1

NGHIN CU CH BIN NHNG SN PHM H TR H TIU HA T LI KHUN PROBIOTICS Trn Th Vn Anh, V Th Kim Ngn, Trng Th Yn Linh Lp 08SH1D Khoa Khoa Hc ng Dng TM TT: Ngy nay vic s dng cc li khun Probiotics ng dng trong cc sn phm h tr tiu ha ngy cng ph bin. Nghin cu c thc hin nhm kho st kh nng thu sinh khi ca vi khun L.casei trn mi trng ti u MRS v mi trng ci bin rau ci xanh, ng thi tin hnh kho st kh nng to bo t ca vi khun B.clausii, to ra mt s ch phm sinh khi v bo t vi khun dng bt kh v dng lng gip a dng ha cc ch phm probiotics hin c trn th trng Vit Nam. QU TRNH NGHIN CU V KT QU 1.Vt liu v phng php nghin cu 1.1 Vi sinh vt + Chng Lactobacillus casei phn lp t sa chua ung Yakult ca Cng ty Honkusha. + Chng Bacillus clausii phn lp t Thuc tiu ha Enterogermina ca Cng ty Sanofi-Aventis. 1.2 Mi trng S dng mi trng MRS v mi trng ci bin rau ci xanh kho st c tnh v kh nng thu sinh khi vi khun L.casei. Mi trng Cao tht Pepton v Acetate nhn ging, kho st kh nng thu sinh khi v to bo t vi khun B.clausii. 1.3 Phng php nghin cu S dng cc phng php nghin cu vi sinh vt thng dng trong nghin cu kho st cc c tnh ca vi sinh vt v mt s phng php kho st ng cong sinh

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

trng, phng php nhn ging v thu nhn sinh khi vi khun, phng php xc nh s lng t bo vi sinh vt 2. Kt qu v tho lun 2.1 Phn lp vi khun T mu sa chua ung Yakult ca Cng ty Honkusha Vit Nam v mu thuc h tr tiu ha Enterogemina ca Cng ty Sanofi-Aventis phn lp c hai chng vi khun L.casei v B.clausii.

Hnh 1. Hnh thi khun lc L.casei tin hnh nhn ging.

Hnh 2. Hnh thi khun lc B.clausii

Cc chng vi khun c lm thun v em gi ging trn ng thch nghing 2.2 Nui cy v thu sinh khi ca vi khun L.casei xc nh thi gian thu sinh khi ti u, chng ti tin hnh xc nh ng cong sinh trng ca vi khun L.casei bng cch o OD610nm mt t bo vi khun thay i trong vng 48 ting trong hai mi trng rau ci xanh lng v MRS lng.

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

0.5 0.4 OD 610nm 0.3 0.2 0.1 0 0 10 20 30 Thi gian (gi) 40 50

th 1. Mi tng quan gia thi gian v mt t bo sng ca L.casei trong mi trng rau ci xanh
2 OD 610nm 1.5 1 0.5 0 0 10 20 30 Thi gian (gi) 40 50 60

th 2. Mi tng quan gia thi gian v mt t bo sng ca chng L.casei trong mi trng MRS Sau khi tin hnh xy dng ng cong sinh trng ca L.casei trn hai mi trng, tin hnh xc nh s lng t bo trong qung thi gian vi khun t sinh khi ln nht bng phng php m trc tip trn bung m hng cu. Thu sinh khi vi khun bng phng php ly tm 10.000 vng/5 pht 100mL mi trng nhn ging cp 2, sau ra li vi nc ct v trng v em ly tm li. Sinh khi vi khun thu c em i sy kh v cn khi lng cho ra sn phm dng bt hoc em ha vi 10mL nc ct v trng cho ra sn phm dng dch lng.

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

2.2.1 Sn phm sinh khi dng dch lng ca L.casei trn mi trng ci bin rau ci xanh S lng t bo vi khun c trong 1mL mi trng rau ci xanh: 26,25 triu t bo Sn phm cha 26,25 x 100 = 2,625 t t bo/ 10mL 2.2.2 Sn phm sinh khi L.casei trn mi trng MRS

Hnh 3. Sinh khi vi khun L.casei thu c sau khi li tm S t bo vi khun c trong 1mL mi trng MRS: 1,255 (t t bo/mL) Khi lng sinh khi vi khun sau khi sy kh: 0,41g (hiu sut t 41%) + Sn phm dng bt kh Tng ng vi 0,41g sn phm cha 1,225 x 100 =125,5 t t bo + Sn phm dng lng Sn phm s cha 1,225 x 100 = 122,5 t t bo/10mL

Hnh 4. Sn phm sinh khi L.casei dng lng

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

Nhn xt kh nng thu sinh khi gia hai mi trng rau ci xanh v MRS: Da trn kt qu kho st v s lng t bo vi khun trong hai mi trng MRS v mi trng ci bin rau ci xanh, nhn thy s lng t bo vi khun c mt trong mi trng rau ci xanh t hn so vi mi trng MRS. Tuy nhin, khi so snh gi thnh ca hai mi trng, mi trng rau ci xanh vn c gi r hn rt nhiu so vi mi trng MRS (nhiu ha cht t tin). Ngoi ra, ng cong sinh trng cho thy thi gian thu sinh khi ca L.casei trong mi trng rau ci xanh s sm hn so vi MRS. 2.3 Nui cy v thu sinh khi v to bo t vi khun B.clausii Trc khi tin hnh thu sinh khi ta tin hnh o mt t bo thay i trong 48 ting xc nh ng cong sinh trng ca vi khun B.clausii.

