả sử ta có một bình nuôi cấy trong đó vi khuẩn đang sinh trưởng phát triển. Vi khuẩn phải sinh trưởng và phát triển theo một số pha nhất định. Thể tích bình nuôi cấy được giữ . Sinh trưởng của vi khuẩn trong nuôi liên tục Trong phương pháp nuôi cấy tĩnh nói trên. nên người ta thường biểu thị thời gian của pha lag không phải thời gian tuyệt đối. các chất ức chế sinh trưởng và điều kiện nuôi cấy. Tuy nhiên trong nhiều nghiên cứu và thực tiễn sản xuất ta cần cung cấp cho vi sinh vật những điều kiện ổn định để trong một thời gian dài chúng vẫn có thể sinh trưởng trong pha log. người ta đưa môi trường dinh dưỡng mới vào bình nuôi cấy vi khuẩn đồng thời loại khỏi bình một lượng tương ứng dịch vi khuẩn. Hiệu giữa sự sinh trưởng thực tế và lý thuyết là L = T1 x v.43429. Đây là một thông số quan trọng để xem xét tính chất của vi khuẩn và môi trường nuôi cấy có thích hợp hay không. Thông số này thường dùng để so sánh các số liệu nói về ảnh hưởng của các chất dinh dưỡng khác nhau. mà là thông qua thời gian sinh lý (thời gian của 1lứa g). Nhưng đơn giản hơn.96 μ = ln X t − ln X 0 = (t − t0 ) lg X t − lg X 0 lg e(t − t0 ) Trong công thức: X0 và Xt là mật độ huyền phù tế bào tại các thời điểm t0 và t. Đại lượng L chỉ cho biết giống phát triển trong thực tế chậm hơn phát triển theo lý thuyết bao nhiêu thế hệ tại thời điểm cuối pha lag và chuyển vào đầu pha log. T1 = tr – ti = tn - ln xr − ln x0 μ Vì T1 chỉ thuận lợi để so sánh 2 giống với cùng tốc độ sinh trưởng log giống nhau. Thông số này được xác định bằng hiệu giữa thời điểm tr (tại đây huyền phù tế bào có mật độ xác định nào đó xr) và ti (tại đây khối tế bào có thể đạt đến mật độ mà sau đó nếu đem nuôi cấy thì chúng bắt đầu pha log ngay).

quần thể tế bào sinh trưởng phải trải qua các pha mở đầu. một mặt tạo điều kiện cho việc nghiên cứu sinh trưởng và sinh lý của tế bào vi khuẩn. Nếu μ = D => v = 0: mật độ tế bào không tăng không giảm theo thời gian. Nuôi cấy tĩnh được xem như hệ thống đóng. nghĩa là bình môi trường đi vào đã được bù bởi dòng môi trường đi ra với cùng một tốc độ.= dX = D.97 không đổi. tốc độ dòng đi vào là f (lít/giờ).= Nếu μ > D => v > 0: mật độ vi khuẩn trong bình tăng. Mỗi pha dX = (μ . ổn định và tử vong. quần thể vi khuẩn ở trong trạng thái cân bằng động học. trạng thái sinh lý của chúng mà cả môi trường nuôi cấy đều không đổi và không phụ thuộc vào thời gian. Ta gọi thể tích bình là v (lít). thường xuyên ở một mật độ tế bào không đổi và không phụ thuộc và thời gian. Điều này.X dt Như vậy mật độ vi khuẩn trong bình tăng theo phương trình: X = X0. ta có công thức tính: X = X0. Trong trường hợp như vậy không những kích thước trung bình của tế bào. logarid. chúng sẽ bị rút khỏi bình nuôi cấy với thể tích: v. e-Dt Tốc độ sinh trưởng của quần thể vi khuẩn trong bình biểu thị bởi phương trình: v+ = dX = μ. Nếu bình thí nghiệm có thiết bị duy trì μ luôn luôn bằng D ta sẽ thu được quần thể vi khuẩn sinh trưởng và phát triển theo lũy thừa. eμt Tốc độ thay đổi cuối cùng (tăng hoặc giảm) mật độ vi khuẩn trong nuôi cấy liên tục là sự sai khác giữa độ tăng v+ và độ giảm v-: v = v+ .D).v. Chemostas và turbidostas là hai thiết bị nuôi cấy trong đó ta có thể duy trì được điều kiện μ = D. Nếu μ < D => v < 0: mật độ vi khuẩn trong bình giảm. Do đó tốc độ pha loãng (còn gọi là hệ số pha loãng) D = f/v (đại lượng D biểu thị sự thay đổi thể tích sau một giờ).X dt . mặt khác cải thiện quá trình sản xuất vi sinh vật ở qui mô công nghiệp. Nếu vi khuẩn không sinh trưởng và phát triển.X dt Như vậy mật độ vi khuẩn trong bình giảm.

Các phương pháp khử trùng 1.Khử trùng bằng phương pháp Pasteur Cơ sở của phương pháp này là làm nóng vật liệu ở nhiệt độ dưới 1000C nhằm tiêu diệt tất cả các vi sinh vật trong các môi trường dễ bị hỏng khi đun sôi như sữa. Nhiệt độ hơi nước sôi không vượt quá 1000C. nhờ việc điều chỉnh tự động (hình 4. . Yếu tố thời gian ở đây trong phạm vi nhất định bị loại trừ.Khử trùng bằng cách đun sôi Người ta dùng nồi Koch hay nồi Arnola để khử trùng. Nước ở thùng ngoài được đun sôi. Khử trùng bằng nhiệt . Sự kìm hãm sinh trưởng và sự diệt khuẩn 1.3). hơi nước sẽ vào thùng trong. trái lại. Việc điều khiển tự động khó thực hiện. Chemosta Turbidost Hình 4. Khử trùng kiểu Pasteur có thể ở 600C trong 30 phút hoặc 750C trong 15 phút hay 800C trong 10 phút. rượu vang.3 Nuôi cấy liên tục trong chemostas (trái) và turbidostas (phải) V. Tế bào được cung cấp những điều kiện môi trường không đổi.. là hệ thống mở có khuynh hướng dẫn đến việc thiết lập một cân bằng động học.98 sinh trưởng được đặc trưng bởi những điều kiện nhất định.. Ở . bia.1. Nuôi cấy liên tục. Nồi hấp được cấu tạo bằng thùng hai vỏ kim loại.

nhưng bào tử vẫn còn khả năng nảy mầm. Khi khử trùng bằng nồi áp lực cao. Để tránh các hiện tượng trên.300C. Nồi hấp áp lực cao làm bằng kim loại. Nước trong nồi phải đủ đến mức quy định đã khắc trên ống đo nước. đáy nút bông phải gọn tròn không dài quá hoặc ngắn quá.5 thạch bị thủy phân và khi nguội không có khả năng tạo gel. Ở nhiệt độ này trong môi trường thích hợp. Vỏ trong là thùng khử trùng. kim tiêm và xylanh trong thời gian khoảng 10 phút. sau khi khử trùng phải trung hòa lại môi trường đến mức pH . có áp kế để xác định áp suất hơi nước. Nồi hấp được đậy kín bằng các khóa van xung quanh. trong khi khử trùng phải để môi trường có pH trung tính. Ngoài phương pháp trên người ta còn có thể đun sôi trực tiếp các dụng cụ bằng kim loại.Khử trùng bằng phương pháp hấp gián đoạn Các môi trường dinh dưỡng. pH dưới 5. Để đảm bảo hoàn toàn vô trùng ta tiếp tục khử trùng lần thứ 3 trong ngày thứ 3 kế tiếp. bình hay nút bông. Trong lần khử trùng thứ hai các tế bào vừa mới nảy mầm lại bị tiêu diệt. Sau đó để môi trường. để cho hơi nước dễ đi qua. Dụng cụ xếp vào nồi khử trùng phải ngay ngắn. Nếu môi trường kiềm. cao su. các bào tử sẽ nảy mầm. Khoảng trống giữ hai lớp vỏ là ngăn chứa hơi nước được nối với phểu. Vì vậy cần phải khử trùng bằng cách đun sôi lặp lại 3 lần trong 3 ngày kế tiếp nhau. dụng cụ đã khử trùng vào tủ ấm 28 . Khi phân phối môi trường tuyệt đối không để môi trường dính vào miệng ống nghiệm. môi trường cần khử trùng. . nhưng bào tử vẫn còn sống. Khi chọn chế độ khử trùng phải chú ý pH của môi trường. không xếp quá sít nhau.Khử trùng bằng nồi hấp áp lực (Autoclave) Phương pháp này dựa trên nguyên tắc làm nóng môi trường bằng hơi bão hòa ở áp suất cao hơn 1atm.99 nhiệt độ này tế bào sinh dưỡng bị tiêu diệt. Nút bông không được chặt quá để khỏi ngăn cản sự cung cấp ôxy cho vi sinh vật và không lỏng quá dễ bị vi sinh vật bên ngoài xâm nhập vào môi trường. caramen hóa đường.45 phút làm cho các tế bào sinh dưỡng đều bị chết. Chuẩn bị môi trường để khử trùng: các dụng cụ chứa môi trường chỉ được chứa đến 2/3 thể tích và nút kín bằng nút bông. khi khử trùng sẽ gây kết tủa sắt. Lần đun thứ nhất trong 30 . áp suất trong nồi tăng lên làm cho nhiệt độ tăng theo. Thùng khử trùng có nắp van thoát khí. phía trên của thùng có lỗ để đưa hơi nước vào thùng trong. có hai vỏ và có khả năng giữ áp suất cao. các ống bằng cao su và một số dụng cụ dễ bị hỏng khi khử trùng ở nhiệt độ cao. có van bảo hiểm để xì hơi khi áp suất quá mức cần thiết và để nồi khỏi bị nổ. . nơi để các dụng cụ.

. bàn ghế trong phòng được lau bằng các dung dịch sát trùng như chloramine 0. bằng cách này mọi vi sinh vật bám trên bề mặt dụng cụ đều bị tiêu diệt.. albumine trong môi trường dễ bị biến tính khi khử trùng bằng nhiệt độ cao nên phải khử trùng bằng cách lọc qua các dụng cụ lọc vi khuẩn. trước khi sử dụng mới được mở ra. Ở điều kiện này các tế bào sinh dưỡng và bào tử của vi sinh vật đều bị tiêu diệt.). không gây độc đối với con người. bệnh viện.).5 3%.. Một bộ phận hình viên trụ ở phía trên. ánh sáng mặt trời Tia tử ngoại có bước sóng 13 . các dụng cụ bằng sắt (kim. lá kính. dùng để chứa dịch lọc. 1..2. hoặc nước phenol 3 .100 cần thiết. Để khử trùng buồng nuôi cấy. Cách khử trùng này được sử dụng để khử trùng các dụng cụ thủy tinh. .Dùng nến lọc vi khuẩn Một số chất hữu cơ như huyết thanh. phòng thí nghiệm. kéo.. một số dụng cụ thủy tinh (đũa thủy tinh. phiến kính. Các pipette. Sàn nhà. gắp. kẹp. dao. Muốn khử trùng ta đưa đi đưa lại nhiều lần dụng cụ trên ngọn lửa đèn cồn. .. người ta đặt vào giữa 2 bộ phận một màng lọc tròn bằng amian hay bằng nitrocellulose dày khoảng 3 . loại này có 2 bộ phận. Các lỗ của màng lọc nhỏ hơn kích thước của tế bào vi khuẩn. que gạt phải được gói kín bằng giấy báo. một bộ phận hình phễu ở phía dưới. hộp petri. Ống nghiệm. Loại dụng cụ thường dùng hiện nay là loại lọc seltz. que gạt.Khử trùng bằng sức nóng khô Cách khử trùng này tiến hành trong tủ sấy ở nhiệt độ 160 . Sử dụng cồn sát trùng để lau các dụng cụ thủy tinh như que gạt.1700C trong 2 . .5%. . Hai bộ phận được gắn vào nhau và được cố định lại nhờ 3 đinh ốc. Khử trùng không bằng nhiệt .3 giờ.40 phút.400 nm đều có tác dụng diệt khuẩn.Khử trùng bằng tia tử ngoại. đũa thuỷ tinh.. bình tam giác trước khi khử trùng cần được nút kín bằng nút bông.5cm (màng lọc chỉ dùng một lần). người ta chiếu tia tử ngoại trong khoảng 30 .Khử trùng bằng cách đốt trên ngọn lửa Cách khử trùng này dùng để khử trùng que cấy vi sinh vật.Khử trùng bằng hóa chất Hóa chất được dùng để khử trùng bảo quản nguyên vật liệu và để làm sạch phòng thí nghiệm. Khi sử dụng hóa chất cần lưu ý tới nồng độ thích hợp. Môi trường sau khi khử trùng được giữ trong tủ ấm 300C trong 2-3 ngày để kiểm tra độ vô trùng. Mỗi lần lọc.

Bảo quản dưới dầu vô trùng: dầu paraffin vừa ngăn cản môi trường khô vừa làm giảm trao đổi chất gây cản trở sự xâm nhập của ôxy. 5. Đông khô: là phương pháp hoàn thiện và có hiệu quả nhất. Phương pháp này đơn giản nhất và thường được dùng nhưng kém hiệu quả nhất. Sau khi đã sinh trưởng vi khuẩn được giữ trong tủ lạnh +40C. Câu hỏi ôn tập chương 4 1. Bảo quản trong cát hoặc đất sét vô trùng: do cấu trúc lí . hiện tượng sinh trưởng kép? . Các pha sinh trưởng của vi sinh vật. Các cơ chất dinh dưỡng cần thiết cho hoạt động sống của vi sinh vật? 3. Sau mấy năm bảo quản tế bào vẫn giữ được khả năng sống mà không bị biến đổi về di truyền. Các kiểu dinh dưỡng của vi sinh vật? 2. 2. 2. 4.. Sau khi làm khô không khí cát (hoặc đất sét) cùng với vi khuẩn có thể bảo quản tế bào rất lâu. Vì thế trong một số trường hợp người ta có thể phơi nắng các dụng cụ của phòng thí nghiệm 2 . Các phương pháp bảo quản 1. Ý nghĩa của việc nghiên cứu đường cong sinh trưởng. Bảo quản trong glycerine (10%) và giữ trong tủ lạnh sâu (-600C hay . Cấy truyền thường xuyên trên thạch nghiêng hoặc trích sâu vào thạch.3 giờ sau khi đã được rửa sạch.400 nm cũng có tác dụng diệt khuẩn.800C): đây là phương pháp rất thích hợp nhưng cần mua được loại ống nhựa chịu nhiệt (khi khử trùng).) rồi làm lạnh và làm khô nhờ băng khô. chủ yếu là các bào tử.101 Tia sáng mặt trời có bước sóng 330 . huyết thanh. Cơ chế và tác dụng của các yếu tố bên ngoài lên sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật? 4. Vi khuẩn được trộn với môi trường thích hợp (sữa..hóa cát và đất sét đều là những vật chất tốt mang các tế bào vi sinh vật. điểm khác biệt của phương pháp nuôi cấy tĩnh và nuôi cấy liên tục? 5. 3.

3 và 10 là phản Hình 5.Parnas (EMP hay đường phân) 1.1: Con đường EMP ứng một chiều. Con đường Embden .3 diphosphoglyceric (a.Glyceric (A3PG) (8) a.6P ATP (3) ADP Fructose .3DPG) ADP (7) ATP a.1) Glucose (1) Glucose .2P. Trừ chất . 1. glucose đều được chuyển a.3 P .6 DP (5) (4) (AlPG) Glyceraldehyd . còn các phản ứng khác là phản ứng thuận nghịch.6 P (2) Fructose .Meyerhof . Các con đường phân giải hexose 1.1.Glyceric (A2PG) (9) Phosphoenolpyruvic (PEP) (10) ADP A TP Trong điều kiện có hoặc không có O2. Pyruvic thành pyruvate qua 10 phản ứng. 1. trong đó 3 phản ứng 1.102 Chương 5 Trao đổi chất ở vi sinh vật I.3P H3PO4 (6) Dioxy acetone – P (DAP) NAD NADH2 a.1 Cơ chế (hình 5.

Gốc phosphoryl mang 3 chức năng là giúp cho chất trung gian mang điện tích âm cao không thể thoát ra ngoài. 3. 3-Pglyceraldehyd. Hoạt hóa glucose tạo fructose .6-P.2). 4. C7. Các phản ứng tiếp theo là sự chuyển hóa giữa pentoso.5P tham gia vào quá trình sinh tổng hợp acid nucleic. Ý nghĩa của chu trình: Xét về mặt năng lượng. 1.P . pyruvate.6-P. . PEP. tất cả các chất trung gian trong chu trình đều ở dạng phosphoryl hóa.3 di ..Cung cấp năng lượng cho hoạt động sống của tế bào tuy hiệu suất không cao (khoảng 10%).glycerate. Bẻ đôi phân tử fructose .2. Ý nghĩa của con đường EMP .103 đầu và chất cuối.6 diphosphate tạo AlPG và DAP. 2. Chuyển hóa A2PG tạo acid pyruvic (hình 5. tạo các loại đường C4.. Ôxy hóa AlPG thành A2PG.glycerate và PEP). .6P. Con đường này tạo NADPH2 cần thiết cho các phản ứng sinh tổng hợp trong tế bào.1). khi có mặt của ADP thì chất trao đổi sẽ chuyển gốc P cho ADP tạo thành ATP. fructose . HMP) Do một đột biến nào đó (thiếu enzyme) mà một số vi sinh vật có thể chuyển hóa glucose thành pyruvate theo con đường PP (hình 5. từ 1 phân tử glucose khi phân giải tạo 35 ATP nhưng qua con đường này tạo riboso . Phương trình chung: Glucose 2 pyruvate + 2ATP + 2 NADH2 ATP được tạo thành từ 2 phản ứng 7 và 10. nhưng đây là con đường nguyên thủy nhất gặp ở hầu hết sinh vật. Có thể chia con đường EMP thành 4 giai đoạn: 1.1. 3P . Con đường pentosophosphate ôxy hoá (PP. Từ glucose qua quá trình decarboxyl hóa tạo ribuloso .5P và CO2.Quá trình đường phân cung cấp cho tế bào 6 trong số 12 tiền chất dùng để tổng hợp các đơn vị kiến trúc: glucose . Sự tạo thành ATP ở 2 phản ứng trên gọi là phosphoryl hóa ở mức độ cơ chất vì phosphate cao năng trước đó là một phần của phân tử chất trao đổi (1.1. 2.5P và hexoso . là vị trí gắn enzyme và là vị trí cung cấp liên kết cao năng.6 diphosphate (có thể xẩy ra ở nhiều monosaccharide khác). tham gia vào quá trình sinh tổng hợp acid amin. Đây là con đường phân giải đường thường gặp ở vi khuẩn thuộc giống Pseudomonas.

.3deoxy . Qua các con đường phân giải glucose. pyruvate được tạo thành. Nếu điều kiện kị khí các vi sinh vật sẽ tiến hành quá trình lên men hoặc hô hấp kị khí (hình 5.3).104 Phương trình tổng quát: Glucose + 6O2 Glucose 6CO2 + 6H2O + 35ATP Glucose Ribulose Glucose Frutose Erytrose Xilulose Ribose Xilulose Xilulose Erytros Fructos Fructos Ribose Xilulose Fructos Hình 5.6Pgluconate) Phương trình tổng quát như sau: Glucose 2 Pyruvate + ATP + NADH2 + NADPH2 Con đường KDPG giúp cho nhiều vi khuẩn sử dụng gluconate và chỉ gặp ở một số vi khuẩn. Con đường KDPG (2keto . Nếu trong điều kiện hiếu khí các vi sinh vật sẽ ôxy hoá pyruvate tạo CO2 và nước. coli và nhiều loài của Clostridium chuyển hóa glucose qua con đường EMP nhưng phân giải gluconate qua con đường KDPG. Ở E.2 Con đường pentosophosphate 3.

4): . Ôxy hoá pyruvate Pyruvate chiếm vị trí trung tâm trong trao đổi chất trung gian và là tiền chất của nhiều sản phẩm.105 Glucose Glucose -6h h 6 .CoA chủ yếu qua 3 phản ứng sau (hình 5.3 Phosphoenol-pyruvate 3-phosphoglycerat 2-phosphoglycerate Hình 5.phosphogluconate 2-keto-3 deoxy-6-phosphogluconate Glyceraldehyd pyruvate 1.3 Con đường KDPG 4.phosphoglucono-18-lactose 6 . Nhiều vi sinh vật ôxy hóa pyruvate thành acetyl .

formate . enzyme này gặp nhiều ở vi khuẩn kị khí tiết acid formic (thuộc họ Enterobacteriaceae) và vi khuẩn quang năng. PDH gặp ở hầu hết vi sinh vật hiếu khí (không gặp ở vi khuẩn kị khí bắt buộc). Phản ứng (2) xúc tác bởi pyruvate .dehydrogenase (PDH) xúc tác.ferredoxin) Pyruvatecarboxylase Vòng tiasolium của thiamin pyrophosphate Pyruvate Enzyme Acid lipoic Dihydrolipoidtransacetylase Enzyme Dihydrolipoid dehydrogenas Enzyme Acid acetyl-lipoic Enzyme Acid dihydrolipoic Hình 5.106 Pyruvate +CoA+NAD+ Pyruvate + CoA + 2Fd Pyruvate + CoA + NAD+ Acetyl .Fd .CoA + NADH2 + CO2 (1) Acetyl .liase xúc tác.CoA + 2FdH + CO2 (2) Acetyl .Fd oxidoreductase. ngoài CoA và NAD+ còn cần TPP (thiamine pyrophosphate) và acid lipoic. . enzyme này gặp nhiều ở vi khuẩn kị khí như Clostridium.CoA + formate (3) (Formate . PDH gồm 3 enzyme.4 Quá trình ôxy hóa pyruvate Phản ứng (1) do phức hệ pyruvate . Phản ứng (3) do pyruvate .

Các coezyme thông qua chuỗi hô hấp vận chuyển H và electron đến cho O2 phân tử tạo nước đồng thời giải phóng năng lượng ATP. acid pyruvic bị phân huỷ triệt để tạo CO2. Chu trình tricarboxylic (Krebs) Trong quá trình ôxy hóa hoàn toàn. Cơ chế được trình bày ở hình 5. . Hình 5. coezyme dạng khử và các hợp chất trung gian.5 Chu trình Krebs (theo Lehninger) Trong chuỗi phản ứng vòng của chu trình ATC.5.107 II. pyruvate sẽ được ôxy hoá triệt để thông qua chu trình Krebs (chu trình acid tricarboxylic = ATC).

. Chuỗi hô hấp (respiratory chain) và phosphororyl hóa ôxy hóa (oxidative phosphorylation) Khác với vi khuẩn kị khí.108 Ý nghĩa của chu trình: Ngoài chức năng ôxy hóa tận cùng. một phần nhỏ giải phóng ra ở dạng nhiệt.).synthetase. vận chuyển hydro hoặc enzyme. Hai hệ thống này nằm ở màng tế bào Prokaryota hoặc màng trong ti thể của tế bào Eukaryota. chu trình cung cấp 1ATP ở mức độ phosphoryl hóa cơ chất nhưng sản sinh NADH2 để đi vào chuỗi vận chuyển electron tạo ATP. Một số vi sinh vật có khả năng ôxy hóa cơ chất trong điều kiện hiếu khí nhưng lại sinh ra các sản phẩm chưa được ôxy hóa hoàn toàn (ketoacid. các coenzyme và nhóm thêm. .S cũng tham gia vào sự cố định N. vừa liên kết với S của cysteine vừa liên kết với S của H2S. khử nitrite. chu trình ATC còn cung cấp cho tế bào 3 tiền chất là oxalacetate (tổng hợp aspactate).Protein Fe-S vận chuyển electron.ketoglutarate và succinyl .oxidoreductase... .Quinol: nằm ở màng trong của ti thể. chứa nguyên tử Fe. acid malic.ferredoxin . Tế bào phải sử dụng phần lớn pyruvate để lên men thu năng lượng..CoA (tổng hợp nhân hem). Các thành phần quan trọng nhất tham gia vào ôxy hóa hydro là : . acid fumaric. quang hợp. III. ở vi khuẩn G.là ubiquinol (CoQ). vi khuẩn G+ là naphtoquinol và ở lục lạp là plastoquinol.Flavoprotein là các enzyme chứa nhóm thêm là FMN hoặc FAD .vận chuyển hydro. Các thành phần của chuỗi nằm trong lớp lipid kép. còn phần nhỏ chuyển thành acetyl . có thể coi trung tâm Fe . vi khuẩn hiếu khí có thể tổng hợp ATP mạnh mẽ hơn nhiều nhờ có chuỗi hô hấp và ATP . Các protein Fe . khử sulphite. acid gluconic. đặc biệt là CoQ có đặc tính ưa lipid do đó lắp vào lớp lipid kép của màng. Về năng lượng. Quinol. Trong điều kiện kị khí chu trình TCA không có chức năng sinh năng lượng nhưng cũng phải cung cấp cho tế bào 3 tiền chất trên. α . Phần lớn các vi sinh vật hiếu khí ôxy hóa chất dinh dưỡng hữu cơ thành CO2 và H2O (vì carbon trong phân tử CO2 đạt mức độ ôxy hóa cao nhất nên người ta gọi là quá trình ôxy hóa hoàn toàn). Nhiều quá trình ôxy hóa không hoàn toàn có ý nghĩa quan trọng trong công nghiệp lên men vì chúng sản sinh ra nhiều sản phẩm có giá trị.CoA nhờ pyruvate . Năng lượng thoát ra được chuyển thành ATP. gồm nhiều enzyme vận chuyển electron và hydro.. Cysteine là một phần của chuỗi polypeptide.S là nhóm thêm của chuỗi polypeptide. các dehydrogenase và hệ thống vận chuyển.

Do đó 1mol glucose khi phân giải qua chu trình EMP và TCA với tất cả [H] tách ra được chuyển vào chuỗi hô hấp để tạo thành nước sẽ tạo 38 ATP. Proteus vulgaris không có cytochrome C). Theo thuyết này.109 . màng tế bào vi khuẩn và màng trong ti thể không thấm các ion kể cả H+ và OH. ở một số vi khuẩn do chỉ có 2 vị trí phosphoryl hóa nên sự hô hấp hiếu khí glucose chỉ cho 26 ATP (như ở E. Sự định hướng không gian của các phân tử enzyme dẫn đến trao đổi chất có đặc tính vectơ. trong quá trình vận chuyển một số lượng H+ tương đương với số lượng electron bị tách vào môi trường (hình 5. Trong sự ôxy hoá NADH2. permease..6 Sơ đồ chuỗi hô hấp Trong quá trình vận chuyển 2[H] từ NADH2 đến O2 có 3 bước chuyền electron liên quan đến tạo thành ATP và được biểu thị bằng hệ số P/O (mol ATP/mol nguyên tử O).và kém dẫn điện.6). Do sự ôxy hoá cơ chất mà phía trong màng có sự tiêu thụ H+ và phía màng ngoài giải phóng H+. Cơ chế phosphoryl hoá ôxy hoá (sự tạo thành ATP trong chuỗi hô hấp) được giải thích theo thuyết hoá thẩm thấu của Mitchell (1979).) khiến màng mang tính chất không đối xứng. không vận chuyển hydrogen. coli không có NAD. Cytochrome nhận electron từ quinol. Sự sắp xếp các protein của màng (các thành phần vận chuyển electron. Sự tính toán trên đúng với ti thể và một số vi khuẩn.sinthetase. Hệ số P/O = 3 khi 2[H] được chuyền qua NAD+ và P/O = 2 khi 2[H] từ succinate qua FAD đến O2. Tuy nhiên.Cytochrome: vận chuyển electron.. Cyt Cyt Cyt Cyt Hình 5. 6H+ đã . ATP . Chuỗi hô hấp bao gồm một dãy các chất vận chuyển hidro và electron sắp xếp luân phiên trong màng.

sinthetase gặp ở các màng tham gia vào sự chuyển hoá năng lượng là màng ti thể. IV. Sự vận chuyển chất dinh dưỡng vào tế bào Để tồn tại. tế bào vi sinh vật phải thường xuyên trao đổi vật chất và năng lượng với môi trường bên ngoài.sinthetase trở vào bên trong ti thể hoặc vi khuẩn. dòng H+ từ ngoài đã đi qua rãnh của ATP . Một mặt chúng nhận các chất dinh dưỡng cần thiết từ môi trường. Thế proton này sẽ là động lực của sự phosphoryl hoá nghĩa là sự tạo thành ATP. enzyme này chuyển năng lượng phát ra từ dòng electron thành liên kết esterphosphate cao năng của ATP. lục lạp và màng tế bào vi khuẩn. Kiểu khuếch tán này được gọi là khuếch tán xúc tiến.110 được vận chuyển ra phía ngoài qua 3 núm. năng lượng thoát ra được dùng cho phản ứng phosphoryl hoá tạo ATP. ATP . Có lẽ. Sự xâm nhập của nước và các chất hòa tan qua màng tế bào là một quá trình động học. tế bào sống không bao giờ ở trạng thái cần bằng với các chất của môi trường chung quanh. từ đây các phân tử chất hòa tan được chuyển vào tế bào chất. Theo cơ chế vận chuyển thụ động. Tế bào nhận và thải các chất một cách chọn lọc. Giữa môi trường xung quanh và môi trường bên trong tế bào tồn tại một hàng rào thẩm thấu. Những phân tử vận chuyển sắp xếp trong màng liên kết với các phân tử chất hòa tan và chuyển chúng vào bề mặt bên trong của màng. Theo cơ chế khuếch tán thụ động các phân tử đi qua màng nhờ sự chênh lệch nồng độ (trong trường hợp các chất không điện phân) hay chênh lệch điện thế (trong trường hợp các ion) ở hai phía của màng. Sự vận chuyển các chất qua màng tế bào vi sinh vật tuân theo một trong hai cơ chế: khuếch tán đơn giản (hay còn gọi là vận chuyển thụ động hay vận chuyển xuôi dòng) và vận chuyển chủ động (vận chuyển ngược dòng).permease” được vận chuyển theo hai phía của . hàng rào này chính là màng tế bào chất. Quá trình được xúc tác bởi ATP .sinthetase. Trái lại. Các phân tử protein vận chuyển (carrier protein) nói trên gọi là protein thấm – permease. Hàng loạt nghiên cứu đã khẳng định. đa số các chất hòa tan qua màng do cơ chế vận chuyển đặc biệt. Việc vận chuyển proton do hô hấp làm xuất hiện một gradien điện hoá giữa 2 phía của màng. Sự vận chuyển các chất nhờ permease có thể là thụ động (không cần năng lượng của tế bào) hoặc chủ động (cần năng lượng). mặt khác chúng thải ra các sản phẩm trao đổi chất. trừ nước ra rất ít hợp chất có thể được vận chuyển qua màng theo cơ chế nói trên. sinh trưởng và phát triển. Phức hợp “chất hòa tan . chất hòa tan liên kết thuận nghịch vào một vị trí đặc biệt trên phân tử permease nằm ở bên trong màng (có thể ở các lỗ của màng).

.ase là enzyme có liên quan đến việc vận chuyển các chất. Sự vận chuyển thụ động nhờ permease đã được chứng minh ở một số vi sinh vật. Tuy nhiên. chúng có tính đặc hiệu cơ chất khác nhau. trong tế bào vi sinh vật ngoài cơ chế vận chuyển thụ động còn tồn tại cơ chế vận chuyển chủ động nhờ permease. Giống như enzyme. EII và một protein vận chuyển bền nhiệt (Hpr: heat stable carried protein) có khối lượng phân tử thấp. EI là chung cho nhiều loại đường nhưng EII lại đặc trưng cho mỗi loại đường. Thêm vào đó. Cho tới nay người ta đã phân lập được hàng loạt protein vận chuyển trong các loài vi sinh vật. Một số có tính đặc hiệu gần như tuyệt đối. Nghĩa là một đột biến nào đó ảnh hưởng đến việc tổng hợp EI sẽ dẫn đến mất khả năng vận chuyển nhiều loại đường. tế bào cũng đồng thời thải ra bên ngoài các ion H+ hoặc Na+. nghĩa là sự vận chuyển diễn ra theo kiểu “xuôi dòng”. Các thành phần protein của hệ thống này đã được thuần khiết và phản ứng diễn ra theo hai bước. Sự vận chuyển này được tiến hành ngược với gradien nồng độ nghĩa là theo kiểu “ngược dòng”. năng lượng tiêu thụ có thể do ATP cung cấp. nồng độ K+ bên trong một số tế bào vi sinh vật có thể lớn hơn nồng độ bên ngoài hàng ngàn lần.coli chỉ vận chuyển galactose. Các permease của các đường và acid amin khác thể hiện tính đặc hiệu yếu hơn đối với các chất hòa tan. Rõ ràng. người ta đã phát hiện thấy ở các màng vi khuẩn có hoạt tính của ATP .P + Pyruvate Sau đó EII chuyển phosphate từ Hpr . Trước hết EI chuyển phosphate từ phosphoenolpyruvate (PEP) đến Hpr: Hpr + PEP Hpr .111 màng nhờ sự chênh lệch nồng độ ở một chất nào đó. Hệ thống này bao gồm hai enzyme EI.P đến C6 của đường đơn. Để đảm bảo độ trung hòa điện. vi sinh vật có khả năng tích lũy một số chất với nồng độ cao hơn nhiều so với nồng độ bên ngoài.7). Trái lại với đột biến như thế đối với EII chỉ ảnh hưởng đến sự vận chuyển của một loại đường (hình 5. Chẳng hạn. permease của galactose ở E. Chẳng hạn. Điều đáng chú ý là trong vi khuẩn sự vận chuyển chủ động của hầu hết các loại đường phụ thuộc vào quá trình phosphoryl hóa và hệ thống enzyme phosphotransferase.

Các nguồn năng lượng ở vi sinh vật Tùy theo bản chất của nguồn năng lượng sơ cấp. Một số vi khuẩn hiếu khí cũng giống như động vật có khả năng tổng hợp ATP cho mình từ đường bị phân giải theo con đường đường phân (glycolyse) và chu trình Krebs nhờ chuỗi hô hấp trên màng tế bào chất (tương tự như chuỗi hô hấp ở màng trong của ty thể). Chính gradien nồng độ ion là nguồn gốc của lực bơm proton (sự khác biệt điện tích) có thể được dùng vào những mục đích khác nhau như vận chuyển tích cực.6P PEP EII glucose Hpr-P pyruvic Hình 5. chuỗi vận chuyển cũng khu trú trên màng tế bào chất tương tự như chuỗi vận chuyển nằm trong các ty thể.7 Sơ đồ vận chuyển đường qua màng tế bào vi sinh vật V. .112 Ngoài Glucose Màng EII Hpr Trong Glucose. Trong cả hai trường hợp. có hai con đường cơ bản để cung cấp cho vi sinh vật: con đường quang dưỡng và hóa dưỡng. chúng có thể thu nhận năng lượng của ánh sáng. Trong thế giới vi sinh vật có sự khác biệt rất lớn về khả năng sử dụng các nguồn năng lượng. chuyển động v. Còn những vi sinh vật kị khí lại thu năng lượng cho hoạt động sống của mình nhờ quá trình lên men của các loại đường hoặc nhờ một loại chuỗi vận chuyển electron trong đó có sử dụng các hợp chất không phải là ôxy phân tử làm chất nhận electron cuối cùng trong chuỗi vận chuyển.v. Ở đây. sự thu nhận năng lượng của tế bào được liên hệ với sự vận chuyển electron qua màng. sản xuất các chất giàu năng lượng. Đối với các cơ thể quang dưỡng thì lại khác. do đó tạo ra một gradient electron proton từ phần này đối với phần kia của màng tế bào chất.. . Trao đổi chất và năng lượng 1.

synthetase tương tự như ATP . Tương tự. Đó là những phản ứng ôxy hóa cơ chất hữu cơ và vô cơ.2. Phức hợp protein vận chuyển qua màng đảm bảo biến đổi dòng proton thành năng lượng trong mối liên kết phosphate ở dạng ATP. Mặt khác. Sự trao đổi chất của các cơ thể hoá dưỡng nói chung bao gồm 3 giai đoạn: .113 Đứng về quan điểm năng lượng sinh học. Quá trình ôxy hoá: . tổ hợp hai quá trình này là quá trình ôxy hóa khử (oxidoreduction).Phân giải triệt để các chất trao đổi trung gian thành CO2 và H2O với việc tạo ra lượng lớn ATP. một hợp chất A là một chất hữu cơ có thể xem là chất được hydro hóa. cấu tạo các cơ quan quang hợp.Các cơ thể quang dưỡng (phototroph) và quang tổng hợp (photosynthesis) Hình thái của cơ thể quang dưỡng và quang tổng hợp giữa vi khuẩn. lục lạp và tế bào vi khuẩn có nhiều nét tương đồng. sắc tố quang tổng hợp.1. Chúng lấy năng lượng hữu ích cho các quá trình tổng hợp của tế bào nhờ giải phóng năng lượng trong các phản ứng hóa học. Quá trình ôxy hóa một cơ chất A có thể xem là một chuỗi phản ứng mà trong đó cơ chất A mất đi các eletron của mình. chất cho electron là H2O và quá trình quang hợp giải phóng ôxy phân tử. S) hoặc hợp chất hữu cơ (isopropanol) (xem thêm chương VII). acetyl . Tất cả các vi khuẩn có trên màng tế bào chất một hệ enzyme ATP .synthetase của các ty thể và lục lạp.Phân cắt các đại phân tử ở ngoài tế bào.Phân giải các phân tử bé để tạo ra các chất trao đổi trung gian (pyruvate. một hợp chất B khác gọi là chất nhận electron sẽ biến thành sản phẩm khử.CoA) và tạo năng lượng hữu ích (ATP). Đối với vi khuẩn quang hợp không thải ôxy và chất cho electron là những hợp chất vô cơ (như H2S. 1. . như vậy thì quá trình ôxy hóa về thực chất là một quá trình khử hydro (dehydrogenation). Các cơ thể hóa dưỡng và ôxy hóa sinh học Phần lớn vi khuẩn không có cơ quan và sắc tố quang hợp. 1. Cơ chất A gọi là chất cho electron sẽ biến thành một sản phẩm được ôxy hóa. thì ty thể. Đối với thực vật. thực vật có sự khác biệt rõ ràng. Trong phần lớn trường hợp. cũng khác biệt (xem chương II). tảo. . trong khi đó quá trình khử là quá trình hydro hóa (hydrogenation).

như nitrate trong trường hợp hô hấp nitrate (nitrate respiration). còn “hô hấp kỵ khí” dùng để chỉ một quá trình vận chuyển qua màng của các electron và proton đến chất nhận electron cuối cùng là một chất khác ôxy phân tử. chất nhận electron có thể là chất hữu cơ hoặc chất vô cơ. FAD) hoặc của pyridine (NAD. Đó là các dẫn xuất của flavin (FMN..v. Nếu chất nhận electron là chất hữu cơ người ta gọi là lên men.2e Quá trình khử: + 2H+ B (chất nhận hydro) + 2e Kết quả: A + BH2 + Năng lượng AH2 + B Trong chuỗi phản ứng. Các chất xúc tác thích ứng cao với quá trình ôxy hoá cơ chất là những dehydrogenase.. Trong số các cơ thể kỵ khí. Những enzyme này đặc trưng cho một loại cơ chất và tổ hợp với các coenzyme mà nó đóng vai trò là chất nhận hydro từ cơ chất. các enzyme này tạo thành chuỗi vận chuyển điện tử. NADP) và nhiều hợp chất khác. nếu chất nhận là electron là chất vô cơ người ta gọi là hô hấp kỵ khí (anaerobic respiration). Ở các cơ thể hiếu khí. việc vận chuyển hydro hay electron từ cơ chất sang chất nhận được thực hiện nhờ hàng loạt enzyme.2H+ AH2 (chất cho hydro) . thì người ta gọi là quá trình lên men hoặc có thể là quá trình hô hấp kị khí và vi sinh vật thực hiện các quá trình này gọi là các cơ thể kỵ khí (anaerobes). fumarate như hô hấp fumarate (fumarate respiration ) v.114 . Hô hấp của một cơ thể hiếu khí là một quá trình vận chuyển electron và proton qua màng với ôxy phân tử làm chất nhận electron cuối cùng. Khi chất nhận electron cuối cùng là một cơ chất khác không phải là ôxy tự do. sự vận chuyển các electron giữa coenzyme của dehydrogenase và ôxy phân tử được thực hiện nhờ các hợp chất trung gian của cytochrome. 2. Các kiểu hô hấp Thông thường khi chất nhận electron cuối cùng là ôxy phân tử thì gọi là quá trình hô hấp hiếu khí và vi sinh vật thuộc dạng này gọi là vi sinh vật hiếu khí (aerobes). BH2 (sản phẩm khử) A (sản phẩm ôxy hoá) + Năng lượng .

còn tồn tại những con đường khác. một chuỗi “hô hấp fumarate”.115 Rất nhiều vi sinh vật có nhiều chuỗi vận chuyển electron có thể cùng hoạt động. H2O2 catalase H2O + 1/2 O2 + H2O2 + 2H + 2e peroxydase 2H2O Những con đường này tạo rất ít hoặc không tạo năng lượng hữu ích. trong đó có sự tham gia của dehydrogenase và các coenzyme liên kết với nó. Bên cạnh quá trình phosphoryl ôxy hoá cơ chất. chúng không có catalase. Cơ chế thường thấy ở hô hấp là con đường của các cytochrome gián tiếp. Ví dụ như ở E. Có một số vi khuẩn chịu được hiếu khí như Streptococcus. vi khuẩn đường ruột này có chuỗi vận chuyển electron với ôxy phân tử là chất nhận electron cuối cùng (chuỗi hoạt động như cơ thể hiếu khí ) và chuỗi “hô hấp nitrate” hoạt động kỵ khí trong môi trường nitrate. không có sự tự động đi qua của dòng electron hoặc proton ở phần bên này và phần bên kia của màng tế bào (một dòng vận chuyển thứ . Một vi khuẩn không có enzyme trên. nhưng con đường phân giải trên buộc chúng phải sống kỵ khí bắt buộc. hoặc được hoạt động trong những điều kiện nuôi cấy nhất định.oxydase và NAD . Hô hấp được đặc trưng trước hết là nơi khu trú của chuỗi vận chuyển electron ở màng tế bào chất đối với các cơ thể nhân sơ và ở màng trong của ty thể đối với các cơ thể nhân chuẩn. hoạt động kỵ khí trên môi trường chứa cơ chất hữu cơ mà vi khuẩn này có thể lên men. Hô hấp còn đặc trưng ở bản chất của chất nhận electron cuối cùng là ôxy phân tử. Ngày nay người ta hoàn toàn biết rõ thành phần và cơ chế hoạt động của các cytochrome này trong tế bào nhân chuẩn và trong một số cơ thể nhân sơ.peroxydase) cho phép chúng thực hiện sự cân bằng trong hô hấp ở màng tế bào chất. đặc biệt là con đường ôxy hoá trực tiếp nhờ các enzyme vận chuyển các electron từ cơ chất đến ôxy với sự tạo thành H2O2 . coli. bởi vì ôxy phân tử là tác nhân gây độc với chúng. peroxydase hoặc superoxyd dismutase tránh cho tế bào khỏi bị chết.oxydase FAD + H2O2 Hợp chất này rất độc và cần phải được phân giải nhờ catalase. FADH2 + O2 FAD. Lên men để chỉ sự có mặt của chuỗi vận chuyển electron nằm trong tế bào chất. Tuỳ thuộc vào số lượng và lượng các enzyme có thể phân giải H2O2 mà quyết định tính hiếu khí hay kỵ khí ở các vi khuẩn. Sự ôxy hoá cơ chất và đồng thời sự khử của ôxy được thực hiện nhờ một chuỗi phản ứng enzyme. nhưng có các enzyme flavin (NAD .

3. phản ứng âm tính đối với các vi khuẩn kị khí không bắt buộc trừ các Vibrio và Aeromonas. rồi cấy giống vào sâu. một số nhà nghiên cứu đề xuất những phương pháp và môi trường có thể định loại nhanh chóng và đơn giản các nhóm vi sinh vật..2 Dùng phản ứng oxydase Phản ứng này cho phép sự có mặt của chuỗi hô hấp đang hoạt động với cytochrome C ở màng nhờ TMPD (tetra .. Việc vận chuyển electron được thực hiện nhờ NAD. 3. chứ không phải là các phân tử ôxy.1 Nghiên cứu kiểu hô hấp Để xác định kiểu hô hấp của một loại vi khuẩn. nhờ năng lượng của ATP). Đặc biệt đối với các vi khuẩn đường ruột là có phản ứng âm tính mặc dù vi khuẩn này có chuỗi hô hấp với các cytochrome. dựa vào khả năng phát triển trong các ống nghiệm ta biết được đó là loại hô hấp gì. Ở đây có sự khác biệt rõ rệt so với hô hấp về bản chất của chất vận chuyển electron về sản phẩm cuối cùng. Các hợp chất cho electron (AH2) và chất nhận electron (B) đều là các hợp chất hữu cơ.gan) đã chế đặc và đưa vào ống nghiệm. trừ các giống Streptococcus và Lactobacilus. trong phòng thí nghiệm người ta sử dụng môi trường VF (nước thịt . Khi có mặt H2O2.116 cấp được thiết lập nếu cần thiết. nhưng chất nhận electron cuối cùng là các hợp chất hữu cơ. Quá trình này cũng giải phóng năng lượng nhưng ít hơn nhiều so với quá trình hô hấp.3 Thử catalase Enzyme catalase thường có ở các vi khuẩn G-. Nếu: . đây cũng là một quá trình ôxy hóa khử. Phản ứng này đặc biệt hiệu quả đối với vi khuẩn G-. 3.paraphenylene diamine). phản ứng dương tính với các vi khuẩn hiếu khí bắt buộc (trừ Pseudomonas maltophyla và Acinatobacter).methyl . một vài giọt huyền phù vi khuẩn có catalase dương sẽ làm sủi bọt giải phóng ôxy phân tử. Về phương diện trao đổi năng lượng. Nghiên cứu sự trao đổi năng lượng Sự khác biệt về các phản ứng ôxy hóa khử ở các nhóm vi sinh vật khác nhau là một tiêu chuẩn dùng để định loại chúng. Cơ chế vận chuyển electron trong quá trình lên men được tóm tắt như sau: AH2 NAD+ BH2 B A NADH2 3.

Thí nghiệm cần nuôi cấy ở 2 điều kiện hiếu khí và kị khí. các nitrate sẽ được khử hoàn toàn thành N2O và N2 sẽ được giải phóng ngoài tế bào. 3. Mẫu này được đặt trong một bình chứa nối với một áp kế.Sủi nhiều bọt: đó là huyền phù vi khuẩn hiếu khí .Không có bọt: vi khuẩn kị khí 3..7 Đo mức độ hô hấp Hô hấp kế (Respirometre) Warburg là dụng cụ đầu tiên dùng để xác định mức độ sử dụng ôxy của tế bào sống.Sủi ít bọt: vi khuẩn hiếu .) có thể thấy rõ nhờ tạo ra hydro được lưu huỳnh hóa (H2S. Hô hấp nitrate là loại hô hấp kị khí. điều này có thể thấy khi dùng peptone. . thiosulfate v. loại đường được dùng phổ biến nhất ở nhiều loại vi khuẩn. có thể có 4 trường hợp xảy ra: .....4 Phản ứng nitrate reductase Sự khử nitrate có thể được nghiên cứu trên môi trường có nitrate (môi trường lỏng hoặc đặc) để phát hiện sự có mặt của nitrite (nhờ thuốc thử Griess). sulfite. chất này có thể được chuyển hóa tiếp thành muối ammon là nguồn nitơ dễ được cơ thể sử dụng.Vi khuẩn kiềm hóa khi thấy môi trường bị kiềm hoá trong điều kiện hiếu khí. có thể dẫn đến 2 kết quả theo 2 cơ chế khác nhau: .v..Khử nitrate đồng hóa được xúc tác bởi nitrate reductase B tạo nitrite.Vi khuẩn lên men khi có giống phát triển trong canh trường và làm acid hóa trong 2 ống nghiệm.). Sau khi nuôi ở tủ ấm với nhiệt độ thích hợp.6 Khử các sản phẩm lưu huỳnh Thí nghiệm khử các sản phẩm ôxy hóa của lưu huỳnh (sulfate.kị khí . bình chứa mẫu và áp kế tạo thành một nhánh được .Vi khuẩn bất hoạt khi không thấy acid hóa trong cả 2 ống nghiệm. 3.5 Nghiên cứu kiểu trao đổi chất Nghiên cứu này được thực hiện nhờ sử dụng glucose làm cơ chất.) phát hiện dưới dạng sulfua kim loại bị đen (sulfua sắt hay sulfua chì. . .117 . 3. .Vi khuẩn ôxy hóa khi nó chỉ làm acid hóa trong ống nghiệm ở điều kiện hiếu khí.Khử nitrate dị hóa hay “hô hấp nitrate” dưới ảnh hưởng của nitrate reductase A và các enzyme khác. Nó bao gồm một bình cách thủy chịu nhiệt để mẫu cần nghiên cứu.

Sự thay đổi áp suất trong áp kế sẽ được tính chuyển nhờ dung tích ôxy tiêu thụ.thio . các enolphosphate như PEP. CH2 R. ví dụ như 1-3 diphosphoglycerate.5 Kj. các acylphosphate.1. . 4. khử amin hóa. Các mối liên kết giàu năng lượng Tế bào sống tích trữ năng lượng vào các hợp chất và chúng có thể được giải phóng dễ dàng khi tế bào cần.Quá trình phosphoryl hóa cơ chất xảy ra trong tế bào chất. . Sự tích trữ và sử dụng năng lượng 4. các acyl .SH. sự di chuyển ở đây là do sự giao động của mẫu nghiên cứu gây nên. Phản ứng hóa học phổ biến là thủy phân mối liên kết esterphosphate.Quá trình phosphoryl hóa liên hệ với gradien electron và proton xảy ra ở màng tế bào chất. GTP. Ngoài ra còn có các hợp chất giàu năng lượng khác như các nucleotide UTP. Để loại bỏ ảnh hưởng của CO2 sinh ra trong quá trình hô hấp. TTP.mole -1) + Các acyl .118 cố định chắc chắn trên ống có mức nước di động. Bình chứa mẫu được nối với một nhánh của bình cong của áp kế và được điều chỉnh để có một dung tích khí nhất định ở phần trên của mẫu nghiên cứu. Hợp chất được tế bào sử dụng thuận lợi và thường xuyên nhất là ATP. trong đó sự thay đổi khí xuất hiện do khử carbonic.C-O∼P Ví dụ: PEP (G = . Trong cả hai trường hợp quá trình tổng hợp ATP phụ thuộc vào lượng ADP và phosphate vô cơ. người ta đặt một ống nhỏ giữa bình đựng mẫu nghiên cứu. Nguồn gốc hợp chất cao năng ATP có thể được tổng hợp bằng hai cơ chế: .53.ester như CoA . CTP.2.thioester: O R-C-S∼P Ví dụ: Coenzyme A 4. Với dụng cụ hô hấp kế này không những dùng để đo sự tiêu thụ ôxy phân tử mà còn có thể nghiên cứu các phản ứng enzyme khác nữa. ở đây người ta thấy có quá trình phosphoryl ôxy hóa và phosphoryl quang hóa (photophosphorylation). trong đó. chứa KOH 10% để hấp thụ CO2 do quá trình hô hấp sinh ra.

X) nhưng đôi khi cùng với các nucleotide purine và pirimidine khác.X.X = . Tất cả các oligo và polysaccharide được tổng hợp bằng cách kéo dài chuỗi saccharide có trước nhờ việc thêm đơn vị monosaccharide (X). Sự tổng hợp carbohydrate Tương tự như các thực vật bậc cao.Y.119 + Quá trình phosphoryl hóa cơ chất: trong quá trình này. vi sinh vật có khả năng tổng hợp các oligo .X.X.X. 5. Lượng các oligo . Hợp chất ôxy hóa là chất mang một mối liên kết phosphate giàu năng lượng và có thể được chuyển đến ADP. + UDP (n . Sự tổng hợp diễn ra theo phản ứng chung như sau: . năng lượng dự trữ này có thể được thu hồi bằng cách để lại các proton một bên màng mà người ta thường so sánh như một động cơ sản sinh ATP. 5.. Sự phân giải carbohydrate Carbohydrate nếu ở dạng hợp chất có trọng lượng phân tử lớn phải được thuỷ phân thành các dạng đường đơn để có thể đi vào các con đường phân giải đường để cung cấp năng lượng cần thiết cho hoạt động sống của cơ thể hoặc tạo ra các hợp chất trung gian cần cho sự chuyển hoá trao đổi chất.phosphoglyceraldehyd thành acid 1.Y.X.X..X. Cả khi vận chuyển electron trong quá trình hô hấp (hiếu khí hoặc kị khí) cũng như trong quang hợp đã tạo ra một gradien proton quan trọng và nó là năng lượng dự trữ (có thể được so với một tụ điện được nạp sẵn)..X.Y + UDP . + UDP ...X. X.X.nhánh) (n + 1 .X + UDP . Sự trao đổi carbohydrate 5.X = .X. Thành tế bào cũng chứa một lượng lớn polysaccharide.Y.1. Đơn vị monosaccharide này tham gia vào phản ứng ở dạng nucleotide monosaccharide được hoạt hóa. một phosphate vô cơ được liên kết (nhờ xúc tác bởi enzyme) với các sản phẩm của sự phân giải.X.2..X. Kiểu hình thành ATP này thường thấy ở sự phân giải glucose theo con đường EMP (giai đoạn ôxy hóa 3 . + Quá trình phosphoryl hóa cũng liên hệ với gradien proton.Y.và polysaccharide nội bào đạt tới 60% khối lượng khô của tế bào.X.X.Y.X. còn polysaccharide ngoại bào có thể vượt nhiều lần khối lượng của vi sinh vật.. thường là dẫn xuất của uridine diphosphate (UDP.và polysaccharide.X..X.nhánh) Trong trường hợp polysaccharide bao gồm hai loại monosaccharide liên tiếp (X và Y) phản ứng chung xảy ra qua hai bước: Bước 1: .3diphosphoglyceric và sự biến đổi hợp chất này thành acid pyruvic).

