You are on page 1of 40

PHNG PHP KIM TRA VI SINH VT TRONG CC SN PHM THY SN NG LNH Kim tra vi sinh vt l mt trong nhng cng

tc cn thit phi tin hnh khi nh gi cht lng cc sn phm thy sn ng lnh, cc ch tiu v vi sinh vt ca cc sn phm thy sn ng lnh c ra 1 cch nghim ngt, buc cc nh sn xut v kim tra cht lng sn phi nghim chnh thc hin, c bit l cc sn phm thy sn ng lnh xut khu. Bi v vi sinh vt c kh nng gy c v gy bnh truyn nhim rt nguy him. Cc ch tiu vi sinh vt cn kim tra i vi sn phm thy sn ng lnh bao gm: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Tng s vi sinh vt hiu kh Tng s coliform S Escherichia coli S staphylococcus aureus S Salmonella S Shigella

PHNG PHP KIM NGHIM VI SINH (khng ch kim tra vi sinh m cn kim tra ha hc, kim tra cm quan) 4.1. Phng php ly, vn chuyn v bo qun mu kim vi sinh 4.1.1. Ly, vn chuyn v x l mu 4.1.1.1. K hoch ly mu 4.1.1.1.1. Ly mu kim tra l hng Lng mu kim tra l hng ty thuc vo tng sn phm c th, nhng khng c t hn yu cu kim nghim. ng vi tng loi thc phm km theo mt lng xc nh s c gii hn mt s lng vi sinh vt nht nh cho php tn ti trong mt hng . Thng thng th i vi vi sinh vt gy bnh, yu cu t ra l khng c hoc khng pht hin trong mt khi lng thc phm xc nh. nhn bit cc mu thc phm khng t yu cu, ngi ta thng thc hin ly mu v ghi nhn kt qu theo cc cp c thit lp nh sau: Cp 1: cch ly mu c in, trong vic nh gi kt qu kim nghim ch da trn mt gi tr duy nht ca mu. Cp 2: k hoch ly mu loi 2 c dng cho cc th nghim tnh vi sinh vt gy bnh. Kt qu c coi l khng t khi mt trong s tng s mu ly b pht hin c vi sinh vt gy bnh. Cp 3: Kt qu t yu cu khi:

Mt vi sinh nh hn thng s gii hn di (c thm iu kin). Mt vi sinh ln hn thng s gii hn di v nh hn thng s gii hn trn. Kt qu khng chp nhn khi mt vi sinh cao hn gii hn trn. Thng thng gii hn trn cao hn t nht 10 ln so vi gii hn di. 4.1.1.1.2. Ly mu kim tra v sinh cng nghip Lng mu phi phn tch, thng thng trng lng mu ti thiu c qui nh nh sau: Dng rn (phn tht): 200 g. Dng lng (nc dng trong ch bin): 500 ml. 4.1.1.2. Phng tin ly mu v dng c cha mu 4.1.1.2.1. Phng tin ly mu ly mu hoc khui m bao b, cn thit phi s dng: Phng tin ph hp. Dng c c ch t vt liu d lm sch, d kh trng, khng tc ng ln mu hoc b mu tc ng. Vi cc loi thc phm khng bao gi, phi dng dng c v trng ly mu.

Trong thi gian ly mu, nu cn thit dng n nhit k, th phi s dng cc nhit k chun vi bin 30 - 100oC c mc chnh xc 1oC. 4.1.1.2.2. Dng c cha mu Dng c cha mu phi bo v c mu trnh b nhim v trnh cc thay i do cc yu t l hc, ho hc, sinh hc, gy ra. Dng cc bnh cha bng thy tinh, ti nha, hp nha hoc kim loi chuyn dng. Trng hp cn thit, th cc dng c ny phi gn thm nhit k o nhit bn trong khi n phng th nghim. Vi cc mu thc phm mau h hng th phi dng nhng thng cch li. Dng c cha mu phi kh, sch, v trng v c kch thc ln cha c lng mu n 200 g. Khi cn thit dng bng keo dn thng cha mu th nn dng bng dnh chc khng lm thay i mu bn trong. 4.1.1.3. Ly mu 4.1.1.3.1. Ly mu kim tra l hng Vic ly mu phi do nhng ngi tho cng tc ly mu thc hin. Nhn vin phn tch ti phng th nghim cng phi c nhng kin thc cn thit v k thut ly mu c nhng khuyn co ph hp trong trng hp vic ly mu c thc hin bi nhng ngi khng chuyn.

Khi ly mu cn phi m bo nhng mu ly mang tnh i din cho l hng hoc cho hot ng cn kim tra v lng mu ly tin hnh vic phn tch. Thng mu c ly mt cch ngu nhin v bt k. Mu kim t thc phm khng bao gi hoc mu ca mt l hng ln cn c cn ly t nht 200 g hoc khng ly t hn 2 n v sn phm. Vi sn phm bao gi, phi ly nhng mu bao b cha m. 4.1.1.3.2. Ly mu nc Trc khi ly mu nc cn phi xc nh v tr ly mu. Thc hin: Dng n cn t nh xung quanh ming vi nc kh trng. M van cho nc chy khong 2 pht, iu chnh van sao cho nc chy y ming vi, khng bn tung te. Dng bnh xt cn kh trng tay. Dng n cn t nh xung quanh ming bnh thy tinh cha mu (bnh phi c kh trng trc khi ly mu). M np bnh, nhanh chng hng nc t vi, lng nc vo khong 2/3 th tch bnh cha, khng nc chy trn ra ming hoc bn ra ngoi, vn kn np bnh.

