Patente de ttulo de la aplicacin:

Preparacin y uso de Pouteria Lucuma Extract

Resumen:
Un mtodo de preparacin de Pouteria lcuma extracto fue desarrollado que comprende la extraccin del aceite de la nuez. El aceite lcuma tuerca (LNO) fue eficaz para inducir la migracin celular, la regeneracin del tejido y mejorar la cicatrizacin de heridas. El aceite de nuez de lcuma proporciona un agente que es til para el mantenimiento teraputico o cosmtico de la piel y el cuero cabelludo.

Reclamos:

1 Un mtodo de preparacin de un extracto de Pouteria lcuma tuerca que comprende:. (A) moler una tuerca Pouteria lcuma a un polvo, (b) extraccin de los aceites de nuez de polvo con el lquido, y (c) retirar el fluido, para obtener un aceite. 2. El mtodo de la reivindicacin 1, que comprende adems la preparacin de una formulacin farmacutica que comprende el aceite de nuez. 3. El mtodo de la reivindicacin 1, que comprende adems la preparacin de una formulacin cosmtica que comprende el aceite de nuez. 4. El mtodo de la reivindicacin 1, en el que el fluido se selecciona del grupo que consiste en heptano y hexano.

5. El mtodo de la reivindicacin 4, en el que el lquido se elimina por evaporacin. 6.El mtodo de la reivindicacin 4, en el que la proporcin de polvo de tuerca a fluido es entre 1 g: 10 ml y 1 g: 100 ml, peso a volumen. 7. Un extracto de Pouteria lcuma tuerca que comprende el aceite de nuez. 8. Una formulacin cosmtica que comprende el extracto de la reivindicacin 9. La formulacin de la reivindicacin 8, que comprende adems un antibitico. 10. La formulacin de la reivindicacin 8, que comprende adems una piel de la salud agente promotor. 11. La formulacin de la reivindicacin 10, en el que la salud de la piel agente promotor se selecciona del grupo que consiste en manteca de karit, un antioxidante, un retinoide, un humectante, un agente promotor de colgeno, una pantalla solar, un cido alfa hidroxi, jojoba aceite, un extracto de seda, palmitato de isopropilo, metil parabeno y propil parabeno. 12. La formulacin de la reivindicacin 11, en el que el antioxidante se selecciona del grupo que consiste en vitamina A, vitamina C y vitamina E. 13. La formulacin de la reivindicacin 8, formulada como una crema, locin, gel, pasta o spray para aplicacin a la piel o el cuero cabelludo. 14. Un mtodo de curacin de heridas que comprende administrar una dosis eficaz de un extracto de nuez de Pouteria lcuma. 15. Un mtodo de induccin de la migracin celular, que comprende poner en contacto una clula con el extracto de la reivindicacin 16. El mtodo de la reivindicacin 15, en donde la clula es un fibroblasto. 17. Un mtodo de mejorar la regeneracin de los tejidos que comprende poner en contacto un tejido capaz de regeneracin con Pouteria lcuma aceite de nuez, en el que el tejido se regenera a

una velocidad que es mayor que la exhibida por el tejido en ausencia del aceite de nuez. 18. Un mtodo para promover la curacin de la piel que comprende el contacto de la piel con una composicin farmacutica que comprende el extracto de la reivindicacin. 19. Un mtodo de reduccin de envejecimiento de la piel que comprende el contacto de la piel con una composicin farmacutica que comprende el extracto de la reivindicacin. 20. Un mtodo de curacin de una quemadura de la piel que comprende el contacto de la piel se queme con una composicin farmacutica que comprende el extracto de la reivindicacin 7 en una cantidad eficaz para promover la curacin de la piel en un paciente en necesidad del mismo.

21. El mtodo de la reivindicacin 20, en el que la composicin farmacutica comprende adems un antibitico.

22. Un procedimiento para reducir, eliminar o prevenir una condicin de la piel seleccionado del grupo que consta de acn, envejecimiento de la piel y la piel arrugada que comprende contacto con la piel con una formulacin cosmtica que comprende el extracto de la reivindicacin

23. El mtodo de la reivindicacin 22 en el que la condicin de la piel es la piel arrugada.

24. El mtodo de la reivindicacin 22 en el que la condicin de la piel es el envejecimiento de la piel.

25. El mtodo de la reivindicacin 22, en contacto con la piel con el extracto de la reivindicacin 7 resulta en un aumento relativo en la expresin de una protena seleccionada del grupo que consiste de colgeno y elastina en una clula de la piel.

26. El mtodo de la reivindicacin 22, en el que la formulacin cosmtica comprende adems una composicin anti-acn.

27. El mtodo de la reivindicacin 26, en el que la composicin anti-acn se selecciona del grupo que consiste en cido saliclico, perxido de benzoilo, el cido gliclico, el azufre, el cido retinoico, el agua de turba, limo resorcinol, turba, permetrn, cido azelaico, clindamicina , adapalene, eritromicina y sulfacetamida de sodio.

28. El mtodo de la reivindicacin 27, en el que la formulacin cosmtica comprende adems un antibitico.

29. Un parche transdrmico que comprende un material de almohadilla que tiene una superficie superior y una superficie inferior, un adhesivo sobre la superficie inferior, y una composicin farmacutica que comprende el extracto de la reivindicacin 7 en la superficie inferior.

30. El parche de la reivindicacin 29, que comprende adems un antibitico en la superficie inferior.

Descripcin:
DECLARACIN DE CASOS RELACIONADOS
[0001] Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad de la solicitud provisional de patente de EE.UU. N 61/199, 029 presentada 12 de noviembre 2008, que se incorpora aqu por referencia en su totalidad.

CAMPO
[0002] La descripcin se refiere a extractos de plantas para uso teraputico. Ms particularmente, los extractos se obtienen a partir de especies de Pouteria, por ejemplo, Pouteria lcuma.

ANTECEDENTES
[0003] Los aceites comestibles de origen natural son algunos de los productos ms consumidos en la industria alimentaria. Aceites de soja, maz, canola y se encuentran entre los ms consumidos en todo el mundo, pero se sabe poco acerca de las composiciones de

menor cultivos conocidos, incluyendo la presencia y composicin de los aceites vegetales. Esta relativa falta de conocimiento es sorprendente, dado que los aceites vegetales son una fuente importante de cidos grasos poliinsaturados (PUFAs) con propiedades que promueven la salud. [0004] lcuma, tambin llamado lucmo o lcuma, es un rbol frutal originario de las tierras altas del oeste de Chile, Per y sur de Ecuador. A excepcin de unas pocas plantaciones en Costa Rica, la lcuma no se cultiva fuera de su regin endmica. Los frutos son ovalados y de color amarillo en la madurez, con una carne de color amarillo seco. Se pueden comer frescas, pero comnmente la pulpa del fruto se deshidrata y se utiliza como saborizante en postres y bebidas. Hay pocos informes publicados sobre los componentes bioactivos que se encuentran en la lcuma, a excepcin de los que presentan los componentes nutricionales de la pulpa del fruto. [0005] Se sabe comnmente que la curacin de heridas se produce como un proceso multietapa. Un paradigma de la curacin de heridas divide el proceso en una fase inflamatoria, la fase proliferativa, y una fase de remodelacin. Mejorando el cuerpo el proceso natural de cicatrizacin de la herida sera deseable para acelerar los tiempos de recuperacin despus de la lesin. Por otra parte, una curacin ms rpida sera limitar el tiempo durante el cual las infecciones oportunistas puede afianzarse, reduciendo as las complicaciones asociadas con heridas de la piel. [0006] Adems de los problemas de salud, los seres humanos tambin tienen problemas estticos relacionados con su apariencia y la imagen que se proyecta. La piel, el rgano ms visible para los dems, es una fuente frecuente de problemas estticos. En consonancia con la realidad de las preocupaciones estticas, la industria cosmtica y cuidado de la piel han sido durante mucho tiempo importantes sectores de comercio y continuar creciendo a medida que ms cosmecuticos eficaces se desarrollan. Concomitante con este crecimiento es el aumento continuo en la investigacin relacionada con la industria cosmtica y cuidado de la piel. Ms all de cicatrices en la piel asociado a la cicatrizacin inadecuada o subptima, incluyendo la curacin quemaduras, cicatrices en la piel se asocia con condiciones tan generalizados como el acn. Adems, el proceso natural de envejecimiento implica cambios en la estructura y funcin de la piel que muchos ven como la imposicin de cambios perjudiciales en la propia imagen. Envejecimiento de la piel, por ejemplo, se asocia con la prdida no deseable de elasticidad, la hidratacin y el color, entre varias otras propiedades de la piel que, en el ojo del pblico,

cambiar a peor con el tiempo. Una condicin de clsico, la piel no deseada con frecuencia como una seal de paso de los aos es la piel arrugada. Los esfuerzos de los cosmticos cuidado de la piel / de la industria para hacer frente a estos problemas ha llevado al aumento de la investigacin se ha sealado, ya que la industria se esfuerza por ofrecer al pblico productos que fiable y eficaz afectar la apariencia esttica para mejorar. [0007] As pues, existe en la tcnica una necesidad de desarrollar nuevos productos teraputicos y / o cosmticos y mtodos para aumentar la velocidad y la eficacia de la curacin de heridas y / o para abordar los problemas cosmticos con enfermedades de la piel tales como cicatrices, envejecimiento, arrugas, y prdida de elasticidad, entre otros.

RESUMEN
[0008] La divulgacin satisface al menos una de las necesidades mencionadas anteriormente en la tcnica de proporcionar composiciones que comprenden un extracto de planta teraputicamente tiles en mtodos teraputicos para fines de curacin, tales como la curacin de heridas y quemaduras curacin, y cosmticamente til para mejorar la apariencia de la piel (por ejemplo, signos de envejecimiento de la piel, incluyendo la piel arrugada) y para mantener la piel saludable, as como para reparar los defectos de la piel, incluyendo el acn. Estas composiciones y mtodos contribuir a un ahorro significativo en los costos de salud y / o cosmticos, mientras que la mejora de los procesos de curacin y la elevacin de la calidad de vida de los segmentos importantes de la poblacin humana. [0009] Un aspecto de la descripcin proporciona un mtodo para preparar un extracto de la tuerca de Pouteria lcuma, por ejemplo, Pouteria lcuma O. Ktze, que comprende moler la tuerca en un polvo, extraer el polvo de la tuerca con el lquido y eliminacin del fluido a obtener aceite de nuez de lcuma (LNO). En algunas formas de realizacin, el mtodo comprende adems la etapa de preparacin de una formulacin farmacutica o cosmtica que contiene el aceite de nuez. En una realizacin del mtodo, la tuerca se seca primero y despus se muele para el polvo. En una realizacin, el lquido usado se selecciona del grupo que consiste de heptano y hexano (por ejemplo, heptano) y, en una realizacin relacionada, el lquido se elimina por evaporacin. En otra realizacin, el fluido, por ejemplo, heptano o hexano, que se aade al polvo de tuerca en una proporcin que es entre 1 g: 10 ml y 1 g: 100 ml (peso tuerca: volumen de fluido). En algunas

realizaciones, el aade al polvo de 1:15, 1:20, 1:25, 1:70, 1:75, 1:80,

fluido, por ejemplo, heptano o hexano, que se tuerca en una relacin de aproximadamente 1:10, 1:30, 1:35, 1: 40, 1:45, 1:50, 1:55, 1:60, 1:65, 1:85, 1:90, 1:95, 1:100 (peso: volumen).