Y.. Sự phân giải protein Khác với lên men.120 Bước 2: . Một cách tương tự việc tổng hợp mannan của thành tế bào nấm men cũng bao gồm việc chuyển các nhánh mannose từ GDP . . cơ chất của quá trình thối rữa là protein.2.6 glucose) với sự phân nhánh α . Sự trao đổi protein 6. Đây là một trong những thành phần quan trọng của xác bã động vật.acetylglucosamine đến phân tử nhận.Y.1.Y + UDP Con đường tổng hợp polysaccharide phân nhánh ta còn biết rất ít. Trong việc tổng hợp tinh bột ở Chlorella và glycogen ở Arthrobacter có sự tham gia của ADP glucose. 6.Y. Trong dịch chiết tế bào của một số loài nấm sợi có chứa enzyme kitine sinthetase xúc tác phản ứng chuyển các nhánh N .Y = .3 hoặc α -1.X..4 được tổng hợp từ saccharose theo phản ứng sau: n saccharose n glucose + (fructose)n n saccharose (glucose)n + n fructose Sự hình thành những hợp chất này chính là nguyên nhân của hiện tượng nhầy nhớt khi nuôi cấy một số loại vi khuẩn trên môi trường giàu saccharose..Y. Hình 5.6-fructose) và các dextran (poly α-1.acetylglucosamine từ UDP .X. Sự phân giải các hợp chất hữu cơ chứa nitơ có ý nghĩa to lớn . X.Y.X.X.X.X.1.8 Sơ đồ tổng hợp glycogen .Y.X + UDP . thực vật và vi sinh vật. Glycogen tích lũy dưới dạng các hạt trong chất ngyên sinh mà chúng ta có thể phát hiện bằng cách nhuộm màu với iode (hình 5.8).. Các hợp chất polysaccharide cùng với hợp chất nitơ sẽ hình thành nên glycopeptide của thành tế bào.mannose đến chất nhận.Tổng hợp levan và dextran: Các levan (poly β.Tổng hợp glycogen: Khi có điều kiện ngoại cảnh hạn chế sự phát triển của vi khuẩn thì chúng có thể tích lũy glycogen nhờ hệ enzyme trùng hợp các glucose.

CO2 và nhiều sản phẩm trung gian khác. các acid amin thường được chuyển hóa nhờ quá trình khử amin.như sự tạo thành acid lactic từ alanine: CH3-CH(NH2)-COOH + H2O CH3-CHOH-COOH + NH3 .CH2.121 đối với nông nghiệp và đối với vòng tuần hoàn vật chất trong tự nhiên.Xạ khuẩn và nấm: Streptomyces griseus.CH (NH2) . Trong cơ thể vi sinh vật....COOH HOOC-CH=CH-COOH+ NH3 hay tạo α . như sự tạo thành acid fumaric từ acid aspactic: HOOC. trước hết vi sinh vật phải tiết ra protease ngoại bào và chuyển hóa protein thành các hợp chất có phân tử nhỏ hơn (polypeptide. Đáng chú ý là các vi sinh vật sau: .Vi khuẩn: Bacillus mycoides. . acid acetic từ glycine. Aspergillus niger. hoặc được xâm nhập ngay vào tế bào vi sinh vật sau đó mới chuyển hóa thành acid amin. fradiae. Một phần các acid amin này được vi sinh vật sử dụng trong tổng hợp protein. đây là tiền chất cho các phản ứng sinh tổng hợp hoặc cần thiết cho một số quá trình trao đổi chất. subtilis.. Rất nhiều loài vi sinh vật khác nhau tham gia vào quá trình ammon hóa trong tự nhiên. E. acid succinic từ aspactic. olygopeptide). coli. Penicillium camemberti.ketoglutaric từ acid glutamic. một phần khác được phân giải theo nhiều con đường khác nhau để tạo NH3. Những vi sinh vật không có khả năng sản sinh các enzyme phân giải protein ngoại bào sẽ không đồng hóa được các loại protein thiên nhiên. Muốn phân giải protein. Mucor spp.. S.). B. cũng như các hợp chất cao phân tử khác. A. awamori. Người ta gọi quá trình phân giải này là quá trình ammon hóa (ammonification).. . Khi phân giải các acid amin tùy theo từng loại phản ứng sẽ tạo các sản phẩm trung gian. quá trình khử carboxyl hoặc đồng thời vừa khử amin vừa khử carboxyl. Chúng chỉ có thể sử dụng được các sản phẩm thủy phân của protein. Pseudomonas aeruginosa. Các chất này tiếp tục được phân hủy thành acid amin nhờ các peptidase ngoại bào. Proteus vulgais. Trong quá trình khử amin thủy phân có sự liên kết với các ion H+ và OH..

các hợp chất diamine như acmatine.CH. cysteine.. vi sinh vật còn có khả năng phân giải một số chất đạm khác như urea. NH2 HOOC.) sẽ được lôi cuốn vào quá trình phân giải tạo năng lượng. acid uric. CO2. như sự tích lũy histamine có thể gây chứng co giật mạch máu.. Sự phân giải các chất này cùng tạo ra các sản phẩm trung gian như acid formic.122 Protein Enzyme phân giải protein ngoại bào Polypeptide Olygopeptide Amino acid Peptidase Các Amino acid nội bào Khử amin và Khử amin phân giải mạch carbon Chuyển amin và phân giải carbon Trực tiếp dùng trong quá trình sinh tổng hợp protein Nhiều sản phẩm sinh ra trong quá trình phân giải acid amin (rượu.. khi đó hầu hết carbon được chuyển thành CO2.(NH2)-CH2-SH + 2H2O H2S + NH3 + CH3COOH + HCOOH (cysteine) Khi quá trình thối rữa xảy ra trong điều kiện thoáng khí thì quá trình ôxy hóa được tiến hành đến cùng. acid hữu cơ . Trong quá trình phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (methionine. cystine) sẽ tạo ra H2S làm cho phân hoặc thịt cá có mùi hôi. Một số vi khuẩn có khả năng chuyển hóa tryptophan thành 2 chất có mùi hôi là indol và skatol. putrecine gặp nhiều trong thịt cá ôi thiu đều có tính độc. Nếu quá trình này diễn ra trong điều kiện kị khí thì có sự tích lũy nhiều sản phẩm trung gian nói trên. . acid acetic. Ngoài khả năng phân giải protein.. Nhiều loại amin do vi khuẩn sản sinh ra trong cơ thể người và động vật có tính độc.

Nitrosococcus.8-1. Vi khuẩn nitrate hóa điển hình là các loài thuộc giống Nitrobacter. Bacillus pasteurii.123 NH3. Trong urea có chứa 47% nitơ nhưng nếu không được vi sinh vật phân giải thành NH3 thì nguồn nitơ lớn lao này cũng trở thành vô ích đối với mọi thực vật.. .. Nitrospira. không tạo bào tử. Micrococcus urea.NH2 + 2H2O (NH4)2CO3 (NH4)2 CO3 ít bền vững do đó dễ dàng phân giải tiếp: (NH4)2CO3 2NH3 + CO2 + H2O NH3 sinh ra do sự phân giải hợp chất hữu cơ thường được ôxy hóa thành NO2.. các chất này có thể tham gia trực tiếp vào quá trình trao đổi chất và trao đổi năng lượng của tế bào. Ngoài ra còn có một số giống khác như Nitrococcus. Đây là những tế bào hình bầu dục.và tiếp tục ôxy hóa đến NO3-. thuộc loại G-. Rất nhiều vi khuẩn. xạ khuẩn. Proteus vulgaris.+ O2 Cũng như các vi khuẩn tự dưỡng hóa năng khác. Phân đạm ((NH4)2SO4 hoặc NH4Cl) sau khi bón ruộng cũng nhanh chóng chuyển thành NO3-. khuẩn lạc nhỏ bé và trong suốt. trong đó sản phẩm trung gian quan trọng nhất là hydroxilamin (NH2OH).Quá trình nitrite hóa được biểu thị bằng phương trình phản ứng sau: 2NH3 + 3O2 2HNO2 + 2H2O + Q Năng lượng sinh ra trong phản ứng này cũng được vi khuẩn nitrite sử dụng để đồng hóa CO2 của không khí. .0μm.CO. Nitrosospira và Nitrosocystis. Urea là chất hữu cơ chủ yếu trong nước tiểu của người và động.được sử dụng để đồng hóa CO2 không khí. Thực ra quá trình này trải qua nhiều phản ứng trung gian và tạo nhiều sản phẩm trung gian.. kích thước khoảng 0. nấm sợi sống trong đất có khả năng phân giải mạnh mẽ urea.+ Q NO2.. Đáng chú ý là các loài như Planosarcina urea. Enzyme xúc tác cho việc chuyển hydro là các enzyme của quá trình hô hấp hiếu khí.. Quá trình chuyển hoá này gọi là quá trình nitrate hóa. Quá trình phân giải urea xẩy ra rất đơn giản với sự xúc tác của urease: H2N. Vi khuẩn nitrite là bọn tự dưỡng bắt buộc với các chi đại diện là Nitrosomonas. Quá trình này bao gồm 2 giai đoạn: .Quá trình nitrate hóa được biểu thị bằng phương trình sau: NO3.. năng lượng sinh trong phản ứng ôxy hoá NO2.

Sự nhân đôi DNA tạo ra 2 phân DNA giống nhau và giống với phân tử DNA “mẹ”.Quá trình sao mã theo đó thông tin di truyền từ DNA được sao sang RNA.9).9 Sơ đồ sinh tổng hợp axit amin (theo Lehninger) .2.Quá trình dịch mã cho phép chuyển dịch thông tin di truyền thành các axit amin cấu trúc nên protein. 5. sau đó được chuyển đến ribosome. Sự tổng hợp protein Ba quá trình chủ yếu trong việc biến đổi và truyền đạt thông tin di truyền ở trong cơ thể là: . Công nghệ di truyền cho phép giải mã trật tự các nucleotide thành trật tự các axit amin đã được xác lập (h. Hình 5. .124 6. .

7. vi nấm Bước đầu tiên của quá trình đồng hóa lipid là sự phân giải thành glycerine (hoặc rượu đơn nguyên tử) và các acid béo. Trong nhiều trường hợp người ta phối hợp giữa tổng hợp hóa học và sinh tổng hợp.. Quá trình này được xúc tác nhờ lipase nội bào hoặc ngoại bào. Một số nấm mốc thuộc các chi như Penicillium và Aspergillus có thể ôxy hóa acid béo một cách không triệt để và tích lũy lại trong môi trường metylketone tạo mùi khó chịu (gặp trong dầu mỡ bị nhiễm mốc). So với các cơ chất khác thì đây là loại cơ chất được đồng hóa với tốc độ chậm. cứ qua một vòng ôxy hóa hòan toàn chuỗi carbon của phân tử acid béo lại mất đi 2C.ôxy hóa (hình 5. Trong phần lớn trường hợp. glycine. một số acid amin được hình thành nhờ hàng loạt biến đổi của các acid amin khác. Con đường tổng hợp axit amin ở vi sinh vật đã được nghiên cứu khá tỉ mỉ.acid amin đã được sinh tổng hợp bằng con đường lên men nhờ vi sinh vật như lysine. Sự phân giải lipid Lipid (ester phức tạp của glycerine và acid béo) và các chất sáp (ester phức tạp của acid béo và rượu bậc một) được nhiều vi sinh vật dùng làm nguồn thức ăn và năng lượng.CoA. Nhiều loại L . Cứ tiếp tục như vậy thì toàn bộ chuỗi carbon sẽ được chuyển hóa thành acetyl . . Hiện nay nhiều loại acid amin “tự nhiên” là sản phẩm của công nghệ sinh học bằng cách thủy phân protein.10).. chất này được chuyển hóa nhờ chu trình TCA hoặc chu trình acid glyoxilic.. trong trường hợp đó không cần sự chuyển amin. Sau khi được phosphoryl hóa. phương pháp này có nhiều ưu điểm là cho các dạng L . α . Sự trao đổi lipid 7.. fumarate. oxaloacetate.1.ketoglutarate.125 Phần lớn các vi sinh vật có khả năng tổng hợp 20 loại axit amin. alanine. xạ khuẩn. còn các acid béo đi vào chu trình β . quá trình này được thực hiện bởi nhiều nhóm vi sinh vật khác nhau như vi khuẩn. glycerine sẽ được chuyển hóa theo con đường EMP. Nguyên liệu dùng cho quá trình tổng hợp đó là những sản phẩm trung gian như pyruvate. Như vậy. tổng hợp hóa học hoặc sinh tổng hợp nhờ vi sinh vật.acid amin là dạng thường gặp trong cơ thể. nhóm amin được đưa vào giai đoạn cuối cùng của sinh tổng hợp nhờ sự chuyển amin. glutamic.

ôxy hóa axit béo Câu hỏi ôn tập của chương 5 1. Các kiểu trao đổi chất ở vi sinh vật? 6. Cơ chế của quá trình sinh năng lượng của hô hấp hiếu khí và kị khí? 3. Các con đường phân giải hexose? 5. Vai trò của vi sinh vật trong tuần hoàn carbon? . Vai trò của vi sinh vật trong vòng tuần hoàn nitơ? 9. Sự phân giải các hợp chất protein? 8.126 Hình 5. Các kiểu hô hấp ở vi sinh vật? 4. Cơ chế và ý nghĩa của chu trình acid tricarboxylic (ATC)? 7.10: Chu trình β. Các hình thức vận chuyển các chất qua màng? 2.

Khả năng chuyển điện tử cho nitrate và sulfate.1: Sơ đồ quá trình hô hấp hiếu khí.Khái niệm chung Nhiều vi khuẩn hiếu khí có thể sinh trưởng được trong điều kiện không có oxy. nhờ đó vi sinh vật thu được nhiều năng lượng hơn so với quá trình lên enzyme (hình 6. ammonium hóa nitrate và khử nitrogen Hô hấp nitrate hay là khử dị hoá nitrate khác với quá trình khử đồng hoá nitrate ở chỗ. có một số ít vi khuẩn (Clostridium aceticum) lại có thể dùng CO2 làm chất nhận hydro trong hô hấp kị khí. lúc đó chúng dùng nitrate (hoặc sulfate) làm chất nhận điện tử cuối cùng. .1) Ngoài ra.127 Chương 6 Hô hấp kị khí I. Hình 6. mà không cần có sự tham gia của oxy phân tử. kị khí và lên enzyme II. giúp cho vi khuẩn thực hiện tương đối đầy đủ quá trình oxy hóa hoàn toàn cơ chất. mà thường được tiết ra ngoài môi trường. vì vậy gọi là hô hấp nitrate (hoặc hô hấp sulfate). các sản phẩm khử trong trường hợp này không được tế bào sử dụng tiếp. Hô hấp nitrate.

người ta cho rằng quá trình amon hoá nitrate và phản nitrate hoá có chung giai đoạn đầu (hình 6. ví dụ một số loài thuộc các chi Bacillus.2) Hình 6.128 Rất nhiều vi khuẩn hiếu khí khi sống trong điều kiện kị khí có khả năng dùng nitrate làm chất nhận hydro cuối cùng.3: Chuỗi hô hấp của vi khuẩn nitrate hóa Nhiều loại vi sinh vật có khả năng dùng nitrate làm nguồn thức ăn nitơ. khử đồng hoá nitrate qua nitrit thành amoniac. trong khi đó một số khác lại khử nitrate để giải phóng nitơ phân tử (N2) hoặc (N2O). Aerobacter và E. coli khử nitrate thành amoniac (quá trình amon hoá nitrate).2: Sơ đồ quá trình hô hấp nitrate Vi khuẩn nitrate hóa thuộc chi Nitrobacter dùng nitrite làm nguồn năng lượng. hợp chất này sẽ tham gia tổng hợp trong tế bào của chúng: − NO 3 → NO − → x → NH2OH → NH + 2 4 Khi ammonium hoá nitrate ta có: . Có thể biểu thị chuỗi hô hấp của vi khuẩn nitrate như sau: Hình 6.

vì nitrate có thể mất hết rất nhanh. mà không có khả năng khử nó thành NH 4 . ở đây phân nitrate dùng bón cho lúa đạt hiệu quả rất ít.129 − 8[H] + H+ + NO 3 → NH + + OH. M. Hô hấp sulfate Phần lớn vi sinh vật và thực vật có thể dùng sulfate làm nguồn dinh dưỡng lưu huỳnh để tổng hợp cáchợp chất của cơ thể chứa S (acid amin chứa S. Vi khuẩn phản nitrate hóa là tác nhân sinh học làm nghèo nitrogen của đất (còn phản nitrate hóa học xảy ra mạnh khi đất quá nhiều acid) quá trình này xảy ra mạnh khi đất bị kỵ khí (đất ngập nước. III.+ 2H2O 4 → N2 + 6H2O Còn khi khử nitrate hoá: − 10[H] + 2H+ + NO 3 Khi hô hấp nitrate. Năng lượng sinh ra với nitrate là chất nhận hydro chỉ thấp hơn trong trường hợp chất nhận là oxy phân tử khoảng 10%. Do vi khuẩn phản nitrate hóa có khả năng dùng nitrate chủ yếu làm + chất nhận điện tử. enzyme. P. cho nên muốn nuôi cấy chúng phải cần bổ sung thêm nguồn đạm vào môi trường + (pepton hoặc NH 4 ). N2O hay NO.)hoặc khi dùng phân đạm (nitrate) cùng với phân chuồng trên những ruộng lúa ngập nước.. Nhiều vi khuẩn phản nitrate hóa có khả năng dùng không những nitrate mà cả nitrite làm chất nhận hydrogen. Giai đoạn đầu của quá trình khử nitrate được xúc tác nhờ nitratereductase. denitrificans. vì vậy quá trình phản nitrate hóa đảm bảo hoạt tính sinh trưởng của vi sinh vật ở mức độ cao.. đặc biệt là khi phản nitrate hoá.coli thì chuỗi vận chuyển điện tử tương tự như trong trường hợp hiếu khí.. denitrificans còn khử được cả N2O. chỉ có citocromo-oxydase được thay bằng nitratereductase..).. chỉ khoảng mười giờ sau khi bón. Tùy theo loài vi khuẩn mà sản phẩm của khử nitrate dị hóa và nitrite dị hóa là N2. những loài thường gặp như: P.. Chỉ có một . Hydrogenomonas agilis. vì oxy phân tử đã ức chế tế bào vi khuẩn tổng hợp enzyme nitratereductase và nitritereductase. cơ chất hữu cơ được oxy hoá hoàn toàn đến CO2 và H2O. aeruginosa. Khi đất thoáng khí quá trình phản nitrate bị ức chế. Ở nhiều loại vi sinh vật có khả năng hô hấp nitrate như E. P. fluorescens. Đó là quá trình khử đồng hóa sulfate. ATP cũng được tạo ra nhờ kết quả của quá trình phosphoryl hóa trong chuỗi hô hấp. Vi khuẩn phản nitrate hóa phân bố rất rộng trong tự nhiên. Micrococcus denitrificans. không tơi.

Mặt khác. nhưng các vi sinh vật thực hiện quá trình này đều thuộc loại kị khí bắt buộc. tức là những nơi có quá trình phân giải kỵ khí các hợp chất hữu cơ.130 số ít vi sinh vật thuộc 2 chi Desulfovibrio và Desulfotomaculum lại dùng sulfate làm chất nhận hydro cuối cùng trong hô hấp kị khí. Bằng cách khử sulfate những vi sinh vật của nhóm này đã tham gia tích cực vào chu trình chuyển hóa chuyển hóa lưu huỳnh trong tự nhiên. amino acid) một số vi khuẩn khử sulfate hóa có khả năng tự dưỡng cacbon. Hàng triệu năm nay... còn trong bùn có H2S số lượng của chúng lên tới 107 tế bào. bò. Desulfotomaculum ruminis tham gia tích cực vào quá trình khử sulfate và tạo thành H2S trong những dạ dày cỏ của động vạt nhai lại (trâu. . do sinh ra H2S có thể làm cá chết hàng loạt. H2S là sản phẩm của quá trình được sinh ra theo khử ứng: 2 8[H] + SO 4− → H2S + 2H2O + 2OH- Vi khuẩn thực hiện quá trình hô hấp sulfate trước khi bị khử thành H2S phải trải qua nhiều giai đoạn trung gian mà có những giai đoạn cho đến nay người ta chưa biết được một cách chắc chắn: 2 SO 4− → APS → SO 2− → → → S23 (Adenosin-5-phosphosulfate) Năng lượng sinh ra trong quá trình hô hấp sulfate được vi sinh vật sử dụng để đồng hóa các hợp chất hữu cơ (acid hữu cơ. H2S làm ăn mòn các bộ phận kim loại của các công trình chôn sâu dưới đất hoặc dưới nước. chúng chỉ có thể dùng sulfate làm chất nhận hydro cuối cùng trong quá trình oxy hóa cơ chất. Trong 1ml nước bẩn chứa 104 – 106 vi khuẩn khử sulfate. chúng dùng hydro phân tử để khử sulfate và sử dụng năng lượng sinh ra trong quá trình hô hấp sulfate để đồng hóa CO2 trong không khí. 4H2 + H2SO4 → H2S + 2H2O + Q Vi khuẩn khử sulfate hóa có thể phân giải pyruvate để hình thành H2S: 4CH3COCOOH + H2SO4 → CH3COOH +4CO2 +H2S Vi khuẩn khử sulfate hóa thường gặp ở những vùng bùn lầy có khí H2S. Quá trình hô hấp sulfate cũng tương tự như quá trình hô hấp nitrate. chúng tham gia tích cực vào quá trình hình thành quặng lưu huỳnh. mỏ dầu hỏa.).

131 Thiobacillus denitrificans Thiobacillus thiooxidans Hình 6. Chúng lấy năng lượng cho hoạt động sống của mình từ quá trình oxy hóa kỵ khí các hợp chất khoáng hay các hợp chất hữu cơ đơn giản như acid formic hay một số acid béo bậc cao.5: Khuẩn lạc Methanosarcina acetivorans.4: Một số loài vi khuẩn lưu huỳnh IV. . Hô hấp carbonate tạo thành methane Những vi sinh vật này có khả năng hình thành methane từ carbonate e. Những vi sinh vật sinh methane bao gồm 4 nhóm phụ khác nhau về hình thái: -Các vi sinh vật sinh methane không sinh bào tử (Methanobacterium) -Các vi sinh vật sinh methane sinh bào tử (Methaneobacillus) -Các vi sinh vật hình cầu sinh methane (Methanococcus) -Các 8 cầu khuẩn sinh methane (Methanosarcina) Hình 6.

Sơ đồ giả thuyết về sự hình thành CH4 từ CO2 hoặc acetate ở vi khuẩn sinh methane có thể được trình bày như sau: . Sản phẩm trung gian của quá trình chuyển hoá là CO2 và H2. Methaneobacterium barkeri. nơi mà điều kiện kỵ khí rất thuận lợi cho chúng phát triển.132 Methanobacterium formocicum Methanospirillum sp.strain TM20-1 Hình 6. Có khả năng chuyển hoá CO thành CH4. 4CO + 4H2O → 4 CO2 + 4H CO2 + 4H2 → CH4 + H2O 4CO + 2H2O → CH4 + 3CO2 Vi khuẩn sinh methane được chứng minh là loại vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp mạnh vitamin B12. đầm và đáy biển.6: Hình dạng một số loài vi khuẩn methane Người ta thường gặp những vi sinh vật sinh methane ở đáy những ao hồ.

Acetyl-CoA sẽ tiếp thu 3 phân tử CO2 để cacbocyl hóa thành acid pyruvic. 1phân tử CO2 khác bị CO dehydrogenase khử thành CO. Hô hấp carbonate tạo thành acetate Quá trình hô hấp carbonate tạo thành acetate mới được phát hiện gần đây ở vi khuẩn methane.133 Hình 6. 1phân tử CO2 bị [H] có năng lực khử thành CH3-X. Hình 6. Qua quá trình cacbocyl hóa CH3X sẽ sinh ra Acetyl-X. Acid pyruvic thông qua các con đường trao đổi chất quen thuộc để tổng hợp ra các chất hữu cơ cần thết cho tế bào. sau đó thành Acetyl-CoA.7: Sơ đồ giả thiết sinh tổng hợp VTM B12 ở vi khuẩn sinh methane V.8: Hình dạng Vi khuẩn Methanobacterium thermoautotrophicum Kết quả nghiên cứu ở vi khuẩn Methanobacterium thermoautotrophicum cho thấy như sau: Theo con đường này. . khử sulfate. Dưới sự xúc tác của piruvate siterase.

Vai trò của vi khuẩn methane trong thiên nhiên và trong đời sống con người ? . Vị trí vi khuẩn. nấm men trong các hệ thống phân loại hiện nay ? 4. nấm mốc. xạ khuẩn. Những điểm giống nhau và khác nhau giữa hô hấp nitrate và hô hấp sulfate. So sánh những điểm khác nhau giữa hô hấp hiếu khí và hô hấp kỵ khí ? 2.134 Câu hỏi ôn tập chương 6 1. 3.

Là một coenzyme dễ khuếch tán. còn năng lượng thì được sinh ra nhờ sự phosphorin hóa cơ chất. tức là NADH phải được hồi phục lại thành dạng oxi hóa. song lại dẫn đến việc tạo ra hai phân tử trung gian quan trọng. gắn vào một enzyme khác. Trong trường hợp của nấm men. Trong sự tạo thành hai phân tử acid 1. sự oxi hóa tiếp tục chỉ có thể xảy ra khi một phân tử NAD+ có mặt để tiếp nhận các điện tử vừa được giải phóng ra. trong đó một số nguyên tử của nguồn năng lượng (chất cho điện tử) trở nên có tính khử hơn. glixeraldehit-3-phosphate (GAP). một phản ứng oxi hóa-khử thứ hai xảy ra và các sản phẩm lên men (chẳng hạn ethanol và CO2. hoặc acid lactic). trong khi một số nguyên tử khác trở nên oxi hóa hơn. Sự "tắc đường" này có thể được khắc phục trong lên men bằng cách oxi hóa NADH trở lại thành NAD+ nhờ các phản ứng khử piruvat thành một trong hàng loạt các sản phẳm lên men khác nhau. enzyme khử piruvat thành acid lactic). sẽ được tạo thành. piruvat bị khử thành acid lactic. piruvat bị khử thành ethanol với sự giải phóng CO2.144 Chương 8 Các quá trình lên men I. và nếu như toàn bộ NAD+ bị chuyển thành NADH thì phản ứng oxi hóa glucose sẽ bị đình chỉ.3 điphosphoglixeric có hai phân tử NAD+ bị khử thành NADH. Tuy nhiên. ở các vi khuẩn lactic. NADH có thể tách khỏi GAP-dedihydrogenase. Đường phân được chia thành ba bước chính. cũng còn được gọi là con đường Embden-Meyerhof. (chẳng hạn lactat-dedihydrogenase. năng lượng được dự trữ dưới dạng ATP và hai phân tử piruvat được tạo thành. . Con đường trao đồi chất chung đối với sự lên men glucose là con đường đường phân. không có các phản ứng oxi hóa và cũng không giải phóng năng lượng. Trong bước hai. song kết quả thật sự đều giống nhau. để cho các phản ứng thu nhận năng lượng của lên men có thể tiếp tục. Con đường Embden-Meyerhof chung cho các quá trình lên men (EM) : Bước chuyển hóa Lên men là một quá trình oxi hóa-khử cân bằng nội sinh. mỗi bước gồm một số phản ứng riêng biệt do enzyme xúc tác. rồi lại lập tức khuếch tán trở lại sau khi NADH đã được oxi hóa thành NAD+ để lặp lại chu trình một lần nữa. sự oxi hóa-khử xảy ra. Nhiều con đường khử piruvat cũng gặp ở các vi sinh vật nhân sơ khác. Trong bước ba. một tế bào chỉ chứa một lượng nhỏ NAD+. Bước một gồm các phản ứng chuẩn bị. NAD+.

145 Trong bất kỳ một phản ứng thu năng lượng nào. Shigella. Có . Salmonella. Trong trường hợp này.1 trình bày một số kiểu lên men chính được phân loại dựa trên các sản phẩm được tạo thành. acid lactic. Đó là các quá trình lên men rượu. Enterobacter Clostridium butyricum Clostridium acetobutylicum Clostridium kluyveri Clostridium aceticum Acetobacterium Methanothrix Methanosarcina Acid butiric Butanol Caproat Homoacetic Sinh methane II.1: Các quá trình lên men phổ biến ở vi sinh vật Kiểu lên men Lên men rượu Lên men lactic đồng hình Lên men lactic dị hình Acid propionic Acid hỗn hợp Phản ứng tổng thể Hexose → 2 Ethanol + 2 CO2 Hexose → 2 Lactat + 2 H+ Hexose → Lactat + Ethanol + CO2 + H+ Lactat → Propionat + Acetate + CO2 Hexose → Ethanol + 2. acid propionic. acid butiric và acid homoacetic. Klebsiella. tức là glucose. acid hỗn hợp. sự khử NAD+ tại một bước trong con đường đường phân sẽ được cân bằng bởi sự oxi hóa nó tại một bước khác.3Butandiol + Xucxinat + Lactat + Acetate + Focmat + H2 + CO2 Hexose → Butirat + Acetate + H2 + CO2 Hexose → Butanol + Acetate + Aceton + Ethanol + H2 + CO2 Ethanol + Acetate + CO2 → Caproat + Butirat + H2 Fructose → 3 Acetate + 3 H+ 4 H2+ 2 CO2 + H+ → Acetate + 2 H2O Acetate + H2O → CH4 + − HCO 3 Vi sinh vật thực hiện Nấm men Zymomonas Streptococcus Một số Lactobacillus Leuconostoc Một số Lactobacillus Propionibacterium Clostridium propionicum Các vi khuẩn đường ruột Escherichia. sự oxi hóa bao giờ cũng phải được cân bằng với sự khử và phải có một chất nhận nào đó đứng chờ sẵn để nhận một điện tử vừa được tách ra. Tính đa dạng của lên men Bảng 6. Bảng 6. (Các) sản phẫm cuối cùng cũng phải nằm trong trạng thái cân bằng oxi hóa-khử với cơ chất ban đầu.

Bảng 6. Chẳng hạn. C6H6O3) theo con đường sau : Phloroglucinol (C6H6O3) +3 H2O → 3 acetate. như C. focmat. 2: Một số quá trình lên men không thông thường Kiểu lên men Acetylen Glycerin Phản ứng cân bằng Vi sinh vật thực hiện tổng thể 2 C2H2 + 3 H2O → Ethanol + Pelobacter acetylenicus Acetate + H+ − Acetobacterium spp.146 nhiều quá trình lên men được phân loại dựa trên cơ chất được lên men thay vì các sản phẩm. Một số ví dụ được nêu trên bảng 6.5 kJ/phản ứng Nhiều quá trình lên men không thông thường chỉ được thực hiện bởi một nhóm rất hạn chế các vi khuẩn kị khí. amoniac và H2. Nhiều trong số các vi khuẩn này có thể được xem như các chuyên gia về trao đổi chất vì chúng có khả năng phân giải một hoặc nhiều cơ chất mà các vi khuẩn khác không phân giải được. và trong một sồ trường hợp chỉ bởi một vi khuẩn duy nhất. 4 Glycerin + 2 HCO → 3 7 Acetate + 5 H+ + 4 H2O Resocxinol 2 C6H4(OH)2 + 6 H2O → 4 (một hợp chất Acetate + Butirat + 5 H+ thơm) Xinamat (một 2C9H7O2 + 2 H2O → C9H9O2 + hợp chất thơm) Benseat + Acetate + H+ Phlorogluxinol C6H6O3 + 3 H2O → (một hợp chất 3 Acetate + 3 H+ thơm) Putresxin 10 C4H12N2 + 26 H2O → 6 Acetate + 7 Butirat + 20 NH4+ + 16 H2 + 13 H+ Xitrat Xitrat + 2 H2O → Focmat + 2 − Acetate + HCO 3 + H+ Aconitat Clostridium spp. CO2. chưa phân loại Bacteroides sp. Acetovibrio multivorans Pelobacter masiliensis Pelobacter acidigallici Các vi khuẩn kị khí gram dương không sinh bào tử. ΔGo' = -142. và amoniac.2. Các loài Clostridium khác. vi khuẩn Pelobacter acidigallici lên men hợp chất thơm phloroglucinol (1. purinolyticum lên men các purin như xantin hoặc ađenin với sự tạo thành acetate. Chẳng hạn. Aconitat + H++ 2 H2O → 2 CO2 Acidaminococcus fermentans + 2 Acetate + H2 . nhiều vi khuẩn kị khí tạo thành bào tử (chi Clostridium) lên men các amino acidvới sự sản sinh acetate.3. acidiurici và C. Còn những bọn kị khí khác thì lên men các hợp chất thơm.5-benzenetriol.+ 3H+.

Propionigenium modestum thực hiện phản ứng sau đây : Xucxinat2. năng lượng sinh ra không đủ để ghép đôi với sự tổng hợp ATP trực tiếp nhờ phosphorin hóa cơ chất. ΔGo' = -20. tuy nhiên nó lại được dùng làm phản ứng thu năng lượng duy nhất cho sinh trưởng của vi khuẩn. Ví dụ về kiểu này có các quá trình lên men của Propionigenium modestum hoặc Oxalobacter formigenes.+ H2O → Propionat.147 Glioxilat Xucxinat Oxalat Malonat 4 Glioxilat +3 H+ + 3 H2O → 6 CO2 + 5 H2 + Glicolat Xucxinat + H2O → Propionat + − HCO 3 Vi khuẩn gram âm chưa phân loại Propionigenium modestum Oxalat + H2O → Focmat + Oxalobacter formigenes − HCO 3 Malonat + H2O → Acetate + Malonomonas rubra − Sporomusa malonica HCO 3 III. cả hai đều gắn sự lên men các acid đicacboxilic với các bơm ion sinh năng lượng liên kết với màng.. Trong những trường hợp này sự phân giải cơ chất được gắn liền với những bơm ion được dùng để tạo nên một građien proton hoặc natri qua màng. Sở dĩ như vậy là vì sự loại CO2 khỏi xucxinat . tuy nhiên các hợp chất này vẫn trợ giúp sinh trưởng lên men của một cơ thể nào đó.5 kJ/phản ứng Phương trình tổng thể này thu không đủ năng lượng tự do để ghép đôi với sự tổng hợp ATP trực tiếp nhờ phosphorin hóa cơ chất.+ HCO3. Lên men không có sự phosphorin hóa cơ chất Với một số cơ chất.

Một ATPse chuyển vị Na+ nằm trên màng của P.khỏi tế bào sẽ tạo nên một động lực nhờ proton (proton motive force = PMF) có khả năng ghép đôi với sự tổng hợp ATP nhờ một ATPase chuyển vị proton nằm trên màng. Sau đó sự xuất focmat.1: Lên men liên kết với bơm ion ở vi khuẩn (năng lượng thu được không qua phosphorin hóa cơ chất) (qua metilmalonil-CoA và đecacboxilase liên kết với màng bởi Propionigenium modestum đã được ghép đôi với sự xuất Na+ qua màng tế bào chất. modestum sử dụng građien này để hoạt hóa sự tổng hợp ATP. ΔGo' = -26..tiêu thụ một proton.+ H2O → Focmat. oxalat tồn tại dưới dạng ion hóa oxalat-.148 Hình 6. . Oxalobacter formigenes thực hiện sự lên men oxalat : Oxalat2.7 kJ/phản ứng ở pH trung tính.+ HCO3. và sự loại cacboxil thành focmat.

con số cần thiết để tạo thành một ATP. Như có thể thấy trên hình 2. hoặc không có khả năng ghép đôi với sự phosphorin hóa cơ chất.1). Trong đa số trường hợp. Và khi cộng hai phản ứng lại thì phản ứng tổng thể sẽ là một phản ứng toả nhiệt và có thể trợ giúp sinh trưởng của cả hai đối tác trong hỗn hợp cộng dưỡng.4 kJ /phản ứng Sinh methane 4H2+ CO2 . bọn lên men ethanol thực hiện một phản ứng không thuận lợi về mặt năng lượng tự do (ΔGo' dương). Do vậy. Tuy nhiên. cũng không thể lập tức bị coi là không có khả năng trợ giúp sinh trưởng cho một vi khuẩn. dù chỉ thu được dưới 31.111. Kẻ tiêu thụ H2 có thể là bất kỳ một cơ thể nào trong số các vi khuẩn khử sunfat. bản chất của một phản ứng cộng dưỡng có liên quan tới khí dihydro (H2) sinh ra bởi một trong hai đối tác và được tiêu thụ bởi đối tác kia.130. một hiện tượng mà hai sinh vật khác nhau có thể cùng nhau phân giải một chất nào đó . cộng dưỡng cũng còn được gọi là sự chuyển H2 liên loài. Điều cần rút ra từ những sự lên men này là : các phản ứng. tuy nhiên. H2 được sinh ra bởi đối tác lên men rượu lại là một chất cho điện tử đầy giá trị đối với quá trình hình thành methane do một vi khuẩn sinh methane thực hiện. cho đến nay.và bảo toàn năng lượng của quá trình phân giải đến mức không cơ thể nào trong hai cơ thể đó một mình có thể làm được. Hiện tượng cộng dưỡng (syntrophy) Trong vi sinh vật học có nhiều ví dụ về hiện tượng cộng dưỡng. Hãy xem xét trường hợp cộng dưỡng liên quan tới quá trình lên men ethanol thành acetate và sự sản sinh methane sau đó.+2H+ +19. IV. sự tạo thành ATP theo cơ chế hóa thẩm vẫn xảy ra dựa vào một bơm Na+/H+ kết hợp với sự loại CO2 khỏi các acid hữu cơ.3 kJ/phản ứng → CH4 + 2CH3COO . và vi khuẩn sinh methane. Lên men ethanol 2CH3CH2OH + 2H2O → 4H2 + 2CH3COO.149 Điều thú vị và độc đáo trong trao đỗi chất của cả Propionigenium modestum lẫn Oxalobacter formigenes nằm ở chỗ sự tổng hợp ATP xảy ra không cần cả phosphoril hóa cơ chất lẫn chuỗi vận chuyển điện tử. Nếu như phản ứng có thể ghép đôi được với một građien ion thì sự sản sinh ATP vẫn có khả năng xảy ra và do vậy vẫn có sinh trưởng (Hình 6. lên men homoacetate.7 kJ/phản ứng → CH4 + 2H2O Phản ứng cộng dưỡng 2CH3CH2OH + CO2 .8 kJ.

+ 2H2O → 2acetate. Bản thân thực vật và nhiều loài nấm cũng tích lũy ethanol dưới các điều kiện kị khí. Song nếu H2 vừa sinh ra trong phản ứng được tiêu thụ ngay bởi một cơ thể đối tác (như một vi khuẩn sinh methane) thì Syntrophomonas lại sinh trưởng rất tốt trong ống giống cấy chung với bọn tiêu thụ H2. nấm men là những cơ thể hô hấp hiếu khí. ΔGo' = +48. V. đặc biệt là các chủng thuộc loài Saccharomyces cerevisiae. acetaldehit bị khử thành ethanol nhờ alcohol-đedihydrogenase chứa NADH. Trong bước sau. 1. Sự chuyển hóa piruvat thành ethanol gồm hai bước. Lên men rượu nhờ nấm men và vi khuẩn Ethanol là một trong số các sản phẩm lên men phổ biến nhất gặp ở vi sinh vật. Syntrophomonas không thể mọc được trên butirat. Nhiều vi khuẩn kị khí và hiếu khí cũng tạo thành ethanol như các sản phẩm chính hoặc sản phẩm phụ khi lên men các hexose hoặc pentose. Giống như đa số nấm.150 Một ví dụ khác của hiện tượng cộng dưỡng là sự oxi hóa butirat thành acetate cộng với H2 bởi vi khuẩn cộng dưỡng oxi hóa acid béo Syntrophomonas: Butirat. Trong bước một. nhưng khi vắng mặt không khí chúng sẽ lên men hiđrat cacbon thành ethanol và CO2.+ H+ + 2H2 . Sự tạo thành ethanol nhờ nấm men Sự lên men glucose thành ethanol và CO2 nhờ Saccharomyces cerevisiae diễn ra theo con đường Embden-Meyerhof. Vi sinh vật sản sinh ethanol chủ yếu là nấm men.2 kJ/phản ứng Sự biến đổi năng lượng tự do của phản ứng này rất không thuận lợi và trong ống giống thuần khiết. piruvat được loại CO2 thành acetaldehit nhờ piruvat-đecacboxilase với sự tham gia của tiaminpirophosphate. Glucose 2 Piruvat 2NAD 2NADH 2 Acetaldehyt 2CO2 2Ethanol .

đồng thời hiệu suất ethanol và CO2 sẽ giảm xuống. và do vậy không thể hoạt động như một chất nhận điện tử được nữa.CHOH -SO3Na Lúc đó glycerin sẽ xuất hiện như một sản phẩm lên men mới. Các dạng phương trình Neuberg Các phương pháp và phát hiện của Carl Neuberg về lên men rượu không chỉ có ý nghĩa lịch sử. Lúc này. Na2HPO4) thì glycerin cũng được tạo thành vì acetaldehit bị chuyển thành ethanol và acetate qua phản ứng hóa hai. Phương trình phản ứng diễn ra như sau : Glucose + Dihydrosulfit → Glycerin + Acetaldehit-sulfit + CO2 Phương trình lên men cải biến này được gọi là dạng lên men Neuberg 2. dihydro tách ra do triosephosphatedehydrogenase xúc tác sẽ được tiêu thụ. Ông đã khám phá ra rằng. nhờ vậy trạng thái oxi hóa-khử sẽ được cân bằng. dihydroxiacetonphosphate được sử dụng làm chất nhận điện tử và bị khử thành glycerin-3-phosphate rồi tiếp tục bị loại phosphate để trở thành glycerin.151 Bằng sự chuyền H này. acetaldehit bị bắt giữ. không chỉ glucose mà cả piruvat cũng được nấm men lên men và acetaldehit xuất hiện như một sản phẩm trung gian có thể bị bắt giữ bởi dihydrosulfit. Dihydrosulfit vốn không độc đối với nấm men. Nguyên lý của nó là. Phương trình lên men có tên là dạng lên men Neuberg 3 và được viết như sau : Glucose + 2H2O → Ethanol + Acetate + 2Glycerin + 2CO2 Dạng lên men thông thường được Neuberg gọi là dạng lên men 1. Nếu bổ sung dihydrosulfit vào một môi trường chứa glucose đang được nấm men lên men thì acetaldehit sẽ bị kết tủa do tạo thành phức chất : CH3-CHO + NaHSO3 → CH3. và do vậy không còn hoàn thành được chức năng của một chất nhận điện tử. thay cho acetaldehit. Khi bổ sung các chất kiềm (NaHCO3. . 2. Lên men với sự có mặt của dihydrosulfit đã được sử dụng trong công nghiệp để sản xuất glycerin.

và hậu quả là. Cơ chế thứ hai chịu trách nhiệm đối với hiệu ứng Pasteur là cơ chế điều hoà bằng enzyme dị lập thể. Tuy nhiên. sự tiêu thụ glucose (cho lên men) vẫn tăng. Sự loại dihydro xảy ra trong phản ứng oxi hóa glyceraldehyt-3-phosphate cần ADP và phosphate vô cơ (Pvc) : Glyceraldehyt-3-phosphate + NAD + Pvc NAD + ATP H → 3-phosphoglicerate + Do vậy. sự tạo thành ethanol cũng sẽ giảm. sự phosphorin hóa chuỗi hô hấp cũng cạnh tranh ADP và phosphate để phát sinh ATP. Trái lại. sự lên men rượu chỉ tạo thành một vài ATP tính trên mỗi phân tử glucose. .6-điphophat nhờ ATP và bị kìm hãm dị lập thể bởi ATP. sự chuyển hóa cơ chất (glucose) qua con đường EM phụ thuộc vào sự có mặt của ADP và phosphate. Đó là enzyme không thuận nghịch đầu tiên của con đường EM. Nó xúc tác cho sự phosphorin hóa fructose-6-phosphate thành fructose-1. Hiệu ứng Pasteur Hiệu ứng Pasteur là sự ức chế lên men rượu (hay quá trình đường phân) bởi oxi (tức là bởi hô hấp hiếu khí). tế bào phải sử dụng nhiều glucose. ATP được tạo thêm rất nhiều nhờ sự quá trình phosphorin hóa chuỗi hô hấp. Trong điều kiện thoáng khí. Enzyme chìa khóa dị lập thể điều hòa sự sử dụng glucose trong nấm men lên men rượu là phosphofructokinase. khi oxi xâm nhập vào môi trường. do đó làm giảm sự tiêu thụ đường này. kìm hãm cả sự hấp thu glucose. đó là sự cạnh tranh ADP và phosphate vô cơ giữa hai quá trình phosphorin chuỗi hô hấp và phosphorin hóa cơ chất. Sự chuyển sang hô hấp không những làm giảm sự tạo thành ethanol và CO2 mà còn làm giảm sự hấp thụ đường.152 3. Để duy trì sự cung cấp năng lượng. Lúc đó nồng độ nội bào của ADP và phosphate giảm. bởi vậy người ta thấy ngay trong điều kiện thóang khí. ADP và phosphate lại trở nên có sẵn đối với phản ứng loại dihydro của glyceraldehyt-3-phosphate. Tỉ lệ của ATP/AMP trong trường hợp này rất thấp. Hình 3 tóm tắt những quan hệ điều hòa chủ chốt trong hiệu ứng này. Có hai cơ chế chịu trách nhiệm đối với hiện tượng này. sự chuyển hóa glucose và do vậy. Khi dùng đinitrophenol (DNP) để làm bất hoạt phosphorin hóa chuỗi hô hấp. Glucose-6-phosphate kìm hãm dị lập thể hexokinase. Một mặt. trong điều kiện hiếu khí. Sự kìm hãm theo cơ chế liên kết ngược này làm tăng nồng độ glucose-6-phosphate trong tế bào do tính thuận nghịch của phản ứng enzyme trước đó.

Hoạt tính của phosphofructokinase cũng bị kìm hãm bởi xitrat. nồng độ giảm đi. Ngoài ra. khả năng sống sót ở nhiệt độ cao. 4. ở E. Các tính chất mong muốn của một quá trình sản xuất ethanol công nghiệp phụ thuộc nhiều vào việc lựa chọn chủng vi sinh vật dùng trong lên men.Kỹ thuật sản xuất ethanol nhờ nấm men Các loài nấm men dùng trong sản xuất ethanol là các nấm đơn bào mang nhiều đặc điểm phong phú về sinh trưởng và phát triển. glucose-6-phosphate. chỉ có những khác biệt về loại chất hiệu ứng. còn nồng độ của fructose-1. coli) và ở mô động vật. Nếu van bị đóng. Các chủng này phải có một năng suất sản phẩm cao trên một đơn vị cơ chất được sử dụng. còn các cơ chế điều hòa thì thường có tính đặc hiệu loài và đặc hiệu chủng. Bởi vậy một tỉ lệ ATP/AMP thấp như trong lên men lại kích thích sự hấp thu và sự trao đổi glucose.6-diphosphate và các triose-phosphate trước và sau khi chuyển từ điều kiện nuôi kị khí sang điều kiện nuôi hiếu khí. tính chịu cồn cần thiết. Hiệu ứng Pasteur cũng gặp ở vi khuẩn (chẳng hạn. nồng độ glucose-6-phosphate và fructose-6-P của tế bào tăng nhanh. ở E. tính bền trong các điều kiện lên men và tính chịu pH thấp. một tốc độ lên men cao. Các loài được quan tâm trước hết trong sản xuất công nghiệp là Saccharomyces cerevisiae. Ngay sau khi được thông khí. fructose-6phosphate. Nhờ chất hiệu ứng âm tính thứ hai này mà tác dụng kìm hãm của ATP được tăng cường.153 Trong khi ATP kìm hãm dị lập thể phosphofructokinase thì AMP lại hoạt hóa nó. trái lại các ion amôn lại kích thích enzyme này. ở đây. Nguyên tắc điều hòa là giống nhau. không phải AMP mà ADP mới là chất hiệu ứng dương. fructose-1. Saccharomyces uvarum (carslbergensis). Những cơ chế cơ bản của trao đỗi chất thì rất giống nhau. phosphofructosekinase hoạt động như một cái van được điều chỉnh bởi các ađenilat cũng như các chất trao đỗi trung gian khác. các chất trao đổi nằm phía trên van sẽ bị ứ đọng. Schizosaccharomyces pombe và Kluyveromyces sp. coli. còn các chất nằm bên dưới van được tiếp tục chuyển hóa và do vậy. Sự điều hòa mô tả ở trên có thể được chứng minh dễ dàng khi người ta đo nồng độ nội bào của glucose. Chẳng hạn. .6-diphosphate và các triosephosphate lại giảm mạnh. nhiều biến chủng bắt nguồn từ các nấm men này đã được tạo ra nhờ kỹ thuật di truyền.

05-0. Các muối vô cơ (như Mn.51 g rượu. Một nồng độ nhỏ oxi cần phải được cung cấp cho nấm men lên men vì đây là thành phần cần thiết trong sự sinh tổng hợp các chất béo chưa bão hòa và các lipit. Các nhu cầu tương đối của các chất dinh dưỡng được dùng trong sự tổng hợp ethanol tỉ lệ thuận với các thành phần chính của tế bào nấm men.154 Khả năng sử dụng các cơ chất khác nhau phụ thuộc vào loài. về mặt trọng lượng mỗi gam glucose về lý thuyết có thể tạo ra 0. và các vitamin) được yêu cấu dưới dạng vết. Hiện nay người ta quan tâm nhiều đến việc tạo ra các thể đột biến khuyết hô hấp từ nấm men nhờ việc sử dụng các tác nhân hóa học như các thuốc nhuộm hoặc các hợp chất làm biến tính protein.1 mm Hg tính theo áp suất oxi. Cũng còn có các phản ứng phụ xảy ra (thường dẫn tới Glycerin và sucxinat) tiêu thụ tới 4-5% cơ chất tổng số.7%. Bất cứ nồng độ nào nằm trên giới hạn đó đều sẽ kích thích sinh trưởng. và H.5-6. O. acid nucleic. người ta cũng đưa thêm vào một số chất dinh dưỡng bổ sung như các muối amôn. Nếu loại trừ được các phản ứng này thì sản lượng ethanol có thể tăng thêm được 2. S. Co. Nhiều loại nguyên liệu dùng để sản xuất rượu ở quy mô lớn (như rỉ đường mía hay actiso Jerusalem) ngoài hiđrat C còn cung cấp toàn bộ các chất dinh dưỡng cần thiết cho sinh trưởng của nấm men. dưới điều kiện kị khí chuyển hoá glucose thành ethanol trước hết bằng con đường Embden-Meyerhof. N. K và Mg dùng để tổng hợp các thành phần thứ yếu. Chúng bao gồm C. Zn) và các nhân tố sinh trưởng hữu cơ (acid amin. Trong một số trường hợp. Cu. phosphate K hay nguồn cao ngô rẻ tiền. Thấp hơn một chút là P. .0 và nhiệt độ từ 28-35oC. Do vậy. Các biến chủng này chứa ADN ti thể đã bị biến đổi theo hướng ức chế sự tạo ra các enzyme cần thiết cho sự trao đổi chất hiếu khí và do vậy thích hợp với sự tổng hợp rượu. 5. Nói chung. Hiệu suất lên men Nấm men. Sở dĩ như vậy là vì một phần chất dinh dưỡng đã được sử dụng để tổng hợp sinh khối mới và cho các phản ứng liên quan tới sự duy trì tế bào. Thông thường oxi được giữ trong dịch lên men ở nồng độ 0. Phản ứng thật sứ bao gồm sự tạo thành 2 mol ethanol. Tuy nhiên sản lượng đạt được trong lên men thực tế thường không vượt quá 90-95% con số lý thuyết. vi phạm đến sự tạo thành ethanol (hiệu ứng Pasteur). 2 mol CO2 và 2 mol ATP trên mỗi mol glucose được lên men. các cơ thể này có khả năng sinh trưởng và lên men ethanol có hiệu quả ở các giá trị pH giữa 3.

