ng php Lowry Nguyn t c: tnh hm l ng protein c a m u nghin c u d a vo ng chu n c a protein v v d a vo ph n ng mu c a protein v i thu c th Folin. C ng mu c a dung d ch t l thu n v i n ng protein.

Ph ng php Coomassie Brilliant Blue G-250 Nguyn t c: ph ng php ny d a vo s thay

Ph

i mu x y ra khi Coomassie

Brilliant Blue G-250 lin k t v i protein trong dung d ch acid, d ng proton ha c a thu c nhu m Coomassie Blue c mu da cam . Thu c nhu m lin k t ch t ch v i cc protein, t ng tc c v i nhm k n c v cc nhm mang i n tch d ng trn phn t protein. Trong mi tr ng c a cc g c mang i n tch d ng, s proton ha khng x y ra v c mu xanh xu t hi n. Ph ng php Bradford:  Thu c nhu m: dung d ch Coomassie Brilliant Blue G-250 (CBB G-250) 0.01%: 100mg CBB G-250, 50 ml ethanol 95% (4.7% w/v), 100 ml H3PO4 85% (8.5), d n n c n 1 lt.  L p th ng chu n theo hi u s o quang OD.  o h p thu OD, d a vo ng chu n suy ra hm l ng protein trong m u.

Ph ng php Smith & Roe c i ti n M i m u em i th nghi m u chu n b 1 m u th th t v th khng lm Ti n hnh th nghi m chu n b m u nh b ng sau: B ng 1: Thnh ph n m u th nghi m theo ph Dung d ch ha ch t D ch amylase (ml) m phosphate pH 6,2 (ml) Dung d ch tinh b t 1% (ml) Dung d ch NaCl 3% (ml) Dung d ch HCl 1N (ml)
o

i ch ng

ng php PP Smith & Roe c i ti n ng th khng 1 1 1 0,5 1 n nhi t 0 5,5 0,5 b c sng 620nm. 1 1 1

ng th th t

0,5 0 em 50 C, 40 pht trong b 1 5,5 0,5

Dung d ch HCl 1N (ml) N c c t (ml) Thu c th Lugol (ml) L c c n

u h n h p trong ng nghi m r i so mu

n v ho t tnh amlase trong tr ng h p ny c nh ngh a l l ng enzym th y phn 10mg tinh b t trong th i gian 40 pht, i u ki n 50oC, pH 6,2.
OD0  ODt C v OD0 10

Ho t tnh chung m u enzyme (UI/ml) = Trong : ODo:

h p thu

620 nm c a m u th khng. ng tinh

ODt: h p thu 620 nm c a m u th th t. C: l ng tinh b t tham gia ph n ng, y C = 10 mg l l b t c trong 1ml dung d ch tinh b t 1%. 10: l 10 mg tinh b t b th y phn trong nh ngh a. Ho t tnh chung (UI/ml) Ho t tnh ring m u enzyme (UI/mg) = Hm l ng protein (mg/ml)

N i dung th nghi m - Nui c y vi khu n Bacillus subtilis enzyme E-amylase. - Ph v t bo b ng ph

quy m bnh l c 250 ml

t o ngu n

ng php: dng sng siu m nh

- Ki m tra ho t tnh E-amylase theo ph ng php Smith & Roe c i ti n, l ng protein theo ph ng php Bradford. - Tinh s ch s b enzyme b ng ph ng php t a phn o n v i c n v ammonium sulfate. - Tinh s ch enzyme b ng ph ng php l c gel v i n di. Quy trnh th nghi m: