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Un poco de historia
1880-1910: Primeros ensayos de sobrevida de clulas fuera de organismos enteros (Roux, Haberlandt, etc.) 1907: El zologo americano R.G. Harrison es considerado el iniciador de los cultivos de tejidos animales.
Fue el primero que emple tcnicas in vitro para el estudio de fenmenos in vivo, realizando cultivos de mdula espinal embrionaria de anfibios. Pudo observar el crecimiento de los axones de los neuroblastos, y estableci que el axn se formaba por expansin a partir del cuerpo neuronal y no por fusin de una cadena de clulas. El cultivo se realizaba en una gota de linfa del anfibio que colgaba de un cubreobjetos sobre una cmara sellada. 100 aos de Cultivos Celulares
Un poco de historia
1920-1940: Se establecen lneas celulares de diversos rganos animales 1940-1955:
Se replican virus sobre clulas cultivadas Se producen las primeras vacunas virales en cultivos celulares Se definen las condiciones para congelar clulas en nitrgeno lquido (Alan Parks, 1949) Se establece la lnea HeLa (1 de origen humano, 1952) Se desarrollan los primeros medios de cultivo qumicamente definidos Se cultivan las primeras clulas de insectos
Un poco de historia
1960s: Se desarrollan las tcnicas de hibridizacin en cultivos 1970s:
Los cultivos celulares se incorporan a la ingeniera gentica Desarrollo de grandes reactores de cultivos en suspensin
Reciente:
Modificacin gentica controlada de clulas Desarrollo de medios de cultivo libres de suero Desarrollo de medios de cultivo libres de componentes animales
Cultivos celulares Propagacin de clulas fuera del organismo de origen Pueden ser de origen vegetal o animal, y dentro de stas, pueden provenir de distintos tejidos de vertebrados o invertebrados Los cultivos celulares producen clones, por lo que todas las clulas de un cultivo poseen el mismo genotipo, excepto que se produzcan mutaciones durante el proceso
Investigacin
Comprender la fisiologa celular Toxicologa, virologa, etc.
Ingeniera de tejidos
Piel, hgado Hueso y cartlago
Produccin de biolgicos
Anticuerpos monoclonales Hormonas (FSH) Enzimas Vacunas virales (polio, aftosa, parvo, moquillo, etc.)
Ventajas
Un solo tipo bien definido de clulas en cada cultivo Fcil de manipular, condiciones controladas Establecimiento de lneas internacionales de fcil acceso Alternativa al uso de animales
Sistema para estudiar principios fisiolgicos Chequeo posterior en un nmero reducido de animales
Pueden obtenerse grandes cantidades de clulas Permite trabajar en pequea, media y gran escala Las clulas pueden mantenerse congeladas por largos perodos de tiempo con mnima prdida de viabilidad
100 aos de Cultivos Celulares
El entorno es distinto Las condiciones de crecimiento son distintas Las conclusiones de los ensayos deben ser debidamente acotadas
100 aos de Cultivos Celulares
Componentes de un cultivo
CLULAS
Tipos de cultivo
Cultivo primario: clulas, tejidos u rganos tomados directamente de un animal. Cultivo de rganos, explantes: mantenimiento de rganos o parte de rganos in vitro. Cultivo de tejidos: mantenimiento de tejidos in vitro. Cultivo de clulas: mantenimiento de clulas dispersas. Lneas celulares: clulas mantenidas por subcultivos sucesivos comenzando por un cultivo primario. Cultivos continuos: clulas que han logrado sobrevivir a muchos subcultivos. Expectativa de vida infinita.
100 aos de Cultivos Celulares
Ciudad, pas
Minassas, USA Braunschweig, Alemania
N de cultivos
European Collection of Cell Salisbury, Cultures Wiltshire, UK Istituto Giannina Gaslini Genova, Italia
Fuente: www.biotech.ist.unige.it/cldb/indexes.html
Componentes de un cultivo
SOPORTE
CELULAS
Soporte
Bioreactores
Soporte Slido: Clulas adheridas a superficies plsticas, membranas, polmeros, vidrio etc.
Soporte
Titulacin de virus en microplacas con tincin final
Microcarriers
Componentes de un cultivo
SOPORTE
FASE GASEOSA
CELULAS
Fase gaseosa La concentracin de oxgeno necesaria depende de los requisitos de las clulas La concentracin de dixido de carbono depende de la capacidad buffer del medio de cultivo Usualmente el equilibrio dixido de carbono (en la fase gaseosa) - bicarbonato (en la fase lquida) acta como buffer del cultivo
Componentes de un cultivo
SOPORTE
FASE GASEOSA
CELULAS
Materiales
Organizacin de un subcultivo
El objetivo de un subcultivo (pasaje) es mantener las clulas en condiciones de replicacin normal. En el subcultivo se renueva el medio de cultivo y se lleva la relacin clulas/medio/superficie de soporte, a la inicial. Las clulas adheridas a soportes slidos deben ser primero despegadas de este soporte y separadas enzimticamente (tripsina). Luego se resuspenden, se tien con colorante vital (Azul Tripan) y se cuentan en cmara de Neubauer. Si se parte de un cultivo de clulas en suspensin directamente se procede a contar las clulas.
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Organizacin de un sub-cultivo Una vez conocida la concentracin de clulas en el material de origen, se definen las condiciones del subcultivo deseado y se realiza el pasaje.
Ejemplo
Material de origen: 2x106 cl/ml Destino: tres botellas de 175 cm2 con una concentracin inicial de 35000 cl/cm2 Necesidad: 3 x 175 x 35000 = 1.8x107 clulas 1.8x107 clulas / 2x106 cl/ml = 9 ml ( 3 ml / botella )
Factores crticos Temperatura de cultivo: depende del origen de las clulas. Mamferos: 37C, peces e insectos: 18-22C, aves: 38.5C, etc. Contaminaciones: gran complicacin en los laboratorios de cultivos celulares, principalmente a escala industrial. Pueden ser por levaduras, hongos miceliares, virus, bacterias, micoplasmas, otras clulas, etc.
Factores crticos no biolgicos Orden Limpieza Higiene personal Vigilancia microscpica Estudio adecuado de los problemas Anlisis de problemas potenciales Trazabilidad de los cultivos Protocolizacin exhaustiva
Componentes de un cultivo
SOPORTE
FASE GASEOSA
CELULAS
Catlogo Materiales
Agitacin
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Manejo de lquidos
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Cultivos robotizados
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Incubadores de CO2
(pinche sobre imagen)
Congeladores -80 C
(pinche sobre imagen)
Almacenamiento de muestras
(pinche sobre imagen)
SOPORTE
FASE GASEOSA
CELULAS
Catlogo Materiales Aplicaciones actuales
Fertilizacin In Vitro
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Soporte tcnico
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Nuestras marcas
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Seminarios conmemorativos del Centenario de Cultivos Celulares (pinche para ver el programa)