155

Hình 6.3: Hiệu ứng Pasteur Cơ chế điều hòa nhờ enzyme dị lập thể Phosphofructosekinase

Nấm men rất mẫn cảm với sự ức chế bởi ethanol. Nồng độ 1-2% (w/v) đã đủ để làm chậm sinh trưởng của vi sinh vật và ở nồng độ cồn 10% (w/v) tốc độ sinh trưởng của nấm men gần như ngừng hẳn. Bản chất của hiện tượng kìm hãm này là rất phức tạp. Việc thêm cồn vào pha log làm giảm nhanh tốc độ sinh trưởng của nấm men (có lẽ do tác động lên sự tổng hợp protein), giảm khả năng sống sót của tế bào (qua sự biến tính không thuận nghịch của các enzyme), và ở một mức độ thấp hơn nhiều,

156

ethanol làm giảm tóc độ tổng hợp bản thân nó. Các dẫn liệu về mức độ chịu cồn của một số chủng nấm men phụ thuộc rất nhiều vào thành phần acid béo trong màng tế bào chất cho thấy rằng thành phần acid béo kích thích hoặc kìm hãm sự tiết ethanol khỏi bào tương. Các kết quả khác cung chứng minh được rằng ethanol được tạo ra trong lên men (ethanol tự sinh) ức chế lên sinh trưởng của tế bào mạnh hơn là ethanol được đưa vào một cách nhân tạo từ bên ngoài. 6. Sự tạo thành ethanol nhờ vi khuẩn Trong số vi khuẩn, kiểu lên men rượu phổ biến ở nấm men (EM, piruvat-đecacboxilase) chỉ gặp ở Sarcina ventriculi. Đây là loài vi khuẩn chịu khí yếu, dễ dàng phân lập được từ đất, nhưng cũng gặp cả trong dịch tiêu hóa của những người mắc bệnh dạ dày. Các vi khuẩn này được coi là không bình thường vì có kích thước rất lớn (đường kính 4 μm), tạo nên các dạng hộp bao gói (chứa trên 64 tế bào mỗi hộp , được liên kết với nhau nhờ xenlulose), chịu pH (sinh trưởng được ở pH từ 0,9 đến 9,8) và tạo thành nội bào tử. Từ dịch ép lên men của cây dứa dại (Agave americana) ở vùng Mexico người ta đã phân lập được một loài vi khuẩn hình que, di động, có lông roi ở hai cực, có khả năng tạo thành ethanol. Vi khuẩn này có tên là Zymomonas mobilis, phân giải glucose theo con đường 2-keto-3deoxi-6phosphogluconat (KDPG) cắt piruvat thành acetaldehit và đioxit cacbon. Acetaldehit được khử thành ethanol. Ethanol, đioxit cacbon và một lượng nhỏ acid lactic là những sản phẩm lên men duy nhất. Người ta để ý rằng trong rượu mạnh chế từ dứa dại, các nguyên tử cacbon số 2 và số 3 cũng như số 5 và số 6 đã thay thế các nguyên tử cacbon số 1 và số 2 cũng như số 5 và số 6 trong rượu chế từ nấm men.

157

Trong quá trình lên men của một số Enterobacteriaceae và Clostridium, ethanol xuất hiện như một sản phẩm phụ. Tuy nhiên, tiền chất của ethanol, acetaldehit, không được giải phóng trực tiếp từ piruvat nhờ piruvatđecacboxilase mà được tạo thành nhờ sự khử acetil-CoA. Các vi khuẩn lên men lactic dị hình (ví dụ Leuconostoc mesenteroides) tạo ra alcohol theo một con đường hoàn toàn khác. Qua các bước đầu tiên của con đường pentosephosphate (PP), glucose được phân giải thành pentosephosphate. Phosphoketolase tấn công vào xilulose -5- phosphate : Xilulose-5-phosphate+Pvc→ Acetilphosphate + glyceraldehyt-3-phosphate Acetilphosphate vừa tạo thành nhờ acetaldehit-đedihydrogenase và alcohol-đedihydrogenase sẽ được khử thành ethanol. Sản phẩm phân giải còn lại là glyceraldehyt-3-phosphate, sẽ được khử thành lactat qua piruvat. VI. Lên men lactic và họ Lactobacteriaceae Các vi khuẩn lactic được xếp chung vào họ Lactobacteriaceae. Mặc dù nhóm này không có sự giống nhau về hình thái và, bao gồm cả vi khuẩn hình que dài, hình que ngắn lẫn các vi khuẩn hình cầu, song về mặt sinh lý chúng có chung các đặc điểm khá đặc trưng. Tất cả các đại diện đều là các vi khuẩn gram dương, không tạo thành bào tử (trừ Sporolactobacillus) và không di động. Để thu năng lượng chúng hoàn toàn phụ thuộc vào các hiđrat cacbon và tiết ra acid lactic (lactat). Đối lập với các Enterobacteriaceae là bọn cũng sản sinh acid lactic, chúng thuộc bọn lên men bắt buộc. Chúng khác chứa các hemin (xitocrom, catalase). Mặc dù vậy, các vi khuẩn thuộc họ Lactobacteriaceae có khả năng sinh trưởng khi có mặt oxi không khí, chúng thuộc bọn kị khí song đồng thời cũng là bọn chịu khí. Một vi khuẩn sinh trưởng hiếu khí mà không chứa catalase thì gần như chắc chắn đó là một vi khuẩn lactic (trừ ngoại lệ Acetobacter peroxydans và Shigella dysenteriae). 1. Nhu cầu về các chất bổ sung và nhân tố sinh trưởng Một đặc điểm nữa của các vi khuẩn lactic là có nhu cầu về các chất bổ sung. Không có đại diện nào có thể mọc được trên môi trường vô cơ thuần khiết chứa glucose và các muối amôn. Đa số trong chúng cần hàng loạt các vitamin (lactoflavin, tiamin, acid pantotenic, acid nicotinic, acid folic, biotin), và các acid amin, các bazơ purin và pirimiđin. Vì vậy người ta thường nuôi chúng trên các môi trường dinh dưỡng phức tạp chứa

158

những số lượng khá lớn cao nấm men, dịch cà chua, dịch đường sữa hoặc thậm chí cả máu nữa. Điều ngạc nhiên là một số vi khuẩn lactic (và cả các vi khuẩn lên men khác) khi sinh trưởng trên môi trường dinh dưỡng chứa máu có thể tạo thành các xitocrom và thậm chí có thể tiến hành quá trình phosphorin hóa chuỗi hô hấp. Vì vi khuẩn lactic thiếu năng lực tổng hợp các pocphirin nên khi các pocphirin được bổ sung vào môi trường thì một số vi khuẩn lactic có thể tạo thành các sắc tố hem tương ứng. Vi khuẩn lactic được coi như những kẻ què quặt về trao đỗi chất. Có thể rằng do hậu quả của sự chuyên hóa sinh trưởng trong sữa hoặc trên những môi trường giàu chất dinh dưỡng và chất sinh trưởng, chúng đã mất đi khả năng tổng hợp nhiều chất trao đỗi. Trong khi đó chúng lại có khả năng mà đa số các vi khuẩn khác không có, đó là khả năng sử dụng lactose. Khả năng này nhiều vi khuẩn đường ruột (ví dụ Escherichia coli) cũng có. Lactose không có mặt trong giới thực vật, nó được các động vật có vú tạo thành và tiết ra cùng với sữa hoặc được hấp thu vào cùng với sữa. Việc sử dụng được lactose cũng có thể được xem như một sự thích nghi với các điều kiện tồn tại trong đường ruột của động vật có vú. Lactose là một đisaccarit, trước khi đi vào các con đường phân giải hexose nó phải được phân cắt : Lactose + H2O
β- Galactozidase

D-glucose + D-galactose

Sau khi được phosphorin hóa galactose được chuyển thành glucosephosphate. Do có sự sản sinh một lượng lớn lactat nên môi trường dinh dưỡng cần phải được trung hòa. Thường người ta dùng cacbonat canxi. Trên một môi trường thạch dinh dưỡng có bổ sung cacbonat canxi có thể nhận ra sự tạo thành acid qua các vòng trong suốt bao quanh các khuẩn lạc. Nơi sống chủ yếu của các vi khuẩn lactic là sữa và những nơi sản xuất và chế biến sữa, thực vật nguyên vẹn hoặc đang tự phân hủy, cũng như đường ruột và niêm mạc của người và động vật. Do tạo thành một lượng lớn lactat và do tính chịu chua mà dưới các điều kiện môi trường thích hợp các vi khuẩn lactic phát triển nhanh, vì vậy có thể dễ dàng phân lập các vi khuẩn lactic trên các môi trường dinh dưỡng chọn lọc.

159

2. Lên men lactic đồng hình Vi khuẩn lactic lên men đồng hình tạo thành toàn bộ hoặc gần như toàn bộ là lactat. Chúng phân giải glucose qua con đường EM, chứa các enzyme cần thiết, kể cả alđolase và chuyển dihydro tách ra trong quá trình loại dihydro của glyceraldehyt-3-phosphate sang piruvat : Glucose
2 Piruvat

2 NAD

2 NADH

2 Lactat

Việc xuất hiện D-, L+ hay DL- lactat là phụ thuộc vào tính chuyên hóa không gian của enzyme vận chuyển lactat-đedihydrogenase và vào sự có mặt của một lactat-racemase. Chỉ một phần nhỏ piruvat được loại cacboxil và chuyển thành acetate, ethanol, CO2 và acetoin. Việc tạo thành các sản phẩm phụ phụ thuộc vào sự có mặt hay vắng mặt của oxi. 3. Lên men lactic dị hình Vi khuẩn lên men lactic dị hình thiếu các enzyme chủ yếu của con đường EM là alđolase và triosephosphate-isemerase. Đoạn phân giải glucose đầu tiên chỉ xảy ra qua con đường pentosephosphate, tức là qua glucose-6-phosphate, 6-phosphogluconat và ribulose-5-phosphate (hình). Chất này nhờ một epimerase được chuyển thành xilulose-5-phosphate và nhờ phosphoketolase được phân giải trong một phản ứng phụ thuộc taminpirophosphate làm xuất hiện glyceraldehyt-3-phosphate và acetilphosphate. Các tế bào Leuconostoc mesenteroides không sinh trưởng và được rửa sạch đã lên men glucose thành lactat, ethanol và CO2 theo một tỉ lệ gần như tương đương: C6H12O6 → CH3 - CHOH - COOH + CH3 - CH2 - OH + CO2 ở các cơ thể này acetilphosphate bị khử qua acetil-CoA và acetaldehit thành ethanol. Các vi khuẩn lên men dị hình khác chuyển một phần hoặc

trước hết là các trẻ nuôi bằng sữa mẹ. trong đó liên kết phosphate giàu năng lượng được chuyển sang ADP và được sử dụng dưới dạng ATP. Bifidobacterium chuyển hóa glucose theo phương trình : 2 C6H12O6 → 2 CH3 .COOH + 3 CH3 . Các đại diện thuộc chi Bifidobacterium là những vi khuẩn kị khí nghiêm ngặt.CHOH . bị phân cắt). mesenteroides lên men thành lactat và acetate. *Lên men lactic dị hình ở Bifidobacterium Vi khuẩn lactic dị hình Bifidobacterium bifidum có dạng chữ V hay chữ Y (bifidus tiếng Hi Lạp có nghĩa là bị chia đôi. Vi khuẩn này cần N-acetilglucosemin chỉ có trong sữa người mà không có trong sữa bò. là thành viên trong khu hệ đường ruột của trẻ sơ sinh. không chứa aldolase cũng như glucose-6-phosphatdehydrogenase. Dihydro thừa trong trường hợp này được truyền cho glucose làm xuất hiện manit. Glyceraldehyt-3-phosphate được chuyển qua piruvat thành lactat.COOH Bifidobacterium lên men glucose qua con đường phụ phosphoketolase. song lại chứa các phosphoketolase hoạt động. Hexose được chuyển hóa theo con đường sau đây : . Ribose được L. phân giải fructose-6-phosphat và xilulose-6-phosphat thành acetilphosphate và eritro-4-phosphate hoặc glixeraldehyt-3-phosphate. không chịu khí và cần một khí quyển chứa CO2 (10% CO2) để sinh trưởng.160 toàn bộ acetilphosphate thành acetate.

Nhờ đặc tính bảo quản và khử trùng dựa trên nguyên tắc acid hóa mà các vi khuẩn lactic .161 Hình 6. Phosphogluconat-dedihydrogenase 3. 4. Phosphoketolase 4.4: Lên men lactic dị hình :1. Trong các môi trường làm giàu này nhóm vi khuẩn nào phát triển được là tuỳ thuộc vào các điều kiện đặc biệt. Epimerase . Glucose-6-phosphat-dehydrogenase 2. Chúng làm giảm pH xuống dưới 5 và qua đó ức chế sinh trưởng của các vi khuẩn kị khí khác là bọn không có khả năng sinh trưởng ở độ chua này. ứng dụng của lên men lactic Nếu để dung dịch đường không khử trùng chứa cả các nguồn nitơ phức tạp và các chất sinh trưởng một cách tự nhiên trong trong điều kiện kị khí hoặc dưới dạng lớp cao thì các vi khuẩn lactic sẽ nhanh chóng phát triển ở phía bên trong.

3. 39g chất béo (là những giọt mỡ đường kính 1-8 μm gồm glixerit và các chất tan trong lipit. và về sau có sự tham gia của Lactobacillus plantarum. Bắp cải được cắt nhỏ. được nén chặt trong các hầm ủ. Sự tiết acid lactic và sự giảm pH làm protein của sữa bị đông lại thành cục vón (curd). đường (đặc biệt là lactose) và các vitamin. trong ngành sản xuất và chế biến sữa.. xitrat. Trong các giai đoạn sớm của lên men sữa lactose bị tấn công nhanh bởi Streptococcus lactis và Lactobacillus spp. protein (chủ yếu là cazein).Thức ăn ủ chua. Để tạo điều kiện cho lên men lactic xảy ra. Sữa có một thành phần dinh dưỡng cao. trong nông nghiệp. trong nội trợ. Khi để sữa ở trong phòng nhiều loại vi khuẩn sẽ lên men lactose tạo thành acid và làm thay đổi tính chất và kiến trúc của sữa. lúc đầu bởi Leuconostoc . chứa nhiều nước và giàu các muối khoáng.Các sản phẩm sữa. KCl. Quá trình này có thể xảy ra tự nhiên hoặc được con người bắt chước như trong qnầ trình sản xuất phomat hoặc iagua. Sự đông cũng làm tách riêng phần dịch đường sữa (whey) ở trên bề mặt. Là một môi trường gần như hoàn hảo nên sữa rất mẫn cảm với sự sinh trưởng của vi sinh vật. K. trộn và bóp với muối ăn 2-3%. *Sữa chua (sữa bơ). máy hoặc bình chứa. lên men lactic sẽ xảy ra một cách tự nhiên. 4. NaCl và MgCl2). 4. Trong điều kiện yếm khí. 4.162 được sử dụng. E. mỡ bơ. Sữa chua là sản phẩm của sự lên men sữa lỏng bằng sự để chua ngẫu nhiên dưới tác động của nhiều vi khuẩn sinh acid . Vi khuẩn lactic phân bố trên các nguyên liệu thực vật giữ một vai trò to lớn trong việc bảo quản thức ăn gia súc. nhưng khi đi ra khỏi núm vú thì sữa bị nhiễm bởi khu hệ bình thường của động vật.2. Cục vón cũng có thể được tạo nên nhờ tác dụng của vi sinh vật hoặc nhờ một enzyme (rennin) lấy từ dạ dày bê. như colesterol và các vitamin A. D..với sự tạo thành CO2. 9g chất khoáng (gồm phosphate.7g protein mà chủ yếu là cazein.1. Ở trong bầu vú của động vật thì nó là vô trùng. Một lít sữa nặng 1032g bao gồm 902g nước và 130g chất khô trong đó chứa 49g lactose. lá các loại cây lấy củ hoặc cỏ .Dưa là một sản phẩm của quá trình lên men lactic. thêm rỉ đường để nâng cao tỉ lệ C/N và tạo độ chua ban đầu bằng cách thêm acid formic hay acid vô cơ. 32. sau đó được bổ sung thêm bởi các vi sinh vật khác từ người vắt sữa.

Kefia và Kumis là các loại đồ uống chứa rượu giàu CO2. đặc. CO2 và một số sản phẩm phân giải cazein sinh ra từ hoạt động phân giải protein của nấm men. Khu hệ vi sinh vật bao gồm nấm men Torula (chịu trách nhiệm đối với quá trình lên men rượu) và các vi khuẩn Streptococcus lactis và Lactobacillus caucaticus (chịu trách nhiệm đối với lên men lactic). hoặc của một số lượng ít hơn nhiều các vi khuẩn gây thơm (như Streptococcus diacetylacis. ở một số nước.5. Phần quan trọng trong hương thơm đặc biệt của iagua là các hợp chất cacbonyl với đixetyl và acetaldehit chiếm ưu thế. Cả hai đồ uống làm từ sữa này đều là các sản phẩm địa phương của vùng Caucasus và các vùng thảo nguyên Turkestan. Một loại igua đặc biệt có tên là sữa aciđophilus được sản xuất nhờ Lactobacillus acidophilú. lactose được chuyển hoá thành acid lactic. Khi lên men diễn ra. *Phomat. Kumis được làm từ sữa ngựa hay sữa dê do các giống kumis thuần khiết (Thermobacterrium bulgaricus và nấm men Candida) . sữa tuần lộc hoặc sữa ngựa. cremoris). acid này sẽ ngưng kết cazein ở pH 4-5. sữa trâu. *Kefia và Kumis. Sữa đông. có vị chua. Kefia chứa acid lactic (0. một số lượng rượu đáng kể (0. Độ quánh mịn được hình thành trong thời gian này. Kem chua được sản xuất bởi một quá trình rất giống quy trình dùng để sản xuất sữa chua chỉ trừ việc kem cà phê đã được sử dụng làm nguyên liệu thô. Sữa chua được làm từ sữa đầy đủ (chứa ít nhất 3% mỡ của sữa) thường được trộn với bột sữa đã vớt váng nhằm làm tăng hàm lượng chất rắn toàn phần và cải thiện cấu trúc gel protein. một độ chua rõ rệt và hương vị dễ chịu.5-3% các vi khuẩn lactic ưa nhiệt (giống hỗn hợp của một hoặc nhiều chủng như Streptococcus thermophilus hay Lactobacillus bulgaricus) và sau đó giữ ở 42-45oC trong khoảng 3 giờ. Phomat là sản phẩm thu được từ sữa đông bằng cách loại bỏ dịch đường sữa và bằng cách làm chín cục vón khi có mặt một khu hệ . Các hạt kefia dùng để sản xuất kefia chứa các cục sữa đông cộng với các vi khuẩn kefia. sữa chua cũng được sản xuất từ sữa cừu. Betacoccus citrovorus) hoặc bằng việc cấy vào sữa đã đun nóng các giống vi khuẩn thuần khiết. khác biệt rõ ràng với loại sữa chua bình thường. tùy theo vùng có tên gọi khác nhau. Iagua được sản xuất bằng cách cấy vào sữa đã khử trùng Pasteur đồng nhất khoảng 1.5-2%). Nó có một độ đông đặc mịn giống như gel. Sản phẩm cuối cùng có vị chua (độ chua 40-60oSH). nhiều bọt. Iagua được làm từ các loại sữa chứa các hàm lượng mỡ khác nhau bằng cách lên men nhờ các giống đặc biệt.163 lactic khác nhau (như Streptococcus lactis hay S. Việc thêm đường và hoa quả vào iagua (iagua hoa quả) làm tăng đáng kể sức tiêu thụ sản phẩm này.1%). *Iagua.

và khi cần. được xếp thành nhóm dựa vào loại sữa sử dụng (bò. và hàm lượng chất béo. Sự chín của phomat mềm xảy ra từ ngoài vào trong. cục vón được chuyển sang quá trình làm chín. Dịch đường sữa được loại bỏ còn phần cục vón chứa mỡ thì được chuyển sang quá trình làm rắn. dê. Sự chín ở phomat cứng xảy ra đồng đều trên toàn bộ khối phomat. như Penicillium camemberti. cừu). Có nhiều loại phomat với hình dạng và kích thước khác nhau. nấm sợi. cụcvón. *Sự tạo thành cục vón Hàm lượng chất béo của sữa được điều chỉnh tới mức độ mong mnốn. ở ngoài vỏ. các loài nấm sợi đặc trưng phát triển thích hợp hơn ở các pH cao đã nâng pH lên nhờ phản ứng loại CO2 từ các amino acid. đặc biệt là hàm lượng nước. Sự tạo thành vỏ chỉ là kết quả của sự khô bề mặt. được nối tiếp bằng sự bổ sung rennin hoặc một tổ hợp nào đó mà thông thường nhất là tổ hợp giữa acid và rennin. nitrat để kìm hãm khu hệ vi khuẩn kị khí hình thành bào tử và các sắc tố tạo màu.164 vi sinh vật đặc biệt. Trong từng nhóm. P. hàm lượng protein cũng được điều chỉnh. điều này có thể tránh được nhờ việc bao gói khối phomat trong các màng plastic thích hợp trước khi quá trình làm chín bắt đầu. ở bên trong khối phomat. sự tạo thành cục vón (dùng acid. các vi khuẩn mang sắc tố màu vàng hoặc màu đỏ như Bacterium linens. kiến trúc hay độ đặc. P. Gel protein này sẽ được cắt thành các hình khối nhỏ trong lúc đang được đun nóng rồi sau đó được khuấy nhẹ. các loại phomat riêng biệt được đặc trưng bởi hương thơm. candidum. kéo dài từ vài ngày đối với phomat mềm tới vài tháng thậm chí vài . Khi độ rắn mong muốn đã đạt được. dùng rennin hay dùng cả hai). roqueforti . Các chất phụ gia bao gồm muối canxi nhằm cải thiện sự ngưng kết protein và kiến trúc của phomat. Sự sản xuất phomat về cơ bản bao gồm hai công đoạn : sự tạo thành cục vón và quá trình làm chín. Thời gian làm chín thay đổi tùy trường hợp. vì thế trong giai đoạn đầu sẽ có một phần vỏ chín và một phần lõi chưa chín. Sữa thô hoặc sữa đã khử trùng được trộn trong một bể ở nhiệt độ 15-59oC với một loại giống khởi động (vi khuẩn lactic hay vi khuẩn propionic. cùng các cầu khuẩn và nấm men) và sữa sẽ đông lại thành một khối bán lỏng mềm. *Làm chín Quá trình làm chín phụ thuộc vào thành phần khối phomat. Sự chín không đồng đều xảy ra là do có sự chênh lệch về pH. sau lên men lactic. pH thấp vì có mặt acid lactic. khu hệ vi sinh vật và các điều kiện bên ngoài như nhiệt độ và độ ẩm của các phòng làm chín.

Mọi thành phần của phomat đều chịu sự biến đổi về mặt sinh hoá học ở các mức độ khác nhau trong quá trình làm chín. pH giảm từ 6. với pH thấp. Trong giai đoạn sớm của sự làm chín. các phản ứng oxi hoá chiếm ưu thế. Các amino acid được chuyển hóa tiếp tục. Sự giải phóng các acid béo.55 xuống 5.6-9% phần chất rắn của phomat và là phần quan trọng trong hương thơm của phomat. 2-alkanon và 2-alkanol cũng được tạo thành như các sản phẩm phụ của sự β-oxi hoá các acid béo. Khi có mặt vi khuẩn propionic (như trong trường hợp của phomat Emmental).15 tính từ lúc bổ sung giống khởi động cho tới khi đúc thành khuôn. Sự phân giải protein bị ảnh hưởng mạnh bởi hàm lượng muối chứa trong phomat. Sản lượng trên 100 kg sữa nước là 8 kg phomat cứng và tới 12 kg phomat mềm. acid acetic.165 năm đối với các loại phomat cứng. Hàm lượng amino acid là 2. Sự phân giải protein không chỉ đóng góp vào sự tạo thành hương thơm. Tùy thuộc vào loại sữa mà 20-40% cazein được chuyển hoá thành các dẫn xuất protein hòa tan trong đó 5-15% là các acid amin. với pH cao. đặc biệt là Penicillium roqueorti. Khi phomat mềm bị làm chín quá mức. Sự phân giải protein thành các amino acid xảy ra qua các peptit như ìà các sản phẩm trung gian. nó còn ảnh hưởng đến kiến trúc của phomat. Trong loại phomat cheđa chẳng hạn. Trong giai đoạn muộn. . sự phân giải protein có thể dẫn đến việc dịch hóa gần như toàn bộ khối phomat. Nấm sợi. Phương thức và mức độ phân giải mỡ của sữa phụ thuộc vào khu hệ vi sinh vật tham gia vào quá trình làm chín phomat. và CO2 theo phản ứng : 3 CH3CHOHCOOH → 2 CH3CH2COOH + CH3COOH + CO2 + H2O Tỉ lệ giữa acid propionic và acid acetic bị ảnh hưởng bởi thế oxi hóa khử của phomat và tỉ lệ này sẽ thấp khi có mặt muối nitrat chăng hạn. sử dụng β-ketoaxyl-CoA đeaxylase (tiodihydroase) và β-ketoacid đecacboxylase để cung cấp các hợp chất điển hình cho hương thơm của các phomat bán mềm. Những lỗi trong quá trình làm chín có thể tạo nên những peptit có vị đắng. Ngoài các acid béo tự do. Lactose được phân giải thành acid lactic nhờ lên men lactic đồng hình. acid lactic được chuyển hóa tiếp tục thành acid propionic. chúng bị loại CO2 thành các amino. Phạm vi pH 3-6 là tối ưu đối với hoạt tính proteinase của Penicillium roqueorti. đặc biệt là các acid ảnh hương đến hương thơm của phomat phụ thuộc vào tính đặc hiệu của các lipase.

Cho ví dụ về những trường hợp lên men ở vi khuẩn trong đó có sự tạo thành nhiều hơn 2 mol ATP trên một mol glucose bị phân hủy. khi thừa nguồn C.166 Câu hỏi ôn tập chương 8 1. Hiệu quả của việc phân giải hiếu khí hoàn toàn một phân tử glucose ở vi khuẩn là bao nhiêu ? So sánh với hiệu quả của một mình đường phân? 8. Hai cơ chế tái tạo NAD+ là những cơ chế nào ? Chúng khác nhau ở chỗ nào ? Đâu là một quá trình hiếu khí và đâu là một quá trình kị khí ? 5. đồng thời thiếu N và P thì lipit lại được tích lũy ? 10. và FADH2 được tạo thành trong chu trình acid citric ? 7. Giải thích tại sao ở một số nấm men. Sự trao đổi điện tử để tạo nên ATP khác nhau như thế nào trong các trường hợp NADH được tạo thành trong đường phân. và vì sao con số này lại khác với tổng số ATP được tạo thành ? Bao nhiêu ATP sẽ được tạo thành bổ sung nếu oxy có mặt ? 3. . Trong tế bào. Phân tử nào mở đầu con đường đường phân ? Khi đường phân hoàn thành. như Rhodotorula hay Geotrichum. Bao nhiêu ATP được tạo thành ở mức độ phosphoril hóa cơ chất ? Con số ATP được tạo thành là bao nhiêu. phân tử nào còn lại. quá trình đường phân diễn ra ở đâu ? Phản ứng này khác nhau như thế nào khi không có mặt oxy và khi có mặt oxy ? 2. NADH được tạo thành trong chu trình acid citric. Khi nguông glucose là không hạn chế thì cái gì sẽ là nhân tố giới hạn trong phản ứng đường phân ? 4. Lên men khác hô hấp oxy hóa chỗ nào khi xét về phương diện các chất nhận điện tử và sự sản sinh năng lượng ? 6. Hiệu ứng Pasteur có gặp ở các vi khuẩn lên men lactic đồng hình không ? Vì sao ? 9.

. Nhiều con đường khử piruvat cũng gặp ở các vi sinh vật nhân sơ khác. một tế bào chỉ chứa một lượng nhỏ NAD+. trong đó một số nguyên tử của nguồn năng lượng (chất cho điện tử) trở nên có tính khử hơn. sự oxi hóa-khử xảy ra. (chẳng hạn lactat-dedihydrogenase. ở các vi khuẩn lactic. piruvat bị khử thành ethanol với sự giải phóng CO2. song lại dẫn đến việc tạo ra hai phân tử trung gian quan trọng.3 điphosphoglixeric có hai phân tử NAD+ bị khử thành NADH. trong khi một số nguyên tử khác trở nên oxi hóa hơn. enzyme khử piruvat thành acid lactic). hoặc acid lactic). Là một coenzyme dễ khuếch tán. Trong sự tạo thành hai phân tử acid 1. một phản ứng oxi hóa-khử thứ hai xảy ra và các sản phẩm lên men (chẳng hạn ethanol và CO2.144 Chương 8 Các quá trình lên men I. Trong bước ba. cũng còn được gọi là con đường Embden-Meyerhof. Bước một gồm các phản ứng chuẩn bị. song kết quả thật sự đều giống nhau. Con đường Embden-Meyerhof chung cho các quá trình lên men (EM) : Bước chuyển hóa Lên men là một quá trình oxi hóa-khử cân bằng nội sinh. Sự "tắc đường" này có thể được khắc phục trong lên men bằng cách oxi hóa NADH trở lại thành NAD+ nhờ các phản ứng khử piruvat thành một trong hàng loạt các sản phẳm lên men khác nhau. tức là NADH phải được hồi phục lại thành dạng oxi hóa. không có các phản ứng oxi hóa và cũng không giải phóng năng lượng. rồi lại lập tức khuếch tán trở lại sau khi NADH đã được oxi hóa thành NAD+ để lặp lại chu trình một lần nữa. Đường phân được chia thành ba bước chính. mỗi bước gồm một số phản ứng riêng biệt do enzyme xúc tác. NAD+. gắn vào một enzyme khác. sự oxi hóa tiếp tục chỉ có thể xảy ra khi một phân tử NAD+ có mặt để tiếp nhận các điện tử vừa được giải phóng ra. còn năng lượng thì được sinh ra nhờ sự phosphorin hóa cơ chất. năng lượng được dự trữ dưới dạng ATP và hai phân tử piruvat được tạo thành. Trong bước hai. NADH có thể tách khỏi GAP-dedihydrogenase. Con đường trao đồi chất chung đối với sự lên men glucose là con đường đường phân. Trong trường hợp của nấm men. glixeraldehit-3-phosphate (GAP). piruvat bị khử thành acid lactic. để cho các phản ứng thu nhận năng lượng của lên men có thể tiếp tục. Tuy nhiên. sẽ được tạo thành. và nếu như toàn bộ NAD+ bị chuyển thành NADH thì phản ứng oxi hóa glucose sẽ bị đình chỉ.

acid butiric và acid homoacetic.3Butandiol + Xucxinat + Lactat + Acetate + Focmat + H2 + CO2 Hexose → Butirat + Acetate + H2 + CO2 Hexose → Butanol + Acetate + Aceton + Ethanol + H2 + CO2 Ethanol + Acetate + CO2 → Caproat + Butirat + H2 Fructose → 3 Acetate + 3 H+ 4 H2+ 2 CO2 + H+ → Acetate + 2 H2O Acetate + H2O → CH4 + − HCO 3 Vi sinh vật thực hiện Nấm men Zymomonas Streptococcus Một số Lactobacillus Leuconostoc Một số Lactobacillus Propionibacterium Clostridium propionicum Các vi khuẩn đường ruột Escherichia. (Các) sản phẫm cuối cùng cũng phải nằm trong trạng thái cân bằng oxi hóa-khử với cơ chất ban đầu. Salmonella.1: Các quá trình lên men phổ biến ở vi sinh vật Kiểu lên men Lên men rượu Lên men lactic đồng hình Lên men lactic dị hình Acid propionic Acid hỗn hợp Phản ứng tổng thể Hexose → 2 Ethanol + 2 CO2 Hexose → 2 Lactat + 2 H+ Hexose → Lactat + Ethanol + CO2 + H+ Lactat → Propionat + Acetate + CO2 Hexose → Ethanol + 2. Enterobacter Clostridium butyricum Clostridium acetobutylicum Clostridium kluyveri Clostridium aceticum Acetobacterium Methanothrix Methanosarcina Acid butiric Butanol Caproat Homoacetic Sinh methane II. Tính đa dạng của lên men Bảng 6.145 Trong bất kỳ một phản ứng thu năng lượng nào. Đó là các quá trình lên men rượu. tức là glucose. sự khử NAD+ tại một bước trong con đường đường phân sẽ được cân bằng bởi sự oxi hóa nó tại một bước khác. acid hỗn hợp. acid lactic. Có nhiều quá trình lên men được phân loại dựa trên cơ chất được lên men . Shigella. sự oxi hóa bao giờ cũng phải được cân bằng với sự khử và phải có một chất nhận nào đó đứng chờ sẵn để nhận một điện tử vừa được tách ra. Bảng 6. Klebsiella. Trong trường hợp này.1 trình bày một số kiểu lên men chính được phân loại dựa trên các sản phẩm được tạo thành. acid propionic.

146 thay vì các sản phẩm. Chẳng hạn. acidiurici và C. vi khuẩn Pelobacter acidigallici lên men hợp chất thơm phloroglucinol (1. chưa phân loại 16 H2 + 13 H+ Xitrat Xitrat + 2 H2O → Focmat + 2 Bacteroides sp. Bảng 6. 2: Một số quá trình lên men không thông thường Phản ứng cân bằng Vi sinh vật thực hiện tổng thể Acetylen 2 C2H2 + 3 H2O → Ethanol + Pelobacter acetylenicus Acetate + H+ − Acetobacterium spp. Chẳng hạn. và amoniac. C6H6O3) theo con đường sau : Phloroglucinol (C6H6O3) +3 H2O → 3 acetate.5-benzenetriol. Glycerin 4 Glycerin + 2 HCO 3 → + 7 Acetate + 5 H + 4 H2O Resocxinol 2 C6H4(OH)2 + 6 H2O → 4 Clostridium spp. CO2. như C. Còn những bọn kị khí khác thì lên men các hợp chất thơm. Nhiều trong số các vi khuẩn này có thể được xem như các chuyên gia về trao đổi chất vì chúng có khả năng phân giải một hoặc nhiều cơ chất mà các vi khuẩn khác không phân giải được.+ 3H+. Một số ví dụ được nêu trên bảng 6.5 kJ/phản ứng Nhiều quá trình lên men không thông thường chỉ được thực hiện bởi một nhóm rất hạn chế các vi khuẩn kị khí. focmat. (một hợp chất Acetate + Butirat + 5 H+ thơm) Xinamat (một 2C9H7O2 + 2 H2O → C9H9O2 + Acetovibrio multivorans hợp chất thơm) Benseat + Acetate + H+ Phlorogluxinol Pelobacter masiliensis C6H6O3 + 3 H2O → (một hợp chất 3 Acetate + 3 H+ Pelobacter acidigallici thơm) Putresxin 10 C4H12N2 + 26 H2O → 6 Các vi khuẩn kị khí gram Acetate + 7 Butirat + 20 NH4+ + dương không sinh bào tử.3. purinolyticum lên men các purin như xantin hoặc ađenin với sự tạo thành acetate. − Acetate + HCO 3 + H+ Aconitat Glioxilat Aconitat + H++ 2 H2O → 2 CO2 Acidaminococcus fermentans + 2 Acetate + H2 + 4 Glioxilat +3 H + 3 H2O → 6 Vi khuẩn gram âm chưa Kiểu lên men .2. amoniac và H2. nhiều vi khuẩn kị khí tạo thành bào tử (chi Clostridium) lên men các amino acidvới sự sản sinh acetate. Các loài Clostridium khác. và trong một sồ trường hợp chỉ bởi một vi khuẩn duy nhất. ΔGo' = -142.

Sở dĩ như vậy là vì sự loại CO2 khỏi xucxinat . năng lượng sinh ra không đủ để ghép đôi với sự tổng hợp ATP trực tiếp nhờ phosphorin hóa cơ chất. tuy nhiên nó lại được dùng làm phản ứng thu năng lượng duy nhất cho sinh trưởng của vi khuẩn.+ HCO3. Propionigenium modestum thực hiện phản ứng sau đây : Xucxinat2.5 kJ/phản ứng Phương trình tổng thể này thu không đủ năng lượng tự do để ghép đôi với sự tổng hợp ATP trực tiếp nhờ phosphorin hóa cơ chất. tuy nhiên các hợp chất này vẫn trợ giúp sinh trưởng lên men của một cơ thể nào đó. ΔGo' = -20. Lên men không có sự phosphorin hóa cơ chất Với một số cơ chất.+ H2O → Propionat.. Trong những trường hợp này sự phân giải cơ chất được gắn liền với những bơm ion được dùng để tạo nên một građien proton hoặc natri qua màng.147 Xucxinat Oxalat Malonat CO2 + 5 H2 + Glicolat phân loại Xucxinat + H2O → Propionat + Propionigenium − modestum HCO 3 Oxalat + H2O → Focmat + Oxalobacter formigenes − HCO 3 Malonat + H2O → Acetate + Malonomonas rubra − Sporomusa malonica HCO 3 III. Ví dụ về kiểu này có các quá trình lên men của Propionigenium modestum hoặc Oxalobacter formigenes. cả hai đều gắn sự lên men các acid đicacboxilic với các bơm ion sinh năng lượng liên kết với màng.

1: Lên men liên kết với bơm ion ở vi khuẩn (năng lượng thu được không qua phosphorin hóa cơ chất) (qua metilmalonil-CoA và đecacboxilase liên kết với màng bởi Propionigenium modestum đã được ghép đôi với sự xuất Na+ qua màng tế bào chất.148 Hình 6. Sau đó sự xuất focmat. modestum sử dụng građien này để hoạt hóa sự tổng hợp ATP.+ HCO3.khỏi tế bào sẽ tạo nên một động lực nhờ proton (proton motive force = PMF) có khả năng ghép đôi với sự tổng hợp ATP nhờ một ATPase chuyển vị proton nằm trên màng. . ΔGo' = -26.+ H2O → Focmat.7 kJ/phản ứng ở pH trung tính. oxalat tồn tại dưới dạng ion hóa oxalat-.tiêu thụ một proton. Một ATPse chuyển vị Na+ nằm trên màng của P. Oxalobacter formigenes thực hiện sự lên men oxalat : Oxalat2.. và sự loại cacboxil thành focmat.

Kẻ tiêu thụ H2 có thể là bất kỳ một cơ thể nào trong số các vi khuẩn khử sunfat. cho đến nay.+2H+ +19. Điều cần rút ra từ những sự lên men này là : các phản ứng.8 kJ. cũng không thể lập tức bị coi là không có khả năng trợ giúp sinh trưởng cho một vi khuẩn. Trong đa số trường hợp. hoặc không có khả năng ghép đôi với sự phosphorin hóa cơ chất. cộng dưỡng cũng còn được gọi là sự chuyển H2 liên loài. H2 được sinh ra bởi đối tác lên men rượu lại là một chất cho điện tử đầy giá trị đối với quá trình hình thành methane do một vi khuẩn sinh methane thực hiện.4 kJ /phản ứng Sinh methane 4H2+ CO2 .và bảo toàn năng lượng của quá trình phân giải đến mức không cơ thể nào trong hai cơ thể đó một mình có thể làm được. bọn lên men ethanol thực hiện một phản ứng không thuận lợi về mặt năng lượng tự do (ΔGo' dương). Tuy nhiên.149 Điều thú vị và độc đáo trong trao đỗi chất của cả Propionigenium modestum lẫn Oxalobacter formigenes nằm ở chỗ sự tổng hợp ATP xảy ra không cần cả phosphoril hóa cơ chất lẫn chuỗi vận chuyển điện tử. một hiện tượng mà hai sinh vật khác nhau có thể cùng nhau phân giải một chất nào đó . dù chỉ thu được dưới 31. sự tạo thành ATP theo cơ chế hóa thẩm vẫn xảy ra dựa vào một bơm Na+/H+ kết hợp với sự loại CO2 khỏi các acid hữu cơ. Như có thể thấy trên hình 2.7 kJ/phản ứng → CH4 + 2H2O Phản ứng cộng dưỡng 2CH3CH2OH + CO2 . Nếu như phản ứng có thể ghép đôi được với một građien ion thì sự sản sinh ATP vẫn có khả năng xảy ra và do vậy vẫn có sinh trưởng (Hình 6. và vi khuẩn sinh methane. bản chất của một phản ứng cộng dưỡng có liên quan tới khí dihydro (H2) sinh ra bởi một trong hai đối tác và được tiêu thụ bởi đối tác kia.130. Lên men ethanol 2CH3CH2OH + 2H2O → 4H2 + 2CH3COO.1). tuy nhiên. Hãy xem xét trường hợp cộng dưỡng liên quan tới quá trình lên men ethanol thành acetate và sự sản sinh methane sau đó. Hiện tượng cộng dưỡng (syntrophy) Trong vi sinh vật học có nhiều ví dụ về hiện tượng cộng dưỡng. IV. lên men homoacetate.3 kJ/phản ứng → CH4 + 2CH3COO . con số cần thiết để tạo thành một ATP. Và khi cộng hai phản ứng lại thì phản ứng tổng thể sẽ là một phản ứng toả nhiệt và có thể trợ giúp sinh trưởng của cả hai đối tác trong hỗn hợp cộng dưỡng.111. Do vậy.

Trong bước một. 1. đặc biệt là các chủng thuộc loài Saccharomyces cerevisiae.+ 2H2O → 2acetate. Lên men rượu nhờ nấm men và vi khuẩn Ethanol là một trong số các sản phẩm lên men phổ biến nhất gặp ở vi sinh vật. Nhiều vi khuẩn kị khí và hiếu khí cũng tạo thành ethanol như các sản phẩm chính hoặc sản phẩm phụ khi lên men các hexose hoặc pentose. nấm men là những cơ thể hô hấp hiếu khí. Trong bước sau. Syntrophomonas không thể mọc được trên butirat.+ H+ + 2H2 .150 Một ví dụ khác của hiện tượng cộng dưỡng là sự oxi hóa butirat thành acetate cộng với H2 bởi vi khuẩn cộng dưỡng oxi hóa acid béo Syntrophomonas: Butirat. Giống như đa số nấm. V. Bản thân thực vật và nhiều loài nấm cũng tích lũy ethanol dưới các điều kiện kị khí. Vi sinh vật sản sinh ethanol chủ yếu là nấm men. piruvat được loại CO2 thành acetaldehit nhờ piruvat-đecacboxilase với sự tham gia của tiaminpirophosphate. Song nếu H2 vừa sinh ra trong phản ứng được tiêu thụ ngay bởi một cơ thể đối tác (như một vi khuẩn sinh methane) thì Syntrophomonas lại sinh trưởng rất tốt trong ống giống cấy chung với bọn tiêu thụ H2.2 kJ/phản ứng Sự biến đổi năng lượng tự do của phản ứng này rất không thuận lợi và trong ống giống thuần khiết. nhưng khi vắng mặt không khí chúng sẽ lên men hiđrat cacbon thành ethanol và CO2. ΔGo' = +48. acetaldehit bị khử thành ethanol nhờ alcohol-đedihydrogenase chứa NADH. Sự tạo thành ethanol nhờ nấm men Sự lên men glucose thành ethanol và CO2 nhờ Saccharomyces cerevisiae diễn ra theo con đường Embden-Meyerhof. Glucose 2 Piruvat 2NAD 2NADH 2 Acetaldehyt 2CO2 2Ethanol . Sự chuyển hóa piruvat thành ethanol gồm hai bước.

Khi bổ sung các chất kiềm (NaHCO3. Lúc này. nhờ vậy trạng thái oxi hóa-khử sẽ được cân bằng. Ông đã khám phá ra rằng.151 Bằng sự chuyền H này. Nếu bổ sung dihydrosulfit vào một môi trường chứa glucose đang được nấm men lên men thì acetaldehit sẽ bị kết tủa do tạo thành phức chất : CH3-CHO + NaHSO3 → CH3. dihydroxiacetonphosphate được sử dụng làm chất nhận điện tử và bị khử thành glycerin-3-phosphate rồi tiếp tục bị loại phosphate để trở thành glycerin. Các dạng phương trình Neuberg Các phương pháp và phát hiện của Carl Neuberg về lên men rượu không chỉ có ý nghĩa lịch sử.CHOH -SO3Na Lúc đó glycerin sẽ xuất hiện như một sản phẩm lên men mới. thay cho acetaldehit. Dihydrosulfit vốn không độc đối với nấm men. . 2. acetaldehit bị bắt giữ. Nguyên lý của nó là. Phương trình lên men có tên là dạng lên men Neuberg 3 và được viết như sau : Glucose + 2H2O → Ethanol + Acetate + 2Glycerin + 2CO2 Dạng lên men thông thường được Neuberg gọi là dạng lên men 1. Lên men với sự có mặt của dihydrosulfit đã được sử dụng trong công nghiệp để sản xuất glycerin. đồng thời hiệu suất ethanol và CO2 sẽ giảm xuống. dihydro tách ra do triosephosphatedehydrogenase xúc tác sẽ được tiêu thụ. không chỉ glucose mà cả piruvat cũng được nấm men lên men và acetaldehit xuất hiện như một sản phẩm trung gian có thể bị bắt giữ bởi dihydrosulfit. Na2HPO4) thì glycerin cũng được tạo thành vì acetaldehit bị chuyển thành ethanol và acetate qua phản ứng hóa hai. Phương trình phản ứng diễn ra như sau : Glucose + Dihydrosulfit → Glycerin + Acetaldehit-sulfit + CO2 Phương trình lên men cải biến này được gọi là dạng lên men Neuberg 2. và do vậy không thể hoạt động như một chất nhận điện tử được nữa. và do vậy không còn hoàn thành được chức năng của một chất nhận điện tử.

ADP và phosphate lại trở nên có sẵn đối với phản ứng loại dihydro của glyceraldehyt-3-phosphate. sự tạo thành ethanol cũng sẽ giảm. Hình 3 tóm tắt những quan hệ điều hòa chủ chốt trong hiệu ứng này. tế bào phải sử dụng nhiều glucose. sự phosphorin hóa chuỗi hô hấp cũng cạnh tranh ADP và phosphate để phát sinh ATP. sự chuyển hóa cơ chất (glucose) qua con đường EM phụ thuộc vào sự có mặt của ADP và phosphate. sự tiêu thụ glucose (cho lên men) vẫn tăng.6-điphophat nhờ ATP và bị kìm hãm dị lập thể bởi ATP. bởi vậy người ta thấy ngay trong điều kiện thóang khí. Enzyme chìa khóa dị lập thể điều hòa sự sử dụng glucose trong nấm men lên men rượu là phosphofructokinase. Trong điều kiện thoáng khí. Sự kìm hãm theo cơ chế liên kết ngược này làm tăng nồng độ glucose-6-phosphate trong tế bào do tính thuận nghịch của phản ứng enzyme trước đó. Tuy nhiên. ATP được tạo thêm rất nhiều nhờ sự quá trình phosphorin hóa chuỗi hô hấp. . Nó xúc tác cho sự phosphorin hóa fructose-6-phosphate thành fructose-1. Trái lại.152 3. khi oxi xâm nhập vào môi trường. Đó là enzyme không thuận nghịch đầu tiên của con đường EM. sự lên men rượu chỉ tạo thành một vài ATP tính trên mỗi phân tử glucose. Sự loại dihydro xảy ra trong phản ứng oxi hóa glyceraldehyt-3-phosphate cần ADP và phosphate vô cơ (Pvc) : Glyceraldehyt-3-phosphate + NAD + Pvc NAD + ATP H → 3-phosphoglicerate + Do vậy. Khi dùng đinitrophenol (DNP) để làm bất hoạt phosphorin hóa chuỗi hô hấp. và hậu quả là. Hiệu ứng Pasteur Hiệu ứng Pasteur là sự ức chế lên men rượu (hay quá trình đường phân) bởi oxi (tức là bởi hô hấp hiếu khí). Có hai cơ chế chịu trách nhiệm đối với hiện tượng này. Tỉ lệ của ATP/AMP trong trường hợp này rất thấp. trong điều kiện hiếu khí. kìm hãm cả sự hấp thu glucose. Một mặt. đó là sự cạnh tranh ADP và phosphate vô cơ giữa hai quá trình phosphorin chuỗi hô hấp và phosphorin hóa cơ chất. Lúc đó nồng độ nội bào của ADP và phosphate giảm. Để duy trì sự cung cấp năng lượng. Sự chuyển sang hô hấp không những làm giảm sự tạo thành ethanol và CO2 mà còn làm giảm sự hấp thụ đường. Glucose-6-phosphate kìm hãm dị lập thể hexokinase. Cơ chế thứ hai chịu trách nhiệm đối với hiệu ứng Pasteur là cơ chế điều hoà bằng enzyme dị lập thể. sự chuyển hóa glucose và do vậy. do đó làm giảm sự tiêu thụ đường này.

Những cơ chế cơ bản của trao đỗi chất thì rất giống nhau. 4. fructose-1. Schizosaccharomyces pombe và Kluyveromyces sp. Sự điều hòa mô tả ở trên có thể được chứng minh dễ dàng khi người ta đo nồng độ nội bào của glucose. ở E. còn các cơ chế điều hòa thì thường có tính đặc hiệu loài và đặc hiệu chủng.153 Trong khi ATP kìm hãm dị lập thể phosphofructokinase thì AMP lại hoạt hóa nó. Nguyên tắc điều hòa là giống nhau. Ngoài ra.6-diphosphate và các triosephosphate lại giảm mạnh. trái lại các ion amôn lại kích thích enzyme này. ở đây. phosphofructosekinase hoạt động như một cái van được điều chỉnh bởi các ađenilat cũng như các chất trao đỗi trung gian khác. nhiều biến chủng bắt nguồn từ các nấm men này đã được tạo ra nhờ kỹ thuật di truyền. không phải AMP mà ADP mới là chất hiệu ứng dương. . Bởi vậy một tỉ lệ ATP/AMP thấp như trong lên men lại kích thích sự hấp thu và sự trao đổi glucose. tính bền trong các điều kiện lên men và tính chịu pH thấp. còn nồng độ của fructose-1. Hiệu ứng Pasteur cũng gặp ở vi khuẩn (chẳng hạn. Nếu van bị đóng. Hoạt tính của phosphofructokinase cũng bị kìm hãm bởi xitrat. Ngay sau khi được thông khí. nồng độ giảm đi. Chẳng hạn.6-diphosphate và các triose-phosphate trước và sau khi chuyển từ điều kiện nuôi kị khí sang điều kiện nuôi hiếu khí.Kỹ thuật sản xuất ethanol nhờ nấm men Các loài nấm men dùng trong sản xuất ethanol là các nấm đơn bào mang nhiều đặc điểm phong phú về sinh trưởng và phát triển. tính chịu cồn cần thiết. chỉ có những khác biệt về loại chất hiệu ứng. fructose-6phosphate. các chất trao đổi nằm phía trên van sẽ bị ứ đọng. Các loài được quan tâm trước hết trong sản xuất công nghiệp là Saccharomyces cerevisiae. một tốc độ lên men cao. coli. Saccharomyces uvarum (carslbergensis). ở E. khả năng sống sót ở nhiệt độ cao. Nhờ chất hiệu ứng âm tính thứ hai này mà tác dụng kìm hãm của ATP được tăng cường. glucose-6-phosphate. Các tính chất mong muốn của một quá trình sản xuất ethanol công nghiệp phụ thuộc nhiều vào việc lựa chọn chủng vi sinh vật dùng trong lên men. coli) và ở mô động vật. còn các chất nằm bên dưới van được tiếp tục chuyển hóa và do vậy. Các chủng này phải có một năng suất sản phẩm cao trên một đơn vị cơ chất được sử dụng. nồng độ glucose-6-phosphate và fructose-6-P của tế bào tăng nhanh.

dưới điều kiện kị khí chuyển hoá glucose thành ethanol trước hết bằng con đường Embden-Meyerhof. và các vitamin) được yêu cấu dưới dạng vết. O. phosphate K hay nguồn cao ngô rẻ tiền.0 và nhiệt độ từ 28-35oC. người ta cũng đưa thêm vào một số chất dinh dưỡng bổ sung như các muối amôn. 5. Hiện nay người ta quan tâm nhiều đến việc tạo ra các thể đột biến khuyết hô hấp từ nấm men nhờ việc sử dụng các tác nhân hóa học như các thuốc nhuộm hoặc các hợp chất làm biến tính protein. 2 mol CO2 và 2 mol ATP trên mỗi mol glucose được lên men. S.1 mm Hg tính theo áp suất oxi. N. K và Mg dùng để tổng hợp các thành phần thứ yếu. Thông thường oxi được giữ trong dịch lên men ở nồng độ 0. Co. Nếu loại trừ được các phản ứng này thì sản lượng ethanol có thể tăng thêm được 2. Cũng còn có các phản ứng phụ xảy ra (thường dẫn tới Glycerin và sucxinat) tiêu thụ tới 4-5% cơ chất tổng số. vi phạm đến sự tạo thành ethanol (hiệu ứng Pasteur). Phản ứng thật sứ bao gồm sự tạo thành 2 mol ethanol. Các biến chủng này chứa ADN ti thể đã bị biến đổi theo hướng ức chế sự tạo ra các enzyme cần thiết cho sự trao đổi chất hiếu khí và do vậy thích hợp với sự tổng hợp rượu.154 Khả năng sử dụng các cơ chất khác nhau phụ thuộc vào loài. Bất cứ nồng độ nào nằm trên giới hạn đó đều sẽ kích thích sinh trưởng. Chúng bao gồm C. về mặt trọng lượng mỗi gam glucose về lý thuyết có thể tạo ra 0. . các cơ thể này có khả năng sinh trưởng và lên men ethanol có hiệu quả ở các giá trị pH giữa 3. acid nucleic.7%. Nhiều loại nguyên liệu dùng để sản xuất rượu ở quy mô lớn (như rỉ đường mía hay actiso Jerusalem) ngoài hiđrat C còn cung cấp toàn bộ các chất dinh dưỡng cần thiết cho sinh trưởng của nấm men. Tuy nhiên sản lượng đạt được trong lên men thực tế thường không vượt quá 90-95% con số lý thuyết.05-0. Sở dĩ như vậy là vì một phần chất dinh dưỡng đã được sử dụng để tổng hợp sinh khối mới và cho các phản ứng liên quan tới sự duy trì tế bào. Thấp hơn một chút là P.51 g rượu. Zn) và các nhân tố sinh trưởng hữu cơ (acid amin. Do vậy. Các muối vô cơ (như Mn. và H. Các nhu cầu tương đối của các chất dinh dưỡng được dùng trong sự tổng hợp ethanol tỉ lệ thuận với các thành phần chính của tế bào nấm men. Trong một số trường hợp.5-6. Một nồng độ nhỏ oxi cần phải được cung cấp cho nấm men lên men vì đây là thành phần cần thiết trong sự sinh tổng hợp các chất béo chưa bão hòa và các lipit. Nói chung. Cu. Hiệu suất lên men Nấm men.

