Ti liu chiaTRNG I HC KHOA HC s ti: wWw.SinhHoc.edu.

vn
KHOA KHOA HC S SNG

TI SINH VIN NGHIN CU KHOA HC

PHN LP GEN LTP HAI GING U XANH C KH NNG CHU HN KHC NHAU
Sinh vin thc hin: Nguyn Th L Ngi hng dn khoa hc: TS. Nguyn V Thanh Thanh

Thi Nguyn, thng 5 nm 2012

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

NI DUNG BO CO
1. M U 2. VT LIU V PHNG PHP NGHIN CU 3. KT QU V THO LUN 4. KT LUN V KIN NGH

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

M U
1.1. T VN
u xanh (Vigna radiata (L.) Wilczek): kinh t v dinh dng - Ci to t - Hn hn nh hng n nng sut, cht lng cy u xanh. - Vic chn cc ging chu hn v nng cao tnh chu hn ca cy u xanh l vn cn thit. - Cc nghin cu u thng nht rng c tnh chu hn ca cy trng rt phc tp do nhiu gen quy nh, trong c gen LTP (Lipid Transfer Protein)
-

Ti liu chia s ti:M U wWw.SinhHoc.edu.vn

LTP tham gia vo qu trnh sinh tng hp biu b thc vt gip hn ch s mt nc trong iu kin kh hn. - Gen LTP iu khin v tng hp nn protein tng ng tham gia xc tc s vn chuyn phospholipid gia cc lp mng t bo, h tr vic to ra cc lp sp hoc lp biu b gip cy hn ch mt nc. - Nhm xc nh ch th phn t lin quan n kh nng chu hn gen LTP nn chng ti tin hnh ti Phn lp gen LTP hai ging u xanh c kh nng chu hn khc nhau.
-

Ti liu chia s ti:M U wWw.SinhHoc.edu.vn

1.2. MC TIU NGHIN CU
- Phn lp gen LTP hai ging u xanh a phng c kh chu hn khc nhau t genome.

1.3. NI DUNG NGHIN CU

- Tch DNA tng s t l non ca hai ging u xanh TS (Tn Sn) v BK (Bc Kn). - Khuch i gen LTP bng phn ng PCR vi cp mi c hiu. - Tch plasmid ti t hp mang gen LTP hai ging u xanh TS v BK.

Ti2. VT LIU V PHNG PHP NGHIN CU liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

2.1. VT LIU NGHIN CU - Hai ging u xanh a phng Tn Sn (TS) v Bc Kn (BK)

TS

BK

Hnh 2.1. Hnh nh hai ging u xanh TS va BK

2. VT LIU V wWw.SinhHoc.edu.vn Ti liu chia s ti: PHNG PHP NGHIN

CU
2.2. PHNG PHP NGHIN CU
2.2.1. Phng php tch DNA trc tip t l non u xanh (theo Gawel v Jarret, 1991) 2.2.2. Khuch i gen LTP c hiu bng phn ng PCR (theo Mullis v cs, 1985)
Bng 2.1. Trnh t cp mi khuch i gen LTP
Gen Cp mi LTP LTP F LTP R Trnh t mi ATGGCTAGCCTGAATGTTGC TTACTTGATGTTAGCGCAGTT Kch thc sn phm PCR (bp) 350

Ti2. VT LIU V PHNG PHP NGHIN liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

CU 2.2. PHNG PHP NGHIN CU
Bng 2.2. Thnh phn phn ng PCR STT 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Nc kh ion PCR Buffer (10X) MgCl2 (25 mM) DNTPS (25 mM) Mi xui (10 pM/l) Mi ngc (10 pM/l) DNA khun (50 ng/l) Taq polymerase (unit/l) Tng th tch Thnh phn Th tch (l) 11 2,5 2,5 2 2 2 2 1 25

Ti2. VT LIU V PHNG PHP NGHIN liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

CU
2.2. PHNG PHP NGHIN CU
Bng 2.3. Chu trnh nhit phn ng PCR
Cc bc Nhit Thi gian S chu k Tc dng

