CNG NGH SINH HC NG VT

Nng cao cht lng heo tht bng k thut chuyn gen ng vt

LI NI U T M C H T N N N N

N GH

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 1

CNG NGH SINH HC NG VT

NI DUNG I. TNG QUAN TI LIU 1. S lc v chi ln ( chi heo ) Chi L n (hay chi Heo theo mi n Nam c a ti ng Vit) l m t chi ng v t mng gu c c ngu n g c i l c -u c g p nhm t ng th v i danh php khoa h c l Sus, thu c h L n (Suidae). L n r c thu n ha m t d ng gia sc l y th C i lng c ng c cs d lm m t s lo i bn ch i, da c th s n xu t bng b u d c. Ngoi ra, phn c a l c dng lm phn chu c it t. 1.1. Thng tin chung Chi L ng v th ng ng v th c v ac T u kin hoang d, chng l cc ng v i, t tm ki m th L ng v t r t d hu n luyn, v th cng v i v kh u gic r t nh y c a chng nn m ts tm n c bit l chu u. Ngoi ra, i ta cn nui l n (heo) m i (m t d ng c a l n Vi N ) ng v t c nh, c bit l M. M ng c t 6 12 T u kin nui nh t, thnh tho i ta th y hi ng l n m t c a n, c l l do thi u ch t. L 44 n, chn c 4 ngn, 2 ngn gi a l ng. Th i k mang thai c a l n trung bnh l 114 ngy. L n khng c tuy n bi ti t m hi, v th chng ph (cc ngu ) trnh b C p b o v kh i b chy n ng. 1.2. Cc loi 1.2.1. Ging ln rng Sus barbatus: L ; Malaysia, Indonesia Sus bucculentus: L Sus cebifrons: L Sus celebensis: L C Sus daelius: Ln rng Poulter Sus habeoncosus: L M Sus heureni: L F Sus philippensis: L P
Page 2

t u kin th i ti t nng.

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

CNG NGH SINH HC NG VT

Sus salvanius: L Sus scrofa ( chu Sus timoriensis: L Sus verrucosus: L 1.2.2. Ging ln nui L L L L L L L M X Y L M T C ; S. domesticus): L T J H ; chu u,

, Indonesia, Philipin

K N

1.3. Cc ging lai Gi ng l T w c cho lai ghp v i l n r s n sinh ra m t gi ng l i ta g i l "l n th i k s " n nh th i k nguyn th y. L n con m i sinh ra ny gi n r ng non. "L n th i k s t" l loi v t c s c thu ht ph bi n (v tnh t m, hi u k) t i cc trang tr i. L n lai ki u ny gi ng l nr n luy n nh v l y th t lm xc xch. Cc gi ng l n nh khc c c lai v i l n r ng s n xu t th t t m t l n nh. Trong "The Variation Of Animals And Plants Under Domestication" Charles Darwin t: Ln rng chu u v ln nh Trung Quc c l gn nh l khc bit mt cch chc chn: Ngi F. Darwin cho giao phi mt con ln ni Trung Quc vi ln rng c Alpine, c thun ha mt phn, nhng cc con ln con, mc d c mt na mu thun ha trong huyt qun ca chng, li l cc k hoang d trong vic nui nht, v khng d dng n cc loi nc go nh nhng con ln Anh thng thng.

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 3

CNG NGH SINH HC NG VT

Hnh 1.3.a. Ln 1.4. Cc t gi ln T ( ): Ln ni hay heo ni - L Ln s - L Ln bt hay heo sa - L Ln hch - L Ln - M Ln lang hay heo bng - L Ln mi - M Ln li - Heo nc - L

Hnh 1.3.b. Ln nh nui th rng

2. K thut tch chit DNA Eukaryote, ph n DNA ch y u n m trong nhn, trn cc nhim s c th . V v tch chi NA c h t c n b c l DNA ra kh i mng nhn, ra kh i t bo. Cc c tch chi t DNA g m: Gi i phng DNA ra kh i mng t bo b ng cch nghi n, dng p xu t, siu m ho c php ho h c (dng ch t t y sodium duodecyl sulfate= sodium lauryl sulfate, triton c tc d ng ph v mng t bo, tch cc phn t ng th i gy bi ng tnh t a protein trong qu trnh tch chi t) ho c dng hh ( z ) lo i b c n (g m ch y u m nh v n c a t bo). Hu b ph n protein trong t bo, trong nhim s c th b K 370C/1GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 4

CNG NGH SINH HC NG VT

2 gi t t a protein b : f N C ng lm bi n tnh pr NA lo i ph n t a. Sau khi li tm, protein s t a pha gi : c ch a DNA n m i ch a : f T c ch NA T ng phenol: chloroform c tr n v i t l 1:1 ho 4:1 u qu t a protein. Ngoi ra cn b sung thm m ng nh isoamylalcohol gip cho ph n phn tch gi c v dung mi h d c trn s d dng P ng d b xy ha thnh h p ch t quinone c mu h ng. Cc h p ch t quinone c th hnh thnh nn cc g c t do lm bi n tnh axit nucleic. V v y phenol ph c b o qu n nhi th p, trnh nh sng ho c b sung ch t ch ng oxy ha T( ) ho c 8-hydroxy-quinoline. 8-hydroxyquinoline t o cho dung mi h phn bit gi c v dung mi h K t t a DNA b ng ethanol tuy l c (t a h u h t cc lo i DNA) ho c t a b ng isopropanol- ch t a DNA c tr ng phn t cao. Khi t ng s d ng cc mu n tch m c ng dng mu i axetate 0 3M u kin t ng 40C/30 L l y ph n t a DNA. DNA thu kh nhi phng v cho tan trong TE (tris, EDTA) v gi nhit o -4 C b o qu n lu di dung d NA c b o qu n -20 C. Ch : trong qu trnh thao tc, ph mb os trnh l n DNA c a ng khc dnh theo d ng c . Trnh cc enzym khc phn hu DNA ho c RNA c n nghin c u. 3. DNA ti t hp ADN ti t h p l phn t ADN c t o thnh t hai hay nhi u trnh t ADN c a cc loi sinh v t khc nhau. Trong k thu t di truy n, ADN ti t h c t o thnh t vic g n nh n ADN c ngu n g c khc nhau vo trong dng. Nh A N h p ny c th bi u hin thnh cc protein ti t h p trong cc sinh v t. Th d m t s c ph m l hormone peptide c t o ra t cng ngh ADN ti t h p l insulin, ng, v oxytocin. Nh ng v c-xin c s n ph m b c ny. Sinh v t ch c s d ng ph bi n nh t trong cng ngh ADN ny l Escherichia coli. 4. Chuyn gen ng vt 4.1. K thut chuyn gen K thu t chuy n gen, ghp gen l k thu t gen l (m n DNA, RNA) vo t bo v t ch lm cho gen l t n t i cc plasmid trong t bo ch ho c g n b gen t bo ch , t n t i v ti b n cng v i b gen c a t bo ch . Gen l trong t bo ch ho ng t ng h c hiu, gy bi c lm
GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 5

