ATLAS de HISTOLOG IA VEGETAL y ANIMAL

CITOLOG IA 4-Tr aco vesicular

Pilar Molist Manuel A. Pombal Manuel Meg as Depto. de Biolog a Funcional y Ciencias de la Salud Facultad de Biolog a Universidad de Vigo
(Versi on: Mayo 2011)

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1.

INTRODUCCION

Una c elula eucariota se puede considerar como una gran ciudad con diversos distritos. En ellos se llevan a cabo trabajos necesarios como pueden ser la producci on de energ a, la fabricaci on de productos, la elaboraci on de tales productos, la exportaci on o la importaci on con otras ciudades, el reciclaje de la basura, etc etera. Para que todo este sistema sea eciente necesita que los distritos est en comunicados entre s por carreteras y por transportadores. Los distritos est an representados en la c elula por los compartimentos intracelulares y en las c elulas eucariotas muchos de estos compartimentos est an delimitados por membranas formando lo que llamamos org anulos. Cada org anulo celular est a especializado en una o varias funciones. Por ejemplo, el ret culo endoplasm atico es un gran productor de mol eculas, el aparato de Golgi modica tales mol eculas, sintetiza gl ucidos y los reparte a otros org anulos, los lisosomas son centros de degradaci on, las mitocondrias y los cloroplastos son grandes centrales energ eticas, etc etera. La necesaria comunicaci on entre los org anulos est a mediada por ves culas, las cuales transportan las mol eculas en su interior o incluidas en sus membranas. A estas comunicaciones es a las que se denominan en conjunto tr aco vesicular. Hay dos grandes rutas de comunicaci on entre los org anulos. La primera se inicia en el ret culo endoplasm atico y env a ves culas al aparato de Golgi, el cual env a tambi en ves culas a la membrana plasm atica en un proceso denominado exocitosis. Esta es la ruta exportadora, es decir, la que liberar a mol eculas producidas por la c elula al exterior, aunque tiene tambi en otras misiones. La otra gran ruta es la importadora y comienza en la membrana plasm atica donde se forman ves culas por un proceso denominado endocitosis. Estas ves culas se fusionan con los endosomas, los cuales terminan convirti endose en lisosomas donde se degradan las mol eculas incorporadas del medio extracelular. Existen otras muchas comunicaciones entre org anulos mediadas por ves culas, dando la impresi on de que todos los org anulos est an comunicados entre s . Esto no se ha demostrado pero s parece existir la regla de que la comunicaci on entre dos org anulos es bidireccional, es decir, un org anulo que env a ves culas a otro, tambi en suele recibirlas de el. Por ejemplo, el ret culo endoplasm atico env a ves culas al aparato de Golgi, el cual a su vez crea ves culas destinadas al ret culo endoplasm atico; la membrana plasm atica forma ves culas que se fusionan con los endosomas,

Figura 1: Esquema de las principales v as de comunicaci on mediante ves culas entre diferentes org anulos que forman parte de la ruta vesicular. Existe comunicaci on bidireccional entre la mayor a de los org anulos que se comunican directamente. No todas las conexiones est an representadas.

pero estos a su vez env an ves culas con destino a la membrana plasm atica en una ruta de reciclaje. xisten org anulos como las mitocondrias, los cloroplastos y los peroxisomas que ni reciben ni forman ves culas para comunicarse con otros org anulos. Est an fuera de la ruta vesicular, pero se comunican con los otros org anulos mediante otros mecanismos.

2.