[0010] Segn otro aspecto, un extracto de nuez Pouteria lcuma que comprende el aceite de nuez se proporciona. La divulgacin comprende una variedad de fluidos para la preparacin de los extractos de nuez de lcuma, que pueden dar lugar, por ejemplo, dispersin, emulsin, o solvatacin del aceite de nuez de lcuma. Preferiblemente, el aceite de nuez es al menos parcialmente disuelto en el fluido, por ejemplo, disolvente, utilizado para la extraccin. Fluidos de ejemplo incluyen pero no se limitan a no polares compuestos orgnicos tales como cloroformo, acetona, acetonitrilo, diclorometano, acetato de etilo, alcanos, tales como heptano o hexano, y compuestos orgnicos ligeramente polares tales como lineales o ramificados, alcoholes primarios, secundarios, o terciarios, por ejemplo, isopropanol, metanol, etanol y glicol, as como dixido de carbono supercrtico. En algunas realizaciones, el fluido es heptano. [0011] Segn otro aspecto, una composicin fitomedicinal se proporciona que comprende un extracto de Pouteria lcuma tuerca que comprende el aceite de nuez. Fitomedicinales composiciones de acuerdo con la divulgacin comprenden un extracto de nuez de lcuma como se describe aqu. Cualquier fluido que se describe aqu se puede utilizar en el proceso de extraccin en la preparacin de una composicin fitomedicinal, y cualquier fluido biocompatible puede ser usado en las composiciones fitomedicinales, que son adecuados para la administracin a mamferos vivos, por ejemplo humanos. [0012] En otro aspecto, la descripcin proporciona una formulacin cosmtica que comprende el aceite de nuez. En algunas realizaciones, la formulacin cosmtica comprende un antibitico. En an otras realizaciones, la formulacin cosmtica comprende una piel de la salud agente promotor. La salud de la piel agente promotor puede ser manteca de karit, un antioxidante, un retinoide, un humectante, un agente promotor de colgeno, una pantalla solar, un cido alfa hidroxilo, aceite de jojoba, un extracto de seda, palmitato de isopropilo, metil paraben, y propil paraben. El antioxidante puede ser la vitamina A, la vitamina C o la vitamina E. La composicin fitomedicinal y la formulacin cosmtica, cada uno puede ser formulado como una crema, locin, gel, pasta o spray para aplicacin.

[0013] Sin embargo, otro aspecto es un procedimiento para estimular la curacin de heridas que comprende administrar una dosis eficaz de la composicin fitomedicinal de la divulgacin (LNO). En un aspecto relacionado, se describe aqu un mtodo de induccin de la proliferacin celular por contacto una clula con LNO. En una realizacin preferida, la clula es un fibroblasto. [0014] Otro aspecto se refiere a un mtodo de mejorar la regeneracin de los tejidos en contacto con un tejido capaz de regeneracin con aceite de P. tuerca lcuma modo que el tejido se regenera a una velocidad que es ms rpida que es exhibida por el tejido en ausencia de la tuerca aceite. En un aspecto relacionado, la descripcin incluye un mtodo para promover la curacin de la piel que comprende el contacto de la piel con una formulacin que comprende el extracto de aceite de nuez. [0015] Todava otro aspecto es un mtodo de cicatrizacin de una quemadura de la piel que comprende el contacto de la piel se queme con una composicin farmacutica que comprende el extracto de P. tuerca lcuma en una cantidad eficaz para promover la curacin de la piel en un paciente en necesidad del mismo. En un aspecto, la composicin farmacutica comprende adems una piel de la salud agente promotor. En otro aspecto, la composicin farmacutica comprende adems un antibitico. [0016] An otro aspecto es un mtodo para reducir, eliminar o prevenir una condicin de la piel seleccionado del grupo que consta de acn, envejecimiento de la piel y la piel arrugada que comprende contacto con la piel con una formulacin cosmtica que comprende el extracto descrito en la presente memoria, es decir, un extracto que comprende lcuma aceite de nuez. En realizaciones atencin a los mtodos de reducir, eliminar o prevenir el envejecimiento de la piel o de la piel arrugada, las formulaciones cosmticas de acuerdo con la divulgacin antagonizar reduccin en la expresin de colgeno y / o elastina, y puede inducir la expresin de colgeno y / o elastina. En algunas realizaciones, la formulacin cosmtica comprende adems una composicin anti-acn y / o un antibitico. En una realizacin relacionada, la composicin anti-acn puede ser cido saliclico, perxido de benzoilo, cido gliclico, azufre, cido retinoico, agua turba, limo resorcinol, turba, permetrn, cido azelaico, clindamicina, adapaleno, eritromicina y sulfacetamida de sodio. [0017] En otro aspecto, la descripcin proporciona un apsito para la entrega de una composicin de la divulgacin, en el que el apsito comprende una composicin que comprende un aceite de nuez

de lcuma. Despus de la aplicacin de la composicin tpica para el tejido comprometido, el tejido puede ser cubierto con un apsito. [0018] En otro aspecto, un parche transdrmico que comprende un material de almohadilla que tiene una superficie superior y una superficie inferior, un adhesivo sobre la superficie inferior, y una composicin farmacutica que comprende un aceite de nuez de lcuma en la superficie inferior. En una realizacin relacionada, el parche comprende adems un antibitico. [0019] Otras caractersticas y ventajas de la presente descripcin se harn evidentes de la siguiente descripcin detallada. Se debe entender, sin embargo, que la descripcin detallada y los ejemplos especficos, aunque indican realizaciones preferidas de la descripcin, se dan a modo de ilustracin solamente, porque varios cambios y modificaciones dentro del espritu y alcance de la descripcin sern evidentes para aquellos expertos en la tcnica a partir de esta descripcin detallada.

Breve descripcin de los dibujos

[0020] El siguiente dibujo forma parte de la presente memoria descriptiva y se incluyen para ilustrar adicionalmente aspectos de la divulgacin. La revelacin puede entenderse mejor por referencia a las figuras de los dibujos en combinacin con la descripcin detallada de las realizaciones especficas aqu presentadas. [0021] la figura. 1 es un grfico de barras de la migracin de clulas de fibroblastos in vitro. [0022] la figura. La figura 2 muestra los resultados de la cicatrizacin de heridas y modelos in vivo de regeneracin. La figura. La figura 2A muestra los resultados de un modelo de cicatrizacin de heridas. La figura. 2B muestra los resultados cuando tailfin primordios de las larvas de pez cebra 5-das de edad (n = 6) fueron amputadas justo posterior a la notocorda. [0023] la figura. 3 proporciona un perfil cromatogrfico de FAMEs de LNO analizados por GC-MS. (A) Cromatogramas de LNO 10 de dilucin, y (B) mezcla industria alimentaria estndar de 37 FAMEs, tanto LNO y estndares se inyectaron a 100 mg / ml. [0024] la figura. 4 muestra un curso de tiempo de efecto in vivo de la cicatrizacin de heridas LNO. El porcentaje de cierre de la

herida se evalu durante 11 das de la aplicacin tpica de LNO 200, 500 y 1000 g / ratn. Los valores se presentan como media error estndar de cinco rplicas (* p <0,05 vs vehculo). ANOVA de un factor seguido por el test de Dunnett para comparaciones se aplic entre el grupo tratado y el vehculo. [0025] la figura. 5 muestra la progresin de la cicatrizacin de la herida drmica inducida por LNO. Imgenes representativas de la progresin de la curacin de heridas en ratones despus de la aplicacin diaria de LNO (500 y 1000 mg / mL), vehculo (carboximetilcelulosa 50,5%, PBS pH 7,4) y CGS (10 ug / ratn). Fotos de las heridas fueron tomadas en das alternos durante once das despus de la piel heridas (DPSW). [0026] la figura. 6 ilustra el efecto sobre la regeneracin de LNO aleta de la cola y la angiognesis en larvas de pez cebra transgnico. (A) representativos micrografas fluorescentes de GFP-positivas las clulas endoteliales durante la regeneracin de aleta de la cola inducida por 100 ug / ml de LNO (LNO 100). B. Cuantificacin de la regeneracin de la cola clulas endoteliales 48 horas despus de la amputacin (hpa) de la aleta caudal. Los resultados se expresaron como media error estndar de nueve repeticiones (* p = 0,003, p = 0,079 vs control). [0027] la figura. 7 se establece el efecto dependiente de la dosis de LNO una repoblacin aleta caudal endotelial de las larvas de pez cebra transgnico. El aumento de la fluorescencia GFPpositivas las clulas endoteliales 48 horas despus de la amputacin (hpa) de aleta de la cola era dependiente de la dosis. Los resultados se expresaron como media error estndar de nueve rplicas. [0028] la figura. 8 muestra el efecto sobre la migracin de LNO fibroblastos humanos. Humanos fibroblastos neonatales fueron marcados con la sonda fluorescente verde de calcena-AM. El efecto de LNO sobre la migracin de fibroblastos se evalu usando la ORIS cell ensayo de migracin como se describe en los Ejemplos. Las imgenes digitales fueron tomadas 72 horas despus de comenzar el experimento. De izquierda a derecha: el tiempo cero (t = 0), Vehicle, LNO 40 ug / mL (LNO 40) y LNO 60 ug / mL (LNO 60). [0029] la figura. 9 ilustra el efecto de LNO en la migracin de clulas de fibroblastos en el ensayo de rayado. Scratched fibroblastos fueron tratados con LNO 60 mg / ml (n = 3) o con concentraciones equivalentes de cidos grasos puros (FAS), cido oleico (OA, n = 4), cido linoleico (LA, n = 3) o 10% fetal suero

bovino (FBS) como control positivo. El efecto de LNO y AF se evaluaron como se describe en los Ejemplos. Los valores son el promedio de cuatro repeticiones error estndar (** p <0,01 vs FBS, One way ANOVA, Newman-Keuls prueba de comparacin mltiple). [0030] la figura. 10 muestra el efecto sobre la expresin de LNO vinculina y estrs formacin de fibras en los fibroblastos. Fibroblastos drmicos humanos fueron tratados con LNO 60 mg / mL o del vehculo y con tincin doble con rodamina faloidina (rojo) y mAb anti-vinculina (verde). LNO caus una disminucin leve en las fibras de estrs (F-actina) y el aumento de la inmunoreactividad para vinculin. [0031] la figura. 11 establece el efecto de LNO en LPS inducido por la produccin de xido ntrico en clulas RAW 264,7. Clulas RAW fueron pretratados con vehculo solo o bien LNO durante 2 horas. Posteriormente, LPS (1 mg / mL) se aadi a cada pocillo y se incubaron durante 8 horas. LPS aument significativamente la produccin de NO en las clulas no estimuladas (control). LNO disminucin de LPS inducido por la produccin de NO de una manera dependiente de la concentracin. Los resultados se expresan como media error estndar (*** p <0,001 frente a LPS ** p <0,01 vs LPS, One way ANOVA, Newman-Keuls prueba de comparacin mltiple). [0032] la figura. 12 muestra el efecto de LNO en la senescencia celular. Ncleos de no senescente (control) y H 2 O 2 inducida por la senescencia (H 2 O 2 y H 2 O 2 + LNO), las clulas se tieron con naranja de acridina y se fotografiaron con un aumento de 25. En las clulas control, la mayora de los ncleos mostraron un fenotipo senescente no clsica con forma alargada nuclear y tamao homogneo. [0033] la figura. 13 muestra el efecto de LNO en la senescencia celular. Estas clulas se observaron bajo un aumento de 100. Morfologa nuclear de la no-senescentes fibroblastos drmicos fue alargada (flechas blancas). Morfologa anormal (globular, doblado, fragmentada o de gran tamao) se observ en los fibroblastos senescentes (flechas de color naranja).