Dng cn kh trng bnh cha mu ri cho bnh vo ti PE v trng. Ghi th nhn din mu v vi nc, cho th vo ti chung vi bnh cha mu. Buc kn ming ti bng dy thun hoc bm bng kim bm. Cho mu vo thng cch nhit c cha xay nh ph quanh ti mu. 4.1.1.3.3. Ly mu bn thnh phm trn dy chuyn Xc nh v tr v thi im ly mu trc khi tin hnh:

STT

Cng on

Thi im ly mu Nguyn liu sau khi tip nhn t i l, cha qua ra s b. Sau khi ra xong, ang ro nc. Ly mu ngay trong khi ang sn xut. Trong cc khun xp sn phm. Trc v / hoc sau khi gia nhit, sau khi lm ngui.

Tip nhn nguyn liu Cc cng on ra Cc cng on ch bin Cng on xp khun Cc cng on c gia nhit

2 3 4

Cng on ch ng

Trc, trong v / hoc sau khi ch ng.

Thc hin: Dng cn kh trng tay nhn vin ly mu. Dng kp v trng, ly mt khi lng mu nht nh cho ti PE, khng mu chm vo ming ti. Dng kim bm bm kn ming ti. Ghi tn mu v cng on ly mu vo th nhn din mu. Dng kim bm bm th ny vo ming ti cha mu. Sau , c mu v th c cho chung vo mt ti PE khc, ct kn ming ti bng dy thun hoc bm kn bng kim bm. Cho ti mu vo thng cch nhit, cho xay nh ph quanh ti mu. 4.1.1.3.4. Ly mu v sinh khng kh Xc nh v tr v thi im ly mu trc khi tin hnh: V tr: cn ch nhng khu vc c mc nhim cao. Thi im ly mu: trc v / hoc trong khi ang sn xut. Thc hin:

Dng cn kh trng tay v b mt v tr cn ly mu. t a Petri c cha mi trng thch thch hp ( kh trng) vo v tr cn ly mu. h hon ton y a v gc g np ln g y a Petri. Sau khong thi gian quy nh (15 - 30 pht), y np li, cho a vo ti PE v trng. Dng kim bm bm kn ming ti. Ghi nhn thi gian v a im ly mu vo th nhn din mu. Dng kim bm bm th ny vo ming ti cha mu. Sau , c mu v th c cho chung vo mt ti PE khc, ct kn ming ti bng dy thun hoc bm kn bng kim bm. Cho ti mu vo thng cch nhit, cho xay nh ph quanh ti mu. Ngoi nhng loi mu c ly nh trn, ty thuc vo quy nh ca mi x nghip, cn c th tin hnh ly nhng loi mu nh: tay / gng tay cng nhn; b mt dng c, thit b tip xc trc tip vi sn phm; 4.1.1.4. Ghi nhn v h s mu 4.1.1.4.1. Ghi nhn trn mu Mu cn c ghi nhn ngay trc hoc sau khi ly mu. Nhn phi ghi cho ph hp vi h s ly mu. Nhn ghi phi chu c nh sng, khng thm nc.

Nhn ghi khng c thay i v ty xo trong thi gian bc xp, bo qun v vn chuyn. Nhn phi c kch thc ln ghi nhn mi thng tin cn thit. 4.1.1.4.2. Ghi nhn trn vt dng chuyn mu Trn vt dng chuyn mu, nhn cn c ghi: Tn, a ch, s in thoi ca ngi nhn. Nu cn gi li, tn ngi gi cng phi c ghi trn nhn. Cc ch cn thit khc nh: d v, thc phm cn tr lnh, mu kim nghim, mt tn, 4.1.1.4.3. H s mu Mi mu phi c nh km theo mt h s mu, xc nh r mu ph hp vi nhn ghi trn mu hoc thng cha mu. H s mu c coi l hp l khi c ch k ca ngi ly mu v ngi ch l hng thc phm c mu c ly. H s mu cn c nhng thng tin sau: Ngi yu cu phng th nghim thc hin ly mu phn tch: tn, a ch, s in thoi,.. Tn, a ch, s in thoi ca ngi ly mu. a im v thi gian ly mu.

Thng tin v thc phm c ly mu: tnh cht thc phm, ngy sn xut, thi hn s dng, iu kin bo qun, dng bao b, Nguyn nhn ly mu: kim tra, b khiu ni, Phng php ly mu: ly ngu nhin trong l hng, ly ngu nhin t s mu c sn, Cc ch tiu cn phn tch: E.coli, Salmonella, Shigella, Ngoi ra cn c thm nhiu thng tin khc. 4.1.1.5. Vn chuyn v bo qun mu Mu sau khi ly, cn chuyn v phng th nghim cng nhanh cng tt. Khi vn chuyn, bo qun cn m bo sao cho khng c bin i ng k no xy ra trc khi phn tch. Mu cn c bo qun tt chng li s nhim khun v nhng thay i trong thnh phn vi sinh vt. ng thi vic vn chuyn mu cn thu xp sao cho mu v n phng th nghim trong vng 18 gi v nh vy vic phn tch c th bt u trong vng 24 gi k t khi ly mu. i vi nhng mu thc phm mau h hng th cn c vn chuyn nhanh, bo qun trong nhng thng cch li ng kn c km theo phng tin lm lnh hoc thng nha cha (hoc bng kh CO2 rn) duy tr nhit ca mu (nhit mu cng thp cng tt). Trnh mu tip xc trc tip vi hay bng khng b ng .

