N Ordre : 2680 THESE prsente DEVANT LUNIVERSITE DE RENNES 1 pour obtenir Le grade de : DOCTEUR DE LUNIVERSITE DE RENNES 1 Mention : BIOLOGIE

PAR

Frdrique Ablain

Equipe daccueil : UMR ECOBIO 6553 Equipe Interaction Biologique et Transfert de Matire Ecole doctorale Vie-Agro-Sant U.F.R Sciences de la vie et de lenvironnement

Rle des activits lombriciennes sur la redistribution des lments traces mtalliques issus de boue de station dpuration dans un sol agricole.

Soutenue le 18 Dcembre 2002 devant la commission dexamen

Benedetti, M. Bispo, A. Cluzeau, D. Marmonier, P. Morel, J.L. Trhen, P.

CR1, CNRS Paris VI Ingnieur de Recherche, Ademe Angers MC, Universit de Rennes 1 Professeur, Universit de Rennes 1 Professeur, Universit de Nancy Professeur, Universit de Rennes 1.

REMERCIEMENTS

Je tiens remercier tout dabord Mr Paul TREHEN qui ma accueillie au sein de lUMR 6553 ECOBIO la Station Biologique de Paimpont et qui a dirig cette thse. Je lui suis reconnaissante des conseils dont il ma fait part tout au long de ce travail. Un grand merci Daniel CLUZEAU qui a initi cette tude et qui ma encadre tout au long de ce travail en me faisant bnficier de ses connaissances et de ses conseils. Ses commentaires pendant la phase de rdaction mont beaucoup aide. Je remercie vivement Pierre MARMONIER pour ses conseils divers et varis, et son optimisme toute preuve. Je le remercie galement davoir accept de faire partie du jury. Je remercie Messieurs les membres du jury davoir accept de lire ce manuscrit : Messieurs Jean-Louis MOREL (ENSAIA, Nancy) et Marc BENEDETTI (CNRS, Paris VI), en tant que rapporteurs, et Monsieur Antonio BISPO (ADEME, Angers), en tant quexaminateur. Je tiens galement remercier Claire SAHUT pour mavoir accueillie au CEA de Cadarache et de mavoir initie aux extractions squentielles. Je tiens galement remercier Guy GENIAUT pour ses conseils, sa disponibilit de chaque instant et nos conversations sur Jimmy Hendrix. Merci Isabelle LAMY pour mavoir accueillie au sein du laboratoire Science du sol de lINRA de Versailles, ds le DEA et de mavoir expliqu en long et en large le fractionnement granulo-densimtrique. Jai une pense particulire pour Jean-Pierre PETRAUD, qui a su donner de son temps combien prcieux pour me former au fractionnement et rparer la centrifugeuse que jai casse Un grand merci Grard GRUAU qui ma permis de faire les dosages de percolats Gosciences, merci pour son optimisme et ses prcieux conseils. Merci aussi Martine LE COZ-BOUHNIK et Patrice PETITJEAN pour leurs conseils aviss en COD et ICP-MS. Un grand merci tout spcial Christine TEXIER-PECHEUL, mon matre spirituel et vnr du ver de terre qui ma tout appris sur les microcosmes. Merci pour ta patience, tes conseils, ta gentillesse et ta bonne humeur. Merci tous ceux que jai croiss durant mes priples dans le sud et la Capitale, Aurlie, la reine des crpes de Cadarache, Marc, Grgoire et les autres. Ma super copine Christelle avec qui je dansais sur Kylie pendant les centri !! Annie ou mobylette, Miguel de source sure et Edson, un joli rayon de soleil. Je remercie mes supers copains de DEA et drivs Gnegnes, Olivier, Fred (garon), Franckinou et Sabrina pour mavoir hberge, soigne, supporte. Je vous aime!!!! Comment pourrais-je oublier les Gpabgirls et autres qui ont su maccueillir bras ouvert quand jtais une toute pitite stagiaire dbutante: Mman Christine, si si tu es une mre pour moi, Sylvie et ses coups de folie, Danile pour nos discussion ragots potins et pis la petite Valrie ou plutot ophlie, tou vas voir tou vas aimer !!

Un grand merci au schtroumph bricoleur Michel LEFEUVRE ou plutt michoubidou qui a ralis les microcosmes, les portoirs et jen passe . Merci toi, michel pour les petits cafs du matin, et nos discussions chasse. Un grand merci Valrie qui combien de fois ma accueillie dans sa petite famille, ta gentillesse, ta disponibilit et pis surtout ton grand cur. RESISTE !! Sans oublier mes petits camarades de la station : MA Nanette super chouette moi tout seule, en fait cest toi ma SUPER copine, Jj ou gamin et ses poils au menton, Davidou mon compagnon de rdaction, alors heureux, Philoubidou, cest toi damener les pains aux chocolats vendredi dabord, Patrick le coupeur de tte, Sylvain et ses kinders surprises, Loudo ma qu pourquoi tou ma fais a, Totof et Clairette le tandem de choc, Guno, cest vrai quon est des supers nanas !! Franousse et Lon, my brother. Une petite pense pour tous ceux que jai crois la station et qui mont laiss comme un petit plus dans le cur : PE, CO, Justine, Bgo, Elodie, Patrick, Naninounette, Noupi, Hlne, dsol pour les ceuces que joublie! Merci galement tous les permanents et les stagiaires de la station pour leur sympathie, les soires dlires. PS spcial Marc : Mais oui marc je men vais bientt !! Merci mes parents (ma petite mman) et mon frre le fameux titi Navier qui bien quintrigus par ma nouvelle passion pour le fabuleux destin de Lumbricus terrestris mont toujours soutenue. Enfin, simplement merci Patrick.

SOMMAIRE

CHAPITRE I .............................................................................................................................. 6 INTRODUCTION...................................................................................................................... 7

CHAPITRE II........................................................................................................................... 21 MATERIELS ET METHODES............................................................................................... 21 1. Conditions experimentales ............................................................................................... 22 1 1- Le sol......................................................................................................................... 22 1.2- La boue de station dpuration (BSE)....................................................................... 24 I.3 - La ressource trophique.............................................................................................. 26 I.4 - Le matriel biologique.............................................................................................. 26 1.4.1 Lumbricus terrestris............................................................................................. 27 1.4.2 Nicodrilus giardi.................................................................................................. 27 I.5 Dispositif exprimental : les microcosmes ................................................................. 27 I.6 Reconstitution de la colonne de sol............................................................................. 29 I.6.1 Exprimentation 1 (Redistribution des ETM dans les biostructures) .................. 30 I.6.2 Exprimentation 2 (Qualit des eaux de percolation).......................................... 30 2. Les compartiments tudis ............................................................................................... 32 2.1 Les turricules .............................................................................................................. 32 2.2 Les parois de galeries et le sol environnant................................................................ 32 2.3 Les percolats............................................................................................................... 32 3. Les analyses...................................................................................................................... 33 3.2 Les extractions chimiques .......................................................................................... 33 3.2.1 La fraction changeable....................................................................................... 34 3.2.2 La fraction potentiellement changeable............................................................. 34 3.2.3 La fraction rsiduelle........................................................................................... 34 3.2.4 Les teneurs totales ......................................................................................... 34 3.3 Le fractionnement granulo-densimtrique ................................................................. 35 3.3.1 Principe du fractionnement granulo-densimtrique. ........................................... 35 3.4 Les analyses statistiques............................................................................................. 37

CHAPITRE III ......................................................................................................................... 38 IMPACTS DES ETM SUR LES LOMBRICIENS.................................................................. 38 1. Suivi des paramtres Biodmographiques ....................................................................... 39 1.1 Exprimentation 1 ...................................................................................................... 39 1.1.1 Le Taux de survie ................................................................................................ 39 1.1.2 Evolution pondrale ............................................................................................ 40 1.2 Exprimentation 2 ...................................................................................................... 41 1.2.1 Le Taux de survie ................................................................................................ 42 1.2.2 Evolution pondrale ............................................................................................ 42 2. Production de turricule ..................................................................................................... 42 3 Discussion ......................................................................................................................... 45

CHAPITRE IV ......................................................................................................................... 47 REDISTRIBUTION DES ETM DANS LES MICROSITES D'ORIGINE LOMBRICIENNES 1. Teneurs totales en carbone, azote et ETM dans le sol et les biostructures....................... 48 1.1 Teneur totale en carbone, azote et ETM dans le sol environnant de la modalit Tmoin et de la modalit Boue......................................................................................... 48 1.1.1 Carbone et azote total .......................................................................................... 48 1.1.2 Teneur totale en ETM.......................................................................................... 50 1.2 - Teneurs totales en carbone, azote et ETM dans les turricules et parois de galeries 51 1.2.1 Teneurs en carbone et azote ................................................................................ 51 1.2.2 Teneurs en ETM dans les microsites................................................................... 52 1.3 Discussion .................................................................................................................. 54 2. Distribution Chimique des ETM dans le sol et les microsites dorigine lombricienne.... 57 2.1 Distribution chimique des ETM dans le sol avec boue et sans boue ......................... 57 2.2 Distribution chimique des ETM dans les turricules et parois de galeries .................. 59 2.3 Discussion .................................................................................................................. 63 3. Distribution physique des ETM dans le sol et les microsites dorigine lombricienne..... 65 3.1 La granulomtrie ........................................................................................................ 65 3.1.1 La granulomtrie des sols.................................................................................... 65 3.1.2 La granulomtrie des biocompartiments ............................................................. 65 3.2 Bilan en % du C, N et ETM dans les fractions granulo-densimetriques.................... 69 3.3 Distribution du carbone et de lazote dans le sol et les microsites............................. 69 3.3.1 Distribution du carbone et de lazote dans les fractions granulo-densimtriques 4

des sols ......................................................................................................................... 69 3.3.2 Distribution du carbone et de lazote dans les fractions granulo-densimtriques des microsites ............................................................................................................... 70 3.3.3 Discussion ........................................................................................................... 73 3.4 Distribution des lments traces mtalliques dans le sol et les biocompartiments .... 74 3.4.1 Distribution des ETM dans les sols..................................................................... 74 3.4.2 Distribution des ETM dans les biostructures ...................................................... 76 3.4.3 Discussion ........................................................................................................... 79 4. Complmentarit des approches chimiques et physiques de la distribution des ETM .... 81 5. Conclusion........................................................................................................................ 81

CHAPITRE V........................................................................................................................... 84 COMPOSITION CHIMIQUE DES PERCOLATS ................................................................. 84 1. Volume des eaux de percolation ...................................................................................... 85 2. Carbone organique dissous dans les eaux de percolation................................................. 86 2.1 Concentration en COD dans les eaux de percolation ................................................. 86 2.2 Flux cumul de COD dans les eaux de percolation.................................................... 88 2.3 Discussion .................................................................................................................. 88 3. Les ETM dans les eau de percolation............................................................................... 90 3.1 Le Cuivre.................................................................................................................... 90 3.2 Le Plomb .................................................................................................................... 92 3.3 Le Cadmium ............................................................................................................... 93 3.4 Le Zinc ....................................................................................................................... 93 3.5 Discussion .................................................................................................................. 94 4. Bilan des flux de carbone et Elements traces metalliques................................................ 96 4.1 Bilan des flux de carbone et ETM.............................................................................. 96 4.2 Le risque Boue.......................................................................................................... 106 5. Discussion Gnrale ...................................................................................................... 108

CHAPITRE VI ....................................................................................................................... 110 DISCUSSION ET CONCLUSION GENERALE.................................................................. 111

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ............................................................................... 123 ANNEXES ............................................................................................................................. 137 5

CHAPITRE I

INTRODUCTION

INTRODUCTION ___________________________________________________________________________

Situ linterface entre leau, latmosphre et les vgtaux, le sol assure de nombreuses fonctions : des fonctions conomiques, cologiques et biologiques. Support de nombreuses activits humaines (industrialisation, urbanisation, agriculture), son rle clef en matire denvironnement a t reconnu rcemment : il intervient comme racteur, rcepteur, accumulateur, et filtre des pollutions (Robert et Juste, 1999). Laccroissement dmographique et lindustrialisation ont conduit une augmentation des flux de dchets contenant des substances diverses telles que les hydrocarbures polycycliques aromatiques (HAP), polychlorobiphnyles (PCB) et les lments traces mtalliques (ETM). Les activits humaines gnrent donc des dchets au sens large (gaz dchappement, rejets industriels) et produisent et utilisent des molcules susceptibles dtre toxiques (pesticides, tensioactifs). Les PCB et HAP sont dgrads plus ou moins rapidement (quelques jours voire plusieurs mois) dans le sol par les micro-organismes (A.T.S.D.R., 1996 ; I.P.C.S., 1998). Les lments traces mtalliques ne sont pas dgrads et saccumulent dans le sol (Robert, 1995). Leur temps de rmanence dans le sol ainsi que leurs effets adverses potentiels sur la sant humaine font de leur prsence dans le sol un problme actuel et venir.

Les lments traces mtalliques (ETM)

La crote terrestre ou lithosphre est compose de 80 lments : 12 lments majeurs et 68 lments traces ou lments mineurs (Coc et Coppenet, 1989). Par convention, les lments majeurs sont ceux dont la teneur dans la crote terrestre est suprieure 1 pour mille et les lments mineurs, ceux dont la teneur est infrieure cette valeur (Juste et Feix, 1995). Cette dfinition ne prend en compte, ni labondance de ces lments dans les organismes vivants, ni la nature des effets (toxiques ou bnfiques) quils pourraient engendrer sur ces derniers. Dans le monde vivant, la notion de macro ou micro-lment est utilise. Cette notion repose sur la concentration moyenne de llment dans les organismes vivants. La limite des concentrations moyennes sparant macro de micro-lments a t fixe par des spcialistes 100 mg/kg de matire sche. Les micro-lments peuvent tre classs en deux catgories : les

micro-lments

indispensables

et

les

micro-lments

neutres

Les

micro-lments

indispensables aux processus vitaux sont appels oligo-lments. Ces oligo-lments peuvent devenir toxiques si leur concentration dpasse une certaine teneur dans lorganisme. Certains micro-lments dont le caractre indispensable na pas t mis en vidence peuvent galement savrer toxiques au-del dun certain seuil : cest le cas du plomb, du cadmium et du mercure. Le terme mtaux lourds est frquemment employ pour dsigner les lments traces mtalliques (ETM). Cette expression vient de la traduction anglaise de Heavy metals (Juste et Feix, 1995). Par mtaux lourds, sont dsigns les lments mtalliques dont la densit est suprieure 5. Cette expression est employe tort car elle englobe des lments dont la masse volumique est bien en de de 5 g/ml (aluminium), et des lments qui ne peuvent tre considrs comme des mtaux au sens strict du terme (slnium).

Origine
Il existe diffrentes sources dapport dlments traces mtalliques dans le sol (figure I.1).
Apports atmosphriques Pratiques Agricoles fertilisation dont effluents d'levage pesticides Dchets dchets de collectivits dchets industriels

Sol = systme accumulateur

Stock initial = fond gochimique

Roches

Figure I.1 Origine des ETM dans le sol (Daprs Robert & Juste, 1999)

Origine naturelle Les ETM sont prsents naturellement dans les roches, ils sont librs lors de laltration de

celles-ci pour constituer le fond gochimique (Bourrelier et Berthelin, 1998). La concentration naturelle de ces lments dans les sols varie selon la nature de la roche, sa localisation, son ge et de la nature de llment.

Tableau I.1 Teneurs moyennes en ETM dans les sols

Valeurs moyennes dans les sols en ppm Elment (Z) Cuivre (29) Monde Europe France 13 - 30 (Juste etFeix, 1995) 10 - 30 (Prog ASPITET, 1997) 40 -50 (Bonneau et Souchier, 70 -90 (Pailler, 1992)
1979)

20 (Kabata-Pendias, 1992 ; Mc 20 - 30 (Baize, 1997)

Lean et Bledsoe, 1992)

Zinc (30)

64 (Kabata-Pendias, 1992,)

Cadmium (48) 0,53 (Kabata-Pendias, 1992) 0,08 1989) Plomb (82) 2-44 (Kabata-Pendias, 1992)

0,44

(Fao-Who, 0,23 (Gomez et al, 1989) 0,2 (Baize, 1997) 24 (Gomez et al, 1989)

20 (Adriano, 1986)

Origine anthropique Deux principaux types de pollutions anthropiques sont responsables de laugmentation des flux de mtaux : la pollution atmosphrique (rejets urbains et industriels) et la pollution lie aux activits agricoles. La pollution atmosphrique rsulte des activits industrielles (rejet dusine), et urbaine (gaz dchappement, etc. ...). Il faut distinguer les apports diffus ariens dorigine lointaine, des apports massifs localiss dorigine proche. Dans les apports diffus sont classs les poussires et arosols provenant des chauffages ainsi que les activits industrielles, les moteurs dautomobiles, etc. Ces apports peuvent parcourir des centaines de kilomtres partir de leur source et se dposent indiffremment sur des secteurs cultivs, des forts ou encore des prairies (Godin et al, 1985, Vangronsveld et al, 2002). Les apports massifs localiss rsultent dapports anthropiques accidentels lis aux activits industrielles de longue dure sans protection efficace contre la dispersion dans lenvironnement (Baize, 1997). Certaines pratiques agricoles sont lorigine de lintroduction dlments traces mtalliques dans le sol. Les produits destins amliorer les proprits physico-chimique du sol sont souvent plus riches en ETM que le sol lui-mme do un enrichissement en ETM de ces sols (Bourrelier et Berthelin, 1998). Parmi ces apports : les lisiers (Martinez,

1996 ; LeGros et al, 2002), la bouillie bordelaise (Branas, 1984 ; Deluisa et al, 1996), les engrais, les composts et les boues de station dpuration (BSE) (Robert et Juste, 1999).

Le rle des pratiques agricoles dans la contamination des sols doit tre pris en compte : cela concerne une grande partie du territoire, et constitue la premire tape vers la contamination de la chane alimentaire (Bourrelier & Berthelin, 1998) et peut donc engendrer des problmes de sant publique. Cas particulier des boues de station dpuration Les boues de STEP (BSE) sont les rsidus du traitement dpuration subi par les eaux uses dorigine domestique ou industrielle. La production annuelle de BSE en France a t estime en 1995 865 000 tonnes de matire sche (Wiart et Thauvin, 1995). Les boues dpuration peuvent suivre diffrentes filires : des filires dliminations par incinration ou mise en dcharge, ou des filires de valorisation. Un projet de loi relatif llimination des dchets et la rcupration des matriaux examin en 1975, remis jour en 1992, prcise (Art 2.1) que les dchets industriels, en raison de leur proprits dangereuses, ne pourront plus tre dposs dans des installations de stockage (Le Morvan, 1992). A compter du 1er juillet 2002, les installations dlimination des dchets par stockage ne seront autorises accueillir que des dchets ultimes. Est considr comme ultime, au sens de la loi, un dchet qui nest plus succeptible dtre trait dans les conditions techniques et conomiques du moment, notamment par extraction de la part valorisable ou par rduction de son caractre polluant ou dangereux L n92-646 du 13 juillet 1992 Art 1er-II (Le Morvan, 1992). Les boues ntant pas considres comme des dchets ultimes, et la production annuelle tant en constante augmentation, le devenir de ces dchets est devenu une forte question dactualit. La filire de valorisation agricole concerne 60% de la production actuelle. Cest la filire de valorisation la moins coteuse ct de lincinration et de la mise en dcharge. Les teneurs en eau et en lments fertilisants des boues (azote, phosphore...) sont favorables leur utilisation en agriculture. Le retour de ces lments nutritifs vers le sol sinscrit vers une gestion plus rationelle des dchets (Ademe, 2001). En plus de leur effet fertilisant, les boues peuvent galement avoir un rle structurant (Korantajer, 1991, Illera et al, 2000) et ainsi amliorer les caractristiques physico-chimiques du sol. En effet, si une partie de la MO apporte par les boues est utilise par les micro-organismes, une autre partie est incorpore au sol et contribue lentretien dune structure favorable au dveloppement des racines notamment (Ademe,

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2001). Lpandage contribue court terme amliorer la structure du sol et lalimentation des vgtaux par lapport de substances nutritives. A long terme, lpandage contribuera quilibrer le bilan humique du sol. Cependant, les boues peuvent galement avoir un effet polluant sur le sol et les eaux, du fait de leur charge en ETM, HAP, PCB et micro-organismes pathognes. La charge en ETM des boues dpend de lorigine de celle-ci. Les boues dorigine urbaine sont moins charges en ETM que les boues dorigine industrielle (Wiart, 2000). Depuis quelques annes, la qualit des boues de station dpuration sest amliore (Baize, 1997) : les boues sont devenues de plus en plus propres , moins charges en ETM entre autre. Lpandage de boues de station dpuration obi une rglementation (Dcret n97-1133, complete par larrt du 8 janvier 1998 fixant les prescriptions techniques, applicables aux pandages de boues sur les sols agricoles (Baize, 2002). La lgislation franaise met laccent sur la limitation des flux cumuls en ETM apports en combinant une plus grande exigence sur la composition des boues et une restriction des tonnages autoriss. Lpandage ne peut donc tre pratiqu quaprs avoir mis en place une planification globale, des outils danalyses et de prvision, des moyens de contrles du respect des bonnes pratiques et des rsultats agronomiques (Ademe, 2001).

Comportement des mtaux dans le sol : Notion de spciation, mobilit, et disponibilit

Actuellement, le stock dlments en traces mtalliques est la rsultante de lhritage du fond gochimique et des diffrents apports anthropiques (Robert & Juste, 1999). Les mtaux issus des apports anthropiques ont un comportement diffrent des mtaux prsents naturellement, car apports sous des formes chimiques ractives (Baize, 1997). Ds leur introduction dans le sol, les mtaux vont sassocier avec diffrents constituants du sol sous des formes chimiques varies. Cette rpartition dpend de caractristiques (1) intrinsques llment (forme chimique initiale, valence, ractivit, ) (Chaney et Olivier, 1996, Mc Laughing et al, 2000) et des caractristiques du milieu (pH, potentiel doxydorduction, CEC, temprature, travail du sol) (Lebourg et al, 1996 ; Richards et al, 1998 ; Filipek-Mazur et al, 2001 ; Tsadilas, 2001). Dans la majorit des cas, les ETM sassocient la matrice solide, ils saccumulent dans le sol, tant que les conditions du milieu restent inchanges (Bourrelier & Berthelin, 1998). De la forme chimique de llment, du constituant auquel il est associ va dpendre le mode de

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fixation par le sol et donc la mobilit et la biodisponibilit de llment. La nature de lassociation des lments traces avec les phases porteuses du sol, est appel spciation. La spciation est dfinie comme la rpartition et la quantification des diffrentes formes chimiques dun lment dans le sol, qui runies, donnent sa concentration totale (Tessier et al, 1979 ; Florence, 1986). La spciation contribue dfinir la mobilit des lments traces et donc permet dtablir des perspectives de comportement et dvolution des lments traces en fonction des conditions du milieu et de leur modification (Bourrelier & Berthelin, 1998). La mobilit chimique est dfinie gnralement comme laptitude dun lment tre transfr vers des compartiments du sol ou il est de moins en moins retenu. Le compartiment ultime est reprsent par la solution du sol o dans certains cas, latmosphre du sol (Juste, 1988 ; Mc laughin et al, 2001). La biodisponibilit selon Thornton (1999) est la portion dlment dans le sol qui est disponible pour un organisme donn. La fraction de mtal biodisponible dans un sol nest pas la mme selon que lon sintresse une bactrie, une plante ou un ver de terre. La biodisponibilit est donc relative lorganisme considr, mais galement son stade de dveloppement, et dautres paramtres externes (Lebourg et al, 1996). La phytodisponibilit, disponibilit pour les plantes, est la fraction biodisponible la plus souvent tudie, car la plus facile quantifier. En effet, les plantes absorbent les mtaux par leur racine, tandis que les organismes du sol en plus dtre en contact direct avec les polluant peuvent en ingrer, do la difficult de dterminer la fraction biodisponible pour de tels organismes.

Il est admis que la mobilit et biodisponibilit dun lment dpendent de sa spciation (Brmmer et al, 1986).

Techniques dtude du comportement des mtaux dans le sol

Diffrentes techniques chimiques et physiques sont utilises pour dterminer la rpartition des lments traces mtalliques dans le sol.

Les extractions chimiques

Ces mthodes permettent de spcifier des compartiments, en fonction du ractif utilis et de la procdure dextraction. Les lments dun sol sont alors fractionns au moyen de ractifs

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chimiques ou de solvants, dsigns pour extraire les lments lis ou associs une phase ou un composant particulier (Ure, 1991). Cinq phases sont gnralement retenues (Tessier et al, 1979, Sposito et al, 1982, Emmerich et al, 1982, Ure, 1991, Lebourg et al, 1996): (1) la fraction changeable, (2) la fraction lie aux carbonates, (3) la fraction lie aux oxydes et hydroxydes de Fer, (4) la fraction lie la MO et (5) la fraction rsiduelle.

1- La fraction changeable correspond la quantit de mtal qui peut tre extraite du sol par change cationique, c'est--dire les mtaux adsorbs sur les sites dchanges dargiles, de la MO et des oxydes de Fer et de Mg. 2- La fraction lie aux carbonates correspond aux constituants solubles en milieu acide. Il sagit essentiellement des carbonates do le nom de fraction lie aux carbonates donn cette fraction. Les ETM prsents dans le sol prcipitent avec les carbonates et sont susceptibles (acidification). 3- La fraction rductible correspond aux mtaux associs aux oxydes et hydroxydes de Fer ou/et de Manganse. Certains auteurs (Zachman et Block, 1994) font la diffrence entre la fraction dite facilement rduite (oxydes de manganse et oxydes amorphes de fer) et la fraction modrment rduite (oxydes cristalliss de fer). Dautres auteurs diffrencient les oxydes de manganse, des oxydes amorphes de fer, et des oxydes cristalliss de fer (Krishnamurti et al, 1995). 4- La fraction oxydable correspond aux ETM lis la MO et aux sulfures. 5- La fraction rsiduelle correspond aux mtaux incorpors dans les minraux du sol. dtre relargus lorsque les conditions physico-chimiques voluent

Il existe diffrents schmas dextraction. Ainsi, lorsquune seule extraction est pratique sur un chantillon, elle est qualifie dextraction simple. En revanche si plusieurs extractants sont utiliss successivement sur un mme aliquote de sol, il sagit dune extraction squentielle (Lebourg et al, 1996). Lextraction est suivie du dosage de la totalit de llment pass en solution. Les extractions squentielles bien que couramment utilises font lobjet de nombreuses critiques. La validit des rsultats obtenus est mise en cause. En effet, chaque solution dextraction est susceptible dagir sur plusieurs fractions du sol, donc pas aussi slectivement que prvue (Lebourg et al, 1996, Bermond et Malenfant, 1990). De plus, lors de la mobilisation dune forme chimique dun mtal, il se produirait une redistribution de ce mtal dans les diverses fractions du sol, les rsultats se trouvant ainsi biaiss (Lebourg et al, 1996). 13

Pour rpondre ces critiques, un autre schma dextraction est utilis : les extractions dites parallles. Chaque extraction est ralise sur un chantillon de sol brut. Les erreurs de mesures sont limites et le manque de spcificit des ractifs est compens par lattaque simultane de plusieurs phases, avec les ractifs appropris. Les formes chimiques les plus mobiles sont la fraction changeable et la fraction lie la MO (Davis, 1984). Certains auteurs ne sintressant quau problme de toxicit des ETM vis--vis de organismes du sol se contentent dextraire les mtaux prsents dans ces deux fractions (Sposito et al, 1982 ; Brown et al, 1984).