Descripcin detallada
[0034] La descripcin proporciona un mtodo de preparacin de un extracto de la tuerca, o semilla, el fruto de lcuma. El extracto activo es til para la cicatrizacin de heridas, por ejemplo, para el tratamiento de lceras trficas, incisiones quirrgicas, quemaduras, abscesos, y similares. El uso de una tuerca de lcuma

extraer para tratar tales condiciones, o para mejorar o aliviar al menos un sntoma de dicha enfermedad, o para prevenir o reducir la gravedad de dicha condicin, proporciona formas teraputicas tiles que se preparan fcilmente, relativamente barato y segura. Los beneficios para el individuo son evidentes en la reduccin del tiempo necesario para la recuperacin de una herida, el gasto de prevenir o tratar una herida, o mejorar un sntoma de una herida, y el tiempo perdido para herir recuperacin. Para facilitar la comprensin de la descripcin, las siguientes definiciones se proporcionan expresas. [0035] Se describe aqu la composicin bioqumica de no polar orgnico (por ejemplo, heptano) los extractos de aceite de nuez de lcuma (LNO) y medidas de la actividad en bioensayos de LNO varias pertinentes para la curacin de heridas, incluyendo la curacin de quemaduras. GC-MS anlisis de los steres metlicos de cidos grasos (FAMEs) derivados de LNO mostr cinco cidos grasos principales, es decir, el cido linoleico (38,9%), cido oleico (27,9%), cido palmtico (18,6%), cido esterico (8,9%) y cido linolnico (2,9%), que en conjunto representan el 97,2% del contenido total de aceite de la tuerca de lcuma. Un adicional de 16 cidos grasos se encuentran en concentraciones menores. En un modelo murino de la cicatrizacin de heridas, LNO mejorado significativamente cierre cutneo herida. LNO tambin promueve la regeneracin de la cola de aletas en larvas de pez cebra transgnico 48 horas despus de la amputacin. Adems, LNO promovi significativamente la migracin de los fibroblastos humanos y la disminucin de LPS inducido por la produccin de NO en los macrfagos. Fibroblastos LNO-tratados mostraron cambios en la expresin de vinculina y en la formacin de fibras de estrs. LNO no mostraba efecto antibacteriano o anti-hongos. Los resultados indican que la curacin de heridas y propiedades antiinflamatorias de LNO, con su composicin nica de cido graso, se utiliza beneficiosamente en una variedad de aplicaciones farmacolgicas y de cosmtica. [0036] El fruto de Pouteria lcuma O. Ktze, comnmente denominada como "lcuma" en Chile y Per, es ampliamente consumido en estos pases. Lucuma fruta consiste en un comestible parte carnosa exterior y una semilla interior duro, o tuerca, que no es comestible y que normalmente se desecha cuando el fruto es consumido o procesado. Lcuma tuerca, sin embargo, es rico en aceite, la composicin de la que nunca se ha investigado. Tambin existe prcticamente ninguna informacin sobre los efectos de lcuma en la salud humana. Esta descripcin proporciona una descripcin de la composicin bioqumica y efectos farmacolgicos

de Lucuma Nut Oil (LNO). Especficamente se describen aqu los resultados experimentales completos de GC-MS anlisis de los steres metlicos de cidos de LNO y resultados experimentales establecer el efecto de LNO sobre la inflamacin, migracin celular, la angiognesis, la senescencia celular, el crecimiento de bacterias y hongos y cicatrizacin de heridas mediante el uso de varios in vivo y en modelos in vitro. [0037] Tal como se utiliza aqu, el trmino "dosis efectiva" significa una dosis que comprende un extracto de P. lcuma que es capaz de provocar un cambio medible en el tiempo de cicatrizacin de heridas. El valor exacto de una dosis eficaz vara en funcin de la sensibilidad y el tamao de cada paciente, y puede determinarse fcilmente por un experto en la tcnica usando procedimientos convencionales para la administracin sistemtica de agentes teraputicos. Una dosis eficaz de un extracto de nuez de Pouteria lcuma es de entre aproximadamente 200 g por herida (o aplicacin tpica) por da a aproximadamente 1.000 g por herida (o aplicacin tpica) por da. Una dosis eficaz ejemplar es de aproximadamente 500 g por herida / aplicacin por da. [0038] El trmino "extracto" como se usa aqu significa una sustancia o composicin obtenida de una fuente de planta o parte de planta, independientemente de si la sustancia o composicin se encuentra externo a la planta (es decir, un exudado), se encuentra dentro de la planta o parte de la planta pero fuera de las clulas de los mismos, o se encuentra dentro de las clulas de la planta. Qumico y / o la accin fsica, como se entiende en la tcnica, puede ser necesario para obtener la sustancia o composicin de la planta o parte de planta. [0039] Los trminos "vehculo farmacuticamente aceptable" o "vehculo fisiolgicamente aceptable" tal como se utiliza aqu, se refiere a uno o ms materiales de formulacin adecuados para lograr o facilitar la entrega de un extracto de P. lcuma como una composicin farmacutica. [0040] El trmino "salud de la piel agente promotor" significa cualquier composicin conocida en la tcnica para disminuir la inflamacin, reducir las arrugas, elasticidad reparacin, reparar o prevenir la decoloracin, reducir o eliminar el acn, mejorar el tono de la piel, reducir o retardar el envejecimiento de la piel, reducir tamao de poro de piel, mejorar la produccin de colgeno, reponer los nutrientes esenciales de la piel, mejorar la hidratacin de la piel, reducir la flacidez de la piel, mejorar la textura de la piel, o en general, promover la piel sana. Tales

agentes incluyen, pero no estn limitados a, manteca de karit, antioxidantes, retinoides, vitaminas A, C, y E, vaselina, aloe vera, lanolina, agentes promotores de colgeno, filtros solares, cidos alfa hidroxi, aceite de jojoba, extractos de seda, palmitato de isopropilo, metil parabeno y propil parabeno. [0041] "envejecimiento de la piel" tiene un significado aceptado en la tcnica y se caracteriza por algunas o todas de las siguientes propiedades: Epidermis muestra una reduccin progresiva en los melanocitos y clulas de Langerhans disminucin de la densidad; dermis se vuelve relativamente acelular, avascular y menos densa; glndulas nervios, la microcirculacin y el sudor disminuyen gradualmente dando lugar a disminucin de la termorregulacin y la disminucin de la sensibilidad a quemar, hay una prdida progresiva de la elasticidad, y una susceptibilidad creciente a traumtico prpura o hematomas capa subcutnea de la piel muestra atrofia grasa en las mejillas y extremidades ; disminuy lpidos de la superficie, la disminucin de la hidratacin. El envejecimiento de la piel tambin se muestra cada vez mayor decoloracin y pueden mostrar manchas cutneas. [0042] "piel arrugada" se le da el significado que ha adquirido en la tcnica y se refiere a la piel en la que la elasticidad se ha reducido hasta tal punto que los pliegues o arrugas, cada vez ms evidente. [0043] Como se usa en la presente memoria "parche" comprende una composicin tpica de acuerdo con la divulgacin y una capa de recubrimiento, de tal manera que el parche se puede colocar sobre una herida, incisin, o grabar, con lo que la colocacin del parche adyacente / composicin a la superficie del tejido comprometido . Preferentemente, el parche est diseado para maximizar el suministro de la composicin a travs del estrato crneo, epidermis superior, y en la dermis, y para minimizar la absorcin en el sistema circulatorio, reducir el tiempo de demora, promocionar absorcin uniforme, y reducir el frotamiento mecnico. [0044] parches ejemplares incluyen (1) un parche de tipo matriz, (2) el parche de tipo depsito, (3) el laminado multi-frmaco en adhesivo de tipo parche, y (4)-drogas en la monoltico adhesivo de tipo parche; (Ghosh, TK, et al, sistemas de frmacos transdrmicos y tpica Entrega, Interpharm Press, Inc. p 249-297 (1997), incorporado aqu por referencia..). Estos parches son bien conocidos en la tcnica y estn disponibles generalmente en el mercado.

[0045] El trmino "vendaje", como se usa aqu, significa una cubierta diseada para proteger y administrar una composicin o sobre o en la cubierta. "Vestir" incluye los revestimientos tales como un vendaje, que puede ser porosa o no porosa, y varios revestimientos inertes, por ejemplo, una envoltura de pelcula de plstico o de otra pelcula no absorbente. El trmino "vendaje" tambin abarca revestimientos no tejidas o tejidas, en particular revestimientos elastomricos, los cuales permiten calor y transporte de vapor. Estos apsitos permiten el enfriamiento del sitio del dolor, lo que proporciona una mayor comodidad. [0046] El trmino "aceite lcuma tuerca" o "LNO" se usa indistintamente con "aceite Pouteria" para referirse a la composicin teraputica que extrae de la tuerca de la fruta de una planta de la familia Sapotaceae de plantas, tal como una planta de el gnero Pouteria, por ejemplo, Pouteria lcuma. El LNO comprende una pluralidad de compuestos, al menos uno de los cuales es teraputicamente activo en la promocin de la curacin de heridas o quemaduras, en la promocin de la regeneracin o bioregeneration, y para retrasar la senescencia.

La Planta de Pouteria
[0047] La presente aceite teraputico en las composiciones de acuerdo con la divulgacin se obtiene de una planta del gnero Pouteria de plantas o de una planta en un gnero estrechamente relacionado con Pouteria, tales como plantas del gnero Manilkara. El gnero Pouteria de plantas taxonmicamente se organiz dentro de la familia Sapotaceae de plantas con flores perteneciente a la Ericales orden. Las plantas adecuadas que sirven como fuentes de aceite de la teraputica incluyen, pero no se limitan a, especies de Pouteria tales como lcuma (Pouteria lcuma), Mamey (P. sapota), Abiu (P. caimito), Canistel (P. campechina), Verde Sapote (P. viridis), rbol Bully (P. multiforme), Curiola (P. torta), canela manzana (P. hypoglauca), Frutao (P. ramiflora), Negro manzana (P. australis), P. sandwicensis y especies del gnero Manilkara relacionada, por ejemplo, Sapodilla (M. zapota van Royen), incluyendo sus muchos cultivares, as como ausubo (M. bidentata), jaimiqui M., y otros.