i vi cc mu hng ng lnh, cn c a vo cc bnh cha lm lnh t trc v gi trong trong ngn ngay sau khi ly mu. Chng c chuyn i trong cc thng cch li. Nu thi gian vn chuyn qu lu lm xy ra hin tng r ng, cn dng bng kh lm cht h nhit. Khi vn chuyn mu dng kh hoc hp th khng cn thit lm lnh, c th vn chuyn trong cc ti nylon, song trong thi gian vn chuyn v bo qun mu khng c nhit vt qu 45oC v khng gi mu trong mi trng c m qu cao. 4.1.2. Tip nhn mu ti phng th nghim Ngi gi mu ti phng th nghim phi thng bo trc cho phng th nghim thi im mu n. ng thi phng th nghim cng cn c thng bo v loi mu s kim v cc php phn tch cn thc hin. Khi n phng th nghim, mu phi c kim tra: Nhn ghi trn mu c ph hp vi s ca h s mu trong s theo di khng. Nhit v thi gian khi mu n, ring vi nhit th: o nhit ngay trn mu chnh: nhngnhit k vo dung dch hypochlorine cha khng di 100 mg / l chlorine hot tnh (mc ch kh trng) hoc dung dch kh trng cha halogen c tnh st khun tng ng. Sau trng li nhit k bng nc v trng, lau kh bng khn v trng trc khi s dng. o nhit trn mt mu ph (mu ph c x l nh mu chnh). Bnh cha mu c r r khng, c c ng k khng, c b nt, thng gy nhim vo mu khng.

Vi mu ng gi dng chn khng, cn kim tra k tnh trng chn khng trong mu: c kh to ra trong cc bao b kn khng, bao b c h, thng hoc nt khng, iu kin l tnh bn trong c bnh thng khng, Nu bao b b h hng cn ghi nhn vo bo co phn tch. Trong trng hp nhn thy bng cm quan mu b hng hoc b nhim trong thi gian vn chuyn c th xem xt v t chi nhn mu, tr khi mun thm tra li kt qu phn tch v mt vi sinh. Kim tra nhng mu nghi ng gy dch bnh. Khi chp nhn mu, th mu c bo qun trnh khi cc tc nhn ho, l, c hc c th lm bin i mu. Phng th nghim cn c y phng tin tr lnh ln cha mu v mu lu. 4.1.3. X l mu s b ti phng th nghim Do mu c ly v mt lng kh ln so vi lng em i phn tch, ng thi cn km theo nhn, bao b,hoc trng hp cn phi r ng mu,nn mu cn c x l s b trc khi tin hnh phn tch. 4.1.3.1. Xc nh h vi sinh vt bn trong cc loi thc phm rn Kh trng b mt sn phm bng bn kim loi t nng hoc ngn la. Dng dng c v trng g b cc nhn hiu trn b mt. Ly mt lng mu bn trong, t nht khong 10 g.

Chuyn mu vo bao, rt dch pha mu v cn, t l mu : dch pha mu l 1 : 9. ng nht mu trong ti dp mu trong 30 giy vi mu d dp v 1 pht vi mu kh dp. Pha long mu nng thch hp tin hnh phn tch ngay. 4.1.3.2. Xc nh h vi sinh vt b mt cc loi thc phm rn nh du mt khu vc b mt mu bng khun v dao m, ly mt lp mng b mt dy 1 - 2 mm vi din tch ti thiu l 10 cm2. Cho vo bao, pha long theo t l 1 : 9, 10 g + 90 ml dung dch pha long. ng nht mu trong ti dp mu trong 30 giy vi mu d dp v 1 pht vi mu kh dp. 1 ml dch pha long tng ng vi s vi sinh vt trn 1 / 100 b mt chn (1 ml ng vi 0,1 cm2 khi b mt ly mu l 10 cm2) v c th dng cy vo trong hoc ln trn cc c cht tng ng. 4.1.3.3. Xc nh h vi sinh vt trong cc loi thc phm lng Trn mu bng cch o ngc chai 10 ln (hoc theo hng dn c th tu tng phng php). Dng pipetman cy chuyn vo mi trng thch hp. C th pha long mu nu cn. Sau khi ly mu v x l s b, mu cn c phn tch cng sm cng tt, thi gian phn tch ti a trong vng 24 gi k t khi ly mu.

4.2. Qu trnh phn tch cc ch tiu vi sinh vt Sau y l mt s vi sinh vt thng c kim tra trong hng thy sn: 4. .1. ng s i hu n hiu h

4.2.1.1. nh ngha v nguyn tc Vi khun hiu kh l nhng vi khun tng trng v hnh thnh khun lc trong iu kin c s hin din ca oxi phn t. Qui trnh phn tch bao gm cc bc: cn mu, ng nht mu, pha long mu, chuyn v phn phi u mt th tch xc nh mu ln b mt mi trng rn trong a Petri, iu kin nhit v thi gian quy nh. 4.2.1.2. i tr ng v h a cht