Les fractionnements physiques

Plus rcemment, des techniques de fractionnement physique ont t utilises pour tudier la dynamique des lments traces mtalliques (Ducaroir et Lamy, 1995 ; Balabane et al, 1999, Besnard et al, 2001, Flores-Velez, 1996). Ces techniques ont t employes avec succs pour tudier la dynamique de la MO (Andreux et al, 1980, Balesdent et al, 1988, Elliot et Cambardela, 1991, Christensen, 1992). Les diffrents compartiments sont alors dfinis selon des caractristiques physico-chimiques (Lamy et al, 1999). Des classes de particules peuvent tre spares en fonction de leur granulomtrie, leur densimtrie ou leurs proprits magntiques. Ces diffrents compartiments ont des proprits voisines en terme de nature et de ractivit. Ces mthodes sont rapides et non destructrices, conservant au mieux les liaisons mtal-phase hte du milieu sol. Il existe diffrents types de fractionnements qui ont chacun une spcificit bien prcise. Le fractionnement granulo-densimtrique sintresse plus particulirement aux relations des mtaux avec la MOP (Matire Organique Particulaire1). En effet, bien que les fractions fines restent le compartiment le plus ractif, la contribution des fractions grossires est non ngligeable. Ces MOP contenant les formes les moins stables de la matire organique des sols, elles constituent un pool risque (Balesdent et al, 1988). Le fractionnement granulo-magntique, lui, sapplique aux particules plus denses telles que les phases minrales. Il contribue lidentification des phases porteuses des mtaux et lestimation de leur stabilit, suivant la rpartition des mtaux en fonction des classes de taille de particules et de leurs proprits magntiques.

Les MOP sont des particules organiques grossires > 50 m (Christensen, 1992). Elles sont constitues

essentiellement de dbris vgtaux plus ou moins dcomposs, mais galement de spores, de graines dhyphes mycliens, et parfois de petits organismes et particules de charbon.

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Interactions Mtaux-Lombriciens
Limportance des lombriciens dans le brassage du sol est reconnue par Darwin ds 1881. Ces organismes ingnieurs (Stork et Eggleton, 1992 ; Lavelle, 1997) modifient les proprits physico-chimiques du sol, favorisant ainsi les activits microbiologiques. Bouch (1972) classe les lombriciens selon trois catgories cologiques : les pigs, les anciques, les endogs. Ces diffrentes catgories se dfinissent dabord par la localisation en profondeur, le rgime alimentaire mais aussi en fonction de la qualit des ressources trophiques et des contraintes biotiques (prdation) et abiotiques (le climat) et par des caractres anatomiques tels que la pigmentation de lpiderme. Les pigs (Bouch, 1977 ; Lee, 1985) sont de petite taille (10 30 mm en gnral) et vivent gnralement dans la litire ingrant peu de matire minrale. Ils peuvent tre classs en plusieurs groupes selon la MO dont ils se nourrissent : les staminicoles (litire), les corticoles (corce et tronc darbre en dcomposition, compost et fumier), les dtritiphages (dchets organiques divers) et les coprophages (djections de mammifres) (Bouch, 1977, Lee, 1985). Ces espces, localises en surface, sont particulirement sensibles la prdation, aux variations climatiques et aux facteurs anthropiques et la disparition des horizons organiques par le labour et lusage des traitements phytosanitaires. Les anciques (Bouche, 1977) sont des vers de taille moyenne gante (10 110 cm), vivant dans des galeries verticales subverticales plus ou moins ramifies souvrant en surface. Ces vers assurent un mlange intime de la matire organique avec la fraction minrale par leurs diverses activits dingestion, de transfert et dexcrtion de la MO travers leurs galeries et forage de galeries. Ces espces, localises sur toute la hauteur du profil de sol, sont sensibles aussi aux travaux mcaniques du sol et aux intrants. Les endogs (Bouch, 1977) sont de taille variable (1 20 cm) et creusent des galeries dorientation quelconque. Ils se nourrissent de la MO incorpore dans la matrice sol et doivent parcourir les horizons du sol pour satisfaire leur besoin alimentaire. Lavelle (1981) prcise cette classification en fonction de la richesse en MO du milieu o le ver volue. Se distinguent, les oligohumiques (c'est--dire vivant dans des milieux pauvres en MO), les polyhumiques (milieux riches en MO) et les msohumiques (milieux intermdiaires)

Limpact des lombriciens sur le sol varie selon leur catgorie cologique. Les endogs et les

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anciques sont les plus influents (Shaw et Pawluck, 1986 ; Brown, 1998). Les lombriciens modifient les proprits physico-chimique du sol crant ainsi une sphre dinfluence particulire appele drilosphre (Shuster et al, 2001 ; Lee, 1985 ; Edwards et Bohlen, 1996 ; Tiunov et Scheu, 1999). Les turricules (djections des vers laisses en surface) et les galeries constituent des microsites particuliers qui compars au sol environnant prsentent un enrichissement en C, N et autres nutriments (P, K, Mg, NH4, )(Lunt et Jacobson, 1944 ; Parle, 1963 ; Syers, 1979, Parkin et Berry, 1999), une texture et structure diffrentes (Shipitalo et Protz, 1989 ; Zhang et Schrader, 1993 ; Gorres et al, 2001) et sont le sige dune importante activit microbienne (Parle, 1963 ; Syers et al, 1979 ; Shaw et Pawluck, 1986 ; Parkin et Berry, 1999). De plus les galeries creuses par les lombriciens constituent des voies prfrentielles dcoulement des eaux entranant ainsi divers particules (Ehlers, 1975 ; Zachmann et al, 1987 ; Syers et Springett, 1983 ; Shipitalo et al, 1994). Les turricules et parois de galeries sont le sige de diverses ractions et processus physiques, chimiques et biologiques influenant ainsi le cycle biogochimique de certains lments majeurs tels que lazote (Binet, 1993 ; Parkin et Berry, 1999), le carbone (Lee, 1985, Jgou, 1998 ; Shuster et al, 2001), et le phospohore (Chapuis-Lardy et al, 1998 ; LeBayon, 1999) et la dynamique des lments traces mtalliques (Tomlin et al, 1993 ; Abdul Rida, 1996 ; Devliegher et Verstraete, 1997).

Impacts des mtaux sur les lombriciens

Les lombriciens peuvent tre sensibles aux teneurs en lments traces mtalliques prsent dans le sol, cette sensibilit vis--vis des mtaux fait ds 1973 (Gish et al), ils sont utiliss comme bioindicateur de pollution aux lments traces mtalliques. Laugmentation de la teneur en mtaux dun sol peut influer sur la densit lombricienne (Pizl & Josen, 1995), la croissance pondrale (Van Rhee, 1975, Abdul Rida, 1996), la production de cocon (Lee, 1985 ; Cortez et al, 1989 ; Abdul Rida, 1996, Bain et al, 1999, Spurgeon et Hopkin, 1999). Prenons lexemple du zinc, Spurgeon et al. (1999) ont observ une rduction significative du taux de survie de 4 espces lombriciennes pour des concentrations en zinc comprises entre 2000 et 3600 ppm. De plus, ils ont galement observ des pertes significatives de poids partir de 1200 et 2000 ppm de zinc. De mme, la capacit des lombriciens accumuler les mtaux est reconnue ds la fin du 19me sicle (Hogg 1895 in Hopkin, 1989). Selon Van Hook (1974), il y a accumulation lorsque le rapport de concentration de mtal dans les tissus sur la concentration du mtal dans

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le sol est suprieur 1. Les rapports daccumulation chez les lombriciens varient entre 16,0 pour le cadmium, 4,1 pour le zinc, 1,1 pour le cuivre, 0,5 pour le nickel et 0,4 pour le plomb (Van Hook, 1974 ; Van Rhee, 1977 ; Czarnowska et Jopkiewicz, 1978 ; Abdul Rida, 1996 ; Kenette et al, 2002): De nombreuses tudes ont permis didentifier les paramtres dont dpend ce processus de bioconcentration : (1) lespce lombricienne et sa catgorie cologique (Ireland, 1979; Ash et Lee, 1980 ; Ireland et Richards, 1981), (2) la saison (Ireland et Wooton, 1976), (3) llment trace (Ma, 1982 ; Marinio et al., 1992 ; Abdul Rida, 1996), (4) les proprits physiques et chimiques du sol (Smith, 1996,) et (5) quand il sagit dune pollution diffuse, la distance la source de contamination (Gish et Christensen, 1973). Les lments traces mtalliques se trouvent accumuls dans des cellules appeles chloragocytes. Le tube digestif est tapiss dun tissu form par un assemblage de cellules : les chloragocytes. Ce tissu accumule les dchets produits lors de la digestion. Ces dchets, pouvant inclure les mtaux comme le plomb ou le cadmium, sont alors stocks dans les chloragocytes sous la forme de granules ou chloragosomes (Ireland et Richard, 1981). Un chloragosome isol possde des proprits dchange cationique et anionique qui lui permettent dabsorber et dimmobiliser certains lments tels que le Pb (Ireland, 1978). Le chloragosome joue un rle primordial dans la concentration de certains lments traces (Ireland, 1983). Llimination du Pb et du Cd peut tre faite par les corps bruns ou par autotomie. Les granules forms lors de ladsorption des mtaux dans les chloragosomes sont dchargs dans la cavit coelomique et peuvent alors tre excrts via les nphridies ou stocks dans des nodules. Dans le cas de certaines espces, les nodules stocks dans la partie postrieure du vers, peuvent tre perdus par autotomie (Andersen et Larsen, 1982).

Laccumulation et la toxicit des mtaux issus de boues de station dpuration vis--vis des lombriciens est trs variable pour une mme espce (Suzuki et al, 1980, Kruse et Barrett, 1985, Barrrera et al, 2001). Les boues, de composition htrogne, contiennent de la matire organique laquelle se complexent les mtaux. Les mtaux ainsi complexs sont moins disponibles pour les lombriciens (Hartenstein et al, 1981). Ainsi, ltude de laccumulation des mtaux dans les tissus des lombriciens pourrait tre un bon indicateur de disponibilit des mtaux dans le sol (Lanno et Mc Carty, 1997 ; Conder et Lanno, 2000 ; Conder et al, 2001 ; Oste et al, 2001).

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Impacts des Lombriciens sur les mtaux

Quelques tudes traitent galement de limpact des lombriciens et de leurs activits sur la dynamique des ETM dans le sol. Diverses notions vis--vis des mtaux comme leur solubilit (Hartenstein et al, 1980, lextractibilit (Helmke et al, 1979), leur biodisponibilit (Abdul Rida 1996 ; Devliegher et Verstraete, 1997), ont t tudies en prsence de lombriciens. Les rsultats obtenus sont contradictoires : selon Ireland (1975), la disponibilit des ETM augmente dans les turricules tandis que pour Hartenstein (1980), elle ne varie pas. Devliegher et Verstraete (1995) montrent que la disponibilit du cuivre et du manganse augmente en prsence de lombricien alors que la disponibilit du zinc ne varie pas. Lhtrognit des rsultats obtenus lors de ces tudes est lie divers critres comme la nature des sols, les espces lombriciennes, la source dapport des mtaux (boues, sel, lisier, ...), llment trace, ainsi que la notion aborde (disponibilit, biodisponibilit, extractibilit, ect...) et lextractant utilis. Selon Abdul rida (1996), le rle de ces organismes dans la mise disposition des lments traces pour les plantes est trs modeste dans les sols contamins.

Les diffrents niveaux dtude

Les activits lombriciennes peuvent tre tudies diffrentes chelles dexprimentation : au champ, et en msocosmes ou microcosmes au laboratoire. Chaque niveau dinvestigation prsentant ses avantages et ses contraintes.

Au champ
Les approches exprimentales au champ sont bien sur celles qui se rapprochent le plus de la ralit. Cependant, les approches exprimentales ralises au champ doivent tenir compte de variations journalires et saisonnires de nombreux paramtres, comme la temprature et la photopriode susceptibles dinfluer sur les rsultats. Lhtrognit de la matrice sol (hydromorphie, ) est galement un paramtre non ngligeable dans les tudes aux champs. De plus, les facteurs abiotiques (humidit, temprature) et biotiques (interactions entre diverses espces) influencent les activits lombriciennes (Kretzschmar, 1989; Binet, 1993). Il faut pouvoir les quantifier et les contrler.

Au laboratoire
Les tudes en microcosmes permettent de saffranchir dun certains nombres de contraintes comme la temprature, la photopriode et lhumidit ambiante qui peuvent tre contrles. De plus, au laboratoire les chantillons obtenus peuvent tre parfaitement identifis. Les 18

turricules observs sur le terrain sont difficilement attribuables une espce prcise. Lutilisation de dispositifs exprimentaux permet donc via le contrle des individus introduits de pouvoir identifier parfaitement lorigine du turricule. Lutilisation de microcosmes prsente certains inconvnients : effet bordure, artefacts lis au tassement, domaine vital rduit, ect... De plus, les rsultats obtenus lors de tests en microcosmes ne sont donc pas directement extrapolables au champ, car les volumes prospects sont trop restreints et la nature des combinaisons de facteurs trs sensiblement modifie. Il nen reste pas moins que lapproche analytique exprimentale en microcosmes est trs approprie une approche mcanistique de la dynamique des polluants, pourvu quelle serve laborer un modle qui sera susceptible dtre ultrieurement valid dans des situations plus comparables aux situations relles.

Problmatique
Un programme de recherche intitul Valorisation Agricole des Dchets et produits drivs VADETOX a t mis en place par lADEME en 1995. Ce programme vise valuer les risques cotoxicologiques lis lpandage de dchets sur diffrents organismes du sol. Les plantes, la faune du sol (lombricien), la faune pige (coloptres), et les micro-organismes (daphnies, mycorhize, micro algues) sont utiliss comme indicateurs potentiels de pollution. Il est apparu alors important de tenter dvaluer limpact rtroactif des ces organismes sur les polluants. Dans ce contexte, nous avons voulu apprhender limpact potentiel des activits fouisseuses lombriciennes sur la dynamique (biodisponibilit, mobilit) des ETM issus de boues de station dpuration. Nous nous intressons rpondre aux questions suivantes : (1) La distribution chimique et physique des ETM est-elle modifie par les activits lombriciennes en particulier dans les microsites dorigine lombricienne (turricule et parois de galeries) ? Ces microsites ragissent-ils diffremment du sol environnant ? (2) Les galeries constituent-elles des voies prfrentielles de transfert des ETM vers les horizons de profondeur et une interface chimique modifiant la qualit des eaux de percolation ? (3) Quelle est la participation des microsites au bilan global de mobilit des ETM dans le sol ?

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De manire apporter des lments de rponses ces questions, nous avons mis en place des exprimentations au laboratoire en microcosmes. Les boues, artificiellement dopes en ETM, ont t fournies par le programme VADETOX. Deux expriences ont t ralises :

La premire exprience a t mise en place afin dobserver les modifications de spciation des lments traces mtalliques au sein des compartiments issus des activits lombriciennes (turricule, parois de galeries). Ce qui, dans un premier temps, nous a permis dtudier la redistribution des ETM dans diffrents compartiments du sol, en prsence ou non de boue et avec ou sans lombriciens.

La deuxime exprimentation avait pour objectif de dterminer la qualit des eaux de percolations en prsence de lombricien. Des bilans de flux de carbone organique dissous (COD) et dlments traces mtalliques seront dresss pour un systme pollu (avec boue) et un systme Tmoin non pollu (sans boue). Dans un deuxime temps, nous nous sommes intress linfluence des lombriciens sur la qualit des eaux de percolation (charge en ETM et Carbone Organique Dissous COD)

Avant de traiter ces deux points, nous dresserons un bref bilan de ltat des lombriciens en fin dexprimentation, par ltude des paramtres biodmographiques tels que la survie et lvolution pondrale et dautres paramtres (production de turricules).

En conclusion, nous essayerons de dresser un bilan global des exportations des ETM en prsence de lombriciens. Ces bilans permettront de contribuer une meilleure comprhension des mcanismes intervenant dans la redistribution des ETM dans les sols et plus particulirement au niveau des microsites dorigine lombricienne.

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CHAPITRE II

MATERIELS ET METHODES

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MATERIELS ET METHODES
__________________________________________________________________________________________

1. CONDITIONS EXPERIMENTALES 1 1- Le sol Le sol provient dune parcelle exprimentale situe la Bouzule prs de Nancy appartenant lENSAIA2. Le site de la Bouzule sert de plate-forme exprimentale au programme national ADEME3 intitul Evaluation des risques cotoxicologiques lis la valorisation agricole des dchets et produits drivs (Shwartz et al, 2000). Il a galement t reconnu comme plate-forme exprimentale dans le cadre du programme GESSOL du Ministre de lEnvironnement. Le domaine exprimental de la Bouzule est situ 12 km au nord Est de Nancy sur le plateau Lorrain. Le sol de texture limono-argileuse est prlev dans les horizons situs entre 20 et 40 cm de profondeur. Ses principales caractristiques sont dcrites dans le tableau II.1 (Shwartz et al, 2000). Aprs prlvement, le sol est tamis 2mm puis sch lair libre. Un tamisage 2mm permet le calibrage et llimination des dbris vgtaux.

2 3

ENSAIA : Ecole Nationale Suprieure dAgronomie et des Industries Alimentaires. ADEME : Agence De lEnvironnement et de la Matrise de lEnergie.

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Tableau II.1 Caractristiques physico-chimiques de lhorizon AP du sol de la Bouzule (Shwartz et al, 2000) Granulomtrie 5 fractions Argiles Limons fins Limons grossiers Sables fins Sables grossiers Carbone (C) organique mthode Anne Matire organique Azote (N) organique total mthode Kjedhal Rapport C/N pH eau Calcaire (CaCO3) total Phosphore (P205) mthode Joret Hebert CEC Calcium (Ca) changeable Sodium (Na) changeable Magnsium (Mg) changeable Potassium (K) changeable Cuivre (Cu) total HF -ICP-MS Fer (Fe) total HF-ICP-MS Zinc (Zn) total HF-ICP-MS Nickel (Ni) total HF-ICP-MS Plomb (Pb) total HF-ICP-MS Cadmium (Cd) total HF-ICP-MS g/kg meq/kg meq/kg meq/kg meq/kg meq/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg g/kg g/kg g/kg % 32 41,4 16,8 3 7 16.5 28.4 1.78 9.27 7.4 2 0.135 142 146 0.38 10.6 5.33 21.6 485 130 61 48.5 0.84

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1.2- La boue de station dpuration (BSE) Dans le cadre du programme ADEME VADETOX (valorisation agricole des dchets et produits drivs), diffrentes matrices dchettaires ont t tudies. La boue utilise est une boue dshydrate, appele B3.2, issue dune boue liquide initiale B1 qui provient dune station dpuration urbaine. Cette boue B3.2 a t artificiellement dope en ETM via lapport de sels selon un procd IRH4. Les polluants minraux (Zn, Cu, Pb, Ni, Cd) sont apports la boue B1 sous forme dune solution aqueuse avant ltape de dshydratation par filtre bande. Les concentrations finales ont t fixes pour tenir compte des teneurs de rfrence dans les boues pandue en agriculture (Dcret du Ministre de lEnvironnement du 08/12/97). Les teneurs en zinc, plomb et cadmium de la boue B3.2, sont suprieures aux teneurs limites autorises en de desquelles la boue est impropre lpandage (tableau II.2).

B1
Boues urbaines paissies

Dopage minral
Filire dshydratation IRH par hydrocureuse rinjection dans circuit boue de STEP

Eau d e ville Polymre Zetag 83 6,5 kg/t de MS

B3.2
Filtre bande

Figure II.1 Filire dobtention de la boue B3.2 (daprs Bispo et Jourdain, 1998)

IRH : Institut de Recherche Hydrologique.

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Tableau II.2 Teneurs en mtaux de la boue B3.2 et teneur limites dans les boues fixes par larrt du 8 janvier 1998 exprimes en mg/kg de matire sche (MS)
B3.2 Valeur limite Arrt du 8/01/98 1000 800 3000 200 10

Cuivre (mg/kg de MS) Plomb (mg/kg de MS) Zinc (mg/kg de MS) Nickel (mg/kg de MS) Cadmium (mg/kg de MS)

939 909 3643 246 26,9

Valeurs limites fixes par larrt du 8 janvier 1998 qui fixent les prescriptions techniques applicables aux pandages de boue sur les sols agricoles.

Tableau II.3 Composition chimique de la litire de Ray grass utilise

% Carbone Litire 41,4 % Azote 1,2 C/N 34,75 Cu (mg/kg) 5,29 Cd (mg/kg) < dtection Pb (mg/kg) 2,8 Zn (mg/kg) 44,3

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I.3 - La ressource trophique La ressource trophique mise disposition des vers est constitue de gramines prairiales sches prleve sur une parcelle du Rheu situe prs de Rennes (35). La composition chimique de cette litire est donne dans le tableau II.4. Elle a t ralise par le laboratoire danalyse des sols de Arras. La litire sche est dcoupe en petits morceaux et dpose en surface des microcosmes chaque semaine. Le dpt de litire se fait chaque fois sur des zones diffrentes de faon ce que toute la surface du sol se trouve en contact au moins 1 fois avec la litire. La quantit de litire apporte est infrieure la consommation journalire estime 0.011g/g de ver/jour (Lee, 1985 ; Edwards et Lofty, 1977, Jgou, 1998) afin dobliger les lombriciens se nourrir de la MO du sol. Lors de lexprimentation 1 Redistribution des ETM dans les biostructures , un jeun de 2 mois est impos aux vers afin quils se nourrissent de la MO du sol. Suite ces deux mois de privation, une quantit correspondant 0.01g/ g de ver/jour de litire est dpose en surface de chaque microcosme. Lors de lexprimentation 2 Qualit des eaux de percolation , un pool minimum de 0.006mg/g/jour de litire est fournie aux lombriciens ds le dbut de lexprimentation.

I.4 - Le matriel biologique Deux espces lombriciennes, appartenant la catgorie cologique des anciques (Bouch, 1984) sont utilises : Lumbricus terrestris et Nicodrilus giardi. Ce choix repose sur diffrents critres et travaux antrieurs comme : - leur importance dans les processus de brassage et de redistribution de la MO sur lensemble du profil de sol (Edwards et Lofty, 1977 ; Shipitalo et al, 1994 ; Tiunov et Scheu, 1999). - leur importance en terme de frquence dans les agrosystmes (Bouch, 1972 ; Bostrm, 1988 ; Binet, 1993). - leur plus ou moins grande sensibilit aux activits humaines (Cluzeau et al, 1987 ; Edwards et Bohlen, 1996), leurs aptitudes biodmographiques (Cluzeau, 1992 ; Bohlen et al, 1997) et leurs impacts pdogntiques (Jgou et al, 1998 ; Subler et Kirsch, 1998).

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1.4.1 Lumbricus terrestris Lumbricus terrestris (Linn, 1758 in Bouch, 1972) prsente une pigmentation rouge pourpre. Il mesure entre 130 et 250 mm de long et son poids est situ entre 5 et 15g (Bouch, 1972). Cette espce est considre comme piancique : elle a un comportement pig quand la litire est prsente en grande quantit et un comportement ancique quand celle-ci est en faible quantit. Cette espce est particulirement tudie car elle est prsente dans la majorit des sols en zone tempre.

1.4.2 Nicodrilus giardi Nicodrilus giardi (Savigny, 1826) est un ancique strict ou typique (Bouch, 1972). Il prsente une pigmentation brun-noir fonc, sa longueur est comprise entre 150 et 250 mm pour un poids situ en 1.5 et 3.1 g. Cette espce a une activit fouisseuse trs importante (Jgou, 1998).

Les vers sont rcolts sur une parcelle exprimentale du Lyce agricole de Le Rheu (35). Ils sont capturs par la mthode formol (Raw, 1959) puis rincs plusieurs fois leau. Les vers issus dun sol diffrent de celui de lexprimentation sont placs en quarantaine dans du sol de la Bouzule. Des lots de 3 vers sont constitus avant introduction dans les microcosmes. Les lots sont raliss de telle faon que la biomasse inter-microcosme ne prsente que des carts infrieurs 1g.

I.5 Dispositif exprimental : les microcosmes Les microcosmes sont des cylindres de PVC de 30 cm de haut et de 15 cm de diamtre intrieur (figure II.1). Ils contiennent la colonne de terre devant accueillir les vers. Ils sont recouverts dun voile pour limiter la fuite des vers. En dessous, une toile grillage de Nylon retient la colonne de terre, tout en permettant une bonne vacuation de leau. Les eaux de percolation sont collectes dans des bacs, placs au dessous de chaque microcosme.

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15 cm Voile de nylon Cylindre de PVC Litire

Toile grillage (maille 0.5 mm) Support Saladier (rcolte des percolats)

Figure II.2 Schma dun microcosme (coupe longitudinale)

Tableau II 4 Conditions exprimentales des 2 exprimentations Sol

Exprimentation 1 Bouzule

Boue
B3.2

Ver
L.terrestris N.giardi

Litire
Aprs 2 mois dincubation Ds le dbut

Dure (jours)
240

Exprimentation 2

Bouzule

B3.2

L.terrestris

20 cm

60

28

30 cm

Colonne de terre

Sans ver = T Sol sans boue = Modalit Tmoin Avec ver = T+ v Sol Sans ver = B Sol avec boue = Modalit Boue Avec ver = B+ v
Figure II.3 Diagramme rcapitulatif des diffrentes modalits

I.6 Reconstitution de la colonne de sol Le sol est rhumidifi avec de leau distille (30 % du poids sec 105C), introduit et compact artificiellement dans les microcosmes. Le sol est compact par couche de 4 cm dpaisseur, de faon obtenir une densit denviron 1,4. La colonne de sol constitue par 5kg de sol mesure 20 cm de hauteur. Deux modalits sont construites : une modalit Tmoin, sans boue et une modalit Boue. Afin daccentuer ses effets toxiques potentiels, la quantit de boue apporte correspond deux fois la dose terrain qui est de 15 t de MS (matire sche) / ha / an : soit 40 g de MS pour la surface du microcosme (0.017m). La boue ne reprsente que 2% du poids total du mlange sol + boue. Ce faible rapport qui correspond cependant deux fois la dose terrain sera susceptible de limiter certains rsultats et observations. Lapport de boues, au champ est raisonn en fonction de la quantit dazote : il doit tre en rgle gnrale compris entre 1 et 2 kg de MS / ha. Dans le cadre de notre exprimentation, nous ne nous sommes pas intresss lazote mais aux ETM. Cest pourquoi lapport dazote, dans le cas de notre exprimentation est de 7 15 fois suprieur la pratique usuelle. Lapport de boue est localis uniquement dans les 10 premiers centimtres de la colonne o elle est grossirement mlange au sol. Le choix dincorporer la boue uniquement dans les 10 premiers centimtres respecte la ralit terrain. Pour les mmes raisons, le mlange de la boue au sol est ralis de faon grossire : des boulettes de boues vont subsister dans lhorizon dincorporation. Pour chaque modalit, un traitement avec ver et un traitement sans ver est ralis, chaque traitement comprenant 3 rptitions.

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I.6.1 Exprimentation 1 (Redistribution des ETM dans les biostructures) Lexprimentation 1 est ralise avec le sol de la Bouzule, la boue et les deux espces lombriciennes : Lumbricus terrestris et Nicodrilus giardi.

I.6.2 Exprimentation 2 (Qualit des eaux de percolation) Lexprimentation 2 est ralise avec le sol de la Bouzule, la boue et Lumbricus terrestris.

