Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.

vn i hc thI nguyn

khoa khoa hc t nhin v x hi

ti sinh vin nghin cu khoa hc

nh gi cc tnh cht l ha ca cellulase t chng vi sinh vt phn lp t sui nc nng Chuyn ngnh : Ha Sinh
Gio vin hng dn : ThS. Trnh nh Kh Sinh vin thc hin : inh Th Hng

Trang
Lp B2K3 : Cng ngh Sinh

( ti thc hin ti phng th nghim Sinh hc khoa

Ni dung chnh ca bo co

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

1. M u 2. Mc tiu nghin cu 3. Tng quan ti liu 4. Vt liu v phng php nghin cu 5. Kt qu nghin cu v tho lun 6. Kt lun v ngh

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

M u
L do chn ti
Cellulase l mt trong nhng loi enzyme c vai tr rt quan trng trong nhiu lnh vc i sng, sn xut ca con ngi. Vic nghin cu tm ra cc enzyme chu nhit v bn nhit c vai tr quan trng, quyt nh kh nng ng dng ca chng. c nhiu cng trnh nghin cu v enzyme bn nhit ni chung v cellulase chu nhit ni ring t cc ngun vi sinh vt khc nhau. Cc vi sinh vt sui nc nng l ngun khai thc tim nng sn xut enzyme ny. Hin nay cc nghin cu v vi sinh vt sui nc nng ca Vit Nam cn cha c quan tm ng mc v cn hn ch. Xut pht t nhng l do trn, chng ti chn ti: nh gi cc tnh cht l ha ca cellulase t chng vi sinh vt phn lp t sui nc nng.

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Mc tiu nghin cu
1. Phn lp cc chng vi sinh vt t cc sui nc nng

2. Tuyn chn chng vi sinh vt c kh nng

sinh tng hp cellulase cao 3. nh gi cc tnh cht l ha ca cellulase.

Tng quan ti liu

1.1. Khi nim Cellulase

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Hnh 1.1. S thy phn mi lin kt -1,4-O-glycoside ca cellulase

1.2. C cht ca Cellulase

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Hnh 1.2. Cu trc cellulose v mng li lin kt hydro

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Hnh 1.3. Cu trc cellulose

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

1.3. C ch thy phn ca cellulase

Cellulose kt tinh

Enzyme C1

Enzyme Cx Cellulose v nh hnh Oligome r

Enzyme C1
Enzyme Cx

Cellobiose

Cellobiase Glucose

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

1.4. Kh nng ng dng ca cellulase

1.4.1. Trong cng nghip
Trong cng nghip thc phm

Trong cng nghip sn xut thc n gia sc

Trong cng nghip sn xut dung mi hu c Trong cng nghip sn xut giy v bt giy

Trong cng nghip sn xut cht ty ra

Trong cng nghip dt

1.4.2. Trong nng nghip

1.4.3. Trong bo v mi trng

1.4.4. Trong cng ngh sinh hc

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

vt liu v phng php

2.1. Vt liu
Bng 2.1. Mu nc sui nc nng dng phn lp cc chng vi sinh vt
Stt Tn mu a im sui nc nng Ngy ly mu Nhit

CP1

Cm Thch - Cm Ph Qung Ninh

Quang Hanh - Cm Ph Qung Ninh Quang Hanh - Cm Ph Qung Ninh La Ph - Thanh Thy Ph Th

Ngy 5 thng 7 nm 2007

Ngy 28 thng 7 nm 2007 Ngy 8 thng 10 nm 2007 Ngy 12 thng 8 nm 2007

400C

CP2

450C

CP3

450C

PT

460C

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn 2.2. Phng php nghin cu 2.2.1. Phng php phn lp vi sinh vt

2.2.2. Phng php nui cy vi sinh vt thu nhn enzyme 2.2.3. Phng php xc nh hot tnh cellulase 2.2.4. Phng php xc nh hot cellulase 2.2.5. Phng php xc nh tnh cht l ho ca cellulase
* Xc nh thi gian phn ng ti u * Xc nh nhit phn ng ti u * Xc nh nng c cht phn ng ti u * Xc nh pH phn ng ti u * nh hng ca ion kim loi n hot tnh cellulase

2.2.6. Phng php x l s liu theo thng k sinh hc trn Excel

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Kt qu v Tho lun
3.1. KT QU PHN LP
Bng 3.1. Cc chng vi sinh vt phn lp c trn cc mi trng khc nhau v hot tnh ca chng
Stt
1 2 3 4