Mi trng Plate Count gar (PC ) c pH ,0 0,2. Ngoi ra c th s dng cc mi trng khc: Tryptose Glucose gar, Nutrient gar. Dung dch nc mui pepton SPW (Saline Pepton Water). 4.2.1.3. ui tr nh ph n t ch 4.2.1.3.1. hn mu trc hi ph n t ch Trc khi tin hnh phn tch, thc hin vic ng nht mu nh sau:

i vi mu rn: Cn chnh xc 10 g mu vo trong bao PE, thm vo lng mu ny 0 ml dung dch SPW pha long. Thc hin ng nht mu bng my dp mu. Thi gian dp mu khng qu 2,5 pht. Thc hin ng nht mu trong trng hp khng c my dp mu: Xay nhuyn mu trong iu kin v trng. Cn chnh xc 10g mu, cho vo bnh tam gic. sung vo trong bnh 0 ml nc SPW c hp kh trng. Lc u trong 2 pht. i vi mu dng lng: ht 10ml mu cho vo bnh tam gic cha 0 ml nc SPW c hp kh trng, lc u. Sau khi c lm ng nht bng mt trong cc phng php trn, dung dch mu thu c c pha long l 10-1 so vi ban u. Nu cn, th tin hnh pha long dch mu n pha long cn thit. 4.3.1.3.2. y mu Chn 2 hay 3 pha long lin tip d kin cha 25 - 250 t bo vi sinh vt trong 1 ml cy ln a Petri. Dng pipet v trng hoc pipetman vi u tip v trng chuyn 1 ml dung dch pha long chn vo gia a. ng vi mi pha long cy t nht 2 - 3 a.

Sau khi cy, vo mi a 10 - 15 ml mi trng PC mi trng bng cch xoay

c un chy v n nh 45oC. Trn u dch mu vi

trn a Petri ngay sau khi mi trng. t cc a trn mt ph ng ngang cho thch ng c. Lt ngc v cc a trong t m nhit 30 1oC trong 2 gi. 4.3.1.3.3. ch t nh t qu Chn cc a c s m t 25 - 250 khun lc tnh kt qu. Mt tng vi sinh vt hiu kh trong 1g hay 1ml mu c tnh nh sau: A (CFU / g hay CFU / ml) = N / ( n1Vf1 + + niVfi) Trong : : s t bo vi khun trong 1g hay 1ml mu. N: tng s khun lc m c trn a chn. ni: s lng a cy ti pha long th i. V: th tch dch mu (ml) cy vo trong mi a. fi: pha long tng ng. Cc kt qu tng s vi sinh vt hiu kh thng c biu din di dng s m ca c s thp phn.

4. . . h

li

gi ng Escherichia coli

4.2.2.1 nh ngha oliforms, oliforms chu nhit, oliforms ph n v E. coli Coliforms l nhng trc khun gram m, khng sinh bo t, hiu kh hoc k kh ty , c kh nng ln men lactose sinh acid khi c 37oC trong mi trng canh Lauryl Sulphate v canh Brilliant Green Lactose Bile Salt. Nhm Coliforms gm 4 ging: Escherichia vi 1 loi duy nht l E. coli, Citrobacter, Klebsiella v Enterobacter. Tnh cht sinh ho c trng ca nhm ny c th hin qua cc th nghim Indol (I), Methyl Red (MR), Voges Proskauer (VP) v Citrate (iC) thng c gi chung l IMViC. Coliforms chu nhit l nhng Coliforms c kh nng ln men lactose sinh hi trong khong 24 gi khi c 44oC trong mi trng canh E. coli medium (EC). Coliforms phn (E.coli gi nh) l Coliforms chu nhit c kh nng sinh indol khi c 24 gi 44,5oC trong canh Trypton. E. coli l Coliforms phn, cho kt qu th nghim IMViC l (+ + - -). 4.2.2.2. nh l ng oliforms, oliforms chu nhit, oliforms ph n v E. coli ng phng php P

4.2.2.2.1. guyn tc Phng php MPN c dng trong nhng thc phm c cha lng Coliforms, Coliforms chu nhit, Coliforms phn v E. coli vi mt thp. Phng php ny da trn nguyn tc: Mu c pha long thnh mt dy thp phn. 3 hoc 5 mu c pha long lin tip c trong ng nghim cha mi trng thch hp c ng by kh Durham. Lp li 3 n 5 ng vi mi nng pha long. Theo d i v ghi nhn s ng nghim cho phn ng dng tnh (sinh hi v i mu) mi nng pha long. Da vo bng MPN, suy ra s lng nhm vi sinh vt tng ng hin din trong 1 g ( hoc 1 ml) mu ban u. 4.2.2.2.2. i tr ng v h a cht

Mi trng lng Lauryl Sulphate roth LSB ( canh Lauryl Sulphate). Mi trng lng rilliant Green Lactose ile Salt (canh G L). Mi trng lng E. coli ( E.coli medium, canh EC).

Cc mi trng lng trn c chun b trong cc ng nghim cha ng Durham p ngc. Sau khi kh trng, ch s dng cc ng nghim khng c bt kh bn trong ng Durham. Canh Tryptone v canh MR-VP. Mi trng rn Simmon Citrate gar ( thch Simmon Citrate). Dung dch nc mui pepton SPW ( Saline Pepton Water). Thuc th Kovacs, Methyl Red, - napthol. 4.2.2.2.3. ui tr nh ph n t ch Chun b dch ng nht ho hoc pha long mu long cn thit. a. nh l ng Coliforms Cy 1 ml dch mu pha long 10-1 vo 3 ng nghim, mi ng cha 10 ml canh LS . Thc hin tng t vi dch mu pha long 10-2 v 10-3. 3 oC. Ghi nhn s ng c kt qu (+) (c sinh hi). Dng que cy vng cy chuyn dch mu t cc ng LS (+) sang cc ng cha canh G L. 3 1oC trong 4 gi. Ghi nhn s ng c kt qu (+) ng vi mi pha long.