Les microcosmes sont placs dans une chambre climatise et ventile. La temprature moyenne est de 12C, et la photopriode 12 heures jour/12 heures nuit est applique au systme. Un arrosage rgulier de 50ml deau distille est ralis deux fois par semaine. Ce volume deau ajout 2 fois par semaine a t choisi en fonction de la demande en percolats des analyses (Carbone Organique Dissous, et Elments traces mtalliques). Lincubation a dur 240 jours dans le cas de lexprience 1 et 60 jours dans le cas de lexprience 2.

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Modalit Tmoin

Modalit Boue

Litire
10 cm

N1

Sol + Boue

N1

10 cm

Sol N2 N2

Figure II.4 Les modalits exprimentales

Turricule (rcolt 1 fois/semaine)

N1 N2

N1

Parois de galerie N1= Pg1 Sol environnant N1= Se1 Echantillonns en fin dincubation aprs destruction de la Parois de galerie N2 = Pg2 colonne Sol environnant N2 = Se2 Percolat (rcolt 1 fois/semaine)

N2

N3

Figure II.5 Les compartiments tudis

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2. LES COMPARTIMENTS ETUDIES 2.1 Les turricules Les turricules, djections produites par les vers et laisses en surface, sont rcolts toutes les semaines. Ils sont pess, schs lair libre puis stocks en chambre froide 5C.

2.2 Les parois de galeries et le sol environnant En fin dexprimentation, les colonnes de sol sont dtruites afin dchantillonner les parois de galeries et le sol environnant. La colonne de sol est dmoule et divise en deux niveaux : Le niveau N1 correspond aux 10 premiers centimtres de la colonne de sol. Pour les modalits boue, ce niveau correspond la zone dapport de boue. Le niveau N2 correspond aux 10 derniers centimtres de la colonne de sol (10 - 20 cm). Lanalyse des teneurs en ETM dans les galeries et dans le sol environnant de ce niveau permettra de mettre en vidence lexistence ou non dune redistribution des mtaux sur le profil de la colonne de sol.

Les parois de galeries des lombriciens sont chantillonnes dans les diffrents niveaux. Lchantillon est prlev sur les 2 premiers mm de la paroi, cette zone tant plus riche en carbone que la priphrie des galeries (2 -4 mm) (Bouch, 1975 ; Jgou, 1998; Tiunov et Scheu, 1999). Les parois sont chantillonnes au moyen dune fine spatule, elles sont mises scher lair libre puis tamises 2mm.

Le sol environnant correspond au sol situ au moins 2 cm de toute trace dactivit lombricienne. Il est mis scher lair libre, tamis 2mm. De mme que pour les parois de galeries, il est chantillonn dans les deux niveaux N1 et N2.

2.3 Les percolats Les eaux de percolations sont rcoltes chaque semaine le lendemain de lapport deau distille. Les percolats sont filtrs 0.45 m et stocks en chambre froide (5C) dans des piluliers en polypropylne. Ces chantillons sont spars en deux : ceux destins aux analyses de carbone organique dissous et ceux destins aux analyses dlments traces mtalliques. Les chantillons destins au dosage des lments traces mtalliques sont acidifis par de lacide nitrique HNO3 concentr (1 mg dacide pour 20 mg deau) de faon obtenir un pH denviron 32

1. Les chantillons destins au dosage de carbone organique dissous ne subissent aucun traitement particulier. Les eaux de percolations sont volumes laide dune burette gradue.

3. LES ANALYSES 3.1 Dosage du carbone organique dissous et des lments traces mtalliques dans les percolats Le carbone organique dissous est dos par un analyser de carbone (Shimadzu TOC 5050A). Les lments traces mtalliques sont dos par ICP-MS (Inductively coupled plasma - Mass spectrometers) (Agilent 4500 Series System Diagram). Pour le carbone et les lments traces mtalliques, des blancs sont raliss avec leau distille servant arroser les colonnes de sol. Les lments traces mtalliques doss sont le cuivre, le plomb, le cadmium et le zinc. Ces lments sont choisis en fonction de leurs proprits (oligo-lments ou non) et de leur comportement dans le sol. Ainsi le cuivre et le zinc sont des oligo-lments mais leur comportement dans le sol diffre : Le cuivre est peu mobile et fortement retenu par la matire organique, alors que le zinc est relativement mobile. Le plomb et le cadmium ont t choisis en rapport aux problmes de toxicit quils peuvent engendrer. De plus, le cadmium dont la phytotoxicit est reconnu, est lun des lments traces les plus mobiles et est donc susceptible dtre transfr dans les eaux et poser des problmes de sant humaine.

3.2 Les extractions chimiques Les extractions chimiques vont permettre de dterminer si aprs passage dans le tube digestif du ver ou si aprs dpt de mucus ou de djection pour les parois de galerie, les mtaux sont redistribus sur dautres constituants du sol et deviennent alors plus disponibles ou/et plus mobiles. Le protocole dextraction chimique dcris par Romkens (rapport CEA) et utilis dans le cadre de notre exprimentation est plus simple que celui dcris par Tessier et al. (1979). Seules trois fractions sont retenues au lieu des 5 cites dans le Chapitre I. Ce choix repose sur une simplification des rsultats obtenus et ainsi une meilleure lisibilit de limpact des activits lombriciennes sur la mobilit des ETM. Les trois principales fractions retenues sont : ! la fraction changeable, cette fraction dtermine les mtaux actuellement disponibles, elle est comparable la solution du sol. 33

! la fraction potentiellement changeable, cest dire les mtaux qui pourront tre transfrs vers la fraction disponible sous certaines conditions (action bactrienne, modification du pH, de la CEC, du potentiel doxydo-reduction), donc les mtaux fixs sur les oxydes ou lis la matire organique. ! la fraction rsiduelle, c'est--dire les mtaux inclus dans la matrice. ! la teneur totale.

3.2.1 La fraction changeable 5 g de sol tamis et sch sont placs dans un tube en polypropylne avec 10 ml de Ca(NO3)2 et mis en agitation pendant 48 h. La solution est centrifuge 3000 tr/min pendant 20 mn, le surnageant est filtr sur filtre pliss puis stock en chambre froide avant dosage.

3.2.2 La fraction potentiellement changeable Une attaque douce lacide nitrique dilu permet dextraire les lments traces mtalliques prsents dans cette fraction. 4g de sol tamis et sch est plac dans un tube en polypropylne avec 40 ml dacide nitrique (HNO3) 0.43 N et mis en agitation pendant 4 heures. Les tubes sont ensuite centrifugs 3000 tr/mn pendant 20 minutes. Le surnageant est filtr sur filtre pliss puis stock en chambre froide avant dosage.

3.2.3 La fraction rsiduelle Les ETM prsents dans cette fraction sont dduits de ceux prsents dans les fractions changeable et potentiellement changeable des teneurs totales.

3.2.4 Les teneurs totales Afin de doser les teneurs totales en lments traces mtalliques, le sol est minralis dans de lacide nitrique HNO3 suprapur en four micro-onde (Fours MARS). A noter quavec une attaque au HNO3, les lments traces mtalliques inclus dans la silice ne sont pas minraliss. Aussi, la teneur en lments traces mtalliques obtenue nest pas exactement la teneur totale en lments traces mtalliques du sol, mais sen approche. 05 g de sol et 10 ml dacide nitrique suprapur sont placs dans des racteurs en tflon du Four. Le protocole de minralisation est adapt pour nos chantillons : Monte de la temprature et de la pression pendant 10 mn jusqu' 200 C et 20 bar Maintien pendant 40 minutes 200 C une pression de 20 bar Refroidissement pendant 10mn (temprature 120 C) 34

 Maintien pendant 40 minutes 200 C une pression de 20 bar Fin de cycle refroidissement Les lments traces mtalliques prsents dans chaque fraction extraite sont doss par absorption atomique (Perkin elmer).

Teneur Totale (extrait par HNO 3 suprapur) libre

Ions solubles

li la MO et aux oxydes HNO 3

0,43 M

inclus dans la matrice

Ca (NO3)2
0,01M

Fraction changeable

Fraction potentiellement changeable

Fraction rsiduelle

Figure II.5 Schma des fractions issues des extractions chimiques daprs Morel (1997)

3.3 Le fractionnement granulo-densimtrique Le fractionnement granulo-densimtrique est ralis sur les chantillons de la modalit Bouz/B3.2. Les particules sont spares selon leur densit et leur taille, sans destruction pralable de la MO. Une sparation classique des particules est choisies : 200 -2000m (sables grossiers), 100-200 m (sable moyen), 50 -100 m sables fins, 20 -50 m (limons grossiers), 2-20 m (limons fins), 0 -2 m (argiles).

3.3.1 Principe du fractionnement granulo-densimtrique. Le sol, aprs tamisage pralable 2mm, est mis en agitation dans de l'eau (rapport 2/5) pendant 16h. Il est ensuite tamis sous eau. Les fractions rcupres sont les suivantes : 2002000m, 100-200m, 50-100m et un jus (2 litres environ) contenant les particules < 50 m est rcupr. Les MOP, les matires organiques particulaires ou figures sont spares de la matire minrale par densimtrie pour les fractions de taille suprieure 50m. Les MOP plus lgres 35

que la matire minrale, sont rcupres partir de ces fractions primaires suivant la mthode de la batte, cest dire par tri densimtrique dans leau. Les diffrentes fractions granulomtriques et densimtrique ainsi obtenues sont sches ltuve 40C Par la suite, la fraction 0-50m est soumise l'action des ultrasons afin de casser les agrgats restant. Le "jus" est alors pass sur un tamis de 20 m permettant de rcuprer la fraction 2050m. La solution contenant les particules < 20m est ensuite mlange de faon remettre les particules en suspension. Puis elle est centrifuge 800 tours/mn pendant 3mn (le temps de centrifugation est dduit de la temprature de la solution). Le surnageant, qui contient les particules < 2m est siphonn, puis centrifug 10 mn 10000 tours/mn; il sert rincer les culots de 2-20m. La fraction 2-20 m est obtenue partir des culots issus de la centrifugation 800 tours/mn aprs rinage l'eau et lyophilisation. La fraction < 2m est rcolte aprs lyophilisation des culots de centrifugation 10000 tours/mn. Les diffrentes fractions issues du fractionnement granulo-densimtrique sont envoys lINRA de ARRAS ou des dosages de teneurs en carbone (NF ISO 10694), azote (NF ISO 13878) et lments traces (mise en solution HF, dosage ICP-MS pour Cd et Pb et ICP-AES pour Cu et Zn) sont raliss sur les chantillons bruts avant fractionnement et sur les diffrentes fractions granulo-densimtriques.

Sol
dispersion par agitation mcanique

Tamisage sous eau

Rcupration de s fractions granulom triques 200 - 2000m 100 - 200m 50 - 100m < 5 0 m

Sparation des MOP de la mati re m inrale p ar densimtrie (Flottaison)

Ultrason ification < 20m Sparation, isolatio n Lyophilisation

200 - 2 000m MOP Min

100 - 200m MOP Min

50 - 100m 20 - 50m MOP Min 2- 20m 0- 2 m

Figure II.6 Le fractionnement granulo-densimtrique 36

3.4 Les analyses statistiques Lensemble des traitements statistiques ralis dans ce travail relve des comparaisons multiples. Cette procdure consiste comparer 2 2 lensemble ou une partie des rsultats (Sokal et Rohlf, 1981). Comme nos chantillons ne suivent pas une loi normale, nous avons utilis des tests non paramtriques (Siegel, 1959). Selon que les chantillons sont lis ou non, les tests utiliss sont diffrents : Dans le cas dchantillons indpendants, le test de Man et Withney est utilis pour comparer les chantillons 2 2 et celui de Kruskall Wallis pour comparer lensemble des chantillons. Dans le cas dchantillons dpendants, les tests de Wilcoxon et de Friedman sont utiliss. Wilcoxon tant lalternative de Man et Withney pour des chantillons dpendant et Friedman celui de Kruskall Wallis (Siegel, 1959). Nos chantillons tant le plus souvent dpendants, les deux derniers tests sont les plus utiliss.

37

CHAPITRE III

IMPACTS DES ETM SUR LES LOMBRICIENS

38

IMPACTS DES ETM SUR LES LOMBRICIENS

___________________________________________________

Au terme de lexprimentation, les microcosmes sont dmonts afin de collecter les chantillons de parois de galeries et de sol environnant. Les lombriciens sont alors rcuprs, compts et pess. Le suivi de quelques paramtres biodmographiques tels que la survie, lvolution pondrale ainsi que dautre paramtre tel que la production de turricules permet dapprhender le comportement des lombriciens au cours de lexprimentation, ceci afin de dterminer si nos observations concernant la redistribution des ETM via les activits lombriciennes sont pertinentes. Seront prsents dans un premiers temps, lvolution des paramtres biodmographiques de lexprimentation 1, puis dans un deuxime temps, celles de lexprimentation 2.

1. SUIVI DES PARAMETRES BIODEMOGRAPHIQUES Deux types deffets toxiques sont distingus : les effets ltaux ou effets toxiques directs, valus par le taux de survie des vers et, les effets subltaux ou effets indirects, touchant des paramtres tels que la croissance et la maturit sexuelle. ! La survie : elle permet dvaluer les effets toxiques directs. En dbut dexprimentation, 3 vers sont introduits dans chaque colonne. En fin dexprimentation, les vers sont rcolts et compts. ! Lvolution pondrale et taux de croissance : indicateurs deffets subltaux, les vers sont pess avant leur introduction dans les colonnes, ils sont galement pess en fin dexprimentation. Le taux de croissance est calcul comme suit : [(Poids final Poids initial)/Poids initial]*100

1.1 Exprimentation 1 1.1.1 Le Taux de survie Le tableau III.1 prsente le taux de survie observe pour les deux espces lombriciennes.

39

Tableau III.1. Taux de survie des 2 espces lombriciennes

Modalits Tmoin Boue L. terrestris 27% 27% N. giardi 100% 93%

Les taux de survie prsents dans le tableau III.1, montrent quil nexiste aucune diffrence significative entre les deux modalits Boue et Tmoin pour une mme espce. La boue ne semble donc pas avoir deffet toxique direct sur les lombriciens. En revanche, le taux de survie est diffrent selon lespce lombricienne. Ainsi, le taux de survie de N. giardi se situe autour 100%, tandis que celui de L. terrestris est de 27%. Une importante mortalit est donc observe pour lespce L. terrestris, et ceci pour les deux modalits. La mortalit observe pour lespce L. terrestris est due, non pas la toxicit de la boue, mais aux conditions exprimentales. En effet, les conditions exprimentales (jeun pendant 2 mois, confinement) ne sont peut tre pas satisfaisante pour cette espce. La diffrence deffets ltaux observs entre les deux espces lombriciennes peut tre attribue un comportement fouisseur diffrent. En effet, L. terrestris se comporte comme un piancique : il se nourri essentiellement des dbris de litire situs la surface du sol. N. giardi est une espce ancique tendance gophage : il va se nourrir de litire mais galement de sol. Il est donc probable que le jeun impos au ver durant les deux premiers mois dexprimentation a t plus prjudiciable pour L. terrestris que pour N. giardi.

1.1.2 Evolution pondrale Lvolution pondrale est exprime en gain ou perte de biomasse observe entre T0 et Tfinal, rapport au poids initial. Le rsultat est exprim en pourcentage (figure III.1). La perte de biomasse est fonction de la mort et/ou de la perte pondrale dindividus. Aussi, dans la perte de biomasse, la part lie la mortalit a t diffrencie de celle lie une volution pondrale. Lvolution pondrale est ngative quelle que soit la modalit. La diminution de biomasse lombricienne est plus importante pour L. terrestris, du fait de limportante mortalit. La diminution de biomasse due aux pertes pondrales se situe entre 30 et 50%. Lhypothse pose afin dexpliquer cette perte pondrale est une carence nutritive lie aux deux premier mois dexprimentation. Durant cette priode, les vers des modalits tmoins ne disposaient daucune autre ressource trophique que la MO du sol. Les vers de la modalit Boue disposaient de la MO prsente dans la boue. La quantit de boue apporte tant faible, lapport de MO est lui aussi relativement faible. 40

L. terrestris
Perte de biomasse en %
0 -20 -40 -60 -80 -100

N. giardi T B3.2

B3.2

Perte de biomasse globale Perte de biomasse due la mortalit Perte de biomasse due une perte pondrale

Figure III.1 Evolution pondrale de L. terrestris et N. giardi durant lexprimentation 1

De plus, lespce N. giardi a une diapause obligatoire aux alentours du mois de Mai. Lors de cette priode, les lombriciens peuvent perdre jusqu 60% de leur poids (Lee, 1985). Celle-ci peut donc tre la cause dune partie de la perte de poids observe pour toutes les modalits. A noter que L. terrestris na pas de diapause obligatoire, il entre en quiescence quand les conditions du milieu lui sont dfavorables. Au regard des paramtres biodmographiques, les boues ne semblent pas tre toxique pour les lombriciens. La mortalit ainsi que les pertes de poids observes seraient dues une carence nutritionnelle et non une toxicit des boues. La priode de jeun impose au lombriciens durant les deux premiers mois de lexprimentation a t prjudiciable.

1.2 Exprimentation 2 Lexprimentation 2 a t ralise avec L. terrestris. Des colonnes sont dmontes tous les 15 jours, le taux de survie, ainsi que lvolution pondrale peuvent tre suivi tous les 15 jours. De la litire est apporte aux lombriciens ds le dbut de lexprimentation.

41

1.2.1 Le Taux de survie

Tableau III.2 Taux de survie (exprimentation 2)

2 semaines Tmoin Taux de survie 100 Boue 50 4 semaines Tmoin 92 Boue 92 6 semaines Tmoin 100 Boue 100 8 semaines Tmoin 100 Boue 75

Aucune mortalit significative nest observe dans le cas de la modalit Tmoin. Pour la modalit Boue, le taux de survie de la semaine 2 est faible, il est de 50%. Cependant lors des semaines suivantes, le taux de survie varie entre 100 et 75%. La mortalit observe lors des premires semaines nest donc pas due une toxicit de la boue. Lhypothse pose est que les substances libres la mort dun lombricien pourraient tre toxiques et entraner la mort des autres individus prsents dans le mme microcosme.

1.2.2 Evolution pondrale

Tableau III.3 Evolution pondrale (exprimentation 2)

2 semaines Tmoin Evolution pondrale -10,43 Boue -62,87 4 semaines Tmoin -17,68 Boue -1,68 6 semaines Tmoin -11,1 Boue -11,83 8 semaines Tmoin -16,31 Boue -31,12

L encore, lvolution pondrale est ngative, les lombriciens perdent du poids durant lexprimentation. La ressource trophique mise leur disposition nest peut tre pas adapte leurs besoins. Les lombriciens sont de grands consommateurs dazote, le mucus pidermique produit tant riche en azote. Ils ncessitent donc de la litire riche en composs azots. Les plus grandes pertes pondrales ne sont pas toujours observs dans le cas de la modalit Boue, la boue ne semble donc pas avoir deffets subltaux, notamment au niveau de la croissance pondrale.

2. PRODUCTION DE TURRICULE Lactivit des lombriciens durant lexprimentation peut tre estime par la production de turricules. Les turricules produits par les vers sont rcolts tous les deux jours en surface de la colonne de sol. Ils sont mis scher lair libre, stocks puis pess en fin dexprimentation. 42

La quantit de turricules produit est exprime en g de turricules rcolts pendant la dure de lexprience, mais aussi en mg de turricules par g de ver pour une priode de 213 jours dure de lexprimentation et galement en mg de turricules par g de ver par jour.

Tableau III.4 Production de turricule

L. terrestris Traitement Turricules (g) g de Turr/g de vdt/77j mg de Turr/g de vdt/jour T 223,80 4,90 19,20 B3.2 288,40 3,60 16,90 N. giardi T 58,32 1,24 5,82 B3.2 205,59 3,98 18,68

La production de turricule oscille entre 19,20 et 16,90 mg de turricule/g de ver/jour, lexception de la modalit Ng/Tmoin. Pour cette modalit, la production de turricule nest que de 5,82 mg de turricule/g de ver/jour. Les conditions du milieu tant dfavorables, la production de turricule est relativement faible pour lespce N. giardi, peut tre plus sensible aux conditions du milieu. Gnralement, N.giardi produit plus de turricule que L.terrestris (Jgou, 1998) Les graphes reprsentant la production de turricule en fonction du temps montrent une diminution de production de turricule aux alentour du 17 Avril (cf figure III.2 et III.3). Cette priode correspond au dbut de diapause de N.giardi, dou un ralentissement de la production de turricule et donc au final une production de turricule relativement identique celle de L.terrestris.

43

Production de turricule (g)

1er apport de litire

40 30 20 10 0

Lt Ng

Figure III.2 Production de turricules de L. terrestris et N. giardi pour la modalit Tmoin

Production de turricule (g)

20 00 /0 2/ 20 15 00 /0 2/ 20 29 00 /0 2/ 20 14 00 /0 3/ 20 28 00 /0 3/ 20 11 00 /0 4/ 20 25 00 /0 4/ 20 09 00 /0 5/ 20 23 00 /0 5/ 20 06 00 /0 6/ 20 20 00 /0 6/ 20 00 01

18

/0 1/

Temps en semaine Priode de jeun

Apport de litire

1er apport de litire

40 30

Lt
20

Ng
10 0

Figure III.3 Production de turricules de L. terrestris et N. giardi pour la modalit Boue

20 00 /0 2/ 20 29 00 /0 2/ 20 14 00 /0 3/ 20 28 00 /0 3/ 20 11 00 /0 4/ 20 25 00 /0 4/ 20 09 00 /0 5/ 20 23 00 /0 5/ 20 06 00 /0 6/ 20 20 00 /0 6/ 20 00 15

18

01

/0 1/

/0 2/

20 00

Temps en semaine Priode de jeun

Apport de litire

44

3 DISCUSSION Au vu des rsultats, les boues ne semblent pas avoir deffet toxique direct ou indirect sur les lombriciens. La mortalit ainsi que la dcroissance pondrale observes seraient dues aux conditions exprimentales. Ainsi, le jeun impos durant les deux premiers mois pour lexprimentation 1, serait la cause de limportante mortalit des lombriciens, L.terrestris plus particulirement.. De plus, une hypothse pose au cours de cette exprimentation est que la mort dun ver pourrait entraner la mort des autres vers prsents dans le mme microcosme. Il est, en effet, probable que lors de la dcomposition du ver mort, des substances toxiques, telle que lammoniaque, sont libres dans le milieu (Lee, 1985). Ces substances associes au confinement du microcosme font que les lombriciens prsents dans le mme milieu meurent. Il suffit donc quun individu, un peu affaibli par des manipulations successives meure pour que cela entrane la mort dautres individus. La dcroissance pondrale observe nest galement pas due la toxicit de la boue, mais un artfact exprimental . Limportante dcroissance pondrale observe pour lexprimentation 1 serait galement due une carence nutritionnelle impose par les deux mois de jeun. Cependant dans le cas de lexprimentation 2 et malgr lapport de litire en dbut dexprimentation, une dcroissance pondrale est galement constate et cela mme dans le cas de la modalit Tmoin. Les hypothses poses sont que la quantit de litire apporte ne suffit pas assurer un bon dveloppement des vers et/ou que la qualit nutritionnelle de la litire vis--vis des lombriciens nest pas satisfaisante. La quantit de litire apporte est calcule partir de travaux bibliographique prcdents estimant les besoins nutritionnel du ver 0,011g de litire/g de ver/ jour (Edwards et Lofty, 1977 ; Lee, 1985). Dans le cas de lexprimentation 1, une quantit similaire 0,011 g de litire/g de ver/jour est apporte en surface des microcosmes aprs les deux mois de jeun. Pour lexprimentation 2, seulement 0,006 g de litire/g de ver/ jour ont t apports aux vers des le dbut de lexprimentation, ceci afin dobliger les lombriciens ingrer la MO prsente dans le sol et dans les boues. Un autre facteur important pouvant expliquer la perte pondrale est la qualit nutritionnelle de la litire. Les lombriciens tant de grands consommateurs dazote, il a t dmontre que lapptance dune litire est corrle sa teneur en azote et ngativement avec les composs phnoliques et tannins (Satchell et Lowe, 1967). Si la litire utilise est riche en azote, elle 45

contient peut tre des composs phnoliques non apptant.

La boue quant elle ne semble pas induire de toxicit vis--vis des lombriciens. Lors de nos exprimentations, les conditions exprimentales choisies ntaient peut tre pas optimales pour assurer un bon dveloppement des vers.

46

CHAPITRE IV

REDISTRIBUTION DES ETM DANS LES MICROSITES DORIGINE LOMBRICIENNE

47

REDISTRIBUTION DES ETM DANS LES MICROSITES DORIGINE LOMBRICIENNE ___________________________________________________________________________

Lobjectif de cette tude est de dcrire et expliquer la distribution des ETM entre les diffrents compartiments tudis (sol, turricules et parois de galeries) et galement de dterminer leur distribution au sein mme de ces compartiments.

Lanalyse des teneurs totales en ETM permettra entre autre de dterminer une chelle globale, la distribution des ETM entre les diffrents compartiments tudis : sol et microsites. A lchelle des diffrents compartiments, sol et microsites, la distribution des ETM sera aborde par deux techniques complmentaires chimique et physique : les extractions chimiques permettront dvaluer les changements de spciation des ETM dans les microsites par rapport au sol environnant ; le fractionnement granulo-densimtrique permettra dapprhender la localisation des ETM au sein des classes de taille granulomtriques afin de mieux comprendre les changements de spciation des ETM associs ces structures.

1. TENEURS TOTALES EN CARBONE, AZOTE ET ETM DANS LE SOL ET LES BIOSTRUCTURES 1.1 Teneur totale en carbone, azote et ETM dans le sol environnant de la modalit Tmoin et de la modalit Boue. 1.1.1 Carbone et azote total Lapport de boue augmente les teneurs en carbone et azote dans le sol (figure IV.1). En effet, les boues contiennent de la MO (Korantajer, 1991 ; Sopper, 1993 ; Barrera et al, 2000), ce qui explique leur utilisation en tant quamendement organique en agriculture.

48

30

2,5

Teneur en C (g/kg)

20 15 10 5 0

Teneur en N (g/kg)

25

Carbone

2,0 1,5 1,0 0,5 0,0

Azote

Sol Tmoin

Sol + Boue

Sol Tmoin

Sol +Boue

Figure IV.1 Teneurs totales en carbone et azote dans le sol des modalits Tmoin et Boue

50

70

concentration en mg/kg

40 30 20 10 0

Cuivre

concentration en mg/kg

60 50 40 30 20 10 0

Plomb

N1
3

N2
200

N1 concentration en mg/kg

N2

concentration en mg/kg

Cadmium
2

Zinc
150 100 50 0

N1

N2

N1

N2

Modalit Tmoin niveau 1 (2-10 cm) Modalit Boue niveau 1 (2-10 cm)

Modalit Tmoin niveau 2 (10-20 cm) Modalit Boue niveau 2 (10-20 cm)

Diffrences significatives

Figure IV.2 Teneurs totales en ETM dans le sol des modalits Tmoin et Boue

49

1.1.2 Teneur totale en ETM Les teneurs totales en lments traces mtalliques dans le sol de la Bouzule avant (sol tmoin) et aprs apport de boues (sol + boue) sont compares aux teneurs limites dans un sol impos par larrt du 8/01/98 (Baize, 2002) et aux teneurs moyennes des sols (Juste et Feix, 1995) (tableau IV.1). Les teneurs en cadmium et zinc dans le sol de la modalit Tmoin sont suprieures aux teneurs moyennes dans les sols mais restent cependant infrieures aux teneurs maximales admissibles.