1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 10 20 30 40 50 Thi gian (gi)

th 3. Mi tng quan gia thi gian v mt t bo sng ca chng B.clausii trong mi trng Cao tht-Pepton 2.3.1 Thu nhn sinh khi B.clausii Tin hnh xc nh s lng t bo vi khun trong khong thi gian ti u bng phng php m trc tip trn bung m hng cu, sau em ly tm thu sinh khi vi khun ri ha ton b sinh khi thu c vi 10mL nc ct v trng. S t bo vi khun c trong 1mL mi trng: 131,5 (triu t bo/mL) Sn phm sinh khi vi khun B.clausii dng lng s cha 131,5 x 100 = 1,315 t t bo/10mL

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

OD 610nm

2.3.2 Thu nhn bo t B.clausii Kh nng hnh thnh bo t ca B.clausii c kho st trn 4 iu kin: Mi trng Cao tht Pepton nhit 15C trong 2 tun Mi trng Cao tht Pepton nhit 15C trong 3 tun Mi trng Acetate nhit 15C trong 1 tun Mi trng Acetate nhit phng trong 1 tun

Sau khong thi gian kho st, tin hnh nhum bo t xc nh s tn ti ca bo t trong mi trng nui cy.

Hnh 5. Bo t chng B.clausii Kt qu cho thy bo t B.clausii xut hin trn cc mi trng trn. Sau tin hnh m s lng bo t hnh thnh trong bn iu kin trn bng phng php m trc tip trn bung m hng cu, kt qu thu c c trnh by trong bng sau:

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

Mi trng iu kin S lng bo t m c trong 5 ln S lng bo t/mL S lng t bo m c trong 5 ln (trc khi cho to bo t) S lng t bo/mL T l hnh thnh bo t

Cao tht Pepton Nhit 15C Nhit 15C trong 2 tun trong 3 tun

Acetate Nhit 15C trong 1 tun 305 15,25 triu bo t/mL Nhit phng trong 1 tun 255 12,75 triu bo t/mL

187 93,5 triu bo t/mL

245 122,5 triu bo t/mL

243

283

121,5 triu t bo/mL 76,95% 100,82%

14,15 triu t bo/mL 107,77% 86,57%

Bng 3.1 S liu so snh t l hnh thnh bo t Da vo bng kt qu s liu trn, ta c th nhn thy trong cng mi trng nui cy, kh nng hnh thnh bo t ca B.clausii ph thuc vo thi gian, nhit v thnh phn mi trng. i vi mi trng Cao tht Pepton, sau mt khong thi gian, cht dinh dng trong mi trng s cn dn, mi trng nui cy s tr thnh mi trng khc nghit kch thch vi khun to bo t, mt khc iu kin nhit thp cng thc y qu trnh hnh thnh bo t vi khun. Khi so snh trn hai mi trng, vi khun c kh nng to bo t nhiu hn trn mi trng Acetate l mi trng ngho cht dinh dng. Ly 100mL dch nhn ging xc nh c bo t ln nht trn em ly tm 10.000 vng/5 pht, thu cn bo t ra vi nc ct v trng v em ly tm li ln hai, ta thu c bo t ca B.clausii.

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

Hnh 6.Bo t B.clausii thu c sau khi li tm Sau khi ly tm, ton b bo t vi khun c chuyn vo ng nghim cha 10mL nc ct v trng to dch huyn ph bo t. Sn phm cha 122,5 x 100 = 1,225 t bo t/ 10mL

Hnh 7. Sn phm lng bo t ca chng B.clausii 2.4 D on gi thnh cc sn phm Probiotics Tin hnh tnh s b gi thnh ca ha cht s dng trong pha ch mi trng nui cy vi sinh vt, c th chng ti s dng ha cht pha 100mL mi trng thu c cc sn phm Probiotics nghin cu. Chng ti thu c bng d on kt qu gi thnh s b sn phm v km theo so snh vi mt s sn phm Probiotics hin c trn th trng.

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

Sn phm Probiotics Sinh khi kh L.casei Sinh khi L.casei lng Sinh khi L.casei trn mi trng rau ci xanh Sinh khi B.clausii lng Bo t B.clausii lng Sa chua ung Yakult Sa chua ung Probi Enterogermina

Th tch (trng lng) 0,41g 10mL 10ml 10mL 10mL 65ml 65mL 2mL

Hm lng vi sinh vt 125,5 t t bo 125,5 t t bo 2,625 t t bo 1,315 t t bo 1,225 t bo t 6,5 t t bo 13 t t bo 2 t bo t

Gi 5000 VN 5000 VN 200VN 3000 VN 3000 VN 4000 VN 3000 VN 6500 VN

Bng 3.2 D on s b gi thnh ca cc sn phm thu c Probiotics v so snh vi mt s sn phm Probiotics trn th trng Nhn xt: + i vi sn phm cha L.casei Sau khi tnh ton s b gi thnh, thu c kt qu nh bng trn. Gi thnh phm ca sn phm sinh khi ca L.casei tng ng so vi Enterogermina, nhng s lng t bo c trong sinh khi ca sn phm cha L.casei nhiu hn gp nhiu ln so vi s bo t trong Enterogermia. Bn cnh nhng u th v s lng, vi nhng c tnh gip L.casei c th sng st qua mi trng acid ca d dy i vo rut m vn m bo hot tnh v c tc dng v ng tiu ha nh mong mun. Trong khi , dng bo t ca B.clausii c th i vo thnh rut nhng cn c thi gian pht trin t bo t thnh t bo, nn sn phm ny cha th c tc dng ngay lp tc ging nh L.casei. y chnh l kh nng cnh tranh trong lnh vc dc phm ca sn phm chng ti nghin cu. Tuy nhin, thu c sinh khi ca L.casei phi tin hnh trong mi trng vi ha cht mc tin. V vy nhm chng ti tin hnh kho st trn mi trng ci bin rau ci xanh. Sau thi gian kho st chng ti c th thu c hm lng vi sinh vt l xp x 2,5 t t bo, nhng vi gi thnh rt thp. C th ni, nu c trin khai quy m

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

10

cng nghip v m bo c iu kin mi trng v trng ti u th y l mc gi rt cnh tranh vi nhng sn phm khc. + i vi sn phm cha B.clausii Ngoi ra, nhm chng ti cn tin hnh kho st thm v thu sinh khi, bo t ca B.clausii trn mi trng Cao tht pepton th thu c sn phm v gi thnh tng ng vi sn phm Enterogermina. V thi gian hn ch, chng ti cha th i su vo nghin cu trn mi trng Acetate to bo t. Nhng vi nh gi s b ban u, chng ti nhn thy t l sinh bo t trn mi trng Acetate ln hn mi trng Cao tht pepton. Nn nu c trin khai thu bo t trn mi trng Acetate chng ta c th thu c s lng bo t ln hn nhiu.

KT LUN Sau gn 5 thng nghin cu, chng ti nghin cu cho ra cc sn phm h tr tiu ha t li khun Probiotics, a dng ha sn phm Probiotics trn th trng.: 1. Sn phm sinh khi vi khun L.casei di hai dng: bt v lng. 2.Sn phm sinh khi v bo t B.clausii. 3.Kho st thnh cng kh nng thu sinh khi ca L.casei trn mi trng ci bin rau ci xanh cho ra sn phm c gi thnh r. 4.Kho st s b kh nng to bo t ca vi khun B.clausii cc iu kin khc nhau.

TI LIU THAM KHO Ti liu ting Vit [1] L Thnh Hng c im v vai tr ca probiotic ngi v ng vt Lun vn Tt nghip 2010

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011

11

[2] Mai m Linh, Minh Phng, Phm Th Tuyt, Kiu Hu nh, Nguyn Th Giang c im sinh hc ca cc chng vi khun lactic phn lp trn a bn H Ni Tp ch Khoa hc HQGHN, Khoa T nhin v Cng ngh 24 (2008) 221-226 [3] Phan Th Phng Tho Nghin cu ng dng vi khun Bacillus subtilis vo sn phm ln men t u h c kh nng h tr tiu ha Lun vn Tt nghip Trng H Tn c Thng, nm 2005 [4] Ti liu Th nghim vi sinh i cng trng H Tn c Thng [5] Thng co bo ch ngy 15/07/2006 Cng ty Sanofi-Aventis _ Bc s Nguyn Th Ngc Dip [6] n Cng ngh sn xut acid lactic - Trng i Hc S Phm K Thut Tp H Ch Minh - GVHD Ng Lm Tun Anh Ti liu ting Anh [7] Sandholmand Maria Saarela, edited by Tiina Mattila - Funcitional dairy products 2003 CRC Press Trang web in t [8] http://en.wikipedia.org/wiki/Bacillus_clausii [9] http://en.wikipedia.org/wiki/Lactobacillus_casei [10] http://www.probiotic.org/lactobacillus-casei.htm [11] http://www.ehow.com/about_5531574_lactobacillus-casei.html [12] http://en.wikipedia.org/ [13] http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Bacillus_clausii [14] http://free.vietscience.org

Hi ngh nghin cu khoa hc sinh vin ln X Nm hc 2010 2011