3: Hiệu ứng Pasteur Cơ chế điều hòa nhờ enzyme dị lập thể Phosphofructosekinase Nấm men rất mẫn cảm với sự ức chế bởi ethanol.155 Hình 6. và ở một mức độ thấp hơn nhiều. giảm khả năng sống sót của tế bào (qua sự biến tính không thuận nghịch của các enzyme). . Việc thêm cồn vào pha log làm giảm nhanh tốc độ sinh trưởng của nấm men (có lẽ do tác động lên sự tổng hợp protein). Bản chất của hiện tượng kìm hãm này là rất phức tạp. Nồng độ 1-2% (w/v) đã đủ để làm chậm sinh trưởng của vi sinh vật và ở nồng độ cồn 10% (w/v) tốc độ sinh trưởng của nấm men gần như ngừng hẳn.

. tạo nên các dạng hộp bao gói (chứa trên 64 tế bào mỗi hộp . 6. các nguyên tử cacbon số 2 và số 3 cũng như số 5 và số 6 đã thay thế các nguyên tử cacbon số 1 và số 2 cũng như số 5 và số 6 trong rượu chế từ nấm men. Acetaldehit được khử thành ethanol. Sự tạo thành ethanol nhờ vi khuẩn Trong số vi khuẩn. nhưng cũng gặp cả trong dịch tiêu hóa của những người mắc bệnh dạ dày. được liên kết với nhau nhờ xenlulose).156 ethanol làm giảm tóc độ tổng hợp bản thân nó. có khả năng tạo thành ethanol. dễ dàng phân lập được từ đất. Vi khuẩn này có tên là Zymomonas mobilis. Đây là loài vi khuẩn chịu khí yếu. kiểu lên men rượu phổ biến ở nấm men (EM. Từ dịch ép lên men của cây dứa dại (Agave americana) ở vùng Mexico người ta đã phân lập được một loài vi khuẩn hình que. piruvat-đecacboxilase) chỉ gặp ở Sarcina ventriculi.8) và tạo thành nội bào tử.9 đến 9. Các vi khuẩn này được coi là không bình thường vì có kích thước rất lớn (đường kính 4 μm). có lông roi ở hai cực. chịu pH (sinh trưởng được ở pH từ 0. Các kết quả khác cung chứng minh được rằng ethanol được tạo ra trong lên men (ethanol tự sinh) ức chế lên sinh trưởng của tế bào mạnh hơn là ethanol được đưa vào một cách nhân tạo từ bên ngoài. đioxit cacbon và một lượng nhỏ acid lactic là những sản phẩm lên men duy nhất. Ethanol. Người ta để ý rằng trong rượu mạnh chế từ dứa dại. phân giải glucose theo con đường 2-keto-3deoxi-6phosphogluconat (KDPG) cắt piruvat thành acetaldehit và đioxit cacbon. di động. Các dẫn liệu về mức độ chịu cồn của một số chủng nấm men phụ thuộc rất nhiều vào thành phần acid béo trong màng tế bào chất cho thấy rằng thành phần acid béo kích thích hoặc kìm hãm sự tiết ethanol khỏi bào tương.

biotin). acid folic. ethanol xuất hiện như một sản phẩm phụ. Phosphoketolase tấn công vào xilulose -5. chúng thuộc bọn lên men bắt buộc. Lên men lactic và họ Lactobacteriaceae Các vi khuẩn lactic được xếp chung vào họ Lactobacteriaceae. acetaldehit. acid nicotinic. Đối lập với các Enterobacteriaceae là bọn cũng sản sinh acid lactic. song về mặt sinh lý chúng có chung các đặc điểm khá đặc trưng. hình que ngắn lẫn các vi khuẩn hình cầu. tiền chất của ethanol. bao gồm cả vi khuẩn hình que dài. tiamin. và các acid amin. không được giải phóng trực tiếp từ piruvat nhờ piruvatđecacboxilase mà được tạo thành nhờ sự khử acetil-CoA. Đa số trong chúng cần hàng loạt các vitamin (lactoflavin. Để thu năng lượng chúng hoàn toàn phụ thuộc vào các hiđrat cacbon và tiết ra acid lactic (lactat). Vì vậy người ta thường nuôi chúng trên các môi trường dinh dưỡng phức tạp chứa . VI. Qua các bước đầu tiên của con đường pentosephosphate (PP). glucose được phân giải thành pentosephosphate. sẽ được khử thành lactat qua piruvat. catalase). các vi khuẩn thuộc họ Lactobacteriaceae có khả năng sinh trưởng khi có mặt oxi không khí. không tạo thành bào tử (trừ Sporolactobacillus) và không di động. Không có đại diện nào có thể mọc được trên môi trường vô cơ thuần khiết chứa glucose và các muối amôn. Các vi khuẩn lên men lactic dị hình (ví dụ Leuconostoc mesenteroides) tạo ra alcohol theo một con đường hoàn toàn khác. Mặc dù nhóm này không có sự giống nhau về hình thái và. Chúng khác chứa các hemin (xitocrom. 1. các bazơ purin và pirimiđin. acid pantotenic. Tất cả các đại diện đều là các vi khuẩn gram dương. Nhu cầu về các chất bổ sung và nhân tố sinh trưởng Một đặc điểm nữa của các vi khuẩn lactic là có nhu cầu về các chất bổ sung. Một vi khuẩn sinh trưởng hiếu khí mà không chứa catalase thì gần như chắc chắn đó là một vi khuẩn lactic (trừ ngoại lệ Acetobacter peroxydans và Shigella dysenteriae). Mặc dù vậy. Sản phẩm phân giải còn lại là glyceraldehyt-3-phosphate.157 Trong quá trình lên men của một số Enterobacteriaceae và Clostridium. chúng thuộc bọn kị khí song đồng thời cũng là bọn chịu khí.phosphate : Xilulose-5-phosphate+Pvc→ Acetilphosphate + glyceraldehyt-3-phosphate Acetilphosphate vừa tạo thành nhờ acetaldehit-đedihydrogenase và alcohol-đedihydrogenase sẽ được khử thành ethanol. Tuy nhiên.

Galactozidase D-glucose + D-galactose Sau khi được phosphorin hóa galactose được chuyển thành glucosephosphate. Lactose không có mặt trong giới thực vật. cũng như đường ruột và niêm mạc của người và động vật. dịch đường sữa hoặc thậm chí cả máu nữa. Có thể rằng do hậu quả của sự chuyên hóa sinh trưởng trong sữa hoặc trên những môi trường giàu chất dinh dưỡng và chất sinh trưởng. Nơi sống chủ yếu của các vi khuẩn lactic là sữa và những nơi sản xuất và chế biến sữa. trước khi đi vào các con đường phân giải hexose nó phải được phân cắt : Lactose + H2O β. Việc sử dụng được lactose cũng có thể được xem như một sự thích nghi với các điều kiện tồn tại trong đường ruột của động vật có vú. Vi khuẩn lactic được coi như những kẻ què quặt về trao đỗi chất. Trên một môi trường thạch dinh dưỡng có bổ sung cacbonat canxi có thể nhận ra sự tạo thành acid qua các vòng trong suốt bao quanh các khuẩn lạc. . Do có sự sản sinh một lượng lớn lactat nên môi trường dinh dưỡng cần phải được trung hòa. Khả năng này nhiều vi khuẩn đường ruột (ví dụ Escherichia coli) cũng có. Trong khi đó chúng lại có khả năng mà đa số các vi khuẩn khác không có. Điều ngạc nhiên là một số vi khuẩn lactic (và cả các vi khuẩn lên men khác) khi sinh trưởng trên môi trường dinh dưỡng chứa máu có thể tạo thành các xitocrom và thậm chí có thể tiến hành quá trình phosphorin hóa chuỗi hô hấp. nó được các động vật có vú tạo thành và tiết ra cùng với sữa hoặc được hấp thu vào cùng với sữa. Lactose là một đisaccarit. dịch cà chua. Vì vi khuẩn lactic thiếu năng lực tổng hợp các pocphirin nên khi các pocphirin được bổ sung vào môi trường thì một số vi khuẩn lactic có thể tạo thành các sắc tố hem tương ứng. đó là khả năng sử dụng lactose.158 những số lượng khá lớn cao nấm men. Thường người ta dùng cacbonat canxi. chúng đã mất đi khả năng tổng hợp nhiều chất trao đỗi. thực vật nguyên vẹn hoặc đang tự phân hủy. vì vậy có thể dễ dàng phân lập các vi khuẩn lactic trên các môi trường dinh dưỡng chọn lọc. Do tạo thành một lượng lớn lactat và do tính chịu chua mà dưới các điều kiện môi trường thích hợp các vi khuẩn lactic phát triển nhanh.

kể cả alđolase và chuyển dihydro tách ra trong quá trình loại dihydro của glyceraldehyt-3-phosphate sang piruvat : Glucose 2 Piruvat 2 NAD 2 NADH 2 Lactat Việc xuất hiện D-. chứa các enzyme cần thiết. Đoạn phân giải glucose đầu tiên chỉ xảy ra qua con đường pentosephosphate. Các vi khuẩn lên men dị hình khác chuyển một phần hoặc .CHOH .159 2. Lên men lactic đồng hình Vi khuẩn lactic lên men đồng hình tạo thành toàn bộ hoặc gần như toàn bộ là lactat. Lên men lactic dị hình Vi khuẩn lên men lactic dị hình thiếu các enzyme chủ yếu của con đường EM là alđolase và triosephosphate-isemerase.COOH + CH3 . Chúng phân giải glucose qua con đường EM. CO2 và acetoin. ethanol và CO2 theo một tỉ lệ gần như tương đương: C6H12O6 → CH3 . ethanol. L+ hay DL. Các tế bào Leuconostoc mesenteroides không sinh trưởng và được rửa sạch đã lên men glucose thành lactat. 6-phosphogluconat và ribulose-5-phosphate (hình). Chất này nhờ một epimerase được chuyển thành xilulose-5-phosphate và nhờ phosphoketolase được phân giải trong một phản ứng phụ thuộc taminpirophosphate làm xuất hiện glyceraldehyt-3-phosphate và acetilphosphate. Chỉ một phần nhỏ piruvat được loại cacboxil và chuyển thành acetate.CH2 . Việc tạo thành các sản phẩm phụ phụ thuộc vào sự có mặt hay vắng mặt của oxi. tức là qua glucose-6-phosphate.lactat là phụ thuộc vào tính chuyên hóa không gian của enzyme vận chuyển lactat-đedihydrogenase và vào sự có mặt của một lactat-racemase. 3.OH + CO2 ở các cơ thể này acetilphosphate bị khử qua acetil-CoA và acetaldehit thành ethanol.

COOH + 3 CH3 . Bifidobacterium chuyển hóa glucose theo phương trình : 2 C6H12O6 → 2 CH3 . mesenteroides lên men thành lactat và acetate. phân giải fructose-6-phosphat và xilulose-6-phosphat thành acetilphosphate và eritro-4-phosphate hoặc glixeraldehyt-3-phosphate. trước hết là các trẻ nuôi bằng sữa mẹ. không chứa aldolase cũng như glucose-6-phosphatdehydrogenase. song lại chứa các phosphoketolase hoạt động. *Lên men lactic dị hình ở Bifidobacterium Vi khuẩn lactic dị hình Bifidobacterium bifidum có dạng chữ V hay chữ Y (bifidus tiếng Hi Lạp có nghĩa là bị chia đôi. là thành viên trong khu hệ đường ruột của trẻ sơ sinh. không chịu khí và cần một khí quyển chứa CO2 (10% CO2) để sinh trưởng. Dihydro thừa trong trường hợp này được truyền cho glucose làm xuất hiện manit. bị phân cắt).CHOH . trong đó liên kết phosphate giàu năng lượng được chuyển sang ADP và được sử dụng dưới dạng ATP. Glyceraldehyt-3-phosphate được chuyển qua piruvat thành lactat. Các đại diện thuộc chi Bifidobacterium là những vi khuẩn kị khí nghiêm ngặt.COOH Bifidobacterium lên men glucose qua con đường phụ phosphoketolase. Hexose được chuyển hóa theo con đường sau đây : . Vi khuẩn này cần N-acetilglucosemin chỉ có trong sữa người mà không có trong sữa bò. Ribose được L.160 toàn bộ acetilphosphate thành acetate.

161 Hình 6. Chúng làm giảm pH xuống dưới 5 và qua đó ức chế sinh trưởng của các vi khuẩn kị khí khác là bọn không có khả năng sinh trưởng ở độ chua này. Glucose-6-phosphat-dehydrogenase 2. Phosphogluconat-dedihydrogenase 3. ứng dụng của lên men lactic Nếu để dung dịch đường không khử trùng chứa cả các nguồn nitơ phức tạp và các chất sinh trưởng một cách tự nhiên trong trong điều kiện kị khí hoặc dưới dạng lớp cao thì các vi khuẩn lactic sẽ nhanh chóng phát triển ở phía bên trong. Nhờ đặc tính bảo quản và khử trùng dựa trên nguyên tắc acid hóa mà các vi khuẩn lactic .4: Lên men lactic dị hình :1. Trong các môi trường làm giàu này nhóm vi khuẩn nào phát triển được là tuỳ thuộc vào các điều kiện đặc biệt. Phosphoketolase 4. 4. Epimerase .

1. Sự tiết acid lactic và sự giảm pH làm protein của sữa bị đông lại thành cục vón (curd). chứa nhiều nước và giàu các muối khoáng. Vi khuẩn lactic phân bố trên các nguyên liệu thực vật giữ một vai trò to lớn trong việc bảo quản thức ăn gia súc. Sữa chua là sản phẩm của sự lên men sữa lỏng bằng sự để chua ngẫu nhiên dưới tác động của nhiều vi khuẩn sinh acid . lúc đầu bởi Leuconostoc . K.. 9g chất khoáng (gồm phosphate. Sự đông cũng làm tách riêng phần dịch đường sữa (whey) ở trên bề mặt.Dưa là một sản phẩm của quá trình lên men lactic. E. sau đó được bổ sung thêm bởi các vi sinh vật khác từ người vắt sữa. máy hoặc bình chứa. xitrat. đường (đặc biệt là lactose) và các vitamin. trong nội trợ.. protein (chủ yếu là cazein). lá các loại cây lấy củ hoặc cỏ . trong ngành sản xuất và chế biến sữa. trong nông nghiệp. mỡ bơ. Ở trong bầu vú của động vật thì nó là vô trùng. NaCl và MgCl2). Khi để sữa ở trong phòng nhiều loại vi khuẩn sẽ lên men lactose tạo thành acid và làm thay đổi tính chất và kiến trúc của sữa.3. lên men lactic sẽ xảy ra một cách tự nhiên. trộn và bóp với muối ăn 2-3%.162 được sử dụng. Sữa có một thành phần dinh dưỡng cao. Cục vón cũng có thể được tạo nên nhờ tác dụng của vi sinh vật hoặc nhờ một enzyme (rennin) lấy từ dạ dày bê. Trong điều kiện yếm khí.Các sản phẩm sữa. nhưng khi đi ra khỏi núm vú thì sữa bị nhiễm bởi khu hệ bình thường của động vật. Để tạo điều kiện cho lên men lactic xảy ra. như colesterol và các vitamin A. KCl. Quá trình này có thể xảy ra tự nhiên hoặc được con người bắt chước như trong qnầ trình sản xuất phomat hoặc iagua. 4. 4.Thức ăn ủ chua.7g protein mà chủ yếu là cazein. Một lít sữa nặng 1032g bao gồm 902g nước và 130g chất khô trong đó chứa 49g lactose. *Sữa chua (sữa bơ). được nén chặt trong các hầm ủ. Là một môi trường gần như hoàn hảo nên sữa rất mẫn cảm với sự sinh trưởng của vi sinh vật. Bắp cải được cắt nhỏ. và về sau có sự tham gia của Lactobacillus plantarum. D. 32.2. thêm rỉ đường để nâng cao tỉ lệ C/N và tạo độ chua ban đầu bằng cách thêm acid formic hay acid vô cơ. Trong các giai đoạn sớm của lên men sữa lactose bị tấn công nhanh bởi Streptococcus lactis và Lactobacillus spp.với sự tạo thành CO2. 4. 39g chất béo (là những giọt mỡ đường kính 1-8 μm gồm glixerit và các chất tan trong lipit.

Sữa chua được làm từ sữa đầy đủ (chứa ít nhất 3% mỡ của sữa) thường được trộn với bột sữa đã vớt váng nhằm làm tăng hàm lượng chất rắn toàn phần và cải thiện cấu trúc gel protein. Sữa đông.1%). một số lượng rượu đáng kể (0. có vị chua. Khi lên men diễn ra. CO2 và một số sản phẩm phân giải cazein sinh ra từ hoạt động phân giải protein của nấm men. Betacoccus citrovorus) hoặc bằng việc cấy vào sữa đã đun nóng các giống vi khuẩn thuần khiết. Việc thêm đường và hoa quả vào iagua (iagua hoa quả) làm tăng đáng kể sức tiêu thụ sản phẩm này. khác biệt rõ ràng với loại sữa chua bình thường. Kefia chứa acid lactic (0. lactose được chuyển hoá thành acid lactic. Các hạt kefia dùng để sản xuất kefia chứa các cục sữa đông cộng với các vi khuẩn kefia.5-2%). Iagua được sản xuất bằng cách cấy vào sữa đã khử trùng Pasteur đồng nhất khoảng 1. Phần quan trọng trong hương thơm đặc biệt của iagua là các hợp chất cacbonyl với đixetyl và acetaldehit chiếm ưu thế. *Iagua. sữa chua cũng được sản xuất từ sữa cừu. Phomat là sản phẩm thu được từ sữa đông bằng cách loại bỏ dịch đường sữa và bằng cách làm chín cục vón khi có mặt một khu hệ . Nó có một độ đông đặc mịn giống như gel.5. Kem chua được sản xuất bởi một quá trình rất giống quy trình dùng để sản xuất sữa chua chỉ trừ việc kem cà phê đã được sử dụng làm nguyên liệu thô. Kefia và Kumis là các loại đồ uống chứa rượu giàu CO2. acid này sẽ ngưng kết cazein ở pH 4-5. tùy theo vùng có tên gọi khác nhau. một độ chua rõ rệt và hương vị dễ chịu. Độ quánh mịn được hình thành trong thời gian này. cremoris). Cả hai đồ uống làm từ sữa này đều là các sản phẩm địa phương của vùng Caucasus và các vùng thảo nguyên Turkestan.163 lactic khác nhau (như Streptococcus lactis hay S. sữa trâu.5-3% các vi khuẩn lactic ưa nhiệt (giống hỗn hợp của một hoặc nhiều chủng như Streptococcus thermophilus hay Lactobacillus bulgaricus) và sau đó giữ ở 42-45oC trong khoảng 3 giờ. ở một số nước. hoặc của một số lượng ít hơn nhiều các vi khuẩn gây thơm (như Streptococcus diacetylacis. Một loại igua đặc biệt có tên là sữa aciđophilus được sản xuất nhờ Lactobacillus acidophilú. *Kefia và Kumis. nhiều bọt. Kumis được làm từ sữa ngựa hay sữa dê do các giống kumis thuần khiết (Thermobacterrium bulgaricus và nấm men Candida) . sữa tuần lộc hoặc sữa ngựa. Khu hệ vi sinh vật bao gồm nấm men Torula (chịu trách nhiệm đối với quá trình lên men rượu) và các vi khuẩn Streptococcus lactis và Lactobacillus caucaticus (chịu trách nhiệm đối với lên men lactic). *Phomat. đặc. Iagua được làm từ các loại sữa chứa các hàm lượng mỡ khác nhau bằng cách lên men nhờ các giống đặc biệt. Sản phẩm cuối cùng có vị chua (độ chua 40-60oSH).

P. vì thế trong giai đoạn đầu sẽ có một phần vỏ chín và một phần lõi chưa chín. Sự chín không đồng đều xảy ra là do có sự chênh lệch về pH. kiến trúc hay độ đặc. nitrat để kìm hãm khu hệ vi khuẩn kị khí hình thành bào tử và các sắc tố tạo màu. roqueforti . các vi khuẩn mang sắc tố màu vàng hoặc màu đỏ như Bacterium linens. đặc biệt là hàm lượng nước. kéo dài từ vài ngày đối với phomat mềm tới vài tháng thậm chí vài . Sự chín của phomat mềm xảy ra từ ngoài vào trong. nấm sợi. và hàm lượng chất béo. pH thấp vì có mặt acid lactic. Sự tạo thành vỏ chỉ là kết quả của sự khô bề mặt. được xếp thành nhóm dựa vào loại sữa sử dụng (bò. như Penicillium camemberti. sự tạo thành cục vón (dùng acid. Sự chín ở phomat cứng xảy ra đồng đều trên toàn bộ khối phomat.164 vi sinh vật đặc biệt. được nối tiếp bằng sự bổ sung rennin hoặc một tổ hợp nào đó mà thông thường nhất là tổ hợp giữa acid và rennin. và khi cần. Sữa thô hoặc sữa đã khử trùng được trộn trong một bể ở nhiệt độ 15-59oC với một loại giống khởi động (vi khuẩn lactic hay vi khuẩn propionic. Khi độ rắn mong muốn đã đạt được. Thời gian làm chín thay đổi tùy trường hợp. Có nhiều loại phomat với hình dạng và kích thước khác nhau. sau lên men lactic. Gel protein này sẽ được cắt thành các hình khối nhỏ trong lúc đang được đun nóng rồi sau đó được khuấy nhẹ. khu hệ vi sinh vật và các điều kiện bên ngoài như nhiệt độ và độ ẩm của các phòng làm chín. Dịch đường sữa được loại bỏ còn phần cục vón chứa mỡ thì được chuyển sang quá trình làm rắn. *Sự tạo thành cục vón Hàm lượng chất béo của sữa được điều chỉnh tới mức độ mong mnốn. *Làm chín Quá trình làm chín phụ thuộc vào thành phần khối phomat. cùng các cầu khuẩn và nấm men) và sữa sẽ đông lại thành một khối bán lỏng mềm. Các chất phụ gia bao gồm muối canxi nhằm cải thiện sự ngưng kết protein và kiến trúc của phomat. các loài nấm sợi đặc trưng phát triển thích hợp hơn ở các pH cao đã nâng pH lên nhờ phản ứng loại CO2 từ các amino acid. ở ngoài vỏ. Sự sản xuất phomat về cơ bản bao gồm hai công đoạn : sự tạo thành cục vón và quá trình làm chín. ở bên trong khối phomat. điều này có thể tránh được nhờ việc bao gói khối phomat trong các màng plastic thích hợp trước khi quá trình làm chín bắt đầu. các loại phomat riêng biệt được đặc trưng bởi hương thơm. cục vón được chuyển sang quá trình làm chín. cụcvón. cừu). Trong từng nhóm. dê. hàm lượng protein cũng được điều chỉnh. P. dùng rennin hay dùng cả hai). candidum.

sử dụng β-ketoaxyl-CoA đeaxylase (tiodihydroase) và β-ketoacid đecacboxylase để cung cấp các hợp chất điển hình cho hương thơm của các phomat bán mềm. . Phương thức và mức độ phân giải mỡ của sữa phụ thuộc vào khu hệ vi sinh vật tham gia vào quá trình làm chín phomat. acid lactic được chuyển hóa tiếp tục thành acid propionic. với pH cao. Sản lượng trên 100 kg sữa nước là 8 kg phomat cứng và tới 12 kg phomat mềm. Khi có mặt vi khuẩn propionic (như trong trường hợp của phomat Emmental). Các amino acid được chuyển hóa tiếp tục. Trong giai đoạn sớm của sự làm chín. nó còn ảnh hưởng đến kiến trúc của phomat. Sự phân giải protein không chỉ đóng góp vào sự tạo thành hương thơm. pH giảm từ 6. Sự phân giải protein thành các amino acid xảy ra qua các peptit như ìà các sản phẩm trung gian. Khi phomat mềm bị làm chín quá mức. Trong giai đoạn muộn. với pH thấp.6-9% phần chất rắn của phomat và là phần quan trọng trong hương thơm của phomat. Mọi thành phần của phomat đều chịu sự biến đổi về mặt sinh hoá học ở các mức độ khác nhau trong quá trình làm chín. 2-alkanon và 2-alkanol cũng được tạo thành như các sản phẩm phụ của sự β-oxi hoá các acid béo. chúng bị loại CO2 thành các amino. Những lỗi trong quá trình làm chín có thể tạo nên những peptit có vị đắng.15 tính từ lúc bổ sung giống khởi động cho tới khi đúc thành khuôn. Sự phân giải protein bị ảnh hưởng mạnh bởi hàm lượng muối chứa trong phomat. Trong loại phomat cheđa chẳng hạn. Ngoài các acid béo tự do. đặc biệt là Penicillium roqueorti. các phản ứng oxi hoá chiếm ưu thế.55 xuống 5. Sự giải phóng các acid béo. Hàm lượng amino acid là 2. Lactose được phân giải thành acid lactic nhờ lên men lactic đồng hình. sự phân giải protein có thể dẫn đến việc dịch hóa gần như toàn bộ khối phomat. acid acetic.165 năm đối với các loại phomat cứng. đặc biệt là các acid ảnh hương đến hương thơm của phomat phụ thuộc vào tính đặc hiệu của các lipase. Tùy thuộc vào loại sữa mà 20-40% cazein được chuyển hoá thành các dẫn xuất protein hòa tan trong đó 5-15% là các acid amin. Nấm sợi. Phạm vi pH 3-6 là tối ưu đối với hoạt tính proteinase của Penicillium roqueorti. và CO2 theo phản ứng : 3 CH3CHOHCOOH → 2 CH3CH2COOH + CH3COOH + CO2 + H2O Tỉ lệ giữa acid propionic và acid acetic bị ảnh hưởng bởi thế oxi hóa khử của phomat và tỉ lệ này sẽ thấp khi có mặt muối nitrat chăng hạn.

đồng thời thiếu N và P thì lipit lại được tích lũy ? 10. NADH được tạo thành trong chu trình acid citric. Giải thích tại sao ở một số nấm men. Trong tế bào. Sự trao đổi điện tử để tạo nên ATP khác nhau như thế nào trong các trường hợp NADH được tạo thành trong đường phân. Cho ví dụ về những trường hợp lên men ở vi khuẩn trong đó có sự tạo thành nhiều hơn 2 mol ATP trên một mol glucose bị phân hủy. phân tử nào còn lại. và FADH2 được tạo thành trong chu trình acid citric ? 7. Phân tử nào mở đầu con đường đường phân ? Khi đường phân hoàn thành.166 Câu hỏi ôn tập chương 8 1. Hiệu quả của việc phân giải hiếu khí hoàn toàn một phân tử glucose ở vi khuẩn là bao nhiêu ? So sánh với hiệu quả của một mình đường phân? 8. . Bao nhiêu ATP được tạo thành ở mức độ phosphoril hóa cơ chất ? Con số ATP được tạo thành là bao nhiêu. và vì sao con số này lại khác với tổng số ATP được tạo thành ? Bao nhiêu ATP sẽ được tạo thành bổ sung nếu oxy có mặt ? 3. khi thừa nguồn C. Lên men khác hô hấp oxy hóa chỗ nào khi xét về phương diện các chất nhận điện tử và sự sản sinh năng lượng ? 6. Khi nguông glucose là không hạn chế thì cái gì sẽ là nhân tố giới hạn trong phản ứng đường phân ? 4. quá trình đường phân diễn ra ở đâu ? Phản ứng này khác nhau như thế nào khi không có mặt oxy và khi có mặt oxy ? 2. Hai cơ chế tái tạo NAD+ là những cơ chế nào ? Chúng khác nhau ở chỗ nào ? Đâu là một quá trình hiếu khí và đâu là một quá trình kị khí ? 5. như Rhodotorula hay Geotrichum. Hiệu ứng Pasteur có gặp ở các vi khuẩn lên men lactic đồng hình không ? Vì sao ? 9.

1.Nhóm III (có tác giả gọi là bộ Oscillatorriales): d.2.Các vi khuẩn quang quang hợp (Phototrophic bacteria) 1.Họ Chromatiaceae: 1.Vi sinh vật quang hợp 1.6.Nhóm I (có tác giả gọi là bộ Chroococcales): b. hệ thống quang hợp chứa các màng hình cầu hay hình phiến (lamellar) gắn với màng sinh chất. Để dùng làm nguồn cho điện tử (electron donors) trong quang hợp thường sử dụng H2. có khả năng quang tự dưỡng vô cơ (photolithoautotroph).3.Chi Thiospirium 1. tế bào có chứa chlorophyll a hoặc b . Có khả năng di động với tiên mao mọc ở cực.9. Chi Lamprobacter 1.5. Chi Thiocapsa 1.10. H2S hay S . Chi Lamprocystis 1. Chi Thiorhodovibrio 1. Chi Amoebobacter 1.8.Nhóm IV (có tác giả gọi là bộ Nostocales) : e.167 Chương 9 Vi khuẩn quang hợp và cố định đạm I. có loài chu mao.Vi khuẩn lưu huỳnh màu tía (Purple sulfur bacteria) Thuộc nhóm này là các vi khuẩn kỵ khí bắt buộc. tỷ lệ G+C là 45-70%.Vi khuẩn không lưu huỳnh màu lục (Green nonsulfur bacteria) 5-Vi khuẩnlam(Ngành Cyanobacteria) a. Chi Chromatium 1.7. Chi Thiocystis 1.Vi khuẩn lưu huỳnh màu tía (Purple sulfur bacteria): a-HọChromatiaceae: b-HọEctothiorhodospiraceae: 2-Vi khuẩn không lưu huỳnh màu tía (Nonsulfure purple bacteria) 3.Vi khuẩn lưu huỳnh màu lục (Green sulfure bacteria) 4.1. Chi Thiospirillum 1.Nhóm II (có tác giả gọi là bộ Pleurocapsales): c.Chi Thiodyction .Nhóm V (có tác giả gọi là bộ Stigonematales) 1. a.4.

13. Chi Thiorhodococcus Chromatium Thiocapsa Thiocystis Thiospirillum Lamprocystis Thiopedia Hình 9.168 1.11.12.Chi Thiopedia 1.1: Một số đại diện vi khuẩn lưu huỳnh màu tía thuộc Họ Chromatiaceae . Chi Rhabdochromatium 1.

hệ thống quang hợp chứa các màng hình cầu hay hình phiến (lamellar) gắn với màng sinh chất.7.Chi Phaeospirillum 2. một số loài là quang tự dưỡng vô cơ không bắt buộc (trong tối là hoá dị dưỡng hữu cơ.Chi Rhodobacter 2. Có khả năng di động với tiên mao mọc ở cực.11.Chi Halorhodospira 1.8.Chi Rubiviva .Chi Rhodobium 2.3.Chi Blastochloris 2.14.10-Chi Rhodopila 2. Tế bào chứa chlorophyl a hoặc b.Chi Rhodothalassium 2.6. một số loài có túi khí (gas vesicles).Chi Rosespira 2.16-Chi Rhodovulum 2.2.18.2.Chi Ectothiorhodospirace 1.Chi Rhodocista 2.5. đôi khi sử dụng hợp chất lưu huỳnh dạng khử hoặc H2. Để dùng làm nguồn cho điện tử (electron donors) trong quang hợp thường sử dụng chất hữu cơ.169 b.15.2-Vi khuẩn không lưu huỳnh màu tía (Nonsulfure purple bacteria) Vi khuẩn không lưu huỳnh màu tía là nhóm vi khuẩn quang dị dưỡng hữu cơ (photoorganoheterotrophs) thường kỵ khí bắt buộc.1.4.Chi Rhodopseudomonas 2.1.Chi Rhodocyclus 2.Họ Ectothiorhodospiraceae: 1.Chi Rhodomicrobium 2.Chi Rhodospirillum 2.Chi Rhodovibrio 2.17. 2.Chi Rhodoplanes 2.Chi Rhodospira 2.chemoorganoheterotrophs).Chi Rhooferax 2.9. hoặc không di động.12.13. tỷ lệ G+C là 61-72%.

170 Rhodospirillum Rhodospirillum dưới KHV điện tử Rhodopseudomonas Rhodopseudomonas dưới KHV điện tử Rhodobacter Rhodopila Rhodocyclus purpureus Rhomicrobium Hình 9.2: Một số đại diện vi khuẩn không lưu huỳnh màu tía .

H2S.1.Chi Prosthecochloris 3.Chi Chloroherpeton Chlorobium Pelodictyon Prosthecochloris Hình 9. Chloronema .3: Một số đại diện vi khuẩn lưu huỳnh màu lục 1.Vi khuẩn lưu huỳnh màu lục (Green sulfure bacteria) Thuộc nhóm này là các vi khuẩn kỵ khí bắt buộc. Để dùng làm nguồn cho điện tử (electron donors) trong quang hợp thường sử dụng H2. Để dùng làm nguồn cho điện tử (electron donors) trong quang dị dưỡng là glucose.4.171 1. H2S hay S .Chi Pelodictyon 3.Vi khuẩn không lưu huỳnh màu lục (Green nonsulfur bacteria) Thuộc nhóm này là các vi khuẩn đa bào.Chi Chlorobium 3.thường kỵ khí không bắt buộc . trong điều kiện kỵ khí thấy có chlorosom.3.4..3.thường là quang dị dưỡng (photoheterotroph). một số loài có túi khí.Chi Ancalichliris 3. trong quang tự dưỡng là H2. axit amin. c hoặc e. tế bào có chứa chlorophyll a cùng với b . hệ thống quang hợp liên quan đến các lục thể (chlorosom) và độc lập đối với màng sinh chất. chứa caroten nhóm 5. có loài quang tự dưỡng hoặc hoá dị dưỡng.2. có khả năng quang tự dưỡng vô cơ (photolithoautotroph). Tế bào có chứa chlorophyll a và c. axit hữu cơ. Di động bằng phương thức trườn (gliding) . tỷ lệ G+C là 48-58%. Chi điển hình là Chloroflexus.5. 3. dạng sợi. tỷ lệ G+C là 53-55%. Hạt lưu huỳnh tích luỹ bên ngoài tế bào Không có khả năng di động .

Dương xỉ.5.4: Một số đại diện vi khuẩn không lưu huỳnh màu lục 1. Thực ra đây là những cơ thể nhân nguyên thuỷ. trong nước ngọt và nước mặn. Chúng phối hợp với sắc tố lục tạo nên màu nâu.. trên đá.phycobiliprotein. Đơn bào hoặc đa bào dạng sơi. một số loài có túi khí (gas vesicles). Không di động hoặc di động bằng cách trườn (gliding). pH thấp. Tuế.Nhiều loại có dị tế bào (heterocysts) và có khả năng cố định nitơ. không liên quan gì đến tảo . trong suối nước nóng. Một số loài có khả năng sống cộng sinh với các cơ thể khác như Rêu. Vi khuẩn lam có mặt ở khắp mọi nơi. Chúng có năng lực chống chịu cao hơn so với thực vật đối với các điều kiện bất lợi như nhiệt độ cao. ngoài khả năng quang hợp hiếu khí (quang tự dưỡng vô cơ) và dùng H2O làm chất cho điện tử trong quá trình quang hợp. Một số loài có sắc tố đỏ phycoerythrin..Nhiều loài cộng sinh với nấm để tạo ra Địa y (Lichen).Vi khuẩn lam (Ngành Cyanobacteria) Theo NCBT (2005) thì Vi khuẩn lam bao gồm những bộ sau đây: • • • • • • -Chlorococcales -Gloeobacteria -Nostocales -Oscillatoriales -Pleurocapsales -Prochlorales Trước đây thường nhầm lẫn là Tảo lam (Cyanophyta).172 Chloronema Chloroflexus Hình 9. trong đất. Vi khuẩn lam chứa chlorophyll a và phycocyanin. Màng liên kết với phycobilisom. Vi khuẩn lam có thể là sinh vật xuất hiện sớm nhất trên Trái đất .

không có dị tế bào. Hầu hết không di động.Chỉ có các baeocytes là có di động. Tỷ lệ G+C là 31-71% .Nhóm I (có tác giả gọi là bộ Chroococcales): Hình que hoặc hình cầu đơn bào. không có dị tế bào (heterocytes).5: Một số đại diện vi khuẩn lam thuộc bộ Chroococcales b-Nhóm II (có tác giả gọi là bộ Pleurocapsales): Hình que hoặc hình cầu đơn bào. phân cắt nhiều lần tạo ra các baeocytes. Tỷ lệ G+C là 40-46% . không có dạng sợi hay dạng kết khối (aggregate). Các chi tiêu biểu là: -Chamaesiphon -Chroococcus -Gloeothece -Gleocapsa -Prochloron Chamaesiphon Chroococcus Prochloron Hình 9. phân đôi hoặc nẩy chồi. Các chi tiêu biểu là: • -Pleurocapsa • -Dermocapsa • -Chroococcidiopsis Glooeothece Gleocapsa . có thể tạo dạng kết khối (aggregate).173 Vi khuẩn lam được chia thành 5 nhóm (subsection) như sau: a.

không có dị tế bào.7: Một số đại diện vi khuẩn lam thuộc bộ Oscillatorriales .6: Một số đại diện vi khuẩn lam thuộc bộ Pleurocapsales c-Nhóm III (có tác giả gọi là bộ Oscillatorriales): Dạng sợi (filamentous) . Tỷ lệ G+C là 3467%. Các chi tiêu biểu là: • -Lyngbya • -Osscillatoria • -Prochlorothrix • -Spirulina • -Pseudanabaena Lyngbya Oscillatoria Prochlorothrix Spirulina Pseudanabaena Hình 9. có kiểu đứt đoạn (fragmentation). thường di động.174 Pleurocapsa Dermocapsa Chroococcidiopsis Hình 9. dạng lông (trichome) không phân nhánh chỉ có ở các tế bào dinh dưỡng. phân đôi trên mặt phẳng.

có tế bào dị hình . phân đôi trên mặt phẳng.175 d-Nhóm IV (có tác giả gọi là bộ Nostocales) Dạng sợi . có kiểu đứt đoạn tạo thành đoạn sinh sản (hormogonia) . Các chi tiêu biểu là : • -Anabaena • -Cylindrospermum • -Aphanizomenon • -Nostoc • -Scytonema • -Calothrix Anabaena Anabaena trong Bèo hoa dâu Cylindrospermum Calothrix . Tỷ lệ G+C là 38-47%. dạng lông (trichome) không phân nhánh có thể chứa các tế bào biệt hoá (specialized cell) . thường di động có thể sản sinh bào tử màng dày (akinetes).

hình thành đoạn sinh sản (hormogonia) . chất khuẩn lục và huyết sắc tố có cấu trúc tương tự như nhau.9: Một số đại diện vi khuẩn lam thuộc bộ Stigonematales 2. Tỷ lệ G+C là 42-44%. còn lõi của huyết sắc tố là Fe. Các chi tiêu biểu là : -Fischerella -Stigonema -Geitlerinema Stigonema Fischerella Geitlerinema Hình 9. có tế bào dị hình . phân nhánh hoặc do các tế bào nhiều hơn một chuỗi tạo thành . có thể sản sinh bào tử màng dày ( alkinetes). Đó là một vòng pocphiril do 4 nhân pirol liên kết với nhau.Trao đổi chất ở các vi sinh vật quang dưỡng Tất cả các vi khuẩn quang hợp đều chứa sắc tố quang hợp. Chất diệp lục.176 Nostoc Scytonema Hình 9. Sắc tố quang hợp ở vi khuẩn được gọi là bacteriochlorophyll. phân đôi theo nhiều mặt phẳng. chất diệp lục a . Chlorophyll và bacteriochlorophyll còn được gọi là chất diệp lục và chất khuẩn lục. có hình thái phức tạp và biệt hóa (differentiation).8: Một số đại diện vi khuẩn lam thuộc bộ Nostocales e-Nhóm V (có tác giả gọi là bộ Stigonematales) : Lông (trichome) dạng sợi. Lõi của chất diệp lục và chất khuẩn lục là Mg.

1: Sự sai khác giữa chất diệp lục a và các loại chất khuẩn lục Chú thích: a→ giữa C3 và C4 không có nối đôi. có thêm H Có thể thấy rõ hơn sự phân biệt của hai loại chlorophyll.bằng cách quan sát hình sau đây: .e ở 7 gốc R (từ R1 đến R7) có thể thấy rõ sự khác nhau này trong bảng sau đây: Bảng 9.. bacteriochlorophyll và hem.b.c.. không thêm H b→ giữa C3 và C4 không có nối đôi.d.177 khác với chất khuẩn lục a.

9.178 H.10: Cấu trúc hóa học của một số sắc tố quang hợp .

12:Phosphoryl hóa quang hợp kiểu tuần hoàn Trong điều kiện kỵ khí một số vi khuẩn quang hợp có thể sử dụng năng lượng của ánh sáng để thực hiện phản ứng phosphoryl hóa sản sinh ra ATP.179 Ngoài các loại chlorophyll vi khuẩn tự dưỡng quang năng còn có chứa một số các sắc tố thuộc loại carotenoit.11: Cấu trúc hóa học các loại carotenoit Ở vi khuẩn tự dưỡng quang năng có hai loại phosphoryl hóa quang hợp: phosphoryl hóa quang hợp tuần hoàn và phosphoryl hóa quang hợp không tuần hoàn. [H] có năng lực khử được sinh ra từ các chất vô cơ cho hydrogen (như H2S... Electron từ bacteriochlorophyll được tách ra dưới tác dộng của ánh sáng. sau đó tham gia vào chuỗi hô hấp tuần hoàn và quay trở lại Bchl. Trên đường đi đã sản sinh ra ATP. 9.).Quá trình quang hợp này không sản sinh ra oxi.9. Việc sinh ra ATP được thực hiện riêng rẽ với việc sinh ra [H] có năng lực khử. Chú thích Bchl*: trạng thái kích phát của bacteriochlorophyll Ru-5-P: Ribulose-5-phosphate H2A: Chất vô cơ cho hydrogen H. . Carotenoit ở vi khuẩn không giống với carotenoit ở tảo hoặc thực vật. Dưới đây là vài ví dụ: H.

180

H.9.12: Phosphoryl hóa quang hợp kiểu không tuần hoàn

Chú thích: Chlb* và Chla* là ở trạng thái kích phát. Đây là kiểu phản ứng phosphoryl hóa quang hợp gặp ở vi khuẩn lam và cũng tương tự như ở tảo và cây xanh. Ở đây chuỗi vận chuyển electron là không tuần hoàn vì vậy còn gọi là dòng chảy electron không tuần hoàn. Quang hợp xảy ra trong điều kiện có oxi và có 2 hệ thống quang. Hệ thống quang I có chứa Chl a (chất diệp lục a) và có thể sử dụng được tia đỏ có bước sóng dài. Hệ thống quang II có chứa Chl.b và có thể sử dụng được tia sáng lam (bước sóng ngắn). Quá trình quang hợp này có sản sinh oxi và xảy ra đồng thời việc sinh ATP(ở hệ thống quang hợp II) và việc sinh [H] có năng lực khử (trong NAD PH2) là H+ và e-, được sinh ra sau sự quang giải nước. Sau quang giải nước sản sinh ra ½ O2 +2H+ + 2e, electron sẽ liên tiếp đi qua chuỗi electron (I và II), sau cùng đem electron đến cho NADP+ để sản sinh ra 2 phản ứng phophoryl hóa để sinh ATP. Ở hệ thống I có sinh NADPH2 và ATP, còn ở hệ thống II có sinh oxi và ATP. Một số vi khuẩn ưa mặn tự dưỡng quang năng có quá trình quang hợp khá dặc biệt. Đại diện cho nhóm này là các vi khuẩn hay gặp trên các hải sản ướp muối (như vi khuẩn Halobacterium halobium, H.eutirubrum...) Màng chất té bào của chúng phân thành 2 phần: phần màu đỏ và phần màu tía. Phần màu đỏ có chứa cytocrom, flavoprotein.. của chuỗi hô hấp dùng để oxi hóa phosphoryl hóa. Phần màu tía rất kì lạ. Trên màng hiện lên các vết khoang (đường kính khoảng 0,5μm), phân bố độc lập với

181

nhau, chiếm tới một nửa tổng diện tích của màng tế bào vi khuẩn. Màng này có khả năng thực hiện một quá trình quang hợp độc đáo. Có một loại protein gọi là bacteriorodopsin, rất giống với rodopsin, loại protein có trong tế bào hình trụ ở trên võng mạc của mắt. Bacteriorodopsin chiếm tới 75% màng màu tía. Những vi khuẩn này có thể sinh trưởng được trong tối hoặc ngoài sáng nếu có mặt oxi, khi không có mặt oxi chúng chỉ sinh trưởng được ngoài sáng. Chúng có 2 con đường thu nhận năng lượng: một đường oxi hóa phosphoryl hóa khi có oxi và một đường oxi hóa phosphoryl hóa khi được chiếu sáng (quang hợp). Tốc độ tạo ra ATP là cao nhất khi được chiếu sáng bằng bước sóng 550-600nm.

H.9.13: Sơ đồ minh họa 2 hệ thống quang

3. Cơ chế quang hợp
3.1. Pha sáng quang hợp Pha sáng là giai đoạn đầu của quang hợp, giai đoạn này ánh sáng là nhân tố trực tiếp tham gia vào quang hợp nên gọi là pha sáng. Pha sáng xảy ra qua 2 giai đoạn: giai đoạn quang lý và giai đoạn quang hoá. * Giai đoạn quang lý: Nhờ tính chất quang hoá của ánh sáng và khả năng hấp thụ năng lượng ánh sáng của phân tử chlorophyll mà năng lượng của ánh sáng được chuyển sang năng lượng của điện tử trong các phân tử chlorophyll. Năng lượng này lại chuyển đến 2 tâm quang hợp là λ700 và λ680 để thực hiện giai đoạn quang hoá tiếp. * Giai đoạn quang hoá: quang hoá là giai đoạn chuyển hoá năng lượng của các điện tử trong 2 tâm quang hợp đã được làm giàu bởi năng lượng ánh sáng thành năng lượng chứa đựng trong các hợp chất giàu năng lượng là ATP và NADPH2. Giai đoạn quang hoá xảy ra tại 2 tâm quang hợp bởi 2 phản ứng

182

quang hoá mà phần chính là quang phân ly nước và phosphoryl hoá. - Quang phân ly nước: Nhờ năng lượng ánh sáng với sự tham gia của sắc tố và hệ thống các chất oxi hoá trong lục lạp mà nước bị phân huỷ. 2H2O ( 4H+ + 4è + O2 ) - Phosphoryl hoá : đây là quá trình tổng hợp ATP nhờ năng lượng của quá trình oxi hoá xảy ra trong chuỗi vận chuyển è quang hợp. ADP + H3PO4 → ATP + H2O Có 3 hình thức Phosphoryl hoá xảy ra: + Phosphoryl hoá vòng. + Phosphoryl hoá không vòng. + Phosphoryl hoá hoá vòng giả. Kết quả chung của pha sáng là: 12H2O +18ADP +18H3PO4+12NADP+ →18ATP + 12NADPH+H+ + 6O2 + 18H2O Pha sáng đã tạo ra ATP và NADPH+H+ cung cấp cho pha tối quang hợp. 3.2. Pha tối quang hợp Sau khi pha sáng tạo ATP và NADPH+H+, giai đoạn tiếp theo của quang hợp là sử dụng ATP và NADPH+H+ để khử CO2 tạo sản phẩm sơ cấp của quang hợp là C6H12O6. Quá trình này không cần ánh sáng nên gọi là pha tối. Pha tối diễn ra nhiều con đường khác nhau, mỗi con đường đặc trưng cho một nhóm thực vật. Có 3 con đường đồng hoá CO2 trong quang hợp: chu trình Calvin, chu trình Hatch-Slack và chu trình CAM. * Chu trình Calvin (chu trình C3) - Đây là con đường đồng hoá CO2 phổ biến nhất do Calvin tìm ra. Chu trình xảy ra qua 3 giai đoạn chính: + Tiếp nhận CO2 : Ribulozo 1,5dP tiếp nhận CO2 sau đó biến đổi thành 2 phân tử APG. APG là sản phẩm đầu tiên nên chu trình còn được gọi là chu trình C3. + APG bị khử thành AlPG nhờ ATP và NADPH+H+ của pha sáng. + AlPG sẽ tái tạo lại Ribulozo 1,5dP đồng thời tạo nên sản phẩm của chu trình là C6H12O6. Tóm tắt chu trình Calvin:

183

C5 + CO2 + ATP + NADPH ---> C6H12O6
H. 9.14: Chu trình Calvin www.starsandseas.com/. ../cellcalvin.htm

II.Cố đinh nitrogen phân tử
Trong không khí có rất nhiều N phân tử, nhưng tuyệt đại đa số sinh vật không sử dụng được nguồn N này. Chỉ có một số VSV là có thể hấp thụ được N. Qua hoạt động sống của chúng N sẽ được chuyển thành N hợp chất (protein và các sản phẩm thủy phân protein). Hoạt động này được gọi là sự cố định N phân tử. Quá trình cố định N có tác dụng rất lớn đến đời sống các sinh vật trên trái đất. Trên cơ bản trong nham thạch không chứa hợp chất N. Cho nên nguồn N trong đất hầu như hoàn toàn do tác dụng cố định N của VSV mà hình thành. Hàng năm cây trồng lại lấy đi một lượng N đáng kể. Hợp chất N được hình thành trong quá trình cố định này lại chính là nguồn N chủ yếu bổ sung cho đất. Các loại VSV cố định N không nhiều lắm, có thể chia làm hai loại lớn như sau: 1.Vi sinh vật cố định N sống tự do (không cộng sinh): bao gồm một số vi khuẩn, xạ khuẩn. Trong số này quan trọng nhất là các loài thuộc chi Azotobacter và loài Clostridium Pasteurianum. 1. Azotobacter 1.1.Sơ lược về Azotobacter Azotobacter là vi khuẩn cố định N sống tự do trong đất, hiếu khí, không có bào tử. Chúng đã được phân lập và nuôi cấy thuần khiết từ năm

184

1901 do nhà VSV Hà Lan Beijerinck. Đại diện điển hình của chi này là Azotobacter chroococcum. Do điều kiện nuôi cấy và lứa tuổi khác nhau mà Azotobacter có hình thái thay đổi. Lúc còn non Azotobacter là những trực khuẩn mập hình que, có tiên mao, có khả năng di động, khi già thì trở thành tế bào hình cầu có giáp mạc xung quanh. Azotobacter có thể sử dụng nhiều loại hợp chất hữu cơ làm nguồn thức ăn C. Chúng cũng cần nhiều nguyên tố khoáng, đặc biệt là 2 nguyên tố vi lượng bor (B) và molipbden (Mo)(Mo cần cho tác dụng cố định N). Khi sống trong điều kiện không có N hợp chất Azotobacter sẽ dùng N của không khí để biến thành hợp chất N của cơ thể sống. Khi sống trong môi trường đủ thức ăn N hữu cơ hoặc vô cơ thì tác dụng cố định N sẽ rất thấp hoặc không có. Azotobacter thích hợp với điều kiện hiếu khí vừa phải và pH trung tính hoặc hơi kiềm. Trong điều kiện thích hợp cứ mỗi khi tiêu thụ 1gam hydratcarbon Azotobacter có thể cố định được 10- 15mg N. Vì Azotobacter có khả năng cố định N mạnh mẽ như vậy nên từ cuối thế kỷ 18 đã có nhiều nước nghiên cứu sử dụng chúng làm phân vi khuẩn (gọi là phân Azotobacterin). Việc sử dụng Azotobacterin cũng đang phát triển mạnh ở nhiều nước và thu được kết quả. Tuy nhiên sử dụng Azotobacterin không phải là vấn đề tiếp giống đơn giản, mà còn phải tạo điều kiện để chúng phát triển mạnh cố định được nhiều N, nghĩa là sử dụng kỹ thuật liên hoàn. Để chế tạo Azotobacterin trước hết ta nuôi thật nhiều Azotobacter trên môi trường đặc hoặc lỏng có bơm không khí. Sau đó đem trộn chúng với than bùn hoặc các chất nuôi dưỡng khác để chế thành bột Azotobacterin. 1.2. Một số đặc điểm sinh học của vi khuẩn Azotobacter a. Hình thái khuẩn lạc Khi nuôi trong môi trường thạch,vi khuẩn Azotobacter có khuẩn lạc nhầy, lồi hoặc tan, lúc đầu không màu, sau biền thành màu nâu tối, thậm chí đến màu đen nhưng không làm nhuộm màu môi trường khuẩn lạc. Ngoài ra một số loài Azotobacter có dạng nhăn nheo, khuẩn lạc có màu vàng lục, màu hồng . Vỏ nhầy của vi khuẩn Azotobacter chứa khoảng 75% là chất hiđrit của acid uronic và chứa khoảng 0.023% N.