Pouteria Petrleo
[0048] Las composiciones de acuerdo con la divulgacin comprender un aceite de Pouteria, que es un extracto teraputicamente til de la tuerca, o semilla, de la fruta de la planta. El extracto de nuez que se conoce como un aceite en un sentido amplio, y puede

incluir compuestos que no son aceites qumicos, tales como cidos orgnicos, hidratos de carbono, y similares. La tuerca de extractos de acuerdo con la divulgacin no comparten la propiedad de ser al menos parcialmente soluble en disolventes orgnicos no polares, por ejemplo, heptano o hexano y, por esa razn, los extractos se trminos generales se conoce como aceites. Adems, debido a que muchos de los extractos de nueces teraputicamente beneficiosos se obtienen de especies del gnero Pouteria, el trmino "aceite Pouteria" se usa en referencia a esos extractos, a pesar de que algunos extractos de planta de acuerdo con la divulgacin se obtienen de especies de los gneros relacionados con el gnero Pouteria, por ejemplo, el gnero Manilkara. Como se ha sealado en otra parte de esta descripcin, "aceite Pouteria" tambin se usa de manera intercambiable con "aceite de nuez lcuma" o "LNO". [0049] La descripcin tambin proporciona el uso teraputico o cosmtico de los componentes de LNO y, en particular, que se utiliza cualquiera de los componentes de cidos grasos de LNO, tal como cido linoleico, cido oleico, cido palmtico, cido esterico y cido linolnico, en forma aislada singular o en combinaciones de al menos dos de tales componentes, en las composiciones de acuerdo con la divulgacin. [0050] Varios aspectos de la divulgacin sobre los mtodos para inducir la migracin celular, la promocin de la cicatrizacin de heridas, incluyendo curacin de quemaduras, la promocin de la regeneracin de tejidos y reducir, eliminar o prevenir una condicin de la piel tales como el acn, envejecimiento de la piel o de piel arrugada. En general, los mtodos comprenden poner una cantidad teraputicamente o cosmticamente eficaz de un extracto que contiene LNO, o componentes purificados de la LNO (por ejemplo, uno o ms cidos grasos), en contacto con una clula, tejido u rgano, por ejemplo, la piel.

Fluido
[0051] LNO se extrae de la nuez o semilla de una planta de acuerdo con la invencin utilizando un fluido como se describe en la presente memoria. Tpicamente, el fluido de extraccin es un compuesto no polar orgnico o un fluido orgnico ligeramente polar que es lquida a temperatura ambiente. En algunas realizaciones, el lquido es un disolvente para LNO, pero en otras realizaciones, el fluido es un medio en el que la LNO es dispersable. Fluidos de ejemplo para la extraccin de LNO son cloroformo, acetona, acetonitrilo, diclorometano, acetato de etilo, etanol, alcanos,

tales como heptano o hexano, dixido de carbono supercrtico, y de cadena lineal o ramificada, alcoholes primarios, secundarios o terciarios tales como isopropanol, metanol, y etanol. [0052] El proceso de extraccin Pouteria [0053] Un mtodo de acuerdo con la descripcin es un mtodo de preparacin de un extracto de Pouteria lcuma, en el que la tuerca de lcuma se muele en un polvo, el aceite de nuez se extrae del polvo por un fluido, y el fluido se elimina para obtener un aceite . La materia prima tuerca lcuma se muele, pulveriza, roto, destrozado, roto, picado, agrietado y / o tamizado a un tamao y forma apropiados. Por ejemplo, un molinillo de caf, molino de martillo o dispositivo similar de reduccin de tamao, se utiliza para reducir la tuerca lcuma a un tamao de partcula ptimo para la extraccin de aceite con un fluido particular. Un rango de tamao adecuado para partculas tuerca sobre molienda o pulverizacin es de 750 micras a 1 mm de dimetro, aunque las partculas ms pequeas y ms grande ser funcional y son contemplados por la divulgacin. Una variedad de lquidos puede ser utilizado para extraer el aceite de nuez de lcuma, por ejemplo cloroformo, acetona, acetonitrilo, diclorometano, acetato de etilo, etanol, alcanos, tales como heptano o hexano, isopropanol, metanol, otros alcoholes, y dixido de carbono supercrtico. El P. lcuma aceite de nuez descritos en este documento se extrae usando un fluido tal como heptano que proporciona extrajo LNO que no requiere un fraccionamiento adicional. Adems, una combinacin de compuestos en cualquier proporcin puede funcionar como un fluido de extraccin, por ejemplo, heptano y hexano, o heptano y cloroformo. Despus de la extraccin, la extraccin de la extraccin de fluido, en su caso, es todo lo que hay que hacer para producir la teraputica o cosmtica de acuerdo con la divulgacin. [0054] El proceso de extraccin se lleva a cabo tpicamente a temperatura ambiente, pero el proceso es compatible con temperaturas elevadas en el intervalo de 22 C a 100 C, aunque con frecuencia se lleva a cabo a 22 C a 65 C ., o desde 22 C a 50 C o de 22 C a 37 C. El proceso de extraccin tambin se lleva a cabo tpicamente a una presin uniforme, por ejemplo, presin atmosfrica, aunque presiones elevadas o bajas tambin se contemplan para la prctica de los mtodos de extraccin. As, en ciertas realizaciones de los mtodos de extraccin, el fluido a presin se pone en contacto con la tuerca de lcuma o carne tuerca, o la carne de fluido y la tuerca o tuerca estar en comunicacin de fluido dentro de un recipiente presurizado. En

otras realizaciones, la carne tuerca o tuerca y el fluido estar en comunicacin de fluido en un recipiente a presin baja, por ejemplo, vaco, parcial o sustancialmente completa. [0055] Extractos de acuerdo con la descripcin pueden ser administrados a mamferos en una dosis efectiva que es capaz de mejorar la cicatrizacin de heridas. Alternativamente, el extracto puede administrarse a mamferos en una dosis efectiva que es capaz de mejorar la curacin de quemaduras de la piel. Otros usos para los extractos de la descripcin incluyen la administracin de una dosis eficaz para eliminar, reducir, prevenir o reducir la probabilidad de acn. [0056] LNO que contienen extractos pueden ser adecuados para su uso sin ms procesamiento. Alternativamente, los extractos crudos se pueden procesar adicionalmente para reducir el volumen por cualquier tcnica conocida, por ejemplo, evaporacin, incluyendo pero no limitado a evaporacin rotatoria, liofilizacin, filtracin, y similares. Otros compuestos teraputicos tambin pueden ser incluidos en las composiciones de acuerdo con la divulgacin, con la composicin que comprende LNO y, por ejemplo, que comprende excipientes, vehculos, aglutinantes, y similares, todos los cuales se describen a continuacin en composiciones que abordan y vas de administracin de las composiciones LNO. Una forma de realizacin ejemplar que ilustra la inclusin de un compuesto teraputico adicional se refiere a composiciones tpicas que incluyen tambin un agente anti-acn. Ejemplos de agentes anti-acn incluyen, pero no se limitan a, cido saliclico, cido gliclico, perxido de benzoilo, azufre, cido retinoico, agua turba, limo resorcinol, turba, permetrn, cido azelaico, clindamicina, adapaleno, eritromicina, sulfacetamida de sodio , y combinaciones de los mismos. Es evidente que las composiciones de acuerdo con la descripcin tambin puede incluir ms de dos compuestos teraputicos.

Composiciones y vas de administracin

[0057] Las composiciones farmacuticas y formulaciones cosmticas se administran por cualquier va que proporciona una dosis eficaz para el sitio de accin deseado, con aceptables (preferiblemente mnimo) efectos secundarios. Las formulaciones adecuadas piel pueden incluir lquidos tpicamente aceptables, cremas, aceites, lociones, pomadas, geles o slidos convencionales, tales como las cremas de noche, cremas cosmticas, lociones bronceadoras fundacin, protectores solares, lociones para las manos, maquillaje, maquillaje y mscaras, bases y similares. Las

composiciones pueden contener otros ingredientes opcionales adecuados tales como vitamina A, C y E, alfa hidroxi-o alfa-cetocidos tales como los cidos lctico pirvico, o gliclico, lanolina, vaselina, aloe vera, metil o propil parabeno, y pigmentos similares. Los vehculos adecuados tpicamente aceptables incluyen agua, vaselina, petrolato, aceite mineral, aceite vegetal, aceite animal, ceras orgnicas e inorgnicas, tales como microcristalina, parafina y cera de ozoquerita, polmeros naturales, tales como xanthanes, gelatina, celulosa, colgeno, almidn, o goma rabe, polmeros sintticos, alcoholes, polioles, y similares. En una realizacin, el vehculo es una composicin de vehculo miscible en agua, que es miscible en agua. Tal miscible en agua, composiciones tpicas, vehculo cosmticamente aceptable puede incluir aquellos hechos con uno o ms ingredientes apropiados indicados anteriormente, pero tambin puede incluir portador sostenida o retardada, incluyendo que contienen agua, las composiciones dispersables en agua o solubles en agua, tales como liposomas, microesponjas, microesferas o microcpsulas, ungentos de base acuosa, agua en aceite o emulsiones de aceite en agua, geles o similares. [0058] La descripcin proporciona una composicin para uso cosmtico para aplicacin tpica a la piel. Dependiendo del mtodo de aplicacin, esta composicin se puede proporcionar en cualquier forma de dosificacin farmacutica normalmente se utiliza en los campos cosmtico y farmacutico. [0059] Para la aplicacin tpica a la piel, incluyendo el cuero cabelludo, las formulaciones pueden tener la forma de una solucin acuosa, alcohlica o acuosa / alcohlica o suspensin, de una suspensin oleosa o solucin, de una emulsin o dispersin de un lquido o semi -consistencia lquida obtenida por dispersin de una fase grasa en una fase acuosa (0 / W) o viceversa (W / O), de una dispersin o emulsin de consistencia blanda, de un (anhidro) acuoso o acuoso / alcohlicas u oleosas gel, de un polvo libre o compacto para ser utilizado como es o para ser incorporado en un medio fisiolgicamente aceptable (excipiente), o tambin de microcpsulas o micropartculas, o de dispersiones vesiculares de tipo inico y / o no inico. [0060] Las formulaciones segn la descripcin tambin pueden comprender adyuvantes convencionales en el campo cosmtico o farmacutico elegido entre agentes gelificantes hidrfilos o lipfilos o espesantes, aditivos hidrfilos o lipfilos, los conservantes, los antioxidantes (carotenoides), fluidos, perfumes, las cargas, los absorbentes de olor, electrolitos, agentes