RET ICULO ENDOPLASMATICO

El ret culo endoplasm atico es un complejo sistema de membranas dispuestas en forma de sacos aplanados y t ubulos que est an interconectados entre s compartiendo el mismo espacio interno. Sus membranas se contin uan con las de la envuelta nuclear y se pueden extender hasta las proximidades de la membrana plasm atica, llegando a representar m as de la mitad de las membranas de una c elula. Debido a que los acidos grasos que las componen suelen ser m as cortos son m as delgadas que las dem as. El ret culo organiza sus membranas en regiones o dominios que realizan diferentes funciones. Los dos dominios m as f aciles de distinguir son el ret culo endoplasm atico rugoso, con sus membranas formando t ubulos m as o menos rectos, a veces cisternas aplanadas, y con numerosos ribosomas asociados, y el ret culo endoplasm atico liso, sin ribosomas asociados y con membranas organizadas formando t ubulos muy curvados e irregulares. La membrana externa de la envuelta nuclear se puede considerar como parte del ret culo endoplasm atico puesto que es una continuaci on f sica de el y se pueden observar ribosomas asociados a ella realizando la traducci on. El ret culo endoplasm atico rugoso y el liso suelen ocupar espacios celulares diferentes como ocurre en los hepatocitos, en las neuronas y en las c elulas que sintetizan esteroides. Sin embargo, en algunas regiones del ret culo no existe una segregaci on clara entre ambos dominios y se aprecian areas de membrana con ribosomas mezcladas con otras sin ribosomas. La disposici on espacial del ret culo endoplasm atico en las c elulas animales depende de sus interacciones con los microt ubulos, mientras que en las vegetales son los lamentos de actina los responsables. Ret culo endoplasm atico rugoso El dominio rugoso del ret culo endoplasm atico se caracteriza por organizarse en una trama de t ubulos alargados o sacos aplanados y apilados, m as o menos regulares en su forma, con numerosos ribosomas asociados a sus membranas. La cantidad de ribosomas asociados a sus membranas condiciona la forma de este org anulo, de tal manera que cuando el n umero de ribosomas asociados aumenta los t ubulos se expanden adoptando la forma de cisternas aplanadas. Esta morfolog a es claramente visible en im agenes tomadas con el microscopio electr onico de las c elulas secretoras de prote nas, las cuales tienen el ret culo endoplasm atico muy desarrollado.

Figura 2: El ret culo endoplasm atico se extiende por toda la c elula, llegando hasta las
proximidades de la membrana plasm atica. Existe una continuidad entre el ret culo endoplasm atico rugoso y el liso. El rugoso forma cisternas a las que se adhieren ribosomas, mientras que el liso forma un entramado de t ubulos.

La principal misi on del ret culo endoplasm atico rugoso es la s ntesis de prote nas que ir an destinadas a diferentes lugares: el exterior celular, el interior de otros org anulos que participan en la ruta vesicular, como los lisosomas, o que formar an parte integral de las membranas, tanto plasm atica como de otros org anulos de la ruta vesicular. Adem as, el ret culo endoplasm atico rugoso tiene que sintetizar prote nas para s mismo, denominadas prote nas residentes. Las prote nas integrales de la membrana plasm atica se sintetizan en el ret culo endoplasm atico. Hay que tener en cuenta que las prote nas sintetizadas en el ret culo que van destinadas a org anulos concretos de la ruta vesicular deben tener unas secuencias de amino aidos o modicaciones espec cas (actuar an como se nales) para que cuando lleguen a la zona de reparto del aparato de Golgi sean reconocidas y dirigidas a sus compartimentos diana correspondientes. Cualquier prote na que se secrete o que forme parte de los org anulos o compartimentos de la ruta vesicular empieza su proceso de s ntesis en el citosol pero terminar a en el interior de una cisterna del ret culo o formando parte de sus membranas. El proceso comienza con la uni on de los ARNm, localizados en el citosol, uni endose en primer lugar a una subunidad peque na ribosomal y posteriormente a una subunidad grande ribosomal para comenzar la traducci on. Lo primero que se traduce de estos ARNm es una secuencia inicial de nucle otidos a partir de la cual se sintetiza una cadena de unos 70 amino acidos denominada p eptido se nal. Una mol ecula conocida como SRP (sequence recognizing particule), que es 6

Figura 3: Imagen tomada con el microscopio electr onico de transmisi on de una neurona. Se observan las cisternas de ret culo endoplasmt atico rugoso que se extienden desde la envuelta nuclear hasta las proximidades de la membrana plasm atica. Los ribosomas aparecen como bolitas negras asociadas a sus membranas. Obs ervese que tambi en hay ribosomas asociados la membrana externa de la envuelta nuclear.

una mezcla de 7 ARNs y 6 polip eptidos, reconoce al p eptido se nal y enlentece el proceso de traducci on. El complejo formado por ribosoma, ARNm, p eptido se nal m as SRP difunde por el citosol hasta chocar con las membranas del ret culo endoplasm atico, a las cuales se une gracias a la existencia de un receptor de membrana que reconoce al SRP. Todo el complejo anterior interacciona con un translocador, que es una prote na integral que forma un canal por el cual penetra la cadena polipept dica naciente hacia el interior de la cisterna del ret culo endoplasm atico. El p eptido se nal queda unido al translocador mientras que el resto de la cadena que se va traduciendo y liberando hacia el interior. Una peptidasa presente en el ret culo escinde el p eptido se nal del resto de la cadena de amino acidos, quedando esta libre en el interior. Una vez completada la s ntesis, la cadena de amino acidos adopta su conformaci on tridimensional y el ribosoma se libera de la membrana. Si la prote na que se est a sintetizando es una prote na integral de membrana no ser a liberada al interior del ret culo. En estos casos las 7