1
2

940C
940C 520C 720C

3 pht
30 giy 1 pht 1 pht 10 pht

Bin tnh
Bin tnh

30 1

Gn mi Tng hp chui Tng hp chui n nh mu

3 4

72oC 40C

2. VT LIU ti: wWw.SinhHoc.edu.vn Ti liu chia s V PHNG PHP NGHIN

CU
2.2. PHNG PHP NGHIN CU
2.2.3. Thi gel bng b kit ca hng Bioneer 2.2.4. Tch dng gen LTP Quy trnh tch dng gen c thc hin nh sau:
Gn gen LTP vo vector to dng pBT

Bin np vector ti t hp vo t bo kh bin chng E.coli DH5

Kim tra sn phm chn dng bng phn ng PCR

Hnh 2.2. S tch dng gen LTP u xanh

Ti2. VT LIU ti: PHNG PHP NGHIN liu chia s V wWw.SinhHoc.edu.vn

CU
2.2. PHNG PHP NGHIN CU
Bng 2.4. Thnh phn phn ng gn gen vo vector tch dng pBT

STT
1 2 3 4 5

Thnh phn
Buffer T4 ligase (10X) DNA Vector pBT Enzyme T4 ligase (2 unit/ l) Nc kh ion Tng th tch

Th tch (l)
2 6 1 1 10 20,0

Lai 220C trong 1,5 gi to vector ti t hp

Ti2. VT LIU V PHNG PHP NGHIN liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

CU 2.2. PHNG PHP NGHIN CU
- Bin np vector ti t hp vo t bo kh bin chng E.coli DH5 bng phng php ha bin np 420C ng 1 pht. - Nui khun: Chn khun lc c mu trng nui trong mi trng LB lng, c b sung ampicilin, qua m. Kim tra sn phm chn dng. 2.2.5. Tch plasmid ti t hp bng b kt ca hng Bioneer.

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 3. KT QU V THO LUN

3.1. KT QU TCH DNA TRC TIP T L NON U XANH
1 2

Hnh 3.1. Hnh nh in di DNA tng s ca hai ging u xanh TS v BK 1.TS, 2. BK

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 3. KT QU V THO LUN

3.2. KT QU KHUCH I GEN LTP BNG PHN NG PCR
M 1 2

350 bp

Hnh 3.2. Hnh nh in di sn phm PCR nhn gen LTP ca hai ging u xanh TS v BK
M. Marker 1kb; 1. TS; 2. BK

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 3. KT QU V THO LUN

3.3. KT QU TINH SCH SN PHM PCR
M 1 2

350 bp

Hnh 3.3. Hnh nh in di kt qu thi gel ca hai ging u xanh TS v BK Marker 1kb; 1. TS; 2. BK

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 3. KT QU V THO LUN

3.4. KT QU TCH DNG GEN LTP U XANH
M 1 2

350 bp

Hnh 3.4. Hnh nh in di kt qu tch dng gen LTP ca hai ging u xanh TS v BK Marker 1kb; 1.TS; 2. BK

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 3. KT QU V THO LUN

3.5. KT QU TCH PLASMID TI T HP
1 2

Hnh 3.5. Hnh nh in di plasmid ti t hp mang gen LTP hai ging u xanh TS v BK 1. TS, 2. BK

Ti liu chiaKT LUN V KIN NGH s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 4.

4.1. KT LUN
- tch chit thnh cng DNA tng s t l non ca hai ging u xan TS v BK. - Khuch i thnh cng gen LTP hai ging u xanh TS v BK bng phn PCR vi kch thc khong 350 bp. - Chn c dng vi khun E.coli DH5 mang vector ti t hp (pBT LTP) v tch c plasmid mang on gen LTP hai ging u xanh TS v BK.

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn

4. KT LUN V KIN NGH
4.2. KIN NGH
Xc nh trnh t gen LTP ca cc ging u xanh tch dng tm kim ch th phn t lin quan n tnh chu hn ca cy u xanh nhm phc v cng tc chn to ging u xanh chng chu tt.

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn