THC HNH VI SINH I CNG

BO CO THC HNH BI 13 NH LNG VI SINH VT BNG PHNG PHP M TRC TIP ( BUNG M HNG CU )
I. NGUYN TC Phng php m trc tip l phng php nh lng da trn s quan st v m trc tip s lng t bo vi sinh vt bng knh hin vi v bung m. 1.I TNG Vi sinh vt n bo c kch thc ln: nm men, to n bo, bo t nm mc d quan st di knh hin vi. 2. HN CH Khng phn bit c t bo vi sinh vt sng v cht trong mu. Khng phn bit c cc t bo vi sinh vt v ht vt th. Hn ch i vi huyn ph c mt thp do lng dung dch em m nh. chnh xc khng cao. Khng thch hp mu c mt vi sinh vt thp.

LU : Ty mc c mt ca vi sinh vt trong mu ban u, dung dch em m cn c pha long n mc ph hp ( s t bo phi ln hn hoc bng 2 v khng qu 10 t bo ). Nguyn tc pha long: Dung dch pha long mu thng l NaCl 0.9% hay photphat m c v trng.

TRN THANH TNG MSSV: 10243221| GVHD: Thy TRNG V ANH DNG

THC HNH VI SINH I CNG

II. DNG C, MI TRNG, HA CHT Dng c phng th nghim. Nc mui sinh l 0.9%. Nc ct v trng. Cn 96o. Chng nm men: Saccharomyces cerevisiae.

III. TIN HNH TH NGHIM S DNG BUNG M HNG CU 1. CU TO BUNG M Bung m l mt phin knh trong, dy, hnh ch nht. Gia l phn lm, phng, c k mt hoc hai khung m gm 400 nh. Bn ngoi c ghi tn loi bung m, v ghi cc thng s k thut nh hnh bn. Hnh 13.1 Bung m hng cu
2 TRN THANH TNG MSSV: 10243221| GVHD: Thy TRNG V ANH DNG

THC HNH VI SINH I CNG

2. CU TO KHUNG M

Hnh 13.2 Cu to khung m 3. CCH TIN HNH

Hnh 13.3 Cch tin hnh

3 TRN THANH TNG MSSV: 10243221| GVHD: Thy TRNG V ANH DNG

THC HNH VI SINH I CNG

QUY TRNH:
Mu

ng nht

Pha long

Chn nng pha long

Bm dch mu vo BHC

m trc tip trn KHV

Tnh kt qu

4. CCH M T BO TRONG BUNG M

Hnh 13.4 Cch m t bo trong bung m

4 TRN THANH TNG MSSV: 10243221| GVHD: Thy TRNG V ANH DNG

THC HNH VI SINH I CNG

Hnh 13.5. Nhng t bo c m ( mu en ) v khng c m ( mu xanh ) trong 1 ln 5. CNG THC TNH Gi A l s lng t bo m c trong 80 nh S lng t bo trong 1 mm3 c tnh theo cng thc: S t bo trong 1 mm3 = Trong : A: S lng t bo trong 80 nh 4000 = 400 x 10 ( 1/400 mm2: din tch 1 nh; 1/10 mm: chiu cao t mt bung m n tm lamelle ) PL: pha long IV. NHNG IM CN LU Ch m c tng s t bo, khng th bit t bo no cn sng, t bo no cht.
A 4000 PL 5 16

TRN THANH TNG MSSV: 10243221| GVHD: Thy TRNG V ANH DNG

THC HNH VI SINH I CNG

Nng dch huyn ph pha long sao cho mt mi nh khng qu 10 t bo. S dng xong phi ra bung m ngay v lau kh. t chnh xc cao, s t bo trung bnh m c trong 1 nh: 2 a 10. V. BO CO THC TP Trnh by nguyn tc v cch tin hnh ca phng php nh lng vi sinh vt bng phng php m trc tip. NGUYN TC: Phng php m trc tip l phng php nh lng da trn s quan st v m trc tip s lng t bo vi sinh vt bng knh hin vi v bung m. m s lng t bo vi khun c trong mt n v th tch ca phng m, t suy ra s lng t bo c trong 1ml dung dch, nhn vi pha long bit s t bo c trong dung dch ban u. CCH TIN HNH: Pha long huyn ph t bo vi sinh vt sao cho trong mi ln ch t 10 - 50 t b o ). Lc mnh dch huyn ph t bo ( pha long), dng pippet Pasteur ht dch huyn ph ny. y bung m bng mt phin knh mng. Nh nhng dng u pippet (cha mt git huyn ph vi sinh vt), t vo cnh bung m (ni tip gip vi phin knh mng). Dch huyn ph s i vo bung m nh c ch mao dn. Bung m c chun b ng khi ch c vng khng gian nm gia l knh v bung m c ph bi dch huyn ph t bo, c n c c r n h c h u n g q u a n h th k h n g b d n h t. Di chuyn nh nhng khung m dch huyn ph trn y cc khoang. Khi , d c h n m tr o n g k h o a n g c d y k h o n g 0 .1 m m. t bung m ln knh hin vi, s dng vt knh x10 tm bung m. Chnh tht r, sau chuyn qua vt knh x40 m. i u c h n h c n g n h s n g b n g c a s p c th q u a n s t r r n g c t b o ln cc ng k. Tu vo s lng t bo m c th chn cch m tt c cc t bo c trong trung tm hay ch m cc t bo c trong mt s vung ln i di n . Thng thng ta chn 1 trung t m v 4 nm ngoi ba. Bt u m t bo sau khi nh git dch t 3 - 5 pht; phi m cc t bo nm t r n 2 n g k k n h a u c c h n c a t n g .
6 TRN THANH TNG MSSV: 10243221| GVHD: Thy TRNG V ANH DNG

THC HNH VI SINH I CNG

Phng php nh lng vi sinh vt bng cch m trc tip thng p dng cho nhng i tng vi sinh vt no? Gii thch I TNG Vi sinh vt n bo: nm men, to n bo, bo t nm mc,... GII THCH: Nhng vi sinh vt nu trn c kch thc ln. D quan st di knh hin vi. Chng thng tn ti vi mt cao trong mu vt cn kim tra. a s khng cn nhum mu ( nu l vi khun thng nhum xanh metylen hoc mu ph hp vi vi khun ). Do quan st bng knh hin vi vt knh x40, ngha l phng i ln 400 ln nn ch c th m c nhng vi sinh vt c kch thc ln.

TRN THANH TNG MSSV: 10243221| GVHD: Thy TRNG V ANH DNG