neutralizantes, agentes de bloqueo de UV, tales como filtros solares, polmeros formadores de pelcula, principios activos cosmticos y farmacuticos con un efecto beneficioso sobre la piel o las fibras queratnicas (como las vitaminas) y materiales colorantes, que pueden o no ser solubles en el medio. Las cantidades de estos diferentes adyuvantes son las clsicamente utilizadas en el mbito cosmtico, por ejemplo de 0,01% a 20% o de 0,1% a 10% del peso total de la composicin. Estos adyuvantes, segn su naturaleza, pueden ser introducidos en la fase grasa, en la fase acuosa y / o en las vesculas lipdicas y, en particular, los liposomas. [0061] Las formulaciones tambin pueden comprender aceites minerales (por ejemplo, el aceite de vaselina, isoparafina hidrogenada), los aceites vegetales (por ejemplo, la fraccin lquida de la manteca de karit, aceite de girasol, aceite de soja, aceite de germen de trigo), los aceites animales (por ejemplo, el perhidroescualeno), aceites sintticos (por ejemplo, aceite de Purcellin, steres de cidos grasos), aceites de silicona o ceras (por ejemplo, polidimetilsiloxanos lineales o cclicos, ciclometicona, feniltrimeticona), los aceites fluorados (por ejemplo, perfluoropoliteres), cera de abejas, cera de candelilla, cera de arroz, cera de carnauba, cera de parafina o cera de polietileno. Alcoholes grasos y cidos grasos (por ejemplo, cido esterico, cido linoleico, cido linolnico) se puede aadir a estos aceites y ceras. [0062] Las formulaciones tambin pueden incluir agentes emulsionantes, por ejemplo, estearato de glicerilo o laurato, estearato u oleato de sorbitol polioxietilenado, o (alquilo) copolioles de dimeticona. [0063] Las formulaciones tambin pueden incluir lquidos, por ejemplo, de alcoholes inferiores, especialmente el etanol y el isopropanol, propilenglicol o ciertos aceites cosmticos ligeros (African aceite de moringa, de jojoba, de color blanco (mineral) de aceite, el aceite de em, aceite de semilla de rosa mosqueta, aceite de aguacate, aceite de almendra, aceite de albaricoque y el aceite de oliva). [0064] Las formulaciones tambin pueden incluir agentes gelificantes hidrfilos tales como polmeros de carboxi-vinilo (carbmero), copolmeros acrlicos, tales como acrilato / alquil acrilato, copolmeros poliacrilamidas, los polisacridos tales como la hidroxipropilcelulosa, arcillas y gomas naturales y se pueden citar, como gelificantes lipfilos, de las arcillas

modificadas como las bentonas, sales metlicas de cidos grasos, tales como los estearatos de aluminio, la slice hidrfoba tratada, la etilcelulosa y sus mezclas. [0065] Las formulaciones pueden contener adicionalmente agentes antifngicos o antibacterianos. Agentes anti-bacterianos antibiticos incluyen, pero no se limitan a, penicilinas, cefalosporinas, carbacephems, cefamicinas, carbapenems, monobactamas, aminoglucsidos, glucopptidos, quinolonas, tetraciclinas, macrlidos, oxazalidiinones, estreptograminas, y fluoroquinolonas. Ejemplos de agentes antibiticos incluyen, pero no se limitan a, linezolid (Zyvax), dalfopristina, quinupristina, Penicilina G (N de registro CAS: 61-33-6); meticilina (Registro CAS N : 61-32-5); Nafcilina (Registro CAS No.: 147-52-4), oxacilina (Registro CAS No.: 66-79-5), cloxacilina (Registro CAS No.: 61-72-3), dicloxacilina (CAS No. Registro: 3116 -76-5), ampicilina (Registro CAS No.: 69-53-4); Amoxicilina (registro CAS No.: 26787-78-0); ticarcilina (Registro CAS No.: 34787-01-4), carbenicilina ( registro CAS No.: 4697-36-3); Mezlocilina (CAS Registro No.: 51481-65-3); Azlocilina (Registro CAS No.: 37091-660), Piperacilina (Registro CAS No.: 61477-96 -1); Imipenem (Registro CAS No.: 74431-23-5); aztreonam (Registro CAS No.: 78110-38-0), cefalotina (Registro CAS No.: 153-61-7); Cefazolina (CAS Registry No.: 25953-19-9); Cefaclor (Registro CAS No.: 7035603-5), formiato de sodio cefamandol (Registro CAS No.: 42540-409); cefoxitina (Registro CAS No.: 35607-66 -0), cefuroxima (Registro CAS No.: 55268-75-2); Cefonicida (Registro CAS No.: 61270-58-4); Cefinetazole (Registro CAS No.: 56796-20-4); Cefotetan (CAS Registry No.: 69712-56-7); Cefprozil (Registro CAS No.: 92665-29-7); Loracarbef (Registro CAS No.: 121961-22-6); Cefetamet (Registro CAS No.: 65052-63-3 ); cefoperazona (Registro CAS No.: 62893-19-0), cefotaxima (Registro CAS No.: 63527-52-6); Ceftizoxima (Registro CAS No.: 68401-81-0), ceftriaxona (CAS No. del Registro : 73384-59-5), ceftazidima (Registro CAS No.: 7255882-8), cefepima (Registro CAS No.: 88040-23-7); cefixima (Registro CAS No.: 79350-37-1); Cefpodoxime (Registro CAS No.: 80210-62-4); Cefsulodin (Registro CAS No.: 62587-73-9); fleroxacina (Registro CAS No.: 79660-72-3), cido nalidxico (CAS No. Registro: 389-082), norfloxacina (Registro CAS No.: 70458-96-7), ciprofloxacina (Registro CAS No.: 85721-33-1), ofloxacina (Registro CAS No.: 82419-36-1); Enoxacina (Registro CAS No.: 74011-58-8); Lomefloxacina (Registro CAS No.: 98079-51-7); Cinoxacina (Registro CAS No.: 28657-80-9), doxiciclina (CAS No. Registro: 564 - 25-0), minociclina (Registro CAS No.: 10118-90-8), tetraciclina (Registro CAS No.: 60-54-8), amikacina (Registro CAS No.: 37517-28-5), gentamicina (CAS Registro No.: 1403-66-3); kanamicina (registro

CAS No.: 8063-07-8); Netilmicina (Registro CAS No.: 56391-56-1); Tobramicina (Registro CAS No.: 32986-56 - 4), estreptomicina (Registro CAS No.: 57-92-1), azitromicina (Registro CAS No.: 83905-01-5), claritromicina (Registro CAS No.: 81103-11-9), eritromicina (CAS Registry No .: 114-07-8); Erythromycin estolato (Registro CAS No.: 3521-62-8); Erythromycin etil succinato (registro CAS No.: 41342-53-4); Erythromycin glucoheptonato (CAS No. Registro: 23067 - 13-2), eritromicina lactobionato (Registro CAS No.: 3847-29-8), estearato de eritromicina (registro CAS No.: 643-22-1), vancomicina (Registro CAS No.: 1404-90-6); Teicoplanina (Registro CAS No.: 61036-64-4), cloranfenicol (CAS Registro No.: 56-75-7), clindamicina (Registro CAS No.: 18323-44-9); Trimetoprim (CAS No. Registro: 738 - 70-5); Sulfametoxazol (Registro CAS No.: 723-46-6); Nitrofurantona (Registro CAS No.: 67-20-9), rifampicina (Registro CAS No.: 13292-46-1); mupirocina (CAS Registro No.: 12650-69-0), Metronidazol (Registro CAS No.: 443-481), cefalexina (Registro CAS No.: 15686-71-2); Roxithromycin (Registro CAS No.: 80214-83 - 1); Co-amoxiclavuanate; combinaciones de Piperacilina y Tazobactam; as como sus diversas sales, cidos, bases y otros derivados. [0066] agentes antifngicos incluyen, pero no se limitan a, clorhidrato de terbinafina, nistatina, anfotericina B, griseofulvina, ketoconazol, nitrato de miconazol, flucitosina, fluconazol, itraconazol, clotrimazol, cido benzoico, cido saliclico, el voriconazol, caspofungina, y selenio sulfuro. [0067] En general, la composicin de la divulgacin est destinada a ser aplicada por va tpica y directamente a la herida o quemadura. Cuando la herida es profunda, o la quemadura grave, la composicin puede estar en la forma de un ungento, pomada o crema que se extiende directamente sobre la herida y luego se cubre con un apsito estril estndar o de otro material apsito adecuado. Alternativamente, la pomada, crema o ungento de una composicin de acuerdo con la descripcin se aplica directamente sobre la almohadilla de vestir u otro material apsito adecuado. La almohadilla o material de vendaje se coloca sobre la herida o quemadura con el lado de contacto con el medicamento para heridas o quemaduras. Este ltimo enfoque funciona mejor cuando se aplica vendaje para quemaduras graves y heridas superficiales. Para quemaduras de primer grado y abrasiones leves, la composicin puede tambin o alternativamente ser aplicado en forma de aerosol. [0068] Un parche transdrmico se puede emplear para entregar lcuma composiciones de aceite de nuez a un sujeto. El parche se incluyen, pero no se limita a, un material de la almohadilla,

adhesivo, y la composicin teraputica. Los materiales tiles tctil ofrecen un sustrato adecuado para el adhesivo y son suficientemente fuertes para resistir la eliminacin de la piel, despus de haber sido fijado a la piel mediante un adhesivo. En algunas realizaciones, la almohadilla proporciona un sustrato adecuado para la formacin de aberturas en la misma. [0069] El material de la almohadilla es lo suficientemente flexible para proporcionar una cierta comodidad para el sujeto. La flexibilidad se consigue por la elasticidad en una cualquiera o todos los ejes del material. Ejemplos de materiales flexibles incluyen, pero no se limitan a, tela de algodn, tela de rayn, tela tetrn, tela de nylon o de espuma de plstico. El material de la almohadilla es preferiblemente flexible para adaptarse a contornos de la piel, cuando se aplica a zonas de la piel que tiene alteraciones en los ngulos de la superficie (por ejemplo alrededor de la zona de la piel fosa nasal). La almohadilla es preferiblemente no estirable, es decir, no elstico, en el eje plano del material. [0070] El material de la almohadilla es tambin preferiblemente transpirable, lo que permite que el aire pase a travs del parche y en contacto con la piel. En algunas realizaciones, sin embargo, la almohadilla puede no transpirable. El material de la almohadilla es tambin preferiblemente no permeable al agente aplicado al parche. Sin embargo, en algunas realizaciones es preferible que la almohadilla de ser permeable al agente. El material de la almohadilla tambin puede ser de un espesor suficiente para proporcionar resistencia a la almohadilla, pero tambin de una delgadez que ser cmodo para el usuario y flexible en contacto con todas las superficies de la piel. [0071] Un adhesivo tiles en las composiciones y mtodos de acuerdo con la divulgacin es cualquier sustancia que mantiene el parche en contacto con la piel. [0072] En algunas realizaciones, el agente se puede aplicar al parche en lugares discretos. La composicin farmacutica est preferiblemente presente en una cantidad y una concentracin tal que una dosis eficaz del agente se aplica a la piel durante el tiempo designado de que el parche permanece en contacto (por ejemplo, adherido) a la piel. La dosificacin de agente disponible para la piel puede ser alterado mediante la alteracin de la densidad de las aplicaciones discretas del agente primario a la superficie definida del parche, el rea de la seccin transversal de cada solicitud de una superficie definida de la revisin, la