. nh l ng oliforms chu nhit Dng que cy vng cy chuyn mt vng dch mu t cc ng canh LS (+) sang mi trng canh EC, 44,5 0,2oC trong 24 3 gi. m s lng cc ng cho kt qu (+) mi pha long. c. nh l ng Coliforms phn Cy ria dch mu t cc ng (+) trn mi trng canh EC sang mi trng thch a EM . cc a ny 3 oC trong 24 gi. Chn khun lc Coliforms phn hay E.coli gi nh (c im: trn, dt hnh a v c nh kim tm) c ng knh ln hn 1 mm, cy chuyn vo canh Trypton, 44,5 0,2oC trong 24 gi. Nh thuc th Kovacs vo cc ng nghim . Phn ng dng tnh khi c mu xut hin trong mi trng trong vng vi pht. Ghi nhn s lng cc ng cho kt qu (+) trn mi trng Trypton ng vi mi pha long. d. nh l ng E. coli Cy ria dch mu t cc ng (+) trn mi trng canh EC sang mi trng thch EMB. cc a ny 3 oC trong 24 gi.

Chn khun lc E. coli gi nh (c im: trn, dt hnh a,c nh kim tm) c ng knh ln hn 1 mm v cy vo cc mi trng MRVP, Simmon Citrate gar thc hin cc th nghim IMViC. ng cho kt qu (+) trong canh EC v khun lc E. coli gi nh trn mi trng EM IMViC l + + - - l ng c E. coli (+). Ghi nhn ng nghim c E. coli (+) cng vi pha long. 4.2.2.2.4. ch c t qu cho kt qu th nghim

Tra bng MPN tnh mt vi sinh vt trong mu v biu din di dng tr s MPN / g hay MPN / ml mu ban u cha pha long. 4.2.2.3. nh l ng oliforms, oliforms ph n 4.2.2.3.1. guyn tc Cy mt lng nht nh mu c ng nht ha ln mi trng thch chn lc thch hp cha lactose, mui mt,.... 3 1oC trong 24 - 4 gi. m s khun lc Coliforms ln men lactose v sinh acid thng qua c im: khun lc c mu n mu m, ng knh 0,5 mm, xung quanh khun lc c vng ta ca mui mt. ng phng php m hun lc

Vic kh ng nh Coliforms c thc hin bng cch nui cy khun lc trn trn mi trng canh chn lc BGBL. nh lng Coliforms phn, thc hin tng t nhng thay i nhit l 44oC. 4.2.2.3.2. i tr ng v h a cht

Mi trng Tryptone Soya gar (TS ). Mi trng Violet Red ile gar (VR ). Mi trng canh rilliant Green ile Lactose roth ( G L). Mi trng canh EC roth v mi trng canh Trypton roth. Thuc kh Kovacs hay Indol. 4.2.2.3.3. uy tr nh ph n t ch ng nht ha v pha long mu sao cho tng t bo Coliforms t hn 100 trong 1ml dung dch pha long. Chuyn 1 ml dch mu pha long vo a Petri. sung vo mi a cy mu khong 5 ml mi trng TS chy v n nh 45oC). Lc trn a petri trn u dch mu vi mi trng. nhit phng 1 - 2 gi hi phc cc t bo b tn thng. Thm vo mi a 10 - 15 ml mi trng thch VR (45oC) ln trn mi trng TS . Ch mi trng trong a ng c, lt ngc a v 3 1oC trong 24 - 4 gi. Lm tng t vi 2 nng pha long lin tip, lp li t nht 2 a ng vi mi nng pha long. Th nghim kh ng nh Coliforms: ( un

Chn t nht 5 khun lc b nghi ng l Coliforms. Trng hp kh ng nh Coliforms tng s: Dng que cy vng cy sang cc ng cha mi trng G L. cc ng nghim 3 1oC trong 24 - 4 gi. Kt qu kh ng nh (+) khi Coliforms tng trng lm c mi trng v sinh hi trong ng Durham. Trng hp kh ng nh Coliforms phn: Dng que cy vng cy sang cc ng cha mi trng EC. cc ng nghim 44oC trong 24 - 4 gi. Cc khun lc cho kt qu (+) trn EC c thc hin th nghim Indol 44 oC. Th nghim kh ng nh Coliforms phn ch c xem l (+) khi va (+) trn mi trng EC va (+) trn th nghim Indol. Tnh t l kh ng nh l t s gia s khun lc cho kt qu (+) vi khun lc c dng trong th nghim kh ng nh. 4.2.2.3.4. ch t nh t qu Da vo s khun lc m c v t l kh ng nh, tnh mt Coliforms, Coliforms phn theo cng thc sau: A (CFU / g hay CFU / ml) = (NR) / (n1vf1 ++ nivfi) Trong : N: tng s khun lc m c.

ni: s a c s khun lc c chn ti mi pha long. v: dung tch mu (ml) cy vo mi a. fi: pha long c s khun lc c chn ti cc a m. R: t l kh ng nh. 4.2.2.4. nh l ng E. coli 4.2.2.4.1. guyn tc Mu c ng nht ha c cy mt lng nht nh ln mi trng thch chn lc thch hp cha lactose, 44oC trong 24 gi. m cc khun lc c hnh dng c trng ca Coliforms. Kh ng nh cc khun lc m l E. coli bng th nghim IMViC. 4.2.2.4.2. i tr ng v h a cht ng phng php m hun lc

Mi trng canh Tryptone Soya gar (TS ) v mi trng thch Violet Red ile gar (VR ). Mi trng canh Lactose Tryptone Lauryl Sulphate roth (LST roth). Mi trng canh Tryptone roth v mi trng canh MR - VP Broth. Mi trng thch Simmon Citrate.