CNG NGH SINH HC NG VT

xu t hin nh mm ic chuy n gen. Ngy nay vic ng d ng cc gi ng cy tr ng v c t nui chuy n gen cng tr nn ph bi N c tnh hin nay trn th gi i c kho tn ng m t ph c c tr ng t nh ng h t gi ng c chuy n gen. C hai hnh th c chuy n gen ch y u l chuy n gen tr c ti p v chuy n gen gin ti p. 1. Chuy n gen tr c ti p bao g : - K thu t siu m - K thu n xung - K thu t PEG - K thu t vi tim - K thu t b n gen - K thu t chuy n gen b ng s c nhit 2. Chuy n gen gin ti p - Chuy n gen nh Agrobacterium tumefaciens - Chuy n gen nh virus v phage 4.2. ng vt chuyn gen ng v t chuy ng v t c gen ngo i lai (gen chuy n) xen vo trong DNA genome c a n. Gen ngo i lai ny ph c truy n l i cho t t c m i t bo, k c cc t bo m m. Vic chuy n gen ngo ng v t ch thnh cng khi cc gen ny di truy n l i cho th h sau. 4.3. Cng ngh to ng vt chuyn gen Cng ngh t ng v t chuy n gen l m t qu trnh ph c t p v nh ng loi khc nhau c th khc nhau t nhi ng c chnh sau: tch chi t, phn l p gen mong mu n v t o t h p gen bi u hin trong t ng v t; t o v t liu bi n n p gen; bi n n ng v t; nui c y phi v c y truy n h p t ( i v ng v t b ); nh v s bi u hin c a gen l v t ng v t chuy n gen g c m t cch lin t c, s n xu t ng v t chuy n gen. 5. K thut PCR PCR l ch vi t t t c a c m t Polymerase Chain Reaction c d ch m t vi sch l Ph n ng chu i trng h p i l "ph n ng khu i gen". PCR l m t k thu t ph bi n trong sinh h c phn t nh m khuy i (t o ra nhi u b n sao) m n DNA m khng c n s d ng cc sinh v t s E. coli hay n m men. PCR c s d ng trong cc nghin c u sinh h c v y h c ph c v nhi u m n cc bnh di truy n, nh n d ng, ch ng bnh nhim trng, tch dng gene, v nh huy t th ng.

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 6

CNG NGH SINH HC NG VT

P n ch PCR c Kary Mullis pht t gi i Nobel v Ha h c vo thng 10 1993 cho thnh t u ny, ch 7 ng. ki n c a Mullis l pht tri n m t quy trnh m DNA c th nhn ln nhi u l n m t cch nhn t o qua nhi u chu k sao chp b i enzyme DNA polymerase. DNA polymerase c t nhin trong sinh v t s c hin ch nhn DNA khi t bo phn chia. N lm vic b ng cch n i v i s i DNA v t o s i b sung. Theo quy trnh PCR g c c a Mullis, enzyme ph n ng nhn b NA c th c hin trong ng nghim (in vitro). S NA tch thnh 2 s nng 96 C. Tuy nhin, nhi ny DNA polymerase b ph h y v v y c n b sung enzyme sau m n nung nng c a m i chu k. Quy trnh PCR g c c a Mullis khng c hiu qu cao v n m t nhi u th i gian, c n m ng l n DNA polymerase, v ph i lin t su t trong qu trnh PCR. c pht tri n b ng cch dng DNA-Polymerase l y t vi khu ( t) s ng trong m c phun nhi trn 110 C. DNA polymerase t sinh v t ny l thermostable ( nh nhi cao) v khi dng trong PCR n khng b ph v khi h n h tch s i DNA. T khng c n ph i thm DNA-polymerase vo m i chu k, qu trnh sao chp DNA c th n v t M t trong nh ng DNA-polymerase ch u nhi u tin c phn l c t Thermus aquaticus cg T T c dng r ng ri trong th c nghi PCR (5/2004) N m c a Taq l thnh tho ng n nh m l n trong qu trnh sao chp DNA, d t bi n (sai) trong chu i DNA, v n thi u tnh s a 3-5 C Pw Pf c phn l p t Archaea c s ( ki m tra l i sai) v c th lm gi m m s t bi n x y ra trong chu NA c sao chp. Ngy nay, s k t h p gi a Taq v Pfu c th cung c p c tin c y cao l n s nhn b n chnh xc c a DNA. 6. K thut ELISA ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) Hay cn g i l ELI A hay EIA l l m t k thu pht hin khng th hay khng nguyn trong m u xt nghim. Hi ELI A c s d ng r ng ri trong nhi c nghin c y h c,nng nghip c bit l trong cc quy trnh ki m tra an ton ch t ng cc s n ph m sinh h c. 7. K thut Southern Blot Southern blot l m t trong nh ng k thu t chuy n DNA t gel ln mng lai do Edwin Southern m t 1975.

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 7

CNG NGH SINH HC NG VT

DNA EM T PCR T L 1 1975 DNA khc nhau. E :

( ( )

8. Chc nng ca hormon sinh trng GH H ng, khc v khng th c hin ch . 8.1. nh hng n qu trnh sinh trng: G w (GH) c g i l somatotropic hormone (SH) hay somatotropin l m c nh v i 191 a.a. t o thnh chu ng phn t 22 005 H ng c a t bo (c c v kch thch qu trnh phn bo). Th nghim tim GH cho chu ng thnh th y t t c cc c so v i ch K n tu ng thnh chu t c tim GH khng pht tri chi t c cc m khc v n ti p t c pht tri n. Th nghi ng c g nv khng pht tri c thm v chi uh t cc m khc c v n c th ti p t ng trong su t cu i. 8.2. nh hng n trao i cht 8.2.1. Lm tng cng tng hp protein tt c mi loi t bo M ts th ng c a GH d : c tuy n yn ti t ra l n t tuy n n i ti t khc m nh u

-L n chuyn amino acid qua mng t bo d amino acid trong t bo. N amino acid s h T ng lm n qu trnh v n chuy n glucose. -L ribosome. Tuy v ng h p protein b ng v : GH c nghin c

ng qu trnh t ng ng c a insulin

ng tr c ti .

n cc

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 8

CNG NGH SINH HC NG VT

-L ng qu trnh sao m DNA t o cc RNA trong nhn t bo (sau khi tc ng 24-48 gi ) t ng h p protein d ng n u cc y u t - Lm gi m s d ng protein thng qua kch thch s d ng cc axit bo (fatty acids) t m m gi ng c n thi t thay cho vic s d ng protein. 8.2.2. nh hng n s dng m m GH c tc d ng gi i phng fatty acid t m m lm cho n lo i d ch th T GH trnh chuy f C A s d ng cho gi c a cc fatty acid ng qu ng.