volumen de la cavidad (medida por la profundidad y el rea de seccin transversal) de la abertura que contiene el agente en una zona definida en la superficie del parche, o cualquier combinacin de estos parmetros. As pues, cuando un revestimiento se utiliza como una mscara en la adicin de agente para el parche, mayor ser la profundidad de las aberturas en el revestimiento, mayor ser la cantidad de agente disponible para la entrega a la piel. Del mismo modo, cuanto mayor es la densidad de aberturas, o el rea de seccin transversal de las aberturas, mayor ser la cantidad de agente disponible para la entrega a la piel. [0073] La entrega de la composicin teraputica a la piel puede proceder por un procedimiento que incluye, pero no se limitan a, la licuefaccin en la hidratacin de la composicin, la difusin del agente de distancia desde el parche o la accin capilar de la composicin desde el parche a la piel . [0074] As, una composicin farmacutica de la divulgacin se aplica a una herida o quemadura para cubrir la superficie lesionada completamente con, por ejemplo, un espesor de un cuarto de pulgada de la composicin farmacutica. Preferiblemente, la composicin farmacutica debe ser aplicado dentro de los primeros veinte minutos despus de la quemadura o lesin, pero la composicin tambin puede aplicarse tan pronto como sea posible, y preferiblemente antes de 12 horas despus de la lesin o postquemadura. Cambio de apsito-horarios dependen de la condicin de la herida y los expertos en la tcnica puede ajustar los horarios y sobre una base de caso por caso. Para las heridas muy contaminadas (que exhiben cantidades significativas de pus), heridas o quemaduras graves llanto, los cambios de apsito se puede realizar cada cuatro a seis horas; para otras heridas o quemaduras, los cambios se llevan a cabo con menos frecuencia, a veces slo una o dos veces por da. [0075] Los apsitos o parches estn ventajosamente cambiado tres a cuatro veces al da. Aderezo repetida diariamente o cambios de patch se continan hasta que la herida o quemadura haya sanado. Tiempo de curacin vara, dependiendo del tipo y la profundidad de la herida o la gravedad de la quemadura. [0076] Las composiciones farmacuticas segn la divulgacin son eficaces en el tratamiento de una gran variedad de heridas y quemaduras a un mamfero, sujeto o paciente en necesidad del mismo, donde la contaminacin bacteriana y fngica normalmente ocurrira en ausencia de tratamiento. La composicin medicinal presente supuesto, tambin puede usarse para tratar quemaduras y

heridas en otros mamferos, tales como animales veterinarios, incluyendo perros, gatos, otros animales domsticos, caballos, animales de granja, y similares. [0077] Los datos descritos en este documento establecer otro aspecto de la divulgacin, que es el uso de LNO como un agente para contrarrestar el envejecimiento de la piel o para el tratamiento de quemaduras de la piel. En consecuencia, se describe aqu un mtodo para promover la curacin de la piel y / o regeneracin de la piel por aplicacin tpica a la piel de una formulacin que contiene el extracto de aceite de nuez. La formulacin puede contener adicionalmente piel que promueven la salud agentes incluyendo, por ejemplo, antioxidantes, retinoides, humectantes, agentes promotores de colgeno, filtros solares y similares. La formulacin tambin puede apoyar la salud o la reparacin del cuero cabelludo. [0078] Los siguientes ejemplos ilustran realizaciones de la descripcin. Ejemplo 1 describe la preparacin de un extracto de Pouteria lcuma tuerca. En la medida en que los materiales especficos se mencionan, es meramente para fines de ilustracin y no est destinado a limitar las reivindicaciones. Ejemplo 2 proporciona resultados experimentales que muestran que Lcuma tuerca de aceite (LNO) induce la migracin celular de los fibroblastos en un ensayo in vitro. Ejemplo 3 describe el efecto de LNO en la curacin de heridas y la regeneracin in vivo en un modelo de ratn herida en la piel. Ejemplo 4 describe el efecto del aceite de nuez de lcuma (LNO) en la regeneracin de tejidos en un ensayo de regeneracin pez cebra aleta de cola. Ejemplo 5 proporciona un metil ster de cido graso (FAME) anlisis de la composicin de LNO. Ejemplo 6 describe ensayos de Griess para la produccin de NO en los macrfagos inducidos por LPS como una medida de la influencia de LNO en los procesos inflamatorios. Ejemplo 7 proporciona un anlisis de la remodelacin del citoesqueleto por tincin de inmunofluorescencia. Ejemplo 8 describe los experimentos que revelan el efecto de LNO en bacterias y hongos. Ejemplo 9 describe el efecto de LNO en prematura senescencia celular.

Ejemplo 1 Lcuma Nut Oil (LNO) Extraccin

[0079] En los experimentos descritos en este Ejemplo y los siguientes Ejemplos 2-9, los medios utilizados fueron agar LB y caldo LB, (Fisher Scientific), Patata Dextrosa Agar (PDA), y caldo

patata dextrosa (PDB) (Difco). Antibiticos y antifngicos utilizados en los experimentos incluyeron penicilinaestreptomicina (Cellgo) y la sal nitrato de econazol (Sigma # E4632); placas de 96 pocillos eran de Costar. Todos los dems reactivos qumicos se adquirieron de Sigma-Aldrich Co. [0080] cscaras de madera se han retirado de las tuercas de Pouteria lcuma, es decir, los frutos secos Lucuma, y la tuerca de carne resultante se liofiliz. Frutos secos liofilizados se molieron finamente con un molinillo de caf. El polvo fue desgrasada en una proporcin de 1 g de polvo tuerca a 100 ml de heptano y se filtr con un papel de filtro cnico (Whatman). Este proceso se repiti dos veces. Heptano se elimin del extracto resultante utilizando un evaporador rotatorio (Bchi) seguido de un Savant Speed Vac obtenindose un aceite de color amarillo. [0081] Como alternativa, Pouteria lcuma O. Ktze. (Sin. Lcuma obvota HBK) aceite de nuez se obtuvo mediante la extraccin de 150 g de suelo tuerca lcuma con 2,25 L de heptano durante 12 horas. La extraccin se realiz bajo agitacin suave, protegida de la luz y a temperatura ambiente. Despus de la extraccin, el heptano se elimin a partir del extracto en vaco, obtenindose un aceite amarillo que se almacen a -20 C protegido de la luz.

Ejemplo 2 Lcuma Aceite de Nuez induce la migracin de fibroblastos in vitro

[0082] La capacidad del extracto de aceite de nuez de lcuma para influir o afectar el comportamiento de clulas eucariotas en forma de migracin de fibroblastos de clulas se evalu mediante un estndar in vitro en clulas de ensayo de migracin en la tcnica. Diversos extractos de la fruta lcuma y la tuerca (dentro de las semillas de un fruto carnoso) se examinaron en ensayos de migracin de clulas in vitro, como la migracin celular se sabe que es una caracterstica de la cicatrizacin de heridas. [0083] Un ensayo in vitro de crecimiento de fibroblastos mostr que la tuerca lcuma extrae aumento de la migracin celular. Los fibroblastos (fibroblastos es decir, 3T3) se cultivaron inicialmente hasta confluencia sobre una superficie de vidrio y un rasguo se hizo entonces en el centro de la placa. Las placas se trataron con suero bovino fetal (FBS) como control positivo o diversas concentraciones (10-40 mg / ml) de aceite de nuez de

lcuma (LNO) extrae preparado segn el Ejemplo 1. Las placas se controlaron durante la migracin celular en el rea de la herida (% de cierre de heridas). LNO aumento de la migracin de clulas de fibroblastos de manera dependiente de la dosis. No se encontr actividad en la fruta o extracto de cscara. Los extractos de carne de nuez (referido como lcuma aceite de nuez o extractos LNO), en contraste, el aumento de la migracin celular en el modelo de herida de una manera dependiente de la dosis (Figura 1). En consecuencia, LNO promueve la migracin celular, una caracterstica del proceso de cicatrizacin de la herida. [0084] Humanos fibroblastos neonatales se mantuvieron en la Dulbecco Modificado Medio Eagle (D-MEM) +10% de suero fetal bovino (FBS) y se mantuvieron en un humidificado incubadora de 37 C con 5% de CO 2. Las clulas se sembraron a una densidad de 1 10 4 clulas por pocillo en una placa de 24-pocillos y se incubaron durante 24 horas, o hasta 100% de confluencia se alcanz. Cada monocapa fue herido arrastrando una punta de pipeta a travs del fondo del pozo, utilizando un borde recto como gua (aproximadamente 1,3 mm de anchura). El medio se elimin y las clulas se lavaron con 500 l de PBS dos veces para eliminar clulas desprendidas o residuos celulares. Las clulas se trataron como sigue: DMEM +10% FBS + vehculo (0,06% de glicerol, control positivo), DMEM + vehculo (0,06% de glicerol, control negativo), DMEM + vehculo (0,06% de glicerol) + LNO (60 mg / mL ), DMEM + vehculo (0,06% de glicerol) + LA (24 mg / mL) y DMEM + vehculo (0,06% de glicerol) + OA (18 mg / mL). Las fotografas fueron tomadas de cada pocillo para medir el rea inicial de la herida. Despus de 24 horas de incubacin, los pocillos fueron fotografiadas de nuevo. La zona rayada se midi usando el software Photoshop CS Acrobat, y el porcentaje de cierre de la herida en cada punto de tiempo se obtuvo mediante la siguiente frmula: (1 [tamao actual herida / tamao de la herida inicial]) x 100. [0085] El efecto de LNO sobre la migracin de fibroblastos tambin se evalu por el ensayo de Oris migracin de clulas desde las tecnologas de Platypus de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente, fibroblastos neonatales humanos se mantuvieron en Dulbecco modificado del medio Eagle (D-MEM) +10% de suero fetal bovino (FBS) y se mantuvieron en un humidificado 37 C. incubadora con 5% de CO 2. Entonces 25.000 clulas / pocillo fueron sembradas en una placa de 96 pocillos y se dejaron adherir al colgeno I placa recubierta durante 24 horas, privadas de suero durante 24 horas, y se trat con LNO o vehculo durante 72 horas. Los tapones se retiraron entonces de la placa de 96 pocillos para crear una zona de deteccin de 2,0 mm, las clulas se marcaron con

Calcena AM 4,0 mM y la migracin a la zona de exclusin se midi por microscopa fluorescente. Los resultados demostraron que LNO promovi la migracin de fibroblastos humanos en la zona de exclusin (Figura 8). Los efectos de LNO oleico frente puro (OA) y cidos linoleico (LA) se compararon en fibroblastos rayados. LA y OA son el AF importante de LNO. Estos resultados demostraron que el efecto de curacin de heridas de LNO no puede explicarse por la nica presencia de LA o OA, como las concentraciones equivalentes de estos AG puro no fueron capaces de reproducir el efecto de LNO en la migracin celular (figura 9).

