NUTRI{IE

Hibridizarea fluorescent/ in situ (FISH)

Hibridizarea fluorescenta in situ (FISH) este o tehnic/ de citogenetic/ molecular/ utilizat/ \n scopul identific/rii anomaliilor cromozomiale, numerice ]i structurale (care nu pot fi detectate prin cariotipare).
Principiul acestei metode const n ataarea la secvena-int a unei sonde de ADN monocatenar (de circa 40 kb), marcat fluorescent, pe baza complementaritii, de o secven-int a unui cromozom. Hibridizarea sondei cu ADN-ul celular este vizualizat la microscopul cu fluorescen echipat cu filtre de excitaie i emisie, ceea ce permite citirea semnalelor specifice zonei-int. Se numr i se analizeaz semnalele prezente n o sut de celule (de ex., trei semnale fluorescente specifice pentru cromozomul 21 indic sindromul Down). Tehnica FISH permite detectarea mozaicismelor, identificarea rearanjrilor cromozomiale complexe. Mai multe sindroame dismorfice (sindromul Williams, Prader Willi, Angelman, Di George) produse de microdeleii sau microduplicaii, suspectate clinic, imposibil de observat prin tehnicile citogenetice convenionale, pot fi evideniate prin FISH metafazic. ntruct aceast metod presupune ca prim etap de lucru obinerea unor culturi celulare (limfocite din snge periferic sau amniocite recoltate prin amniocentez n sptmnile 15-17 de sarcin), rezultatul investigaiei este obinut n dou sptmni. FISH-ul interfazic permite punerea n eviden a anomaliilor numerice, detecia sexului genetic ntr-un

FISH interfazic prezenta a trei semnale roii indica trisomia 21 (Down)

FISH metafazic Prader Willi del (15) (q11-q13) timp scurt (48-72 h). Se realizeaz pe nuclei interfazici fr s fie nevoie de efectuarea de culturi celulare. Se folosesc sonde de ADN corespunztoare regiunilor centromerice ale cromozomilor 18, X, Y (CEP18, CEPX, CEPY), respectiv sonde locus specifice pentru cromozomii 13 i 21 (LSI13, LSI21). Metoda este mai puin informativ n cazul contaminrii cu celule materne (comparativ cu alte tehnici). Analiza FISH este o metod specific, performant, dar laborioas, care necesit celule intacte; nu se substituie celorlalte metode de analiz cromozomial i are indicaii foarte precise. FISH-ul interfazic este indicat a fi folosit ca test de screening rapid atunci cnd exist semne de alert ecografic sau biochimic (dublu test, triplu test), iar ulterior se recomand o evaluare citogenetic complet.

14

Nr. 99

13 - 26 ianuarie 2010