DOSSIER CIENTFICO

La qumica como herramienta en biomedicina

Enrique Mann

La qumica es la ciencia que estudia las molculas, su sntesis, propiedades, estructura e interacciones. Todo este conocimiento es fundamental para entender los procesos fisiolgicos a escala molecular, que logran mejorar los mtodos de diagnstico precoz de las enfermedades y sintetizar nuevos frmacos para su tratamiento.

a biomedicina es una parte de la ciencia mdica que aplica los principios de las ciencias al desarrollo de la prctica clnica. Como cual quier ciencia mdica, su objetivo principal es el de curar enfermedades y/o paliar los sntomas de estas. Para ello recurre a una aproximacin multidisciplinar en la que participan diversas reas del conocimien to, entre las que se pueden citar la medi cina, biologa humana, biologa de siste mas, fisiologa, inmunologa, neurociencia, endocrinologa, bioqumica, biologa molecular, qumica, ciencia de los mate riales, fsica y matemticas. Aplicando esta aproximacin multidisci plinar, la biomedicina pretende entender el origen de la enfermedad para poder tratarla ms eficazmente. Para alcanzar este logro, es necesario entender las enfermeda des a escala molecular. La biomedicina estudia los procesos fisiopatolgicos tenien do en cuenta desde los procesos de recono cimiento molecular que dan lugar a las interacciones entre biomolculas, hasta el funcionamiento dinmico de un organis mo dado, el cual se genera por los procesos de interaccin entre sus diferentes compo nentes. A la hora de abordar problemas tan complejos es fundamental emplear una combinacin de las herramientas que nos

ofrecen, principalmente, la biologa, la qumica y la fsica. Esto nos permite mejo rar los mtodos de diagnstico precoz de las enfermedades, as como disear y sinte tizar nuevos frmacos para su tratamiento. Las aportaciones de la qumica a la bio medicina son muy variadas. Por un lado, la principal caracterstica de la qumica es la de preparar molculas. Estas sustancias qumicas son la base con la que se prepa ran los medicamentos. Tambin estas molculas han servido como herramientas para estudiar procesos fisiolgicos relacio nados con las enfermedades, proporcio nando la base de nuestro conocimiento a escala molecular. Otro aspecto importan te de la qumica es el estudio de la estruc tura molecular (conectividad de tomos dentro de una molcula) y supramolecu lar (cmo las molculas interaccionan entre s y con otras entidades qumicas). Tanto la qumica estructural como la qumica supramolecular ayudan a enten der las relaciones entre la estructura qu mica y la respuesta biolgica. Este cono cimiento permite profundizar en la comprensin de las enfermedades a esca la molecular y a disear tratamientos qumicos para las mismas. Durante milenios, la prctica de la medi cina por los seres humanos ha sido una

especie de caja negra basada en resultados. Se saba que si a un enfermo con una dolencia especfica se le suministraba un remedio obtenido a partir de una planta en particular su enfermedad paliaba o, en el mejor de los casos, desapareca. Era imposible dar una explicacin a una esca la molecular de lo que estaba realmente ocurriendo debido a que, lgicamente, no se dispona ni de las tcnicas ni de los conocimientos necesarios para ello.

Algunos hitos de las aportaciones de la qumica a la biomedicina

Esta situacin empez a cambiar a media dos del siglo XX. Especialmente signifi cativa fue la aportacin de Linus Pauling, que en 1949 explic por primera vez una enfermedad (la anemia falciforme) a esca la molecular, indentificndola como de origen gentico debida a la mutacin de un aminocido en secuencia de los 457 aminocidos presentes en la hemoglobina humana.1 Este hecho se puede considerar el comienzo de la biomedicina. Desde entonces el desarrollo de nuestro conocimiento para poder comprender cmo las biomolculas varan, se modifi can e interaccionan a escala molecular ha