Thuc kh Kovacs. 4.2.2.4.3. ui tr nh ph n t ch Mu c ng nht pha long v nh lng tng t nh phn Coloforms phn, ring bc kh ng nh c tin hnh nh sau: Chn 5 khun lc nghi ng l E. coli. Dng que cy vng cy sang mi trng canh EC, 44 0,5oC trong 24 gi. Chn cc ng cho kt qu (+) (sinh hi) v dng que cy vng cy sang cc mi trng sau : canh Tryptone, canh MRVP, thch Simmon Citrate. cc mi trng trn 44 0,5oC trong 24 gi.

Thc hin th nghim IMViC v ghi nhn s khun lc E. coli (+). 4.2.2.4.4. ch t nh t qu Tnh t l kh ng nh v tnh mt E. coli (CFU / ml hay CFU /mg) theo cng thc tng t mc 4.2.2.3.4 trn. 4.2.3. Staphylococcus aureus 4.2.3.1. nh ngha v nguyn tc Staphylococcus aureus l vi khun hiu kh hay k kh ty , hnh cu, gram dng, c th nghim coagulase, phosphatease (+), c kh nng ln men v sinh acid t mannitol, trehalose, sucrose.

Tt c cc dng S. aureus u mn cm vi novobiocine, c kh nng tng trng trong mi trng cha n 15 % NaCl. Hu ht cc dng u to sc t vng sau 1 - 2 ngy nui cy nhit phng, c th tng hp enterotoxin trong mi trng c nhit trn 15oC. S. aureus c th nhim vo trong thc phm qua con ng tip xc gia ngi vi thao tc trong qu trnh ch bin thc phm. S. aureus c xc nh trn c s cc c im tng trng v phn ng ng huyt tng ca cc dng thun t cc khun lc c trng trn mi trng phn lp. 4.2.3.2. i tr ng v ho cht

Mi trng canh Mannitol Salt Broth (MSB). Mi trng thch mu. Mi trng thch Baird Parker Agar (BPA). Mi trng thch Tellurite Glycine Agar (TGA). Mi trng Brain Heart Infusion (BHI). Huyt tng th. 4.2.3.3. Ph n t ch nh tnh Staphylococcus aureas

Cy 2 ml dung dch vo mu ng nghim cha

ml mi trng MSB, trn u v 37oC trong 24 gi.

Dng que cy vng cy ria dch mu t ng (+) (mi trng chuyn t sang vng) ln mi trng phn lp (thch TGA), 37oC trong 24 gi. Tm khun lc c trng ca S. aureus trn mi trng phn lp: c mu en nhnh, sng, trn, li, ng knh 1 - 1,5 mm c vng sng chung quanh khun lc . Chn khun lc c trng, cy vo ng mi trng BHI, 37oC trong 24 gi. Cy vo ng nghim nh cha khong 0,3 ml huyt tng v 37oC trong 24 gi th phn ng ng kt. Thc hin thm mt ng i chng khng c cy dch vi sinh vt. Mu c kt lun l c S. aureus khi th nghim coagulase (+) (c s xut hin ca khi ng trong khi ng i chng khng c). 4.2.3.4. nh l ng S. aureus b ng phng php m khun lc 4.2.3.4.1. ng nht mu v pha long Cn chnh xc 10 0,1 g mu ttrong ti PE v trng, thm 90 ml dung dch pha long, ng nht mu bng my dp mu khong 30 giy. Chun b dy pha long thp phn thch hp, sao cho khi cy mt th tch xc nh ln a P s xut hin khong 10 - 100 khun lc / a.

4.2.3.4.2. Phn lp trn mi tru ng ch n l c Cy 0,1 ml mu nguyn hoc pha long vo a mi trng BPA. Dng que cy tam gic thy tinh tri u mu ln b mt mi trng cho n khi kh. Cy mu trn 3 a mi trng P c pha long khc nhau. Thc hin tng t vi mi trng thch mu. Lt ngc a, 37 1oC trong 24 - 48 gi i vi mi trng BPA v 24 gi i vi mi trng thch mu. Trn mi trng thch BPA: Sau 24 gi, khun lc S. aureus c ng knh khong 0,5 - 1 mm, li, en bng c vng sng rng khong 1 - 2 mm bao quanh. nh du trn mt y ca a cc khun lc c c im trn v tip tc n 48 gi. Sau 48 gi, khun lc S. aureus c ng knh 1 - 1,5 mm, mu en bng, li, c vng trng c hp v vng sng rng 2 - 4 mm quanh khun lc. C mt s dng S. aureus c th khng to cc vng sng quanh khun lc nh trn. Cn m v nh du c hai dng khun lc. Trn mi trng thch mu, sau 24 gi , S. aureus cho khun lc bng long, c, li c mu xm hay vng nht, ng knh 1 - 2 mm. 4.2.3.4.3. Khng nh

Dng que cy vng cy 5 khun lc c trng v 5 khun lc khng c trng t mi trng thch P ln mi trng thch TSA, 37oC. Theo di kt qu phn ng ng huyt tng sau cc khong thi gian 2, 4, 6, 8 v 24 gi. Tnh t l kh ng nh da trn s khun lc c trng v khng c trng. Thc hin tng t vi cc khun lc c trng trn mi trng thch mu. Kt qu th nghim l (+) khi c khi dng huyt tng hnh thnh (mi mc ng kt u c xem l (+)). Kt qu l (-) khi khng c hnh thnh khi ng, hn dch vn ng nht nh ng khng cy. 4.2.3.4.4. Cch tnh kt qu Mt S. aureus trong mu c tnh nh sau: Mt (CFU/g hay CFU/ml) = [ 10 (NtHt + NaHa) ] / ( F1 + F2) Trong : F: pha long. Nt: tng s khun lc c trng. Na: tng s khun lc khng c trng. Ht: t s gia s khun lc c trng cho th nghim kh ng nh (+) so vi khun lc c trng.