Tn chng
CP1.1 CP1.2 CP1.3 CP1.4

Mi trng phn lp
Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I

Hot tnh
++ ++ -

Loi
XK XK XK XK

5
6 7 8 9 10 11

CP1.5
CP1.6 CP1.7 CP1.8 CP1.9 CP1.10 CP1.11

Czapek
Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I

+ -

Nm
XK XK XK XK XK XK

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

12 13 14 CP1 .12 CP1.13 CP1.14 LB Gauze I Gauze I ++ ++ VK XK XK

15
16 17 18 19

CP1.15
CP1.16 CP1.17 CP1.18 CP1.19

Gauze I
Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I

++
++ + ++++-

XK
XK XK XK XK

20
21 22 23 24 25 26 27 28

CP1.20
CP1.21 CP1.22 CP1.23 CP1.24 CP1.25 CP1.26 CP1.27 CP1.28

Gauze I
Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I Gauze I

+
+ + + ++ ++ ++

XK
XK XK XK XK XK XK XK XK

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 CP1.29 CP1.30 CP1.31 CP1.32 CP1.33 CP2.1 CP2.6 CP2.7 CP2.8 PT.1 PT.2 PT.3 PT.4 PT.5 PT.6 Gauze I Gauze I LB LB LB LB LB LB LB LB LB LB LB LB LB ++++ +++++ ++XK XK VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK

44
45

PT.7
PT.8

LB
LB

++++-

VK
VK

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

46
47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59

PT.9
PT.10 PT.11 PT.12 PT.13 PT.14 PT.15 PT.16 CP3.1 CP3.2 CP3.3 CP3.4 CP3.5 CP3.6

LB
LB LB LB LB LB LB LB LB LB LB LB LB LB

++++ +++++++ +++++ ++++-

VK
VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK

60
61

CP3.7
CP3.8

LB
LB

+++++

VK
VK

3.2. TUYN CHN CC CHNG VI SINH VT SINH TNG HP CELLULASE BNG PHNG PHP NH TNH

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

6.6% 45.9% 22.9%

Mnh Tng i mnh Trung bnh Yu

9.9%

14.7%

Khng c hot tnh

Hnh 3.1. T l (%) ca cc chng vi sinh vt sui nc nng c hot tnh cellulase khc nhau

Chng CP3.4 c ng knh vng phn gii ln nht (HT = 33 mm) (Hnh 3.2).

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Hnh 3.2. Hot tnh cellulase ca chng CP3.4

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

3.3. TUYN CHN CC CHNG VI SINH VT SINH TNG HP CELLULASE BNG PHNG PHP NH LNG
0,12 0,001
0,25 0,002 0,07 0,005 0,64 0,006 0,07 0,003 0,10 0,002
i nh H o t t t- ng (100% )

STT

Tn chng

Hot tnh (IU/ml)

120 100 80 60 40 20 0 CP3.1 CP3.2 CP3.3 CP3.4 CP3.5 CP3.6 CP3.7 CP3.8 PT.5 PT.6

1
2 3 4 5 6

CP3.1
CP3.2 CP3.3 CP3.4 CP3.5 CP3.6

7
8 9 10

CP3.7
CP3.8 PT.5 PT.6

0,08 0,001
0,13 0,007 0,11 0,010 0,16 0,004

Tn chng

Bng 3.2. Hot tnh cellulase ca mt s chng vi sinh vt phn lp t sui nc nng

Hnh 3.3. Hot tnh cellulase ca cc chng vi sinh vt

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

3.4. KH NNG SINH CELLULASE THEO THI GIAN Bng 3.3. nh hng ca thi gian nui cy ti kh nng sinh tng hp cellulase ca chng CP3.4
Thi gian (gi) Hot tnh (IU/ml)
120 100 80 60 40 20 0 16 18 20 22 24 26 28

18 0,43 0,008

20 0,74 0,012

22 0,87 0,009

24 0,67 0,004

26 0,50 0,007

Hot tnh tng i (%)

Thi gian (gi)

Hnh 3.4. Kh nng sinh tng hp cellulase ca chng CP3.4 theo thi gian

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

3.5. TNH CHT L HA CA CELLULASE 3.5.1. Thi gian phn ng ti u

Bng 3.4. nh hng ca thi gian phn ng ti hot tnh cellulase ca chng CP3.4
Thi gian (pht) 5 Hot tnh (IU/ml) 3,29 0,012 Thi gian (pht) 20 Hot tnh (IU/ml) 1,01 0,006

10
15
120 100 80 60 40 20 0 0

1,89 0,009
0,42 0,004

25
30

0,70 0,003
0,51 0,007

Hot tnh tng i (%)

10

15

20

25

30

35

Thi gian (pht)

Hnh 3.5. nh hng ca thi gian phn ng n hot tnh cellulase ca chng CP3.4

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

3.5.2. nh hng ca nng c cht n hot tnh cellulase

Bng 3.5. nh hng ca nng c cht n hot tnh cellulase
Nng CMC (%) 0,3 0,5 1,0 Hot tnh (IU/ml) 0,18 0,007 0,30 0,005 0,93 0,014 Nng CMC (%) 1,5 2,0 2,5 Hot tnh (IU/ml) 0,22 0,008 0,50 0,102 0,20 0,004