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DOSSIER CIENTFICO propuestas hace un siglo por Ehrlich, el padre de la quimioterapia y de la qumica mdica moderna.4 Otro aspecto de la qumica de polmeros con aplicaciones directas en biomedicina es la preparacin de biomateriales poli mricos o biopolmeros. Estos compues tos se introducen en un organismo con el objetivo de permitir adaptar sustitu ciones para distintos entornos (esquel tico, vlvulas para el corazn, lentes o electrodos, etc.) gracias a la selectividad de sus propiedades. Dependiendo de la respuesta al tejido del entorno en el cual se introducen, hablamos de materiales bioinertes, biocompatibles o bioactivos. Sin embargo, aunque los polmeros y biomateriales polimricos ejercen un papel clave en la biomedicina moderna, sigue siendo necesario el avance de nue vas metodologas qumicas para el desa rrollo de polmeros ms sencillos y efi cientes que puedan satisfacer la cada vez mayor demanda de aplicaciones terapu ticas. No sera exagerado afirmar que nos ve mos inmersos en lo que se podra definir como una segunda revolucin industrial: la revolucin de la nanotecnologa. Se estn consiguiendo avances extraordina rios en diversas reas, siendo sin duda la biomedicina una de las grandes benefi ciadas de este desarrollo y donde segura mente seremos testigos de numerosas aplicaciones clnicas de gran impacto en la diagnosis y tratamiento de enfermeda des.5 Los sistemas de distribucin nano particulados son transportadores de un tamao que puede variar entre los 10 a los 1000 nm. Desde hace varios aos, sistemas como por ejemplo los puntos cunticos (quantum dots), nanopartculas magnticas, nanopartculas de oro, mi celas o liposomas, estn siendo emplea dos para la distribucin de frmacos y genes. Debido a su pequeo tamao son capaces de atravesar diferentes barreras fisiolgicas, permitiendo la acumulacin del frmaco en la zona de inters. Al igual que lo comentado anteriormente para los polmeros teraputicos, esta distribucin controlada ofrece varias ventajas impor tantes, ya que permite reducir la dosis, minimizar efectos secundarios indesea dos e incrementar la biodisponibilidad del frmaco. La modificacin qumica de la superficie de estas nanopartculas, tiene un impacto enorme tanto en sus propiedades fsicas como qumicas, lo cual repercute de manera directa en su eficacia teraputica.

Figura 1. Sntesis industrial de la L-DOPA desarrollada por Knowles et al. La etapa clave consiste en una hidrogenacin asimtrica. El catalizador de rodio se prepara con el ligando quiral DiPAMP

crecido exponencialmente. Esto ha dado lugar al desarrollo de nuevas reas del conocimiento como la biologa estructu ral, la qumica biolgica, la biofsica o la gentica qumica, por poner algunos ejemplos, las cuales en la mayora de los casos convergen y se apoyan entre s con el objetivo de comprender los cada vez ms complejos sistemas biolgicos que estudiamos. La principal aportacin de la qumica al campo de la biomedicina contina siendo la generacin de molculas con potencia les aplicaciones teraputicas. Este proce so se ha visto acelerado en las ltimas dos dcadas por el desarrollo de mtodos basados en qumica combinatoria, snte sis en paralelo y mtodos de cribado de alto rendimiento, que permiten sintetizar y evaluar biolgicamente miles de com puestos en tiempos asombrosamente cortos. Por otro lado, existe la necesidad de fr macos en forma pticamente pura, ya que la actividad de los mismos puede ser muy variable de un estereoismero a otro. Esto se debe a que, en los organismos vivos, los receptores naturales (protenas, enzimas, cidos nucleicos, etc.) de estos frmacos poseen una estructura tridimensional asimtrica (quiral). Esta necesidad ha promovido el desarrollo de mtodos de sntesis asimtrica que permiten obtener de forma altamente selectiva compuestos con potenciales aplicaciones teraputicas en forma pticamente pura. Un ejemplo significativo de cmo la qu mica ha abordado esta necesidad fue el

desarrollo de un mtodo de sntesis de LDOPA (fig. 1); hasta el momento el frmaco ms til del que disponemos para el tratamiento de la enfermedad de Par kinson, de forma pticamente pura y a escala industrial. Por esta contribucin fundamental al desarrollo de un proceso comercial de sntesis cataltica asimtrica, Knowles recibi el premio Nobel de Qu mica en el ao 2001 junto a Sharpless y Noyori.2