Tableau IV.1 Teneurs maximales admissibles (Arrte du 8/01/98), teneurs moyennes dans les sols et teneurs totales dans les sols exprimentaux du cuivre, plomb, cadmium et zinc5
Teneurs en mg/kg Teneurs limites (Arrt du 8/01/98) Teneurs moyennes dans les sols (Juste et Feix, 1995) Sol tmoin (valeur +/- cart-type) Sol + boue (valeur +/- cart-type) Cuivre 100 10 30 sol agricole 15,27 (0,29) 25,98 (5,2) Plomb 100 10 30 sol non pollu 37,23 (7,47) 48,43 (8,03) Cadmium 2 0.2 0.5 sol non pollu 1,58 (0,05) 2,10 (0,07) Zinc 300 70 90 sol non pollu 107,23 (28,4) 158,30 (25,2)

Les teneurs totales en cuivre, plomb, cadmium et zinc dans les niveaux 1 et 2 du sol de la modalit Tmoin et de la modalit Boues sont reprsentes dans la figure IV.2. Les teneurs totales en lments traces mtalliques augmentent dans le niveau 1 (2-10 cm) du sol + boue. Cette augmentation nest pas toujours significative. Ainsi, les teneurs en plomb et zinc du sol + boues ne sont pas significativement diffrentes du sol sans boue. Cette non significativit peut tre due lhtrognit du mlange sol + boue : Lincorporation des boues dans le sol se faisant de faon grossire, des agrgats de boue peuvent rester forms et augmentent alors la variabilit de la mesure. De plus, la quantit dETM apporte par 40g de boue peut tre faible et se retrouver dilue dans le stock initial dlments traces du sol : le rapport quantit de boue en MS sur la quantit de sol ntant que de 0,016.

Des analyses de teneurs en ETM ont galement t ralises dans le niveau 2, c'est--dire le
5

Les teneurs totales en ETM cites ici, tableau III.1, sont diffrentes de celles cites dans le tableau II.1. Ces

diffrences tiennent la mthode dextraction et de dosage employe. Les teneurs cites dans le tableau II.1 rsultant dune attaque par HF et dosage ICP-MS, tandis que les teneurs cites ci-dessus rsultent dune attaque lacide nitrique et dosage labsorption atomique.

50

niveau situ au dessous de lapport de boue (10-20 cm) afin didentifier une migration potentielle des ETM apports par la boue vers les horizons sous-jacent. Les teneurs sont similaires celle du sol initial pour le cuivre, le plomb et le zinc. En revanche, les teneurs en cadmium du niveau 2 sont similaires celle du niveau 1, laissant penser que le cadmium des boues migre vers le niveau 2. Des travaux ralises dans des condition relativement similaire (colonnes de sol homognises et compactes) (Emmerich et al, 1982 ; Mc Bride, 1995; Smith, 1996 ; Michelin et al, 2002 ; Vulkan et al, 2002) montrent que les ETM apports par les boues sont gnralement peu mobiles et migrent trs peu. Cependant, nombre de ces tudes ne bouclent pas leur bilan de masse. Ainsi, Mc Grath et Lane (1989) nont pu retrouver 68% des lments traces appliqus, suggrant une perte possible dlments. Nos rsultats, concernant le cadmium, sassocient dautres travaux qui ont mis en vidence une migration de la surface vers les horizons de profondeurs du nickel du cadmium et dans certains cas du zinc. Ces lments sont connus pour tre les plus mobiles (Dowdy et al, 1991 ; Streck et Richter, 1997 ; Richards et al, 1998). Les effets combins de la prsence de voies prfrentielles dcoulement des eaux (fractures, galeries) et de composs inorganiques et/ou organiques solubles, permettraient aux ETM de migrer vers le bas dune colonne de sol (Harter et Naidu, 1995 ; Steenhuis et al, 1995 ; Camobreco et al, 1996 ; Richards et al, 1998). Nos rsultats confirment la migration dun front de cadmium plus labile du haut vers le bas du microcosme.

1.2 - Teneurs totales en carbone, azote et ETM dans les turricules et parois de galeries 1.2.1 Teneurs en carbone et azote Les dosages de carbone et azote ont t raliss pour les microsites de la modalit boue. Les teneurs totales en C et de N sont significativement plus leves dans les turricules et les parois de galeries de L.terrestris que dans le sol environnant (figure IV.3). Pour N.giardi, seuls les turricules sont significativement enrichis en C et N. De nombreux auteurs (Rafidison, 1982 ; Lee, 1985 ; Binet, 1993 ; Doube et al, 1994 ; Jgou, 1998) ont observs une augmentation des concentrations du C total dans les turricules. Selon Lee (1985) les teneurs de C et de N dans les djections peuvent tre de 1,5 2,0 fois suprieures celles du sol environnant. Les teneurs en C et N des parois de galeries de L.terrestris sont galement suprieures celle du sol. Les parois de galeries sont tapisses par des djections, du mucus et des dbris de litire qui contribuent un enrichissement en C et N. Les teneurs en C et N des parois de galeries sont gnralement intermdiaires entre le sol et les turricules.

51

100

Teneur en C (g/kg)

80 60 40 20 0

Teneur en N (g/kg)

Carbone

* *

4 3 2 1 0

Azote

* *

Se1 Se2

Pg1

Se1 Se2

Pg1

Sol environnant niveau 1 L.terrestris Sol environnant niveau 2 N.giardi

Figure IV.3 Teneurs totales en carbone et azote dans le sol environnant, les parois de galeries et les turricules de L.terrestris et N.giardi pour la modalit Boue.

1.2.2 Teneurs en ETM dans les microsites Les teneurs totales en ETM dans les biostructures de L.terrestris et N.giardi pour les 2 modalits Tmoin et Boue sont prsentes dans la figure IV.4. Les teneurs en cuivre, plomb et zinc dans les microsites ne sont pas significativement diffrentes de celles du sol. En revanche, les teneurs en cadmium dans les microsites sont significativement infrieures celles du sol environnant pour les deux modalits Tmoin et Boue. Ce rsultat nest pas en accord avec les conclusions de Ireland (1983) qui, dans une synthse bibliographique, a montr que les teneurs en cadmium dans les turricules sont gnralement suprieures celles du sol, alors que les concentrations en cuivre, plomb et zinc dans les turricules sont variables et non directement relies aux teneurs dans le sol. Les travaux cits par Ireland (1983), ont t raliss sur les turricules despces pigs et pour des teneurs en ETM plus importantes que dans notre exprimentation. Des travaux plus rcents raliss par Morgan et Morgan (1992) ne montrent aucune diffrence significative entre les teneurs en Cd, Cu, Zn et Pb du sol et des turricules de L.terrestris. Ces diffrences pourraient tre dues une consommation de particules de sol plus ou moins contamines en ETM (Greville et Morgan, 1989) rsultant du comportement alimentaire slectif des lombriciens (Martin et al, 1991 ; Barois et al, 1993). Dans les parois de galeries du niveau 2, niveau sans apport de boue, aucun enrichissement en ETM nest observ. Il ny a donc pas de phnomne denrichissement des parois situes audessous de lapport de boue via lactivit lombricienne. Cependant, des tudes de terrains ont montr une augmentation des teneurs en ETM dans les parois de galeries situes au dessous 52

de la zone dincorporation de la boue (Tomlin, 1993; Sterckman et al, 2000).

Modalit Tmoin
concentration en mg/kg concentration en mg/kg
50 40 30 20 10 0

Modalit Boue
50 40 30 20 10 0

Cuivre

Cuivre

Sol

Pg2

Pg1

Sol

Pg2

Pg1

concentration en mg/kg

concentration en mg/kg

70 60 40 20 0

Plomb

70 60 40 20 0

Plomb

Sol

Pg2

Pg1

Sol

Pg2

Pg1

concentration en mg/kg

concentration en mg/kg

Cadmium

Cadmium

**
Sol Pg2

**
Pg1

**
T

**
Sol Pg2

**
Pg1

concentration en mg/kg

concentration en mg/kg

200 150 100 50 0

Zinc

200 150 100 50 0

Zinc

Sol

Pg2

Pg1

Sol

Pg2

Pg1

Sol environnant niveau 1 Sol environnant modalit Tmoin Sol environnant niveau 2

L.terrestris N.giardi

Figure IV.4 Teneurs totales en ETM dans le sol environnant, les parois de galeries et les turricules de L.terrestris et N.giardi pour les modalits Tmoin et Boue.

53

1.3 Discussion Carbone et Azote Lapport de boues contribue effectivement une augmentation significative des teneurs totales en C, N et ETM dans le sol. Laugmentation de ces paramtres est fonction de la quantit de boue apporte. Les teneurs en carbone et azote des biostructures sont 2 3 fois suprieures celles du sol environnant. Cet enrichissement en C et N des microsites, illustr par de nombreux auteurs (Rafidison, 1982 ; Lee, 1985 ; Binet, 1993 ; Doube et al, 1994 ; Jgou, 1998), serait du lingestion prfrentielle des particules organiques par le ver (Lee, 1985 ; Martin et al, 1991 ; Chapuis-Lardy et al, 1998). Les diffrences de comportement alimentaire et fouisseur entre L.terrestris et N.giardi se traduisent par un enrichissement en C et N des turricules et parois de galeries plus important pour L.terrestris que pour N.giardi. Les consommations de litire observes pendant la dure de lexprimentation tmoignent de cette diffrence (Annexe1). Ainsi L.terrestris (ancique tendance pig) a ingr plus de litire que N.giardi, do une augmentation plus importante des teneurs en C et N dans les turricules et les parois de galeries de cette espce. Selon Jgou et al, (2000), la structure du rseau de galeries forme par les deux espces fait que la distribution du carbone dans les galeries est diffrente. Le rseau de galerie form par N.giardi tant important et trs ramifi, le carbone se trouve dilu au sein de ces structures. Tandis que, pour L.terrestris dont le rseau est peu ramifi et permanant, lenrichissement en carbone se trouve plus localis et donc plus important dans ces structures (figure IV. 5).

54

5 cm
2 individus

Nicodrilus giardi

Lumbricus .terrestris

Figure IV.5 Reconstructions en 3 dimensions par tomographie du rseau de galeries de Nicodrilus giardi et Lumbricus terrestris (Vue latrale) (Daprs Jgou, 1998)

Elment traces mtalliques Les teneurs en ETM dans les biostructures dpendent plus de llment considr que de lespce lombricienne et de la teneur en ETM du sol. Ainsi, les teneurs en Cu, Pb et Zn dans les biostructures ne sont pas significativement diffrentes de celles du sol. Le cadmium a un comportement plus original : ses teneurs diminuent dans les turricules et les parois de galeries pour les deux modalits. Deux hypothses peuvent tre mises afin dexpliquer cette nonconcentration du cadmium dans les biostructures :

1. Le cadmium serait fortement assimil dans les tissus des lombriciens. Des tudes ralises sur laccumulation des mtaux dans les tissus des lombriciens, montrent que les lombriciens accumulent le Cd plus que tout autre mtal (Ash et Lee, 1980 ; Ireland, 1983 ; Beyer et al, 1985 ; Abdul Rida, 1996). Le cadmium ingr peut se trouver fix dans les tissus des lombriciens, et nest donc pas excrt dans les turricules. Dans le cadre de notre tude, le dosage de mtaux dans les tissus des lombriciens est en cours lINRA dARRAS.

2. Le cadmium ne serait pas associ aux particules de sol ingres par le ver. En effet, selon Helmke et al, (1979), si laugmentation des teneurs en lments 55

traces mtalliques dans les djections est corrle une augmentation des teneurs de ces lments dans le sol, cela signifierait que ces lments sont associs la fraction de sol ingre par le ver. Dans notre exprimentation, laugmentation des teneurs en Cu, Pb et Zn dans le sol est corrl celles observes dans les biostructures : ce qui suggre que le cuivre, le plomb et le zinc sont associs des particules de sol ingres par le ver. Le cadmium, la diffrence, naugmente que lgrement dans les biostructures de la modalit boue : il ne serait donc pas associ aux particules de sol ingres par le ver.

Au cours de notre exprimentation, le choix alimentaire des lombriciens pouvait sorienter soit vers la MO du sol ou des boues, soit vers la litire dpose en surface. Les lombriciens aient prfrentiellement ingr la litire dpose en surface, plutt que la MO du sol ou des boues. Cette litire tant peu charge en lments traces mtalliques, elle ne peut contribuer laugmentation des teneurs totales en ETM dans les biostructures. La sparation des turricules en 2 lots, avant lapport de litire et aprs lapport de litire aurait peut tre permis de mettre en vidence une ventuelle accumulation des ETM dans les turricules. En effet, lingestion de la MO du sol ou des boues laquelle des lments traces mtalliques peuvent tre associs se serait peut tre traduit par une augmentation des teneurs en ETM dans les biostructures.

Litire (non contamine en ETM)

Ver

Ingestion Litire et Sol

Sol Particules de sol non associes avec ETM Particules de sol et ETM associes

Figure IV.6 Prfrence alimentaire des lombriciens aux cours de notre exprimentation

Les teneurs totales en lments traces mtalliques dans les biostructures dpendent de deux principaux facteurs que sont le comportement alimentaire des lombriciens et la spciation des lments traces mtalliques. Les lombriciens, pour se nourrir, slectionnent les particules les plus organiques du sol. Selon que les lments traces mtalliques sont associs ou non ces particules, ils vont se retrouver concentrs dans les biostructures.

56

2. DISTRIBUTION CHIMIQUE DES ETM DANS LE SOL ET LES MICROSITES DORIGINE LOMBRICIENNE 2.1 Distribution chimique des ETM dans le sol avec boue et sans boue Les chantillons de sol sont soumis des extractants de force croissante qui vont permettre de dterminer la disponibilit de ces lments. Une quantit trs faible dETM se trouve sous forme disponible et napparat donc pas sur la figure IV.7, les teneurs en ETM tant situes en dessous du seuil de dtection de labsorption atomique. Selon Kabata Pendias et Pendias, (1992), en condition naturelle, seule une trs faible fraction dETM se trouve sous forme disponible dans les sols, la plupart des lments se trouvant associs la matrice. Deux types de reprsentation sont utiliss pour illustrer la distribution des ETM : soit leur concentration dans les diffrentes fractions (figure IV.7), soit le pourcentage reprsent par la fraction disponible par rapport la teneur totale (figure IV.8). Avant ou aprs lajout de boue, plus de 50% des ETM se trouve dans la fraction rsiduelle, cest dire inclus dans la matrice sol. Le cuivre fait exception puisque la fraction disponible, aprs apport de boue, reprsente environ 80% du cuivre total. La fraction potentiellement disponible des ETM augmente dans le sol aprs apport de boue, comme lont montr plusieurs auteurs (Gerritse et al, 1982 ; Alloway et Jackson, 1991 ; Mc Grath et al, 2000). Ce changement de disponibilit dpend directement de la concentration et de la disponibilit de ces lments dans la boue (Illera et al, 2000). Dans la boue que nous avons utilise, les mtaux sont essentiellement sous forme lie et non disponible (Tableau III.2). Cependant, lapport de boues entrane des ractions qui peuvent modifier la spciation des mtaux dans le sol (Juste et al, 1995 ; Richards et al, 1998 ; Illera et al, 2000) et entraner une immobilisation ou une mobilit accrue de ces mtaux.

57

30

60

Teneur en mg/kg

25 20 15 10 5 0

Teneur en mg/kg

Cuivre

50 40 30 20 10 0

Plomb

Tmoin

N1 N2 Sol + boue

Tmoin

N1 N2 Sol + boue

2,5

Teneur en mg/kg

2,0 1,5 1,0 0,5 0,0

Teneur en mg/kg

Cadmium

160 120 80 40 0

Zinc

Tmoin

N1 N2 Sol + boue

Tmoin

N1 N2 Sol + boue

Fraction disponible

Fraction potentiellement disponible

Fraction rsiduelle

Figure IV.7 Teneurs en ETM dans les fractions rsiduelle, potentiellement disponible, disponible du sol des modalits Tmoin et Boue.

Disponibilit en %

80 60 40 20 0

Cuivre

Disponibilit en %

80 60 40 20 0

Plomb

Tmoin

N1 N2 Sol + boue Disponibilit en %

80 60 40 20 0

Tmoin

N1 N2 Sol + boue

Disponibilit en %

80 60 40 20 0

Cadmium

Zinc

*
N1 N2 Sol + boue

*
N1 N2 Sol + boue

Tmoin

Tmoin

Figure IV.8 Reprsentation en % de la fraction potentiellement disponible

58

Tableau IV.2 Distribution en % des ETM dans les fractions rsiduelles et potentiellement disponibles de la boue Cuivre
Fraction rsiduelle Fraction pot disponible 13,30 86,70

Plomb
29,49 70,51

Cadmium
9,30 90,36

Zinc
44,42 55,58

2.2 Distribution chimique des ETM dans les turricules et parois de galeries Comme pour les teneurs totales, la disponibilit des ETM dans les biostructures est plus fonction de llment que de lespce lombricienne et que de lorigine de llment (figures IV.9 et IV.10).

Concernant, la disponibilit du cuivre, aucune diffrence significative nest observe entre les biostructures et le sol, et ceci quelle que soit la modalit (Tmoin ou Boue) et lespce lombricienne. La disponibilit du cuivre des parois de galeries est toujours similaire celle du sol environnant. Il n y aurait pas de modification de spciation du cuivre dans les turricules et parois de galeries (dans les limites du test dextraction choisi).

La disponibilit du plomb augmente dans les biostructures des 2 espces lombricienne quelle que soit la modalit. Que le plomb provienne du fond gochimique ou des boues, sa disponibilit augmente de manire similaire dans les turricules et parois de galeries. Cette augmentation semble tre plus importante dans les biostructures de la modalit Tmoin (augmentation toujours > 2), que pour la modalit Boue (augmentation comprise entre 1,4 et 2). Quelle que soit lorigine du plomb, une certaine fraction relativement constante de cet lment se retrouve sous forme potentiellement disponible dans les galeries. Ce phnomne peut trouver son explication dans la physiologie des vers. L.terrestris et N.giardi possdent des glandes calcifres par lesquelles ils excrtent du carbonate de calcium (Lee, 1985). Ce processus dexcrtion aurait pour but de limiter la baisse de pH dans les parois de galeries : baisse de pH dues aux activits microbiennes qui rejettent du H+ dans le milieu (Parkin et Berry, 1999). Le plomb se retrouvant fix sur ces carbonates se trouve englob dans la fraction potentiellement disponible. Lexcrtion de carbonate de calcium constant dune modalit lautre pourrait expliquer que la disponibilit du plomb dans les biostructures soit relativement constante : 70 80% dans les 2 modalits.

59

Quelle que soit la modalit (Tmoin et Boue), la disponibilit du cadmium augmente dans les turricules et parois de galeries des deux espces lombriciennes. Dans le cas de la modalit Tmoin, les changements de disponibilit observs dans ces compartiments ne sont pas toujours significatifs. Cette non significativit sexplique par le fait que les teneurs en cadmium dans ces compartiments se situent en limite du seuil de dtection de labsorption atomique. Ce qui implique une moins grande prcision dans les mesures. Les concentrations en cadmium tant plus importantes pour la modalit boue, les mesures sont alors plus prcises. 80 % du cadmium est sous forme disponible dans les turricules et parois de galeries de L.terrestris, 60 70% dans les turricules et parois de galeries de N.giardi et 20 40% respectivement pour le sol Tmoin et le sol+ boue.

La disponibilit du zinc dans les biostructures varie selon son origine et/ou sa concentration dans le sol. Dans la modalit Tmoin, la disponibilit du zinc dans les biostructures est similaire celle du sol environnant ; par contre sa disponibilit augmente dans les biostructures lors de lapport de boue. Cette augmentation se limite aux turricules et parois de galeries du niveau 1. La disponibilit du zinc dans les parois de galeries du niveau 2, niveau sans boue, est similaire celle du sol. Ce qui suggre effectivement que lorigine et/ou la teneur en zinc dans le sol influe sur le changement de disponibilit de cet lment dans les biostructures. Lutilisation de marqueur isotopique et de sol naturellement riche en zinc permettraient de faire la diffrence entre laugmentation des teneurs et lorigine de llment dans les processus de redistribution chimique intervenant dans les parois de galeries de la modalit Boue.

60

Modalit Tmoin Cuivre

Modalit Boue Cuivre

Lt Ng

Teneur en mg/kg

Teneur en mg/kg

30 20

30 20 10 0

Se1

Lt Ng
10 0

Se2

Sol

Pg2

Pg1

Sol
60

Pg2

Pg1

60

Teneur en mg/kg

50 40 30 20 10 0

Teneur en mg/kg

Plomb
Lt

50 40 30 20 10 0

Se1 Se2

Plomb
Lt

Ng

Ng

Sol

Pg2

Pg1

Sol

Pg2

Pg1

2,5

Teneur en mg/kg

Teneur en mg/kg

2,0 1,5 1,0 0,5 0,0

Cadmium

2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0

Se1 Se2

Cadmium
Lt

Lt Ng

Ng

Sol

Pg2

Pg1

Sol

Pg2

Pg1

160

Zinc
Teneur en mg/kg
Lt Ng

160 120 80 40 0

Se1 Se2

Zinc

Lt Ng

Teneur en mg/kg

120 80 40 0

Sol

Pg2

Pg1

Sol

Pg2

Pg1

Fraction disponible

Fraction potentiellement disponible

Fraction rsiduelle

Figure IV.9 Teneurs en ETM dans les fractions rsiduelles, potentiellement disponibles et disponibles, pour le sol environnant, les turricules et parois de galeries des modalits Tmoin et Boue.

61

Modalit Tmoin
100

Modalit Boue
100

Disponibilit en %

80 60 40 20 0

Disponibilit en %

Cuivre

80 60 40 20 0

Cuivre

Sol
100

Pg2

Pg1

T
100

Sol

Pg2

Pg1

Disponibilit en %

Disponibilit en %

80 60 40 20 0

Plomb

**

**

80 60 40 20 0

Plomb

* *

* *

Sol

Pg2

Pg1

Sol

Pg2

Pg1

140

Disponibilit en %

Disponibilit en %

120 100 80 60 40 20 0

Cadmium

140

* * **

120 100 80 60 40 20 0

Cadmium

* *
Sol Pg2

* *
Pg1

* *

*
Sol Pg2 Pg1 T

100

Disponibilit en %

Disponibilit en %

80 60 40 20 0

Zinc

100 80 60 40 20 0

Zinc

* * *

Sol

Pg2

Pg1

Sol

Pg2

Pg1

Sol environnant niveau 1 Sol environnant modalit Tmoin Sol environnant niveau 2

L.terrestris N.giardi

Figure IV.10 Reprsentation de la fraction potentiellement disponible en % dans le sol environnant, les turricules et parois de galeries des modalits Tmoin et Boue.

62

2.3 Discussion De prcdentes tudes (Hartenstein et al, 1980 ; Abdul Rida, 1996) ont montr que le rle des lombriciens dans la mise disposition des ETM dans un sol pollu est trs modeste. Cependant, pour ces 2 cas cits, la dure de lexprimentation, et la prsence de plante sont autant de paramtres qui peuvent modifier la perception de la remise disposition des ETM. Plus rcemment, Delviegher et Verstraete (1997) ont mis en vidence une augmentation de disponibilit du fer, du manganse et du cuivre en prsence de L.terrestris. Les rsultats obtenus dans le cadre de notre exprimentation montrent que des changements de disponibilit des ETM peuvent tre observs dans turricules et parois de galeries par rapport au sol dorigine ; dans ce cas, il y a redistribution dans ces microsites. Ce changement de disponibilit suggre un changement de spciation des lments traces dans ces structures. Les microsites, issus des activits lombriciennes, possdent des proprits physiques, chimiques et biologiques diffrentes de celle du sol (Brown, 1998). Ainsi, les turricules sont plus riches en argile (Sharpley et Syers, 1976, Shipitalo et Protz, 1988, Chapuis-Lardy et al, 1998), en matire organique et en nutriments disponibles pour les plantes (Rafidison, 1982 ; Lee, 1985 ; Binet, 1993 ; Jgou, 1998). Lactivit des micro-organismes y est plus importante (Brown, 1998). Les parois de galeries ont elles aussi des proprits diffrentes du sol. Les vers tapissent leur parois de djections et mucus lors de leur passage successif (Sims et Gerard, 1985 ; Jgou, 1998). Ces apports, de mme quune aration plus importante, favorisent le dveloppement de la microflore pouvant entraner un flush bactrien (Binet, 1993). Tous ces processus chimiques, physiques et biologiques peuvent influer la spciation (McBride, 1989 ; Kabata-Pendias et Pendias, 1992 ; Bourrelier et Berthelin, 1998) et donc la disponibilit des lments traces mtalliques dans les microsites. La redistribution dun lment au sein des diffrents constituants du sol va dpendre de la chimie de llment luimme et de ses affinits pour les diffrents constituants du sol. Le cuivre et le plomb ont une forte affinit pour la MO (Xian, 1989 ; Saha et al, 1991 ; Martin et Bulock, 1994 ; Juste et al, 1995 ; Alva et al, 2000). Cependant, le comportement de ces deux lments dans les biostructures est diffrent : la disponibilit du plomb augmente tandis que la disponibilit du cuivre ne varie pas. Il est donc probable que ces deux lments ne soient pas lis aux mmes constituants ou au mme type de MO. Le plomb a par exemple une plus forte affinit pour les carbonates que le cuivre et pourrait tre li ces constituants.

63

Par opposition au cuivre et au plomb, le cadmium a une faible affinit pour la MO (Camobreco et al, 1996 ; Richards et al, 1998 ; Vulkan et al, 2002). Ainsi quelle que soit son origine, gogne ou exogne, la disponibilit du cadmium augmente dans les biostructures (80 90 % du cadmium total se trouve sous forme potentiellement disponible dans les turricules et parois de galeries). La mobilit du cadmium dpendrait largement des modifications de pH (Halen, 1993 ; Alloway, 1995 ; Baize, 1997). Le pH des biostructures est gnralement diffrent de celui du sol. Il peut tre plus lev (Kang et al, 1994 ; Parkin et Berry, 1999) ou plus bas (Bhandari et al, 1967 ; De Vleeschauwer et Lal, 1981 ; Henrot et Brussard, 1997) que le pH du sol. Cependant, certaines espces lombriciennes, dont L.terrestris et N.giardi, excrtent du carbonate de calcium par leur glandes calcifres (Darwin, 1883, Lee, 1985) augmentant ainsi le pH dans les galeries (Stehouwer et al, 1993 ; Parkin et Berry, 1999). Cette augmentation de pH dans ces structures pourrait limiter le changement de disponibilit des lments traces mtalliques dans les galeries. Il conviendrait de mesurer le pH de nos chantillons, pour pouvoir conclure quant cette hypothse.

Le changement de disponibilit du zinc dans les biostructures dpend essentiellement de son origine. La disponibilit du zinc dans les biostructures des modalits Tmoin nest pas modifie tandis quelle augmente avec lajout de boue : la disponibilit du zinc gogne ne serait pas modifie par laction des lombriciens. En revanche, la disponibilit du zinc dorigine exogne est modifie dans les biostructures (Cf figures III.9 et III.10). Selon Baize (1997), les ETM exognes sont apports sous des formes chimiques assez ractives et entranent de ce fait des risques environnementaux suprieurs aux ETM dorigine gogne. Dans les sol amends par des boues de station dpuration, le zinc se distribue majoritairement entre les fractions rsiduelle et oxydables (c'est--dire, le zinc li, complex par des composs organiques des sols) (Canet et al, 1997 ; Luo et Christie, 1998 ; Illera et al, 2000). Le fait que le zinc soit fix sur des composants organiques prfrentiellement ingrs par le ver, peut donc aboutir une redistribution du zinc dans ces structures.