M t s nh nghin c u cho r ng tc d ng fatty acid thay cho vic s d ng quan tr ng c a GH d ng. Tuy v y, GH c n n vi gi c n th i gian tnh b ng GH ng t ng h p protein. 8.2.3. nh hng n trao i carbonhydrate - Lm gi m s d :C d n ng ny v c nghin c u. C th GH ng fatty acid d n t ng h p m ng l n acetyl-CoA sinh ra cc tn hiu ph n h i kha qu trnh bi i glucose v glycogen. -T ng d tr glyco : gi i ng nn glucose vo trong t c bi i thnh glycogen d tr . Khi t bo tr thnh tr ng thi "no" glycogen s khng th d tr glycogen thm n a. - D ng qu trnh h p glucose trong :K u qu trnh chuy n glucose vo t bo s lm cho n glucose trong mu gi m nh. Tuy v y, hi ng ny d ng l i ch sau kho 30 n 1 gi d c l i (do gi m qu trnh v n chuy n v t bo khng th thu nh c n a). N u khng c s h p thu glucose, n glucose trong mu c th s 50-100 l n trong mu so v ng. II. VT LIU PHNG PHP NGHIN CU 1. i tng d tnh nghin cu C 2. Ni dung thc hin T NA
Page 9

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

CNG NGH SINH HC NG VT

P . T C K T 3. Phng php nghin cu T cng ngh DNA ti t h i c tnh cch m N c tnh k diu m b n c nh i i ta c th t o ra nh ng v t mang cc lai t o bnh ng khng th th c hi c. ( ) G GH

Cng ngh t ng v t chuy n gen l m t qu trnh ph c t p v nh ng loi khc nhau c th khc nhau t nhi ng c chnh sau: tch chi t, phn l p gen mong mu n v t o t h p gen bi u hin trong t ng v t; t o v t liu bi n n p gen; bi n n ng v t; nui c y phi v c y truy n h p t ( i v ng v t b ); nh v s bi u hin c a gen l v t ng v t chuy n gen g c m t cch lin t c, s n xu t ng v t chuy n gen. 3.1. Tch chit on Gen m ha cho hoocmon tng trng GH t ngi. Nguyn t c: Thu nh n DNA t t G T n 1: ng v c ti 2 n:

ng v t ng nh t v m c, c th c tch chi t b ng n qua ly tm. C th ph v mng t n nhn b ng c, s T m ny chng ta c th dng ha ch t t y (detergent). Cc ch t Detergent c tnh ki m. pH ki m lm thay n tch, tnh acid base... c t gy cc lin k t trong phn t protein (c u n i disulfide, lin k t peptide, lin k t hydro, lin k t Van de Waals), d n t i lm m t c u hnh c a n ho t gy m ch K z m t ch b bi n tnh d n t i c u trc mng b "l " t qu l mng b ph. Trong ny chng ta c th dng 2 ch t t y l ch t t y nh (triton X 100) v ch t t y m ( ) T c tin, ch t t y nh ph v mng h ng c u; n u khng an ny th h ng c u s cng l ng v i nhn trong l 2
GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 10

CNG NGH SINH HC NG VT

thu nh an nhn m i dng ch t t y m ph mng nhn. Ti n hnh ly tm 1 nh m lo i b trong ph n d ch n i nh ng bo quan nh v nh , khng T n ly tm 2, cn g m saccharose, ch c nhn - bo quan c t tr ng cao nh t l c th di chuy n xuyn qua l p c l ng xu ng ly tm trong th i gian v l G n 2: i v i cc dung mi

Ti n hnh lo i b cc t p ch t d a trn tnh ha tan c h :

Phenol: ch t lm bi n tnh m nh protein v khng ha tan acid nucleic. C f : i phenol, c tc d ng bi n tnh protein gi ng phenol trong dung d ch. Isoamyalcohol: Lm gi m b t, c v chloroform sau ly tm. Isobutanol: c tc d ng tch cc phn t h c dung d ch nucleic acid nh kh c t a DNA tinh s ch c th N C 1M a t a l i b ng ethanol 70% Ch ph NA NA thu 3.1.1. o hm lng DNA Ty vo c u trc c a m i ch t m chng c m nh h p th nh iv i nucleic acid, do s a cc proton v cc electron c a vng purine v pyrimine m n c kh p th l n nh t c sng 260nm trong vng t ngo i v h p th c c ti u c sng t 230nm-240nm v khng h p th c sng l 310nm. D a vo tnh ch i ta c th c hm ng cc nucleic acid b h p th c sng 260nm. h p th ny cn ph thu c vo cc nhn t : H h p th ng acid ho c ki m. Trong th nghim ny pha A N c v nhi phng. Cng th H tinh s ch c a ADN. ng ADN (ng/l) =50HSPLOD260 (1) th p nhi th p. nhi & th p. tinh s ch b

c b o qu n trong dung d ch TE c ti n hnh ki

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 11

CNG NGH SINH HC NG VT

Cng th (1) c p d ng tnh hm tnh s ARN c tnh b i cng th c sau: H H T HSPL : h s pha long OD260 : ch s OD280 : ch s 3.1.2. o tinh sch ca DNA Trong m h p th 280nm. A N ng c l n phenol v protein. Nh ng t p ch c c c sng 260nm c sng 260nm L ng ARN hay ADN s ng oligonucleotid (ng/l) ( ng c a ADN s h p th i v i ADN bi n 260 (2) (3)

/ ) = 40 H PLO 260 = 20 HSPLOD260

c sng 280nm vng t ngo i. V v tinh s ch c a dung d ch nucleic ng t l gi h p th nh sng c sng 260nm v c tnh b ng cng th c sau:

s ch nucleic acid = OD260/OD280 N u t l ny n m trong kho 18 n 2 th dung d A N c xem l tinh s ch.