15: Hình dạng tế bào Azotobacter sp. Sinh chất xuất hiện nhiều hạt lổn nhổn. Khi còn non tế bào có dạng que đầu tròn đứng riêng lẻ hay xếp thành từng đôi chồng chất. urê.0. Các đặc tính sinh lí.7. nhiều tác giả cho biết có không ít các chủng Azotobacter không có khả năng đồng hoá lactose.0 × 10. sinh hoá.2. b. … tuy vậy. (a) dưới kính hiển vi điện tử (b) tiêu bản âm (www-micro.ac.3. hợp chất thơm. dextrin.0. chất tế bào nhuộm màu đồng đều. Khi già tế bào Azotobacter mất khả năng di động.5 μ m . tinh bột. Đó là các hạt volutin. acid hữu cơ. Khả năng sử dụng nguồn N: Trên các môi trường không chứa N khuẩn lạc Azotobacter có dạng nhầy. 1. Một số chủng Azotobacter có khả . manitol hoặc natribenzoat. Hình thái tế bào vi khuẩn Azotobacter Azotobacter là loại vi khuẩn Gram âm không sinh bào tử. các giọt mỡ… Lượng ADN trong tế bào Azotobacter thường thấp hơn so với nhiều loại vi khuẩn khác (0. lồi. Tóm lại hình dạng tế bào Azotobacter và chu kì biến đổi của chúng phụ thuộc vào tuổi của ống giống và điều kiện phát triển. 9.81%). đôi khi nhăn nheo. Đặc điểm nuôi cấy : Vi khuẩn Azotobacter thuộc loại vi khuẩn hiếu khí. a. sống theo phương thức dị dưỡng. kích thước khoảng :2.uk/ video/Azotobacter. có khả năng di động nhờ tiên mao.le. granulose.185 H. kích thước thu nhỏ lại biến thành dạng hình cầu. Sở dĩ chúng tồn tại được là vì có khả năng đồng hoá muối amonium. Chúng sử dụng nhiều loại hợp chất hữu cơ khác nhau: disacarit.html) b. Chứng tỏ vi khuẩn Azotobacter có khả năng sinh trưởng trên môi trường không có N.msb.70.

sự phát triển và khả năng cố định N của chúng trong đất chịu ảnh hưởng của các điều kiện sau: a. Vì vậy ít gặp chúng ở vùng khô hạn. Độ ẩm của đất Azotobacter đòi hỏi độ ẩm rất cao của đất. A. Tế bào sinh dưỡng của Azotobacter không sống được khi xử lí 500C trong 30 phút. 1. Độ thoáng khí . pH của đất. chroococcum.5. b. Azotobacter thích hợp nhất với pH = 7. sự khô hạn của đất chỉ có bào xác của chúng mới chịu đựng được. Ở nhiệt độ 70C Azotobacter có hoạt động cố định N thấp hơn 5 lần so với 450C. 1. tương đương với nhu cầu của cây trồng.5. song có thể phát triển được ở pH = 4. Đặc điểm phân loại của vi khuẩn Azotobacter Theo Becking (1974) thì vi khuẩn cố định đạm thuộc chi Azotobacter có 4 loài: A.20%. Hai loại acid thích hợp nhất đối với nhu cầu dinh dưỡng của Azotobacter là acid glutamic và axtit asparaginic. A. khi nồng độ ôxi trong không khí là 4% quá trình cố định N vượt quá ba lần so với khi ôxi là 10. ở nhiệt độ 800C sẽ chết rất nhanh.4. Ẩm độ thích hợp:75. Nhiệt độ ảnh hưởng đến Azotobacter không giống nhau ở các vùng địa lí khác nhau. không khí quá mạnh cũng ức chế quá trình cố định N phân tử.9. Ảnh hưởng các nhân tố sinh thái đến sự sinh trưởng và phát triển của các vi khuẩn Azotobacter Vi khuẩn Azotobacter hiếu khí. Độ thoáng khí của đất có liên quan đến quá trình cố định N của Azotobacter.0. Chẳng hạn: pH thấp nhất của môi trường đối với Azotobacter . Nhu cầu về độ ẩm của chúng cao hơn so với các vi khuẩn khác. d. pH của đất ảnh hưởng không giống nhau đến sự phát triển và khả năng cố định N của Azotobacter.186 năng sử dụng nitrit. nitrat.2.80%. Tuy vậy vi khuẩn thuộc loại hiếu khí nhưng có thể phát triển được trong điều kiện vi hiếu khí. Quá trình cố định N của Azotobacter bị giảm khi thể ôxi hoá khử của môi trường cao quá +200 mv hoặc thấp quá (–) 200 mv. Như vậy. c .28. Nhiệt độ thích hợp đối với sự phát triển của Azotobacter vào khoảng 20-300C. vinelandii. beijerinckii. Các loài Azotobacter khác nhau mẫn cảm một cách khác nhau đối với pH của môi trường. Ở vùng nhiệt đới Azotobacter thích hợp với nhiệt độ 35400C. agilis . A. Nhiệt độ.

Sự phát triển của Azotobacter rất cần đến kali. có thể tác hại này là do gốc anion của muối này gây ra. beijerinck khoảng 5.đạt tới 800 mg trong 100 ml quá trình cố định N sẽ bắt đầu ngừng lại. Phân đạm Trong đất Azotobacter có khả năng đồng hoá các chất dinh dưỡng từ môi trường. Nếu đưa vào môi trường một lượng muối kali quá dư thừa chúng sẽ làm ức chế sự phát triển của Azotobacter. Khi thiếu canxi tế bào Azotobacter sẽ tạo thành nhiều không bào ảnh hưởng xấu đối với việc tổng hợp ATP và sự tạo thành các polyphotphat. amino acid. Phần lớn Azotobacter chỉ phát triển ở pH lớn hơn 6.6. Sự mẩn cảm mạnh mẽ của Azotobacter với phốt pho cho phép người ta sử dụng chúng như loại vi khuẩn chỉ thị để xác định nhu cầu về phospho của đất. i.nếu cao hơn sẽ ảnh hưởng không tốt đối với hoạt động cố định N của chúng.187 chroococcum và A. nguyên tố Mg được Azotobacter đòi hỏi với số lượng cao hơn sắt khoảng 10 lần . Hầu như không phát triển trong mẫu đất có có lượng chứa CaO dưới 0. Có tác giả đã dùng A. đối với A. Tuỳ thuộc vào nồng độ của các hợp chất chứa N có trong môi trường mà quá trình cố định N sẽ bị ức chế nhiều hay ít .25% (Nguyễn Lân Dũng 1965) Riêng đối với A. Những điều tra ở Việt Nam cho thấy trong đất có lượng chứa CaO cao hơn 0. Phân kali. Nguồn N đối với Azotobacter không phải chỉ là N phân tử mà còn là muối amon. Canxi.4% luôn có mặt một số lượng lớn các tế bào Azotobacter.chroococcum nồng độ CaCl2 .01% .thích hợp nhất là 0. vì vậy ít gặp chúng ở đất chua. Phốt pho rất cần cho quá trình cố định N của Azotobacter chỉ bắt đầu xảy ra khi nồng độ PO43. h. e. Canxi ảnh hưởng lớn đến sự phát triển của Azotobacter. . Ngược lại khi nồng độ PO43. g. nhưng với lượng nhỏ. Cũng có thể phân lập được một số chủng từ đất chua nhưng các chủng này thường đã mất khả năng cố định N phân tử.đạt đến 4 mg trong 100 ml môi trường. nitrat. marocytoges là khoảng 4.5. Phân lân. chroococum như là loài vi khuẩn chỉ thị để xác định nhu cầu về vôi của đất.

chroococum có khả năng sinh ra một số chất chống nấm có tác dụng khá rộng (ức chế Aspergillus. Đã có nhiều công trình nghiên cứu đề cập đến mối quan hệ gữa Azotobacter với cây trồng với số lượng cao hơn nhiều so với ngoài vùng rễ .người ta đã sản xuất ở quy mô công nghiệp hoặc thủ công nghiệp những chế phẩm Azotobacter và gọi là azotobacterin. các nguyên tố vi lượng cũng cần thiết đối với Azotobacter. Alternaria …) 1. Ở Việt Nam. việc sản xuất và sử dụng chế phẩm azotobacterin chỉ đặt ra trong những điều kiện thâm canh có khả năng dồi dào về phân bón.6. bo(Bo). Các phương pháp tạo chế phẩm Azotobacter . Các nhân tố sinh học Sự phát triển và cố định N của Azotobacter trong đất còn chịu ảnh hưởng mật thiết của khu hệ các sinh vật đất. ở nhiều nước khác nhau . Trong nhiều năm. Một số chủng A. mangan(Mn) k. Penicillium. Fusarium. Có lẽ tác dụng chủ yếu của chúng không phải ở khía cạnh cố định N mà là ở khía cạnh tổng hợp các chất hoạt động sinh học có tác dụng kích thích sinh trưởng của cây trồng . Đó là những dịch nuôi cấy Azotobacter được hấp thụ vào than bùn hoặc các loại đất giàu chất hữu cơ đã trung hoà và bổ sung thêm một ít phân phospho. cần bón vôi và bón phân lân để làm tăng số lượng Azotobacter trong đất. đáng chú ý hơn cả là molybden. kali… Khác với nitragin. Azotobacterin chỉ có tác dụng tương đối rõ đối với các loại đất giàu chất hữu cơ hoặc trong trường hợp được bón thêm nhiều chất khóang. Tình hình nghiên cứu ứng dụng Azotobacter. Bên cạnh các nhóm vi sinh vật có ảnh hưởng tốt còn có nhiều nhóm có khả năng ức chế sự phát triển của Azotobacter . azotobacterin khi dùng để bón cho cây trồng thường đưa đến những hiệu quả không lớn và không ổn định (nếu có làm tăng sản lượng thường cũng không tăng quá 10% so với đối chứng ).188 Cùng với nguyên tố đại lượng. a. Đa số các tác giả cho rằng hiệu quả của việc sử dụng azotobacterin chỉ tương đối với các đất giàu chất hữu cơ hoặc trong trường hợp được bón thêm nhiều phân khoáng.Có lẽ tác dụng chủ yếu của chúng không phải ở khía cạnh cố định N mà là ở khía cạnh tổng hợp các chất hoạt động sinh học có tác dụng kích thích sự sinh trưởng của cây trồng .

H20 -1 lít .2 K2HPO4. K2HPO4.0 1 lít H2O pH 6.2. đất bột giàu chất hữu cơ.0. * Dạng dịch thể Chuẩn bị môi trường dịch thể Thành phần môi trường (g/l): Glucose 20 0. chất mang vi khuẩn có thể là than bùn. chất mang vi khuẩn phải đạt yêu cầu thích hợp vớ sự tồn tại của Azotobacter trong quá trình bảo quản và độ sống sót trên hạt giống khi được tẩm vào.1. bã bia làm chất mang vi khuẩn .3H2O MgSO4. MgSO4 . đưa dịch vi khuẩn vào bình nón (250500ml) đựng 150ml môi trường và nuôi chúng trên máy lắc(220 dao động/phút) .5-7. K2SO4 -0.7H2O -0. Khi khi dịch nuôi đạt mật độ 109 tế bào/ml thì có thể đem sử dụng * Dạng bột Nuôi cấy giống vi khuẩn Nhân giống Hâp thụ giống vào chất mang vi khuẩn Điểm quan trọng cua phương pháp này là lựa chọn chất mang vi khuẩn. loại bỏ những ống bị nhiễm vi sinh vật khác ta thu được chủng Azotobacter thuần khiết. NaCl. Ủ ấm ở nhiệt độ: 28-30 0 C trong thời gian 2-6 ngày.7H2O 0.2 NaCl 0.5-7 Chuẩn bị giống vi khuẩn Azotobacter : Lấy 5-10 ml môi trường dịch thể (Có thành phần như trên không có thạch) đã khử trùng cho vào mỗi ống nghiệm φ 14 5ml Dùng que cấy gạt nhẹ.2 K2SO4 0.3H2O -0. có nơi sử dụng cả trấu. Tạo chế phẩm: Cấy truyền giống vi khuẩn Azotobacter từ giống gốc vào những ống nghiệm thạch nghiêng. Chuẩn bị giống Azotobacter :Các ống giống đã được phân lập và tuyển chọn từ trước.189 * Dạng môi trường thạch nghiêng Chuẩn bị môi trường thạch nghiêng Thành phần môi trường (g/l):Glucose-20.Thạch 20 pH: 6.1 CaCO3 5.0. CaCO3 -5.2.2.

chúng có thể sử dụng được N không khí. có tính hấp thụ cao. nó còn là nguyên liệu rẻ tiền sẳn có ở nhiều nơi. khi những hợp chất này đầy đủ thì tác dụng cố định N của chúng hạ thấp hoặc hoàn toàn không có. C. trong các VSV cố định N còn có một số vi khuẩn thuộc chi Clostridium. Trong quá trình phát triển. bào tử nằm ở giữa làm tế bào phình lên như hình thoi. Nhưng khả năng này không phải bản thân cây họ đậu có mà do những vi khuẩn nốt rễ cộng sinh với cây họ đậu mang lại. có bào tử.1. Chúng có thể sử dụng hợp chất N vô cơ và hữu cơ làm nguồn thức ăn N. acetic. Vi khuẩn cố định N cộng sinh. Tuy nhiên. 2.2(m x 0. Clostridium pasteurianum và một số VSV cố định N khác C. Phần lớn các cây thuộc họ đậu không cần thức ăn hợp chất. pasteurianum thấp hơn Azotobacter. pasteurianum là một loại vi khuẩn butyric. hiếu khí. rất dễ nhầm với Pseudomonas. CO2 và H2. . nó thay đổi hình dạng tùy theo lứa tuổi và điều kiện sống. Khi còn non chúng là trực khuẩn nhỏ bé. 2. Tuy nhiên C. không có bào tử. chữ V gọi là giả khuẩn thể (Bacteroids). Giống (chi) Rhizobium (Franck.Pasteurianum rất nhiều và phân bố rộng rãi hơn Azotobacter nên nguồn N mà chúng cố định cho đất là rất quan trọng. Chúng lại phát triển được ở ruộng ngập nước. chúng có thể sử dụng các hydratcarbon thông thường và làm lên men suinh ra acid butyric. vì những loài này phân bố không nhiều và hiệu lực cố định N cũng thấp nên tác dụng thực tế không lớn lắm. Ngoài hai loài trên. Vi khuẩn nốt rễ Người đầu tiên chứng minh rằng các cây bộ đậu có thể sinh trưởng trong đất không chứa N là H. giữ nước tốt . 1.Beijerinck đã phân lập được vi khuẩn từ nốt rễ một số cây đậu. Hellrigel và H. yêu cầu pH không gắt gao nên thích hợp cho các loại ruộng của ta.pasteurianum là trực khuẩn kị khí bắt buộc.W. Tác dụng cố định N của C. trực khuẩn tự do có kích thước 1.5 chuyển động nhờ nhung mao và tiên mao ở cực. chúng sẽ chuyển thành hình cầu và những dạng phân nhánh hình chữ Y. Ngoài đặc tính của than bùn là không độc. Wilfarth (1886). Bacillus và Azotomonas. Khi hình thành nốt sần thì trực khuẩn biến dạng (có hiện tượng đa hình thái). Cứ mỗi khi tiêu thụ 1g hydratcarbon thì chúng cố định được 2-3 mg N.190 Ngày nay chất mang vi khuẩn được sử dụng bởi than bùn thích hơp trong việc sử dụng chế phẩm vi khuẩn nói chung và chế phẩm Azotobacter nói riêng.2. 1889) là loại vi khuẩn đơn bào ở đất. Năm 1886 M. di động nhờ tiên mao.

Nhóm này hiện nay được định loại là Bradyrhizobium (gồm tất cả các chủng mọc chậm. đậu xanh). Japonicum (đậu nành) với nhiều loài phụ. trong nốt rễ chứa đầy vi khuẩn. Rhizobium có nhiều loài và có tính chất chuyên tính. R. -Rhizobium lupini (mục túc. Về hô hấp. nghĩa là mỗi loài chỉ có thể xâm nhập và tạo thành nốt rễ trong một số cây họ đậu nhất định. Hiện nay. linh lăng). Trong nốt sần đó cũng chứa vi khuẩn cố định N gần giống ở rễ.2.Chúng có thể sử dụng nhiều hydratcarbon khác nhau làm nguồn C. người ta xếp vi khuẩn nốt rễ vào một chi chung là Rhizobium. R. các xạ khuẩn có khả năng giải cellulose. Vi khuẩn nốt rễ khi gặp cây họ đậu thích hợp sẽ xâm nhập vào tế bào rễ. chúng là loại vi hiếu khí. Gần đây người ta còn thấy nốt sần ở lá một vài loài cây nhiệt đới. Canada (1905). Beijerinkia indica. Nga (1907). hoặc một số chủng vi sinh vật có khả năng chuyển hóa các . Nitragin là loại phân được chế tạo bởi vi khuẩn Rhizobium do Beijerink phân lập năm 1888 và được Fred đặt tên vào năm 1889 dùng để bón cho các loại cây thích hợp của họ đậu.191 Năm 1963. Khi sống riêng lẻ trong đất hoặc trong môi trường nuôi cấy chúng không có khả năng cố định N. một số rễ cây khác cũng có thể cộng sinh với vi khuẩn cố định N. trifolii (cỏ ba lá). Manil đã chia các vi khuẩn nốt sần thành 3 nhóm: -Rhizobium leguminosa (đậu Hà Lan).Phân bón nốt rễ (nitragin) Phân bón vi sinh do Noble Hiltner sản xuất đầu tiên tại Đức năm 1896 và được đặt tên là nitragin: Sau đó phát triển sản xuất tại một số nước khác như ở Mỹ (1896). lupin). nốt rễ to bằng hạt đậu nhỏ. gộp nhóm 1 và 2 thành Rhizobium mọc nhanh. phaseoli (đậu cô ve. 2. Sau khi hình thành nốt rễ giữa vi khuẩn và cây họ đậu làm thành một thể cộng sinh có lợi cho cả hai bên. Nốt rễ thường thường bằng hạt gạo. Anh (1910) và Thụy Điển (1914). .Rhizobium lupini (đậu đũa. Ngoài các cây họ đậu. R. Azotobacter spp. kích thích rễ tạo thành những nốt rễ. các vi khuẩn cố định N sống tự do Clostridium pasteurianum. Từ đó cho đến nay đã có nhiều công trình nghiên cứu nhằm ứng dụng và mở rộng việc sản xuất các loại phân bón vi sinh cố định nitơ mà thành phần còn được phối hợp thêm một số vi sinh vật có ích khác như một số xạ khuẩn cố định nitơ sống tự do Frankia spp.

Ngoài các nhóm vi khuẩn cố định N nói trên ra. Cách sử dụng phân bón vi khuẩn nốt rễ là đem trộn phân với hạt giống. Ngoài hai nhóm vi khuẩn cố định N sống cộng sinh với thực vật và sống tự do trong đất như đã nói ở trên. Ví dụ như vi khuẩn lam sống tự do và sống cộng sinh trong bèo hoa dâu.v. trong các quặng apatit. Sau khi trồng các cây họ đậu đất giàu thêm N rất nhiều. làm cho cây họ đậu không sinh nốt rễ sẽ có thể sinh nốt rễ và những cây có thể sinh nốt rễ thì càng sinh nhiều hơn.Hãy nêu tổng quát chu trình chuyển hóa N trong thiên nhiên và vai trò của vi sinh vật trong chu trình đó ? 2. 4.. còn có một số loài vi tảo đơn bào cũng có khả năng cố định N. Naza là gì ? Cơ chế hiện biết của quá trình cố định N phân tử.Các loại phân bón vi sinh vật ? cơ sở khoa học của việc sản xuất và sử dụng các loại phân bón vi sinh vật? 6. Khi sử dụng có thể tăng sản lượng cây họ đậu lên 15. ngô. Đó là một loài vi khuẩn có dạng xoắn được phát hiện từ năm 1974 thuộc chi Azospirillum.. làm cho đất không chứa vi khuẩn nốt rễ thích ứng sẽ có vi khuẩn thích ứng.192 nguồn dự trữ phospho và kali ở dạng khó hoà tan với số lượng lớn có trong đất mùn. Cũng có thể dùng nốt rễ tốt. 3. chuyển chúng thành dạng dễ hoà tan. Các loài này cũng đóng góp không nhỏ vào quá trình cố định N không khí. sau đó đem gieo.. Trong các loại vi sinh vật kể trên. Trình bày các bước chủ yếu điều chế Azotobacterin và Nitragin.Các nhóm vi sinh vật cố định N ? ý nghĩa thực tế của việc nghiên cứu vi sinh vật cố định đạm.. 5. Câu hỏi ôn tập chương 9 1. than bùn. cây trồng có thể hấp thụ được.. mía. phosphorid v. nghiền nát để trộn với hạt giống. Chính vì vậy. Trong điều kiện hiện nay ở Việt Nam có thể sản xuất 2 chế phẩm này được không ? Tại sao ? . còn một số vi khuẩn có khả năng cố định N sống trên bề mặt rễ và ăn sâu vào vào lớp tổ chức bề mặt rễ của một số cây hòa thảo như lúa. vi khuẩn nốt rễ có ý nghĩa hết sức to lớn trong nông nghiệp. rồi để khô.Nêu một số thành tựu hiện nay về nghiên cứu vi sinh vật cố định đạm. cố định N càng mạnh mẽ hơn. Cường độ cố định N cộng sinh lớn hơn nhiều so với cường độ cố định N không cộng sinh.20%. từ đầu thế kỷ XX người ta nghiên cứu sử dụng phân bón nốt rễ với mục đích là để tiếp giống nhân tạo.

giai đoạn sinh dưỡng ngắn. Ở tất cả các sinh vật nhân sơ (prokaryote. với cha mẹ hoặc giữa con cái với nhau.. tảo. kích thích. là hiện tượng các cá thể trong một gia đình có những thuộc tính cấu tạo và phát triển giống tổ tiên. hay nói cách khác.. sinh sản đồng loạt. thụ thể.) trong quá trình gọi là dịch mã (transcription) dẫn đến biểu hiện tính trạng. đơn allele. còn gọi là sinh vật nhân sơ sơ. kìm hãm. tức chân khuẩn. Biến dị là đặc tính chung của mọi sinh vật có thể mang những sự khác biệt về nhiều chi tiết tính trạng so với bố mẹ của chúng và với các cá thể khác cùng loài. Vật chất di truyền được truyền từ thế hệ tế bào này sang thế hệ tế bào khác (và từ thế hệ này sang thế hệ khác) nhờ quá trình tự sao . Dù cơ chế xuất hiện khác nhau nhưng ở phần lớn các trường hợp biến dị đều tạo ra những dòng hay tập đoàn có sự thích ứng tốt nhất với điều kiện ngoại cảnh vốn luôn biến động. Vật chất di truyền này được thể hiện thành tính trạng của cá thể thông qua quá trình tổng hợp từ khuôn DNA thành phân tử RNA thông tin (quá trình phiên mã) và sau đó RNA thông tin này lại làm khuôn để tổng hợp protein (cấu trúc. Ở vi sinh vật biến dị thể hiện ở mức độ lớn hơn ở vi sinh vật bậc cao nhờ số cá thể trong một quần thể lớn. bao gồm các vi khuẩn) hay nhân chuẩn (eukaryote. nguyên sinh động vật. tính trạng được mã hóa và tồn trữ dưới dạng mã hóa là trình tự thẳng của các nucleotide trong thành phần acid deoxyribonucleic (DNA). Vật chất di truyền ở vi khuẩn Acid nucleic là cơ sở vật chất di truyền của tất cả các dạng sinh vật. bao gồm nấm. Đối tượng nghiên cứu của di truyền học không chỉ là hiện tượng di truyền mà cả hiện tượng biến dị. thực vật và động vật bậc cao).193 Chương 10 Di truyền học vi sinh vật Di truyền là đặc tính chung của mọi sinh vật giữ lại những và truyền cho con cháu những đặc điểm về cấu tạo và phát triển của tổ tiên. I. enzyme. còn gọi là sinh vật nhân chuẩn. trừ virus và các yếu tố sinh học đơn giản hơn như viroid và prion. Cơ sở vật chất di truyền ở vi sinh vật 1.. tần số đột biến và tái tổ hợp cao và có khả năng trao đổi di truyền ngoài loài. Tính biến dị có vẻ như độc lập với tính di truyền nhưng thực ra sự khác biệt giữa các cá thể trong một loài trong nhiều trường hợp liên quan đến sự biến đổi hoặc trong trường hợp khác đến sự phản ứng của vật chất di truyền của sinh vật.

. 4 hoặc nhiều hơn do quá trình phân bào diễn ra chậm hơn quá trình phân nhân. Vì vậy. guanine luôn kết hợp với cytosine. Hình 10. khép kín (không có đầu tự do). thông thường nhiễm sắc thể được mô hình hóa trong tế bào vi khuẩn dưới dạng một vòng tròn. Quy tắc này được gọi là quy tắc trung tâm biểu hiện di truyền. hơn nữa các sườn có nhiều nhóm ái thủy nên DNA tan tốt trong nước. adenine kết hợp với thymine của chuỗi song đối nên trình tự hai chuỗi không bao giờ giống nhau nhưng trình tự một chuỗi quy định trình tự của chuỗi kia. phân bố trong tế bào chất. Mỗi tế bào vi khuẩn chỉ có một nhân (thể nhân) duy nhất.194 (replication) của phân tử DNA. Nhân (thể nhân) vi khuẩn là một nhiễm sắc thể vi khuẩn cấu tạo từ một phân tử DNA duy nhất xoắn kép (gồm hai mạch xoắn).1: Mô hình cấu trúc một đoạn phân tử DNA: một dẫn xuất purine liên kết qua cầu nối hyđrô với một dẫn xuất pyrimidine nên khoảng cách giữa hai sườn đường ribose .Acid phosphoric của hai chuỗi là không đổi. mặc dù trước khi phân bào số lượng nhân (nhiễm sắc thể) thường thấy là 2. Ở vi khuẩn DNA có thể gặp ở hai dạng: DNA nhiễm sắc thể và DNA plasmid.

một gốc purine được gắn kết với một gốc pyrimidine theo nguyên tắc "tương bù": adenine gắn với thymine bằng hai mối liên kết hyđrô. đường deoxyribose (C5) và Acid phosphoric. nếu không có chú giải khác thì mạch ATT CGC GCA TCA GCT cũng có nghĩa là 5'ATT CGC GCA TCA GCT-3' hay 5'-ATT CGC GCA TCA GCT. trong khi đó nguyên tử C 3' gắn với Acid phosphoric của nucleotide kế tiếp. hay song đối) từ 5'→3' hoặc ngược lại. có bốn loại nucleotide: adenine (A). Do số lượng mối liên kết hyđrô giữa guanine (G) và cytosine (C) cao hơn nên DNA có nhiều G+C thường có mức nhiệt biến tính hay "nhiệt nóng chảy" (melting point) cao hơn hay bền vững hơn. Do trình tự hoạt động của các enzyme tổng hợp DNA từ đầu C 5' đến đầu C 3' của mỗi mạch DNA nên người ta quy ước mô tả mạch theo hướng C 5'→C 3'. Ở vi khuẩn toàn bộ trình tự nucleotide gen cấu trúc được phiên mã thành RNA thông tin và sau đó dịch toàn bộ thành trình tự Acid amin trong phân tử protein. còn guanine gắn với cytosine bằng ba mối liên kết hyđrô. Ở DNA. Hai chuỗi của một phân tử DNA gắn kết với nhau nhờ các mối liên kết hyđrô giữa các gốc bazơ. nên với tính ái thủy của Acid phosphoric và đường deoxyribose. Còn các gốc bazơ nitơ gắn vào nguyên tử C 1' của phân tử đường deoxyribose. Chuỗi polymer của mỗi mạch (sợi) DNA được hình thành nhờ liên kết phosphoester giữa Acid phosphoric và đường deoxyribose tạo nên bộ "sườn" của phân tử ((-P-C5)n).195 Hai mạch xoắn của phân tử DNA thực chất là hai chuỗi polymer và có mối quan hệ chặt chẽ với nhau về thành phần hóa học cũng như trình tự sắp xếp của các monomer được gọi là một nucleotide. guanine (G) và cytosine (C) (hay xitôzin). Các nucleotide khác nhau bởi gốc bazơ khác nhau. Có thể những Z-DNA đóng vai trò quan trọng trong tái tổ hợp gen cũng như điều hòa hoạt động của gen. Phân tử Acid phosphoric trong một nucleotide gắn vào vị trí C 5' của phân tử đường deoxyribose. ở những vùng hàm lượng G+C cao DNA còn có cấu trúc xoắn trái (Z-DNA) là nơi DNA có sự gấp khúc mạnh và xuất hiện đoạn DNA xoắn chuỗi ba. Gen mã hóa phân tử protein được gọi là gen cấu trúc. Một đoạn DNA mã hóa một RNA (như RNA ribosome. bên cạnh cấu trúc xoắn phải (B-DNA) nêu trên. DNA là chất tan tốt trong nước và khá bền vững trong dung môi này. Hơn nữa. thymine (T). Và nhờ vậy mà sườn này hướng ra phía ngoài và xoắn quanh trục tưởng tượng xuyên qua các lớp gốc bazơ nitơ vòng. Hai chuỗi như vậy không đối xứng mà chạy ngược hướng (đối nghịch song song. RNA vận chuyển) hay mã hóa một protein (qua RNA thông tin) được gọi là một gen. Do một gốc purine của một chuỗi liên kết với một gốc pyrimidine của chuỗi kia nên khoảng cách giữa hai sườn (-P-C5-)n của phân tử DNA ở mọi điểm không đổi. Ví dụ. . Mỗi chuỗi polymer được cấu tạo từ bốn loại monomer có cấu trúc tổng quát gồm ba thành phần: bazơ nitơ dị vòng (dẫn xuất purine hoặc pyrimidine).

do một polypeptide được khởi đầu tổng hợp với Acid amin methionine (mã AUG trên RNA thông tin). Nhờ vậy. chức năng của nhiều đoạn còn chưa biết.196 Mặc dù được cấu tạo bởi hai chuỗi nhưng ở vi khuẩn (cũng như ở sinh vật nhân chuẩn) gen chỉ có một mạch "hiệu lực". Như vậy. thông tin di truyền được giải đọc từng "khung" bộ ba nucleotide (tức ba nucleotide liền kề nhau mã hóa cho một Acid amin trong sản phẩm protein) nên chỉ có những đoạn DNA bắt đầu từ bộ ba ATG (theo cả ba cách đọc của mỗi chuỗi DNA) đến một mã dừng (TAA. tức chỉ một mạch làm khuôn tổng hợp nên RNA thông tin. chuỗi dương của một gen là chuỗi có trình tự nucleotide tương đương với trình tự nucleotide của RNA thông tin. còn gọi là gen chỉ huy) và gen điều hòa (regulator .O. đồng thời quá trình tổng hợp các cơ chất nguyên liệu cho quá trình tổng hợp các thành phần tế bào cũng diễn ra và đình chỉ một cách hiệu quả và tiết kiệm. RNA thông tin được sao chép từ chuỗi âm của gen có vai trò sao mã di truyền từ nhiễm sắc thể cho RNA ribosome giải mã thành phân tử protein có mạch polypeptide có thành phần và trình tự Acid amin xác định. Ngoài ra. (Những RNA xúc tác phản ứng sinh học thường được gọi là ribozyme).) là chuỗi âm. UAG và UGA) và chỉ có thể có thuộc tính protein nếu đủ lớn (dài hơn 50 Acid amin). Đoạn DNA này được gọi là một "khung khả phiên" (hay một "khung đọc mở" . kết thúc bởi một trong những "mã dừng" (UAA. các tính trạng quy định trong genome chỉ biểu hiện trong điều kiện môi trường nhất định.R). đồng thời còn có các đoạn DNA đặc biệt tham gia vào điều hòa hoạt động của các gen cấu trúc. Đây là những phân tử RNA tương đối ngắn có tác dụng hoạt hóa Acid amin nguyên liệu và vận . TGA) đủ dài (hơn 150 nucleotide) mới có thể là (nhưng không nhất thiết phải là) một gen cấu trúc... vùng điều hành và các gen cấu trúc tạo thành một đơn vị hoạt động gọi là operon. Gen điều hòa (R) nằm ở vị trí nào đó trong nhiễm sắc thể xa với các gen cấu trúc và điều khiển việc tổng hợp một protein đặc biệt có tác động (phong tỏa hoặc giải tỏa) trực tiếp hoặc gián tiếp lên các vùng P hoặc O. như RNA ribosome. gen (hay vùng) điều hành (operator . có chức năng hoạt động như một enzyme tức xúc tác quá trình sinh tổng hợp protein. Tham gia vào quá trình sinh tổng hợp protein còn có nhóm các RNA vận chuyển. TAG.open reading frame). Ở sinh vật nhân sơ các gen cấu trúc (các cistron) được gắn liền nhau thành tập hợp và cùng chịu sự kiểm soát của các gen điều hòa gồm gen (hay vùng) khởi động (promotor .. đồng thời. Ngoài ra. Cả tập hợp bao gồm các vùng khởi động. RNA gồm ba loại khác nhau: RNA ribosome là thành phần chủ yếu cấu tạo nên ribosome.P). Hiệp hội sinh hóa quốc tế quy ước chuỗi làm khuôn để tổng hợp nên RNA thông tin (hay tổng hợp RNA hoạt động. không phải tất cả các đoạn DNA đều mang gen cấu trúc.

Ngoài ra.1 : Mã di truyền trên nhiễm sắc thể (biểu hiện trên mRNA. các RNA đều cấu tạo chỉ từ một chuỗi nucleotide.197 chuyển Acid amin này đến RNA thông tin cũng đã được hoạt hóa nhờ gắn kết với ribosome. Bảng 10. nhưng quá trình nhận biết trình tự Acid amin mã hóa trong RNA thông tin là nhờ RNA vận chuyển. cũng kém bền vững hơn DNA. Nhờ mỗi Acid amin có loại RNA vận chuyển riêng nên trình tự mã bộ ba được dịch một cách chính xác. Hai đoạn có trình tự tương bù ngược hướng tạo thành một đoạn xoắn kép. chiều 5' đến 3') Chữ thứ hai của mã Đầu U C A G 5' Chữ thứ nhất của mã (đầu 5') U C A G UUU UUC UUA UUG CUU CUC CUA CUG AUU AUC AUA AUG GUU GUC GUA GUG Phe Phe Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ile Ile Ile Met Val Val Val Val UCU UCC UCA UCG CCU CCC CCA CCG ACU ACC ACA ACG GCU GCC GCA GCG Ser Ser Ser Ser Pro Pro Pro Pro Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Ala UAU UAC UAA UAG CAU CAC CAA CAG AAU AAC AAA AAG GAU GAC GAA GAG Tyr Tyr Stop Stop His His Gln Gln Asn Asn Lys Lys Asp Asp Glu Glu UGU UGC UGA UGG CGU CGC CGA CGG AGU AGC AGA AGG GGU GGC GGA GGG Cys Cys Stop Trp Arg Arg Arg Arg Ser Ser Arg Arg Gly Gly Gly Gly U C A G U C A G U C A G U C A G Khác với DNA. trong thành phần của các RNA còn có những điểm khác biệt khác: uracine thay thế thymine. RNA. Chữ thứ ba của mã (đầu 3') . Mỗi Acid amin được mã hóa bởi một bộ ba nucleotide trên RNA thông tin. Tuy cấu tạo từ chỉ một chuỗi nucleotide nhưng cấu trúc không gian của các loại RNA lại ổn định nên chức năng của chúng cũng ổn định. Tính ổn định của cấu trúc có được nhờ các mối liên kết hyđrô xuất hiện giữa hai đoạn trình tự tương bù ngược hướng của cùng chuỗi nucleotide. vì vậy. và bộ ba này tương bù với trình tự bộ ba nucleotide nhận biết của RNA vận chuyển. đường deoxyribose được thay thế bởi ribose trong sườn của mạch polymer cũng như sự có mặt một số bazơ dẫn xuất khác của purine và pyrimidine. Trình tự RNA thông tin quyết định trình tự Acid amin trong thành phần polypeptide. Chính vì có thêm một gốc -OH ở vị trí C 2' (của đường ribose) mà cầu nối phosphoester giữa nguyên tử C 3' và Acid phosphoric của nucleotide tiếp theo thường yếu hơn so với cầu nối C 3' với Acid phosphoric trong DNA.

làm cho bản thân plasmid hoặc một đoạn plasmid kèm theo một đoạn DNA nhiễm sắc thể được tổng hợp đồng loạt với tần suất cao. . nhưng có phân tử lượng thấp hơn nhiều (khoảng 106 .2: Bản đồ enzyme hạn chế của plasmid pBR322. là một plasmid được sử dụng phổ biến trong kỹ thuật DNA tái tổ hợp. Vì vậy. các phân tử RNA vận chuyển có dạng "lá ba chẽ" với chức năng đặc hiệu. trong nhiều trường hợp (như chủng Hfr) plasmid tái tổ hợp lại có thể điều khiển sao chép độc lập. hay khoảng 1/100 đến 1/200 lần nhiễm sắc thể vi khuẩn). Plasmid có thể phân bố trong tế bào chất ở trạng thái tự do và có thể sao chép một cách độc lập với nhiễm sắc thể hoặc nằm trong nhiễm sắc thể (tái tổ hợp). Có loại plasmid có số phiên bản cao (high-copy plasmid). Ở trạng thái tái tổ hợp trong nhiễm sắc thể (hay episome) plasmid thường được sao chép đồng thời với nhiễm sắc thể và được truyền từ thế hệ này sang thế hệ khác của vi khuẩn. Về bản chất hóa học. plasmid cũng là một phân tử DNA xoắn kép. trong khi đó có loại plasmid có số phiên bản thấp (low-copy plasmid). khép kín.198 trong khi đoạn nucleotide nằm giữa chúng hình thành một "thòng lọng" mạch đơn. chẳng hạn. khi đó plasmid được gọi là episome. Bên cạnh DNA nhiễm sắc thể ở vi khuẩn còn có thể gặp cơ sở vật chất di truyền ngoài nhiễm sắc thể gọi là plasmid.108 Dalton. hoặc mang một hoặc một số plasmid. nhờ vậy plasmid vector này áp dụng được với nhiều DNA khác nhau. Một vi khuẩn có thể không mang. Tuy vậy. Hình 10. Plasmid cải biến nhân tạo này mang hai gen kháng thuốc (tetR đề kháng tetracycline và ampR đề kháng ampicillin) và một loạt vị trí cắt của enzyme hạn chế trong đó mỗi enzyme này chỉ có một vị trí phân cắt.

hay plasmid R (resistance factor). đã xác định được rằng một số loài (hoặc còn được coi là dạng huyết thanh học) vi khuẩn Salmonella có được độc tính nhờ mang plasmid. enteritidis 50 Độc tính gây chết. Yếu tố F có thể nằm ở trạng thái tự do trong tế bào chất hay ở trạng thái liên kết với nhiễm sắc thể hay trạng thái episome. hay yếu tố kháng thuốc. Yếu tố đề kháng. Ví dụ. 75 S. Cơ chế đề kháng này là sự điều khiển việc tổng hợp các enzyme (như penicillinase. Trong trường hợp sau quá trình vận chuyển thông tin di truyền thường diễn ra với tốc độ và tần suất cao nên những chủng vi khuẩn này thường được gọi là chủng Hfr (bắt nguồn từ tiếng Anh: high frequency of recombination).2 : Plasmid độc tính đặc hiệu một số loài (dạng huyết thanh) Salmonella Độ lớn (kb) Biểu hiện tính gây bệnh chủ yếu Salmonella 90 Độc tính gây chết.199 Thêm hoặc mất một plasmid thường dẫn đến mất hoặc bớt một hoặc một số tính trạng. giảm thiểu tính thẩm thấu S. plasmid đề kháng. Trong trường hợp này tế bào mang plasmid F là tế bào cho thường được gọi là tế bào đực hay tế bào F+. là plasmid điều khiển sự hình thành các pili giới tính (nhung mao giới tính).. và thường liên quan đến tính gây bệnh của các vi khuẩn. tính đề kháng huyết thanh. choleraesuis khuẩn ở chuột S. còn tế bào nhận được gọi là tế bào cái hay tế bào F-. mặc dù nhiều plasmid không thể hiện tính trạng (plasmid "câm").. là plasmid điều khiển sự đề kháng của vi khuẩn đối với các chất kháng sinh và thuốc chống vi khuẩn khác.. Tính trạng mà các plasmid điều khiển đa dạng nhưng nhìn chung plasmid không phải là yếu tố thiết yếu đối với sự sống còn của vi khuẩn. gallinarum85 Độc tính gây chết pullorum Plasmid giới tính còn gọi là yếu tố sinh dục hay yếu tố F (fertility factor). dublin năng lực tăng trưởng trong tế bào hệ lưới nội bì 75 Giống như plasmid ở S. typhimurium của các chất kỵ thủy Độc tính gây chết.. Bảng10.) phân . gây chứng máu nhiễm S. Dựa vào sự tương hợp của các sản phẩm của plasmid mà người ta chia các plasmid thành một số nhóm: plasmid giới tính... sự tiếp hợp và sự vận chuyển thông tin di truyền (gen plasmid hay gen nhiễm sắc thể) một chiều từ tế bào cho sang tế bào nhận. naestved Dublin) 54 Độc tính gây chết S. plasmid điều khiển sinh tổng hợp (nhóm chất nào đó). dublin ( hay serovar S.

Vật chất di truyền ở virus Khác với các sinh vật khác. cấu trúc genome của virus rất đa dạng. Dưới đây trình bày ngắn gọn về cấu trúc genome một số virus. 2. hay thực khuẩn thể) tức nhờ quá trình tải nạp (transduction).. Genome các virus thuộc chi Parvovirus là virus chứa DNA một sợi âm nhưng cũng thấy khoảng 1 . có loại virus mang DNA một sợi (chuỗi) âm hoặc dương. Thông tin di truyền trên genome của virus cũng có sự khác biệt khác so với genome vi khuẩn.200 hủy thuốc kháng sinh thành các sản phẩm vô hoạt hoặc ức chế sự xâm nhập của thuốc kháng sinh vào tế bào (như chặn các lỗ khổng trên màng tế bào chất đối với tetracycline hoặc thuốc kháng sinh họ macrolide. có loại DNA hai sợi. gồm hai miền gen.). Yếu tố R lan truyền được (transmissible R factor) là yếu tố F kháng thuốc. động vật và thực vật) nhưng có loại lại mang genome dưới dạng RNA. Thông thường sự vận chuyển các plasmid này có tốc độ cao. Hầu hết các virus thực vật có genome RNA. nhưng yếu tố vận chuyển cũng có thể tự ức chế hoặc bị ức chế bởi yếu tố khác. có loại virus mang genome dưới dạng DNA (tương tự genome của vi khuẩn. Chúng có thể tồn tại và phổ biến trong quần thể vi khuẩn nhờ quá trình sinh sản của vi khuẩn hoặc nhờ các quá trình vận chuyển vật chất di truyền qua dịch thể tức quá trình biến nạp (transformation) hoặc sự vận chuyển của virus của vi khuẩn (phage. Ở các chi Dependovirus và Densovirus thì số lượng virion chứa . còn hầu hết virus của vi khuẩn có genome DNA. Cũng như bản chất hóa học. có loại mang RNA một sợi âm hoặc dương hoặc lưỡng nghĩa (ambisense RNA: có đoạn âm có đoạn dương. Genome nhiều virus là một sợi acid nucleic duy nhất nhưng cũng có loại virus genome bao gồm một số đoạn. trường hợp sau thường gọi là plasmid đề kháng đồng loạt. Yếu tố R không lan truyền được (non-transmissible R factor) chỉ mang miền gen điều khiển tính đề kháng. Đó là hiện tượng gen chồng lặp (overlapping genes): có thể có hai RNA thông tin khác nhau được sao chép từ một đoạn genome.. hay đồng thời với khung khả phiên một gen cấu trúc còn mang khuôn của một khung khả phiên một gen khác ngược hướng). Các plasmid này không tự vận chuyển sang tế bào khác mà chỉ làm cho tế bào mang chúng có tính đề kháng thuốc kháng sinh. virus chỉ mang một trong hai loại Acid nucleic (hoặc DNA hoặc RNA).. Miền gen thứ hai (miền RTF) là gen điều khiển sự vận chuyển các plasmid vào tế bào khác. Số lượng yếu tố bị đề kháng có thể là 1 đến 10 hoặc nhiều hơn nữa. trong khi các virus động vật có genome hoặc loại này hay loại khác. Một miền gen điều khiển sự đề kháng.50% số virion chứa DNA một sợi dương.

DNA mang mật mã thông tin di truyền trong khi RNA tham gia chuyển hóa mật mã này thành protein mà thể . có vùng gồm 2 sợi. Genome các virus họ Papillomaviridae là một phân tử DNA hai sợi chuỗi vòng khép kín.2. Chức năng hai loại acid này tương tự ở tế bào nhân sơ.0 .9 kbp). Genome các arenavirus (họ Arenaviridae) có 2 phân tử RNA một sợi. Genome của các orthomyxovirus (họ Orthomyxoviridae) là RNA một sợi gồm 8 phân đoạn (riêng virus cúm C có 7 phân đoạn). nên thường gọi "RNA lưỡng nghĩa (ambisense RNA"). Genome của các birnavirus (họ Birnaviridae) là phân tử RNA hai sợi. RNA genome cũng lưỡng nghĩa (ambisense).1 kbp và đoạn B 2. Còn sợi DNA dương thì có độ dài không hoàn toàn và không ổn định. Genome của các Adenovirus (họ Adenoviridae) là một phân tử DNA 2 sợi chuỗi thẳng.6 S chứa RNA thông tin dưới genome (subgenomic mRNA) mã hóa protein Z có thể là nhân tố điều tiết sao chép. có chuỗi poly-A ở đầu 3'. Các RNA 4 . có chiều dài toàn bộ là 3. Riêng RNA S của chi Phlebovirus có một đoạn có cơ năng của sợi dương.3. Vật chất di truyền ở vi sinh vật nhân chuẩn Ở vi sinh vật nhân chuẩn (eukaryote) vật chất di truyền cũng có bản chất hóa học là acid nucleic DNA.8.2 kb có khấc (nick) đặc hiệu ở một số chỗ. phân tử lượng 2.8 kb.7 đến 2. có vùng chỉ một sợi.400 Da. 4 . thường từ 1. Genome của các hepadnavirus (họ Hepadnaviridae) là một phân tử DNA mạch vòng.201 DNA chuỗi âm và virion chứa DNA chuỗi dương tương bù về căn bản tương đương nhau. bên trong virion còn có các RNA 28 S. Sợi DNA âm là sợi đầy đủ. phân tử lượng khoảng 5 kbp . Ngoài ra.6 S có nguồn gốc từ tế bào ký chủ. Các bunyavirus (họ Bunyaviridae) có genome gồm 3 phân tử RNA một sợi âm có kích thước khác nhau (gọi là các RNA L.5 kb).4 . trong đó có chứa một gen cho tiểu đơn vị lớn của enzyme ribonucleotide reductase (RR1). 3. gồm hai đoạn (đoạn A có kích thước 3.7 x 106 (khoảng 7. Genome picornavirus (họ Picornaviridae) cấu tạo từ 1 phân tử RNA một sợi dương chuỗi thẳng. còn đầu 5' kết hợp cộng hóa trị với phân tử protein VPg có phân tử lượng khoảng 2.5 . 18 S. tương đương genome của các tế bào côn trùng. RNA. là một phân tử DNA duy nhất hai sợi. Genome của các baculovirus (họ Baculoviridae) rất lớn. M và S).

Tuy nhiên ở nhiều nấm và thực vật còn tồn tại chu trình đơn bội. Còn ở các nấm chuyển hình không hoàn toàn (imperfect fungi) không có giai đoạn lưỡng bội. phần bị cắt bỏ gọi là intron.202 hiện tính trạng. Điểm khác biệt lớn giữa sinh vật nhân chuẩn và sinh vật nhân sơ là nhân chuẩn có màng nhân và genome thường gồm hai bộ (lưỡng bội) hoặc đôi khi nhiều hơn nhiễm sắc thể (ở thực vật: tam bội. Ở sinh vật . thường bị ngắn dần sau mỗi lần phân bào do đoạn RNA mồi không được tổng hợp bù đắp bằng DNA. gen trên nhiễm sắc thể được sao chép thành RNA thông tin sơ cấp trong nhân tế bào nhưng để trở thành RNA thông tin thành thục đặc hiệu thì RNA phải trải qua quá trình biến đổi. DNA nhiễm sắc thể nhân chuẩn còn quấn quanh các phân tử protein histone. Ngoại lệ có thể gặp là gen histone và interferon không có intron. Tổ chức gen sinh vật nhân chuẩn còn có sự khác biệt khác so với sinh vật nhân sơ. Cấu trúc gen không liên tục này đóng vai trò quan trọng đối với sự biệt hóa tổ chức trong quá trình sinh trưởng của cá thể. Gen cấu trúc bao gồm nhiều đoạn và chỉ một số đoạn mã hóa cấu trúc protein. Quá trình tự sao chép DNA cũng là cơ sở di truyền từ thế hệ tế bào này sang thế hệ tế bào khác hay thế hệ này sang thế hệ khác. hay "tách ghép"). đa bội) cũng cấu tạo từ DNA xoắn kép nhưng không khép kín (có đầu tự do). Điểm khác biệt nữa là. gọi là telomer. tứ bội. Trong quá trình phiên mã. khép kín) nhưng được cắt bớt đi nhiều. Ở các nấm chuyển hình hoàn toàn (holomorphous fungi) thể lưỡng bội thường là điểm khởi đầu của sự hình thành cơ quan sinh bào tử hữu tính từ đó sản sinh các bào tử đơn bội."cắt xén". Methyl hóa đầu 5' làm cho RNA thông tin có thể nhận biết đối với ribosome. khi đó trong tế bào nhân chỉ chứa một bộ nhiễm sắc thể. genome nhiễm sắc thể ở động vật bậc cao còn có trình tự lặp giàu G+C ở đầu nhiễm sắc thể. (Ngoài ra. ở các eukaryote còn có hệ thống tín hiệu di truyền khác là DNA trong các ty thể và lạp thể. Phần gen tương ứng phần còn lại của RNA thông tin thành thục là phần được biểu hiện thành tính trạng nên được gọi là exon. có thể liên quan đến quá trình lão hóa của cơ thể). Một số đoạn của RNA thông tin sơ cấp bị cắt bỏ khỏi đoạn RNA thông tin (trong quá trình gọi là splicing . Đoạn DNA mã hóa RNA thông tin sơ cấp được gọi là một đơn vị gen. còn quá trình poly-A hóa RNA thông tin góp phần đẩy RNA này ra khỏi lỗ khổng màng nhân mà đi vào tế bào chất. Bộ gen này điều khiển sự tổng hợp một số protein của các cơ quan này và có bản chất tương tự bộ gen ở sinh vật nhân sơ (DNA cũng có cấu tạo mạch xoắn kép. Thể đơn bội này ở nhiều nấm tồn tại song song với thể lưỡng bội và dạng tế bào song nhân có hai nhân đơn bội riêng rẽ. Bên cạnh genome nhiễm sắc thể (ở trong nhân). còn đầu 3' được bổ sung đoạn dài adenine (poly-A). đồng thời đầu 5' được methyl hóa.

