Professional Documents
Culture Documents
s¾c ký láng
Môc tiªu häc tËp
• Tr×nh bµy ®îc s¬ ®å cña m¸y HPLC
vµ vai trß cña tõng bé phËn.
• Tr×nh bµy ®îc nguyªn t¾c ho¹t ®éng
cña detector UV-VIS.
• Ph©n biÖt ®îc c¸c lo¹i pha tÜnh trªn
nÒn silicagel thêng dïng trong HPLC
vµ ®Æc tÝnh cña chóng.
• Ph©n biÖt ®îc s¾c kÝ láng ph©n bè
pha thuËn vµ pha ®¶o.
• Tr×nh bµy c¸ch tiÕn hµnh ch¹y s¾c ký
S¾c kÝ láng
B×nh ®ùng
dm
Cét s¾c
kÝ
HÖ
thèng
tiªm
mÉu
B¬ T
1.1 M¸y s¾c ký láng hiÖu
n¨ng cao:
1.1.1. HÖ thèng cÊp pha
®éng:
• Pha ®éng thêng ®îc
chøa trong b×nh thuû
tinh
• Pha ®éng trong s¾c ký
láng thêng lµ hai dung
m«i hoµ tan vµo nhau.
• Tríc khi sö dông, cÇn läc
qua mµng läc 0,45µm díi
¸p suÊt gi¶m.
• §uæi khÝ hoµ tan trong
pha ®éng b»ng c¸ch:
ch¹y siªu ©m, sôc khÝ
tr¬ nh heli...
1.1.1. HÖ thèng cÊp pha
®éng:
Thay ®æi tû lÖ
thµnh phÇn MP
nhê bé trén.
Hçn hîp MP mçi
dung m«i ®ùng Thay ®æi tèc
®é dßng pha
trong mét b×nh
®éng nhê b¬m
Ch¬ng tr×nh dung m«i
(Gradient):
Tiªm
mÉu Lä th¶i
Autosampler
• Cét nhåi:
Cét cã chiÒu dµi thêng cã h¹t cì 5
hoÆc 10 µm. Sè ®Üa lý thuyÕt dao
®éng 40000 ®Õn 60000/m.
1990’s cã lo¹i cét nhá (microcolumn)
víi ®êng kÝnh trong 1 - 2 mm, dµi 3 ÷
7,5 cm. Lo¹i cét nµy ®îc nhåi h¹t cì
3,5 µm. Cã trÞ sè N ®Õn 100 000
®Üa/m. u ®iÓm næi bËt cña chóng
lµ ch¹y s¾c ký tèn Ýt dung m«i vµ Ýt
thêi gian.
1.1.4. Cét vµ pha tÜnh:
KÝch thíc lç
B¶n chÊt pha
xèp
tÜnh KÝch thíc h¹t
ChiÒu dµi cét nhåi
- H×nh d¹ng tiÓu ph©n
(Particle shape)
L=30cm
10 µ
dp=10
m
L=15cm
dp=5 µ
m
L= 9cm
dp= 3,5
µm
KÝch thíc tiÓu ph©n
(Particle size):
§é xèp tiÓu ph©n (Porosity
particle)
H¹t silicagel kh«ng cã lç xèp (Non-
porous) th× S bÒ mÆt tiÕp xóc nhá,
nªn N thÊp (HiÖu lùc cét thÊp).
Detector
Detector ®o chØ sè
Detector khóc x¹
khèi phæ
Detector
t¸n x¹
bay h¬i
Detector UV-VIS
Dung dÞch ®o
lµ MP ch¶y liªn
tôc qua buång
chøa mÉu.
1.Detector cã bíc sãng cè ®Þnh
- Nguån s¸ng:
§Ìn thuû ng©n ¸p suÊt thÊp.
ChØ sö dông duy nhÊt 1 bíc sãng
®· ®îc lùa chän (thêng 254, 280,
334, 436 nm)
1.Detector cã bíc sãng cè ®Þnh
- H¹n chÕ:
§èi víi c¸c chÊt PT kh«ng hÊp thô
quang t¹i bíc sãng nµy th× kh«ng
ph¸t hiÖn ®îc .
§èi víi c¸c chÊt hÊp thô quang yÕu
t¹i c¸c bíc sãng nµy th× giíi h¹n
ph¸t hiÖn sÏ lín.