T l ny th 18 ng t m u c l n t p ch t. i v i dung d ch ADN s n u t l qu l n th ch ng t ADN c ch a trong m u b bi n tnh hay b phn h y. 3.2. Phn lp gen mong mun M t gen ngo c chuy n vo genome c a t bo v t ch t o ra ng v t chuy n gen ph c phn l p v tinh ch hay ni cch khc l n ph i c t o dng. Cc cng c s d t o dng bao g z c bit c ho t tnh c t v n i DNA (enzyme h n ch v ligase), cc m u d (probe), vector v t bo v t ch . T bo v t ch c s d ng l t bo vi khu n E.coli v c s d ng l plasmid. Vic tch chi t m t gen ring l l r t ph c t p b i v DNA m u ch a hng triu gen. th c hi u ny, DNA m u ch a gen mong mu n v vector plasmid ph i c c t b i cng m t lo i enzyme h n ch C n DNA m c c t c mang gen mong mu n s uc n DNA m u c a vector plasmid s c n i v i nhau nh ligase t o thnh plasmid ti t h h c bi n n p vo cc t bo vi
GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 12

CNG NGH SINH HC NG VT

khu n E.coli v cc t bo vi khu n ti bo vi khu n ch a plasmid mang gen mong mu n s ng. Vo th m ny, cc t c pht hin b ng m u d.

C c nui c ng thch h ng pht tri n t o ra hng triu b n sao c a vector ch a gen ny. Vector ch a gen ny s c tch ra kh i t bo vi khu n v gen mong mu n s c tch chi P t o ra hng triu b n sao c a gen mong mu n m khng b nhim b i cc gen khc. Gen chuy n c ngu n g c t genome ny ch a c n intron khng m ho. N phn l c gen mong mu n t s n ph m bi u hin c a n RNA c protein. T RNA ng c z cs t ng h p ra DNA b sung m ( d complement DNA-ss cDNA), ti p theo l DNA b sung m ch kp (double strand complement DNA- ds cDNA). DNA b sung (complement DNA- cDNA) ny khc v i DNA g c l khng ch a cc intron m ch bao g m cc exon. Ho c t s n ph m protein, c th suy ra trnh t nucleotid c a gen c trnh t cc axit amin trong phn t protein. Sau thi t k c p m ( ) n gen mong mu n. D ng genome bao g m t t c n exon v intron xu t hin m t cch t nhin. C n vic c t ghp mRNA v bi u hin c a gen. D ng cDNA l m t trnh t ch bao g n exon m ho protein c a gen.

Hnh 3.2. So snh hai dng gen chuyn 3.3. To t hp gen chuyn biu hin trong t bo ng vt Cc gen ngo c s d chuy n vo l n l mMT-hGH (mouse methallothionein-human growth hormone), mMT-bGH (mouse methallothioneinbovin growth hormone), mMT-pGH (mouse methallothionein-porcine growth hormone), PRL-bGH (prolactin-bovin growth hormone), Alb-hGRF (albuminhuman growth hormone releasing factor), mMT-hiGF1 (methallothionein-human insulin like growth factor 1). Trong khun kh n s s d ng mMT - hGH v mMT bGH.
GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 13

CNG NGH SINH HC NG VT

t o t h p gen chuy n bi u hin trong t ng v t, cc vng ch nhau c a gen c ngu n g c t cc loi khc nhau c th c k t h p l i v i nhau trong ng nghim b ng cch s d ng enzyme h n ch v ligase. T t c cc thnh ph n c a gen c th c tch chi t v ti t h t o thnh m t c u trc gen chuy n bi u hin. uc ac ny c th cs i b ng cch b sung cc trnh t polylinker ch a m t s v tr nh n bi t cc enzyme h n ch khc nhau. Trnh t polylinker cho php c th xen vo c u trc ny m ki m tra v t o dng. Gen chuy v i cc trnh t u ho s bi u hin c a gen. Cc y u t n m n intron. Y u t u ho g 5 a gen l promoter, c vai tr quy nh trong vi u ho s bi u hin c a gen. S bi u hin c a gen c th x y ra trong t t c cc m c ( c hiu) ho c ch c bit. Hay ni cch khc gen c u trc mu n ho bi u hi nh trong h th ng t bo nh nh th ph i c promoter thch h p v i h th ng m n ho ng. Promoter t ng v t c ngu n g c ho c t ng v (MT) -actin, amylase, insulin, -lactoglobulin, adiposite P2 ... ho c t ng v Simian virus (SV40), Rous sarcoma virus (RSV)... M ty ut u ho khc l y u t ng (enhancer), c ch ng s bi u hin c a gen, khng ph thu c vo v tr v s i v i gen. Cc y ut ng xu t hi i cc trnh t qu m n c m v i Dnase v cch gen m n kho ng vi kilobase. 3 i mang m t trnh t poly-A m b o thch h p cho qu trnh phin m v d ch m. C nhi o DNA ti t h :

P u lch: Ch n v x l DNA Plasmid: P c tch ra t t bo E.Coli ho c t bo n DNA plasmid. z RE II ( E RI) u lch nhau. Ch n v x n ci: a t ng nghin (E RI) t t o plasmid h c hai

NA c thu nh n v l a ch n, tinh ch theo m c u. C t DNA b ng enzyme RE lo i II cng lo i v i enzyme c t o ra cc v t c t gi ng nhau. T o plasmid ti t h p:

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 14

CNG NGH SINH HC NG VT

G n ci vo plasmid b ng cch NA n ci v i plasmid v i s c m t c a enzym NA c DNA ti t h p. Ph n ng n i x c bi u di n trn hnh.

Hnh 3.3.a. Phng php n gin dng u lch P Ch n v x Ch n v x d n ci: n n i (linker) ( )

Linker l nh n DNA di 10 15 c t ng h p b ha h c, sao cho gi a m i linker ph i c 1 trnh t nh n bi t b i m t enzyme c t h n ch lo i II. V d E RI G/AATTC NA u b c t ng h p t mRNA nh nuclease S1. Metyl ha cc vng h n ch b i enzyme EcoRI. linker c ch a chu t lai. G/AATTC NA z n cDNA s z NA

c nh n bi t

t o phn

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 15

CNG NGH SINH HC NG VT

C t phn t DNA lai b i z E RI c phn t u lch.