Phân tử DNA.203 sinh sản hữu tính (hợp tử hình thành từ giao tử đực và giao tử cái) bộ gen này ở mọi cá thể đều có nguồn gốc từ mẹ do trong quá trình thụ tinh giao tử đực không truyền được các ty thể (và lạp thể ở thực vật) vào giao tử cái. có một chuỗi là chuỗi gốc còn chuỗi thứ hai hoàn toàn được tổng hợp mới. Đoạn này có thể tách rời khỏi vị trí vốn có của nó và di chuyển đến một vị trí khác của cùng nhiễm sắc thể hoặc sang nhiễm sắc thể khác. Đoạn mạch đơn duy trì được độ . Di truyền và biểu hiện tính trạng 1. Quá trình tháo duỗi xoắn của chuỗi đôi thành chuỗi đơn có sự tham gia của enzyme helicase. Gen nhảy (transposon) là đoạn DNA đặc biệt gặp cả ở sinh vật nhân sơ và sinh vật nhân chuẩn. phân tử này được tách đôi thành hai mạch đơn. Nó có thể khống chế hoặc giải phóng một gen cấu trúc nào đó dẫn đến việc mất tính trạng hoặc xuất hiện tính trạng quy định bởi gen đó. do DNA xoắn kép. vùng có mạch gốc được tách đôi gọi là chạc tái bản. khép kín nên hai sợi phải xoắn bện và lồng vào nhau không thể tách rời nên quá trình tự sao DNA lại càng phức tạp và có sự tham gia của nhiều yếu tố. như vậy. Nguyên lý bổ sung các bazơ trong chuỗi xoắn kép DNA đáp ứng quá trình nhân đôi và tái bản chính xác trình tự các bazơ trong phân tử gốc hay DNA khuôn. cơ chế tự sao DNA là cơ chế bán bão toàn. Trong quá trình tái tạo DNA. Tuy không phải là gen cấu trúc nhưng transposon ảnh hưởng rất lớn đến quá trình biểu hiện tính trạng. Tự sao hay tái tạo DNA (replication) Quá trình tổng hợp DNA trong nhân tế bào gắn chặt chẽ với quá trình bão toàn và truyền đạt thông tin di truyền từ thế hệ này sang thế hệ khác. không có vị trí ổn định trong nhiễm sắc thể. Mỗi mạch đơn của DNA gốc được dùng để làm khuôn tổng hợp một mạch mới có các nucleotide liên kết hyđrô tương bù với các nucleotide của chuỗi gốc. Quá trình khống chế có thể diễn ra khi một gen nhảy chèn vào khoảng giữa gen khởi động (promoter) và gen cấu trúc cũng như chèn vào giữa gen cấu trúc làm cho quá trình phiên mã không thể khởi động hoặc bị gián đoạn. Do đó. Sự phát sinh một chạc tái bản từ điểm khởi đầu được gọi là sự khởi đầu tái bản. Vị trí bắt đầu quá trình tái bản DNA được gọi là điểm khởi đầu tái bản. Genome của các tiểu cơ quan (ty thể và lạp thể) được phiên mã thành RNA thông tin tương ứng với quá trình diễn ra tương tự ở tế bào nhân sơ. Khi khởi đầu tái bản enzyme topoizomerase (tức gyrase) có chức năng cắt đứt một sợi của chuỗi DNA và khôi phục sợi này lại nhanh chóng làm cho DNA xoắn kép có thể tách đôi được mà vẫn giữ nguyên cấu trúc. Đặc biệt ở DNA sinh vật nhân sơ. II. Đây là quá trình phức tạp có sự tham gia của nhiều enzyme và protein khác nhau.

dGTP và dCTP). Một khi đoạn khuôn mới được mở ra thì trên mạch lùi này lại diễn ra sự tổng hợp một mồi mới nhờ enzyme primase. rồi từ mồi này quá trình lắp ráp các nucleotide tương bù với trình tự của mạch khuôn lại diễn ra. Đoạn oligonucleotide mồi này thường là một đoạn RNA ngắn được enzyme primase xúc tác tổng hợp trực tiếp trên khuôn DNA và sau đó cung cấp đầu 3'-OH cho một nucleotide nguyên liệu lắp ráp vào. Trung bình độ dài một đơn vị tái bản đến 40000 bp. còn trên sợi kia (sợi đối nghịch song song với sợi trước) quá trình tổng hợp lại diễn ra gián đoạn. Những đoạn mạch này được gọi là đoạn Okazaki (gọi theo tên người phát hiện). như vậy. Trong tế bào các nucleotide nguyên liệu được tổng hợp sẵn dưới dạng các phân tử cao năng nucleotide triphosphate (dATP. Nhờ hệ thống này mà quá trình tái bản DNA diễn ra với tốc độ cao (ở E. Ở sinh vật nhân chuẩn quá trình tự sao DNA diễn ra theo quá trình tương tự nhưng cơ chế có thể phức tạp hơn và còn nhiều điểm chưa rõ. Khi bắt đầu tái bản từ điểm khởi đầu tái bản. Mồi RNA sau đó được phân hủy khỏi DNA khuôn và chỗ trống này được lấp đầy nhờ enzyme DNApolymerase I. Enzyme DNA-helicase tham gia vào tháo duỗi xoắn . và cũng dưới sự xúc tác của enzyme này chỗ trống được lấp bởi sự lắp ráp các deoxyribonucleotide. quá trình tổng hợp DNA trên một sợi khuôn là liên tục. DNA nhiễm sắc thể tế bào nhân chuẩn rất dài và sự khởi đầu tái bản có thể đồng thời từ nhiều điểm khởi đầu tái bản và thường diễn ra theo cả hai chiều. Quá trình tổng hợp DNA từ chạc tái bản. Sau đó nhờ tác dụng endonuclease của enzyme DNA-polymerase I mà mồi bị loại bỏ.204 căng của nó là nhờ các enzyme đặc biệt gọi là các protein liên kết DNA mạch đơn (ssDNA binding protein). trong khi chạc tái bản chuyển động liên tục về một hướng. Mạch có sự lắp ráp liên tục gọi là mạch tiến còn trên mạch kia sự tổng hợp lại diễn ra theo hướng ngược với chiều chuyển động của chạc tái bản gọi là mạch lùi hay mạch gián đoạn. Chính vì vậy. coli khoảng 30000 50000 đôi nucleotide trong một giây). Mối liên kết giữa các đoạn Okazaki được kết nối sau đó nhờ enzyme ligase. dTTP. Các protein trong tập hợp các protein tham gia quá trình tái bản DNA gọi là replisome. mạch của chạc tái bản luôn duy trì được đầu 3'-OH để từ đó một nucleotide mới khác lắp ráp vào. enzyme topoisomerase cắt DNA ở một sợi và nhanh chóng khôi phục khía đứt để chuỗi siêu xoắn kép được tháo xoắn và duỗi thẳng. Các nucleotide này không thể tự liên kết vào chuỗi DNA một sợi dù thỏa mãn tính tương bù mà phải còn cần có một oligonucleotide (tức một đoạn Acid nucleic mạch đơn) gọi là mồi (primer) gắn kết một cách tương bù với đoạn DNA một sợi đã được duỗi sẵn. tiếp diễn nhờ nối dài đầu 3'-OH của mỗi mạch mới theo hướng 3'→5'của sợi khuôn. Quá trình lắp ráp tiếp diễn dưới sự xúc tác của enzyme DNA-polymerase III. Nhờ đó. Đoạn DNA giữa hai điểm khởi đầu tái bản được gọi là đơn vị tái bản.

và C. Ở các virus RNA. Ở sinh vật nhân chuẩn tái bản kiểu vòng lăn diễn ra trong trường hợp khuyếch đại gen. Đầu 5'-P tách dần ra khỏi vòng và được tổng hợp gián đoạn (có sự tham gia của primase). RFB.. Cũng đã phát hiện được bốn loại DNA-polymerase khác nhau. β. tách ra rồi vòng lại. ở mạch lùi quá trình khử bỏ các RNA mồi và lấp chỗ trống của mồi bởi deoxyribonucleotide do DNApolymerase α đảm nhận. topoisomerase. (RFA. (Vai trò của hai DNA-polymerase khác còn chưa rõ).. từ một điểm cắt bởi enzyme endonuclease trên một sợi hình thành đầu 3'-OH và đầu 5'-P. đầu 3'-OH hoạt động như một mồi cho DNA-polymerase tổng hợp liên tục nhiều vòng đoạn nhiễm sắc thể này. Còn các virus DNA hai sợi. hay virus có quá trình phiên ngược (hepadnavirus và retrovirus).. β và δ phát hiện thấy trong nhân tế bào còn DNA-polymerase γ thì chỉ phát hiện trong các ty thể và lạp thể. nhìn chung. DNA-polymerase δ hoạt động tương đương DNA-polymerase III ở vi khuẩn: xúc tác kéo dài quá trình lắp ráp. Quá trình tái bản DNA nhân chuẩn trên chạc tái bản diễn ra tương tự ở tế bào vi khuẩn. ký hiệu theo độ lớn của phân tử lượng là α. helicase và primase. virus RNA một sợi hay hai sợi. quá trình tự sao genome có cơ chế đa dạng tùy thuộc loại virus DNA một sợi hay hai sợi. còn đầu 3'-OH được DNA-polymerase nhận biết và xúc tác quá trình lắp ráp không cần mồi RNA.205 của chuỗi kép để tạo mạch đơn. trong tổ hợp replisome của tế bào nhân chuẩn còn có các protein khác gọi là các yếu tố tái bản A.. DNA-polymerase α. Ở plasmid hoặc vi khuẩn. Sự khởi đầu mỗi đoạn tái bản cũng do enzyme primase đảm nhận. Bên cạnh các DNA-polymerase. B.. Enzyme này xúc tác quá trình lắp ráp trên cả mạch tiến (mạch liên tục) lẫn mạch lùi (mạch gián đoạn). RFC. γ. Cuối cùng vết khấc giữa các đoạn Okazaki cũng được kết nối nhờ sự xúc tác của enzyme ligase. Tương tự DNA-polymerase I ở vi khuẩn.) cũng như kháng nguyên hoạt hóa nhân tế bào (PCNA).. Kết quả là sau lần tái bản DNA tiếp theo số phiên bản của gen tăng cao trong thành phần của nhiễm sắc thể. Bên cạnh cơ chế tái bản phụ thuộc primase tạo mồi (ở sinh vật nhân sơ và nhân chuẩn) nêu trên còn có cơ chế tái bản DNA khác gọi là cơ chế tái bản theo vòng lăn thường thấy ở plasmid và có thể diễn ra ở nhiễm sắc thể vi khuẩn cũng như nhiễm sắc thể sinh vật nhân chuẩn. Ở virus DNA có genome chuỗi thẳng có cấu . nó tổng hợp một đoạn RNA trên khuôn DNA chuỗi đơn và nhờ đó cung cấp đoạn chuỗi đôi cho DNA-polymerase nhận biết và đầu 3'-OH cần thiết cho quá trình lắp ráp. Tốc độ tái bản DNA phụ thuộc vào tốc độ làm việc của các hệ thống tái bản trên mạch lùi vì quá trình tái bản trên mạch này thường chậm trễ so với mạch tiến. và δ. có quá trình sao chép tương tự ở prokaryote và eukaryote. chẳng hạn. Khi đó một mạch đơn của đoạn gen này bị cắt tại một điểm.

Những sợi DNA âm này lại làm khuôn để tổng hợp DNA dương nhưng quá trình này chưa kịp hoàn thiện thì DNA hai sợi này bị nhồi vào vỏ capsid cũng đồng thời hình thành. Nhờ DNA-polymerase sẵn có trong virion. Genome hepadnavirus gồm DNA hai sợi mạch vòng. Các virus RNA hai sợi cũng có quá trình tương tự ở DNA hai sợi nhưng diễn ra trong tế bào chất tế bào ký chủ với sự xúc tác của enzyme RNA-polymerase phụ thuộc RNA và sự sao chép RNA không cần đến đoạn mồi oligonucleotide. Trường hợp cá biệt xảy ra với các virus thuộc họ Hepadnaviridae và họ Retroviridae. Nhờ LTR này mà sau khi di nhập vào nhân DNA retrovirus tái tổ hợp vào DNA nhiễm sắc thể tế bào ký chủ (trở thành tiền virus . Đồng thời.long terminal repeat). Phiên mã (Transcription) Phiên mã là quá trình sao chép trình tự nucleotide trên DNA gen cấu trúc thành trình tự nucleotide trên RNA thông tin (mRNA). Còn sợi âm làm khuôn tổng hợp sợi RNA dương. còn sợi dương có độ dài không hoàn toàn và không ổn định. Cấu trúc DNA hai sợi này có các đoạn dài trình tự lặp ở đầu cực (LTR . sợi âm có cấu trúc khá đầy đủ nhưng có một điểm khuyết thiếu (khấc) đặc hiệu chi. Dưới tác dụng của enzyme RT và mồi là RNA vận chuyển chuỗi DNA âm tương bù được tổng hợp.reverse transcriptase). Về nguyên lý tổng . genome là phân tử RNA gồm hai đoạn có đầu 5' giống nhau. 2. Thông tin di truyền trên DNA như vậy được truyền đạt sang hệ thống tổng hợp các yếu tố hình thành tính trạng. Ở các retrovirus. Ở các virus một sợi (DNA hoặc RNA). hàng loạt sợi DNA âm của virus được tổng hợp từ khuôn là sợi RNA dương.206 trúc kẹp tóc (hair pin) ở đầu quá trình tái bản DNA có thể theo cơ chế tái bản theo vòng lăn. Sợi tương bù tiếp tục làm khuôn để tổng hợp đồng loạt các sợi NA virus. Sau khi chuỗi RNA bị phân giải sợi DNA âm được dùng làm khuôn để tổng hợp sợi DNA dương tương bù. nhờ sự xúc tác của enzyme RT (enzyme phiên ngược . Provirus nhờ tín hiệu sao chép trong LTR dưới tác dụng của RNA-polymerase của ký chủ mà tổng hợp RNA genome virus (đồng thời với việc tổng hợp các RNA thông tin có kích thước khác nhau). sợi dương không hoàn toàn được tổng hợp thành sợi dương hoàn toàn (để tổng hợp RNA thông tin). Sau đó. quá trình tái bản genome đều thông qua dạng tái tạo (replicative form) là dạng Acid nucleic (NA) hai sợi gồm một sợi NA virus và một sợi NA tương bù được tổng hợp trong tế bào ký chủ (nhưng không có trong thành phần virion). trên một khuôn DNA có nhiều RNA thông tin được tổng hợp. Quá trình này thường diễn ra trên chạc tái bản DNA nên khi hoàn thành quá trình tự sao DNA thì tế bào cũng đã chuẩn bị sẵn lượng lớn RNA thông tin cần thiết.provirus).

RNA-polymerase định hướng tới đúng chỗ bắt đầu tổng hợp RNA. Các ribonucleoside triphosphate khác cũng hoạt động tương tự: A bù T. Trong nhiều trường hợp vùng kết thúc phiên mã có cấu trúc đặc biệt và thường là vùng có cấu trúc lặp ngược hướng (palindrome) tạo nên cấu trúc thòng lọng hay cấu trúc uốn palindrome. Hướng kéo dài của mạch luôn là 5'→3'. RNA ribosome và RNA vận chuyển. rất có thể là vùng mesosome). Một adenyl ribonucleoside triphosphate sẽ tìm đến lắp ráp tương bù với thymine trên khuôn DNA. Enzyme này xúc tác tổng hợp cả ba loại RNA: RNA thông tin. G bù C nhưng uracyl ribonucleoside triphosphate thay thế thymyl ribonucleoside triphosphate gắn kết tương bù với adenine trên khuôn DNA. Ở điểm bắt đầu quá trình lắp ráp một ribonucleoside triphosphate tương bù được lắp vào. Thông tin di truyền thường kết chuỗi thành một đơn vị phiên mã (operon): một số gen cấu trúc (cistron) được phân bố liên tiếp sau một đoạn gen khởi đầu phiên mã (tổ hợp R và O) và phiên mã cùng nhau thành một RNA thông tin đa cistron gồm một số RNA thông tin phân cách nhau bởi một đoạn trật tự nêm không mã hóa Acid amin gồm khoảng vài chục nucleotide. và xảy ra quá trình kết thúc phiên mã: cả RNA-polymerase lẫn chuỗi RNA được tách khỏi chuỗi DNA khuôn. mở đầu sự hình thành chuỗi. Sau đó RNA-polymerase tiếp tục trượt dọc theo khuôn (chuỗi đơn) DNA. kéo dài chuỗi và kết thúc. các RNA vận chuyển và các RNA ribosome có phân tử lượng nhỏ (III). Quá trình phiên mã được xúc tác bởi enzyme RNA-polymerase và không cần có sự tham gia của mồi. RNA thông tin (II). Quá trình phiên mã diễn ra trong bốn giai đoạn: sự nhận biết đoạn khởi đầu. Đoạn khởi đầu có trật tự nucleotide giàu A và T nên thường gọi là trình tự ATAT (hay miền ATAT) là một vùng của miền khởi động (promoter) trong cấu trúc operon (gồm các đoạn gen cấu trúc với các gen điều hòa (R) và gen điều hành (O) phân bố trước chúng). Ở vi khuẩn có một loại RNA-polymerase. RNApolymerase được tác động với yếu tố ρ. Gắn vào điểm khởi đầu phiên mã. Khi chạy đến vùng kết thúc.207 hợp RNA thông tin cũng theo nguyên tắc tương bù nucleotide. C bù G. nhưng ở sinh vật nhân chuẩn thì RNA thông tin được tổng hợp trong nhân phải trải qua quá trình thành thục hóa (processing) gồm methyl hóa đầu 5' và poly-A . nhờ đó các ribonucleoside triphosphate tương bù tiếp theo cũng được lắp vào chuỗi RNA. Ở sinh vật nhân chuẩn có ba loại RNApolymerase I. Enzyme nhận biết được điểm khởi đầu khi có yếu tố σ. II và III. Các RNA thông tin ở sinh vật nhân sơ được sử dụng trực tiếp ngay trong quá trình phiên mã để tổng hợp protein trên bề mặt cấu trúc màng (màng tế bào chất. RNApolymerase ở vi khuẩn gồm bốn tiểu phần: hai tiểu phần giống nhau α và hai tiểu phần khác β và β1. theo trình tự tổng hợp RNA ribosome (I).

mất hoạt tính bao vây vùng O. Mạng lưới nội chất không có ribosome bám lên gọi là mạng lưới nội chất nhẵn còn mạng lưới nội chất có ribosome bám lên gọi là mạng lưới nội chất có hạt. Các gen cấu trúc trong tập hợp operon được phiên mã cùng nhau thành một RNA thông tin đa cistron. 3.cAMP) tác dụng gián tiếp qua protein đặc biệt có tên là CAP (catabolic gene activator protein) kết hợp với vị trí khởi động làm tăng ái lực của RNA-polymerase dẫn đến tăng cường quá trình phiên mã. sau đó quá trình dịch mã thành các protein trên ribosome tiến hành theo từng đoạn ứng với các gen cấu trúc. Khi có mặt trong môi trường. Cơ chất nguyên liệu được tổng hợp ra một cách dư thừa (ví dụ các Acid amin) tham gia vào tổ hợp kìm hãm vùng operator làm dừng quá trình phiên mã.triplet reading frame) quyết định trình tự các Acid amin trong mạch polypeptide. Bên cạnh cơ chế điều hòa âm tính nêu trên. Tham gia vào quá trình dịch mã là một hệ thống phức tạp: RNA thông tin (mRNA). yếu tố cảm ứng (như lactose đối với Lac operon) làm cho protein điều hòa thay đổi cấu trúc không gian. Ở vi khuẩn gen điều hòa I. bảo đảm cho quá trình sử dụng thức ăn cũng như tổng hợp các hợp chất nguyên liệu đồng hóa một cách tiết kiệm. Ribosome chỉ hoạt động khi bám lên cấu trúc màng. tổng hợp protein điều hòa có mặt trong tế bào với liều lượng thấp có tác động bao vây vùng điều hành (O) gây ức chế sao mã các gen cấu trúc (điều hòa âm tính). trong tế bào còn có cơ chế điều hòa dương tính. Trình tự đọc bộ ba nucleotide (hay khung đọc bộ ba . một loạt các protein khác và đặc biệt là còn có sự tham gia của cấu trúc màng. Dịch mã (translation) Dịch mã là quá trình tổng hợp mạch polypeptide ở ribosome trên cơ sở khuôn RNA thông tin.208 hóa đầu 3'-OH và cắt xén hay tách ghép (splicing: vùng intron của gen cấu trúc bị cắt khỏi RNA thông tin chỉ còn lại phần exon) để trở thành RNA thông tin thành thục hay RNA thông tin dịch mã. chẳng hạn. Nhờ vậy (và còn nhờ các chất tạo khuôn gọi là chaperon) các . Sinh vật có cơ chế điều hòa quá trình phiên mã cũng như dịch mã. ribosome và các Acid amin đã được hoạt hóa bởi RNA vận chuyển (tRNA) thành dạng aminoacyl-tRNA dưới sự xúc tác của enzyme aminoacyl-tRNA-synthetase. Khi đó chất giữ vai trò trọng yếu là adenosyl monophosphate vòng (cyclic AMP . Bên cạnh hai cơ chế cảm ứng đã nêu còn có cơ chế điều hòa khác: cơ chế kìm hãm. Trong khi đó cấu trúc màng có chức năng tương ứng ở sinh vật nhân chuẩn là mạng lưới nội chất (endoplasmic reticulum). Ở vi khuẩn cấu trúc màng tham gia vào quá trình sinh tổng hợp protein là màng tế bào chất mà có thể là vùng mesosome. Vùng O được giải tỏa cho phép RNA-polymerase nhận biết và xúc tác quá trình tổng hợp các RNA thông tin.

RNA vận chuyển (tRNA) chỉ gồm 70 . inosine. nhờ đó. Ribosome cấu tạo từ hai tiểu thể có hằng số lắng khác nhau: 30S và 50S ở vi khuẩn và trong ty thể hay lạp thể. Sau khi gắn với tRNA methionine đầu chuỗi thường phải formyl hóa (nhờ nhận gốc formyl từ Acid N10tetrahydrofolic) thành formyl-methionine-tRNA. Sau đó hạt này liên kết tiếp với hạt 50S thành thể ribosome 70S. Trước hết tổ hợp này gắn vào vị trí A với codon tương ứng.. mRNA liên kết với ribosome 30S. Đầu 5' của cuống là vị trí gắn Acid amin. Tổ hợp Acid amin hoạt hóa có dạng chung là aan-tRNA-Tu-GTP. Tu và GTP hoạt hóa tất cả các Acid amin tham gia kéo dài chuỗi polypeptide. còn trong nhiễm sắc thể tế bào nhân chuẩn ribosome lớn hơn và cấu tạo từ tiểu thể 40S và 60S. ribothymidine. Liên kết peptide thứ nhất được tạo thành nhờ hoạt tính peptidyl-transferase của ribozyme 23S trong thành phần hạt ribosome 50S. thioutidine. Nhờ tín hiệu này codon AUG mở đầu được chuyển chính xác vào vị trí mở đầu trên ribosome thay thế vị trí của IF-3 trên hạt 30S của ribosome. Tổ hợp Tu-GTP năng lượng cao được phục hồi nhờ yếu tố Ts. Vì vậy.90 nucleotide.). Tín hiệu UAG của methionine trên mRNA là của methionine mở đầu chỉ khi nó nằm gần trình tự Shine-Dalgarno (3 . Kết quả là phức hợp mở đầu (70S-mRNAfMet-RNAfmet) được hình thành. Quá trình dịch mã bao gtờ cũng bắt đầu từ một methionine. Tiếp đến tổ hợp fMet-RNAfmet ở dạng phức hợp cao năng (fMet-RNAfmet-IF-2-GTP) được chuyển vào vị trí P trên hạt 30S ứng với codon mở đầu UAG của methionine. Nhóm -COOH của fMet và -NH2 của Acid amin tiếp theo (aa2) tham gia phản ứng trùng ngưng giải phóng một phân tử nước. RNA vận chuyển methionine vào đầu chuỗi và giữa chuỗi được ký hiệu lần lượt là RNAfmet và RNAmmet. có dạng lá ba chẽ với cuống và ba thùy. Đồng thời. rồi ở đó GTP bị thủy phân bởi Tu và cùng bị đẩy ra ngoài... Quá trình kéo dài cần các yếu tố kéo dài: EF-T và EF-G.209 protein được tổng hợp ra có được cấu trúc không gian xác định. Các ribosome đều có hai vị trí gắn tRNA: vị trí A gắn aminoacyl-tRNA và vị trí P gắn peptidyl-tRNA. phân bố trong cấu trúc màng theo hướng xác định (đầu NH3+ hướng ra ngoài màng tế bào chất và hướng vào phía trong của màng mạng lưới nội chất) và. Ở vi khuẩn tRNA vận chuyển methionine đầu chuỗi cũng khác với tRNA vận chuyển methionine vào giữa chuỗi. Trước hết nhờ sự kích thích của protein IF-3. IF-2 (trong tổ hợp hoạt hóa với IF-1) bị đẩy ra ngoài nhờ năng lượng thủy phân GTP. chứa nhiều bazơ nitơ cải biến (dihydroutidine. có chức năng xác định. còn thùy giữa là đối mã (anticodon). nhận điện tử (năng lượng) từ tổ hợp . Yếu tố EFT gồm hai protein: Tu và Ts.9 nucleotide chứa trình tự trung tâm GAG) ở trước đó. pseudoutidine.

còn sinh vật nhân chuẩn đó chính là mạng lưới nội chất. cơ chế này còn được bổ sung thêm cơ cấu sửa chữa DNA. Ở vi khuẩn. Các phân tử protein được tổng hợp trôi dạt dần trong cấu trúc linh động của màng. Màng được hình thành chủ yếu nhờ quá trình chuyển hóa lipid trung tính dự trữ thành lipid phân cực (chủ yếu là phospholipid) tạo nên cơ cấu màng đơn vị (hay màng điển hình) hai lớp có các đuôi Acid béo hướng vào nhau nhờ lực kị thủy. III. Sự chuyển chỗ này cần yếu tố EF-G và GTP: EF-G thủy phân GTP cung cấp năng lượng cho sự chuyển chỗ đồng thời đẩy EF-G ra ngoài. hoặc nằm giữa hai lớp màng đơn vị phụ thuộc vào tính phân cực và lực kị thủy của toàn bộ hay một phần cấu trúc phân tử của chúng. Ở vi khuẩn cơ cấu này chủ yếu là màng tế bào chất tạo thành nếp cuộn của mesosome. Để dịch mã được tiếp tục fMet-aa2-tRNA được dịch chuyển từ vị trí A sang vị trí P của ribosome. Mặt khác. còn tRNAfMet bị tách khỏi cả hai liên kết: liên kết với codon mRNA và liên kết với methionine mà trở nên tự do. quá trình hình thành màng bắt đầu từ mesosome và quá trình tổng hợp protein cũng diễn ra đồng thời. nếu phát triển virus luôn lộ xuất các kháng nguyên của mình trên bề mặt tế bào ký chủ trước khi giải phóng ra khỏi tế bào. . Màng đơn vị được bổ sung các phân tử protein đang được tổng hợp trên ribosome bám dính trên màng này mà trở thành cấu trúc màng sinh học đặc trưng: các phân tử protein khác nhau hoặc thẩm nhập suốt độ dày của màng.210 tRNA-Tu-GTP. các quá trình tổng hợp protein virus và hình thành màng của tế bào cũng diễn ra đồng thời theo phương thức tương tự. thẩm nhập chỉ phía trong hoặc phía ngoài của màng. Về thực chất hai cơ cấu màng này đều là sản phẩm của quá trình tổng hợp màng vốn diễn ra liên tục trong tế bào và cung cấp phần diện tích màng mới bao bọc thể tích của tế bào đang tăng trưởng. Ở các tế bào động vật hay thực vật bị cảm nhiễm virus. Ở sinh vật nhân chuẩn Acid amin mở đầu sự dịch mã cũng là methionine nhưng không cần formyl hóa. Chính nhờ những cơ cấu này mà cơ thể có những tính trạng đặc trưng. Sửa chữa DNA Tế bào có cơ cấu sao chép thông tin di truyền hoàn thiện nhờ cơ chế sao chép bán bảo toàn và lắp ráp nucleotide tương bù vào khuôn mạch đơn. Tuy vậy. Cơ cấu màng sinh học từ trạng thái mạng lưới nội chất chuyển dần ra ngoài rồi dung hợp với màng tế bào chất làm diện tích màng tế bào chất càng rộng. Vì vậy. Các chuỗi polypeptide được tổng hợp nhờ ribosome phải diễn ra trên cấu trúc màng. các protein tiết xuất cũng được tổng hợp trên cơ cấu màng và nhờ quá trình dung hợp màng tiểu bào (thể Golgi phình rộng) với màng tế bào chất mà được tiết xuất ra ngoài tế bào.

các protein MutS. vì vậy gây đột biến GC thành AT. Trong sửa chữa DNA. chẳng hạn. Trong cơ thể có một loại enzyme gọi là photolyase đảm trách việc sửa sai này. phân giải dimer rồi tách khỏi DNA. Nhờ đó tế bào phân biệt được sợi cũ và sợi mới. Sau khi AP xuất hiện các enzyme APendonuclease cắt bỏ deoxyriboso-5'-phosphate sót lại. còn MutL kết hợp với cả hai protein đã kết hợp DNA nói trên thành một phức hợp làm cho phân tử DNA uốn cong trong khoảng độ dài 1000 bp phía đầu 5' . sửa chữa cắt bazơ và sửa chữa ghép đôi sai.211 Có thể gặp ba cơ chế sửa chữa DNA là sửa chữa trực tiếp.10-dimethyl tetrahydrofolate. Các enzyme này cắt bỏ nucleotide sai bằng cách cắt bỏ mối liên kết glycosyl giữa bazơ nitơ và nguyên tử C 1' của deoxyribose. Khi đó nó có thể nhận biết cấu trúc dimer thymine. có ít nhất 9 protein. photolyase được hoạt hóa bởi ánh sáng nhìn thấy. MutS liên kết các cặp bazơ ghép đôi sai. Trong thành phần có FADH2 và 5. coli. Sửa chữa cắt bazơ được thực hiện nhờ enzyme DNA-glycosylase. Enzyme này nhận biết những chỗ hư hỏng phổ biến trên DNA như adenine và cytosine khuyết thiếu amin hoặc guanine và adenine methyl hóa. O6MG có khuynh hướng ghép đôi với T hơn là với C. Sự phân biệt sợi dựa vào tác dụng của enzyme dam-methylase methyl hóa DNA ở các vị trí N6 của tất cả các adenine (*A) gặp trong trình tự 5'GATC hay enzyme dcm-methylase methyl hóa cytosine (*C) nằm kề adenine hoặc kề thymine trong trình tự CCATGG hay CCTAGG. Sửa chữa trực tiếp thường gặp khi trên DNA hình thành dimer thymine. Sau thời điểm sao chép chỉ sợi khuôn được methyl hóa còn sợi mới còn chưa methyl hóa. MutH liên kết với trình tự GATC. Sửa chữa trực tiếp còn nhờ các exonuclease là những enzyme cắt DNA từ hai đầu. (Do nhóm methyl liên kết chặt với Acid amin cystine của trung tâm hoạt động của enzyme nên enzyme bị vô hoạt sau phản ứng sửa chữa DNA). MutH và MutL đóng vai trò quan trọng. hay ở động vật bậc cao một số cytosine trong trình tự CG. Ví dụ khác về sửa chữa trực tiếp là sửa chữa phục hồi guanine đã bị methyl hóa trên nguyên tử O6. Hệ thống sửa chữa này ở E. ký hiệu là AP (apurinic/apyrimidineic site). Kết quả là tạo nên những điểm khuyết thiếu purine hoặc pyrimidine. O6-methyl guanine (O6MG) hình thành khi tế bào phát triển trong môi trường có yếu tố ankyl hóa. Enzyme DNA-methyl transferase xúc tác loại bỏ nhóm methyl khỏi O6MG làm phục hồi guanine bình thường trong chuỗi DNA. Khi sao mã. sau đó DNApolymerase I tổng hợp DNA bổ sung và ligase hàn chỗ trống trong mạch. Bên cạnh sửa chữa điểm nêu trên còn có quá trình sửa chữa ghép đôi sai. là kết quả của sự chiếu xạ tử ngoại vào lứa cấy tế bào.

Bảng dưới đây giới thiệu một số enzyme hạn chế.cohesive). Chú ý một số enzyme hạn chế (Eco RI. Hha I) cắt DNA hai sợi tạo ra đầu gồm một số nucleotide một sợi (đầu dính . Hệ thống gồm hai hoạt tính enzyme trên cùng một phân tử protein hay trên hai protein riêng rẽ: hoạt tính endonuclease và methyltransferase. Endonuclease của phage P1 thuộc loại này. Tuy nhiên trong nhiều trường hợp tế bào chịu sự xâm nhập của gen lạ. .restriction enzyme) trong khi các DNA tế bào chủ không bị cắt là nhờ sự cải biến (modification). Do DNA của mình được methyl hóa tại các điểm adenine (tại N-6) và cytosine (tại N-5 và N-4) bởi hoạt tính methyltransferase tác dụng phân cắt của hoạt tính endonuclease bị trở ngại. Loại I nhận biết trình tự DNA đặc biệt và cắt DNA này ở xa vị trí nhận biết. mặt khác phân hủy DNA lạ. protein SSB. nếu một trong hai mạch không được methyl hóa MutH sẽ tác dụng như một endonuclease phân giải sợi không được methyl hóa ở phía 5' của guanine thuộc GATC. Cơ chế chống sự xâm nhập của gen lạ (hạn chế và cải biến) Tế bào có cơ chế tự sao chép và sửa sai bảo đảm cho vật chất di truyền ổn định. Sự hạn chế (restriction) này là nhờ các tế bào ký chủ có hệ thống enzyme nhận biết và cắt các DNA lạ (gọi là các enzyme hạn chế . Một mặt chúng có tác dụng đánh dấu DNA tế bào. Sợi không methyl hóa sẽ được tiếp tục bị cởi xoắn và bị phân giải theo hướng 3'→5' từ vị trí đánh dấu đến vị trí ghép sai rồi được thay thế bằng sợi DNA mới với sự xúc tác của hệ thống replisome gồm helicase II. trong khi đó một số enzyme hạn chế khác (Ba II. polymerase III và ligase. Hạn chế và cải biến phổ biến ở vi sinh vật và được nghiên cứu kỹ ở vi khuẩn. Do phân cắt tại những điểm đặc hiệu tạo ra những mảnh DNA xác định nên enzyme hạn chế loại II được sử dụng trong kỹ thuật tái tổ hợp và tạo dòng gen. exonuclease I. Khi đó tế bào còn có cơ chế khác chống lại sự xâm nhập của DNA từ ngoài vào.212 của trình tự GATC. Các endonuclease này nhận biết một trình tự đặc hiệu dài ngắn khác nhau tùy loại enzyme và phân cắt DNA này tại vị trí hoặc cách xa điểm nhận biết đó. Loại II nhận biết và phân cắt DNA trong trình tự nhận biết là một vùng có trình tự đối xứng quay kép (trình tự đối xứng đảo vị hay trình tự lặp ngược hướng palindrome). Khi đó. IV. như các phage xâm nhập vào tế bào vi khuẩn. Hae III) cắt DNA hai sợi tạo ra đầu bằng (đầu tầy). Các endonuclease đều cắt DNA sợi đôi và có thể chia thành hai loại.

Khi môi trường mất đi yếu tố cảm ứng thì tính trạng đã từng hình thành cũng trở nên không biểu hiện nữa (gen trở nên lặn).lặn của gen sẵn có trong tế bào dưới tác động cảm ứng của môi trường. Biến dị kiểu hình. Tế bào vi khuẩn E. Biến dị kiểu hình Biến dị kiểu hình còn gọi là thường biến. thuận nghịch và không ổn định của toàn bộ quần thể sinh vật. có những tính chất sau: tính tạm thời (không ổn định). Biến dị 1.6 giờ trong môi trường và điều kiện thích hợp sẽ dài ra trước khi phân bào. là hiện tượng có sự khác biệt về cấu trúc cũng như đặc điểm phát triển giữa thế hệ con cái so với thế hệ bố mẹ cũng như giữa chúng với nhau dưới tác động của môi trường và không liên quan đến sự thay đổi vật chất di truyền. coli nuôi cấy được 5 .3 : Hai dạng đầu cắt của enzyme hạn chế loại II: a) cắt hình thành đầu tầy và b) cắt hình thành đầu dính. tính thuận nghịch và tính toàn bộ. Biến dị hình thái trong quá trình sinh sản thường xảy ra biến dị về kích thước của tế bào. V. dạng vết cắt và nguồn gốc của chúng Enzyme Eco RI Hha I Ba II Hae III Bam HI Hind III Kpn I Mbo I Trình tự điểm nhận biết 5'-G↓AA*TTC 5'-GC*G↓C 5'-TGG↓C*CA 5'-GG*↓CC 5'-G↓GATCC 5'-A↓AGCTT 5'-GGTAC↓C 5'-↓GATC Nguồn gốc Escherichia coli RY 13 Haemophilus haemolyticus Brevibacterium albidum Haemophilus aegypticus Bacilus amyloliquefaciens H Hemophilus influenzae Rd Klebsiella pneumoniae Moraxella bovis Hình 10. biến dị kiểu hình có thể biểu hiện dưới một số hình thức. Trái .213 Bảng 10. Đây là những biến dị tạm thời. như vậy. Bản chất của biến dị kiểu hình là hiện tượng trội . Ở vi khuẩn.3: Một số enzyme hạn chế. Những biến dị này xuất hiện chậm và mất đi khi các yếu tố làm xuất hiện chúng mất đi.

Ở nhiệt độ 37 °C Brucella. nhiều nấm gây bệnh thường biểu hiện hai dạng hình thái khác nhau. Chúng có dạng hình cầu (dạng nấm men) khi ở trong nội quan động vật mắc bệnh nhưng có dạng sợi khi nuôi cấy trên môi trường nuôi cấy nhân tạo hay ở môi trường ngoài. Sức căng bề mặt của môi trường cũng như độ Acid (pH) môi trường tăng làm hình thành những vi khuẩn mập hơn. Những vi khuẩn cùng loài khi phát triển trên môi trường đặc có thể hình thành khuẩn lạc láng (dạng S) hoặc nhám (dạng R) hoặc những dạng trung gian. vi khuẩn trở nên mập hơn nếu được nuôi cấy trong môi trường giàu chất dinh dưỡng. hình thoi hoặc dạng cầu khuẩn nhỏ trong khi nuôi cấy ở nhiệt độ thấp hơn tế bào thường dài.. Hoặc biến dị hình thái dưới ảnh hưởng của ngoại cảnh như cấu trúc hóa học của môi trường làm cho vi khuẩn có những hình thái khác nhau. Histoplasma farsimosa. ví dụ. Biến dị kiểu hình còn thể hiện ở hiện tượng dung nạp thuốc và khả năng hình thành enzyme để sử dụng các yếu tố môi trường. có dạng rất ngắn. mảnh. thường gọi là nấm nhị hình. . Aspergillus fumigatus. Những chất ức chế ở nồng độ thấp có khả năng biến đổi hình thái của vi khuẩn. Trong trường hợp thường biến kháng thuốc các gen tổng hợp yếu tố đề kháng (thường là enzyme phân giải thuốc kháng sinh hoặc các hợp chất làm thay đổi các lỗ khổng trên màng tế bào chất) từ trạng thái bị ức chế được cảm ứng mà chuyển thành dạng hoạt động tức trở thành khuôn tổng hợp các protein tương ứng. Biến đổi hình thái do thường biến còn biểu hiện ở dạng khuẩn lạc. 2. thường là đơn bào. Tương tự. Tiếp xúc lâu ngày với nồng độ thấp chất kháng sinh có thể dẫn đến việc hình thành những chủng vi khuẩn kháng thuốc kháng sinh do gen lặn được cảm ứng trở nên trội (mặc dù trong đa số trường hợp sự xuất hiện tính đề kháng với thuốc kháng sinh là do đột biến hoặc vận chuyển và tái tổ hợp thông tin di truyền). ngắn hơn.. thì khái niệm biến dị kiểu gen phải được hiểu rộng hơn và như là sự hình thành các biến chủng có thể là kết quả của đột biến (biến đổi cấu trúc genome sẵn có) hoặc của quá trình tiếp nhận vật chất di truyền từ bên ngoài (thường tiếp theo sau là quá trình tái tổ hợp thông tin di truyền vào genome nhiễm sắc thể). Tuy vậy. trái lại hình thành những dạng tế bào mảnh hoặc dạng cầu bất thường khi nuôi cấy trong môi trường nghèo chất dinh dưỡng. Coccidoides immitis.214 lại chúng sẽ trở nên nhỏ hơn khi vào trong giai đoạn phát triển tối đa. ở vi sinh vật. và có kích thước tối thiểu khi mất khả năng sinh sản.. Biến dị kiểu gen Khái niệm biến dị kiểu gen ở sinh vật đa bào thường được coi là đồng nhất với khái niệm đột biến (mutation). chẳng hạn.

đột biến đề kháng cả penicillin và streptomycin) là tích số các tần suất tương ứng. Tính gián đoạn của đột biến là sự thay đổi xảy ra một cách hoàn chỉnh trong một thời hạn. Ví dụ.1. Tính đặc hiệu của đột biến còn hiểu là tính độc lập của đột biến. trong nhiều trường hợp có thể xuất hiện những đột biến biến đảo (conversion).10-6) của một quần thể vi sinh vật. mặc dù cũng có những đột biến do cảm ứng với các yếu tố chọn lọc. thường là một lần phân bào. Biến dị này là những biến đổi đột ngột. coli pha loãng phân nhỏ ra ống nghiệm và pha loãng mà không phân nhỏ (vẫn để trong bình lớn) để nuôi cấy chuẩn bị trước khi cấy lên đĩa thạch môi trường có chất cảm ứng chọn lọc (streptomycin) chứng minh rằng đột biến xảy ra ngay cả khi không tiếp xúc với yếu tố chọn lọc (chất kháng sinh). Một tính trạng mới xuất hiện thường không ảnh hưởng đến sự hình thành tính trạng đột biến khác. không dự tính trước được và không liên tục ở một số cá thể hiếm hoi (tần suất xuất hiện ở vi khuẩn: 10-8 . Mặc dù vậy. phát triển) khác biệt so với thế hệ cha mẹ liên quan đến sự biến đổi vật chất di truyền. tần suất xuất hiện biến chủng đề kháng một chất kháng sinh là 10-7 và tần suất xuất hiện biến chủng đề kháng chất kháng sinh khác là 10- . Thí nghiệm của Lederberg (1952) với một chủng E. để kiểm tra sự hình thành một biến chủng nào đó người ta phải sử dụng yếu tố chọn lọc để tuyển chọn những dòng vi khuẩn có thuộc tính khác biệt nhờ kìm hãm những vi khuẩn không có thuộc tính đề kháng chất chọn lọc. Đột biến Đột biến là sự hình thành các cá thể có những chi tiết (cấu trúc.10-5). xuất hiện một cách ngẫu nhiên. Biến đảo không nhất thiết có cùng tần suất xuất hiện của đột biến ban đầu nhưng chúng cũng hiếm. Tần suất này ở vi khuẩn khoảng 10-7 (10-8. Tính vững bền của đột biến là sự xuất hiện một biến chủng nếu tồn tại được trong điều kiện ngoại cảnh xác định thì tính trạng mới được duy trì và truyền sang thế hệ tiếp theo. Trong nghiên cứu vi khuẩn. có tính cố định. tính bền vững và tính di truyền. Tính hiếm của đột biến là hiện tượng tất cả các đột biến đều xảy ra với tần suất hết sức thấp và xảy ra không đều. Tính ngẫu nhiên của đột biến có nghĩa là sự hình thành biến chủng đột biến trước khi có những yếu tố chọn lọc tác động đến. Trong những điều kiện nhất định xác suất xuất hiện đột biến nào đó được biểu diễn như là tỷ số tế bào hình thành đột biến trong tập đoàn vi khuẩn giữa hai lần phân chia tế bào. Chúng tương đối độc lập với môi trường chung quanh.215 2. gián đoạn và di truyền. Tần suất xuất hiện một đột biến kép (ví dụ.

. ethyleneimine.hoặc diethylmetasulfonate. phối hợp hai thuốc trên có thể làm giảm khả năng chọn lọc những biến chủng kháng thuốc hơn là sử dụng các thuốc kháng sinh riêng rẽ. đặc biệt đột biến điểm ở vị trí đầu 5' của sợi dương của gen cấu trúc. bớt hoặc thay thế một đoạn DNA bằng một đoạn DNA khác (đột biến đoạn).. ethyl. Người ta gọi chúng là đột biến do ngẫu nhiên.)... Bản chất của đột biến: Bộ nucleotide của DNA thuộc một gen là một mật mã thông tin. 2-aminopurine.. Nguyên nhân đột biến có thể là do các yếu tố hóa học và vật lý ion hóa hoặc gắn kết hóa trị với cầu nối giữa hai chuỗi monomer của DNA xoắn kép (tia tử ngoại tạo dimer thymine. Đột biến điểm tuy nhỏ nhưng thường góp phần quan trọng trong quá trình tiến hóa. hình thành một tính trạng đột biến. Biến đổi này được gọi là sự chuyển dịch khung (frame shift). nếu Acid amin mới đó khác nhiều 8 . Vì vậy thành phần của chuỗi polypeptide chỉ thay đổi tại một vị trí tương ứng với điểm đột biến trên gen. kích thích.) của nó. acid nitrơ. dimethyl. enzyme.. thụ thể. Đột biến này thường không biến đảo. trong nhiều trường hợp khó có thể phát hiện và kiểm soát được các nguyên nhân gây nên nhiều đột biến. những biến chủng này thường mất khả năng sống nếu biến dị xảy ra trên gen thiết yếu (house-keeping genes) của sinh vật do cấu trúc (hóa học cũng như không gian) protein thay đổi dẫn đến mất chức năng vốn có (cấu trúc. Như vậy. Khi một bazơ bị mất hoặc được chèn thêm vào trình tự của gen cấu trúc sẽ xuất hiện sự thay đổi mạnh mẽ trong cấu trúc protein do thay đổi toàn bộ trình tự Acid amin trong thành phần chuỗi polypeptide kể từ vị trí thêm điểm hay mất điểm (đọc theo hướng 5'→3' của RNA thông tin). Khi đó. Tuy nhiên. Mọi thay đổi của bộ này dẫn đến sự thay đổi cấu trúc và chức năng của protein đó. actinomycin D.216 thì tần suất xuất hiện một biến chủng đề kháng cả hai thuốc trên là 10-15. điểm đột biến thế điểm không làm thay đổi khung đọc của phần lớn chiều dài của chuỗi RNA thông tin. Đột biến thế điểm (GC→AT và ngược lại) ngược lại là đột biến thường gặp nhưng ít biểu hiện ra bên ngoài và thường khó phát hiện. bớt hoặc thay thế một đôi bazơ bằng một đôi bazơ khác (đột biến điểm) hoặc thêm. ethidium bromide. nó tương ứng với cấu trúc một protein đặc hiệu. Trong đa số trường hợp.hoặc methylmetasulfonate. cũng là đầu 5' của RNA thông tin. N-methyl-N-nitroN-nitroso-guanidine. Đột biến là những thay đổi ở tầm phân tử. Khi DNA gen được phiên thành RNA thông tin. nhưng do tính phổ biến của đột biến điểm nên người ta thường đồng nhất khái niệm đột biến điểm với đột biến. Mọi đột biến dù là ngẫu nhiên hay do cảm ứng thì sự thay đổi của bộ nucleotide có thể xảy ra hai kiểu: thêm. như hiện tượng khuyếch đại gen. Mặc dù đột biến đoạn thường khá gặp. bromouracine.

kết quả có thể là biến chủng không thể tồn tại. 2. 2. Biến nạp (Transformation) .. và tế bào cho (donor) chỉ vận chuyển một phần di truyền. v.v. hiện tượng giao phối là sự phối hợp giữa hai vi khuẩn có giới tính khác nhau.1. thay đổi tính kháng nguyên hoặc sự mẫn cảm đối với kháng sinh hoặc tia tử ngoại. khả năng sử dụng các đường. còn gọi là chuyển nạp) và tiếp hợp (conjugation. Trong quá trình biến nạp chất liệu di truyền là những mảnh DNA tự do. tải nạp (transduction.. hay là sự vận chuyển từ vi khuẩn đực sang vi khuẩn cái. trừ một vài ngoại lệ ít gặp trong những trường hợp vận chuyển nhiễm sắc thể do sự tiếp hợp.. một số đột biến dẫn đến việc tăng khả năng tổng hợp các yếu tố sinh trưởng hay các hợp chất khác như Acid amin. Khác với sự vận chuyển di truyền trong biến nạp và tải nạp. Các đột biến khác cũng thường gặp ở vi khuẩn là đột biến thay đổi khả năng lên men. Đây thường là nguyên nhân của sự hình thành loài mới trong quá trình tiến hóa. còn gọi là tiếp nạp hay giao phối). Mỗi cơ chế vận chuyển này đều có đặc tính riêng quyết định sự truyền những yếu tố di truyền từ tế bào cho sang tế bào nhận. Hiện tượng chuyển nạp là do các phage đưa mảnh nhiễm sắc thể từ một tế bào phage đã ký sinh và dung giải trước đây cho một tế bào khác.217 so với Acid amin nguyên thủy về thuộc tính phân cực. Những cơ chế đều có đặc điểm là vận chuyển di truyền theo một chiều từ tế bào này sang tế bào khác mà không có chiều ngược lại. Hiện tượng này biểu hiện trầm trọng nếu acid amin thay thế nằm ở trung tâm hoạt động của một enzyme thiết yếu. Trong trường hợp Acid amin thay thế không có sự khác biệt nhiều so với acid amin nguyên thủy hoặc đột biến tạo mật mã thoái hóa (nhiều mã bộ ba nucleotide cho một acid amin) thì đột biến không biểu hiện tính trạng và tích lũy lặn trong quần thể. (đồng nghĩa với việc mất khả năng điều tiết sản xuất thừa). đột biến gây vững bền đối với các nhân tố ức chế dẫn đến thay đổi độc lực. thay đổi khả năng sinh sắc tố hoặc khả năng hình thành nha bào.. tính ái thủy và tính phản ứng thì tính chất nguyên thủy của protein bị thay đổi dẫn đến chức năng cũ của protein bị mất. Chủng loại đột biến thường gặp khá phong phú. Đặc biệt có thể gặp các đột biến khuyết dưỡng hay tự dưỡng (auxotrophic mutants): các chủng đột biến này mất khả năng phát dục nếu trong môi trường thiếu một yếu tố nào đó. Có thể gặp đột biến hình thái như đột biến dạng khuẩn lạc..transformation).2. Ngược lại.2. Sự vận chuyển và tái tổ hợp thông tin di truyền Có ba cơ chế vận chuyển di truyền khác nhau ở vi khuẩn: Biến nạp (còn gọi là chuyển thể .

Có chừng 30 . Biến nạp tự nhiên thường diễn ra ở họ Enterobacteriaceae..60 giây). khả năng sử dụng đường để sinh trưởng. Vì vậy sự biến nạp thường có kết quả hơn trong giới hạn một loài có các cá thể có những tính trạng khác nhau. chứ không phải protein. còn tiêm vi khuẩn chủng R sống cho chuột thì chuột vẫn sống. Nếu tiêm vi khuẩn sống chủng S thì làm chuột nhắt chết. Điều đó chứng minh rằng DNA. là vật chất mang thông tin di truyền. khả năng sinh độc tính. Cho đến nay. .15% tế bào ở quần thể. Trên bề mặt tế bào nhận có các yếu tố cảm ứng để cho đoạn DNA có thể cố định.218 Biến nạp (hay chuyển thể) là sự vận chuyển thông tin di truyền nhờ sự xâm nhập của các phân tử DNA tự do (có nguồn gốc từ tế bào cho đã phân giải) vào tế bào nhận làm cho genome của tế bào nhận thay đổi. Điều kiện biến nạp: Quá trình biến nạp chỉ xảy ra trong khi các vi khuẩn nhận ở một tình trạng sinh lý đặc biệt (ở khoảng 1 . khả năng kháng thuốc. những tính trạng được biến nạp được biết là khả năng tổng hợp yếu tố sinh trưởng. Tần suất tái tổ hợp phụ thuộc vào đặc tính các đoạn nhiễm sắc thể khác nhau. Hiện tượng này được vận dụng rộng rãi trong kỹ thuật di truyền. và một mạch đơn được ghép vào nhiễm sắc thể của tế bào nhận.. tiêm S chết do qua xử lý nhiệt (hơ nóng) thì chuột vẫn sống. thông thường ở giai đoạn phát triển giảm). Đoạn DNA đã nhập vào tế bào được tách đôi. Quá trình này được gọi là sự tái tổ hợp (recombination). Kết quả của biến nạp phụ thuộc vào mức độ tương đồng trong cấu trúc phân tử DNA của tế bào cho và tế bào nhận. MacLeod và McCarty. Trong điều kiện thí nghiệm tần suất biến nạp tăng cao nhờ tế bào được xử lý làm thay đổi màng tế bào chất (như xử lý polyethylene glycol) và gây sốc nhiệt (chuyển tế bào từ nhiệt độ 0°C sang nhiệt độ 40 . Dạng không gây bệnh hình thành khuẩn lạc nhám ký hiệu R. tên cũ là Diplococcus pneumoniae hay pneumococcus) vào năm 1928. Dạng gây bệnh cho động vật hình thành khuẩn lạc láng ký hiệu là S. vào sự tương đồng các phân tử DNA.70 vùng cảm ứng như thế.50°C trong vòng 50 . 1944) cho thấy nếu xử lý dịch S chết được tinh chế vẫn có năng lực biến nạp in vitro và nếu xử lý bằng DNase thì làm mất hoạt tính biến nạp của dịch này trong khi xử lý bằng protease vẫn giữ nguyên tính biến nạp. Tình trạng này đã làm thay đổi các tính chất bề mặt tế bào nhận có các yếu tố cảm ứng enzyme đặc biệt trên đó các đoạn phân tử DNA có thể xâm nhập được. Các thí nghiệm sau đó (Avery. Griffith là người đầu tiên đã phát hiện sự biến nạp ở phế cầu khuẩn (Streptococcus pneumoniae. Vi khuẩn này có hai dạng khác nhau. nhưng tiêm R sống đồng thời với tiêm S chết lại làm chuột chết và sau đó trong máu chuột chết phân lập được chủng S đặc trưng..

