K THUT NH TNH BNG SC K GIY I.GII THIU V SC K GIY I. 1.

nh Ngha Sc k giy (SKG) l loi sc k dng giy lm gi mang pha tnh. y l mt k thut ha hc phn tch c dng tch v xc nh cc thnh phn trong cng mt hn hp ca cc cht mu, c bit l sc t.

Hnh 1.Sau khi chm hn hp phn tch ln giy, cho dung mi th 2 (pha ng) i qua cc cu
t s c phn tch thnh tng vng trn giy.

I.2. ng Dng Thng dng th nghim tinh khit, nh tnh, nh lng hay phn tch cc cht. y l mt k thut hu ch bi v n thc hin tng i nhanh chng v ch cn mt lng nh vt liu mu. Thng thng sc k giy dng nh tnh sn phm hn l nh lng cht. I.3. Nguyn l hot ng Trong sc k giy, pha tnh v pha ng u l cht lng. Pha tnh c hp th trong cc l xp ca giy (cht mang). S phn ly trong sc k giy lin quan

n cc nguyn tc ging nh trong sc k lp mng. Cht c phn b gia mt pha tnh v pha ng. Pha tnh thng l nc hoc thnh phn thn nc t hn hp dung mi ca pha ng c ht chn lc vo giy. Pha ng l mt h dung mi di chuyn i ln pha tnh, mang theo cc cu t c trong mu cng vi n. Cc cht c trong thnh phn ca mu s tch theo s hp thu mnh hay yu ty thuc vo kh nng tng tc ca cc cht vi pha tnh. Nh vy SKG l sc k phn b lng -lng, da vo h s phn b khc nhau ca cc cu t trong hn hp 2 cht lng khng ha tan vo nhau phn tch cc cu t c trong thnh phn mu. I.4. H S Di Chuyn t trng cho mc di chuyn ca mt cht ngi ta thng dng l h s di chuyn Rf v c tnh bng khong cch di chuyn ca cht so vi s di chuyn ca dung mi. Gi tr ca Rf bao gi cng nh hn 1.

Rf =
Trong : Rf: H s di chuyn

a b

a l khong cch di chuyn ca cht phn tch b l khong cch di chuyn ca dung mi. Trong trng hp sc k lin tc khng cn xc nh c gii tuyn ca dung mi, ngi ta dng h s di chuyn Rr. Rr l t s gia khong cch di chuyn ca cht phn tch v khong cch di chuyn ca cht dng lm chun so snh. Gi tr Rr c th nh hn hay ln hn 1. II. TRANG THIT B II.1. Giy sc k: Cht mang trong SKG thng l cellulose tinh khit dng giy c bit c dy v c ht khc nhau nn c hiu ng tch khc nhau, dng lm cht cho pha tnh. Ngoi ra, cc SKG khc cn c dng nh sc k trao i ion, sc k

pha o Wh CM 50,Wh P 20, Wh ct 30, Wh nos, cc loi giy lm t si thy tinh WhGF/A, WhGF/B, WhGF/C,. C thng s k thut ca SKG: dy (mm), trng lng (g/m2), chiu cao thm dung mi trong mt thi gian (h), * iu kin la chn giy sc k: + C sc cn va + ng nht v c ht v t trng + Tinh khit ha hc + t hp ph. II.2. Dung mi Sc k giy thng l sc k phn b nn dung mi lm pha tnh thng dng l cc dung dch nc, cn pha ng l nhng dung mi c phn cc thp hn pha tnh. * iu kin dung mi + Tinh khit cao + Cc dung mi dng lm pha ng ca cu t phi khc nahu trong hai pha. +Thnh phn dung mi trong qu trnh sc k khng c bin i. + Dung mi d khi loi khi giy. II.3. Bnh sc k Thng bnh hnh tr hay hnh hp ch nht v cht liu thng lm bng thy tinh, c np kn. Nn dng np thy tinh c mp mi nhm, khng nn dng nt cao su. III.QU TRNH V K THUT SC K III.1. Chun b Chn bnh sc k c kch thc thch hp. Bnh phi c kch thc thch hp, c np y kn. Np c l gia lp bnh gn c kho ng dung mi. Trong bnh c cc gi mng ng dung mi v treo giy sc k c thit k thch hp cho kiu khai trin sc k. Chun b dung mi:

Trn cc dung mi theo t l. Thnh phn v t l cc h dung mi c quy nh trong cc chuyn lun. Vic trn cc thnh phn c tin hnh trong bnh gn, sau khi lc u, yn. Nu c tch lp th gn ly lp pha thn nc, thng l lp di, lm dung mi pha tnh bo ho giy sc k sau khi chm cc cht phn tch, cn lp trn dng lm dung mi pha ng. Nu dung mi khng tch lp th dng chnh dung mi bo ho giy sc k. (vd: h butanol-acid aceticnc 50:1:50 sau khi trn xong s phn thnh hai lp (2 pha), mt lp s l nc acid bo ha butanol (pha tnh), mt lp s l butanol bo ha nc (pha ng)) Chun b giy: Giy sc k l loi giy c bit v ph hp vi yu cu cho sc k, c b dy thch hp. Tu theo kch thc ca bnh v s lng cc vt cn chm m ct nhng kh giy hnh ch nht thch hp, chiu di dc theo th giy. Chiu rng phi nh hn chiu di ca mng dung mi nhng khng c nh hn 2,5 cm. B di phi tnh sao cho khi treo giy vo bnh khng c u di chm vo mng dung mi trong khi bo ho dung mi. Trng hp bnh sc k c hnh chung p th giy phi cun trn v c nh bng mc thy tinh hoc khu bng ch. ng knh ca cun giy phi nh hn ng knh ca a giy (sau khi bo ho bnh s rt dung mi vo a ny) nhm trnh giy chm vo thnh a v s lm qu trnh phn tch km i. III.2. Sa son cht th Cht th phi c loi tp cht hon ton v c ha tan vi mt lng dung mi ti thiu. Dung mi hay c s dng trong phng th nghim l: chloroform, methanol, acetol. III.3. Chm dung dch ln giy K mt ng ch mnh song song vi mp giy (ng vch chm sc k) theo chiu rng v cch mp giy 3 cm i vi sc k i ln sao cho cc vt chm khng b ngp vo dung mi, 6 cm i vi sc k i xung vch chm khng trng vi a thy tinh giy m thp hn 2 cm khi t giy treo vo mng phn trn ca bnh.