Hnh 3.3.c. Dng cc on ni linker to DNA ti t hp .......... 3.4. To c s vt liu bin np gen ng v n bi n n p gen thch h p nh t l tr ng n ti n nhn ( ) n m nhn c a tinh trng v tr p (fusion) v i nhau. n ny t h p gen l i xm nh p vo genome c ng v t nh s ti t h p DNA c a tinh trng v c a tr ng. Do t phn ho nn t h p gen l c bi n n n ny s c m t t t c cc t bo k c t bo sinh s n c ng v ng thnh sau ny. iv ng v t c v, tr c thu nh n b d ng kch d c t c xy d ng cho m i loi ho c b y tr ng trong ng nghi tinh nhn t t o ra tr ng ti n nhn.
GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 16

CNG NGH SINH HC NG VT

Kch d c t (KDT), thu t ng ti ng Anh l gonadotropin hay gonadotropic hormone, l nh ng glycoprotein kch thch s pht tri n tuy n sinh d c (bu ng tr ng v tinh so) m t cch tr c ti v c nh ng ch t khc c kh thch tuy n sinh d c pht tri n m t cch gin ti p. Nh ng ch c g i l kch d c t . Hai kch d c t n:

1. FSH (Fo H ) ng. H qu l c nang tr u pht tri n. 2. LH (Luteinizing Hormone), hormon hong th C a LH l gy chn non bo v r ng tr ng. S r ng tr ng l hi ng nang tr ng v non bo thot ng d n tr ng. Nang tr ng v l i bu ng tr ng r i bi n thnh th vng (Corpus Luteum) v th m i c thu t ng hong th ha. C F H LH u c ngu n g c l tuy n yn. Ngy nay nh cng ngh sinh h c FSH v LH nhn t c g i l nh ng KDT ti t h p (Recombinant Gonadotropins). 3.4.1. Siu bi non S thnh th c v th tinh nhn t o c a tr cung c p m n kh c ph c v k thu t siu bi non, sinh s n t hiu qu c a v t nui.

K thu t gy siu bi non ch y u d a vo s ng c a cc hormon sinh d c ln bu ng tr kch thch s pht tri n, chn v r ng c a t bo tr ng. Hai lo i cs d gy siu bi non l Huy t thanh ng a ch a v FSH. Huy t thanh ng a ch a (PMSG) l ho t ch t sinh h c chi t xu t t huy t thanh ng a c ch a trong th i gian t 45 - 120 t ch t c ho t tnh v a gi ng FSH v a gi ng LH c a tuy n yn. Nh tnh ch t hai m t c PM G cs d kch thch gy siu bi non. + Cch s d ng: PMSG c th s d ng ring l ho c k t h p v i m t s hormon khc : PM G i HCG (Human Choronique Gonandotropin - Kch t i), ho c PMSG v i Prostaglandin nhm F2 (pGF2) v Progesteron Nguyn l c gia sc s c tc d ng kh ng ch t ib pht tri n, chn v r ng lo t. HCG P ng c a nang tr K PM G

i v i cc nang pht tri n, s kch thch cc nang

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 17

CNG NGH SINH HC NG VT

+ Li ng v th i gian s d ng: Ty t ng hormon v th gy siu bi non n m trong pha th vng. 3.4.2. Th tinh nhn to Th tinh nhn t o (artificial insemination) l k thu t sinh s n c nhi u l c s d ng r i s m nh t trong t t c cc k thu t sinh s n m i. Th tinh nhn t c c i ti n. Th tinh nhn t o l m t k thu t sinh s n bao g m vic l y tinh d ch ra ngoi con ng tinh d ch (k c pha long v b o t n) r ch y vo ng sinh d c c mb c th h sau. K thu t th tinh nhn t o bao g L T n sau: ng gia sc khc nhau m li u i gian s d ng

c x y ra bnh c bit l d s d ng. nh gi ch ng tinh trng v pha long tinh d ch. B o qu n tinh d ch. C hai hnh th c l ng n h n (tinh l ng) v di h n (tinh nh). Pht hi ng d c con ci D n tinh cho con ci

ng s d o gi v n c nhi c tinh d ch thu n khi t, cc ph n x phng tinh c ng, c u t o c o gi i n, g n v i t nhin

Th tinh nhn t o cho php m c gi ng c th ph i gi ng v i nhi so v i kh ng v cho php ti ng th i nhi nhn gi ng gy gi ng c a c. M t khc v s ng c th con i sau l n nn c th nn c th p d ng ch n l c ch t ch v c th nhanh i ti n vo ph n cn l i c a qu n th . Th tinh nhn t o cn c th kh c ph c p v th tr ng, v sinh l hay t p tnh gi a cc gi ng hay cc loi thn thu c. K t h p v i vic ch n l ng v ki m tra h u th , th tinh nhn t i hiu qu l n trong s n xu t s a (Vishwanath 2003, Hansen and Block 2004) v vic k t h p v i gi i tnh c a tinh trng (tch tinh trng mang nhim s c th X v tinh trng mang nhim s c th Y 2003) u m r ng l i ch c a. gia sc ni chung v b ni ring c qu nhi u bnh do giao c u, th tinh nhn t c cc bnh truy ng ny. Th tinh nhn to ln: Nhn chung, nh h uh m t k thu tinh nhn t o l n b h n ch nhi u. i u ny do u th i v i d ch v ny trong s n
Page 18

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

CNG NGH SINH HC NG VT

xu t. Khi ti n hnh th tinh nhn t o, tinh d ch l n s d ng ph l y tinh th m c hiu qu t t (Mare 1984). Tuy nhin m t s ph i gi ng nhn t i th i ph i gi ng t s d ng r ng ri trong s n xu t. 3.5. Chuyn gen vo ng vt Vi cm a vic t ng v t chuy i s pht tri n c a u qu chuy n gen mong mu n vo phi. Hin nay c nhi u cs d t ng v t chuy n gen c 72 gi sau khi c, chi ph cho c

Vi tim (microinjection), l m d ng cc thi t b vi thao tc c c nh y v c th c hi i knh hi tim m n ADN trong d ch tim vo phi non c ng v t.

Hnh 3.5.a. Vi tim gen ngoi lai vo tin nhn ca trng th tinh Chuyn gen bng s dng t bo gc(stem cell). Cc t bo phi n 16-32 t bo l cc t ( ) phn ha thnh b t k lo N n hnh nui c y v bi n n p gen vo nh ng t bo ny b ng cch nhim v i vector virus. Sau khi ch n ra nh ng t c bi n n p gen l t ng v t chuy n gen th kh m. T l cc phi s ng st sau thao tc l kh cao (80%), trong s 90% u hin tnh tr ng m i. Ti i ta lai t ng v ng h p t v cc tnh tr ng m ta chuy n vo. Chuyn gen bng sng bn gen (gene gun), l bin php chuy n gen xu t hin cu i nh 1980 n php ny s d ng cc h t b i volfram ho c
GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 19

CNG NGH SINH HC NG VT

b i vng tr n l n ADN (t h p gen c n chuy n) v b n vo kh i m, t ch c c n nh n nh p l (3500 ) n php chuy n gen c nhi m v hiu qu , Vi ts u p d ng k thu n Di truy n Nng nghip, Vin Cng ngh sinh h c thu t ny ch ch y u ti i v i m th c v t Phng php xung in (electroporation) P o cho cc mng sinh h c d th m v d dung h p nh s kch thch c ng, M t y ut n t o ra nh ng l th ng nh trn b m t c a mng t bo, nh v y r t nhi u lo i plasmid c th chuy P c hiu qu cao, ph h p cho vic bi n n p v i s ng l n t bo. Tuy nhin t l t bo ch h nhie v m t m t lo i t i bin php ti n x l thch h p.