Ở E.219 2. các phage mang gen nhiễm sắc thể thực hiện chức năng vật mang chất di truyền từ tế bào cho (ký chủ trước) sang tế bào nhận (ký chủ sau). Khi phage hấp bám lên màng tế bào vi khuẩn đặc hiệu bằng thụ thể ở lông đuôi. Các vi khuẩn mang prophage được gọi là vi khuẩn dung nguyên (lysogenic bacteria) do những vi khuẩn này mang mầm mống của quá trình dung khuẩn sau này. phage độc tồn tại độc lập trong tế bào chất. Sự tải nạp (chuyển nạp . ATP-ase ống đuôi của phage được hoạt hóa phân giải ATP giải phóng năng lượng làm co rút vỏ đuôi. phage khuyết tổn này lại tiếp tục hấp bám lên tế bào mới và đưa đoạn DNA của tế bào cũ vào tế bào mới. Các phage tải nạp ở Staphylococcus. Trong quá trình lắp ráp vỏ protein phage thường bao bọc DNA phage nhưng trong nhiều trường hợp vỏ protein phage lại chứa mảnh DNA vi khuẩn (và tạo thành phage khuyết tổn hay phage thui: abortive phage). Sau khi xâm nhập DNA. điều khiển quá trình tổng hợp protein phage. Sự tải nạp phổ biến rộng rãi và được nghiên cứu kỹ ở vi khuẩn họ Enterobacteriaceae. Tuy vậy. Các phage độc làm tan vi khuẩn ký chủ đặc hiệu trong khi các phage ôn hòa không làm tan vi khuẩn. Khi đó prophage tự sao chép thành những phiên bản ở trạng thái độc lập trong tế bào chất và bắt đầu chu trình dung giải vi khuẩn. lý) gây đột biến. Quá trình tải nạp có thể vận chuyển một hoặc một số gen bất kỳ như nêu trên được gọi là tải nạp .2. Ở trạng thái episome này bộ gen của phage ôn hòa được truyền cho các thế hệ sau của vi khuẩn tương tự các gen khác của nhiễm sắc thể. Khi xâm nhập vào tế bào mới. Trong quá trình sao chép đó các phage mới hình thành có thể mang theo DNA của phage và đoạn DNA (nằm kề bên) của nhiễm sắc thể vi khuẩn. Có hai loại phage. Khi giải phóng ra ngoài cùng các phage khác do dung giải tế bào. chúng có thể trở thành phage độc khi môi trường có tác nhân (hóa. Ở một số phage được gọi là phage ôn hòa. khi chuyển sang trạng thái độc. sau khi xâm nhập vào tế bào chất vi khuẩn. kết quả là ống đuôi chọc thủng màng tế bào chất vi khuẩn và làm DNA phage theo ống đuôi này xâm nhập vào tế bào chất vi khuẩn. DNA ấn nhập vào cấu trúc phân tử DNA nhiễm sắc thể của vi khuẩn ở dạng tiền phage (prophage).2. coli đó là các phage T và P-1. Vi khuẩn dung nguyên tiếp tục sinh trưởng bình thường. ở Shigella P-1. Pseudomonas và Proteus cũng biết đến.transduction) Tải nạp là sự vận chuyển vật chất di truyền nhờ phage (bacteriophage hay thực khuẩn thể) là các virus ký sinh vi khuẩn. DNA phage và làm phân hủy DNA của vi khuẩn. ở Salmonella typhimurum P-22. các phage ôn hòa có hai giai đoạn thay thế nhau trong chu trình phát triển. tuy nhiên khi gặp điều kiện môi trường có các yếu tố gây đột biến thì phage chuyển sang trạng thái độc làm vi khuẩn dung giải.

Tương tự. Ở loài vi khuẩn này chỉ có những tế bào dung nguyên có khả năng tổng hợp ngoại độc tố biểu hiện độc tính: gây sốt và các hiện tượng bệnh lý khác ở người (bệnh bạch hầu). ví dụ. giao phối . Nói chung. phage Φ-80 cũng ở E. Khả năng cho của tế bào đực quyết định bởi sự có mặt của yếu tố di truyền ngoài nhiễm sắc thể là . chỉ vận chuyển những gen nằm kề locus galactosidase (Gal) là vị trí phage này tái tổ hợp vào genome ký chủ. lan truyền kháng nguyên thân (gây phản ứng chéo miễn dịch) và nâng cao khả năng tổng hợp các chất yếu tố sinh trưởng. Nhiều phage chỉ có thể tái tổ hợp vào một vị trí (locus) nhất định trong genome ký chủ. Chẳng hạn. Khi đó vi khuẩn trở nên có khả năng phát triển trên môi trường không có hợp chất này và thể hiện kiểu hình là các khuẩn lạc nhỏ mọc trên môi trường tổng hợp không chứa purine. 2. một đoạn nhiễm sắc thể điều khiển tổng hợp kháng nguyên thân được truyền theo điều khiển tổng hợp kháng nguyên thân ở tế bào nhận.220 chung hay tải nạp không đặc hiệu (như tải nạp do phage P-1 và P-22 ở E. Điều này được Lederberg và Tatum chứng minh lần đầu tiên vào năm 1964 trên các biến chủng E. Quá trình truyền vật chất di truyền chỉ diễn ra một chiều từ tế bào đực (F+) sang tế bào cái (F-). coli.2. coli có thể tái tổ hợp vào gần locus điều khiển tổng hợp tryptophan và sau đó tải nạp yếu tố này một cách đặc hiệu. Hiện tượng này gọi là tải nạp đặc hiệu. Phage lambda (λ) ở E. Tiếp hợp (hay tải nạp. ở vi khuẩn chuyển nạp đóng vai trò trong lan truyền độc tính. Khi tải nạp. Một số phage ôn hòa khi làm dung nguyên hóa vi khuẩn có khả năng làm thay đổi các kháng nguyên vi khuẩn nhận. Shigella và Salmonella. Lý do của quá trình này là gen tổng hợp purine không sao chép được trong mỗi lần vi khuẩn phân bào nên chỉ một tế bào vi khuẩn duy nhất mang tính trạng tổng hợp purine trong quần thể (để phát triển và có thể hỗ trợ tế bào bên cạnh).conjugation) Tiếp hợp là quá trình vận chuyển thông tin di truyền bằng cách tiếp xúc trực tiếp các tế bào cho và nhận nguyên vẹn về mặt sinh lý.3. sau khi được ấn nhập vào tế bào nhận (vốn không có kháng nguyên này). Khi nghiên cứu sự tải nạp ở Salmonella người ta còn phát hiện được sự tải nạp khuyết (abortive transduction). trường hợp một đoạn nhiễm sắc thể điều khiển tổng hợp các purine được phage tải nạp sang tế bào nhận không tái tổ hợp với nhiễm sắc thể mà tồn tại tự do trong tế bào chất ở dạng gen ngoài (extragene) và không tự sao chép. coli. Chính vì vậy chúng chỉ có thể vận chuyển những gen phân bố gần locus này mà thôi. coli K-12. Hiện tượng tải nạp đoạn gen điều khiển độc tố được phát hiện ở Corynebacterium diphtheriae.

hai hiện tượng có thể gặp là biến nạp một phần genome plasmid F hoặc biến nạp toàn bộ genome plasmid. coli. cũng như plasmid điều khiển tổng hợp kháng nguyên K-88 (tức F4). yếu tố giới tính). Số lượng pili giới tính rất ít (khoảng 2 3). Trong trường hợp pili giới tính tự do trong tế bào chất. Đường kính trong khoảng 25Åcó thể cho phép sợi DNA của tế bào đi qua khi nó tiếp xúc với tế bào nhận. Tương tác các virus Tương tác các virus là hiện tượng thường gặp và góp phần thay đổi tính trạng cũng như khả năng phát triển của virus khi trong một tế bào đồng thời cảm nhiễm một số virus.221 F (fertility factor. 2. Những chủng có tần suất biến nạp gen nhiễm sắc thể cao được gọi là chủng Hfr (chủng có tần suất biến nạp cao).vì trong quá trình tiếp hợp ngắn ngủi DNA nhiễm sắc thể thường bị đứt đoạn. colv 3). sex-factor. một mạch của đoạn nhiễm sắc thể ở kề bên yếu tố F bị cắt và duỗi ra mà trở nên có cấu trúc thẳng. plasmid Hly điều khiển sự tổng hợp hemolysin. col v2. hemotoxin. Tương tác kiểu gen có thể là: 1) tái tổ hợp. K-99 (tức F5) và một vài plasmid khác. có plasmid độc tố vir. Trên bề mặt của tế bào F+ có các nhung mao đặc biệt . Quá trình tiếp hợp của plasmid F tái tổ hợp trong DNA mạch vòng của nhiễm sắc thể bắt đầu từ khi hai tế bào đực và cái tiếp xúc nhau. Yếu tố ngoài nhiễm sắc thể điều khiển quá trình tiếp hợp gọi là các plasmid tiếp hợp (conjugative plasmid). Khi đó. Những plasmid này có thể điều khiển sự vận chuyển DNA của chính nó hoặc định hướng vận chuyển nhiễm sắc thể khi nó nằm ở trạng thái liên kết với nhiễm sắc thể đó. Bởi vì plasmid F nằm ở cuối chuỗi thẳng nhiễm sắc thể nên nó không được truyền qua tế bào F. Hiện tượng này có thể liên quan đến kiểu gen nhưng trong nhiều trường hợp ở các virus chỉ xảy ra liên quan đến kiểu hình.pili giới tính. và nhờ đó chỉ một phần nhiễm sắc thể của tế bào F+ được chuyển sang tế bào F-. có thể hấp thụ các phage đặc biệt. Đầu nhiễm sắc thể tự do này tách ra và tự sao thành hai sợi. hướng về phía pili giới tính và được chuyển theo pili này sang tế bào F-. Trong trường sau. Plasmid điều khiển tổng hợp colicin (col j. tế bào nhận trở thành tế bào F+. plasmid điều khiển tổng hợp enterotoxin ở E. Ngoài yếu tố giới tính F còn có các plasmid tiếp hợp khác như plasmid điều khiển sự đề kháng của vi khuẩn đối với một số thuốc (plasmid R). Hiện tượng này được gọi là sự hùng hóa ("đực hóa") tế bào cái.3. hoạt hóa đồng . Các thuật ngữ "tế bào đực" và "tế bào cái" được dùng theo hệ thống định danh hiện đại từ năm 1976. Trong trường hợp đầu chỉ một số gen của plasmid F được chuyển sang và có thể tái tổ hợp vào nhiễm sắc thể tế bào nhận.

oncornavirus) và ở tất cả các virus DNA hai sợi. chẳng hạn quá trình tái tổ hợp giữa các virus động vật và người trong thí nghiệm in vitro cũng như in vivo. hoạt tính sinh sản trong phôi gà. độc tính đối với động vật. Những virus trên được gọi là dị hợp thể và khác với các virus đồng thể ở chỗ các virion thế hệ con không đồng nhất. Tái tổ hợp có thể truyền hàng loạt tính trạng: hoạt tính ngưng kết hồng cầu. trong đó một số virion mang tính trạng của một virus khởi nguyên loại này còn một số khác mang tính trạng của virus khởi nguyên loại khác. Mặc dù sự kết hợp genome trên không di truyền nhưng nó cho phép các virus sản sinh thế hệ mới. Tái tổ hợp là sự trao đổi vật chất di truyền giữa các thể virus khác biệt nhau về một số tính trạng cùng phát triển trong một tế bào.222 loạt. hoạt tính enzyme và miễn dịch. tương bổ. kích thích và cản nhiễm (hay can thiệp cảm nhiễm). Dị hợp hóa là hiện tượng khi một số thể virus có tính trạng khác nhau tái sản đồng thời trong một tế bào có thể hình thành những virion mang toàn bộ genome của một virus và một phần hoặc toàn bộ genome của virus thứ hai. trong một tế bào. Bản chất của quá trình tái tổ hợp gen virus có thể là sự trao đổi từng đoạn và trao đổi trong đoạn kết quả là thể lai mang thông tin di truyền của cả hai chủng gốc. reovirus. điều này giải thích sự xuất hiện dịch cúm ở người cũng như khả năng người mắc bệnh cúm động vật do cúm động vật có thể tiếp nhận một số tính trạng (như mang thụ thể đối với tế bào người) bảo đảm tiếp tục xâm nhập và phát triển trong tế bào người. dị hợp hóa. Kết quả là hình thành những thể lai mang một phần tính trạng của chủng gốc này và một phần tính trạng của chủng gốc khác. Có thể xảy ra. Tái tổ hợp là đặc tính chung của mọi virus nhưng việc phát hiện được thể lai là khó khăn và phụ thuộc vào nhiều điều kiện. các phần gen còn nguyên vẹn của các genome có thể trao đổi (tái tổ hợp) dẫn đến hình thành thể có đầy đủ những gen nguyên vẹn. Tương tác kiểu hình có thể là pha trộn kiểu hình. Ở virus động vật xương sống hiện tượng tái tổ hợp chỉ diễn ra khi các chủng virus gần gũi cùng cảm nhiễm một tế bào và tần suất xuất hiện phụ thuộc vào chủng loại hệ thống tế bào ký chủ. Hoạt hóa đồng loạt là quá trình thường diễn ra trong một tế bào cảm nhiễm đồng thời nhiều thể virus đã bị vô hoạt bởi bức xạ tử ngoại. tính đề kháng nhiệt và chất ức chế. chuyển vỏ và tái hoạt hóa chéo. Hiện tượng dị hợp hóa có thể quan sát trong các thí nghiệm với virus cúm và virus bệnh Newcastle. Thí nghiệm cũng đã chỉ ra rằng có thể đun nóng làm biến tính DNA virus làm mạch đôi chuyển thành mạch đơn và khi để nguội thì mạch đôi lại tự phục hồi. Tần suất lai cao diễn ra ở một số virus RNA (orthomyxovirus. tái hoạt hóa phi kiểu gen. Nếu trong dung . Do tử ngoại chỉ gây đột biến một số phần của genome virus nên.

Kết quả là hình thành những virion có tính trạng hỗn hợp của hai virus khởi nguyên. Khi tách biệt hai virus này đều không thể tái sản nhưng nếu cảm nhiễm hỗn hợp thì .223 dịch tồn tại hai loại virus thì có thể hình thành những thể dị hợp mang genome hỗn hợp của hai virus khởi đầu. Tương bổ là hiện tượng khi nhiễm đồng thời hai virus có genome tổn thương do biến dị ở hai miền gen khác nhau và đều mất khả năng tái sản. Virus đậu thỏ cũng đã được chứng minh có hoạt hóa chéo. Dạng tái tổ hợp thường dễ hình thành hơn trong trường hợp hoạt hóa chéo so với việc kết hợp hai virus nguyên vẹn. Pha trộn kiểu hình là hiện tượng hai virus khác nhau khi tái sản đồng thời trong một tế bào làm xuất hiện những virion mang genome của chỉ một virus khởi nguyên nhưng lại mang kháng nguyên của cả hai virus khởi nguyên đó. Chẳng hạn. và các "arbovirus" typ A). Hoạt hóa chéo thường diễn ra trong tế bào nếu tiêm virus vô hoạt (bằng nhiệt hoặc tia tử ngoại) vào hệ thống mẫn cảm khoảng 24 .48 giờ trước khi tiêm virus có hoạt tính. virus bệnh Newcastle. Hiện tượng pha trộn kiểu hình thường gặp ở phage T2 và T4 và cũng như ở một số virus người và động vật (như virus cúm. Trong trường hợp này không diễn ra quá trình tương tác kiểu gen mà các virion chỉ thừa hưởng chung các protein cấu trúc đã được tổng hợp đồng thời trong một tế bào. Hoạt hóa chéo là hiện tượng genome tương tự tái tổ hợp nhưng một trong hai virus tham gia ở dạng nguyên vẹn còn virus kia đã bị vô hoạt do hư tổn một phần genome (đun nóng hoặc chiếu tử ngoại). Trong trường hợp này phần genome của virus bị vô hoạt có thể tham gia tái tổ hợp với genome virus bình thường. thì chúng cùng sử dụng chung sản phẩm (các protein) của hai genome mà cùng có khả năng thực hiện chu trình tái sản. bại liệt. Tái hoạt hóa phi kiểu gen là hiện tượng một virus bị vô hoạt protein cấu trúc nhưng có thể phát triển nhờ hoạt tính của protein-enzyme có nguồn gốc từ virus khác. Hiện tượng này có thể gặp khi nuôi cấy vào tế bào đồng thời adenovirus và virus SV-40 của khỉ. ví dụ nhờ enzyme "cởi vỏ" của virus đậu. gen khuyết tổn do biến dị ở một virus có thể là protein dịch sớm (RNApolymerase) còn virus khác khuyết tổn ở gen protein cấu trúc. Hiện tượng tái hoạt hóa phi kiểu gen có thể diễn ra nhờ một virus đậu nguyên vẹn nhưng cũng có thể nhờ một virus đậu genome khuyết tổn. Có đến 70% genome virus cúm gia cầm vô hoạt A1 được hoạt hóa nhờ virus cúm A2. Chuyển vỏ (transcapsidation) là hiện tượng genome của một virus được ấn nhập vào vỏ của virus khác có khả năng bảo tồn ở trạng thái ổn định trong tế bào mẫn cảm với virus khởi nguồn.

cản nhiễm dị loại. Phụ thuộc vào chủng loại virus bị cản nhiễm mà chia thành ba loại cản nhiễm: tự cản nhiễm. Virus bạch cầu gà trong trường hợp này gọi là virus trợ giúp. can nhiễm . hợp chất này đã được sản xuất bằng công nghệ di truyền và áp dụng trong điều trị bệnh nhiễm virus ở người. hay adenosatelite). Kỹ thuật di truyền Kỹ thuật di truyền bắt đầu như một khoa học từ 7/1972 khi nhóm nghiên cứu của Paul Berg (Viện hàn lâm khoa học quốc gia Mỹ) hoàn thành việc chế tạo bộ gen lai giữa virus SV40 của khỉ với phage lambda. Ngày nay. Do không có sự tái tổ hợp di truyền nên các virion thế hệ con cháu cũng có genome khuyết tổn. giúp tế bào bị nhiễm cũng như các tế bào bên cạnh trở nên đề kháng tái cảm nhiễm virus.interfering) là hiện tượng một tế bào đã bị cảm nhiễm một loại (typ) virus có khả năng đề kháng lại sự xâm nhập sau đó của virus khác. Khi trong môi trường có mặt của virus bạch cầu gà. Virus á cúm typ 3 có thể là virus trợ giúp đối với virus Newcastle trong lứa cấy tế bào thận khỉ. từ các tế bào gà biến nạp (có gen đã tái tổ hợp) virus u thịt Raus xuất hiện các virion virus u thịt Raus. Do khả năng hình thành nhanh chóng (khoảng 24 48 giờ) và tạo sự đề kháng đối với nhiều loại virus một cách nhanh chóng nên interferon được coi chú ý ứng dụng. Cản nhiễm (hay can thiệp cảm nhiễm. VI. adenovirus đối với các virus tùy thuộc adeno (hay AAV.224 quá trình tái sản của cả hai đều xảy ra. coli. Phân tử DNA lai chứa các thông tin di truyền của virus SV40. thông tin điều khiển quá trình tự sao của DNA phage lambda cũng như toàn bộ chức năng của operon galactosidase của vi khuẩn E. Hiện tượng này liên quan đến sự hình thành protein đặc biệt gọi là interferon do genome tế bào động vật chi phối. Ví dụ virus u thịt Raus không thể cảm ứng tổng hợp protein cấu trúc. virus Sendai đối với virus bại liệt trong lứa cấy tế bào sơ phôi chuột vàng. Lần đầu tiên kết nối hai virus khác nhau hoàn toàn về mặt di truyền thành một chỉnh thể và được nhân lên dưới dạng plasmid trong tế bào vi khuẩn. Tác dụng của các vaccine virus nhược độc (attenuated vaccine) trong giai đoạn sớm là do hiện tượng cản nhiễm. Ban đầu khái niệm kỹ thuật di truyền chỉ các kỹ thuật tái tổ hợp DNA nhưng . cản nhiễm đồng loại. Kích thích là hiện tượng một virus nguyên vẹn khi cảm nhiễm đồng thời với virus khuyết tổn thì cung cấp một hoặc một số nguyên liệu cần thiết cho virus khuyết tổn thực hiện chu trình tái sản. mà sử dụng protein của virus bạch cầu gà trong thành phần áo ngoài. Điểm đặc biệt của interferon là chỉ bảo vệ được các tế bào cùng loài với tế bào đã tổng hợp nên nó (tính đặc hiệu ký chủ) và chống lại sự xâm nhập của các loại virus khác nhau (tính không đặc hiệu vật ký sinh).

hoặc PCR. mất khả năng tổng hợp beta-galactosidase). Nuôi cấy tạo dòng những cá thể vật .. Nhờ được cắt cùng một loại enzyme hạn chế (thường là enzyme đầu dính) các đoạn DNA mục tiêu và các DNA vector (chỉ cắt tại một điểm của mạch vòng xoắn kép) có thể ngẫu nhiên hình thành mối liên kết hyđrô tương bù ở các đầu dính. Nguyên tắc chung của công nghệ DNA tái tổ hợp gồm một số bước.Southern blot analysis. Hơn nữa.. hóa chất gây chết đối với tế bào động vật và thực vật). Bước tiếp theo là chọn những dòng biểu hiện tính trạng của gen mục tiêu hoặc những dòng mang gen mục tiêu (nhờ lai phân tử: các phương pháp thử nghiệm miễn dịch như ELISA. Northern blot analysis). nên chỉ những vật mang sống sót và không biểu hiện tính trạng đó được chọn nuôi cấy tạo dòng. microarray. kỹ thuật lai phân tử (Northern hybridization. Western blot analysis hoặc với các dò DNA hoặc RNA . những plasmid đã tái tổ hợp mất khả năng tạo tính trạng đó ở vật mang (chẳng hạn. DNA vector có thể là của một plasmid hoặc phage (nếu vật mang. Trong điều kiện đó. Trước hết DNA genome mục tiêu và DNA chuyển tải (vector) được tinh chế và cắt thành đoạn nhờ một loại enzyme hạn chế. Trong nhiều trường hợp (đặc biệt đối với sinh vật bậc cao) DNA genome mục tiêu được thay thế bằng DNA tương bù (cDNA) của RNA thông tin thành thục. Southern hybridization. rồi được enzyme ligase hàn gắn các đầu khấc. các vector tự tái tổ hợp với nhau và các mảnh DNA không tái tổ hợp hoặc tự tái tổ hợp). dòng hóa và bước tiếp sau đó là sau đó nuôi cấy vật mang. Kết quả là trong hỗn hợp hình thành thể tái tổ hợp vector với một hoặc một số mảnh DNA của genome mục tiêu (bên cạnh các sản phẩm không mong muốn như vector tự khép vòng. Bước thứ hai là chuyển vận DNA tái tổ hợp vào cơ thể vật mang.. nếu vật mang dòng hóa gen mục tiêu trong tế bào động vật). sau đó các vật mang được nuôi cấy trong môi trường dinh dưỡng có chứa yếu tố chọn lọc (chất kháng sinh đối với vi khuẩn. sản xuất (chiết xuất và tinh chế) sản phẩm mục tiêu. do plasmid bị enzyme hạn chế cắt tháo vòng tại một vị trí xác định trong một gen điều khiển một thuộc tính nhận biết khác.225 dần dần nội dung của thuật ngữ này mở rộng tới các kỹ thuật liên quan như PCR với các biến tướng PCR. chỉ các tế bào vật mang mang vector sống sót. Tất cả các sản phẩm trong hỗn hợp đều được trộn với các vật mang tạo dòng. DNA này được tổng hợp từ khuôn RNA thông tin nhờ sự xúc tác của enzyme sao chép ngược (reverse transcriptase. dòng hóa gen là vi khuẩn). RNA-dependent DNA-polymerase). là virus (retrovirus hoặc adenovirus không gây bệnh. plasmid Ti của vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens (nếu vật mang dòng hóa gen là tế bào thực vật).

hoặc các động vật tái tổ hợp sản sinh những sản phẩm hữu ích như thuốc chữa bệnh. Chưa thể chứng minh được tính vô hại của GMO thực phẩm đối với con người. hỗn hợp gồm DNA. sau đó từ E. sau đó khi máy hạ nhiệt . bông. mang gen chống sâu bệnh hoặc kháng thuốc chống cỏ dại hoặc có chất lượng sản phẩm nâng cao như khoai tây chứa nhiều protein. trong đường ruột) người và động vật.. Tương tự. ảnh hưởng xấu đến môi trường sinh thái... coli tái tổ hợp gen này của Thermus aquaticus . cho uống). Trong máy luân nhiệt... cũng như chưa thể phủ nhận khả năng lan truyền gen kháng thuốc (của plasmid vector) trong tập đoàn các vi khuẩn tự nhiên của cơ thể (ví dụ. DNA-polymerase. Hiện thực hóa nguyên lý trên để áp dụng trong ống nghiệm được xúc tiến nhờ những tiến bộ trong kỹ thuật như: tổng hợp được các mạch oligonucleotide có trình tự đặc hiệu biết trước từ các deoxyribonucleoside triphosphate... hạt có dầu. Cho đến nay. PCR (phản ứng chuỗi trùng hợp: polymerase chain reaction) là một kỹ thuật riêng biệt được sáng tạo để khuyếch đại DNA in vitro dựa trên cơ sở phản ứng tự sao của DNA nhờ DNA-polymerase từ các deoxyribonucleoside triphosphate luôn cần mồi (primer) là đoạn oligonucleotide (trong tế bào là đoạn RNA do primase xúc tác tổng hợp) gắn kết sẵn một cách tương bù trên khuôn sợi đơn của phân tử DNA..rTaq polymerase). thành công trong việc chế tạo máy chu kỳ nhiệt hay máy luân nhiệt (thermocycler) và tinh chế được enzyme DNA-polymerase chịu nhiệt (từ vi khuẩn ưu nóng Thermus aquaticus . nguy cơ những sinh vật GMO lấn át sinh vật tự nhiên là rất cao và có thể dẫn đến sự tuyệt diệt của nhiều loài sinh vật hiện có. tạo ra được những vaccine tái tổ hợp có thể dễ sản xuất (dễ nuôi cấy trên lứa cấy tế bào hay phôi gà) và dễ sử dụng (cho ăn.. kỹ thuật di truyền đã đạt được những bước tiến vượt bậc. kỹ thuật di truyền cũng đặt loài người vào tình trạng có thể phải đương đầu với những đe dọa mới liên quan đến sức khỏe của người và sinh thái ... dNTP. cặp oligonucleotide mồi và dung dịch đệm được gia nhiệt (94 . lúa giàu vitamin A và sắt..Taq polymerase.môi trường. Chăm sóc những loại cây trồng đề kháng thuốc diệt cỏ và thuốc diệt sâu bệnh có thể dẫn đến lạm dụng nông dược và nếu thoái hóa trở thành cỏ dại thì thực vật kháng thuốc và kháng sâu bệnh sẽ là một nguy cơ mới đối với nông nghiệp.226 mang thỏa mãn các bước thử nghiệm trên giúp tạo ra dòng thuần các sinh vật mang có thể sản xuất các sản phẩm mục tiêu. thậm chí tạo ra những đàn lợn mang kháng nguyên người hy vọng có thể là vật cho tim hoặc nội quan khác để điều trị những trường hợp người bệnh cần phải thay thế nội quan. khi đó các DNA mạch đôi biến tính thành chuỗi đơn. Tuy nhiên.GMO) như giống ngũ cốc. Nhiều sản phẩm có ích đã được sản xuất từ các sinh vật tái tổ hợp hay sinh vật biến đổi gen (genetically modified organisms . đậu tương.96 °C).

Ngoài kỹ thuật PCR thông thường (conventional PCR) nêu trên còn có PCR thực thời (real-time PCR) được phát triển trên cơ sở phản ứng PCR thông thường với cặp mồi đặc hiệu và một dò chỉ hấp thụ và phát xạ (bức xạ bước sóng đặc hiệu) khi gắn với DNA đoạn giữa hai mồi tổ hợp với thiết bị đặc biệt trắc định cường độ phát xạ của dò ngay trong quá trình phản ứng. Để tăng hiệu quả của PCR. mở rộng phạm vi sử dụng của nó hoặc áp dụng để nhân DNA từ khuôn RNA.. panhandle PCR. PCR còn được sử dụng trong việc xác định trình tự nucleotide (sequencing) của DNA. hạ nhiệt gây gắn mồi (annealling) rồi nâng nhiệt gây kéo dài (elongation) ta có thể tổng hợp được lượng lớn sợi đơn mới. inverse PCR. Do hai mồi trong hỗn hợp được thiết kế có thể gắn đặc hiệu với hai sợi đơn khác nhau sao cho mạch mới tổng hợp của mồi này cung cấp chỗ gắn cho mồi kia nên sau một số khá lớn (25 40) chu kỳ tổng hợp đoạn DNA nằm giữa hai mồi được tổng hợp với số lượng lớn áp đảo. RAGE. Do hai mồi được thiết kế một cách đặc hiệu với trình tự DNA biết trước hay do mỗi sinh vật có trình tự DNA đặc hiệu nên sản phẩm được PCR tổng hợp có phân tử lượng đặc hiệu (do tính đặc hiệu của trình tự nucleotide). Nếu cho sản phẩm phản ứng di động trong gel nhờ dòng điện một chiều bên cạnh các đoạn DNA có phân tử lượng (DNA molecular weight marker) biết trước và nhuộm ethidium bromide rồi soi dưới tia tử ngoại. Khi đó.. Taq DNA-polymerase.60 °C thì các oligonucleotide mồi sẽ gắn vào các vị trí đặc hiệu (có trình tự nucleotide tương bù) và cung cấp đầu 3'-OH cho DNA polimerase gắn vào. khi gia nhiệt lên khoảng 60 .227 xuống khoảng 40 . một mồi duy nhất bắt cặp với đầu 5' của đoạn DNA cần đọc trình tự. ta có thể nhận ra các băng DNA và xác định được phân tử lượng của sản phẩm (cũng như sự thuần khiết của sản phẩm)..) trong mỗi lọ trong bốn lọ phản ứng (hoặc bốn loại đánh dấu khác nhau trong một lọ phản ứng chung). Nguyên tắc chung là khuyếch đại một đoạn DNA nhờ một mồi với hỗn hợp gồm DNA khuôn. LA PCR. có thể sử dụng trực tiếp sản phẩm khuếch đại nhờ PCR hoặc các đoạn DNA đã được dòng hóa. hot start PCR.).75 °C polymerase hoạt động gắn kết các dNTP tương bù kéo dài sợi mới theo hướng 5'→3' làm cho sợi đơn trở thành sợi đôi bắt đầu từ điểm gắn mồi. Phản ứng xảy nối dài bắt đầu từ mồi và kết thúc khi gắn kết với một ddNTP đánh dấu (do ddNTP thiếu gốc 3'- .. Nhờ đó có thể dùng phản ứng này để nhận biết sự hiện diện của một đoạn gen cho trước hoặc để chẩn đoán bệnh (đồng định: nhận biết sự hiện diện của mầm bệnh) hoặc nhận diện (đồng định) cá thể. các dNTP cùng với một trong bốn loại ddNTP (dideoxyribonucleotide) đã được đánh dấu huỳnh quang (hoặc phóng xạ... Tiếp tục các chu kỳ gia nhiệt gây biến tính (denaturation). hàng loạt biến tướng của kỹ thuật này được thiết lập (nested PCR.

gồm lai Southern (phân tích DNA) hoặc Northern (phân tích RNA) và các kỹ thuật miễn dịch học như Western blot analysis và ELISA. Kết quả là ta có các băng (band) phân bố liên tiếp (lần lượt. 5. có thêm formamide) ta có hỗn hợp chứa các đoạn DNA sợi đơn dài ngắn khác nhau. 8. Western blot analysis là phương pháp lai kháng thể gắn kết với một enzyme có khả năng chuyển màu cơ chất thích hợp (đánh dấu bằng peroxidase hoặc phosphotase kiềm) với sản phẩm đã cố định trên màng. 3. Kết quả là nếu phát hiện được yếu tố đánh dấu (nhờ kỹ thuật chuyển màu cơ chất enzyme) thì chứng tỏ trong sản phẩm có kháng nguyên hay protein đặc hiệu. Sau khi rửa kỹ màng giá thể. trong khi ELISA là phương pháp lai kháng thể đánh dấu với sản phẩm đã cố định trên bề mặt lỗ khay. 2. Lai phân tử (hybridization) có thể giúp nhận biết sự hiện diện của một phân tử đặc hiệu nào đó. 7. Khi điện di (trong polyacrylamide gel bão hòa urea) trong bốn làn (lane) cạnh nhau (với trường hợp đánh dấu cùng loại) hoặc trong một làn (với trường hợp đánh dấu khác loại) các đoạn dài ngắn khác nhau sẽ di động với tốc độ khác nhau. 9. 6. Do việc gắn kết với các phân tử ddNTP là tương bù đặc hiệu và ngẫu nhiên giữa một ddNTP với dNTP cùng loại nên sau khi biến tính kết quả phản ứng (bằng nhiệt. nếu phát hiện được dò (nhờ kỹ thuật phóng xạ tự ký) trên màng chứng tỏ trong sản phẩm có chứa trình tự nucleotide tương bù. Trình tự đọc được chính là trình tự nucleotide của đoạn DNA bắt đầu từ mồi. Nếu trong sản phẩm có kháng nguyên đặc hiệu thì kháng thể đánh dấu sẽ kết hợp đặc hiệu và không bị rửa trôi.228 OH cần thiết cho phản ứng tiếp tục). 4. Vật chất di truyền ở sinh vật nhân chuẩn. đọc từ băng di động nhanh nhất) phụ thuộc vào độ dài của mạch đơn nucleotide tức phụ thuộc vào vị trí gắn kết của một loại ddNTP. nếu có trình tự tương bù dò sẽ gắn kết một cách đặc hiệu. Một trình tự mạch đơn (DNA hoặc RNA) biết trước gọi là dò (probe) được đánh dấu (bằng chất phóng xạ) được chuẩn bị sẵn và cho tiếp xúc với sản phẩm RNA hoặc DNA sợi đơn đã cố định trên giá thể (màng nylon hoặc màng nitrocellulose). Câu hỏi ôn tập chương 10 1. sinh vật nhân sơ và virus? Sự tự sao DNA? Quá trình phiên mã? Quá trình dịch mã? Sự điều tiết phiên mã và điều tiết dịch mã? Cải biến và hạn chế? Biến dị kiểu hình? Đột biến? Biến nạp (chuyển thể) ở vi khuẩn? .

11. Các kỹ thuật lai phân tử dựa trên tính chất cơ bản gì của các yếu tố tham gia phản ứng? . những điều kiện phản ứng như thế nào? 15.229 10. 13. 14. Tải nạp ở vi khuẩn? Tiếp hợp ở vi khuẩn? Tương tác di truyền ở virus" Kỹ thuật di truyền và công nghệ DNA tái tổ hợp? PCR cần những yếu tố hóa học gì. 12.

* Dịch cơ thể như nước mắt. một số sẽ có thể trở thành VSV gây bệnh cơ hội. tiêu hoá và sinh dục.230 Chương 11 MIỄN DỊCH Miễn dịch (MD-immunity) là trạng thái bảo vệ đặc biệt của cơ thể chống lại các tác nhân gây bệnh (vi sinh vật và các độc tố của chúng. Phía ngoài.Cơ chế bảo vệ không đặc hiệu Là miễn dịch tự nhiên mang tính chất bẩm sinh.Hàng rào vật lý: Da và niêm mạc ngăn cách nội môi của cơ thể với ngoại môi xung quanh. Khi phá vỡ sự cân bằng trong khu hệ.. Sự bảo vệ cơ thể do rất nhiều các phân tử và tế bào nằm rải rác khắp cơ thể tham gia theo cơ chế bảo vệ không đặc hiệu và bảo vệ đặc hiệu. Trên mặt biểu bì chứa keratin không tan trong nước.. không bị VSV phân giải. biểu bì chủ yếu gồm tế bào chết nên virus không nhân lên được.cũng giúp rửa trôi VSV khi chúng bám trên bề mặt các mô. .. bao gồm các tuyến phòng thủ từ ngoài vào trong để ngăn chặn không cho vi sinh vật (VSV) xâm nhập vào cơ thể. nước bọt. các phân tử lạ. Chất nhầy của niêm mạc là cái bẫy bắt giữ VSV. MD không đặc hiệu được hình thành từ khi mới lọt lòng và trước khi có sự xuất hiện của kháng nguyên. hắt hơi. Ngoài ra nhiều vi khuẩn sống trong đường tiêu hoá còn tiết ra biotin. Chúng chiếm trước các vị trí mà VSV gây bệnh đã đến.) khi chúng xâm nhập vào cơ thể. cạnh tranh thức ăn và tiết ra chất hoá học tiêu diệt VSV gây bệnh.Hàng rào VSV bao gồm các vi khuẩn bao phủ bề mặt hoặc khu trú bên trong cơ thể. y hệt như ta tắm rửa để làm trôi bụi bặm. có số lượng gấp 9 lần tổng số tế bào của cơ thể. MD đặc hiệu bao gồm MD thể dịch do hình thành kháng thể trong thể dịch của cơ thể và MD tế bào (tạo Protein độc tiêu diệt các tế bào mang kháng nguyên lạ) I. .. tạo nên khu hệ VSV bình thường. do đó không cho VSV thấm qua. nôn cũng giúp ngăn chặn VSV xâm nhập vào cơ thể. nước tiểu. riboflavin và các vitamin khác cung cấp cho cơ thể. Niêm mạc bao phủ bề mặt trong cơ thể như đường hô hấp. hệ thống nhu mao chuyển động hất VSV ra bên ngoài qua đường mũi hoặc miệng. phản xạ ho. . Đây là một khu hệ VSV phức tạp. Lông mũi.

..v. * Lysozym là enzyme có trong nước mắt. nước mũi. Bổ thể (Complement) là glycoprotein có khả năng làm tan tế bào và tăng cường hiện tượng thực bào. Bạch cầu này có khả năng gây độc các ấu trùng giun.. trong huyết thanh làm giảm trọng lượng sắt tự do gây tình trạng thiếu sắt cần thiết cho VSV sinh trưởng. có tính hoá ứng động bắt giữ và tiêu diệt các vật lạ.. nhất là virus.. * pH acid ức chế sự sinh trưởng của VSV. Bạch cầu ưa acid chứa các hạt bắt màu eosin. chứa enzyme phân giải histamin và heparin. heparin. .v. do đó ngăn cản được nhiễm trùng. trong dịch lympho đều chứa các nhân tố ức chế hoặc tiêu diệt VSV gây bệnh. Ngoài vai trò bảo vệ. nước bọt.231 . Vi khuẩn lactic lên men glycogen tạo acid lactic trong âm đạo.. Inteferon (IFN) là glycoprotein do các tế bào mô đã nhiễm virus hoặc vi khuẩn (IFN-α và IFN-β) hoặc do các tế bào lympho T sinh ra (IFN-γ). mồ hôi. do đó được coi là một loại chất kháng sinh. do vậy đóng vai trò quan trọng trong chống nhiễm trùng. Protein liên kết với sắt như lactoferrin có trong tinh dịch. nước mũi.Hàng rào hoá học: trong dịch tiết của các mô trong máu. kể cả VSV và các mảnh tế bào phân huỷ. Bạch cầu ưa kiềm chứa các hạt bắt màu xanh methylen. dịch nhầy ruột. có khả năng diệt vi khuẩn Gram dương nhờ cơ chế phân giải thành tế bào.. mật.Hiện tượng thực bào: Các bạch cầu tham gia vào cơ chế bảo vệ không đặc hiệu bao gồm: Bạch cầu trung tính chứa các hạt không bắt màu thuốc nhuộm. dịch âm đạo. IFN còn làm nhiệm vụ điều hoà mạng lưới bảo vệ chống nhiễm trùng và sự nhân lên của các tế bào ung thư. nước mắt. do vậy điều hoà hoạt động của bạch cầu kiềm. tạo không bào .v. chứa các hoạt chất nhu histamin. Ngoài ra VSV còn tiết ra bacterioxin là chất diệt khuẩn mạnh. Sản phẩm lên men của các vi khuẩn thường trú trong đường tiêu hoá là acid lactic và axetic.v. Dịch vị do tuyến trong dạ dày tiết ra chứa acid clohydric có pH 1-2. serotonin. dáy tai. Đại thực bào đóng vai trò quan trọng trong chống nhiễm trùng. IFN ức chế sự nhân lên của virus trong tế bào bằng cách hình thành protein cảm ứng ngăn cản quá trình dịch mã và phân huỷ RNA thông tin của virus. VSV phân giải lipid thành acid béo làm tăng độ acid của da. Đại thực bào thâu tóm VSV nhờ giả túc. transferrin có trong gian bao các mô. sữa mẹ. sữa..

Tính lạ: Cơ thể không đáp ứng bảo vệ với kháng nguyên bản thân..Chất sinh miễn dịch và kháng nguyên 1. trong khi hapten có trọng lượng phân tử thấp nhưng gắn với protein thì lại trở thành chất gây đáp ứng miễn dịch. còn kháng nguyên (KN-antigen) là những chất có khả năng liên kết với kháng thể hoặc thụ thể đặc hiệu của tế bào limpho T (TCR). . ribonuclease. photpholipase. khả năng sinh miễn dịch yếu hoặc không có vì khó bị đại thực bào bắt giữ và xử lý. khả năng gây đáp ứng miễn dịch càng cao. tạo acid lactic làm giảm pH. Ví dụ: Hapten là kháng nguyên không trọn vẹn.v. bạch cầu trung tính. đau. Chất sinh miễn dịch (immunogen) là những chất khi đưa vào cơ thể ở điều kiện thích hợp có khả năng gây một đáp ứng miễn dịch (ĐUMD). polisaccharid không gây hoặc gây đáp ứng miễn dịch yếu vì cấu trúc đơn giản do lặp đi lặp lại.Sự thay đổi kiểu hô hấp.Cơ chế thực bào không phụ thuộc oxy bao gồm hoạt động của các enzyme phân giải của lysosom như lyzozim. Viêm không đặc hiệu có tác dụng khu trú VSV vào một nơi không cho chúng lan rộng thêm. tăng dòng máu. . do đó góp phần tiêu diệt VSV.Trọng lượng phân tử đủ lớn: Kháng nguyên thường có trọng lượng phân tử trên 10. do vậy chất càng lạ với cơ thể. làm tăng phản ứng enzyme phân huỷ VSV. .Các enzyme phụ thuộc oxy chuyển hoá oxy phân tử thành peoxit gây độc cho VSV. Các không bào dung hợp với lysosom tạo phagolysosom. Tất cả các chất sinh miễn dịch đều là kháng nguyên. làm tăng hoạt động của IFN và làm giảm nồng độ sắt tự do trong máu.v. Các VSV trong phagolysosom bị tiêu diệt do nhiều nguyên nhân. pH thấp làm tăng hoạt tính nhiều enzyme trong lysosom. sưng. nóng là do giãn mạch. Sốt là cơ chế bảo vệ tự nhiên. . . .000 dalton. có thể gắn với kháng thể những không kích thích tạo kháng thể. đại thực bào vào ổ viêm. Nếu thấp hơn. 4 tính chất của viêm là: đỏ. Ba điều kiện cần của một chất sinh miễn dịch là: . II. nhưng không phải tất cả kháng nguyên đều là chất sinh miễn dịch..232 (phagosom). làm thoát bradykinin và prostaglandin.Cấu trúc phân tử phức tạp: nhiều chất có trọng lượng phân tử lớn như polylisin. deoxyribonuclease.

233 2. Các cơ quan lympho ngoại vi Lách là cơ quan lympho ngoại vi lớn nhất. Trong lách có vùng chứa tế bào T và vùng chứa tế bào B. Các gen kiểm tra sự hình thành các thụ thể này xuất hiện do tái tổ hợp DNAcủa tế bào T non khi còn ở tuyến ức. Phần tương ứng với quyết định kháng nguyên nằm trên mỗi kháng thể gọi là vị trí kết hợp kháng nguyên hay paratop còn phần tương ứng nằm trên mặt tế bào lympho là thụ thể. Túi Fabricus là cơ quan lympho trung tâm chỉ có ở gia cầm. Sự liên kết giữa epitop với paratop mang tính đặc hiệu cao. III. Cơ quan lympho trung tâm gồm tuyến ức và túi fabricius Các tế bào gốc hay còn gọi là tế bào nguồn đi từ tuỷ xương vào tuyến ức. các cơ quan lympho: là nơi huấn luyện và tàng trữ các tế bào lympho. nằm gần hậu môn và là nơi biệt hoá tế bào B. là nơi bẫy kháng nguyên vào bằng đường tĩnh mạch và là cơ quan chính tạo kháng thể. Phần lớn các tế bào T có thụ thể nhận diện được kháng nguyên bản thân sẽ bị loại trừ và chết. như cơ quan lympho của hệ tiêu hoá. 1. Các tế bào B chín rời túi đến cơ quan lympho ngoại vi. Khi tiếp xúc với kháng nguyên sẽ được kích thích. mới liên kết với kháng thể hoặc tế bào lympho. Các cơ quan và tế bào tham gia vào hệ thống miễn dịch Nhiều cơ quan và tế bào nằm rải rác khắp cơ thể hợp tác với nhau để nhận diện và phản ứng với kháng nguyên theo nhiều cách dẫn đến đáp ứng miễn dịch cuối cùng.1.2. 1. tương ứng như giữa enzyme và cơ chất hay giữa khoá với chìa. bao gồm cơ quan lympho trung tâm và cơ quan lympho ngoại vi. sau đó các tế bào này theo máu rời tuyến ức để vào cơ quan lympho ngoại vi. Các tế bào còn lại di cư vào phần tuỷ của tuyến ức để tiếp tục biệt hoá tạo các dòng tế bào T phân lớp. Trung tâm mầm . biệt hoá để trở thành tế bào plasma (tương bào) sản xuất kháng thể. 1. ví dụ thể tế bào T (TCR Tcellreceptor). Vì thế tế bào plasma được coi là nhà máy sản xuất kháng thể. Động vật có vú không có túi Fabricus nên sự biệt hoá tế bào B xẩy ra ngay trong tuỷ xương và các cơ quan tương đương. tiền tế bào T được phân chia nhiều lần và biệt hoá thành tế bào T chín với các thụ thể khác nhau trên bề mặt. Tính đặc hiệu của kháng nguyên (KN) Không phải toàn bộ kháng nguyên tham gia vào kích thích hệ thống miễn dịch mà chỉ có một phần nhất định của kháng nguyên gọi là quyết định kháng nguyên hay epitop. Tại phần vỏ của tuyến ức.

234

nằm trong nang lympho ở vùng tế bào B. Trong trung tâm mầm chứa đầy tế bào B và tế bào plasma, một số đại thực bào và tế bào tua. Hạch lympho nằm rải rác khắp cơ thể và hoạt động như một hệ thống lọc. Kháng nguyên di chuyển chậm theo các mạch hẹp và gấp khúc để tăng sự tiếp xúc với đại thực bào và tế bào lympho. Phần vỏ gồm vùng vỏ nông có nhiều nang chứa tế bào B. Khi có kháng nguyên kích thích, nang sẽ nới rộng ra tạo trung tâm mầm, chứa chủ yếu tế bào B chuẩn bị phân chia. Vùng vỏ sâu chứa chủ yếu là tế bào T và một số đại thực bào. Phần tủy có nhiều xoang chứa dịch lympho. Các tế bào plasma đi từ vùng vỏ sang vùng tuỷ. Khi có kháng nguyên xâm nhập, đại thực bào bắt giữ, xử lý, hợp tác với các tế bào B và T để sản xuất kháng thể. 2. Các tế bào tham gia và đáp ứng miễn dịch: từ nguồn gốc chung là tế bào tuỷ xương sẽ được biệt hoá để tạo thành các dòng tế bào khác nhau: (Hình 11.1)

235

- Dòng tạo máu biệt hoá thành các tế bào dòng tuỷ bao gồm tế bào mono (tiền thân của đại thực bào) và các tế bào đa nhân (bạch cầu trung tính, bạch cầu kiềm và bạch cầu acid). Dòng hồng cầu tạo tế bào hồng cầu và dòng tế bào khổng lồ tạo tiểu cầu. - Dòng lympho đi vào các cơ quan trung tâm. Nếu vào túi Fabricius, sẽ biệt hoá thành tế bào B (từ chữ Bursa Fabricius) khi được kháng nguyên kích thích tế bào B sẽ biệt hoá thành tế bào plasma sản xuất kháng thể và tế bào B nhớ để đáp ứng với kháng nguyên vào lần hai. Nếu tế bào nguồn đi vào tuyến ức sẽ được biệt hoá thành các tế bào lympho T (từ chữ Thymus-tuyến ức). Các tế bào T được phân biệt bởi các thụ thể bề mặt thành các dòng tế bào T4 và T8. Dòng tế bào T4 bao gồm: - Lympho T hỗ trợ (TH) có nhiệm vụ kích thích tế bào B biệt hoá thành tế bào plasma sản xuất kháng thể. - Lympho T cảm ứng (Ti) tiết ra intơlơkin-2 kích thích sự biệt hoá và hoạt động của các tế bào T khác. - Lympho T gây quá mẫm muộn (TDTH) tiết lymphokin hoạt hoá đại thực bào và các bạch cầu khác gây quá mẫm muộn. - Lympho T điều hoà ngược (TFR) có tác dụng hoạt hoá lympho T ức chế. Dòng tế bào T8 bao gồm: - Lympho T độc (TC) tấn công trực tiếp các tế bào có kháng nguyên lạ (tế bào ung thư, tế bào nhiễm virus). - Lympho T ức chế (TS) điều hoà đáp ứng miễn dịch bằng cách ức chế sự hoạt động của các loại lympho bào khác. Đại thực bào đóng vai trò như là tế bào khơi mào cho một đáp ứng miễn dịch. Trước hết chúng làm nhiệm vụ chế biến kháng nguyên bằng cách bắt giữ, nuốt và tiết enzyme phân giải để bộc lộ quyết định kháng nguyên, sau đó đẩy kháng nguyên ra bề mặt để tiếp cận với tế bào B và tế bào T. Nhờ động tác này mà đại thực bào được gọi là tế bào trình diện kháng nguyên (APC-antigen presenting cell). Đại thực bào còn chứa các thụ thể dành cho phần Fc của IgG và bổ thể C3, do đó làm tăng khả năng thực bào.

236

IV. Kháng thể
Kháng thể (KT-antibody) là các gamma globulin Ig) có trong huyết thanh của động vật có khả năng liên kết đặc hiệu với kháng nguyên đã kích thích sinh ra nó. Ở đây ta chỉ xét các kháng thể miễn dịch (KTMD) 1. Cấu trúc của kháng thể miễn dịch: Tất cả các kháng thể đều có cấu trúc giống nhau gồm 4 chuỗi polypeptit. Hai chuỗi nhẹ ký là L và 2 chuỗi nặng ký hiệu là H, gắn với nhau bởi cầu disulfua (S-S).

Hình 11.2: Cấu tạo của kháng thể

237

Các amino acid nằm xa nhau trên cùng một chuỗi có thể gắn với nhau nhờ cầu nối S-S để tạo vùng gấp (domain) Chuỗi nhẹ: Trật tự amino acid của hai chuỗi nhẹ giống hệt nhau và được chia làm hai vùng. Vùng có trật tự amino acid thay đổi gọi là vùng biến đổi (ký hiệu VL), nằm phía đầu amin (-NH2) của phân tử. Vùng có trật tự amino acid không thay đổi gọi là vùng cố định (ký hiệu CL), nằm ở phía đầu cacboxyl (-COOH). Trật tự amino acid vùng cố định của chuỗi nhẹ luôn giống nhau ở tất cả các lớp kháng thể, hoặc theo trật tự λ (lamda) hoặc theo trật κ (kappa). Ngược lại trật tự ở vùng biến đổi luôn khác nhau, kể cả ở các kháng thể do cùng một tế bào sinh ra. Chuỗi nặng: Mỗi chuỗi nặng có 4 vùng amino acid: một vùng biến đổi và 3 vùng cố định. Vùng biến đổi (ký hiệu là VH) nằm phía đầu amin đối xứng với vùng biến đổi của chuỗi nhẹ, tạo thành vị trí kết hợp kháng nguyên (paratop). Vùng cố định nằm phía đầu cacboxyl, chai làm 3 vùng nhỏ (ký hiệu là CH1,CH2,CH3). Giữa vùng CH1 và CH2 là vùng khớp nối, có tác dụng như bản lề làm cho phân tử có hình chữ Y và có thể điều chỉnh cho hai paratop gắn với hai epitop của kháng nguyên. Dưới tác dụng của papain (protease ở nhựa quả đu đủ), phân tử kháng thể bị phân giải tại vùng bản lề thành 3 mảnh: hai mảnh nhỏ chứa toàn bộ chuỗi nhẹ và một nửa chuỗi nặng có đầu amin. Đây là nơi gắn với kháng nguyên và được gọi là mảnh Fab (Fragment of antigen binding). Mảnh còn lại của chuỗi nặng phía đầu cacboxyl có thể kết tinh được gọi là mảnh Fc (Fragment crystalizable). Mảnh này có thể liên kết với thụ thể đặc hiệu nằm trên đại thực bào, tế bào B và bổ thể. Dưới tác dụng của pepsin thu được hai mảnh: mảnh lớn gần như một kháng thể trọn vẹn với hai paratop và mảnh nhỏ Fc. 2. Các lớp kháng thể Có 5 lớp kháng thể mang tên chuỗi nặng là IgG, IgM, IgA, IgD và IgE. - IgG chiếm 80% tổng Ig trong huyết thanh người bình thường, cấu tạo gồm hai chuỗi nhẹ κ (kappa) hoặc λ (lamda) và hai chuỗi nặng γ (gama). Ở người Việt Nam nồng độ IgG trong máu là 1400 mg/100ml. IgG là kháng thể duy nhất được truyền từ mẹ sang thai qua nhau thai. IgG giữ vai trò chính bảo vệ cơ thể chống tác nhân gây bệnh, đảm nhiệm các chức năng opsonin hoá (giúp đại thực bào bắt giữ kháng snguyên), hoạt hoá bổ thể, gây độc qua trung gian tế bào phụ thuộc kháng thể (giúp tế bào K diệt tế bào đích) trung hoà ngoại độc tố (độc tố uốn ván, độc tố do

238

Clostridium botulinum gây ngộ độc thức ăn, nọc rắn, nọc côn trùng... gây ngưng kết vi khuẩn và trung hoà virus. IgM Chiếm từ 5-10% trong huyết thanh của người bình thường. Có cấu tạo gồm hai chuỗi nhẹ κ (kappa) hoặc λ (lamda) và hai chuỗi nặng μ (muy). Năm globulin chụm lại với nhau thành phân tử lớn hình sao nhờ cầu nối disulfua và chuỗi protein J do vậy có tới 10 paratop. IgM xuất hiện sớm nhất thực hiện các chức năng như hoạt hoá bổ thể, ngưng kết hồng cầu cùng loài trong trường hợp nhóm máu AB, ngưng kết vi khuẩn. - IgA có cấu tạo gồm hai chuỗi nhẹ κ (kappa) hoặc λ (lamda) và hai chuỗi nặng α (anfa). Có hai loại: IgA trong huyết thanh chủ yếu ở dạng monome và IgA tiết (SIgA), luôn có dạng dime, có trong dịch tiết của cơ thể như sữa, nước bọt, nước mắt, trong dịch nhầy đường tiêu hoá, sinh dục, hô hấp. IgA monome làm nhiệm vụ hoạt hoá bổ thể theo con đường nhánh. IgA tiết chống vi khuẩn trên bề mặt niêm mạc gây nhiễm trùng đường hô hấp, tiêu hoá, đồng thời chống kháng nguyên nhóm máu AB. - IgD có nồng độ trong máu rất thấp và cấu tạo gồm hai chuỗi nhẹ κ (kappa) hoặc λ (lamda) và hai chuỗi nặng δ (delta). Hoạt tính sinh học IgD còn chưa rõ nhưng nó có mặt trên tế bào B làm thụ thể cho kháng nguyên. - IgE có nồng độ trong huyết thanh rất thấp và có cấu tạo gồm hai chuỗi nhẹ κ (kappa) hoặc λ (lamda) và hai chuỗi nặng ε (epsilon). IgE tham gia vào quá mẫn tức thì (hay dị ứng) bằng cách gắn phần Fc với tế bào Mast (dưỡng bào) và phần Fab với kháng nguyên. Tế bào Mast được hoạt hoá sẽ giải phóng các chất hoạt mạch như histamin leukotrien, serotonin gây giãn mạch và tăng tính thấm thành mạch.