Hot tnh tng i (%)

120 100 80 60 40 20 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3

Nng CMC (%)

Hnh 3.6. nh hng nng c cht n hot tnh cellulase ca chng CP3.4

3.5.3. Nhit phn ng ti u

Nhit (0C) Hot tnh (IU/ml)

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Bng 3.6. nh hng ca nhit n hot tnh cellulase ca chng CP3.4

Nhit (0C) Hot tnh (IU/ml)

45
50 55

0,91 0,01
0,94 0,02 1,38 0,04

60
65 70

1,40 0,06
1,79 0,02 1,64 0,05

Hot tnh tng i (%)

120 100 80 60 40 20 0 40 45 50 55 60 65 70 75

Nhit (OC)

Hnh 3.7. nh hng ca nhit n hot tnh ca cellulase ca chng CP3.4

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

3.5.4. pH phn ng ti u
Hot tnh tng i (%)

pH 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,5 7,0

Hot tnh (IU/ml) 0,03 0,001 0,11 0,003 0,14 0,004 0,97 0,012 0,69 0,101 0,34 0,005 0,58 0,008 1,40 0,110 0,28 0,002

120 100 80 60 40 20 0 3 3.5 4 4.5 5 5.5

PH

Acetate

6.5

7.5

8.5

Phosphate

7,5 8,0

Bng 3.7. nh hng ca pH n hot tnh cellulase ca chng CP3.4

Hnh 3.8. nh hng ca pH n hot tnh cellulase ca chng CP3.4

3.5.5. nh hng ca ion kim loi

Kim loi C Mg2+ EDTA Pb2+ Mn2+ Cu2+ Fe3+ Hot tnh (IU/ml) 0,84 0,021 0,50 0,002 0,29 0,003 0,47 0,006 0,18 0,005 0,55 0,004 0,37 0,002
Hot tnh tng i (%)

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

120 100 80 60 40 20 0 C Mg EDTA Pb Mn Cu Fe

Ion kim loi

Bng 3.8. nh hng ca ion kim loi n hot tnh cellulase ca chng CP3.4

Hnh 3.9. nh hng ca ion kim loi n hot tnh cellulase ca chng CP3.4

 KT LUN

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

1. phn lp c 61 chng vi sinh vt, trong c 32 chng vi khun, 28 chng x khun, 1 chng nm. Trong s 61 chng vi sinh vt c 32 chng c kh nng sinh tng hp cellulase. 2. tuyn chn c chng vi khun: CP3.2, CP3.4, CP3.8 v PT.5 c hot tnh cellulase mnh. Chng CP3.4 c hot tnh cellulase mnh nht c chn tin hnh cc nghin cu tip theo. 3. Chng CP3.4 c kh nng tng hp cellulase mnh nht sau 22 gi nui cy. 4. Cellulase ca chng CP3.4 phn ng ti u thi gian 5 pht, nng c cht 1,0% (w/v) CMC, nhit 650C v pH = 7,5.

5. Cc ion kim loi kho st u c ch hot tnh cellulase ca chng CP3.4 theo cc mc khc nhau: ion Mn2+ c ch mnh nht, ion Cu2+ km hm nh nht.

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

NGH 1. Tip tc phn lp cc chng vi sinh vt sinh tng hp cellulase t nhiu ngun sui nc nng khc nhau.

2. Nghin cu cc yu t nh hng n kh nng sinh tng hp cellulase ca chng CP3.4 ti u ha kh nng sinh enzyme ca chng ny. 3. Tip tc nh gi cc tnh cht l ha ca cellulase ca chng CP3.4.
4. Nghin cu to enzyme ti t hp v nghin cu ng dng cellulase ca chng CP3.4.

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Xin chn thnh cm n !

Mt s hnh nh v cellulase

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Cu trc cellulase ca T. fusca

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

M hnh Endoglucanase Cel5A ca Bacillus Agaradhaerens

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Cu trc Cellulase ca B. agaradhaerens

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Cu trc Endo-Beta-1,4-Glucanase ca Acetobacter Xylinum

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

M hnh cellulase hot ng trn b mt cellulose

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

M hnh cellulase thy phn cellulose

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Cu trc cellulase ca T. fusca

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

M hnh Endoglucanase Cel5A ca Bacillus Agaradhaerens

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Cu trc Cellulase ca B. agaradhaerens

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Cu trc Endo-Beta-1,4-Glucanase ca Acetobacter Xylinum

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

M hnh cellulase hot ng trn b mt cellulose

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

M hnh cellulase thy phn cellulose

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHc.edu.vn

Xin chn thnh cm n !