Hnh 3.5.b. S b tr mch c bn ca my xung in Qua trung gian virus(virus mediated), l bin php chuy c hiu chuy ng nh n. Nguyn l c gi n. Khi xm nh p vo t bo v t ch ng chuy n m n gen ca n vo t bo ch v b t t bo ch ph i t ng h p nguyn v t liu cho n. P ra m t tri n v t thch th iv i khoa h u khi n v l i d m c l s a ch a khuy t t t di truy n trong liu php gen. Chuy n gen s d ng trung gian virus (retrovirusl lo i virus khng gy bnh) c l i th i ho ng c a i nghi ng i vic t o ra virus m i, lan truy n cc thnh ph n c t o ra m t lo i virus m m

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 20

CNG NGH SINH HC NG VT

Chuyn qua trung gian tinh trng (sperm mediated), l m chuy n gen s d ng tinh trng v i liposome c ch a ADN plasmide v dng th tinh nhn t P c th c hin kh thnh cng th . P c nghin c u v p d i v i chuy n gen l n, nh m t o ra ngu ch c ph c v cho c y ghp.

Hnh 3.5.c. Chuyn gen vo tinh trng

Hnh 3.5.d. S dng cc t bo tin th ca tinh trng chuyn gen 3.6. Nui cy phi trong ng nghim

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 21

CNG NGH SINH HC NG VT

T bo tr ng ti c nui c y trong ng nghi pht tri n n phi du (morula) ho c ti phi (blastocyst). n ny mng trong (pellucida) b bong ra v phi c th lm t c d con. Nh ng phi ny c c y chuy n vo con nh c gy ch a gi (pseudopregnant) pht tri n thnh c th con. 3.7. Cy chuyn phi Nguyn t c c a vic c y chuy sng chuy n phi. c l y ra v tr no th c y tr vo

P y chuy cs d kh nc ng v t ci. Hi bi c s d ng trong th c tin ch n gi ng gia sc nhi c trn th gi C c y chuy c pht tri n. Hiu qu c a vic chuy n phi ph thu c vo nhi u y u t quan tr ng nh t l kinh nghim v k i th c hin thao tc c y chuy n C y chuy : u thu khng ph u thu P y chuy n phi khng ph u thu t c m t s m: t t n km, c th t t l th u thu t. V v c s d ng r ng ri. C y chuy n phi khng ph u thu c th c hin b ng cch s d ng m t sng chuy n phi thu nh xuyn qua c vo s ng t cung. Cc con nh c ki m tra s c m t c a m t th vng ho ng (CL-corpus luteum). Vic gy t mng c ng ( ) gi n m c t i thi u s P c y chuy c ht vo m t "c " 0 25 trong m t c t trung tm ch a 20 ng gi (holding medium) n m gi a hai ti kh. "C " c l p vo sng c y chuy n phi v m t mng b c v u kim lo cl m t mng b c v c qu trnh b t k s nhim trng no t h N o. By gi , sng chuy n ngoi ming t cung. R mng b c v c xuyn qua v sng chuy t qua c v thn t cung n trn 1/3 s ng t cung, cng pha v i bu ng tr ng mang th vng. Piston c a y ch m ch t phi vo s ng t c rt ra t t . Trong c y chuy n phi b u thu c quan tr ng nh t l t d ng c sng c y chuy n c v s ng t cung. Vic s d ng khng cNn th n cc d ng c s lm t n cung v gy ch ch di chuy n cc d ng c trn khi bi t v tr c a chng v qu ng c vo t c ki m tra u chnh qua tr c trng. 3.8. Kim tra kt qu ln c sinh ra t phi chuyn gen

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 22

CNG NGH SINH HC NG VT

kh ng v c chuy n gen l xem gen l c xm nh c vo b my di truy n c ng v khng v s n ph m c a gen l c t ng h p ra hay khng. i v i v th nh i ta s d (Southern blot, Northern blot...) ho c PCR. P (PCR) i ta ph i ki m tra ng thnh hay

trn pha r n

P sng l c tin l ph n ng nhn gen (PCR ) s d ng c p m c hi c chuy P PCR t nhanh (hng triu l n trong m t hai gi ) v chnh xc t n ADN ring bit. ts i, kinh t v thu n tin cho vic x nh s c m tc am bo v i cao. S c m t c a A N c mong mu n di s n ph m PCR ch ng t s c m t c a gen ngo i lai trong h gen v t ch T nh y t qu c th b nhi PCR n gen khng phn bi ADN ngoi nhim s c th hay khng ho c c th b ly nhim ADN trong qu trnh thao tc. Do tnh ph c t p c a h gen v t ch , c p m b t c p v i nh n kh c hiu trong h gen v t ch t o nn k t qu nng cao tnh chnh xc c a vi nh s h i nh p c a gen ngo i ta cn s d m php r t h u hi nh s c m t c a gen ngo i lai v c th pht hin s ng b n sao c a gen h i nh p. Trong ph n l n cc phng th nghi i ta s d m ch hng nghn c th c chuy xc nh n l i k t qu PCR P d nh vi nh ng trnh t c bit trn ADN h gen. ADN m c c t b ng cc lo i enzyme gi i h n di trn gel (agarose ho c polyacrylamide), ti p theo m c lm bi n tnh v chuy n ln mng lai nitrocellulose, A N u phng x (ho c khng phng x ) c s d lai ghp. Ti p theo, k t qu t phng x t ghi,..... iv iv th hai, s n ph m c a gen l d ch m. S n ph hai m : phin m v RT-PCR, s n ph m PCR sng l d n hng

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 23

CNG NGH SINH HC NG VT

d d ch phng x (RIA) W pht hin protein l ng v t chuy ELI A ng v t. (F1 F2 F3 ) c k thu t min