Les activits lombriciennes modifient directement (rorganisation des liaisons organominrales dans les turricules) ou indirectement (activit des micro-organismes) la disponibilit des ETM dans les turricules et parois de galeries. Les lombriciens ne modifient pas uniquement la disponibilit des ETM dorigine exogne mais galement les ETM du fond gochimique. Afin de mieux comprendre ce changement de spciation, un fractionnement granulo64

densimtrique a t ralis sur les chantillons de la modalit Boue.

3. DISTRIBUTION PHYSIQUE DES ETM DANS LE SOL ET LES MICROSITES DORIGINE LOMBRICIENNE 3.1 La granulomtrie 3.1.1 La granulomtrie des sols La figure IV.11 prsente la granulomtrie du sol de la Bouzule avant et aprs apport de boue. Lapport de boue modifie peu ou pas la granulomtrie du sol. La proportion des fractions fines tend diminuer tandis que les fractions grossires augmentent significativement. La granulomtrie de la boue est essentiellement argilo-limoneuse (figure IV.12). Elle contient galement une faible proportion dlment figur qui ne peut expliquer en totalit laugmentation des fractions grossires dans le sol amend. Suite lapport de boue des agrgats ont pu se former, non dtruits lors de lagitation rotative, ils peuvent contribuer laugmentation des fractions grossires. Cependant, il faut rappeler que le rapport boue/ sol est de 0,016 : la faible quantit de boue apporte ne permet peut tre pas dobserver un changement significatif de distribution des particules avant et aprs pandage.

3.1.2 La granulomtrie des biocompartiments Le pourcentage de fractions fines et grossires diminue significativement dans les turricules des deux espces lombriciennes par rapport au sol environnant, tandis que le pourcentage de matires organiques particulaires (MOP) augmente (figures IV.13 et 14). Dans les parois de galeries, seul le pourcentage de fractions grossires diminue significativement. Ces rsultats sont en contradiction avec la bibliographie. De nombreux auteurs ont montr que le pourcentage dargile des turricules et parois de galeries est gnralement suprieur celui du sol (Lee, 1985 ; Steehouwer, 1993 ; Kang et al, 1994). La granulomtrie des turricules reflte le comportement slectif du ver vis vis du sol quil ingre. Il en rsulte gnralement une augmentation des argiles et des limons et une diminution des sable dans les turricules (Lee, 1985 ; Kang et al, 1994 ; Chapuis-Lardy et al, 1998).

65

45 40 35
0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 200-2000 100-200 50-100

MOP

Modalit Tmoin

Rpartition en %

30 25 20 15 10 5 0

Modalit Boue

MOP modalit Tmoin MOP modalit Boue

200-2000

100-200

50-100

20-50

2-20

0-2

Fractions m

Figure IV.11 Granulomtrie du sol de la modalit Tmoin et Boue

60 50

Rpartition en %

40 30 20 10 0 200-2000 100-200 50-100 20-50 2-20 0-2

MOP

Fractions m

Figure IV.12 Granulomtrie de la Boue

66

45 40
8 6 4 2 0 200-2000

*
MOP

Rpartition en %

35 30 25 20 15 10 5 0

* *
50-100

*
100-200

**
200-2000 100-200 50-100 20-50 2-20 0-2

Fractions m
Sol environnant MOP Sol environnant Parois de galeries MOP Parois de galeries Turricule MOP Turricule

Figure IV.13 Granulomtrie des turricules et parois de galeries de L. terrestris

45 40
8 6 4 2 0 200-2000 100-200 50-100

Rpartition en %

35 30 25 20 15 10 5 0

MOP

* *

**
200-2000 100-200 50-100 20-50 2-20 0-2

Fractions m
Sol Bouzule + Boue MOP Sol Bouzule Parois de galeries MOP Parois de galeries Turricule MOP Turricule

Figure IV.14 Granulomtrie des turricules et parois de galeries de N. giardi

67

La prsence de litire en surface a probablement oriente le comportement alimentaire du ver. Celle-ci constitue une ressource trophique apptante, car riche en azote (Abbot et Parker, 1981 ; Cortez et Hameed, 1988) et facilement disponible. Elle a probablement t prfre la matire organique du sol moins facilement assimilable. Lors dune tude en microcosme avec de la litire marqu au C-13, Jgou (1998) a montr que les vers navaient pas slectionn le C-organique du sol mais la litire, les turricules tant enrichis en C-13. La granulomtrie des turricules et des parois des galeries reflte cette prfrence alimentaire. Le pourcentage daugmentation des MOP dans les turricules et parois de galeries de L.terrestris est plus important que pour N.giardi. Ces diffrences entre les deux espces sexpliquent par leur comportement fouisseur diffrent. L.terrestris est une espce ancique, tendance pige quand la litire est prsente en grande quantit (Bouch, 1972): il va donc consommer essentiellement les dbris vgtaux rests en surface. N.giardi est une espce ancique tendance gophage qui se nourrit de dbris de litire en surface mais aussi de la MOS. La consommation de la litire et lobservation du rseau de galeries traduisent galement les diffrences de comportement fouisseur des deux espces. Ainsi, L.terrestris a creus peu de galeries et consomm 100% de la litire chaque semaine tandis que N.giardi a creus un important rseau et na consomm en moyenne que 60% de la litire apporte. La granulomtrie des turricules et des parois de galeries est conditionne par le comportement fouisseur du ver.

68

3.2 Bilan en % du C, N et ETM dans les fractions granulo-densimetriques Avant toutes analyses de rsultats concernant les teneurs en C, N et ETM dans les diffrentes fractions granulo-densimtriques, nous devons nous assurer quaucun problme de perte ou de contamination quelconque nest intervenu durant le fractionnement. La somme des teneurs en lments dans les diffrentes fractions granulo-densimtriques dun chantillon doit correspondre la teneur de llment dans lchantillon global.

Les bilans sont calculs par la formule suivante:

[Concentration de llment X dans la fraction Z]* [% par rapport au sol total de la fraction Z] [Concentration totale de llment X]

Les bilans sont donns en annexe (Annexe 2). Ces bilans sont globalement bons, et bouclent 100% avec une marge derreur de +/- 10%. Dans certains cas des pertes dlments allant jusqu' 25% sont observes. Ces pertes sont ponctuelles et ne concernent pas le mme lment dans tous les cas. En revanche, un problme de contamination en plomb a t dtect. Les rsultats concernant le plomb devront donc tre considrs avec prcaution.

3.3 Distribution du carbone et de lazote dans le sol et les microsites 3.3.1 Distribution du carbone et de lazote dans les fractions granulo-densimtriques des sols Dans les 2 modalits, les concentrations les plus importantes en carbone et azote sont observes dans les MOP et les fractions fines (0-2 et 2-20m) (figure IV.15). Cest dailleurs dans ces fractions que lenrichissement en C, aprs apport de boue est le plus significatif. Cependant, pour lazote, les concentrations diminuent dans les MOP.

Sur cette mme figure (figure IV.15) est reprsente la distribution en %, par rapport au sol total, du carbone et de lazote dans les fractions granulo-densimtriques des sols aprs pondration par la granulomtrie. La fraction 0-2m contient jusqu' 50% du carbone et 60% de lazote total. Cette fraction constitue la principale fraction de stockage du carbone et de lazote. Bien que les concentrations en azote et carbone soient importantes dans les MOP, leur importance en terme de stockage reste modeste : 10 15% du carbone et de lazote total du 69

sol. Lapport de boue modifie trs peu la distribution du carbone et de lazote : cela entrane une distribution plus faible dans les MOP, sauf dans la fraction 100-200m. Cependant comme nous lavons dit prcdemment pour la granulomtrie, la quantit de boues apporte nest pas suffisante pour observer un changement dans la distribution du carbone et de lazote (2% de la masse du sol)
Concentration (g/kg)
100 80 60 40 20 0 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2 400 10 Concentration MOP 8 6 4 2 0 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2 25 Concentration MOP

Carbone
300

* MOP

Azote

20 15

MOP

200

*
Fractions denses
100 0

*
Fractions denses

10 5 0

Fractions (m) Modalit Tmoin Modalit Boue

Fractions (m)

Distribution (%)
70 60 50 40 30 20 10 0 200-2000 100-200 50-100 20-50 2-20 0-2 6 4 2 0 70

MOP

Carbone

5 4 3 2 1 0

60 50 40 30 20

MOP

Azote

MOP

10 0

MOP
200-2000 100-200 50-100 20-50 2-20 0-2

Fractions (m) Modalit Tmoin Modalit Boue

Fractions (m)

Figure IV.15 Concentration et distribution du carbone et de lazote dans les fractions granulo-densimtriques du sol des modalits Tmoin et Boue (N1)

3.3.2 Distribution du carbone et de lazote dans les fractions granulo-densimtriques des microsites Les concentrations en C augmentent dans toutes les fractions granulo-densimtriques des turricules et parois de galeries des deux espces lombriciennes (figure IV.16). Les plus fortes augmentations en carbone sont observes pour les MOP et les fractions fines (20-50 et 0-2 m). Les concentrations en azote augmentent dans les fractions denses et diminuent dans les

70

fractions lgres (MOP) (figure IV.16). Laugmentation des teneurs en carbone dans les MOP est associe une diminution des teneurs en azote par rapport au sol environnant. Le C/N augmente donc dans les biostructures. Laugmentation du C/N observe pour la fraction 20-50 est due lapport de litire dont la fraction 20-50 est riche en C et N (Annexe 3)

Tableau IV.3 Evolution du C/N dans les fractions pour chaque compartiment tudi
Fractions (m) 200-2000 100-200 50-100 20-50 2-20 0-2 200-2000 MOP 100-200 MOP 50-100 MOP Sol
24,71 18,82 12,74 14,59 10,41 8,23 23,11 14,20 12,47

Lumbricus terrestris Parois de galeries Turricules

71,05 33,43 26,61 39,73 13,49 8,87 73,66 26,12 21,16 60,03 20,18 16,49 48,65 17,85 9,19 66,62 32,96 30,25

Nicodrilus giardi Parois de galeries Turricules

25,98 17,04 9,23 19,16 9,37 7,28 41,42 16,97 12,59 51,66 18,24 13,03 30,15 12,59 8,52 67,59 25,85 18,81

La distribution du carbone et de lazote est modifie dans les turricules et parois de galeries par rapport au sol (figure IV16). Ainsi, la contribution des MOP dans le stockage du carbone et de lazote augmente de 300% 500% dans les turricules et de 150 300 % dans les parois des galeries, ces MOP devenant les principales fractions de stockage du carbone, au dtriment des fractions fines. Dans le sol, 10% du carbone est localis dans les MOP, pour respectivement 60% et 40% dans les turricules de L.terrestris et N.giardi. Pour le sol, 80% du carbone total est localis dans les fractions fines (0-2 et 2-20m), pour seulement 30 62% dans les microsites. La fraction 20-50 m voit galement sa contribution augmenter dans le stockage du carbone.

71

Concentration (g/kg)
100 90 500 6 20

C concentration g/kg

80 70 60 50 40 30 20 10

MOP concentration g/kg

N concentration g/kg

MOP

400 350 300

5 4 3 2 1

MOP

16 14 12

* * * * *

* * * *

* * * * * *
0-2

* *

250 200 150 100 50 0

10 8 6 4 2 0

0 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20

0-2

0 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20

Fractions (m) Sol environnant Turricule L.terrestris Galerie L.terrestris

Fractions (m) Turricule N.giardi Galerie N.giardi

Distribution (%)
70 60 50 40 30 20 10 0 200-2000 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2 70

Carbone
MOP

60 50 40 30 20

Azote

MOP
10 0 200-2000 100-200 50-100 20-50 2-20 0-2

Fractions (m)

Fractions (m)

Sol environnant Turricules L.terrestris Parois de galeries L.terrestris Turricules N.giardi Parois de galeries N.giardi

MOP sol environnant MOP Turricules L.terrestris MOP Parois galeries L.terrestris MOP Turricules N.giardi MOP Parois de galeries N.giardi

Figure IV.16 Concentration et distribution du carbone et de lazote dans les fractions granulo-densimtriques du sol environnant, des parois des galeries et des turricules de L.terrestris et N.giardi

72

MOP concentration g/kg

Carbone

450

Azote

18

Cette redistribution du carbone dans les MOP est galement observe pour lazote. Cependant, pour lazote, les fractions fines (0-2m et 2-20m) restent les principales fractions de stockage.

3.3.3 Discussion En terme de concentration, les teneurs en carbone et azote augmentent dans les MOP et les fractions fines. Laugmentation des teneurs en carbone des MOP est due lingestion de litire. Cette litire, non totalement dcompose lors du passage dans le tube digestif de ver (Cortez et Hameed, 1988), vient enrichir en carbone les MOP des turricules et des parois de galeries. Les teneurs en azote diminuent dans les MOP des biostructures par rapport au sol. Selon Lee (1985), les lombriciens sont de grands consommateurs dazote. La production de protine et de mucus ncessite une grande quantit dazote do une consommation dazote importante afin de compenser ces pertes . Les lombriciens exploitent lazote apport par la litire do une diminution des teneurs en azote dans les MOP des turricules et parois de galeries par rapport au sol environnant.

Laugmentation des teneurs en carbone des fractions fines est lie aux diffrents processus (comminution6, minralisation) se droulant dans les galeries et les turricules. Ces microsites sont le lieu dune intense activit microbienne (Parle, 1963 ; Svensson et al, 1986 ; Parkin et Berry, 1994, 1999 ; Tiunov et Scheu, 1999) dans lesquels la dgradation de la MO est importante (Scheu, 1987). La MO se distribue selon son degr de transformation (Andreux et al, 1980 ; Balesdent et al, 1988). Le C/N traduit la transformation de la MO : le C/N des fractions fines est plus faible que celui des fractions grossires (tableau III.3) ce qui traduit une volution de la MO (plus le C/N est bas, plus la MO est transforme). La matire organique peu transforme est principalement localise dans les fractions grossires, tandis que les fractions fines contiennent un mlange de matire organique frache et de matire organique transforme (Balesdent et al, 1988). Ainsi, les dbris de litire peu dcomposs viennent enrichir les MOP des turricules et parois de galeries tandis que la MO transforme va se distribuer dans les fractions fines. Laugmentation de concentration observe pour la fraction 20-50 reflte la distribution granulomtrique de la ressource trophique. Cette

Processus due aux multiples contractions musculaires qui vont conduire au broyage fin de diffrentes

substances.

73

observation traduit la faible capacit dassimilation de la MO par les vers (Cortez et Hameed, 1988). Lexpression des rsultats en terme de distribution permet didentifier les compartiments de stockage du carbone et de lazote. La pondration de la concentration par la quantit de fraction permet de dfinir la quantit dlment dans cette fraction. Cette valeur rapporte toutes les fractions permet ainsi de voir quelle fraction renferme la plus grande quantit dlment, et ainsi didentifier la ou les fractions de stockage. Limportance des MOP dans le stockage du carbone et de lazote dans les microsites dorigine lombricienne est mise en vidence : la distribution du carbone et de lazote dans les turricules et parois de galeries est diffrente de celle du sol ; la contribution des fractions fines dans le stockage de ces deux lments diminuant au profit des MOP. Cette redistribution du carbone et de lazote dans les turricules et parois de galeries par rapport au sol est, comme pour la granulomtrie, lie aux prfrences alimentaires des lombriciens. Cette redistribution confirme galement la diffrence de comportement fouisseur des 2 espces. Laugmentation de la contribution des MOP est plus importante pour L.terrestris que pour N.giardi, traduisant ainsi un rgime alimentaire presque exclusivement bas sur la litire pour L.terrestris.

3.4 Distribution des lments traces mtalliques dans le sol et les biocompartiments 3.4.1 Distribution des ETM dans les sols La figure IV.17 prsente les concentrations et la distribution des lments traces mtalliques dans les fractions granulo-densimtriques du sol des modalits Tmoin et Boue. Les concentrations les plus importantes en lments traces mtalliques sont observes pour les fractions grossires (dense et MOP) et pour les fractions fines 0-2m. Aprs apport de boues, les teneurs en lments traces mtalliques augmentent dans chaque fraction. Cependant, les fractions les plus enrichies ne sont pas les mmes selon llment trace considr. Ainsi, aprs apport de boue : les fractions les plus enrichies en Cu sont les MOP, les fractions les plus enrichies en Cd sont les fractions grossires (dense et MOP) Le Pb et Zn se rpartissent de faon homogne dans les diffrentes fractions.

74

Concentration (mg/kg)
250 200 150 100 50 0 200-200 100-200 50 -100 250 200 150 100 50 0 200-200 100-200 50 -100 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0 200-200 100-200 50 -100 400 300 200 100 0 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2 60

Distribution (%)
3 2 1 0

* *

Cuivre

50 40 30

MOP

Cuivre

* *
20 -50

20 10

*
2-20 0-2

*
2-20 0-2

200-2000 100-200 50-100 20-50

60

3 2 1 0

* *

Plomb

50 40

MOP

Plomb

* * *
2-20 0-2

30 20 10

20 -50

2-20

0-2

0 200-2000 100-200 50-100 20-50 60

* * * *

* *

Cadmium

50
2

MOP

Cadmium

40

* * *

30
0

20 10

*
2-20 0-2

0 200-2000 100-200 50-100 20-50 60

* * * *

* *

Zinc

3 2 1 0

50 40 30

MOP

Zinc

*
20 -50

*
2-20 0-2

20 10 0 200-2000 100-200 50-100 20-50 2-20 0-2

Fractions (m) Modalit Tmoin Modalit Boue

Fractions m Modalit Tmoin Modalit Boue

Figure IV.17 Concentration et Distribution des ETM au sein des fractions granulo-densimtriques du sol des modalits Tmoin et Boue.

En terme de distribution (figure IV.17), les fractions fines (0-2, 2-20 m) constituent, comme 75

pour le carbone et lazote, le principal compartiment de stockage des ETM : 50 60% des lments traces mtalliques sont localiss dans ces fractions fines. La fraction 200-2000m dense a une importance non ngligeable puisquelle contient 10 20% des ETM totaux. Limportance des MOP dans le stockage des ETM dans les sols est modeste et varie selon llment considr et est fonction de son affinit pour la MO. Le cuivre et le cadmium sont les lments les plus prsents dans les MOP. Laffinit du cuivre pour la MO (Saha et al, 1991, Alva et al, 2000) peut expliquer sa prsence dans les fractions lgres. En revanche, pour le cadmium dont laffinit pour la MO est faible, nous ne pouvons conclure quant laugmentation de sa prsence dans les fractions lgres. Lapport de boue modifie la distribution des ETM. Il entrane une diminution des ETM dans la fraction 200-2000m et une augmentation dans les fractions fines (2-20m) et dans les fractions 100-200 et 50-100m des MOP. Cette distribution correspond celle des boues. Dans la boue, les lments traces mtalliques se distribuent entre les fractions fines et les MOP (Annexe 4).

3.4.2 Distribution des ETM dans les biostructures La figure IV.18 reprsente les concentrations en lments traces mtalliques dans les diffrentes fractions granulo-densimtriques du sol, des turricules et parois de galeries des 2 espces lombriciennes. Les concentrations se rpartissent de la mme faon que pour le sol : les concentrations les plus importantes sont observes pour les fractions grossires (denses et lgres) et les fractions fines (0-2 m). Quel que soit le mtal, les teneurs en ETM diminuent dans la fraction 200-2000 m dense des biostructures. Dans les autres fractions granulomtriques denses, les teneurs en lments traces mtalliques du sol et des biostructures ne sont pas significativement diffrentes, quelques exceptions prs. Les diffrences les plus pertinentes sont observes au niveau des MOP. Ainsi, les concentrations en ETM diminuent dans la fraction 200-2000 m lgre quel que soit le mtal et lespce lombricienne. Les concentrations en lments traces mtalliques dans les autres fractions des MOP (100-200 et 50-100 m) varient selon lespce lombricienne et le mtal : (1) Dans la fraction 50-100m, les teneurs en cuivre et plomb des turricules et parois de galeries sont infrieures celle du sol, tandis que les teneurs en cadmium et zinc sont suprieures celle du sol. (2) Les concentrations en lments traces mtalliques dans les MOP de L.terrestris sont toujours infrieures celle du sol. (3) Pour N.giardi, les concentrations en plomb, zinc et cadmium sont suprieures celle du sol dans la fraction 100-200m. 76

90

Fractions denses Cuivre

250

MOP Cuivre

concentration mg/kg

80 70 60 50 40 30 20 10 0

200 150 100 50 0

200-2000
200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2
250

100-200

50-100

200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0

concentration mg/kg

Plomb
200 150 100 50 0

Plomb

200-200 100-200 50 -100

1,6 1,4

20 -50

2-20

0-2

200-2000

100-200

50-100

3,5

Cadmium

concentration mg/kg

3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0

Cadmium

1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2

200-2000

100-200

50-100

450

concentration mg/kg

450

400 350 300 250 200 150 100 50 0

Zinc

400 350 300 250 200 150 100 50 0

Zinc

200-200 100-200 50 -100

20 -50

2-20

0-2

200-2000

100-200

50-100

Sol environnant

Turricules L.terrestris Parois galeries L.terrestris

Turricules N.giardi Parois de galeries N.giardi

Figure IV.18 Concentration en ETM dans les fractions granulo-densimtriques du sol environnant, des parois de galeries et des turricules de L.terrestris et N.giardi.

77

Fractions denses
50
8

MOP
7

Cuivre
Rpartition (%) Rpartition (%)
40 30 20

Cuivre

6 5 4 3 2 1 0 200-2000 100-200 50-100

MOP
10 0
200-2000 100-200 50-100 20-50 2- 20 0-2

60

Rpartition (%)

Rpartition (%)

50 40 30 20 10 0

Plomb

8 7 6 5 4 3 2 1 0

Plomb

MOP MOP

200-2000 100-200 50-100 20-50

2- 20

0-2

200-2000

100-200

50-100

50

Rpartition (%)

40 30 20

Rpartition (%)

Cadmium

7 6 5 4 3 2 1 0

Cadmium

MOP
10 0
200-2000 100-200 50-100 20-50 2- 20 0-2

200-2000

100-200

50-100

60 50

Zinc
Rpartition (%)

7 6 5 4 3 2 1 2- 20 0-2 0

Zinc

Rpartition (%)

40 30 20 10 0

MOP

200-2000 100-200 50-100 20-50

200-2000

100-200

50-100

Fractions m Sol environnant Parois de galeries L.terrestris Parois de galeries N.giardi

Fractions m Turricules L.terrestris Turricules N.giardi

Figure IV.19 Distribution des ETM dans les fractions granulo-densimtriques du sol environnant, des parois et des turricules de galeries de L. terrestris et N. giardi 78

Comme pour le sol, les ETM sont principalement stocks dans les fractions fines (60%) et dans les fractions grossires (10%). Cependant par rapport au sol, les ETM ont tendance diminuer dans ces fractions (figure IV.19). Inversement, la contribution des MOP dans le stockage des ETM augmente dans les biostructures par rapport au sol. Cette augmentation est due limportance des MOP dans la granulomtrie des turricules. Ainsi, dans les biostructures de L.terrestris et plus particulirement dans les turricules, la redistribution des ETM vers les MOP est la plus importante en liaison avec la quantit de MOP qui est plus importante dans ces microsites de L.terrestris.

3.4.3 Discussion Bien que les teneurs totales en ETM naugmentent pas dans les turricules et les parois de galeries, les ETM sont redistribus au sein mme de ces compartiments. Les teneurs en lments traces mtalliques diminuent dans la fraction 200-2000 m globale (dense et lgre) des turricules et parois de galeries par rapport au sol environnant, tandis quelles tendent augmenter dans les fractions fines (0-2 m). La diminution des concentrations en ETM dans la fraction 200-2000 m des MOP peut sexpliquer l aussi par les prfrences alimentaires du ver. Les MOP des turricules sont essentiellement constitues de dbris vgtaux issus de cette litire non contamine entranant ainsi une dilution des concentrations en ETM dans ces MOP. Cependant, aprs pondration des concentrations par la granulomtrie, les MOP se rvlent tre un des principaux compartiments de stockage des ETM dans les biostructures. En effet, les MOP, bien que peu charges en ETM, reprsentent jusqu' 50% de la granulomtrie des turricules, donc par rapport au sol, leur reprsentativit augmente considrablement Ainsi, dans les turricules, la quantit dETM stocke dans les MOP augmente de 4 9% par rapport au sol pour L.terrestris et de 2 4 % pour N.giardi. De plus, les MOP contiennent des groupes ractifs capables de complexer les mtaux (Harter et Naidu, 1995 ; Mackey et al, 1996). La rorganisation des liaisons physico-chimiques et organo-minrales (Shipithalo et Protz, 1989) se droulant dans les microsites peut conduire une redistribution des ETM dans ces microsites.

79

3.5. Relation entre la distribution du carbone, de lazote et des ETM dans les sols et les biostructures Les teneurs totales ainsi que la redistribution des ETM dans les biostructures dpend directement du comportement alimentaire des vers. Le ver slectionne gnralement les particules les plus fines (Barois et al, 1999) ainsi que les fragments organiques (Martin, 1991, Lee, 1985). Dans le cadre de notre exprience, les choix alimentaires des lombriciens se sont orients vers la litire dpose en surface, plutt que la MO du sol ou des boues. Il rsulte de ce comportement alimentaire une granulomtrie particulire des turricules : diminution de la teneur en argile et augmentation des MOP. Les parois de galeries tant tapisses de djections, de mucus et de matriel illuvial (Jeanson, 1964, Stehouwer et al, 1993), leur granulomtrie est intermdiaire celle du sol et des turricules. De ce choix alimentaire va dpendre les teneurs totales en carbone, azote et ETM ainsi que leur distribution physique au sein de ces microsites : les teneurs en carbone et azote augmentent dans les turricules et parois de galeries par rapport au sol. La litire tant peu charge en ETM, les teneurs totales en ETM sont similaires celles du sol, voire infrieures pour le cadmium notamment. Lenrichissement en carbone et azote des turricules et parois de galeries provient trs

probablement du C et N- litire. Dans une tude ralise en microcosme, Jgou (1998) a galement montr que les lombriciens ne slectionne pas le C organique du sol mais le carbone apport par la litire, do un enrichissement en dbris vgtaux ou MOP des turricules. Les MOP deviennent alors la principale fraction de stockage du carbone dans les turricules (50% du carbone des turricules de L.terrestris est localis dans les MOP). La distribution du C et N va donc tre modifie dans les biostructures. La redistribution des lments traces mtalliques dans les biostructures suit le mme schma que la redistribution du carbone: une diminution dans les fractions fines (0-2m) et dans la fraction 200-2000m dense et une augmentation dans les MOP. Cependant, la redistribution des ETM na pas la mme ampleur que la redistribution du carbone : la fraction < 2m reste dans les turricules et parois de galeries, la principale fraction de stockage des ETM. Limportance de la fraction argileuse (0-2m) dans la rtention des lments traces mtalliques a t mise en vidence par de nombreux travaux (Ducaroir et Lamy, 1995 ; Flores-Velez et al, 1996 ; Besnard et al, 2001). La forte ractivit des constituants minraux et des associations organo-minrales prsents dans cette fraction (Essington et Mattigod, 1990) contribuent son importance dans le stockage des lments traces. La diminution de 80

limportance de cette fraction dans le stockage des ETM dans les turricules et parois de galeries est due principalement la diminution du taux dargile dans ces structures. Il ne faut cependant pas exclure la possibilit dune redistribution lie aux diverses ractions physicochimiques se droulant dans ces microsites. Comme pour le carbone, la distribution des ETM augmente dans les MOP, principalement constitues de dbris de litire. En fait, les MOP sont peu charges en ETM mais leur contribution (masse) dans les biostructures est telle quelles deviennent un compartiment important dans le stockage des ETM.