Dng ng mao qun hay micropipet 1-10 l chm ln nhng im nh du trn giy, vt chm phi gn, ng knh khng qu 5mm. Mi ln chm phi sy kh mi chm tip ln 2. Lng chm v nng dung dch cht th c quy nh trong chuyn lun. Khi chm nhiu vt trn mt di giy th vt chm n phi cch vt chm kia t nht l 30 mm III.4. Khai trin sc k Giy c chm dung dch v c bo ha hi dung mi s c nhng vo dung mi pha ng. Sau khi trin khai xong, lm kh giy bng nhit phng hoc sy 100oC trong 10-15 pht. C nhiu phng php dung khai trin sc k giy ty thuc vo cht cn phn tch m dng cho thch hp. Phng Php Khai Trin Sc k i ln: u giy c cht phn tch nhng vo dung mi y bnh. Pha ng chy ln nh lc ht mao qun. u im Dng c n gin Thao tc nhanh C th nh lng v tch cc cht c Rf khc Nhc im Trng lc tc dng ngc chiu vi lc ht mao qun nn tc ht gim nhanh khi

xa nhau chy ln. Sc k i xung: u giy c chm C th tch cc cht c Rf Dng c phc tp hn cht phn tch nhng vo mng dung mi. Pha ng chy t trn xung nh trng lc. Sc k i ngang: Giy ct hnh vung hoc hnh ch nht c t nm ngang trn cc a thy tinh. u giy chm cht phn tch khc nhau. C th nh lng Dng c n gin c th t trong t m hoc t lnh. nh lng nhanh ng, Ch dng nh tnh Vic so snh vi cht khc mu c kh cc phng php khc.

nhng vo chu dung mi. acid amin, cht bo. Sc k hnh trn: Giy ct hnh trn Thao tc nhanh c mt bc, c nhng vo chn dung mi. Pha ng i t tm ra Vng tch nh, chnh xc Hiu ng tch cao hn

theo ngoi vng trn. Sc k hai ln: s dng hai dung mi v quay 90 giy gia. u tin t u giy hng xung tng t nh sc k i xung, n xoay gc 90o gia t giy v chuyn sang h dung mi khc. III.5. Pht hin cc vt

cc phng php trn. Hiu ng tch tt khc nhau. Tch hn hp phc tp amin, ng,

khn. Dng c phc tp hn khc.

C th tch cc cht c Rf cc phng php

khi cht phn tch gia t giy th ca cc hp cht; acid

Sau khi khai trin cc cht c phn b trn giy cc v tr khc nhau hnh thnh sc k . C th php hin cc cht bng mt (cht mu), hay bng cch chiu tia UV, hay phun thuc th mu nh: ninhydrin, iodine, IV.U IM v KHUYT IM IV.1. u im K thut v dng c n gin,d thc hin. L phng php vi phn tch v lng mu phn tch nh. C th ng dng xc nh nhiu ch tiu nh nh tnh, nh lng, xc nh tp cht lin quan,. Sc k giy hin l phng php n gin nht tch v pht hin cc cht c cha nguyn t phng x. IV.2. Khuyt im Khng lm sc k ch ha bng sc k giy. Khng dng cc ha cht c tnh n mn trong pht hin vt. Thi gian khai trin lu t 4-5 gi (mt mu sc k giy c th khai trin t 2-3 ngy). Giy d hp ph cc ha cht khc c trong mi trng nn phi bo qun giy sc k tht k. IV. NG DNG CA SC K GIY TRONG K THUT NH TNH

IV.1. nh tnh v th tinh khit Tng t nh trong sc k lp mng, thng sc k so snh vi cht chun nh tnh (da vo gi tr Rf ). nh tnh mt cch tng i chc chn cn tin hnh sc k vi t nht vi h dung mi khc nhau. Cht th c coi l tinh khit khi trn sc k khng c vt l. IV.2. Mt s v d IV.2.1. nh tnh xylose bng sc k giy H dung mi: BuOH-pyrimidin-nc (6:4:2) Giy sc k: Wh No1 hay giy tng ng.Chm cht chun v mu th cch ba giy 6cm Thuc th: Ha 1,66 g acid phtalic v 0.93g aniline mi chng ct trong 100ml BuOH Cht chun: Ha tan xylose chun thnh dung dch 100mg/ml trong nc,lng chm 2 Mu th: Cn 1 g Xylose pha trong nc thnh 10ml,lng chm 2 l .Vt chm c ng knh khng qu 3mm. Khai trin: Theo k thut trn xung. Cho dung mi vo bnh bo ha hi dung mi trong thi gian trn 16h. t giy vo bnh bo ha 4h. Sau khai trin, ly ra sy kh,phun thuc th, sy 105oC/5=10 phut1, c th soi UV. Tnh Rf .