Theo di cc th h sau c di truy n hay khng. P PCR

nh gen l c

PCR l ch vi t t t c a c m t Polymerase Chain Reaction c d ch m t vi sch l Ph n ng chu i trng h p i l "ph n ng khu i gen". PCR l m t k thu t ph bi n trong sinh h c phn t nh m khuy i (t o ra nhi u b n sao) m n DNA m khng c n s d ng cc sinh v t s ng E. coli hay n m men PCR c s d ng trong cc nghin c u sinh h c v y h c ph c nhi u m pht hin Hnh 3.8.a PCR machine cc bnh di truy n, nh n d ng, ch nh ng bnh nhim trng, tch dng gene, v nh huy t th ng. Quy trnh PCR g 20 n 30 chu k. M i chu k g 3 c: c ny g i l bi n tnh, n NA c bi n tnh c phn tch hon ton v

(1) Nhi 94-96 C tch hai s NA ph v c u n i hydrogen n i 2 s NA T c chu k 1 n th i gian m chu m b o m u DNA v m ch cn d ng s T i gian: 1-2 pht

(2) Sau khi 2 s i DNA tch ra, nhi c h th p xu m i c th g n vo s i NA c ny g i l g n m i. Nhi n ny ph thu nm i ng th bi n tnh 50 C (45-60 C). S d ng sai nhi trong n ny d n vi n m i khng g n hon ton vo DNA m u, hay g n m t cch ty tin. Th i gian: 1-2 pht. (3) Cu i cng, DNA polymerase g n ti p vo s i tr ng. N b u bm vo v ho t ng d c theo s NA c ny g i l ko di. Nhi ko di ph thu c DNApolymerase. Th i gian c c ny ph thu c vo c DNA-polymerase v chi u di m nh DNA c n khu N t quy t 1000 / 1

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 24

CNG NGH SINH HC NG VT

Hnh 3.8.b. Chu trnh PCR di dng s . (1) Nng chy 96C. (2)Gn mi 68C. (3) Ko di 72C (P=Polymerase). (4) Chu trnh u tin hon thnh. Hai si DNA kt qu thnh DNA mu cho chu trnh k tip, mc d gp i lng DNA bn sao cho mi chu k. P ELI A

ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) Hay cn g i l ELI A hay EIA l l m t k thu pht hin khng th hay khng nguyn trong m u xt nghim. Hi ELI A c s d ng r ng ri trong nhi c nghin c y h c,nng nghip c bit l trong cc quy trnh ki m tra an ton ch t ng cc s n ph m sinh h c. Nguyn l c a ELISA chnh l d g : (1) Khng nguyn (KN) c hiu khng nguyn - khng th v

c g n trn m t b m t; c "r a" qua b m K ny

(2) Khng th - antibody (KT) bi c g n k t v i enzyme;

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 25

CNG NGH SINH HC NG VT

(3) Thm vo m c th t (substance); enzyme s bi c. c pht ra t m u ch a KN-KT. S sng pht ra. ng t ny v t o tn hiu

i v i cc ELISA pht quang, nh sng s hin din c a ph c h p KN-KT s quy V ELI A KN trong m u nghin c u.

nh s c m t hay khng c m

ti n hnh ELISA c n ph i c t nh t m KT c hi KN t. Thng KN cc nh t i cc gi ng c a vi phi m (polystyrene microtiter plate). -P cc c hiu: KN g n tr c ti p vo b m t c ; c

-P cg c hi (" w " ELI A): KN hiu cho cng khng nguyn c n ki m tra KT N c hiu s

c g n v i m t khng th

c thm vo, ph n ng t o ph c h p KT-KN c th s y ra.

KT c g n tr c ti p v i enzyme, tn hiu quang h c do enzyme lm bi i t s gip pht hin KN c n ki T ng h p s d ng KT th c p ( ) c g n v i enzyme thng qua cc lin k t c ng ha tr gi a cc phn t sinh h c (bioconjugation), KN c nh s c nh n bi t qua KT th c p ny. Gi c c ELI A KT c hiu, KT khng g n v i KN s cl cc lo i d ch c tc d ng "r " c "r a" cu i cng, ch cn KT lin k t v KN c gi l t s ch u tc d ng c a enzyme lin k t v i KT trong ph c h p KT-KN. Ph n ng pht quang (bi i t) s s y ra. T ch ELISA. t t o mu s c dng r cs d ELI A c hi

chnh xc c a

3.9. To dng ng vt chuyn gen Sau khi ki m tra th y gen ngo c di truy n ch n l t ng v t chuy n gen. nh, ti n hnh lai t o v

T o dng v tnh (somatic cloning) l m t thu t ng ch m t t p h p c th (t hai tr ln) c xu t x t m t c th u qua qu trnh sinh s n v tnh. T o dng v tnh v n v i m t s cc k thu t:

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 26

CNG NGH SINH HC NG VT

Chia tch phi V i k thu t ny c th cho ra hai hay nhi u phi t m u, t o ra hng lo t cc c th gi ng ht nhau v m t di truy n hay ni cch khc l t o nn m t dng v tnh. C dao c P nhi u so v d ch nui phi, knh hi khi n kim ho c dao c t, kim gi ( ): th c hin chia tch phi c n ph i c dung c (inverted microscope), thi t b vi thao tc u c nh phi...

T ch a dung d ch nui c y; c nh phi b ng kim gi ; u khi n thi t b d ch chuy n dao c ng thng ng t trn xu ng n i a kh i t bo phi; c t phi thnh hai, ch thao tc nhanh, d t khot v chnh xc; chuy n phi sau khi tch vo dung d ch nui m nui c y kho ng 2 - 3 gi c khi chuy n vo v t nh ng d c ; nui c y v ti p t c chia tch l p l i thu nh c nhi u phi

P cs d chia tch t nh t l n 5-7 ngy sau khi th ( iv i b). N u s d ng phi n cu u phi nang khi kh i t bo l n v cc t t ho th k t qu chia tch phi ni chung l s t N u chia tch phi o n phi du th ch vic chia kh i m m phi thnh hai ph u nhau. Cn n u chia tch phi n phi nang th ngoi vic tch n i phi b th cn ph i tch ph n ngo i phi b. N u tch phi n mu bo bit ha th t l t o nn nh ton vn l th p. Chuy n ghp nhn: P n ghp nhn (nuclear transplantation) t thnh cng nhi u loi gia sc u, b, ng a, l n, d. y l m hi i nh m chuy n ton b v t ch t di truy n (DNA ch a trong nhn) t m t t bo phi s m vo m t t bo tr t o nn t ng b i (h p t ) v pht tri n thnh phi. K thu t chuy n nhn bao g -T du. n sau: n phi

c h t, gy siu bi non, th tinh, r i thu nh n phi t t nh t l

- Tch kh i t bo phi du thnh t ng t bo ring l .