Dans le cadre de notre exprience, la redistribution du carbone, de lazote et des ETM est plus lie au comportement alimentaire slectif des lombriciens qu une redistribution mettant en cause les ractions physico-chimiques se droulant dans les microsites.

4. COMPLEMENTARITE DES APPROCHES CHIMIQUES ET PHYSIQUES DE LA DISTRIBUTION DES ETM Deux approches complmentaires ont t utilises afin de dterminer la distribution des ETM dans le sol et les biostructures. Lapproche chimique avait pour objectif de dterminer la disponibilit des ETM et lapproche physique avait pour objectif de localiser les ETM dans les diffrentes fractions granulo-densimtriques. La localisation des ETM dans ces diffrentes fractions peut apporter des lments de rponses quant aux changements de disponibilit des ETM dans les biostructures. Dans le tableau IV.4 sont regroups les principaux rsultats obtenus par les extractions chimiques et le fractionnement granulo-densimtrique.

Les principaux rsultats obtenus pour les extractions chimiques sont : ! Une augmentation de la disponibilit du cadmium et du plomb dans les microsites ! Aucun changement de disponibilit du cuivre dans les microsites ! Une augmentation de la disponibilit du zinc dans les microsites de la modalit avec boue. Les changements de disponibilit observs dans les microsites suggrent un changement de spciation des ETM dans ces microsites. Pour le cadmium et le plomb, ce changement de spciation va vers des formes plus labile quelle que soit la modalit. Pour le cuivre, aucune modification de disponibilit nest mise en vidence dans les microsites par rapport au sol environnant. Ce non-changement ne veut pourtant automatiquement dire quil ny a pas eu de 81

modification de spciation de cet lment. Le changement de spciation du cuivre nest peut tre pas visible par le test dextraction choisi. Dans le cas du plomb, du cuivre et du cadmium, le changement de disponibilit observ dans les microsites va dans le mme sens (augmentation ou diminution), quil sagisse de la modalit Tmoin ou Boue. Ce changement de disponibilit est li au choix alimentaire du ver, en loccurrence lingestion de litire. Aux vues de ces rsultats, la redistribution des lments traces mtalliques dans les microsites peut tre qualifi de redistribution trophique . Ceci ne veut pas dire quune redistribution lie aux modifications des paramtres physico-chimiques dans les turricules et parois de galeries nest pas intervenue. Cependant, cette redistribution que nous allons qualifi de physico-chimique na pu tre mise en vidence pour ces trois lments Contrairement au Pb, Cd et Cu, les changements de disponibilit du zinc dans les microsites varient selon la modalit, suggrant ainsi une redistribution diffrente selon la nature du Zn : gogne ou exogne. Sa disponibilit naugmente pas dans les microsites de la modalit Tmoin, alors quelle augmente dans les microsites de la modalit Boue. Le paramtre variant entre les deux modalits est la nature des ETM et donc leurs ractivits. Il semble donc que les diffrentes ractions physico-chimiques se droulant dans les turricules et parois de galeries ne suffisent pas augmenter la disponibilit du zinc issu du fond gochimique. En revanche, la disponibilit du zinc apport par la boue est modifie dans les microsites. Ainsi, la redistribution du zinc dans les microsites dorigine lombricienne nest pas du uniquement un choix alimentaire slectif mais galement des ractions physico-chimiques se droulant dans les microsites.

Le principal rsultat obtenu pour le fractionnement granulo-densimtrique est : ! Une augmentation de la contribution des MOP dans le stockage des ETM.

Les changements de localisation des ETM dans les microsites (augmentation des MOP) suggrent un changement de spciation de ces ETM. Ainsi, le cuivre dont la disponibilit naugmente pas dans les microsites est redistribu dans les MOP. Le changement de spciation du cuivre napparat pas dans lapproche chimique, en revanche il apparat dans le cas du fractionnement granulo-densimtrique .

82

Tableau IV.4 Synthse des rsultats de redistribution des lments traces mtalliques obtenus par les approches chimique et physique.

Concentration
C Se Boue Se Tmoin Cu Pb Cd Zn C

Disponibilit
Cu Pb Cd Zn C

Distribution granulo
Cu Pb Cd Zn

Tmoin Pg Se Boue
MOP MOP MOP MOP MOP

Tmoin T Se Boue
MOP MOP MOP MOP MOP

32

Nos rsultats montrent une augmentation de la contribution des MOP dans le stockage des ETM dans les microsites dorigine lombricienne ainsi quune augmentation de leur disponibilit. Ceci tendrait montrer que les ETM lis aux MOP sont plus faiblement lis que quand ils sont lis au sol. En effet, les MOP constituent les formes les moins stables de la matire organique des sols (Balesdent et al, 1988). Elles sont constitues de dbris organiques possdant de nombreux groupements fonctionnels ractifs relargant ainsi les ETM qui y sont fixs. Laugmentation de la contribution des MOP dans le stockage des ETM qui va dans le sens dune augmentation de la disponibilit de ces lments dans les microsites, tend mettre en vidence des changements de spciation vers des formes plus labiles.

5. CONCLUSION Lobjectif de ce chapitre tait de dterminer la redistribution des ETM entre et au sein du sol et des biostructures. Cette redistribution inter et intra compartiments des ETM a t largement conditionne par la prsence de litire en surface de la colonne de sol. Celle-ci constituant une ressource trophique facilement exploitable et apptante, est prfre la matire organique du sol ou des boues. Cette litire ntant pas contamine, les teneurs totales en ETM dans les turricules sont similaires celles du sol, voire infrieures pour le cadmium. Des teneurs similaires en Cu, Pb et Zn dans les microsites et le sol suggrent que les lombriciens ont ingr de la litire mais aussi des particules de sol contamines. Selon Helmke et al (1979), laugmentation des teneurs en ETM dans les turricules corrle une augmentation des teneurs dans le sol, signifie que ces ETM sont associs aux particules de sol ingres par le ver. Ainsi, la diffrence du Cd, le Cu, le Pb et le Zn sont associs aux particules de sol ingres par le ver. La redistribution intra-compartiment est conditionne par le comportement alimentaire slectif des lombriciens : les particules slectionnes pouvant dterminer la disponibilit des ETM dans les microsites. Ainsi, le choix alimentaire des lombriciens sest focalis sur la litire, ce qui aboutit une augmentation des MOP dans les microsites. Les MOP possdent des groupes fonctionnels sur lesquels peuvent se fixer les ETM. Ces MOP constituant une des fractions les moins stables de la matire organique du sol, elles contribueraient laugmentation de la disponibilit de ETM dans les microsites. La redistribution des ETM dans les microsites peut

81

galement tre due aux modifications des proprits physico-chimiques (pH, CEC, % dargile, ) dans ces structures.

Les hypothses de travail suivantes peuvent tre proposes : ! 1 Si dans les turricules et les parois de galeries, les teneurs en ETM augmentent ou restent similaires au sol, les ETM sont lis aux particules de sol ingres par le ver ! 2 Si les teneurs en ETM diminuent dans les turricules et parois de galeries, cela signifie que les ETM ne sont pas lis aux particules de sol ingres par le ver. ! 3 Si les changements de disponibilit dans les microsites suivent le mme schma pour les deux modalits, la redistribution des ETM est due majoritairement une redistribution alimentaire . ! 4 Si les changements de disponibilit dans les microsites varient dune modalit lautre, la redistribution est aussi due un changement de spciation due aux modifications des proprits physico-chimiques lies aux localisations dans ces microsites.

Voyons alors lment par lment. Les teneurs en cadmium dans les turricules et parois de galeries sont infrieures au sol. Le cadmium nest pas associ aux particules de sol ingres par le ver. Un effet dilution induit par la litire peut galement intervenir et faire en sorte que les teneurs en cadmium dans les turricules sont infrieures celles du sol. La disponibilit du plomb augmente dans les turricules et parois de galeries. Les teneurs totales en plomb dans les turricules tant similaire celle du sol, le plomb est associ aux particules de sol ingres par le ver. Laugmentation de la disponibilit du plomb peut tre due laugmentation de la contribution des MOP issus de la litire. Les teneurs totales en cuivre augmentent dans les turricules et parois, le cuivre est galement associ aux particules de sol ingres par le ver. Cependant, la disponibilit du cuivre est similaire celle du sol. Le changement de spciation du cuivre na pas pu tre mis en vidence par la technique dextraction chimique employe. En revanche, le changement de localisation du cuivre observ grce au fractionnement granulo-densimtrique suggre un changement de spciation de cet lment dans les microsites.

82

 La dynamique du zinc est diffrente des trois autres lments, car sa disponibilit varie selon la modalit. La disponibilit du zinc naugmente pas dans les turricules de la modalit Tmoin tandis quelle augmente dans la modalit Boue. Ces deux modalits recevant le mme apport de litire, les diffrences observes rsultent du sol. Le zinc gogne nest pas remis en circulation par les activits lombriciennes alors que, le zinc issu de la boue serait remis en circulation par ces activits lombriciennes.

Les lombriciens jouent un rle dans la redistribution des lments traces mtalliques dans le sol, cette redistribution pouvant tre de deux types : alimentaire et physico-chimique. La prsence de litire ayant constitu un artfact dans la redistribution alimentaire, la redistribution physico-chimique est alors masque.

83

CHAPITRE V

COMPOSITION CHIMIQUE DES PERCOLATS

84

COMPOSITION CHIMIQUE DES PERCOLATS ___________________________________________________________________________

Lors du chapitre prcdent, une redistribution chimique et physique des lments traces mtalliques via les activits lombriciennes a t mise en vidence. Cette redistribution peut avoir un impact non ngligeable sur la qualit des eaux de percolation. Les galeries lombriciennes constituants des voies prfrentielles dcoulement des eaux, les flux deau et dlments traces mtalliques peuvent tre diffrent en prsence de lombriciens.

1. VOLUME DES EAUX DE PERCOLATION Les volumes moyens de percolats rcuprs chaque semaine sont reprsents sur la figure V.1. La premire semaine aucun percolat nest rcolt. La percolation se droule suivant trois tapes. La premire tape qui peut tre appele phase initiale, couvre les deux premires semaines. Elle montre une grande diffrence de percolation entre les deux modalits, Tmoin et Boue. Au cours de cette phase, les diffrences intra-modalit (ver ou sans ver) sont faibles. 80% de leau apporte est rcolte dans les percolats de la modalit Boue, pour seulement 20% pour la modalit Tmoin. Cette phase peut correspondre une phase de r-humectation du sol de la modalit Tmoin. Les boues tant riches en eau (siccit 37.8%), la modalit Boue ncessite moins deau pour sa r-humectation. Le taux dhumidit 105C, calcul en dbut dexprimentation puis par la suite tous les 15 jours (prlvement dun aliquote de sol), pour les diffrentes modalits confirme cette hypothse : le taux dhumidit en dbut dexprimentation se situe pour les modalits Tmoin entre 6 et 12%, et entre 15 et 20%pour les modalits Boue. La deuxime tape, semaines 2 4, est une tape transitoire, o le volume deau percole augmente pour les modalits tmoins, et diminue pour les modalits Boue. Aprs la 4me semaine, une troisime tape de stabilisation se met en place. Le volume deau percol est plus important pour les microcosmes avec ver, la prsence de ver ayant une influence sur le drainage du sol. Des travaux raliss au laboratoire (Joschko et al, 1989 ; Binet, 1993) et aux champs (Zachmann et al, 1987 ; Edwards et al, 1992 ; Shipitalo et Butt, 1999) montrent une augmentation du drainage en 85

prsence de ver.

Phase dinitialisation
100 80

Phase transitoire

Phase de stabilisation

Volume (ml)

60 40 20 0 1 2 3 4 5 6 7 8

Temps (semaine)

B+ v

B0

T+ v

T0

Figure V.1 Volume des percolats recueillis chaque semaine pour les microcosmes Tmoin sans vers (T 0), Tmoin avec ver (T + v), Boue sans ver (B0) , Boues avec ver (B +0)

2. CARBONE ORAGNIQUE DISSOUS DANS LES EAUX DE PERCOLATION 2.1 Concentration en COD dans les eaux de percolation La figure V.2 prsente les concentrations en carbone organique (CO) mesures dans les eaux de percolation pour les diffrentes modalits avec ou sans ver. Les concentrations en COD des eaux de percolation sont plus importantes pour la modalit Boue que pour la modalit Tmoin. La prsence de ver na pas deffet apparent sur les concentrations en COD des eaux de percolation. Comme dans le cas des volumes d'eau de percolation, des variations importantes se produisent pendant les trois premires semaines dexprimentation (phase de mise l'quilibre des dispositifs), les concentrations tant plus stables ensuite. Entre 3 et 8 semaines, on note une diminution significative de la concentration en COD des eaux du sol de la modalit Tmoin (15 10 mg.l-1). Pour la modalit Boue, les concentrations sont constantes sur la mme priode. 86

Concentration DOC (mg/l)

40

30

20

10

0 2 3 4 5 6 7 8

Temps (semaine)

B+ v

B0

T+ v

T0

Figure V.2 Teneur en Carbone Organique Dissout (COD) dans les percolats recueillis chaque semaine pour les microcosmes Tmoin sans vers (T0 ), Tmoin avec ver (T+v), Boue sans ver (B) , Boues avec ver (B +v)

L'excs de COD constat dans les eaux de percolation de la modalit Boue est la consquence directe du passage en solution des fractions les plus hydrosolubles du carbone organique apport par la boue. Les boues utilises dans nos expriences contiennent environ 250 g de CO par kg de Matire Sche (MS). Rapport au 40g de MS apport nos microcosmes, cela constitue un surplus de 10 g de CO li l'apport de boue. De ce fait, le microcosme avec boue contient au dpart 5 fois plus de CO que le microcosme Tmoin. Alternativement, les molcules organiques contenues dans l'eau des percolats de la modalit boue peuvent tre le rsultat des effets de la boue sur le sol : les boues, riches en MO, ont un effet favorable sur les proprits physicochimiques du sol : structuration du sol, augmentation de la CEC et du pH pour les boues chaules, apport de nutriment, ect (Wei et al, 1985 ; Korantajer, 1991 ; Sort et Alcaniz, 1996). Lactivit des micro-organismes se trouve galement stimule par lapport de boues (White et al, 1997, Andres, 1999). Laccroissement de cette activit microbienne est susceptible de conduire l'mission de molcules organiques hydrosolubles, lesquelles pourraient tre entranes par l'eau de percolation. Cependant, cot de ces effets stimulants court terme, peuvent apparatre des effets toxiques entranant une diminution de la biomasse microbienne et des activits enzymatiques (Bardgett et 87

Saggar, 1994, Giller et al, 1998, Khan et Scullion, 2002)

2.2 Flux cumul de COD dans les eaux de percolation La figure IV.3 prsente les flux cumuls de COD au cours du temps pour les diffrentes modalits. Comme pour les concentrations, les flux de COD sont plus importants pour la modalit boue que pour la modalit tmoin sans boues. Un effet ver est observ pour la modalit boue : le flux cumul de COD export est plus important pour la modalit Boue + ver que pour la modalit avec Boue sans ver. Pour la modalit Tmoin, aucun effet ver significatif nest mis en vidence.
12

Flux cumul DOC (mg)

10 8 6 4 2 0 1 2 3 4 5 6 7 8

Temps (semaine)

B+ v

B0

T+ v

T0

Figure V.3 Flux cumuls de COD exports via les eaux de percolation en fonction du temps et pour les diffrentes modalits.

2.3 Discussion Dans le cadre de notre exprimentation, la prsence de ver na pas occasionn une augmentation significative de la solubilit des matires organiques, qu'il s'agisse des matires organiques du sol ou de celles apportes par les boues. L'effet prpondrant observ sur le COD est un effet Boue . Les eaux de percolation des modalits boue sont plus charges en COD que les eaux de percolation des modalits Tmoin. Au niveau des concentrations, au premier abord aucun effet ne semble se dgager. Cependant, 88

selon Stehouwer et al (1993), les teneurs en carbone labile dans les parois de galeries peuvent tre 2 8 fois suprieures celles du sol et ainsi contribuer une augmentation des teneurs en C des eaux de percolation. Dans le cadre de notre exprience, les quantits de carbone rendues plus mobiles par lactivit du ver sont peut-tre trs faibles par rapport la quantit de carbone du fond gochimique mobilis lors de la percolation. Ce bruit de fond pourrait masquer la remise en solution du carbone par les activits lombriciennes. De plus, la dure dexprimentation, 8 semaines, nest peut-tre pas assez longue pour mettre en vidence un effet ver. En effet, au cours de lexprimentation, les concentrations en COD des modalits sans ver ont tendance diminuer progressivement tout au long de lexprimentation : lapport deau solubilise des matires organiques qui sont alors progressivement lues. Tandis que dans les modalits avec ver, un quilibre est atteint ds la 3me semaine. Ces rsultats semblent suggrer que dans notre sol, existe un pool de matires organiques hydrosolubles lues via les eaux de percolation. Llution progressive et continue constate dans les modalits sans ver serait due la quantit de pores recruts lors de la percolation. Dans ces modalits, il nexiste aucun chemin prfrentiel dcoulement des eaux. Lorsque leau est apporte en surface du microcosme, le nombre de chemin quelle peut emprunter est multiple. La probabilit quelle emprunte toujours les mmes pores est faible. Le nombre de combinaison de pores recruts lors de chaque percolation est diffrent, la surface explore par leau est donc importante aussi et conduit une lution progressive des MO hydrosolubles. En revanche, la prsence de galeries lombriciennes entrane une combinaison stable des pores recruts donc une lution constante de ces MO hydrosolubles. Lors de chaque arrosage, leau aura tendance a emprunter le mme chemin : la galerie. Llution de la MO hydrosoluble se limite la surface explore par leau, elle est donc moins importante pour les modalits avec ver, du fait de la prsence de galeries. Leau empruntant toujours le mme chemin, les concentrations en COD des modalits avec ver devraient logiquement diminuer au cours du temps. Or, les concentrations en COD des modalits vers sont constantes, suggrant ainsi la prsence dun effet ver. Lenrichissement en C des galeries pourrait contribuer ce que les concentrations de COD lues soient constantes dans le temps. Un effet "ver" est observ au niveau des flux. Celui-ci est particulirement notable pour les modalits "boue" ou le flux total de COD export au bout de 8 semaines est de 20% plus lev pour la modalit tmoin avec vers que pour la modalit tmoin sans ver (figure IV.3). Cette diffrence est la rsultante des diffrences de volume deau percol entre des deux mmes

89

modalits. La prsence de galeries est connue pour augmenter la conductivit hydraulique du sol. Dans le cas des modalits Boue, l'accroissement de la conductivit hydraulique de la modalit Boue avec vers par rapport la modalit Tmoin a entran une augmentation de 20% de la quantit d'eau percole (figure V.1). Les concentrations en COD des deux modalits tant identiques (pas d'effet chimique), laugmentation de la quantit d'eau totale percole se traduit in fine par une augmentation de 20% du flux de COD export. Concernant les modalits Tmoins, l'cart des flux de COD calculs entre la modalit avec vers et la modalit sans vers nest que de 5%, alors que l'cart des flux d'eau est comme dans le cas prcdent de 20%. En fait, cet cart entre flux de COD et flux d'eau dans le cas des modalit Tmoin est due l'inversion des concentrations en COD observe entre modalits : en effet ! [COD]sans vers>[COD]vers pour la modalit Tmoin ! [COD]vers>[COD]sans vers pour la modalit Boue(figure V.2). En l'tat actuel de nos rsultats, nous sommes dans l'incapacit d'expliquer cette inversion.

Dans le cadre de notre exprimentation, les modifications induites par la prsence de vers sur le transfert du COD l'chelle du profil de sol sont essentiellement d'ordre physique, lies l'augmentation de la conductivit hydraulique (augmentation des flux transfrs). Concernant une modification de la solubilit des matires organiques du sol ou des boues du fait de leur remaniement ou de leur mtabolisation partielle par les vers implants dans les microcosmes, un effet chimique pourrait intervenir, mais il na pu clairement tre mis en vidence.

3. LES ETM DANS LES EAUX DE PERCOLATION Les concentrations en plomb, cuivre, zinc et cadmium des eaux de percolation pour les diffrentes modalits sont prsents dans la figure V.4. Les flux cumuls de ces lments en fonction du temps sont prsents dans la figure V.5.

3.1 Le Cuivre Les concentrations pour cet lment sont constantes dans le temps et plus leves dans les modalits Boue (12 ppb en moyenne) que dans les modalits Tmoin (8-10 ppb en moyenne). Aucun effet "vers" significatif n'est observ sur les concentrations en Cu. Il existe des similitudes entre les sries temporelles de cet lment et celles des concentrations en COD.

90

Concernant les flux, les quantits de Cu exportes sont plus leves en prsence de ver, du fait de laugmentation de la conductivit hydraulique lie la prsence des galeries. Par ailleurs, les valeurs de flux sont plus leves pour les modalits Boue que pour les modalits Tmoin conformment aux diffrences de concentrations en cuivre observes entre ces deux modalits

20

0,10

Teneur en g/l

Teneur en g/l

15 10 5 0 2 3 4

Cuivre

0,08 0,06 0,04 0,02 0

Plomb

Temps (semaine)
2,5 300

Temps (semaine)

Teneur en g/l

Teneur en g/l

2 1,5 1 0,5 0 2 3 4

Cadmium

250 200 150 100 50 0

Zinc

Temps (semaine)

Temps (semaine)

B+ v

B0

T+ v

T0

Figure V.4 Concentration en Cd, Zn, Pb et Cu dans les percolats recueillis chaque semaine pour les microcosmes Tmoin sans vers (T0 ), Tmoin avec ver (T+v), Boue sans ver (B0) , Boues avec ver (B+v)

91

7 6

1,2

Cuivre
Flux cumul g/l

Flux cumul g/l

1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0

Plomb

5 4 3 2 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8

Temps (semaine)
0,6 70

Temps (semaine)

Flux cumul g/l

Flux cumul g/l

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 1 2 3

Cadmium

60 50 40 30 20 10 0

Zinc

Temps (semaine)

Temps (semaine)

B+ v

B0

T+ v

T0

Figure V.5 Flux cumuls de Cu, Pb, Cd et Zn exports via les eaux de percolation en fonction du temps et pour les modalits Tmoin et Boue.

3.2 Le Plomb Les concentrations en Pb sont trs faibles pour tous les percolats (<0.1 ppb) (figure IV.4). Par ailleurs, aucune volution temporelle significative n'est dcele. Cette constance des concentrations se retrouve au niveau des flux dexportation cumuls, lesquels sont aussi trs 92

proches les uns des autres (figure IV.4). En terme de flux, les modalits Boue n'exportent pas plus de Pb que les modalits Tmoin. Par ailleurs, la prsence de vers n'est pas un facteur d'augmentation du flux de Pb dissous. Les concentrations en plomb des percolats tant trs faibles, des contaminations en plomb pouvant galement intervenir, des erreurs analytiques peuvent se produire et expliquent limportant intervalle de confiance.

3.3 Le Cadmium Les teneurs en Cd des percolats varient de 0.2 2 ppb pour les modalits Boue et de 0.2 0.5 ppb pour les modalits Tmoin. Les concentrations en cadmium des modalits Boue augmentent progressivement au cours du temps, tandis quelles restent constantes pour les modalits Tmoin. En terme de concentration, la prsence de vers ne semble avoir aucun effet, puisque les teneurs en Cd des percolats des modalits avec et sans vers s'avrent tre quasiment identiques. Leffet boue prdomine et se retrouve au niveau des flux. Pour les modalits Tmoin, les flux sont constants : les quantits de cadmium exportes augmentant linairement avec le temps. Pour les modalits Boue, l'augmentation des concentrations conduit une augmentation exponentielle du flux export avec le temps. Comme pour le cuivre, laugmentation de la conductivit hydraulique lie la prsence de galeries lombriciennes conduit une augmentation des flux de cadmium pour la modalit Boue. En revanche, pour la modalit Tmoin, laugmentation de la conductivit hydraulique lie la prsence de ver ne conduit pas une augmentation du flux de cadmium. Les concentrations en cadmium des modalits avec ver tant lgrement infrieure celle de modalits sans vers, cette diffrence se rpercute au niveau des flux.

3.4 Le Zinc Le comportement du Zn est similaire celui du Cd en ce sens o les concentrations augmentent avec le temps pour les percolats provenant des modalits Boue, alors que ceux issus des modalits Tmoin montrent des concentrations constantes lgrement dcroissantes dans le temps. Par ailleurs, et comme pour le Cd, les concentrations en Zn des percolats des modalits Boue sont 5 10 fois plus levs (de 50 250 ppb) que celles des concentrations des percolats des modalits Tmoin (1 50 ppb). Cependant et l'inverse du Cd, pour les modalits boue, la prsence de ver conduit une forte augmentation des concentrations en Zn aboutissant une diffrence significative de plus de 80ppb au niveau des concentrations aprs 8 semaines

93

dexprimentations. Les courbes de flux du Zn dissous sont comparables celles du Cd : les flux de Zn export par la modalit Boue augmentent exponentiellement, alors que les flux sont linaires voire dcroissants pour la modalit Tmoin. Leffet ver observ pour les concentrations se rpercute au niveau des flux par une augmentation de plus de 50% des flux de Zn en prsence de ver.

3.5 Discussion Dans notre discussion, le cuivre et le plomb seront associs de mme que le cadmium sera associ au zinc. Ces associations dpendent du comportement de ces lments dans le sols : le cuivre et le plomb ayant une forte affinit pour la MO (Petruzzeli et al, 1978 ; Chang et al, 1984 ; Keller et Vedy, 1990 ; Flores-velez, 1996), le cadmium et le zinc ayant une affinit plus modre pour la MO. Les concentrations ainsi que les flux de plomb sont trs faibles quelle que soit la modalit. Tandis que les concentrations et flux de cuivre sont plus importants : les flux de cuivre sont 10 fois suprieurs aux flux de plomb. Ces deux lments tant fortement lis la MO, ces rsultats sont mettre en parallle avec ceux obtenus pour le COD. Les percolats des modalits Boue sont plus chargs en COD que les percolats des modalits Tmoin. Ce rsultat a t attribu une plus grande labilit de la MO de la boue. Le plomb et le cuivre, associs la MO devraient donc se retrouver dans les eaux de percolation. Or pour le plomb ce nest pas le cas. Ces rsultats suggrent que le plomb et le cuivre ne sont pas associs aux mmes composs organiques. Selon Cambier et al, (1999), le plomb migre peu et reste en surface car li aux composs de poids molculaires moyens (8000 Da) assimil des produits humiques. De plus selon Prudent et al (1993) les phnomnes de solubilisation du plomb apport par du compost urbain sont ponctuels et interviennent 45 jours aprs pandage. Les concentrations en plomb dans les lixiviats de sol amend par du compost sont gnralement trs faibles (Cambier et al, 1999). Tandis que le cuivre associ aux comportements des fines particules et de composs organiques de faible poids molculaire (Cambier et al, 1999) prsente un potentiel de migration rapide dans le sol (Prudent et al, 1997). Ainsi dans notre exprience, le plomb serait associ des complexes organiques stables qui sont faiblement entrans par les eaux de percolation. Alors que le cuivre serait li au pool de MO hydrosoluble entran par les eaux de percolation. Des analyses fines de spciation du cuivre et

94

du plomb, dans le sol et dans les eaux de percolation seraient ncessaires la vrification de cette hypothse.