prote nas nacientes tienen cadenas de amino acidos hidr ofobos que cuando se traducen facilitan su inserci on directamente entre los acidos grasos de la membrana gracias a la acci on del translocador. El proceso es muy complejo y diverso para los diferentes tipos de prote nas integrales puesto que en un receptor con siete cruces de membrana tienen que alternarse secuencias que han de insertarse en la membrana con otras que quedan bien en el lado citos olico o bien en el interior de la cisterna del ret culo endoplasm atico. S olo en raras ocasiones el ret culo importa prote nas que se sintetizan completamente en el citosol gracias a ciertos transportadores presentes en su membrana. Las prote nas que se sintetizan en los ribosomas adosados a la membrana del ret culo endoplasm atico son modicadas conforme van siendo sintetizadas. a) Hay una glucosilaci on (N-glucosilaci on) de los amino acidos asparragina. Estos recibir an un complejo de 14 az ucares en su radical, que son transferidos desde un l pido embebido en la membrana denominado dolicol fosfato, perdi endose algunos de estos az ucares en procesos posteriores. b) Se da hidroxilaci on s olo en algunas prote nas, sobre todo en aquellas que van a formar parte de la matriz extracelular. Aqu se hidroxilan los amino acidos prolina y lisina, dando hidroxiprolina e hidroxilisina, que formar an parte del col ageno. c) Algunas prote nas asociadas a la membrana plasm atica est an unidas covalentemente a l pidos de la membrana, esta uni on tambi en se produce en este compartimento. En el ret culo endoplasm atico se produce un control de la calidad de las prote nas sintetizadas, de modo que aquellas que tienen defectos son sacadas al citosol y eliminadas. Existen unas prote nas denominadas chaperonas que juegan un papel esencial en el plegamiento y maduraci on de las prote nas reci en sintetizadas. Son tambi en ellas las encargadas de detectar errores y marcar las prote nas defectuosas para su degradaci on. Otras prote nas con dominios tipo lectina, reconocen determinados az ucares y comprueban la adici on correcta de gl ucidos. Como dijimos, las prote nas que se sintetizan en el ret culo endoplasm atico terminan en varios posibles destinos: en el exterior celular mediante un proceso de secreci on, el interior o en la membrana de alguno de los compartimentos de la ruta vesicular como el aparato de Golgi, los endosomas o los lisosomas. Sin embargo, algunas tienen su funci on en el propio ret culo endoplasm atico, son las denominadas prote nas residentes. Hemos nombrado algunas como las chaperonas, ciertas glusosidasas, el receptor para el SRP, el propio translocados, etc etera. Para ser retenidas en el ret culo deben poseer una secuencia de cuatro amino acidos concrfetos localizados en el extremo carboxilo (-COOH). 8

Ret culo endoplasm atico liso Es un entramado de t ubulos membranosos interconectados entre s y que se contin uan con las cisternas del ret culo endoplasm atico rugoso. No tienen ribosomas asociados a sus membranas, de ah el nombre de liso, por tanto la mayor a de las prote nas que contiene son sintetizadas en el ret culo endoplasm atico rugoso. Es abundante en aquellas c elulas implicadas en el metabolismo de grasas, detoxicaci on y almac en de calcio. El ret culo endoplasm atico liso est a involucrado en una serie de importantes procesos celulares de los que se pueden destacar: S ntesis lip dica Las membranas del ret culo endoplasm atico liso producen la mayor a de los l pidos requeridos para la elaboraci on de las nuevas membranas de la c elula, incluyendo glicerofosfol pidos y colesterol. Gran parte de la s ntesis de los esngol pidos se lleva a cabo en el aparato de Golgi, pero su estructura b asica, la ceramida, se sintetiza tambi en en el ret culo. En realidad, en las membranas del ret culo no se realizan todos los pasos de la s ntesis de los l pidos de las membranas. Los acidos grasos se sintetizan en el citosol y son insertados posteriormente en las membranas del ret culo endoplasm atico liso donde son transformados en glicerofosfol pidos. Esta s ntesis la realizan prote nas de membrana que tienen sus centros activos orientados hacia el citosol y por tanto los l pidos estar an inicialmente en la hemicapa citos olica de la membrana. Como el cambio pasivo de los l pidos entre hemicapas, o movimiento ip-op, es dif cil por el ambiente hidr ofobo de las cadenas de acidos grasos de la membrana, para que algunos de ellos lleguen a la hemicapa interna desde la externa se requiere la existencia de transportadores de l pidos denominados ipasas. Estos transportadores son inespec cos, es decir, transportan cualquier tipo de l pido entre las dos hemicapas y el transporte es independiente de ATP. Se propone entonces que la s ntesis de l pidos en el ret culo endoplasm atico no crea asimetr a de membrana, sino que esta se producir a en otros org anulos de la ruta vesicular. Por ejemplo, los az ucares que formar an los glucol pidos se ensamblan en el interior del aparato de Golgi, y no ser an expuestos al citosol, creando por tanto asimetr a. Adem as, en el aparato de Golgi, as como en otros org anulos como los endosomas, s existen transportadores espec cos de l pidos que crean asimetr a. Por tanto, en cuesti on de l pidos, la localizaci on asim etrica de estos en las membranas no depende del ret culo endoplasm atico.