V. Thụ thể tế bào T
Tế bào T có khả năng nhận diện kháng nguyên thông qua thụ thể bề mặt, viết tắt là TCR (T-cell receptor). Sự nhận diện này mang tính đặc hiệu cao. Chẳng hạn tế bào Tc có thể phân biệt được mỗi loại virus khi chúng xâm nhập vào cơ thể. TCR có cấu tạo gần giống kháng thể, gồm hai chuỗi peptit α và β gắn với nhau bởi cầu nối disulfua. TCR cũng có hai vùng: vùng biến đổi nằm ở phía đầu amin của mỗi chuỗi tạo nên vị trí kết hợp kháng nguyên. Vùng cố định nằm phía đầu cacboxyl và cắm sâu vào màng sinh chất của tế bào T.

viết tắt là MHC (major histocompatibility complex). b) Lớp II. còn chỉ có các gen phụ mã cho MHC-2 (Hình 11. đó là kháng nguyên "của mình" hoặc cùng loại với mình. còn MHC-2 chỉ có mặt trên tế bào lympho B và đại thực bào. MHC hoạt động như là phân tử trình diện kháng nguyên vì nó tương tác đặc hiệu với cả kháng nguyên lạ lẫn TCR và đóng vai trò quan trọng trong toàn bộ đáp ứng miễn dịch. MHC-1 có trên bề mặt tất cả các tế bào có nhân ở động vật có xương sống. gọi là kháng nguyên hay phức hợp phù hợp tổ chức chính. chẳng hạn đại thực bào và tế bào B).3: Cấu trúc của protein phù hợp tổ chức chính a) Lớp I. . (Cần nhớ rằng các phân tử lớp I nằm trên bề mặt tất cả các tế bào có nhân. Có hai loại MHC: MHC-1và MHC-2. vùng gen MHC. Hình 11. Kháng nguyên phù hợp tổ chức (MHC) Thụ thể tế bào T chỉ có thể nhận diện kháng nguyên quen. Kháng nguyên ày nằm trên bè mặt tế bào bình thường và được mã hoá bởi vùng gen riêng. Ở người kháng nguyên phù hợp tổ chức (MHC) được gọi là hệ thống HLA tức kháng nguyên bạch cầu người (human leucocyte antigen). còn các phân tử lớp II chỉ có trên bề mặt các tế bào trình diện kháng nguyên đã biệt hoá.239 VI.3). Có nhiều gen mã cho MHC-1.

đồng thời thụ thể CD8 trên mặt tế bào Tc cũng gắn với MHC-1. Một số protein này bị tiêu hoá và được đưa .4: Nhận diện kháng nguyên nhờ protein MHC lớp 1 Protein lớp I được tạo thành và tích luỹ trong lưới nội chất.240 Protein MHC-1 có cấu tạo gồm hai chuỗi polypeptit. . Sau khi được kháng nguyên kích thích. cùng với các protein khác (như kháng nguyên virus và ung thư). sẽ được gắn với MHC-1 trong lưới nội chất. do vậy khi ghép cơ quan giữa hai cá thể có MHC không tương đồng thì sẽ dễ bị thải loại. Một chuỗi được mã hoá bởi gen nằm trong vùng gen MHC. ở đây tế bào Tc thông qua TCR đặc hiệu kháng nguyên sẽ liên kết với phức hệ trên.Với MHC-1: kháng nguyên sau khi được tế bào ký chủ chế biến nhờ enzyme tiêu hoá. gọi là chuỗi α và được cắm sâu vào màng sinh chất còn chuỗi kia nhỏ hơn được mã bởi gen nằm ngoài vùng gen MHC. gọi là chuỗi microglobulin β-2 (viết tắt là β2m). làm cho phức hệ mạnh hơn. Rõ ràng tế bào T phải rà soát để nhận diện kháng nguyên phù hợp với TCR của mình và TCR ấy phải tương tác cả với epitop của kháng nguyên lẫn MHC. Protein MHC-2 cũng có cấu tạo từ hai chuỗi polypeptit α và β cả hai đều cắm sâu vào màng sinh chất và nhô ra ngoài mặt tế bào.4) Hình 11. Ví dụ tế bào nhiễm virus phân giải protein virus thành các peptit rồi gắn với MHC1. Cấu trúc MHC ở các cá thể khác nhau trong cùng loài cũng khác nhau. Với mỗi loại MHC có một cơ chế trình diện riêng.(Hình 11. Chức năng của MHC: MHC làm nhiệm vụ trình diện hay nói đúng hơn là trung chuyển kháng nguyên cho tế bào T. tế bào T tăng sinh và sản ra lymphokin để làm tan tế bào nhiễm. Phức hệ MHC-1 kháng nguyên sẽ xuyên qua màng sinh chất và nằm trên mặt tế bào.

Tế bào này sản ra lymphokin kích thích tế bào B tạo kháng thể. Khi được kháng nguyên lạ kích thích.5: Sự nhận diện kháng nguyên nhờ phân tử MHC-2 MHC-II được tạo thành và tích luỹ trong lưới nội chất cùng với protein bao vây (blocking protein) Ii . Hình 11. . thâu tóm rồi chuyển vào endosom. Tại đây protein Ii và protein lạ từ bên ngopài vào sẽ bị phân giải nhờ enzymee protein lớp II lại được gắn với peptit lạ đã phân giải tạo phức hợp đưa ra mặt tế bào. Thụ thể CD4 trên mặt tế bào TH cùng gắn vào MHC-2. Phức hợp này tương tác với TCR và đồng thụ thể CD4 của tế bào TH. Các peptit lạ được giải phóng ra sẽ thế chỗ cho protein I để gắn vào MHC-2 tạo phức hệ chui qua màng sinh chất đặng trình diện cho tế bào TH thông qua TCR. Ở đây nhờ proteinase. tế bào B). sau đó tế bào Tc sản ra lymphokin là các protein diệt tế bào đích. MHC-2 được hình thành trong lưới nội chất cùng với các protein khác. Tế bào APC là đại thực bào hoặc tế bào B. MHC-2 cùng chuỗi I được chuyển vào endosom. chúng được phân giải cùng với protein I.241 vào trong lưới nội chất tạo thành peptit. Một chuỗi protein không đổi gọi là chuỗi I gắn trước với MHC-2 để cản ngăn không cho MHC-2 gắn với các peptit khác. Bất kì tế bào có nhân nào cũng có thể hoạt động như một tế bào trình diện kháng nguyên (APC) cho phân tử lớp I. Kháng nguyên lạ bị tế bào APC (đại thực bào. Sau đó lớp II đi qua thể Golgi vào endosom. Ở đây chúng tương tác với TCR trên mặt tế bào Tc đồng thụ thể CD8 trên mặt tế bào Tc cũng đồng thời gắn với MHC lớp I tạo nên phức hệ mạnh hơn. Chuỗi này ngăn không cho lớp II gắn với các peptit khác cũng được tạo thành trong lưới nội chất. Các peptit này gắn với protein lớp I rồi chuyển ra mặt tế bào. tế bào TH hoạt hoá và tiết intơlơkin để biệt hoá tế bào B thành tế bào plasma sản xuất kháng thể.

Đây là một nửa phân tử Ig. Cơ chế hình thành kháng thể miễn dịch Việc hình thành kháng thể là một quá trình rất phức tạp đòi hỏi có sự tham gia của nhiều loại tế bào: Tế bào T. Kháng nguyên vào tế bào rồi tiêu hoá trong endosom. Đại thực bào thâu tóm kháng nguyên (theo kiểu amip bắt mồi).APC là đại thực bào cũng hoạt động như vậy nhưng không có thụ thể dành cho kháng nguyên. tế bào B và tế bào trình diện kháng nguyên (APC) và phải có mối tương tác giữa các phân tử bề mặt (TCR. VII.242 Hình 11.APC là tế bào B thông qua thụ thể là kháng thể bề mặt sẽ nhận diện kháng nguyên. Khi kháng nguyên vào cơ thể sẽ theo dòng máu và bạch huyết vào hạch lympho. CH và CL là vùng cố định của chuỗi nặng và chuỗi nhẹ. kháng thể bề mặt tế bào B). Trước hết kháng nguyên phải được APC trình diện. lách và gan. APC là đại thực bào hoặc cũng có thể là tế bào B. tiêu hoá và giải phóng peptit. . Kháng nguyên sẽ được tạo thành ở lách và hạch lympho. Peptit cũng được gắn với MHC-2 để đưa ra bề mặt trình diện tế bào TH như trường hợp với APC là tế bào B. .6: Cấu tạo chi tiết vùng biến đổi của chuỗi nặng và chuỗi nhẹ. các peptit được tạo thành sẽ kết hợp với phân tử MHC-2 đi ra bề mặt tế bào để tương tác với TCR. MHC. .

243 Hình 11.7: Mô hình thuyết chọn lọc dòng .

có ái lực thấp. cơ thể chỉ còn lại các tế bào phản ứng lại kháng nguyên lạ. được gọi là kháng nguyên không phụ thuộc tuyến ức. tế bào TH hoạt hoá và tăng sinh sản ra interlơkin để kích thích tế bào B tăng sinh và biệt hoá thành tế bào plasma sản xuất kháng thể và dòng tế bào B nhớ.Kháng thể đơn dòng Trong tự nhiên. Phân tử MHC cũng tương tác với thụ thể CD4 trên bề mặt tế bào TH. do đó sẽ kích thích cơ thể tạo thành không phải một mà là một phức hợp kháng thể.244 Phức hệ MHC-2 KN sẽ được trình diện cho tế bào TH thông qua TCR. Khi ra đời. được kích thích bởi kháng nguyên. lặp đi lặp lại. Tế bào B nhờ có đời sống dài và tồn tại cả khi kháng nguyên đã mất. phân chia theo con đường gián phân tạo thành dòng. kháng nguyên có nhiều nhóm quyết định (kháng nguyên đa giá). Khi được kích thích bởi kháng nguyên vào lần 2. Năm 1975 Milstein và Kohler đã tiến hành lai bằng con đường dung hợp tế bào ung thư tuỷ và tế bào lympho B. Kháng thể được tạo thành thường thuộc lớp IgM. Các tế bào không phù hợp với kháng nguyên thì không được kích thích để tạo dòng. tế bào B đáp ứng kháng nguyên này không có trí nhớ miễn dịch 1.Thuyết chọn lọc dòng của Burnette Theo Burnette thì thông tin để hình thành kháng thể đã có sẵn trong tế bào B từ trước khi có kháng nguyên xâm nhập. Một số kháng nguyên có thể kích thích tạo thành kháng thể ở mức độ thấp mà không cần có sự tham gia của tế bào T. Muốn nhận một loại kháng thể trong phức hợp ấy thì phải tiến hành tách tinh khiết. chúng sẽ biến thành tế bào plasma để sản xuất kháng thể nhiều và nhanh chóng hơn.(Hình 11. Tế bào ung thư có khả năng phân chia nhanh nhưng không tạo thành kháng thể. hàng loạt tế bào B được tạo thành. Tế bào plasma chỉ sống được khoảng một tuần nhưng lại sản xuất một lượng lớn kháng thể.7) Thuyết chọn lọc dòng được công nhận vì nó giải thích được nhiều hiện tượng miễn dịch như dung nạp miễn dịch (không tạo kháng thể chống kháng nguyên bản thân) và trí nhớ miễn dịch. Khi có kháng nguyên xâm nhập. Mỗi loại có khả năng đáp ứng với một loại kháng nguyên có sẵn. Các kháng nguyên này thường có cấu tạo đơn giản. chúng sẽ chọn lọc tế bào nào phù hợp (có thụ thể phù hợp với quyết định kháng nguyên) để kích thích. Trong thời kỳ bào thai. loại tế bào nào chống lại kháng nguyên bản thân sẽ bị ức chế. ngược lại tế bào B có . Đó chính là đáp ứng miễn dịch lần 2 và là cơ sở của việc tiêm chủng vaccin. như polysaccharit. Bằng con đường đột biến. 2.

Điều đó vượt quá tiềm năng gen có sẵn của cơ thể. Muốn hiểu rõ cơ chế di truyền của sự tổng hợp kháng thể. xác định protein chấn đoán ung thư. gọi là vùng siêu biến. Tiến hành pha loãng liên tục trong giếng của phiến nhựa vi lượng cho đến khi mỗi giếng chỉ có một tế bào. ở chuỗi nhẹ không có vùng D. chúng ta cần nghiên cứu chi tiết hơn cấu trúc kháng thể và sự sắp xếp lại gen. Có thể đưa thuốc đến tận mục tiêu cần tiêu diệt như là tên lửa đạo đạn. Kỹ thuật kháng thể đơn dòng đã được áp dụng rộng rãi để thay thế dần một số phương pháp huyết thanh thông thường như xác định hocmon trong đánh giá chức năng nội tiết. xác định nồng độ thuốc trong máu với độ nhạy cao gấp nhiều lần so với các biện pháp thông thường. . Kỹ thuật đơn dòng cũng được dùng để xác địng doping trong thể thao. Đó chính là vị trí kết hợp với kháng nguyên. Tế bào lai có được ưu điểm của cá hai tế bào trên: vừa phân chia rất nhanh vừa có khả năng tổng hợp kháng thể. Vùng J nối giữa vùng V với vùng CL. Nếu mỗi protein cần một gen mã hoá thì cơ thể phải cần đến hàng tỷ gen để sản xuất kháng thể. Do vậy kháng thể đơn dòng là kháng thể do một dòng tế bào B sinh ra để chống lại một quyết định kháng nguyên.245 khả năng hình thành kháng thể nhưng không có khả năng phân chia vì chúng là tế bào tận cùng của quá trình biệt hoá. cuối cùng là vùng cố định được mã hoá bởi các gen C. VIII. Trong vùng biến đổi lại có những vùng nhỏ có trật tự amino acid thay đổi rất mạnh. Vùng biến đổi của chuỗi nhẹ cũng như chuỗi nặng có 3 vùng siêu biến. được mã hoá bởi các gen vùng biến đổi (gen V) nằm trên DNA của tế bào B trong quá trình chín ở tuỷ xương. Cấu trúc kháng thể: Các kháng thể khác nhau có trật tự sắp xếp các amino acid khác nhau ở vùng biến đổi. Tại vùng siêu biến thứ 3 của chuỗi nặng còn có một vùng được mã hoá bởi riêng gọi là gen D (từ chữ diversity-đa dạng) và một vùng nối giữa vùng đa dạng (D) và vùng cố định (CH) gọi là vùng nối (J) được mã hoá bởi gen J. Từ một tế bào đơn chỉ sản xuất một dòng kháng thể thuần khiết. Thuốc sẽ được phóng thích liên tục để diệt các tế bào ung thư. Cơ sở di truyền của sự tạo thành kháng thể Một vấn đề đặt ra là làm sao cho cơ thể có khả năng sản ra một lượng lớn và đa dạng các loại kháng thể đến như vậy để đáp ứng với các loại kháng nguyên muôn hình muôn vẻ.

8: Sự sắp xếp lại gen Ig trong tế bào lympho chưa chín và cơ chế hình thành gen hoạt tính (a) chuỗi năng (b). tách biệt dành cho mỗi loại chuỗi. Sự tái cấu trúc này dẫn đến tạo thành các gen hoạt tính chuỗi nặng và các gen hoạt tính chuỗi nhẹ. D là các gen intron. Sự hình thành một nửa phân tử Ig. Đoạn DNA chứa các gen này được sao lại theo cơ chế bổ sung để tạo ra RNA sơ cấp rồi từ RNA sơ cấp các gen hoạt tính chắp nối lại với nhau. Chuỗi nhẹ kapa. Chuỗi nhẹ lamda được mã hoá trong phức hệ gen tách biệt hoàn toàn (c). 50 gen D và 5 gen CH gen xen giữa các gen V. không làm nhiệm vụ mã hoá. Tế bào B trong quá trình biệt hoá xẩy ra tái tổ hợp di truyền. Nếu sự chắp nối sai bao gồm các gen không phù hợp xen vào giữa thì các gen sai sẽ được enzyme phân giải. loại bỏ intron để tạo ra mRNA dùng để dịch mã tạo ra protein chuỗi nặng hay chuỗi nhẹ. Sự ghép . 2 gen vùng cố định (CL). TCR và MHC đều có sẵn trong các tế bào lympho. Đối với chuỗi nặng có ~200VH. 4 gen J. Để kiểm tra sự tao thành chuỗi nhẹ của kháng thể. tuỳ thuộc từng vùng gen. trong tế bào B chưa chín có 150 gen vùng biến đổi (VL). 5 đoạn gen liên kết J. J.246 Hình 11. Sự sắp xếp lại gen: các gen kiểm tra tính đa dạng của các phân tử của hệ thống miễn dịch như kháng thể.

Tế bào này biệt hoá thành tế bào plasma sản xuất kháng thể (gọi là đáp ứng nguyên phát hay lần 1) và tế bào B nhớ. 2 gen CL sẽ cho ra 150 x 5 = 1. Sự tạo thành kháng thể là một tập hợp các phản ứng do kháng nguyên kích thích. chúng sẽ lựa chọn tế bào lympho tương ứng. Ricketsia. Khi còn ở giai đoạn bào thai nếu tế bào lympho nào phản ứng với kháng nguyên bản thân sẽ bị ức chế. Trong TCR cũng chứa các vùng VDJ. Tế bào B nhớ có đời sống dài. 107 phân tử kháng thể khác nhau. Sự đa dạng của các loại kháng thể này đủ thoả mãn với các loại kháng nguyên. Hai chuỗi nhẹ lại liên kết với 2 chuỗi nặng nên ta có 20000 x 1500 x 2 = 6. Miễn dịch qua trung gian tế bào Miễn dịch qua trung gian tế bào gọi tắt là CMI ( cell mediated immulity) có tầm quan trọng chống lại virus. J cũng sẽ tạo ra các TCR khác nhau giống như ở kháng thể vậy. chúng còn hoạt động nhiều năm khi kháng nguyên đã hết. Tính đa dạng này có được là do sự sắp xếp lại gen của DNA trong tế bào T chưa chin khi đang biệt hoá trong tuyến ức. D. do vậy số lượng các loại kháng thể được tạo thành sẽ là rất lớn. Những tế bào không phù hợp với kháng nguyên lạ sẽ không được tạo thành dòng.500 chuỗi khác nhau. Vì thế sự tạo thành TCR của kháng nguyên cũng phải rất đa dạng. Có thể có trong tự nhiên. TCR nhận diện kháng nguyên do tế bào APC trình diện thông qua MHC. sự tái tổ hợp giữa các gen V. kích thích tăng sinh để tạo thành dòng tế bào sản xuất kháng thể. Khi có kháng nguyên lạ xâm nhập. tế bào TH tiết ra interleukin để hoạt hoá tế bào B. Khi kháng nguyên vào lần sau. Tính đa dạng của thụ thể tế bào T. Cũng như vậy ta sẽ có 200 x 4 x 50 x 5 = 20000 chuỗi nặng khác nhau.247 nối các gen hoạt tính theo nguyên tắc tổ hợp. Về phần mình. Ví dụ chuỗi nhẹ được tạo thành bởi các tổ hợp 150 gen VL. IX. . cơ thể sẽ đáp ứng nhanh và mạnh hơn đó là do tế bào B nhớ biệt hoá thành tế bào plasma sản xuất kháng thể (gọi là đáp ứng thứ phát hay lần 2). Kháng nguyên được tế bào APC xử lý và trình diện cho tế bào TH. vi khuẩn (đặc biệt là vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis) sống bên trong tế bào và trong miễn dịch ung thư cũng như trong thải bỏ mô ghép. Cơ chế tạo thành kháng thể. Theo thuyết chọn lọc dòng (clon) của Burnett thì trong cơ thể đã có sẵn nhiều loại tế bào lympho có khả năng sản xuất kháng thể. Như vậy TCR vừa phải gắn được với các vùng của MHC vừa phải gắn đặc hiệu với epitop của kháng nguyên. mỗi loại thì nhận diện và phản ứng với một loại kháng nguyên. 5 gen JL.

Bổ thể Bổ thể (complement) là một nhóm protein huyết thanh có đặc điểm hoá học và miễn dịch học khác nhau. Các lymphokin khác như yếu tố hoá ứng động hấp dẫn đại thực bào nơi có kháng nguyên. Một bổ thể sau khi được hoạt hoá sẽ kích thích để hoạt hoá bổ thể tiếp theo. Bất kể tế bào nào mang kháng nguyên lạ. Có thể chia ra làm sáu bước: . C2 và kháng thể.. Cách thứ nhất phát hiện sớm hơn gọi là hoạt hoá theo con đường cổ điển. tế bào nhiễm virus.v. Cho đến nay người ta vẫn chưa thấy thụ thể của tế bào NK cần cho việc làm tan tế bào đích. Hoạt hoá theo con đường cổ điển cần có sự tham gia của các bổ thể C1. Tuy nhiên cũng giống như tế bào TC. Sự tăng đột ngột lymphokin do tế bào này tiết ra gây triệu chứng viêm da do tiếp xúc. interferon tham gia vào sự điều hoà miễn dịch kích thích tế bào B sản xuất kháng thể.248 Đảm nhiệm vai trò trong CMI là các tế bào T. Yếu tố hoạt hoá đại thực bào. Hai con đường này chỉ khác nhau giai đoạn đầu. X. trước hết là tế bào TC. chỉ khác ở chỗ không cần có sự kích thích của kháng nguyên đặc hiệu. nhưng có khả năng giết tế bào ung thư và tế bào nhiễm virus như tế bào TC. Tế bào giết tự nhiên gọi tắt là tế bào NK (Natural killer cells) là các tế bào nhiều hạt lớn trong tế bào chất. ở phần chót lại giống nhau. yếu tố ức chế di tản ngăn cản đại thực bào ra khỏi vùng chứa kháng nguyên. chẳng hạn tế bào mô ghép không tương đồng. đều bị tế bào TC tiết ra perforin-chất độc từ bọng nằm trong tương bào chui qua màng sinh chất của tế bào đích để tiêu diệt tế bào đích. Lympho TDTH gây quá mẫn muộn. Tế bào này nhận mặt kháng nguyên khi chúng gắn với MHC. Sự hoạt hoá này theo kiểu phản ứng dây chuyền. các yếu tố B.. kích thích tế bào này làm nhiệm vụ hiệu quả hơn v. Có hai cách hoạt hoá bổ thể. Chúng không phải là tế bào T hay B. trước tiên tế bào NK phải tiếp xúc với tế bào chứa kháng nguyên lạ sau đó mới tiết độc tố để giết tế bào. chúng chủ yếu đóng vai trò trong dị ứng và viêm mãn tính. Các bổ thể muốn hoạt động phải được hoạt hoá. Cách thứ hai phát hiện sau gọi là hoạt hoá theo con đường nhánh hay con đường propecdin. D và propecdin. C4. Hệ thống bổ thể bao gồm 9 protein được ký hiệu là C (từ C1 đến C9). Các tế bào T cũng tiết ra các chất điều biến (modulator) như các interleukin. với kháng thể và với màng sinh chất của tế bào.. có khả năng phản ứng với nhau.

do đó làm tăng khả năng thực bào. C5 bị tách thành 2 mảnh là C5a và C5b. còn chất bất hoạt C3b là yếu tố I. IgG3 thuộc IgM) nằm kề nhau. virus vừa gắn với đại thực bào. 4. đó chính là convertase C3 dùng để bổ C3. thì C1q được hoạt hoá. Khi gắn với C3b. 6. C1S đã hoạt hoá sẽ tham gia hoạt hoá C4 và C2. Chất bất hoạt C1 là C1-INH. đó chính là convertase C3 (enzyme bổ C3). C1r được hoạt hoá sẽ kích thích C1S. yếu tố H cạnh tranh với yếu tố B để gắn với C3b ngăn cản sự tạo thành C3bBb. C3b bao phủ quanh tế bào đích sẽ làm tăng khả năng tiêu diệt tế . C3b gắn với C4b2a thành C4b2a3b đó chính là convertase C5 (enzyme bổ C5). 2.kháng thể để hoạt hoá C1. C4 để dẫn đến tạo thành enzyme hoạt hoá C3. Sự hoạt hoá bổ thể dẫn đến nhiều hậu quả sinh học. C3 bị tách thành 2 mảnh là C3a và C3b. C3bBb gắn thêm C3b tạo thành C3bBb3b chính là convertase C5. 3. C1r và C1s. Mảnh Bb được giữ lại tạo thành phức hợp C3bBb. Yếu tố B gắn với C3b tạo phức hợp C3bB. Dưới tác dụng của C4b2a3b. IgG2. C5b gắn vào tế bào đích và vào C6 để tạo phức hợp C5b6 sau đó gắn với C7 để tạo thành C5b67. Dưới tác dụng của C4b2a. 5. C4b kết hợp với C2a thành C4b2a. tiếp tục tách đôi C2 thành C2a và C2b. Khi C1 gắn vào phần của FC của 2IgG (thuộc loại IgG1. C2. Tạo phức hệ kháng nguyên.C1 gồm 3 protein hợp thành: C1q. C1S đã hoạt hoá.249 1. làm thoát nội chất và giết chết tế bào. Hoạt hoá theo con đường nhánh không cần có sự tham gia của kháng thể. Tiểu phần này sau khi được hoạt hoá sẽ kích thích C1r. yếu tố B để lộ vị trí chịu sự tác động của yếu tố D và bị tách ra thành Ba và Bb. Từ đây sự hoạt hoá bổ thể sẽ diễn ra giống như ở con đường cổ điển. C1S đã hoạt hoá sẽ xức tác để tách đôi C4 thành C4a và C4b. C3b vừa gắn với thụ thể của vi khuẩn. C5b67 bám vào C8 sau đó bám tiếp vào C9 tạo thành phức hợp tấn công màng C5b6789 khoan lỗ thủng. D và propecdin thay cho các bổ thể C1. nhưng cần đến yếu tố B. trước hết là làm tan tế bào nhờ phức hệ tấn công màng (C5b6789). Sự hoạt hoá bổ thể được điều hoà bởi các chất ức chế. Phức hợp này bám vào lớp lipid kép của màng sinh chất. Mảnh C4b sẽ gắn vào màng nguyên sinh chất của tế bào và vào C2 tạo thành C4bC2.

chúng lôi kéo bạch cầu trung tính vào nơi tập trung kháng nguyên lạ để làm nhiệm vụ thực bào.250 bào đích của tế bào K trong hiệu ứng ADCC (gây độc tế bào phụ thuộc kháng thể). còn phần FC bám vào tế bào K. C3a và C5a là độc tố gây phản vệ. Hình 11.9a: Hoạt hoá và điều hoà theo con đường cổ điển Cả hai con đường đều tạo thành convertase C3: C4b2a( con đường cổ điển) và C3bBb (con đường nhánh). Các enzyme này gắn với C3b để tạo thành covertase C5: C4b2a3b (con đường cổ điển) C3bBb3b (con đường nhánh). C3a và C5a cũng là chất hoá ứng động. Hình 11. chúng tham gia vào sự giải phóng histamin khỏi tế bào Mast. giúp cho tế bào K diệt tế bào đích).9b: Sự hình thành phức hệ tấn công màng (Phần Fab của kháng thể đặc hiệu bám vào tế bào đích. .

sốc do dùng huyết thanh điều trị hoặc bệnh chết trong nôi (kháng thể chống protein có trong sữa bò). làm thoát các bọng rồi từ bọng giải phóng các chất trung gian hoạt mạch như histamin (gây co thắt cơ trơn). heparin (kìm hãm động mạch.251 XI. ECF-A-yếu tố hoá hướng động bạch cầu trung tính). bạch cầu đơn nhân hay đại thực bào) dẫn tới làm tan tế bào đích. Quá mẫn loại này cũng có thể biểu hiện cục bộ như hen phế quản và viêm mũi dị ứng). Quá mẫn không biểu hiện ngay sau khi tiếp xức với kháng nguyên lần đầu. Quá mẫn típ I có thể biểu hiện toàn thân như sốc phản vệ. Miễn dịch bệnh lý 1. nguyên do là IgE được hình thành gắn vào thụ thể FC của tế bào mast. bạch cầu trung tính. sốc do dị ứng với thuốc. giúp đại thực bào diệt tế bào đích. chằng hạn truyền máu nhóm A cho người có nhóm máu B thì sẽ làm tan máu của kháng thể (IgM) của nhóm A sẽ kháng lại kháng nguyên B người nhận. phần Fab của hai IgE nằm kề nhau gắn chéo với kháng nguyên. dẫn đến làm thay đổi cấu trúc không gian của thụ thể. chẳng hạn tế bào đích gắn với kháng thể đặc hiệu. tiểu cầu. hoạt hoá bổ thể tạo phức hợp C5b-9 tấn công màng tế bào đích. gây biến đổi tại chỗ màng. . xẩy ra nhanh (<30phút) ngay sau khi tiếp xúc với kháng nguyên vào lần hai. Quá mẫn típ II thể hiện rất rõ trong các trường hợp sau: Khi truyền máu không phù hợp. Quá mẫn là những tổn thương bệnh lý xẩy ra do một đáp ứng miễn dịch quá mức và không hợp lý. gây huỷ hoại mô. serotonin (tăng tính thấm thành mạch). Gell và Combs đã chia quá mẫn ra là 4 loại. Sự hoạt hoá tế bào Mast cũng dẫn đến việc tổng hợp các chất mới như phản ứng chậm (SRS-A làm tăng tính thấm thành mạch) và yếu tố hoạt hoá tiểu cầu (PAF. đồng thời mảnh C3b có thể bám quanh tế bào đích và bám vào đại thực bào thực hiện opsonin hoá. Phản ứng kháng nguyên-kháng thể sẽ hoạt hoá bổ thể gây hiện tượng tan hồng cầu của người nhận máu. * Quá mẫn tip I hay quá mẫn tức thì được đặc trưng bởi các phản ứng dị ứng. mà chỉ ở những lần tiếp xúc sau. gây tổn thương thận do tắc nghẽn bởi một lượng lớn màng hồng cầu và gây độc do giải phóng phức hợp hem (C34H23O4N4Fe). * Quá mẫn típ II hay quá mẫn gây độc tế bào xẩy ra khi kháng thể gắn trực tiếp với kháng nguyên trên bề mặt tế bào cùng với sự tham gia của bổ thể và các tế bào hiệu ứng (tế bào K. gây ngưng kết tiểu cầu và giải phóng histamin).

người ta phải tiêm cho mẹ kháng thể kháng Rh (RhoGAM) để loại bỏ kháng nguyên Rh ở cơ thể mẹ.kháng thể rồi lắng đọng vào giữa các tế bào nội mô và màng đáy mao mạch. * Quá mẫn típ III hay phức hợp miễn dịch khác với quán mẫu típ II ở chỗ kháng thể chống lại với kháng nguyên hoà tan phân bố rộng rãi trong máu. lúc đó chúng trở thành kháng nguyên mạnh. Nếu thai nhi mang Rh+ thì hồng cầu có thể truyền sang mẹ. Vì tiểu cầu cần cho sự đông máu nên nếu thiếu sẽ gây xuất huyết trên da. Bệnh ban xuất huyết xảy ra khi phần tử thuốc (hapten) gắn xung quanh tiểu cầu. để tránh tai hoạ cho lần có thai sau. Khi tiêm kháng nguyên vào cơ thể sẽ kết hợp với kháng thể kết tủa có sẵn tạo thành phức hợp kháng nguyên. Các thành phần khác là các chất hoá . O B. Kháng thể này có thể truyền cho con qua nhau thai gây tan hồng cầu của thai nhi. A. Hiện tượng này kéo theo sự hoạt hoá dòng bổ thể tạo C3a và C5a (các chất gây phản vệ) làm tăng tính thấm thành mạch (gay phù nề). kích thích tạo kháng thể kháng Rh. B (nhận toàn năng) A.1: Sơ đồ nhóm máu Nhóm Kháng nguyên AB A B O A&B A B Không có Kháng thể Không có kháng thể Kháng thể kháng B Kháng thể kháng A Nhóm có thể thận AB. O.252 Bảng 11.thì 50% đứa trẻ chào đời mang Rh+. Kháng thể chống phức hợp này gây huỷ tiểu cầu khi có mặt bổ thể. O (cho toàn năng) kháng B O Nhóm máu Rh: khi bố mang máu Rh+ và mẹ mang máu Rh. O Kháng thể kháng A.

Kết quả là mao mạch đứt. Mối tương tác giữa lympho T này với hapten bám trên da đã gây phản ứng viêm da. khớp).. có tác dụng làm cho đại thực bào tập hợp quá nhiều. Các thương tổn có thể do tế bào TC phá huỷ tế bào đích đã có các kháng nguyên đặc hiệu bám trên bề mặt hoặc do tác động của lymphokin do lympho T tiết ra. 2. nhập lại thành tế bào khổng lồ (u hạt). Kháng nguyên có thể là vi khuẩn (sau nhiễm liên cầu). Nguyên nhân là do phức hợp miễn dịch lắng đọng trong thành mạch máu. Quá mẫn do tiếp xúc là một ví dụ. thận. ký sinh (viên thận sau sốt rét ác tính ) protein lạ (viêm thận trong bệnh huyết thanh). mỹ phẩm. xuất huyết dẫn đến hoại tử cục bộ. Khi thấm qua biểu bì. do vậy kháng thể kháng vi khuẩn gây phản ứng chéo với các thành phần của cơ thể gây viêm (màng tim. các hoá chất trong cao su. Bạch cầu trung tính hoạt hoá sẽ tiết enzyme protease. Bệnh tự miễn Bình thường cơ thể không sinh đáp ứng miễn dịch chống lại kháng nguyên bản thân. Hiện tượng này gọi là phản ứng Arthus. sau 24 giờ hoặc hơn. Bệnh viêm cầu thận là một ví dụ của quá mẫn típ III. Phản ứng xẩy ra muộn. Khi tính tự dung nạp bị mất và cơ thể không còn khả năng phân biệt kháng nguyên bản thân với kháng nguyên lạ thì sẽ gây đáp ứng miễn dịch chống lại kháng nguyên bản thân và dẫn đến bệnh tự miễn. các tế bào này tập trung gây ghẽn mao mạch. Một số chất như niken. Cùng với tiểu cầu. kháng nguyên thành tế bào chứa protein M kích thích tạo kháng thể. Bệnh huyết thanh: việc sử dụng kháng huyết thanh trong điều trị mang lại kết quả lớn (ví như virrut dại). cromat. song ở một số trường hợp có thể gây tai biến. Ví dụ: viêm cầu thận * Quá mẫn típ IV hay quá mẫn muộn là tổn thương do sự tương tác giữa kháng nguyên với các lympho T đã mẫn cảm với các kháng nguyên đó gây ra. colagenase và các chất hoạt mạch gây viêm loét.có trong lượng phân tử (<1kDa) nên là hapten. khớp cũng có protein này. đồ hoạ. thu hút bạch cầu trung tính.. Tại màng tim. Phức hợp kháng nguyên-kháng thể đọng lại trong gian bào nội mô và màng đáy vách mao mạch gây viêm. gặp protein sẽ trở thành chất công hợp hapten protein thải (kháng nguyên) kích thích lympho T. thận. Bệnh phức hợp miễn dịch liên quan đến nhiễm trùng (Rheumatic fever): khi bị viêm họng do Streptococcus gây ra. .253 ứng động. đặc biệt là TC.

do sai sót hoặc thiếu các gen của hệ thống miễn dịch nhận từ cha mẹ hoặc có thể mắc sau khi dùng thuốc. Sau đây là một số ví dụ: + Bệnh Grave (Típ II) là do kháng thể gắn vào thụ thể của tế bào tuyến giáp dành cho hocmon kích thích tuyến giáp. + Luput ban đỏ hệ thống (SLE) (típ III) là bệnh tạo trên vùng ban đỏ hình bướm hay mặt sói. do sai sót hoặc thiếu các gen của hệ thống miễn dịch mang tính bẩm sinh. Việc thiếu insulin làm cho lượng đường trong máu tăng dẫn đến mù loà và hoại thư. hoạt hoá bổ thể. Các gai này gắn vào thụ thể CD4 nằm trên mặt tế bào TCD4 và đại thực bào là tế bào đích chính của HIV. Sợi DNA mới tổng hợp được dùng làm khuôn để tổng hợp sợi DNAmới theo cơ chế bổ sung. Suy giảm miễn dịch: Suy giảm miễn dịch là sự đáp ứng miễn dịch không đầy đủ. thu hút bạch cầu hạt gây viêm cầu thận.254 Bệnh tự miễn có thể thuộc quá mẫn típ II. dẫn đến tử vong. III hoặc IV. Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải (AIDS) Virus HIV là virus Retro mang genom RNA một sợi và enzyme phiên mã ngược. Trên mặt vỏ ngoài chứa các gai glycoprotein với trọng lượng phân tử 120 kDa nên gọi tắt là gp 120. Kết quả là tuyến giáp bị kích thích sản ra một lượng ngày càng lớn hocmon tuyến giáp dẫn đến bướu cổ do tuyến giáp phìng to. + Bệnh nhược cơ (Típ II) làm cho cơ thể suy yếu. Nguyên nhân do tạo thành kháng thể chống DNA dạng xoắn kép hoặc sợi đơn (gọi chung là kháng thể kháng nhân). virus cởi bỏ ỏ ngoài nhờ enzyme tiêu hoá của tế bào sau đó sợi RNA virus được sao thành DNA đơn nhờ enzyme sao mã ngược. Phức hợp miễn dịch lắng đọng ở cầu thận. Hai sợi xoắn vào nhau tạo sợi DNAxoắn kép. Ví dụ: bệnh Hodgkin (ung thư) làm giảm đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào hoặc nhiều loại virus giết các tế bào của hệ thống miễn dịch (HIV). Bao bọc capsit là vỏ ngoài liporotein. Hocmon này do tuyến yên sinh ra. Nguyên nhân có thể do sự khiếm khuyết hệ thống miễn dịch mang tính bẩm sinh. + Bệnh tiểu đường phụ thuộc insulin (Típ IV) do kháng thể đặc hiệu tiêu diệt tế bào tuyến tuỵ sản sinh insulin. Do không tiếp nhận xung thần kinh do phân tử axetylcholin. hô hấp dừng. Ấy là do kháng thể gắn vào thụ thể dành cho axetylcholin tại điểm nối xung thần kinh cơ. . cơ sẽ bị yếu. Sau khi xâm nhập vào tế bào. bị ung thư hoặc sau khi nhiễm trùng.

Khi mới bắt đầu nhiễm nhiều dòng tế bào B được hình thành và trong huyết thanh chứa một lượng lớn IgG. pha đầu gọi là pha đặc hiệu hay pha không nhìn thấy xẩy ra nhanh. Pha sau xẩy ra chậm. Chỉ một thời gian ngắn sau khi nhiễm đã có 1-100 tế bào chứa HIV. Mg++. Cách tốt nhất vẫn là phòng chống. Phản ứng xảy ra theo hai pha. Phản ứng kháng nguyên-kháng thể phụ thuộc vào điều kiện pH. ngăn sự lây lan theo các con đường quan hệ tình dục. Gen HIV được biểu hiện khi có sự kích thích của yếu tố phiên mã của tế bào chủ gắn vào 2 đầu lặp lại dài của provirus. Sự kết hợp giữa kháng nguyên-kháng thể hay đúng hơn là giữa epitop và paratop dựa trên ba lực liên kết: lực Vander-wals. lượng kháng thể giảm đột ngột và các kháng thể kháng gp 120 cũng giảm theo. tiêm chích ma tuý và truyền máu đã nhiễm. một số là RNA genom của virus. Cho đến nay mọi loại thuốc cũng chỉ làm giảm sự tiến triển thành AIDS. XII Các phản ứng huyết thanh Kháng thể tồn tại trong huyết thanh miễn dịch. một số là RNA thông tin dùng để tổng hợp protein vỏ capsid. Sự kích thích này dẫn đến tạo thành các RNA khác nhau. Vỏ capsid kết hợp với RNA genom tạo thành hạt virus (virion) chui ra ngoài để lặp lại vòng đời mới ở tế bào CD4 khác. các ion Na+. Phản ửng huyết thanh dùng đề chẩn đoán kháng nguyên hoặc kháng thể khi đã biết một trong hai thành phần. do đó các phản ứng miễn dịch dùng kháng huyết thanh gọi là phản ứng huyết thanh học.255 DNA kép này gắn xen vào nhiễm sắc thể của tế bào chủ nhờ enzyme integrase và nằm ở đó dưới dạng porvirus. . gọi là phương pháp chẩn đoán huyết thanh học. Lúc đầu cơ chế bảo vệ của cơ thể làm giảm tốc độ nhân lên của virus nhưng sau chung vượt qua và nhiễm ngày càng nhiều vào các tế bào T. chất điện giải . biểu hiện ra ngoài có thể nhìn tháy được như kết tủa hoặc ngưng kết. bệnh nhân bắt đầu mất đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào và dẫn đến nhiễm bệnh cơ hội. nhiệt độ. Dựa vào số lượng tế bào T trong máu để xác định mức độ nhiễm. Một bản sao DNA có thể nằm im trong tế bào vài tháng đến vài năm. IgM và IgA nhưng ở giai đoạn sau của AIDS. Liệu pháp thành công nhất để chống HIV là dùng Dideoxynucleozit. lực hút tĩnh điện giữa các nhóm chức và lực liên kết giữa các liên kết hydro. Nếu lượng tế bào T4 trong máu xuống dưới 600/μ. Các chất này ức chế enzyme phiên mà ngược của HIV và do đó cản trở sự tổng hợp DNA của virus. Cl-. chủ yếu là azidotimidin hoặc zidovudin. đặc trưng bởi sự hấp phụ kháng nguyên.

Kháng nguyên liên kết chéo với kháng thể kết dính với nhau tạo thành từng cụm có thể nhìn thấy bằng mắt thường. Sau đây là các phản ứng chính: + Phản ứng kết tủa: Khi cho kháng thể phản ứng với kháng nguyên hoà tan ở nồng độ chuẩn sẽ xuất hiện kết tủa. Phản ứng bị ức chế khi quá thừa một trong hai thành phần trên. rửa phần không tham gia phản ứng. 1/80. Bước 1: Trộn kháng nguyên đánh dấu phóng xạ với kháng thể chuẩn. chất phóng xạ. rửa kháng nguyên thừa (không tham gia phản ứng). Ví dụ với độ pha loãng 1/20. sau đó ủ. nơi gặp nhau tạo thành vòng cung kết tủa. Bước 2: Trộn kháng nguyên đánh dấu và kháng nguyên không đánh dấu với kháng thể. Có thể thực hiện phản ứng kết tủa trong thạch. Đo độ phóng xạ (A).. 1/40. Ví dụ kháng thể bao quanh virus gây ngưng kết hồng cầu do đó hồng cầu không bị virus làm ngưng kết. Hiệu giá kháng thể (titer) là ở độ pha loãng cao nhất mà vẫn xẩy ra ngưng kết. Phản ứng dùng để xác định kháng nguyên khi đã có sẵn kháng thể đặc hiệu hoặc xác định kháng thể khi đã có sẵn kháng nguyên hoà tan đặc hiệu. + Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang dựa trên nguyên tắc là thuốc nhuộm khi bị kích thích bởi bức xạ có bước sóng đặc biệt sẽ phát sáng chẳng hạn fluorescein phát huỳnh quang màu vàng lục còn rodamin phát huỳnh quang màu da cam. + Phản ứng trung hoà xẩy ra khi kháng thể bao vậy trung hoà ngoại độc tố vi khuẩn hoặc bao vây virus. + Kỹ thuật miễn dịch phóng xạ dựa trên sự cạnh tranh giữa kháng nguyên đánh dấu động vi phóng xạ (ví dụ 125I) (đã biết) với kháng nguyên không đánh dấu (cần biết) gắn vào kháng thể đặc hiệu chuẩn.256 Nhiều phản ứng xảy ra khó nhận biết do đó cần các chất chỉ thị như hồng cầu. rồi quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang. 1/640 đều ngưng kết thì 1/640 là hiệu giá kháng thể. Cho kháng nguyên vào dãy ống nghiệm chứa kháng nguyên huyết thanh với độ pha loãng tăng dần. kháng nguyên và kháng thể khuếch tán trong thạch. + Phản ứng ngưng kết tương tự như phản ứng kết tủa. tế bào vi sinh vật.. Sau khi phản ứng kháng nguyênkháng thể xẩy ra. Một trong hai thành phần (kháng nguyên hoặc kháng thể) được gắn với thuốc nhuộm. Sau đó ủ và rửa kháng nguyên thừa không gắn với .. nhưng đòi hỏi kháng nguyên hữu hình có kích thước lớn như hồng cầu. thuốc nhuộm huỳnh quang.

Hãy phân biệt miễn dịch đặc hiệu và không đặc hiệu (khả năng đề kháng).Vẽ sơ đồ cấu tạo kháng thể. So sánh độ phóng xạ ở A và B có thể suy ra lượng kháng nguyên cần xác định. chúng tham gia vào hoạt hoá tế bào B như thế nào ? 8.Hãy phân biệt chất sinh miễn dịch. Đo độ phóng xạ (B).Thế nào là tế bào trình diện kháng nguyên (APC).Phân tử MHC là gì ? chúng có chức năng gì trong trình diện kháng nguyên ? 10. Các lớp kháng thể có chức năng gì ? 4. Miễn dịch đặc hiệu gồm những loại miễn dịch nào ? 2. 11. người ta cho thêm cơ chất có màu. Quyết định kháng nguyên (epitop) là gì ? 3. 5.257 kháng thể. 6. Đo cường độ màu là biết được nồng độ kháng nguyên cần phát hiện. Sau đó phản ứng kháng nguyên-kháng thể. Hãy mô tả quá trình chế biến kháng nguyên. Hãy nêu tính chất cơ bản của kháng nguyên. Hãy trình bày quá trình trình diện kháng nguyên với sự tham gia của MHC-I và MHC-II.Kể tên các tế bào tham gia vào đáp ứng miễn dịch. Sự xuất hiện màu chứng tỏ phản ứng đặc hiệu kháng nguyên với kháng thể. Vùng nào của kháng thể giữ vai trò gắn kháng nguyên.TRC là gì ? Nó tham gia vào hoạt hoá tế bào T như thế nào ? 7. kháng nguyên và hapten. 12. Chúng đảm nhiệm chức năng gì trong đáp ứng miễn dịch. Câu hỏi ôn tập chương 11 1.Hãy trình bày quá trình hình thành kháng thể.Thế nào là thụ thể tế bào B. Kỹ thuật ELISA (kỹ thuật chất hấp phụ miễn dịch gắn enzymeenzyme-Linked Inmunosorbent Assay) nguyên tắc của kỹ thuật này giống như miễn dịch huỳnh quang nhưng khác ở chỗ thay vì gắn kháng thể với thuốc nhuộm huỳnh quang thì người ta gắn kháng thể với một enzyme. 9. Nêu sự khác nhau cơ bản giữa tế bào T và B. Tại sao cơ thể có tiềm năng to lớn trong việc hình thành kháng thể để chống lại mọi kháng nguyên có thể có trong tự nhiên.Bổ thể được hoạt hoá như thế nào và đóng vai trò gì trong đáp ứng miễn dịch. .Nêu sự khác nhau cơ bản giữa tế bào TH và TC.

Nguyễn Khắc Tuấn & Nguyễn Bá Hiên. 1997.) 1990. Ngô Tiến Hiển. & Timbury M. 7. 2002. 2001. Miễn dịch học. 2. 6.Phạm Thành Hổ. Nguyễn Đường. Vi sinh vật công nghiệp. Vi sinh vật đất. 2004. Homberg. (1998). Hà Nội. 1977. 2001. Cơ sở sinh học vi sinh vật. Hà Nội. 12.Collier L.Phạm Hồng Sơn. 9.J. Phan Văn Chinh. San Diego. Hà Nội. Di truyền học.Cann A.C. NXB Đại học Quốc gia Hà Nội. NXB Giáo dục. NXB Khoa học và Kỹ thuật. NXB Giáo dục. NXB Nông nghiệp. Hà Nội.Vũ Triệu An. Hoá sinh. 2001. H. 8. Vi sinh vật học. T ÀI LI ỆU TI ẾNG VI ỆT 1.Phạm Bá Kim. NXB Nông nghiệp. Topley & Wilson's Principles of bacteriology. Vi sinh vật học đại cương. Vi sinh vật học thú y.Nguyễn Như Thanh.Nguyễn Bá Lộc. vol. Nguyễn Thị Thanh & Phạm Quang Trung. Edward Arnold. 2002. Nguyễn Đình Quyến. Hà Nội.Lê Đức Trình. 4. Hà Nội 5. (ed. Công nghệ vi sinh. Principle of molecular virology. NXB Xây dựng. 10. London.258 TÀI LIỆU THAM KHẢO I.Lê Xuân Phương.). Phạm Văn Ty. Sinh học phân tử.Nguyễn Lân Dũng. 2004. Academic Press. virology and immunology (8th ed. II. NXB Giáo dục. 15.Nguyễn Thành Đạt. 11. Hà Nội. 2001. .Nguyễn Thị Chính. Hà Nội 4. NXB Giáo dục. C. Nhà xuất bản Y học Hà Nội. TÀI LIỆU TIẾNG ANH 14. Nxb 3. Trường Đại học Cần Thơ. Hà Nội. Virus học. 2001. 2000.Võ Thị Thương Lan. NXB Giáo dục. Sinh học phân tử của tế bào. J. Hà Nội. 13.Trần Thị Thanh. 1999.

Ronald M. 19. J. & Tabuchi K. Mosby. Edward Arnold. 1983. 18.Lehninger A.. Veterinary virology (2nd ed. John Wilson & Sons.259 16. vol. M. Brown publisher. Dubuque.Linton A. 2002.) 1990. Buneidou shuppan. 1993.. 20. Microbiology. Microbiol.).. Second Edition. 3rd edition.L.M. Tokyo..) 1995. Topley & Wilson's Principles of Bacteriology. Gibbs E. London. 2002. 23. Nelson D. (ed. Immunol. 22. 21.Johnson L. New York. Principles of Microbiology University of Louisville. Iowa.Pham H.. Bachmann P. (ed. G. 17. Principles of Biochemistry. .) Academic Press. J. C. 24. H. Wm. 1995. Kentucky. Kiuchi A. 1993. Co.-S.L. Cox M.. & Dick H.Mikami T. Orland. P. B. Virology and Immunology (8th ed. Publisher. Inc. Biology. Cell and molecular biology. et al. USA. 1999.Karp G. Methods for rapid cloning and detection for sequencing of cloned inverse PCR-generated DNA fragments adjacent to known sequences in bacterial chromosome. W. New York. Worth Publishers. 1. Juui biseibutsu gaku [Vi sinh vật học thú y] (Tiếng Nhật). Concepts and experriments. A. 43: 928-836.Fenner F.Prescot Harley Klein.

Phạm Văn Ty Biên soạn các chương 8 1. 7. Phạm Ngọc Lan 4. Kiều Hữu Ảnh 2. Phạm Hồng Sơn 6.3 diphosphoglyceric Adenosine triphosphate Acid 6-penicillanic Coenzyme A Chất kháng sinh Deoxiribonucleic acid Ribulose-1. TS. Nguyễn Thị Thu Thủy 5. TS. 6. TS. ThS. PGS.5-diphosphate Ribulose-5-diphosphate Ribonucleic acid Vi sinh vật Fructose-6-phosphate Flavin adenine dinucleotide Glucose-6-phosphate Glyceraldehyde phosphate 2-Keto-3-deoxi-6-phosphogluconate Nitrogen Nicotinamid adenine dinucleotide dạng oxi hóa Nicotinamid adenine dinucleotide dạng khử Nicotinamid adenine dinucleotide phosphat dạng oxi hóa Nicotinamid adenine dinucleotide phosphat dạng khử Pentose phosphate Xylulose-5-phosphate Người biên soạn 1. PGS.NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT ADP AMP APG A-1. Biền Văn Minh (Chủ biên) 3.5-DP R-5-P RNA VSV F-6-P FAD G-6-P GAP KDPG N NAD NADH NADP NADPH PP X-5-P Adenosine diphosphate Adenosine monophosphate Acid 3-phosphoglyceric Acid 1. và 9 4.TS.3-DPG ATP A-6PA CoA CKS DNA R-1. 5 2 10 3 và 11 .TS.

You're Reading a Free Preview

Tải về
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->