Le cadmium et le zinc sont deux lments dont le comportement dans le sol est relativement similaire mais dans notre exprience, leur comportement diffre sur plusieurs points. Les concentrations en cadmium et zinc des percolats sont plus importantes pour les modalits Boue que pour les modalits Tmoin. Ces concentrations augmentent au cours du temps pour les modalits boues, tandis quelles restent stables pour les modalits tmoin. Au niveau des concentrations, aucun effet ver nest mis en vidence pour le cadmium. En revanche, un effet ver est mis en vidence pour le zinc dans les modalits Boues. En terme de flux, les tendance observes sont les mmes que pour les concentrations. Toutefois, un effet ver est mis en vidence concernant les flux de cadmium pour les modalits boues, reli laugmentation de la conductivit hydraulique. Cependant, le cadmium migre dans le sol sans que la prsence de galeries lombriciennes ne constitue des voies prfrentielles de circulation. En effet, le cadmium migrerait dans les percolats via leau circulant dans la microporosit du sol. Laugmentation dans le temps des concentrations en cadmium des percolats pourrait alors correspondre au dplacement d'un front de cadmium labile apport par la boue, du haut vers le bas du microcosme. Le comportement du zinc est relativement similaire celui du cadmium. Les concentrations et flux de zinc sont plus importants pour les modalits boues et augmentent au cours du temps. Ainsi, cet lment pourrait comme le cadmium circuler dans le sol via un front de migration de zinc labile apport par les boues expliquant laugmentation des concentration en zinc dans les percolats au cours du temps. De plus, la prsence de ver de terre pour la modalit Boue augmente les concentrations en zinc des percolats.

Linfluence des lombriciens sur la migration dun lment peut tre de type physique ou chimique. Dans le cadre de notre exprimentation, linfluence physique li la prsence de galeries lombriciennes a t mise en vidence dans le cas des flux de COD, Cu et Cd. Cependant, du fait de la nature des galeries, une influence chimique de ces structures sur le lessivage des lments traces mtalliques pourrait galement intervenir. En effet, les parois de galeries constituent une sphre dinfluence reconnue depuis quelques annes : la drilosphre (Brown,

95

1998). Elles ont des proprits physiques et chimiques diffrentes de celles du sol : le pH, les teneurs en argiles et les teneurs en carbone total et soluble diffrentes de celle du sol (Syers et Springett, 1983 ; Stehouwer et al, 1993 ; Gorres et al, 1997). Laugmentation de la conductivit hydraulique ne suffisant pas expliquer les diffrences de flux de zinc observes en prsence et en absence de ver. Pour cet lment, un effet chimique sajoute leffet physique, augmentant ainsi les flux de zinc dans les eaux de percolation.

4. BILAN DES FLUX DE CARBONE ET ELEMENTS TRACES METALLIQUES Des bilans dexportation des diffrents lments dans le systme sont raliss pour les deux modalits en prsence et/ou non de ver. Ces bilans permettent de quantifier les flux sortant par rapport la matrice sol.

4.1 Bilan des flux de carbone et ETM Les bilans des flux du carbone, cadmium, zinc, plomb et cuivre sont reprsents dans les figures V.6 pour le carbone, V.7 et V.7 bis pour les ETM. Les flux de sortie du carbone et des lments traces mtalliques calculs sur la priode d'tude, c'est--dire 8 semaines, sont trs faibles. Les flux de sortie rapports la matrice sol varie au minimum de 2.7 10-5 % pour le plomb et au maximum de 0.18 % pour le cadmium, le plomb tant llment le moins mobilis et le cadmium, llment le plus lessiv.

96

Bilan du carbone
Boue
1,66 g 9,89 1,66 g

Sol + Litire
stock initial : 68,47 g

Sol
stock initial :68,47 g

Sol + boue + Litire

117,69 g

+ Ver
V eau : 381.21 ml 35,6 mg de COD V eau : 299.1 ml 28,2 mg de COD

+ Ver
V eau : 451.7 ml 87,67 mg de COD V eau : 387.46 ml 59,6 mg de COD

0.050 %

0.040 %

0.074 %

0.050%

Figure V.6 Bilan de sortie du carbone par lessivage pour les microcosmes Tmoin avec ver (T+v), Tmoin sans vers (T0), Boues avec ver (B +v), Boue sans ver (B0)

Pour le carbone seulement 0,040% 0,074% du carbone total passe en solution. La prsence de vers de terre augmente les bilans de sortie du carbone. Laugmentation des flux de sortie du carbone en prsence de ver serait la rsultante de laugmentation de la conductivit hydraulique et non de processus chimiques pouvant se drouler dans la drilosphre Le cuivre bien que moins mobilis prsente des bilans dexportation similaires ceux du COD. En prsence de boue, les bilans dexportations du cuivre sont plus importants. Selon Juste et al, (1995), lapport de boues provoque une redistribution du cuivre dans le sol : des molcules organiques complexantes, produites lors des processus de biodgradation des boues participent lapprovisionnement en mtal de la solution du sol, dou un lessivage plus important du cuivre pour ces modalits. Comme pour le COD, laugmentation des bilans dexportation de cuivre en prsence de lombriciens pourrait tre lie laugmentation de la conductivit hydraulique. Il ne faut cependant pas exclure lhypothse dun effet chimique li la prsence de ver, effet qui na pu tre mis en vidence ici. Le plomb est llment le moins mobilis, seulement 4.31 10-5 % du plomb de la matrice passe en solution. Les bilans dexportation du plomb sont plus importants pour la modalit Tmoin que

97

pour la modalit Boue. Les boues joueraient un rle de rtention du plomb. Le mtal pourrait tre immobilis au sein de complexes organo-mtalliques stables. De plus, la prsence de lombriciens limite encore lexportation du plomb. Le plomb pourrait galement tre squestr dans ces structures. Les lombriciens et notamment L.terrestris rejettent du carbonate de calcium par leurs glandes calcifres (Lee, 1985). Le plomb pourrait donc se fixer ce carbonates de calcium et se trouver alors immobiliser dans les galeries. Le cadmium est llment dont lexportation est la plus importante, 0.06 % et 0.18 % du cadmium total passe en solution respectivement pour les modalits tmoin et boue, sans que les lombriciens y jouent un rle. Le cadmium est reconnu comme tant un lment assez mobile (Legret et al, 1988 ; Baize, 1997). Aprs apport de boue, plus de cadmium passe en solution. Selon Illera et al, (2000), aprs apport de boue, les fractions du sol les plus enrichies en cadmium sont les fractions changeable, acido-soluble (carbonates). Ces fractions tant les plus facilement mobilisables (Berti et Jacobs, 1996 ; Ma et Rao, 1997 ; Sloan et al, 1997), le cadmium peut migrer en profondeur via les eaux de percolation. Comme pour le cadmium, les bilans du zinc sont plus importants pour la modalit Boue. Dans le cas du zinc, la prsence de ver augmente les bilans dexportations du zinc. Il semble donc que le ver ait une propension mobiliser slectivement le zinc des boues mais pas le cadmium. Il a t montr que le cadmium et le zinc entraient en comptition lors des processus dadsorption (Juste et al, 1995). Dans nos expriences, il est possible que le Zn apport par les boues ait t prfrentiellement adsorb par rapport au Cd sur les constituants du sol ingrs par le ver. Des travaux ont montr que dans un sol amend par des boues ou du compost (Canet et al, 1997 ; Luo et Christie, 1998 ; Illera et al, 2000), le zinc se distribue entre les fractions rsiduelles et oxydables (li la MO). Une telle slectivit dans l'adsorption pourrait expliquer les diffrences de comportement de ces deux mtaux.

98

Bilan du Cuivre
Litire 3,8 10-4 mg

Boue
+ 16.76 mg

Litire 3,8 10-4 mg

Sol
stock initial : 108 mg

Sol
stock initial : 108 mg

Sol + boue
124.76 mg

+ Ver
V eau : 381.21 ml 0.02305 mg de Cu V eau : 299.1 ml 0.01946 mg de Cu

+ Ver
V eau : 451.7 ml 0.04072 mg de Cu V eau : 387.46 ml 0.03126 mg de Cu

0.021 %

0.018 %

0.032 %

0.025 %

Bilan du Plomb
Litire 4,48 10-4 mg

Boue
15.56 mg

Litire 4,48 10-4 mg

Sol
stock initial : 242.5 mg

Sol
stock initial : 242.5 mg

Sol + boue
258,06 mg

+ Ver
V eau : 381.21 ml 0.000089 mg de Pb V eau : 299.1 ml 0.0001 mg de Pb

+ Ver
V eau : 451.7 ml 0.00008 mg de Pb V eau : 387.46 ml 0.00011 mg de Pb

2.7 10-5 %

4.12 10-5 %

2.74 10-5 %

3.78 10-5 %

Figure V.7 Bilan de sortie par lessivage du Pb et du Cu, pour les microcosmes Tmoin avec ver (T+ v), Tmoin sans vers (T0), Boues + ver (B + v), Boue sans ver (B0)

99

Bilan du cadmium
Litire 1,12 10-5 mg

Boue
+ 0.38 mg

Litire 1,12 10-5 mg

Sol
stock initial : 1.42 mg

Sol
stock initial : 1.42 mg

Sol + boue
1.80 mg

+ Ver
V eau : 381.21 ml 0.00089 mg de Cd V eau : 299.1 ml 0.00088 mg de Cd

+ Ver
V eau : 451.7 ml 0.00328 mg de Cd V eau : 387.46 ml 0.00303 mg de Cd

0.06 %

0.06 %

0.18 %

0.17 %

Bilan du Zinc
Litire 2,29 10-3 mg

Boue
+ 69.52 mg

Litire 2,29 10-3 mg

Sol
stock initial : 650 mg

Sol
stock initial : 650 mg

Sol + boue
719.52 mg

+ Ver
V eau : 381.21 ml 0.07715 mg de Zn V eau : 299.1 ml 0.05814 mg de Zn

+ Ver
V eau : 451.7 ml 0.325 mg de Zn V eau : 387.46 ml 0.28657 mg de Zn

0.011 %

0.008 %

0.045 %

0.039 %

Figure V.8 Bilan de sortie par lessivage du Cd et du Zn, pour les microcosmes Tmoin avec ver (T+ v), Tmoin sans vers (T0 ), Boues avec ver (B + v), Boue sans ver (B0)

100

Ces bilans nous permettent daller plus loin dans linterprtation par la quantification de leffet boue et de leffet ver. Ces effets sont calculs comme suit :

Effet ver sur llment X [tmoin] = [Flux de sortie de X tmoin + V]- [Flux de sortie de X tmoin 0] * 100 [Flux de sortie de X tmoin 0] Effet boue sur llment X = [Flux de sortie de X tmoin + V]- [Flux de sortie de X boue + V] * 100 [Flux de sortie de X tmoin 0]

Tableau V.1 Quantification des effets boue et ver sur les flux dlments
COD Effet ver [tmoin] Effet ver [boue] Effet boue [0 ver] Effet boue [+ ver] + 25 % + 48 % + 25 % +48 % Cu + 16,67 % + 28 % + 38,89 % + 52,3 % Pb - 34,47 % -27,51 % -8,25 % +1,48 Cd 0 +5,88% + 183,3 % + 200 % Zn + 3,75 % +15,38 % + 387,5 % + 309,09 %

A lexception du COD et du plomb, leffet boue prdomine sur leffet ver dans la remise en circulation du cuivre, cadmium et zinc. Cet effet est trs important pour le cadmium et le zinc dont lexportation augmente respectivement de 200 et 350% aprs apport de boue. Pour le plomb, leffet ver jouerait un rle plus important que leffet boue dans limmobilisation du plomb. Leffet boue en prsence de ver aboutissant une augmentation de lexportation du plomb. Ces rsultats suggrent que outre un effet ver sur la percolation, un effet ver de type physico-chimique semble galement contrler lexportation du plomb. Concernant, le COD leffet ver et boue sont de mme ordre.

Par la formulation dhypothse, on peut aller encore plus loin dans lidentification de leffet boue et de leffet ver. Leffet boue peut se dcomposer en deux : un premier effet li laugmentation des teneurs en lments dans le sol aprs apport de boue et un deuxime effet li aux diverses ractions physico-chimiques induites par cet apport. Ces deux effets peuvent tre diffrencis par 101

un calcul thorique simple qui supposerait quil nexiste aucune interaction physico-chimique (changement de spciation des lments, modification de la conductivit hydraulique, ) entre la boue et le sol. La quantit dlment export par les eaux de percolation ne serait alors fonction que de la quantit dlment apporte par la boue. Ceci signifierait que le rapport entre la quantit dlment lessiv via les eaux de percolation et le stock dlment dans la matrice de la modalit tmoin en labsence de ver serait gal celui de la modalit Boue en absence de ver. Soit :
[Quantit de X lessiv pour la modalit tmoin] [Stock de X dans le sol de la modalit tmoin] = [Quantit de X lessiv pour la modalit boue] [Stock de X dans le sol de la modalit boue]

La diffrence obtenue entre la valeur thorique et la valeur relle dlment lessiv serait alors la part pris par leffet physico-chimique des boues. Le mme calcul thorique est appliqu aux modalits avec ver. La valeur thorique la mme signification que prcdemment, associ la prsence de ver. La diffrence entre la valeur thorique et la valeur relle correspondrait la part dlment export sous leffet des modifications physico-chimique induites par laction conjointe de la boue et du ver. Lors des calculs, nous avons constat que les valeurs thoriques calcules pour les modalits avec et sans vers taient du mme ordre. Lhypothse pose est alors que leffet boue due laugmentation des teneurs en lment est le mme pour les modalits vers et sans vers. Ainsi, la diffrence entre les effets physico-chimiques observs pour les modalits sans vers et pour les modalits avec vers quantifierait leffet physico-chimique li la prsence de ver. Les diffrents effets sont synthtiss dans les figures V.9 V.13.

Ainsi pour le carbone selon les calculs raliss, un effet squestrant des boues est mis en vidence : la valeur thorique dlution calcule daprs laugmentation des teneurs en COD dans la modalit boue tant suprieur (70%) la valeur relle (25%). En revanche, la prsence de ver de terre favoriserait le lessivage du COD. Leffet squestrant de la boue est suprieur et soppose leffet luant des vers : celui-ci est donc masqu. Leffet ver de 23% serait d aux modifications physico-chimiques intervenant dans les parois de galeries.

Lapport de boue augmente le lessivage de cuivre de 38,89 % en labsence de ver et de 52,3% en

102

prsence de ver. Laugmentation des teneurs en cuivre dans la modalit boue serait responsable de 14 15% du cuivre lu. Ainsi 23,3% du cuivre lu serait li aux processus physicochimiques induit par lapport de boue. Leffet ver serait alors de 14%.

Les rsultats pour le plomb sont variables. Ainsi en labsence de ver, lapport de boue limite llution du plomb tandis quen prsence de ver lapport de boue augmente le lessivage du plomb. Les boues ont un effet squestrant sur le lessivage du plomb. Cet effet boue tant dans le cas des modalits avec ver contrebalanc par effet ver qui lui va plutt favoriser llution du plomb. Ainsi selon lorigine du plomb, le ver va avoir un action diffrente : il limite llution du plomb gogne, il favorise llution du plomb exogne. Les rsultats concernant cet lment sont cependant prendre avec prcautions, rapport aux incertitudes de mesures lies aux faibles concentrations mesures et aux problmes de pollution.

Lapport de boue augmente fortement le lessivage du cadmium et du zinc de 200% et de 350% environ respectivement pour le cadmium et le zinc. Cette augmentation tant li pour plus de 150% dans le cas du cadmium et plus de 366% dans le cas du zinc aux modifications physicochimiques soprant dans le sol suite lapport de boue. Si dans le cas du cadmium, leffet ver sajoute leffet boue, dans le cas du zinc, leffet ver soppose leffet boue. Ainsi, la prsence de ver favorise llution du cadmium et limite llution du zinc. Ces rsultats semblent sopposer ceux obtenus dans le cadre des flux. Cela veut seulement signifier quen labsence dinteractions entre les lombriciens et le zinc provenant des boues, les flux de zinc seraient encore plus importants. Les interactions physico-chimiques ver/Zn sopposent alors leffet des vers sur le drainage.

Ces calculs montrent lexistence de la prsence dun effet physico-chimique li la prsence de ver. Cet effet peut acclrer lexportation dlment, cest le cas pour le carbone, le cuivre et le cadmium, ou ralentir llution cest le cas du zinc.

103

Carbone

Effet Boue sans boues Effet ver Sans boue + 25%

+ 25% Effet ver Avec boue + 48%

Dt +70% augmentation teneurs - 45% physico-chimie

Effet Boue avec boue + 48%

Dt +70% augmentation teneurs - 22% physico-chimie

Figure V.9 Bilan des effets des vers et de la boue sur le lessivage du COD

104

Cuivre
Boue

Effet Boue (0) + 38,9 % Effet ver sans boue +16,7%

Dt 15,5% augmentation teneurs 23,3% physico-chimie

Effet ver avec ver +28%

Effet Boue (+v) + 52,3%

Dt 14,3% augmentation teneurs 38% physico-chimie

Figure V.10 Bilan des effets des vers et des boue sur le lessivage du cuivre

Plomb
Boue

Effet Boue sans ver Effet ver sans boue -34,47%

-8,25% Effet ver avec boue -27,51%

Dt +6,3% augmentation teneurs -15,2% physico-chimie

Effet Boue avec ver

+1,5%

Dt +6,3% augmentation teneurs -4,8% physico-chimie

Figure V.11 Bilan des effets des vers et de la boue sur le lessivage du plomb

105

Cadmium

Boue

Effet Boue sans ver + 183,3 % Effet ver sans boue +0%
Dt 26,6% augmentation teneurs 156,7% physico-chimie

Effet Boue avec ver

Effet ver avec boue +5,88%

+ 200%

Dt 26,6% augmentation teneurs 173,4% physico-chimie

Figure V.12 Bilan des effets des vers et de la boue sur le lessivage du cadmium

Zinc

Boue

Effet Boue (0) + 387,5 % Effet ver sans boue +3,7%

Dt 10% augmentation teneurs 377,5% physico-chimie

Effet ver avec boue +15,4%

Effet Boue (+v) + 309,1%

Dt 10,69% augmentation teneurs 366,8% physico-chimie

Figure V.13 Bilan des effets des vers et de la boue sur le lessivage du Zinc

4.2 Le risque Boue Nous avons voulu quantifier un ventuel risque Boue. Cest dire dterminer la probabilit que les ETM prsents dans les boues se retrouvent dissous dans les eaux de percolation. Ce risque a

106

t quantifi en calculant les deux indices suivants :

I1 [(% de x lessiv pour la modalit boue) - (% de x lessiv pour la modalit tmoin)] *100 (% de x lessive pour la modalit boue)

I2 (Quantit total de x lessiv provenant de la boue) *100 (Quantit total de x apport par la boue)

Tableau V.2 Indice I1

Carbone I1 (sans ver) I1 (+ ver) 20 32,43 Cuivre 28 34,37 Plomb Cadmium 64,70 66,6 Zinc 79,4 75,5

Tableau V.3 Indice I2

Carbone I2 (sans ver) I2 (+ ver) 0,04 0,06 Cuivre 0,01 0,015 Plomb Cadmium 0,06 0,08 Zinc 0,04 0,06

Lindice I1 quantifie la fraction d' ETM prsent dans les percolats ayant la boue comme origine. L'indice I2, quant lui, exprime la fraction du stock total d'ETM contenu dans la boue qui a t mobilise par la solution de percolation. Les deux indices sont calculs en absence de ver et en prsence de ver. Les calculs mettent en vidence des indices I1 levs pour le cadmium et le zinc, lments pour lesquels 67 % 79% du flux total export pendant les 8 semaines qu'ont dur les expriences proviendrait des boues. Pour le cuivre, l'indice I1 descend 50. Pour le plomb, cet indice est nul tant donn que le lessivage de plomb en prsence de boue est infrieur aux tmoins.

107

Concernant l'indice I2, les valeurs les plus leves sont obtenues pour le Cd (0.6%) et le Zn (0.3%); pour le Cu la valeur de l'indice est de 0.1%; pour le plomb une valeur ngative est obtenue, les modalits Boue exportant moins de Pb que les modalits Tmoin.

Le risque boue existe notamment pour le cadmium et le zinc dont plus de 50% de ces lments retrouv dans les percolats provient de la boue. Cependant, ce risque reste trs faible, lindice I2 tant compris entre 0,06 pour le cadmium et 0,01 pour le cuivre. La prsence de ver de terre acclre ce processus dlution. Cette augmentation tant faible, le risque boue reste minime.

5. DISCUSSION GENERALE Pour de nombreux chercheurs (Emmerich et al, 1982 ; Smith, 1996 ; Lozano Cerezo et al, 1999), la mobilit potentielle des lments traces issus de boues de station dpuration via les eaux de percolation est rduite. La plupart de ces travaux sont raliss au laboratoire sur des colonnes compactes et ne prennent pas en compte la macroporosit (Richards et al, 1998). Ces voies prfrentielles peuvent acclrer le mouvement de leau et des soluts dans le profil de sol (Stagnitti et al, 1991 ; Steenhuis et al, 1995). Les galeries de ver de terre sont reconnues pour tre des voies prfrentielles dcoulement des eaux (Ehlers, 1975 ; Zachmann et al, 1987 ; Shipitalo et Butt, 1999). Elles peuvent augmenter de 8 9 fois la conductivit hydraulique (Joschko et al, 1992) augmentant par la-mme les flux de soluts (Steenhuis et al, 1990 ; Shipitalo et al, 1994). Elles sont galement reconnues pour tre des interfaces ractifs, capables de favoriser le transfert des soluts du sol vers la solution du sol. Ainsi, il a t dmontr que certaines parois de galeries taient enrichie en NO3- soluble et en carbone organique labile (Syers et Springett, 1983 ; Stehouwer, 1993). Par ailleurs, d'aprs les travaux de Binet (1993), la quantit de NH4+ exportable par lixiviation serait accrue d'un facteur 5 en prsence de ver. Dans le cadre de notre exprience, aucun effet ver significatif nest mis en vidence pour aucune des deux modalits (sans boue ou avec boue) au niveau des concentrations. Ce qui ne veut pas dire pour autant que cet effet nexiste pas. Leffet ver est peut tre masqu par leffet boue largement prdominant. En effet, lexception du plomb, les concentrations en COD et lments traces mtalliques dans les eaux de percolation sont suprieures pour les modalits Boues, avec et sans ver. Les lments traces mtalliques provenant des boues sont prsents sous des formes chimiques assez ractives potentiellement plus labiles que les lments traces gognes. Ceux-ci

108

sont le plus souvent immobiliss sous des formes relativement inertes (Baize, 1997). Les ETM provenant des boues peuvent donc tre lessivs court terme via les eaux de percolation. Seul le plomb dont les teneurs diminuent dans les percolats des modalits Boue semble tre immobilis suite lapport de boue. Une partie de la MO apporte par les boues sapparente la MO humifie du sol, et rsiste la dcomposition dans le sol (Terry et al, 1979 ; Gerritse et al, 1982). Le plomb pourrait donc tre immobilis au sein de tels complexes organiques stables peu labiles. Les concentrations en cuivre voluent de faon similaire celles du COD. Ces rsultats suggrent la prsence de deux types de MO : lune hydrosoluble laquelle le cuivre sans tre fix, et lautre peu labile laquelle le plomb serait li. Les concentrations en zinc et cadmium des percolats des modalits Boue augmentent au cours du temps indiffremment la prsence de ver. Ces observations suggrent la migration dun front labile de ces deux lments du haut vers le bas du microcosme. Les travaux de Scokart et al (1983) montrent galement une migration du cadmium et du zinc vers les horizons situs en dessous de lapport de boue. La spciation de ces deux lments traces dans les boues (Illera et al, 2000) pourrait expliquer que ces deux lments migrent vers les horizons sous-jacents.

En terme de flux, un effet ver est observ pour les modalits Boue notamment. Cet effet ver est avant tout li laugmentation de la conductivit hydraulique. Cet effet physique direct est mis en vidence pour le cadmium, le cuivre et le zinc. Un effet indirect, li aux proprits physicochimiques particulires des parois de galeries, peut galement favoriser le lessivage des ETM via les eaux de percolation. Cet effet indirect na t mis en vidence que pour le zinc.

La contribution des lombriciens dans les transferts de COD et dlments traces mtalliques vers les eaux souterraines est modeste. Cette contribution peut tre de type physique : en prsence de ver, la conductivit hydraulique augmente et par consquent le transfert de solut et de type physico-chimique : les interactions ver/ETM dans les parois de galeries pouvant acclrer ou limiter le transfert de solut.

109

CHAPITRE VI

DISCUSSION ET CONCLUSION GENERALE

110

DISCUSSION ET CONCLUSION GENERALE ___________________________________________________________________________

Le rle des lombriciens dans la redistribution des ETM dans le sol a pu tre mis en vidence au cours de ce travail par le biais de deux approches. La premire nous a permis dtudier au moyen de deux techniques complmentaires (chimique et physique) la redistribution des ETM entre les diffrents compartiments tudis (sol, turricule et parois de galeries) et au sein de ces diffrents compartiments (disponibilit, rpartition granulo-densimtrique). La deuxime a permis dvaluer le rle des lombriciens sur la qualit des eaux de percolation et notamment leur charge en ETM.

La redistribution des ETM via les activits lombriciennes est tudie deux niveaux : o inter-compartiment, c'est--dire les diffrences de concentrations totales en ETM entre le sol et les microsites ; o intra-compartiment, c'est--dire la disponibilit et la rpartition granulodensimtrique des ETM au sein mme de ces microsites.

Les lments traces mtalliques ne sont pas concentrs dans les turricules et encore moins dans les galeries. Le cadmium est le seul lment dont les teneurs dans les turricules et les parois de galeries sont infrieures celles obtenues dans le sol. La concentration dun lment dans les turricules et parois de galeries dpend de lespce lombricienne considre et de ses prfrences alimentaires (Morgan et Morgan, 1992). Ainsi, lingestion slective de particules plus ou moins contamines selon les prfrences alimentaires dun vers de terre entrane une concentration plus ou moins accentue de ces lments dans ses faeces et dans ses galeries. La prsence de litire a orient le comportement alimentaire du ver, qui a prfrentiellement ingr cette litire non contamine plutt que la MOS. Ceci entrane une dilution des teneurs en Cd, Zn Pb et Cd au sein des turricules et parois de galeries, ce qui explique que lapport de boue, et par consquent 111

laugmentation des teneurs en ETM dans le sol, na pas conduit une concentration des ETM dans les turricules et parois de galeries. Cependant, la dure de lexprimentation (9 mois) ne permettait pas le maintien de la priode de jeun des lombriciens au del de 2 mois. La sparation des turricules en deux lots, avant apport de litire et aprs apport de litire, aurait peut-tre permis de voir une diffrence dans laccumulation de nos 4 ETM dans les turricules.

Toutefois si le Cu, Pb, Zn et Cd ne sont pas concentrs dans les turricules et les parois de galeries, leur disponibilit et leur rpartition granulo-densimtrique est modifie dans les biostructures.

La composition des djections et notamment leur granulomtrie (Chapuis-Lardy et al, 1998) dpend du comportement alimentaire du ver. Ainsi, l encore, lingestion de litire joue un rle important dans la granulomtrie et la rpartition des ETM au sein de ces fractions dans les turricules et parois de galeries. Ainsi, la prsence de dbris organiques ou MOP augmente considrablement dans les microsites par rapport au sol environnant, allant jusqu' reprsenter 20% de la granulomtrie totale des turricules : ces MOP tant issus en majeure partie de la litire dpose en surface des microcosmes. Du fait de leur importance en terme de granulomtrie, la contribution des MOP (matires organiques particulaires) dans le stockage du Cu, Pb, Cd et Zn augmente dans les turricules et les parois de galeries. De plus, ces MOP possdent des groupements organiques (COO-) capables de complexer les ETM et par consquent, elles peuvent constituer une fraction de stockage des ETM.