Polmeros teraputicos y nanopartculas

Con el amplio trmino de polmeros teraputicos se engloba tanto a frmacos con estructura polimrica, conjugados frma copolmero, conjugados protenapol mero, micelas de estructura polimrica unidas de manera covalente a un frmaco, como a poliplejos (complejos entre cidos nucleicos y un polmero catinico), que se estn desarrollando como vectores no virales en transporte gnico.3 La conjuga cin de polmeros biocompatibles, como por ejemplo el polietilenglicol (PEG), a protenas y pptidos con propiedades te raputicas ha demostrado ser una estrate gia muy efectiva a la hora de reducir la inmunogenicidad y aumentar la biodis ponibilidad. Por otro lado, el desarrollo de nanocpsulas polimricas diseadas para ser capaces de romperse y liberar el frmaco de inters de una forma contro lada y selectiva en la zona deseada, co mienza a ser ya una realidad. Conceptual mente, estas nanocpsulas pueden considerarse la mejor versin de que dis ponemos hasta ahora de las balas mgicas

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Reacciones de bioconjugacin in vivo a travs de la qumica clic

Otra rea de investigacin con aplicaciones inmediatas en biomedicina es aquella re lacionada con el empleo de reacciones qumicas de bioconjugacin. La intensa actividad investigadora desarrollada en torno a este tipo de reacciones se debe a sus aplicaciones con los ms variados ob jetivos, como pueden ser, por ejemplo, las tcnicas de radioetiquetado o el marcaje con sondas fluorescentes de biomolculas. En este punto hay que hacer hincapi en la revolucin que ha supuesto la denomi nada qumica clic dentro de este rea. En el ao 2002, Sharpless propuso una aproximacin a la sntesis de compuestos inspirada en la manera en que la natura leza construye a partir de un nmero li mitado de bloques estructurales (amino cidos, monosacridos, bases nucleicas, etc.) las biomolculas que componen a los seres vivos.6 La idea central de esta aproxi macin es emplear reacciones cuantitati vas desde un punto de vista del rendimien to qumico, que no generen subproductos, que se puedan llevar a cabo empleando

agua como disolvente en condiciones de reaccin suaves y que estn orientadas a la formacin de enlaces carbonohete rotomo. De entre todas las reacciones que cumplen estos requisitos destaca es pecialmente una: la reaccin catalizada por cobre entre azidas y alquinos para generar triazoles. Esta reaccin se ha apli cado extensamente en biomedicina en el descubrimiento de frmacos y el desarro llo de materiales polimricos (fig. 2a). Una aplicacin muy novedosa de la qu mica clic en biomedicina se encuentra en las reacciones de bioconjugacin.7 Esta aplicacin puede suponer una revolucin en biomedicina por constituir una herra mienta poderosa en el estudio de los procesos biolgicos. La reaccin clic es especialmente til en biomedicina por varias razones. Por un lado, los 1,2,3triazoles generados son espaciadores (linkers) ideales. Son muy solubles en agua lo que facilita su admi nistracin in vivo, y, estructuralmente, son muy similares a los enlaces peptdicos que estn presentes en las protenas, pero sin embargo son mucho ms robustos frente a las reacciones de hidrlisis enzimticas.