Ejemplo 3 En Vivo y Curacin de Heridas Heridas-Skin Regeneration

[0086] El extracto LNO del Ejemplo 1 se us adicionalmente en dos modelos in vivo para evaluar la curacin de heridas y la regeneracin. En el ensayo de curacin CD-1 de ratn escisin herida, LNO disminuy el tiempo requerido para el cierre de heridas (Figura 4A). En este experimento, un punzn de 12 mm de la piel se utiliza para crear una herida en ratones y los ratones se dividieron en tres grupos, es decir, un grupo de control negativo, un grupo experimental y un grupo control positivo. Inmediatamente despus de la herida, las heridas se trataron durante diez das con vehculo (0,5% de carboximetilcelulosa en PBS), aceite de nuez de lcuma (LNO) (200 ug / ratn) en vehculo, o el control positivo CGS-21680 (CAS120225-54-9 , una especfica de adenosina A 2 Un agonista del receptor ofrecen comercialmente por Tocris; ver Patente de EE.UU. N 4.968.697), tambin en el vehculo.. La mediana del tiempo requerido para el cierre de heridas (CT 50) se muestra en la figura. 4A. Los datos establecen que el LNO disminuy el tiempo requerido para el cierre de heridas (CT) versus el control del vehculo. [0087] ensayos de curacin de la herida se realizaron por MDS Pharma Services, Taiwan, MDSPS pruebas de cdigo 1115924, de acuerdo con el protocolo describen en otra parte (Kapoor, et al, J. Clin Invest, 118:3279-3290 (2008);... Montesinos , et al., J. Exp.. Med., 186:1615-1620 (1997), cada descripcin de incorpora aqu como referencia). Brevemente, grupos de 5 machos CD-1 ratones que pesen 22 2 g se utilizaron para este ensayo. Bajo anestesia con ter, la regin de los hombros y la espalda de cada animal se afeit y un afilado punzn (dimetro interno 12 mm) se utiliza para eliminar de la piel, incluyendo el panculo carnoso y los tejidos adherentes. La zona de la herida se traz sobre lminas de plstico en los das 3, 5, 7, 9 y 11 y se cuantificaron mediante

el uso de un analizador de imagen (Life Science Resources VISTA, Version 30). CGS agonista de la adenosina, LNO o vehculo se aplicaron tpicamente inmediatamente despus de la lesin y una vez al da a partir de entonces para un total de 10 das consecutivos. [0088] La aplicacin tpica de LNO en las heridas drmicas de DC-1 ratones mostraron las importantes propiedades cicatrizantes de LNO. Los animales tratados mostraron casi 100% cierre de la herida despus de 10 das de la administracin tpica de LNO (figuras 4 y 5), que fue significativamente mayor que la del vehculo y comparable con el control positivo. El pronunciado in vivo de cicatrizacin de heridas efecto de LNO (Tabla 1) se explica por su relacin nica de AF y por los efectos potenciadores de varios anti-inflamatoria conjuntos combustibles contenidos en el LNO. Herida datos de cierre o curacin de heridas obtenidos en estos experimentos se presentan en la Tabla 1.

TABLA-US-00001 CUADRO 1 cierre de la herida drmica expresada

como tiempo medio de cierre (CT 50) Tratamiento CT 50 a SE b (das) Vehculo de 7,58 0,4 CGS 10 ug / ratn 6,04 0,2 * LNO 200 ug / ratn 6,84 0,2 LNO 500 ug / ratn 5,86 0,3 * LNO 1000 g / ratn 6,34 0,1 * una hora a la que se cierra el 50% de la herida de la piel. b error estndar * p <0,05, versus vehculo (ANOVA de un factor seguido por prueba de Dunnett)

Ejemplo 4 En la curacin de heridas y la regeneracin Vivo-Tailfin

Amputacin Primordial [0089] Un modelo de aleta de cola en la curacin de heridas y la regeneracin in vivo tambin se utiliz para evaluar la capacidad de un extracto de aceite de lcuma tuerca para promover la curacin de heridas apropiado, y los resultados de estos ensayos tambin proporcionan informacin sobre las propiedades angiognicas de LNO. En este modelo transgnico, el promotor fli1 impulsa la expresin de la protena verde fluorescente (GFP) en todas las clulas endoteliales vasculares, lo que permite el seguimiento de la cicatrizacin de heridas en tiempo real mediante la observacin directa de la angiognesis. Forty-eight-hour-old or five-day-old zebrafish larvae (AB strain) were anesthetized in 0.04% 3-amino benzoic acid ethylester (tricaine; MS-222) and placed in 2% agar Petri dishes. Surgical blades were used to amputate tailfin primordia just posterior to the notochord. Larvae

were placed in 24-well plates containing either water (control), CGS-21680 (50 g/mL; CAS120225-54-9) or LNO (10-100 g/mL in water) and incubated at 28 C. Primordia re-growth was measured using fluorescence microscopy and image analysis of fluorescent endothelial cells. For this assay, the fin fluorescent area was normalized against the total fin area. Photographs of regenerating tailfins were taken at 24 and 48 hours post-amputation using a Scion CFW-1310C color digital camera with an Olympus SZ4060 zoom stereo microscope. The effects of LNO were analyzed and compared to the positive control CGS-21680 (2-p-(2Carboxyethyl)phenethylamino-5'-N-ethylcarboxamidoadenosine). The results, shown in FIG. 6B, establish that LNO increased the amount of regenerative tissue versus both non-treated and positive control larvae. These effects were dose-dependent (FIG. 7). These results are in agreement with the data from CD-1 mice and indicate that LNO is not only a wound healing agent, it is also a promoter of the formation of new blood vessels in wounded areas. [0090] Taken together, the experimental results presented in Examples 3 and 4 indicate that the nut oil extracted from lucuma has significant activity in enhancing wound healing processes.

Example 5 GC -MS Analysis of LNO

[0091] For fatty acid methyl ester (FAME) analysis, a 100 L aliquot of LNO was added to 1 mL methanolic HCl and heated for 1 hour at 100 C., gently shaken every 15 minutes for 1 minute. Vials were cooled in an ice bath and 2 mL hexane added. Samples were gently stirred in a tabletop incubator for 5 minutes at 120 rpm and then centrifuged for 3 minutes at 2100g. The organic phase was transferred to a new vial, dried under a stream of nitrogen and reconstituted in 100 L of methylene chloride. This extract was diluted 1:10 twice for further analysis. A 1 L aliquot of the diluted sample was injected into a heated (250 C.) split (50:1) injector and separated on an SGE BPX70 (highly polar cyanopropyl polysilphenylsiloxane) capillary column (60 m0.25 mm ID0.25 m film). Oven conditions were: 100 C. hold 2 minutes, ramp 5 C./minute to 150 C. hold 10 minutes; ramp 2 C./minute to 200 C. hold 8 minutes, ramp 5 C./minute to 240 C. hold 1 minute. The carrier gas was helium flowing at 1 mL/minute. Mass spectra from 40 to 550 m/z were acquired using a dual-stage quadrupole with source at 250 C. and +EI ionization of 70 eV. A 37-component food industry fatty acid mixture at 100 g/mL each was injected for verification. Results are presented in Table 2.

[0092] The heptane extract from lucuma nut yielded 2.6% LNO from ground lucuma nut powder. GC/MS analyses of fatty acid methyl esters (FAMEs) indicated that the most abundant FAs in LNO were linoleic (C18:2), oleic (C18:1), palmitic (C16:0), stearic (C18:0), and -linolenic acid (C18:3) (Table 2, FIG. 3). In addition, there were five as yet unidentified FAs. None of the unknowns contributed significantly to fatty acid composition of the LNO. Several of the FAs from LNO have been reported as potentially relevant in maintaining healthy skin and in improving lipid metabolism in humans. Linoleic and oleic acids have been reported as wound healing agents potentially acting as modulators of skin inflammation. Another bioactive molecule detected in LNO was -linolenic acid (GLA). Both GLA and its metabolites can prevent uncontrolled inflammation damage to healthy cells that severely impair the wound healing process.

TABLE -US-00002 TABLE 2 Chemical composition of lucuma nut oil %

Fatty Acid Methyl Area 1 Fatty Acid Ester (FAME) Carbon 2 RT 3 38.85 linoleic acid methyl linoleate 18:2 40.51 (cis-9, 12) 27.85 oleic acid methyl oleate (cis-9) 18:1 38.18 18.63 palmitic acid methyl palmitate 16:0 28.83 8.94 stearic acid methyl stearate 18:0 36.92 2.93 linolenic acid methyl -linolenate 18:3 42.99 (cis-6, 9, 12) 0.61 arachidic acid methyl arachidate 20:0 44.01 0.42 myristic acid methyl myristate 14:0 20.24 0.34 eicosenoic acid methyl eicosenoate 20:1 45.09 (cis-11) 0.24 pentadecanoic acid methyl pentadecanoate 15:0 24.34 0.17 palmitoleic acid methyl palmitoleate 16:1 30.29 (cis-9) 0.14 decanoic acid methyl decanoate 10:0 10.90 0.11 heptadecanoic acid methyl heptadecanoate 17:0 32.76 0.1 lauric acid methyl laurate 12:0 14.60 0.1 behenic acid methyl behenate 22:0 50.90 0.08 ? ? ? 45.42 0.07 ? ? ? 25.16 0.07 eicosadienoic acid methyl eicosadienoate 20:2 47.17 (cis-11, 14) 0.05 erucic acid methyl erucate (cis-13) 22:1 52.21 0.04 ? ? ? 46.75 0.04 heneicosanoic acid methyl heneicosanoate 21:0 47.33 0.04 docosadienoic acid methyl docosadienoate 22:2 52.65 (cis-13, 16) 0.04 lignoceric acid methyl lignocerate 24:0 58.77 0.03 ? ? ? 55.58 0.02 octanoic acid methyl octanoate 8:0 7.85 0.02 ? ? ? 60.02 0.01 ? ? ? 47.50 0.01 ? ? ? 47.88 0.01 eicosapentoic acid methyl eicosapentanoate 20:5 55.17 (cis, 5, 8, 11, 14, 17) 0.01 ? ? ? 63.43 1 All peak areas integrated and summed. Area of each FAME was divided by summed peak area of all FAMEs to calculate % area. 2 Total carbon number and unsaturation (if any). eg 16:0 represents the completely saturated palmitic acid. 3 RT = retention time in minutes (see FIG. 3).