La redistribution chimique ou disponibilit des ETM dans les microsites varie selon le mtal et la modalit. Ainsi, en terme de redistribution chimique, par rapport au sol environnant : " La disponibilit du Cu nest pas modifie, " Le Cd et le Pb sont plus disponibles dans les turricules et les parois de galeries, " Le Zn est plus disponible dans les microsites de la modalit Boue uniquement.

Le changement de disponibilit observ pourrait tre li laugmentation de la quantit de MOP dans les biostructures. En effet, ces MOP constituent les formes les moins stables de la matire organique, car peu transformes et donc facilement biodgradables par les microorganismes;

112

cette faible stabilit peut alors aboutir un relargage des ETM (Balesdent et al, 1988).

Dans les turricules et parois de galeries, la redistribution des ETM vers les MOP pourrait donc conduire une augmentation de la disponibilit des ETM. Pour le cuivre, la redistribution physique ne saccompagne pas dune redistribution chimique : le test dextraction chimique employ ne suffit pas mettre en vidence un changement de disponibilit de cet lment au niveau des microsites. Pour le cadmium et le plomb, la redistribution des ETM dans les MOP saccompagne dune augmentation de disponibilit dans les microsites quelle que soit la modalit. Pour ces trois lments, leffet ver prdomine sur leffet Boue, lapport de boue ne modifiant pas la redistribution de ces lments dans les microsites par rapport la modalit Tmoin. Les hypothses poses sont, soit que la redistribution de ces lments est lie en majorit lingestion de litire et donc un effet ver, soit que le Cu, le Pb et le Cd du fond gochimique sont redistribus au mme titre que les ETM provenant de la boue. Le comportement du zinc est diffrent : sa disponibilit dans les turricules et parois de galeries varie selon la modalit : elle est similaire celle du sol dans le cas de la modalit Tmoin, tandis quelle augmente dans le cas de la modalit Boue. Ces rsultats suggrent que le zinc gogne nest pas mobilis par les ractions lies aux activits des lombriciens (digestion, scrtion de mucus, ), alors qu linverse le zinc apport par la boue est redistribu par les activits lombriciennes.

La redistribution des ETM par les lombriciens se fait selon deux grands processus : ! Une redistribution lie au comportement alimentaire slectif du ver qui va ingrer des particules de sol plus ou moins contamines et induire la concentration ou non de ces 4 ETM dans les turricules et parois de galeries par rapport au sol. De ce comportement slectif va dpendre galement la distribution des ETM au sein mme des microsites. ! Une redistribution lie aux ractions physico-chimiques engendres par la prsence et les activits (ingestion de sol, bioturbation, ect..) des lombriciens : La spciation du Cu, Pb, Cd et Zn est ainsi modifie, entranant leur redistribution au sein mme des microsites.

113

Les parois de galeries constituant des voies prfrentielles dcoulement des eaux, la redistribution des ETM dans ces structures peut jouer un rle sur la qualit des eaux de percolation.

La prsence de galeries acclre la circulation de leau dans la colonne de sol. (Francis et Fraser, 1998 ; Shipithalo et al, 2000). Ceci permet de penser qu teneurs quivalentes en ETM, leur flux subit un accroissement corrlatif. De plus, les galeries constituent des interfaces chimiques ractives qui peuvent modifier la spciation des ETM (Scheu, 1987 ; Lee, 1985, Shipitalo et Protz, 1989 ; Devliegher et Verstraete, 1997) et ainsi acclrer ou retarder le transfert des ces lments vers la solution du sol. Les variations de flux observes entre modalits avec et sans vers sont la rsultante de deux processus qui peuvent selon leur nature, cumuler leurs effets ou les soustraire : ! Un processus physique se traduisant par une augmentation de la conductivit hydraulique via les galeries et laugmentation des surfaces de contact. ! Un processus physico-chimique se traduisant par un changement de spciation des lments traces mtalliques dans les galeries. Au cours de notre exprimentation, nous avons mis en vidence une augmentation de la conductivit hydraulique en prsence de lombriciens. Cependant, limpact des processus physico-chimiques se droulant linterface galeries / eau na pas pu tre dissoci du prcdent, en raisons de difficults techniques et mthodologiques. En effet, dans les microcosmes sans vers soumis une percolation plus lente, le processus physico-chimique a pu tre masqu par la mise en solution dlments prsents dans la fraction hydrosoluble. Dans les modalits avec vers, leau apporte en surface du microcosme va emprunter prfrentiellement la macroporosit : les pores recruts lors de chaque apport deau tant les mmes. Pour les modalits sans ver, labsence de macroporosit fait quun nombre plus important de pores est recrut par leau de percolation : la fraction hydrosoluble des ETM sollicite au cours de ces arrosages successifs peut tre plus importante la diffrence des modalits avec ver o leau emprunte prfrentiellement la macroporosit dorigine lombricienne et la mso et micro circumvoisines. Cette fraction hydrosoluble constitue une sorte de bruit de fond et peut masquer leffet physico-chimique des vers.

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Un autre rsultat obtenu dans le cadre de cette exprimentation est la prpondrance dun effet boue par rapport celui des vers. Les flux dETM sont toujours plus importants pour les modalits Boue. Ce rsultat apporte un lment supplmentaire dans la comprhension de la mobilit des ETM issus des boues de station dpuration dans le sol. En effet, des travaux raliss en laboratoire montrent une immobilisation dans les horizons de surface des ETM apports par les boues (Giodarno et Mortvedt, 1976 ; Emmerich et al, 1982 ; Dowdy et al, 1991) : cette immobilisation tant dduite de labsence de migration dETM vers les niveaux sous-jacents. Cependant, malgr labsence de migration dlments, limpossibilit de boucler les bilans de masse 100% suggre vraisemblablement une perte dlment (Chang et al, 1984 ; Dowdy et al, 1991 ; Sterck et Richter, 1997). De rcentes tudes dmontrent que les ETM apports par les boues ne sont pas totalement immobiliss au sein des fractions solides du sol mais quune partie de ces ETM peut passer en solution (Camobreco et al, 1996 ; Mc Bride et al, 1997; Richards et al, 1998). Labsence de migration dun lment dans le sol ne signifie donc pas que cet lment soit immobilis dans les phases solides du sol. Dans le cadre de notre exprimentation, le Cu, Cd et Zn apports par les boues ne sont pas totalement immobiliss et passent en solution. En revanche, llution du plomb tant plus importante dans le cas des modalits Tmoin, cet lment est probablement immobilis dans les phases solides su sol suite lapport de boue. Outre leffet ver sur la conductivit hydraulique, les concentrations en cadmium des percolats des modalits Boue avec et sans vers sont similaires. Selon certains auteurs (Harter et Naidu, 1995 ; Camobreco et al, 1996 ; Grolimund et al, 1996 ; Karathanasis, 1996), des entranements de particules par les collodes contribuent la mobilit des ETM dans le profil de sol. Dans le cadre de notre tude, la migration du cadmium dans la matrice sol vers les horizons sous-jacents associs aux rsultats de percolation confirment quun front de cadmium labile apport par les boue migre dans le sol via la microporosit indpendamment des activits lombriciennes.

Grce ces diffrentes exprimentations, nous pouvons dresser un bilan de redistribution du Cu, Pb, Cd et Zn dans un sol en prsence de lombriciens. Les bilans globaux ont t calculs pour une seule espce lombricienne L.terrestris (figures V1 et V.2). Les bilans de redistribution obtenus pour N.giardi sont prsents en annexe (Annexe 6).

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Bilan du cuivre Tmoin

Litire 3,8 10-4 mg

Boue
0,86 % dt 0,21 disponible

Boue
30.07 mg

Litire 3,8 10-4 mg

1.13 % dt 0,97 disponible

Sol
stock initial : 76.35 mg

1,03 % dt 0,30 disponible

Sol
stock initial : 103.8 mg

0,72 % dt 0,48 disponible

0,20 % dt 0,08 disponible

0,10 % dt 0,05 disponible

Soit 0,02%

Soit 2,09 % dt 0,59 disponible

Soit 0,03 %

Soit 1,95 % dt 1,5 disponible

Bilan du Plomb

Tmoin
Litire 4,48 10-4 mg

Boue
0.69 % dt 0,33 disponible

Boue
22.5 mg

Litire 4,48 10-4 mg

0.84 % dt 0,72 disponible

Sol
stock initial : 186.15 mg

0,55 % dt 0,36 disponible

Sol
stock initial : 208.72 mg

0.45 % dt 0,36 disponible

0,16 % dt 0,1 disponible

0,08 % dt 0,05 disponible

Soit 0,03 10-3 %

Soit 1,4 % dt 0,79 disponible

Soit 0,03 10-3 %

Soit 1,37 % dt 1,13 disponible

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Bilan du Cadmium

Tmoin
Litire 1,12 10-5 mg

Boue
0.27 % dt 0,23 disponible

Boue
0.7 mg

Litire 1,12 10-5 mg

0.47 % dt 0,43 disponible

Sol
stock initial : 7.9 mg

0.36 % dt 0,25 disponible

Sol
stock initial : 10.55 mg

0.22 % dt 0,21 diponible

0,09 % dt 0,04 disponible

0.04% dt 0,04 disponible

Soit 0,06%

Soit 0,72 % dt 0,05 disponible

Soit 0,18 %

Soit 0,73 % dt 0,07 disponible

Bilan du Zinc Tmoin

Litire 2,29 10-3 mg

Boue
0.55 % dt 0,08 disponible

Boue
102.21 mg

Litire 2,29 10-3 mg

1% dt 0,55 disponible

Sol
stock initial :536.15 mg

0,62 % dt 0,12 disponible

Sol
stock initial : 683.77 mg

0.58 % dt 0,23 disponible

0,24 % dt 0,04 disponible

0.11 % dt 0,02 disponible

Soit 0,011%

Soit 3.56 % dt 0,23 disponible

Soit 0,045 %

Soit 1,69 % dt 0,8 disponible

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Ces bilans montrent que la contribution de ces 2 espces lombriciennes dans la redistribution des ETM dans le sol est modeste : 1 3% des ETM du stock initial sont redistribus dans les turricules et parois de galeries et un maximum de 0,18% dans les eaux de percolation. En terme de bilan, la redistribution globale du cuivre, plomb, cadmium et zinc dans les turricules et parois de galeries est plus importante pour les modalits Tmoin. Par exemple, pour le zinc, 3,6 % du zinc prsent dans le stock initial est redistribu dans les microsites de la modalit Tmoin pour 1,69% dans le cas de la modalit Boue. Cette redistribution plus importante dans les microsites de la modalit Tmoin sexplique par le fait que les lombriciens ont produit plus de turricules et de galeries dans les modalits Tmoins que dans les modalits Boue (Annexe 5). Deux hypothses peuvent expliquer cette observation : ! Une toxicit de boues sur les lombriciens. La prsence de boue na pas eu dimpact toxique visible sur les paramtres biodmographiques des deux espces lombriciennes. Limportante mortalit observe pour L.terrestris dans les deux modalits serait plutt due une dure de jeun trop longue pour cette espce pi-ancique. Cependant, lactivit proprement dite des lombriciens peut avoir t affecte par la prsence de boue. ! Un effet MO li la prsence de boue. Lautre hypothse pose est que la boue apportant de la MO, les vers doivent parcourir moins de volume afin de puiser une quantit de MO suffisante sa survie. Ce qui pourrait galement expliquer le fait que moins de turricules et de galeries aient t produits en prsence de boue.

Il faut cependant distinguer la redistribution inter-compartiment (concentration totale dans le sol, turricules et parois de galeries) de la redistribution intra-compartiment (changement de disponibilit et de phases porteuses). Or, si la redistribution inter-compartiment du cuivre, plomb, cadmium et zinc est plus importante dans le cas des modalits Tmoin, la redistribution intracompartiment est plus importante dans le cas de la modalit Boue : la part dlments potentiellement disponibles dans les microsites de la modalit Boue est suprieure celle de la modalit Tmoin. Il semble donc quen terme de changement de spciation (ractivit), le Cu, Pb, Cd et Zn issus de la boue constituent un pool plus facilement mobilisable que les ETM du fond gochimique. La redistribution de ces lments sous des formes plus potentiellement disponibles dans les microsites peut favoriser le transfert de ces lments vers les nappes.

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En conclusion rappelons que deux sries dexprimentations nous ont permis de sparer laction des lombriciens sur la redistribution des ETM dans les eaux de percolation et les compartiments du sol savoir le sol environnant, les turricules et les parois de galeries. Le rle des turricules et des parois galeries en tant quinterfaces chimiques ractives pouvant modifier la spciation des ETM est mis en vidence : la distribution chimique et physique des ETM dans ces microsites tant diffrente de celle sol environnant. Deux types de redistribution ont t identifis : Une redistribution alimentaire : Lingestion de particules plus ou contamines dtermine les concentration totales en ETM doss dans les microsites, contribuant ainsi une redistribution des ETM entre compartiment (sol, turricule et parois de galeries). Cette redistribution alimentaire peut galement influer sur la distribution des ETM au sein mme de ces compartiments : les MOP prfrentiellement ingres par le ver deviennent dans les turricules et parois de galeries, une des principales fractions de stockage de ces ETM (Cu, Pb, Cd et Zn). Une redistribution physico-chimique lie aux activits lombriciennes (ingestion, digestion, bioturbation) et son cortge de ractions associes (activit des micro-organismes, pH, CEC, ) : ceci va modifier la spciation des ETM dans les microsites, les rendant gnralement plus disponibles.

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Ingestion Slective

Caractrisation des microsites Granulomtrie Teneurs en C, N et ETM

Ac

tio

nd ire cte

Redistribution alimentaire
Redistribution chimique Modification Spciation Redistribution physique

Ver/Sol/ETM
Ac tio nd ni ire cte

Redistribution physico-chimique
Bioturbation " Dpt de mucus " Enrichissement en C " Activit des micro-organismes Modification des paramtres physico-chimiques (pH, potentiel doxydo-rduction, )

Figure V.3 Schma de redistribution des ETM par les lombriciens

Les modifications de spciation des ETM au niveau des microsites et notamment des parois de galeries peuvent avoir une influence sur la qualit des eaux de percolation. Les flux dlments traces mtalliques dans les eaux de percolation augmentent en prsence de ver. Cette augmentation dpend en premier lieu de laugmentation de la conductivit hydraulique due la prsence de galerie. Des processus physico-chimiques interviennent galement au niveau des biostructures lombriciennes influenant le transfert des ETM vers les nappes : ces processus pouvant acclrer le transfert ou le retarder. La part prise par laugmentation de la conductivit hydraulique et les modifications physico-chimiques nont pu tre dissocis.

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Interface physico-chimique ractive # modification de la spciation des ETM Favorise le lessivage des ETM

Prsence de galeries # Augmentation de la conductivit hydraulique Augmentation des flux de sortie dETM

Figure V.4 Influence des lombriciens sur la qualit des eaux de percolation

Des travaux complmentaires permettraient de prciser le rle des lombriciens dans la redistribution des ETM : ! Il conviendrait de mieux identifier lorigine du mtal rellement redistribu dans les microsites. Lutilisation de marqueur isotopique associs aux ETM de la boue permettrait lidentification exacte des ETM redistribus dans les turricules et les parois de galeries. ! Il conviendrait galement dvaluer plus prcisment la redistribution des ETM du sol et non de la litire. La mise en place dexprimentation plus courte 2 mois, avec et sans litire permettrait ainsi de diffrencier les deux type de redistribution : la redistribution lie au comportement alimentaire du ver et celle lie aux processus physico-chimiques se droulant dans les microsites. ! Il conviendrait de mieux comprendre les processus modifiant la spciation des ETM dans les biostructures. La ralisation dextractions squentielles plus compltes, ainsi que le suivi de diffrents facteurs comme le pH, la CEC et le potentiel doxydorduction dans les microsites pourraient apporter des lments de rponses quant la comprhension des

121

mcanismes responsables du changement de spciation des ETM dans les microsites. ! Enfin, il conviendrait de dterminer faire la part entre les phnomnes chimiques et physiques intervenant dans laugmentation des flux dlments traces dans les eaux de percolation en prsence de lombriciens, aprs lessivage complet de la fraction des ETM prsents dans la fraction hydrosoluble.

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136

ANNEXES

137

ANNEXE 1
Consommation moyenne de litire (exprimentation 2)

Modalit Tmoin

Modalit Boue

L.terrestris N. giardi

++++

+++ ++

++

++++ Consommation moyenne entre 75 et 100% de la litire +++ Consommation moyenne entre 50 et 75% de la litire ++ Consommation moyenne entre 25 et 50% de la litire + Consommation moyenne < 25% de la litire 0 Pas de consommation de litire

138

ANNEXE 2
Bilan fractionnement granulo-densimtrique

Fractions m 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2 % Sol Total 9,02 2,29 2,13 14,28 35,08 24,60 %C 1,32 0,23 0,22 7,84 10,79 12,79

Turricules Lumbricus terrestris %N 0,56 0,29 0,34 4,17 15,68 36,07 % Cu 7,87 1,44 1,34 8,04 24,34 37,01 % Cd 7,09 2,77 3,27 8,11 23,69 39,11 % Pb 8,87 3,08 3,68 9,43 37,87 72,49 % Zn 9,65 2,32 2,38 4,73 19,82 51,07

200-2000 MOP 100-200 MOP 50 - 100 MOP Somme

7,92 2,16 2,53 100,00

38,04 8,08 8,25 87,56

14,80 6,38 7,07 85,36

7,32 5,69 7,26 100,31

7,68 4,25 6,06 102,04

2,51 2,54 4,99 145,46

3,93 2,62 3,43 99,94

Fractions m 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2 % Sol Total 9,24 2,04 1,21 13,80 40,18 27,86

Parois de galeries Lumbricus terrestris %C 3,27 0,38 0,21 7,96 17,93 22,83 %N 0,82 0,22 0,14 3,49 23,16 44,90 % Cu 10,55 1,31 0,78 6,35 26,70 41,92 % Cd 7,59 2,22 1,49 5,54 23,07 39,72 % Pb 11,37 2,57 1,77 7,41 32,12 65,67 % Zn 11,66 1,90 1,17 4,35 20,46 52,60

200-2000 MOP 100-200 MOP 50 - 100 MOP Somme

2,48 0,95 2,24 100,00

24,14 6,48 7,76 90,96

5,72 4,33 6,41 89,19

3,13 3,30 5,85 99,90

2,20 2,17 5,21 89,20

1,02 1,75 4,95 128,61

1,21 1,18 2,98 97,51

139

ANNEXE 2
Bilan fractionnement granulo-densimtrique
Fractions m 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2 % Sol Total 7,04 2,30 2,37 15,82 39,36 27,82 %C 1,91 0,54 0,40 7,61 16,09 22,35 Turricules Nicodrilus giardi %N 0,58 0,50 0,51 4,17 21,13 43,35 % Cu 7,70 1,61 1,77 7,83 29,54 44,00 % Cd 4,69 2,67 3,58 7,55 27,37 46,69 % Pb 7,50 3,22 3,92 8,71 31,55 67,66 % Zn 7,29 2,14 2,48 4,70 22,03 54,50

200-2000 MOP 100-200 MOP 50 - 100 MOP Somme

2,71 0,97 1,61 100,00

26,16 6,76 7,43 89,25

6,40 4,32 6,53 87,49

3,23 3,88 6,60 106,18

2,79 2,77 5,77 103,87

1,11 2,13 0,00 125,80

1,29 1,46 3,11 98,99

Fractions m 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2 % Sol Total 8,89 1,95 1,98 15,20 41,24 28,59 %C 3,02 0,77 0,41 7,90 23,38 34,17

Parois de galeries Ng %N 1,17 0,45 0,45 4,14 25,10 47,19 % Cu 11,97 1,45 1,41 6,43 27,09 42,69 % Cd 8,09 2,28 3,30 7,07 26,59 44,95 % Pb 11,37 2,65 3,07 8,51 30,66 54,05 % Zn 13,25 1,82 2,01 4,18 21,02 54,31

200-2000 MOP 100-200 MOP 50 - 100 MOP Somme

0,70 0,48 0,97 100,00

12,42 5,40 7,12 94,62

3,01 3,20 5,68 90,40

1,78 2,52 4,36 99,69

1,01 1,42 3,02 97,75

0,74 1,52 2,34 114,92

0,53 0,79 1,81 99,73

140

ANNEXE 2
Bilan fractionnement granulo-densimtrique
Fractions m 200-200 100-200 50 -100 20 -50 2-20 0-2 % Sol Total 13,68 3,02 1,92 8,90 5,86 3,32 %C 0,42 0,05 0,09 6,47 3,51 2,79 %N 0,13 0,04 0,05 5,06 5,03 7,92 Litire % Cu 3,94 0,87 0,83 10,58 8,84 9,92 % Cd 1,01 0,30 0,47 13,37 9,91 8,50 % Pb 9,97 3,04 3,21 65,59 67,32 65,81 % Zn 3,03 0,75 0,76 9,78 8,38 10,17

200-2000 MOP 100-200 MOP 50 - 100 MOP Somme

49,69 6,61 7,01 100,00

61,59 7,49 8,11 90,52

50,11 9,29 9,74 87,38

33,82 9,10 10,19 88,09

36,50 11,42 13,63 95,12

37,90 16,98 35,57 305,41

31,55 9,01 10,17 83,61

Fractions m 50-2000 20 -50 2-20 0-2 % Sol Total 2,80 4,66 18,44 56,56 %C 0,72 1,91 10,88 58,29 %N 0,23 0,54 8,27 52,74

Boues % Cu 0,62 1,11 1,57 81,35 % Cd 0,45 1,29 9,24 86,68 % Pb 0,92 8,34 18,93 72,56 % Zn 0,62 1,21 9,23 87,10

200-2000 MOP 100-200 MOP 50 - 100 MOP Somme

6,05 1,94 9,56 100,00

10,31 2,92 10,44 95,47

3,34 1,39 7,20 73,72

2,91 2,39 9,53 99,47

2,60 1,51 8,80 110,57

2,48 1,37 8,53 113,12

2,74 1,71 9,89 112,49

141

ANNEXE 3
Distribution du C, N et ETM dans la litire

Teneurs totales en C, N et ETM C N C/N

402,97

g/kg

g/kg

mg/kg

Cd

mg/kg

Cu

mg/kg

Pb

mg/kg

Zn

Litire

414?,91

11,94

< 0,05

5,29

2,855

44,36

Distribution physique du C et N (fractionnement granulo-densimtrique)

80 70
Distribution en %

60 50 40 30 20 10 0
200-2000 100-200 200-2000 100-200 50-100 50-100 20-50 20-50

Carbone Azote
MOP

Carbone MOP Azote MOP

2-20

2-20

0-2

<2

Fractions (m)

142

ANNEXE 3 (bis)
Distribution du C et N et ETM dans la litire

Distribution Chimique des ETM (Disponibilit)

100 80

Distribution en %

60

Fraction potentiellement disponible

40

Fraction rsiduelle
20 0

Cadmium

Cuivre

Plomb

Zinc

Distribution physique des ETM (fractionnement granulo-densimtrique)

45 40

Cadmium Cuivre Plomb

MOP

Distribution en %

35 30 25 20 15 10 5 0
200-2000 1 100-200 2 50-100 3 20-50 4 2-20 5 <6 2

Zinc Cadmium MOP Cuivre MOP Plomb MOP

Fractions (m)

Zinc MOP

143

ANNEXE 4
Distribution du C, N et ETM dans la boue

Teneurs totales en C, N et ETM

g/Kg

g/Kg

C/N
188,34

mg/Kg

Cd

mg/Kg

Cu

mg/kg

Pb

mg/kg

Zn

Boue

221,42

33,08

22,09

744

771

2905

Distribution physique du C et N (fractionnement granulo-densimtrique)

80 70 Distribution en % 60 50

Azote Carbone Carbone MOP

40 30 20 10 0
200-2000 100-200 50-100 20-50 2-20 <2

Azote MOP

Fractions (m)

144

ANNEXE 4 (bis)
Distribution du C, N et ETM dans la boue

Distribution Chimique des ETM (Disponibilit)

100

Distribution en %

80 60 40 20 0

Fraction potentiellement disponible Fraction rsiduelle

Cadmium

Cuivre

Plomb

Zinc

Distribution physique des ETM (fractionnement granulo-densimtrique)

90 80 70
Distribution en %

Cadmium Cuivre Plomb Zinc Cadmium MOP Cuivre MOP

MOP

60 50 40 30 20 10 0 200-2000 200-2000 100-200 100-200 50-100 50-100 20-50 20-50 2-20 2-20 0-2 <2

Plomb MOP Zinc MOP

Fractions (m)

145

ANNEXE 5

Production de turricules et Quantit de matriel chantillonn dans les parois de galeries

Modalit Tmoin
L.terrestris N.giardi

Modalit Boue
L.terrestris N.giardi

Production de turricules (g/microcosme/3vdt) Quantit de matriel chantillonn dans les galeries Du niveau 1 (g) Quantit de matriel chantillonn dans les galeries Du niveau 2 (g)

37,3

9,7

48

34

43,4

71

25,5

41,67

12,5

110

7,5

61,66

146

ANNEXE 6
Bilan du cuivre Tmoin
Litire 3,8 10-4 mg

Boue
0.19 % dt 0,07 disponible

Boue
30.07 mg

Litire 3,8 10-4 mg

1.03 % dt 0,79 disponible

Sol
stock initial : 76.35 mg

1.2 % dt 0,59 disponible

Sol
stock initial : 103.8 mg

1.10 % dt 0,71 disponible

1.9 % dt 0,77 disponible

0.88 % dt 0,56 disponible

Soit 3.29 % dt 1,43 disponible

Soit 3.01 % dt 2,06 disponible

Bilan du Plomb

Tmoin
Litire 4,48 10-4 mg

Boue
0.13 % dt 0,06 disponible

Boue
22.5 mg

Litire 4,48 10-4 mg

0.79 % dt 0,52 disponible

Sol

1.34 % dt 0,57 disponible

Sol
stock initial : 208.72 mg

0.73 % dt 0,48 disponible

1.34 % dt 0,86 disponible

0.97 % dt 0,53 disponible

Soit 2.81 % dt 1,49% de disponible

Soit 2.49 % dt 1,53 disponible

147

ANNEXE 6 (Bis)
Bilan du Cadmium

Tmoin
Litire 1,12 10-5 mg

+ Boue
0.079 % dt 0,07 disponible

Boue
0.7 mg

Litire 1,12 10-5 mg

0.37 % dt 0,27 disponible

Sol
stock initial : 7.9 mg

0.66 % dt 0,33 disponible

Sol
stock initial : 10.55 mg

0.33 % dt 0,21 disponible

0.75 % dt 0,50 disponible

0.34 % dt 0,19 disponible

Soit 1.48 % dt 0,9 disponible

Soit 1.04 % dt 0,67 disponible

Bilan du Zinc Tmoin

Litire 2,29 10-3 mg

+ Boue
0.22 % dt 0,03 disponible

Boue
102.21 mg

Litire 2,29 10-3 mg

0.68 % dt 0,42 disponible

Sol
stock initial :536.15 mg

1.39 % dt 0,3 disponible

Sol
stock initial : 683.77 mg

0.72 % dt 0,46 disponible

1.95 % dt 0,3 disponible

0.90 % dt 0,24 disponible

Soit 3.56 % dt 0,63 disponible

Soit 2.3 % dt 1,12 disponible

148