Uno de los mayores inconvenientes de las reacciones de bioconjugacin son las re acciones secundarias en puntos de ancla je no deseados. Este problema no existe con los sustratos de las reacciones clic, pues tanto las azidas como los alquinos son prcticamente invisibles qumica mente, al no reaccionar con la mayora de los grupos funcionales presentes en otras molculas de dentro de una clula. Esta quimioselectividad es una gran ventaja que facilita que la bioconjugacin ocurra nicamente en las posiciones deseadas. Esta bioortogonalidad es la clave del xito que permite emplear la qumica clic para modificar componentes celulares de ma nera selectiva sin afectar a otras biomol culas presentes en el medio. Sin duda, el ejemplo ms espectacular del empleo de la qumica clic en reacciones de biocon jugacin se debe a los trabajos desarrolla dos por Carolyn Bertozzi (fig. 2b).8 Con esta metodologa se puede estudiar la dinmica de los glicanos presentes en la superficie de las clulas, los cuales son fundamentales para el proceso de seali zacin entre ellas durante el desarrollo, adems de estar implicados en otros pro

Figura 2. Qumica clic

a) Reaccin catalizada por cobre entre azidas y alquinos para obtener triazoles. b) Qumica clic en vivo desarrollada por Bertozzi: la N-azidoacetilgalactosamina (GalNAz) se incorpora al metabolismo de un embrin de pez cebra. Posteriormente se suministra una sonda fluorescente con un cicloalquino en su estructura que es capaz de reaccionar con los grupos azida presentes en el embrin sin la necesidad de la presencia de cobre. Fuente: Adaptada de Laughlin et al.8

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DOSSIER CIENTFICO el empleo de RNA de transferencia mo dificados (y que ya ha permitido obtener organismos eucariotas con un cdigo gentico expandido) (fig. 3).9 Una vez conseguido esto, se podr hacer reaccionar posteriormente la protena de inters con una sonda bioortogonal de manera totalmente selectiva sin interferir en otros procesos biolgicos del organis mo. Es importante recordar que el desa rrollo de todas estas metodologas, que van a tener numerosas y variadas aplica ciones inmediatas en biomedicina, requie ren de un profundo conocimiento de la qumica y de sus mtodos. # ....................... Enrique Mann instituto de QuMica oRgnica geneRal, csic MadRid

Bibliografa
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Figura 3. a) Metodologa desarrollada por Schultz para incorporar aminocidos no naturales a protenas. b) Algunos ejemplos de aminocidos no naturales incorporados a protenas mediante esta tcnica

cesos relacionados con las infecciones bacterianas y virales, as como en la res puesta del sistema inmunolgico frente a ella. Carolyn Bertozzi ha desarrollado una metodologa consistente en suministrar al organismo que se va a estudiar (peces cebra, ratones, etc.) monosacridos no naturales que contienen un grupo azida en su estructura. La maquinaria metab lica celular es capaz de asimilar estas molculas, incorporndolas y distribuyn dolas en diferentes puntos y a distintas concentraciones en las superficies celulares del organismo. Posteriormente, se le su ministra una sonda fluorescente con un grupo alquino presente en su estructura que es capaz de reaccionar nicamente con los glicanos que poseen una azida en su estructura. De esta manera, se puede visualizar en tiempo real la distribucin de estos glicanos en diferentes tejidos. La principal innovacin de esta metodologa

con aplicaciones inmediatas en reas como la glicobiologa radica en que Bertozzi ha sido capaz de desarrollar una clase especial de alquinos cclicos que no necesitan la presencia de cobre (txico para el organis mo) para reaccionar con las azidas, lo que permite aplicar esta tcnica a clulas y organismos vivos.

Etiquetado de protenas a travs de aminocidos no naturales

La metodologa de etiquetado de prote nas se ha enriquecido con las aportaciones del grupo de Schultz, que ha desarrollado procedimientos biolgicos que permiten introducir aminocidos no naturales (como por ejemplo aminocidos que posean un grupo azida en su cadena late ral) en protenas individuales, mediante

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