Ht: t s gia s khun lc khng c trng cho th nghim kh ng nh (+) so vi khun lc khng c trng. 4.2.3.5. nh l ng S. aureus b ng phng php P

Phng php ny c dng nh lng mu c mt S. aureus thp nhng mt vi sinh vt cnh tranh cao. Dung dch mu c pha long 3 mc: 10-1, 10-2, 10-3; thc hin vi h thng 9 ng nghim (3 ln lp li mi pha long). Cy 1 ml dch mu c pha long khc nhau vo ng nghim c cha 10 ml mi trng canh MSB, 37oC trong 48 gi. Chn cc ng (+) (mi trng b c) tin hnh phn lp khun lc n, 37oC trong 48 gi. Chn cc khun lc c trng thc hin th nghim kh ng nh S. aureus (tin hnh tng t nh phng php m khun lc). Tra bng MPN, suy ra mt S. aureus trong mu (MPN / g hay MPN / ml). 4.2.4. Salmonella

4.2.4.1. nh ngha v nguyn tc Salmonella l trc trng gram m, hiu kh v k kh ty , di ng, khng to bo t, ln men glucose v sinh acid, khng ln men saccharose v lactose, khng phn gii ure, hu ht cc chng u sinh H2S. Salmonella khi phn tch nh tnh c pht hin qua 4 bc: c tng sinh: tu theo c tnh ca mu, cn chn qui trnh tng sinh ph hp. Thng thng t l gia mu v mi trng tng sinh l 1 : (tu tng trng hp c th t l ny c th thay i).

c tng sinh chn lc: cc mi trng tng sinh chn lc thng pht hin Salmonella trong mu thc phm l Rappaport Vassiliadis (RV), Selenite Cystein roth, Tetrathionate Mueler Kauffmann roth (TT), c phn lp: mi trng XLD c khuyn khch s dng phn lp Salmonella, nhm tch v nhn dng

Salmonella khi qun th vi sinh vt khc trong mu. Bc kh ng nh: thc hin cc th nghim sinh ho v huyt thanh c trng ca Salmonella xc nhn li cc khun lc Salmonella. 4.2.4.2. i tr ng v ho cht

Nc pepton m ( Buffered Peptone Water, BPW). Tetrathionate Mueler Kauffmann Broth (TT).

Thch Xylose Lysine Desoxycholate (XLD). Thch Hektoen Entric Agar (HE). Thch Bismuth Sulphite Agar (BS) v Triple Sugar Iron (TSI). Thch Brilliant Green Phenol Red Lactose Sucrose (BPLS). Canh Rappaport Vassiliadis Soya Pepton (RV). Canh Malachite Green Magnesium Chloride (canh RV ci tin). Canh Urea, Tryptone, Lysine Decarboxylase. Canh Phenol Red Broth Base gm 3 loi: Mannitol, Sucrose, Sorbitol. Thuc th Kovacs v khng huyt thanh Salmonella a gi. 4.2.4.3. ui tr nh ph n t ch nh tnh Salmonella trong thc phm 4.2.4.3.1. Tng sinh i vi cc loi mu thng thng: Cn 25 g mu trong ti PE v trng, b sung 225 ml dung dch BPW. ng nht mu bng Stomacher v 37 1oC trong 18 - 24 gi.

i vi mt s thc phm c cha cc cht c th gy c hoc ng ch s tng trng ca Salmonella, cn thc hin qui trnh tng sinh c bit: i vi mu gia cm ti sng: t mu vo bao PE ln, thm 1 lt mi trng tng sinh khong 30 giy mi trng thm c vo trong ton b mu. i vi sa kh: cho 25 g mu vo ti PE v trng, thm 225 ml mi trng PW, yn 60 pht nhit phng, sau lc cho sa tan ht. i vi da v cc mu c hm lng cht bo cao: ng nht mu vi BPW, thm vo 2 - 3 git Triton X - 100 v tng sinh. 4.2.4.3.2. Tng sinh ch n l c Lc u dch tng sinh, chuyn 0,1 ml sang 10 ml mi trng tng sinh RV c m n 42oC. 42oC 0,2oC trong 18 - 24 gi. Mi mi trng tng sinh chn lc c mt nhit nui cy khc nhau v mi loi mi trng ch c tc dng trn mt c im pht trin ca Salmonella. 4.2.4.3.3. Phn lp v nhn din Dng que cy vng cy phn lp khun lc n vi ging t dch tng sinh chn lc ln a mi trng chn lc nh XLD, HE, PW, lc bng my lc

Cc biu hin ca Salmonella trn tng mi trng chn lc khc nhau l khc nhau, th hin hnh thi khun lc Salmonella, v d: Mi trng XLD: khun lc c mu hng trong sut, c hoc khng c tm en. Mi trng HE: khun lc c mu thay i t xanh dng n xanh lc, c hoc khng c tm en. Mi trng BS: khun lc c mu nu xm hay mu en, thnh thong c xut hin nh kim tm. Mi trng xung quanh khun lc chuyn thnh mu nu v sau chuyn mu en nu ko di thi gian . Mi trng BPLS: khun lc mu hng nht, trong sut, xung quanh khun lc mi trng c mu . Sau khi cy, cc a c 37oC trong 22 - 26 gi. 4.2.4.3.4. Khng nh Chn t nht 5 khun lc b nghi ng l Salmonella, cy sang mi trng khng chn lc, 37oC trong 18 - 24 gi. Cc khun lc xut hin trn mi trng ny c dng cho cc th nghim sinh ha v huyt thanh. Cc chng Salmonella cho kt qu th nghim sinh ha nh sau: Th nghim H2S (TSI hay KIA): xut hin cc vt mu en trong mi trng, c hin tng lm v thch mi trng (do sinh hi).