UV-VIS DETECTOR
2. Detector ®o ë bíc sãng
thay ®æi
- Nguån s¸ng:
§Ìn D2- Deuterium (vïng UV: 190-
360 nm)
§Ìn Wolfram (vïng VIS: 360-800
nm)
- ¦u ®iÓm:
Cã thÓ ®o ë bÊt kú bíc sãng nµo
trong vïng UV-VIS (190 - 800 nm)
VARIABLE WAVELENGTH DETECTOR
S¬ ®å detector ®o ë bíc
sãng thay ®æi.
3. DAD - (Diod Array
Detector)
M¶ng C¸ch tö kÎ
Diod v¹ch b»ng
lase
Nguån
Buång s¸ng
®o
MËt ®é
quang
MËt ®é
quang
Thêi
gian
MËt ®é Thêi
quang gian
X,Y= S¾c kÝ
®å
Z,Y= Quang Bíc sãng
phæ
øng dông DAD trong ®Þnh
tÝnh
F1 F2
R©y ¸i
ph©n lùc
tö
S¾c ký lµ qu¸ tr×nh hÊp phô
cña chÊt ph©n tÝch trªn bÒ
mÆt chÊt r¾n.
Silicagel trÇn (silica)
1.2. C¸c kiÓu s¾c ký láng hiÖu
n¨ng cao
Ph©n bè (L-
LC)
- S¾c kÝ láng-láng:
Pha tÜnh lµ líp chÊt láng bao
quanh c¸c h¹t mang r¾n.
Nhãm DC DC
Silanol Clorosilan Siloxan
§Æc tÝnh cña Silicagel biÕn
tÝnh
- Thêng chØ 50% nhãm Si-OH ph¶n
øng víi hîp chÊt Clorosilan cßn 50%
nhãm -OH vÉn cßn trªn bÒ mÆt h¹t
silicagel.
CH3 CH3
Si-OH + Cl-Si- Si-O-Si-CH3
CH3
CH3 CH3
CH3
Si-O-Si-(CH2)17-
CH3
CH3
BÒ mÆt silica cña cét
Ended-Capping
OH OH
§Æc tÝnh cña Silicagel biÕn
tÝnh
2. Silicagel pha liªn kÕt chØ bÒn trong
vïng pH = 2-8. Nªn pha ®éng chØ pha
trong vïng pH nµy.
NÒn Silica sÏ
bÞ thuû ph©n
Silicag
el
2 4 6 8 1 1 14
0 2
Liªn kÕt Si-R dÔ
bÞ thuû ph©n
* C¬ chÕ t¸c ®éng cña SK
ph©n bè
F2 F1
F1
* Pha tÜnh ph©n cùc
-(CH2)2-NH2 Amino
-(CH2)2-CN Cyano
- (CH2)2-O-CH(OH)-CH2OH Diol
ChÊt
ChÊt ChÊt Ýt
ph©n
kh«ng ph©n
cùc
ph©n cùc
ChÊt ph©n tÝch kh«ng
ph©n cùc?
• Chän pha tÜnh?
Kh«ng ph©n cùc: R lµ C2, C4, C8, C18,
phenyl….
• Chän pha ®éng?
Ph©n cùc: Acetonitril, Methanol, N
íc… S¾c kÝ ph©n bè
pha ®¶o
• Muèn thêi gian lu gi¶m gi¶m ®é
ph©n cùc cña pha ®éng.
LS-Na+
BH
Na+
BH+ X-
+
Na+ -
X
Na
Silicag +
el
BH+ Na+
Na
+
X-
SK ph©n bè pha ®¶o t¹o
cÆp ion:
Khi BH+ ®i vµo cét t¹o cÆp ion
BH+LS- (chÊt kh«ng ph©n cùc).
SÏ bÞ lu gi÷ trªn cét vµ röa gi¶i
theo nguyªn t¾c SK ph©n bè pha
®¶o.
Gi¶i thÝch t¹i sao khi ®Þnh lîng
B1, B2, B6 thêng cho Natri
Heptansulfonat vµo trong pha
®éng?
SK ph©n bè pha ®¶o t¹o cÆp ion:
Ph©n Ph©n
HÊp bè pha bè pha Trao
phô ®¶o thuËn ®æi
ion