Ejemplo 6

LNO Decreases NO Production in Macrophages

[0093] Murine RAW264.7 macrophages were obtained from the American Type Culture Collection (ATCC). RAW264.7 cells were cultured in DMEM, supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum, and maintained in a 37 C. humidified incubator containing 5% CO 2 . The RAW264.7 cells were plated at a density of 0.410 5 cells/well, in 24-well plates. Cells were pre-treated for 2 hours with LNO prior to incubation with LPS at 1 g/mL for 8 hours. Cells were subcultured by scraping plates when cells reached 90% confluency. [0094] The Griess assay was performed to indirectly measure nitric oxide production by LPS-induced macrophages. The Griess assay, which provides a measure of nitrite in the culture medium, was performed according to the protocol described elsewhere (Park, et al., J. Leukoc. Biol., 54:119-124 (1993)), with minor modifications. Briefly, RAW macrophages were plated at a minimum density of 0.410 5 cells/well in a 24-well plate and grown for 24 hours. Stock solutions of LNO and triptolide (positive control) were added to the medium 2 hours before LPS stimulation. Cells were stimulated with 1 g/mL LPS (Sigma-Aldrich, Inc., St. Louis, Mo.). After 8 hours, conditioned media (50 L) was removed and immediately mixed with 50 L of Griess reagent (10% sulfanilamide, 1% naphthaleneethylenediamine dihydrochloride in 5% H 3 PO 4 ). After incubation for 15 minutes at room temperature in darkness, samples were read at 540 nm using a BIOTEK micro-plate spectrophotometer. LNO did not show any cytotoxic effect at the concentrations used in our studies as evaluated by the MTT viability assay. LNO produced a moderate but significant decrease in the concentration of nitric oxide (FIG. 11). The decrease in nitric oxide production after LNO application was dose dependent. Taken together, the results from the in vivo mice wounding assay, the transgenic zebrafish larvae tailfin regeneration assay, and the LPS-stimulated macrophage behavior, establish that LNO modulates the inflammatory process in a manner that accelerates the wound healing process.

Ejemplo 7 Immunofluorescence Staining

[0095] Cells were seeded into 24-well plates containing glass coverslips, serum-starved for 24 hours, and treated with LNO 60

g/mL or vehicle for 24 hours. For staining of stress fibers and vinculin, cells were fixed with ice cold 4% paraformaldehyde in PBS for 15 minutes and permeabilized with ice cold 0.5% (vol/vol) Triton X-100 in PBS for 5 minutes at room temperature. Cells were washed with PBS and then permeabilized for 2-5 minutes. Cells were washed with PBS and then blocked with 3% (wt/vol) BSA in PBS for 1 hour. Vinculin mAb FITC-Conjugate (Sigma, Cat F7053) 1/200 or Rhodamine Phalloidin 140 nM (Cytoskeleton Inc), diluted in 3% BSA (wt/vol) in PBS was applied, and the cells were incubated overnight at 4 C. Cells were washed again for at least 20 minutes with PBS and then mounted in 80% glycerol PBS. [0096] The results showed that LNO at 60 g/mL induced a mild decrease in stress fiber formation and increased the expression of vinculin (FIG. 10). These results are consistent with the finding that LNO increased cell migration by increasing vinculin expression and mildly decreasing stress fiber formation in fibroblasts, thus favoring cell motility.

Ejemplo 8 LNO Effects on Bacteria and Fungi

[0097] The bacteria and fungi studied were Escherichia coli DH5 (ATCC # 47093), Staphylococcus aureus (ATCC # 12600), Enterobacter aerogenes (ATCC # 13048), Mycobacterium rhodococcus DK17, and Saccharomyces cerevisiae (ATCC # 201459). The medium for the growth of all bacteria was LB agar at 37 C. The medium for the growth of S. cerevisiae was Potato Dextrose Agar (PDA). E. coli and S. aureus were grown on LB agar plates at 37 CE aerogenes and M. rhodococcus DK17 were grown on LB agar plates at 30 CS cerevisiae was grown on PDA plates at 30 C. For inhibition experiments, LB broth was used for all bacteria and Potato Dextrose Broth (PDB) was used for testing S. cerevisiae. [0098] The minimal inhibitory concentration (MIC) values were determined by broth dilution assay, using a method modified from Jones et al., Susceptibility tests: microdilution and macrodilution broth procedures, in Manual of Clinical Microbiology, 4th ed. American Society for Microbiology, ABEH Lennette, WJ Hausler, Jr., and HJ Shadomy, Editor. 1985, American Society for Microbiology, Washington, DC and CLSI Ferraro, Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. Vol. 17. 1997: Natl. Comm. Clin. Lab. Stds, Wayne. The descriptions are incorporated herein by reference The above-identified microorganisms were grown for 24 hours in broth

cultures. The MIC was defined as the lower concentration of the compound to inhibit growth of microorganisms compared to the growth of the untreated control. Media inoculated with the preferred microorganism (510 5 cells/mL) was added to each well of a 96-well plate containing 10-1000 g/mL of LNO. The plate was then incubated at 30 C. or 37 C. (depending on the microorganism) for 24 hours. The inhibitory effect of LNO on the growth of the tested organism was evaluated using a MultiDetection Microplate Reader (Synergy HT, Biotek) at 600 nm (absorbance). [0099] All bacteria and fungi were tested in triplicate over the range of 10 g/mL to 1000 g/mL LNO concentrations. No significant inhibitory effect was observed up to the concentration of 1000 g/ml of LNO.

Example 9 LNO Effects on Premature Cellular Senescence

[0100] During cellular senescence, cells display several changes in their phenotype. Among other characteristics, alterations in nuclear morphology are characteristic of senescent cells. Globular, folded, fragmentized or oversized nuclei are frequently found in senescent cells. These anomalous morphological features are hallmarks of the aging process in senescent cells. In the experiments described in this Example, the effect of LNO on cellular senescence was assessed by studying the changes in nuclear morphology of H 2 O 2 -induced senescent fibroblasts. [0101] Human neonatal fibroblasts (Cascade Biologics Catalog Number: C-004-5C) were maintained in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)+10% fetal bovine serum (FBS) and were kept in a humidified 37 C. incubator with 5% CO 2 For induction of premature senescence, exponentially growing fibroblasts were inoculated at a cell density of 510 5 in 50 mm dishes. Three days after seeding, the cells were treated with the culture medium containing H 2 O 2 (100 M), H 2 O 2 (100 M)+LNO 60 g/mL, or just culture medium for 1 hour. After the treatments, fibroblasts were trypsinized, passaged normally, and incubated in fresh complete medium for another 7 days. Cells were then fixed in ice-cold methanol for 5 minutes and stained with Acridine orange. Fluorescent microphotographs of cell nuclei were taken with an Olympus 151 microscope coupled to a CWF 1310C camera (Scion Corporation). [0102] By fluorescence microscopy, non-senescent cells (control)

showed increased cell density, classical elongated nuclear shape and homogeneous nuclear size. Conversely, cells treated with H 2 O 2 displayed lower cell density and abnormal nuclear morphology, such as oversized and folded nuclei, which are characteristic features of the senescent phenotype (FIGS. 12 and 13). Cells treated with H 2 O 2 +LNO showed fewer cells with senescent nuclear abnormalities compared with H 2 O 2 -treated cells (FIGS. 12 and 13, orange arrows). Thus, the results of these experiments show that LNO prevents dermal fibroblasts from entering into premature senescence. [0103] LNO is disclosed herein as a new source of compounds, including natural fatty acids (FAs) consisting mainly of linoleic acid, oleic acid, palmitic acid, stearic acid and -linolenic acid. LNO displayed a pronounced wound-healing effect, both in mice and transgenic zebrafish larvae. Fatty acids (FAs), particularly polyunsaturated fatty acids (PUFAs), play an important role in inflammatory processes, as they are metabolic precursors of several key mediators of inflammation, such as eicosanoids, lipoxins and resolvins. [0104] Wound closure is a highly coordinated sequence of molecular events involving inflammation, fibroblast migration, reepithelialization, extracellular matrix (ECM) remodeling bacterial and fungal growth, and angiogenesis. Several cytokines and nitric oxide are important mediators of this process. Angiogenesis is known to be important in the formation of granulation tissues and supply of oxygen to wounded tissues. Another important aspect in the treatments of cutaneous wounds is the possibility of bacterial and fungi infections, especially in immunocompromised individuals. Infected skin wounds are frequently associated with delayed wound closure, prolonged inflammation and severe scar formation. Colonized or infected wounds tend to develop an abnormally prolonged inflammatory state which generates large amounts of nitric oxide. Disclosed herein are the results of experiments establishing that LNO, a composition comprising a mixture of fatty acids obtained as an extract from the nut of a South American fruit, promotes wound healing. The effect of LNO on the wound healing process was investigated, including investigations of such relevant events as fibroblasts migration, revascularization, bacterial and fungal growth and nitric oxide production. In a transgenic zebrafish model, LNO not only accelerated wound healing, it also increased new GFP-positive endothelial cells. This finding indicates that FAs in LNO increase vessel sprouting, thus improving perfusion of wounded areas. This effect was not found using pure LA and OA, the major components of LNO.

[0105] The data from cell migration experiments led to the conclusion that the in vivo wound healing effect of LNO is related to the increase in the migration capacity of fibroblasts. As focal adhesions are important for fibroblast migration and adhesion, changes in the expression of focal adhesion proteins in fibroblasts treated with LNO were expected. In fact, it has been disclosed that fibroblasts from wounded areas increase expression of vinculin and the increased expression is correlated with a higher migratory capacity (van Beurden, et al., Wound Repair Regen., 14:66-71 (2006); van Beurden, Eur. J. Oral Sci., 113:153158 (2005)). During cell migration, vinculin and stress fibers play a key role in the integrin-mediated interaction of fibroblasts with the ECM. Integrins are key players in fibroblast interaction with ECM and with other cells. During the wound healing process, integrins nucleate three distinct matrix adhesions in fibroblastic cells, ie, focal complexes, focal adhesions and fibrillar adhesions. Focal complexes contain paxillin, vinculin, -actinin, talin, focal adhesion kinase (FAK) and tyrosine-phosphorylated proteins. Fibrillar adhesions are located centrally in migrating cells and contain fibronectin and tensin. 1 integrins can translocate from focal complexes to focal adhesions and ultimately fibrillar adhesions, indicating that a precursor-product relationship between the three types of matrix adhesion is necessary for optimum cell migration. A mild disassembly of stress fibers and increased expression of vinculin in focal adhesion has been shown to be important for cell migration. The data indicate that the wound healing effect of LNO observed in mice and transgenic zebrafish larvae is produced by increasing fibroblasts migration, promoting angiogenesis and modulating nitric oxide production. Further, LNO has been shown herein to antagonize cellular senescence. Therefore, LNO contains a unique combination of natural, pharmacologically active compounds, eg, FAs, making the total extract more effective than, eg, the individual FAs it contains. [0106] Numerous modifications and variations of the disclosure are possible in view of the above teachings and are within the scope of the claims. The above-described embodiments are not intended to limit the claims in any way. The entire disclosure of all publications cited herein are hereby incorporated by reference. Patent applications by Ilya Raskin, Manalapan, NJ US Patent applications by RUTGERS, THE STATE UNIVERSITY OF NEW JERSEY

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