Th nghim LDC (+): mi trng chuyn thnh mu nh ban u. Th nghim Urea (-): mi trng gi nguyn mu vng cam. Ln men mannitol, sorbitol (+): mi trng chuyn sang mu vng. Th nghim Indol v VP: (-). Cc th nghim khng nguyn c thc hin song song vi mu i chng bng dung dch nc mui sinh l. Phn ng (+) khi chng th nghim to ngng kt vi khng huyt thanh nhng khng c ngng kt vi nc mui sinh l. 4.2.4.3.5. Bo co kt qu Bo co kt qu l c hay khng c Salmonella trong 25 g mu. 4.2.5. Shigella 4.2.5.1. nh ngha v nguyn tc Shigella l trc khun gram m, hiu kh v k kh ty , cho th nghim catalase (+), ln men glucose khng sinh hi, khng ln men lactose, khng sinh H 2S, khng c enzyme lysine decarboxylase. Ging Shigella gm 4 loi: S. dysenteriae khng ln men mannitol, thuc nhm khng huyt thanh A.

S. flexneri thuc nhm khng huyt thanh B. S. boydii ln men mannitol sinh hi, thuc nhm khng huyt thanh C. S. sonnei ln men mannitol, thuc nhm khng huyt thanh D. Shigella l tc nhn gy bnh shigellosis, l bnh nguy him ly lan rt nhanh t ngi sang ngi qua ng thc phm (tht bm, thy sn,..) v nc ung. Shigella gy ng c thc phm vi liu lng l rt thp. Shigella c pht hin bng cch cy mt lng mu xc nh vo mi trng lng khng chn lc, sau chuyn vo mi trng tng sinh chn lc. Dch khun sau khi tng sinh chn lc c cy phn lp trn t nht 2 a mi trng thch khc nhau. Khun lc nghi ng c kim tra bng th nghim sinh ho v khng huyt thanh. 4.2.5.2. i tr ng v ho cht

Canh Tryptose Soya v Gram Negative (GN). Dulcitol Phenol Red Broth (DPR). Lysine Decarboxylase Broth (LD). Mannitol Phenol Red Broth (MPR). Thch Hektoen Enteric (HE) v Triple Sugar Iron (TSI). Thch Deoxycholate Citrat Agar.

Thch MacConkey (MAC) v Xylose Lysine Desoxycholate (XLD). Mi trng Tergitol - 7 Agar (T7A). Mi trng th nghim tnh di ng. Thuc th oxidase v catalase. Khng huyt thanh gm 4 loi: polyvalent A, B, C, D. 4.2.5.3. Qui trnh phn tch 4.2.5.3.1. Tng sinh Tng sinh: ly 25 g mu cho vo ti dp mu, thm 225 ml canh Tryptone Soya, ng nht mu, o pH v chnh v 7 0,2, buc chc ming ti, 37oC trong 16 - 20 gi. Tng sinh chn lc: chuyn 0,1 ml dch tng sinh sang 10 ml canh tng sinh GN, 37oC trong 16 - 20 gi. 4.2.5.3.2. Phn lp Dng que cy vng cy dch tng sinh ln cc a mi trng thch chn lc. S dng t nht hai loi mi trng thch phn lp khc nhau, mt s mi trng thng dng nh: T cc a mi trng nhit 37oC trong 24 - 48 gi. Biu hin ca Shigella trn cc mi trng phn lp nh sau: , XLD, HE, M C,

Mi trng T7A: khun lc Shigella c mu xanh nht. Mi trng HE: khun lc Shigella c mu xanh nht, trong sut. Mi trng XLD: khun lc Shigella c mu , trong sut. Mi trng MAC: khun lc Shigella c mu nu , trong sut. 4.2.5.3.3. Khng nh Shigella b ng th nghim sinh ha v huyt thanh Chn t nht 5 khun lc nghi ng trn mi trng phn lp, cy ln mi trng thch khng chn lc, 37oC trong 20 - 24 gi. Cc khun lc xut hin trn mi trng ny c s dng tin hnh cc th nghim sinh ha v khng huyt thanh. Th nghim sng lc: Cy t nht 5 khun lc nghi ng vo mi trng TSI, cch cy nh sau: trc ht cy ria trn mt nghing, sau m su xung ng nghim. ng 37oC trong 24 gi. Kh ng nh Shigella: Shigella cho mu trn mt nghing, mu vng phn y ng nghim v khng to H2S trong mi trng. Th nghim kh ng nh : Shigella c kh ng nh bng cc th nghim sinh ha ng vi cc kt qu:

Th nghim sinh ha Simmon citrate Arginine decarboxylase Lisine decarboxylase Urease Malonate MR VP

Kt qu + -

Th nghim sinh ha Salicine Xylose Cellobiose Adonitol Dulcitol Inositol

Kt qu -

4.2.5.3.4. Khng nh Shigella b ng th nghim khng huyt thanh Thc hin th nghim khng huyt thanh bng huyt thanh a gi , , C, D t cc dng c nui cy trn mi trng thch khng chn lc. Tin hnh song song vi mu i chng (dng nc mui sinh l).

Phn ng (+) khi chng th nghim to ngng kt vi khng huyt thanh nhng khng c ngng kt vi nc mui sinh l. 4.2.5.3.5. Bo co kt qu Kt qu bo co l c hay khng c Shigella trong 25 g mu.

You might also like