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 27

CNG NGH SINH HC NG VT

Cc t i nh nui c y. B ng cch ny s ng t bo c th cc bi i di truy n v ch n cc t ln. - Dung h p cc t bo trn v i t bo tr t o thnh phi. - Phi t c nui c y in vitro ho ng l th ho c c u. - Sau m t th i gian, chuy ng d ng pha. K thu t chuy u kin c bi C mong mu ng th c hin nhn chng n

tinh khng nhn b

v t nh n trung gian

n ny vo cc v t nh

c gy

ng c th con c ng v t ci, c th t c hng ngn. Ni cch khc, n cho php c th t o ra cc nhm ng v t gi ng ht nhau v m t di truy n mang m t tnh tr ng mong mu i hiu qu cao trong nhn gi ng, trong c i ti n di truy n cc gi ng v t nui.

III. KT QU C TH - KH NNG NG DNG 1. Kt qu c th Qua qu trnh tch chi t, t ng h n gen mong mu t chuy ng v t, c th t o ra ch ng l n c t l n c cao gp ph n nng cao ch ng gi t hiu qu cao v kinh t m khng c n s d ng nh ng ch t t o n c b c m trn th ng.

Hnh III.1 Ln siu nc

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 28

CNG NGH SINH HC NG VT

2. Kh nng ng dng Th c ph m bi t nhi u trong vi ng nhu c u c, th c ph i. Cy bi i gen v i m t s cc tnh tr kh nh, ch u h n, ch u l nh, khng ch t dit c , b t th c, g o c ti n ch t caroten, c chua chn ch m.. v i din tch canh tc dnh cho cy chuy n gen l vo kho ng 130.000 km2 t p trung t M, Trung qu c, Canada, A c r p v i h u h t l trn cc lo i cy tr ng (kho ng 60 lo i ).Tri n v ng c ng v t chuy n gen h i h n. Tuy nhin, tt i m t ti ts ng h n v ng th t l r rng v ngy cng c nhi u s kinh ph v ch c ny. M c d u nh ng thnh t u c a k thu t chuy n gen r t to l n v d nh n th nh ng nguy h i t v th t kh n m b C i ti n ho,vic chuy n gen nhn t o l n dng gen trong t nhin, d sinh ra m t s n dng gen h n trong t i kh ki m sot h c. Kh t c a nh ng dng gen c th gy ra hi m ho iv i ng sinh thi. M iv ng v t chuy n gen nh retrovirus m t lo i ng ch a m d ng retrovirus lm vector th c th s n y sinh nh c.Vic chuy ng v y sinh nh ng v v php lu c. Trong khi t ng v t chuy mang l i r t nhi u l i nhu n m tri c, lo s r ng t ng v t chuy ph v s cn b ng h sinh thi ho ng v t chuy n gen c kh n th p, n u lai v ng v t t nhin c th lm gi m kh n, gi m s s t n t i c a loi. M t s ng h ng v t chuy n gen c kh nh km ho c c bi u hin bnh T ng v t chuy n gen s d ng lm th c ph c nhi u s ng h c a tuy i cng chng. C m t s m cho r ng th c ph m chuy n gen c th c nh ng tc h iv N i ta lo l n nh ng v v s c kho khi s d ng nh ng lo i th c ph m ny. T ng ng d ng trong y h c c ng v t chuy n gen d c ch p nh i m t v i nh ng bnh t t hi i ta s l a ch n gi i php t r T c hy v ng s lm n th c c a cng chng v s ch p nh n nh ng s n ph m chuy n gen. Vit nam, nh ng nghin c u v p d ng cng ngh sinh h c bit l cng ngh c pht tri n kh m nh m trong nh N u chuy n gen th c v ng v c ti n hnh nhi nghin c n Di truy n nng nghip, Vin Cng ngh sinh h c,Trung tm cng ngh sinh h c - i h c qu c gia H n
GVHD: Th.S L TRM NGHA TH Page 29

CNG NGH SINH HC NG VT

Cc k thu n vic t ng v t chuy c ti p c n v th c hin m ts nghin c u. V d m v trang thi t b my mc cho phn tch gen, protein; th tinh nhn t o, gy siu bi non, thu ho ch phi, tr ng, c t phi, c y truy nh gi i tnh phi, lai t o v ch n gi ng. H a, r t nhi nghin c ng k t qu v kinh nghim v chuy n gen th c v t ng v t. ng v t chuy thnh m ng nghin c u v pht tri n thay v ch cung c p th c ph n. Vic nghin c u v t ng v t chuy n t c ph m v cc s n ph m c c hin nhi c trn th gi i. Nhu c u th ng th gi i v i cc c ph c hiu ch c th t o ra b ng chuy n gen. Vic chuy n gen v t o s n ph m chuy n gen cho n nay t l thnh cng cn th m nhi u trong nh m nhi u trong nh ng v t chuy n gen s l m ng pht tri n t t y u ph c v nhu c i. Do v y, v u ki v t ch i u c ta, vic k t h p nghin c ti n hnh chuy ng v t c v l hon ton c th th c hi n ny. Chi ph cho vic chuy n gen cng ngy cng th p v trong th i gian khng xa, v i s pht tri a khoa h c, cng ngh th vic chuy ng v t v i hiu qu cao; t h p gen c n chuy c chn chnh xc vo v tr c n thi t v kh ng ch c nh ng tiu c c c a vic chuy n gen ti p nh n, th vic ch p nh n v kh ng d ng r ng ri k thu t chuy ph c v cc nhu c u c i l v cng l n. Vic nghin c u v chuy ng v t Vit nam l yu c n thi chng ta khng b l c h u v khoa h c v cng ngh so v c trong khu v c v th gi i.

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 30

CNG NGH SINH HC NG VT

TI LIU THAM KHO 1. Tr n Th L, Nguyn Hong L c, Tr n Qu c Dung, 2007. Gio trnh Cng Ngh Gen trong nng nghip. Nh Xu t b n Nng nghip H N i, trang 110 154. 2 ng Tr A T 2006 Bc u ng dng k thut Southern Blot phn tch a dng di truyn nm Magnaporthe grisea gy bnh o n trn cy la. Lu sinh h i H c Nng Lm TP. H Ch Minh 3. Makrides SC. 2003. Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells. Elsevier Science B.V.USA. 4. Louis-Marie H. 2003. Animal Transgenesis and Cloning. John Wiley and Sons, Ltd. USA.

GVHD: Th.S L TRM NGHA TH

Page 31