El colesterol es otro importante componente de las membranas, sobre todo de la plasm atica, que se sintetiza mayoritariamente en el ret culo endoplasm atico liso. Desde aqu es transportado por la v a vesicular o por transportadores proteicos solubles. Por ejemplo, las levaduras, que poseen ergosterol en sus membranas en vez de colesterol, usan v as no vesiculares para transportar el ergosterol desde el ret culo hasta la membrana plasm atica. Estos transportadores son diversos y sus movimientos son independientes de ATP.

Figura 4: Esquema de los caminos propuestos para el transporte de l pidos desde el

ret culo endoplasm atico hasta otras membranas celulares: en ves culas y mediante transportadores.

Las mitocondrias y los peroxisomas no forman parte de la ruta vesicular por lo que sus l pidos de membrana deben ser importados. Para ello utilizan los transportadores de l pidos. Por ejemplo, para los glicerofosfol pidos existen unas prote nas solubles llamadas intercambiadoras de glicerofosfol pidos que tienen la habilidad de transportarlos a trav es del citosol. Los toman en la membrana del ret culo endoplasm atico liso y los sueltan en las de estos org anulos. En las c elulas de los tejidos fotosint eticos son los cloroplastos los encargados de sintetizar sus propios glicerofosfol pidos y glucol pidos. En el ret culo endoplasm atico liso tambi en se sintetizan l pidos como los triacilgliceroles que ser an almacenados en el propio ret culo. Este proceso es muy activo en los adipocitos, c elulas que almacenan grasa, con dos funciones: reserva alimenticia y aislamiento t ermico. Tambi en es el principal responsable de la s ntesis de la parte lip dica de las lipoprote nas, de la producci on de hormonas esteroideas y de acidos biliares. 10

Detoxicaci on Los hepatocitos, las c elulas t picas del h gado, tienen un ret culo endoplasm atico liso muy desarrollado. En el se sintetizan las lipoprote nas que transportar an al colesterol y a otros l pidos al resto del organismo. En sus membranas se encuentran tambi en enzimas, como la familia de prote nas P450, responsables de la eliminaci on de productos del metabolito potencialmente t oxicos, as como algunas toxinas liposolubles incorporadas durante la ingesta. La supercie de membrana del ret culo se adapta a la cantidad de enzimas detoxicadoras sintetizadas, la cual depende a su vez de la cantidad de t oxicos presentes en el organismo. Defosforilaci on de la glucosa-6 fosfato La glucosa se suele almacenar en forma de gluc ogeno, fundamentalmente en el h gado. Este organo es el principal encargado de aportar glucosa a la sangre, gracias a la regulaci on llevada a cabo por las hormonas glucag on e insulina. La degradaci on del gluc ogeno produce glucosa-6-fosfato que no puede atravesar las membranas y por tanto no puede abandonar las c elulas. La glucosa 6-fosfatasa se encarga de eliminar ese residuo fosfato, permitiendo que la glucosa sea transportada al exterior celular. Reservorio intracelular de calcio Las cisternas del ret culo endoplasm atico liso est an tambi en especializadas en el secuestro y almacenaje de calcio procedente del citosol. Este calcio puede salir de forma masiva en respuesta a se nales extra o intracelulares gracias a cascadas de segundos mensajeros. Un ejemplo destacable es el ret culo sarcopl asmico (nombre que recibe el ret culo endoplasm atico liso en las c elulas musculares) que secuestra calcio gracias a una bomba de calcio presente en sus membranas. El secuestro y la salida de calcio desde el ret culo sarcopl asmico se produce en cada ciclo de contracci on de la c elula muscular.
Bibliograf a espec ca English AR, Zurek N, Voeltz G K. Peripheral ER structure and function. Current opinion in cell biology. 2009. 21:506-602.

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3.

DEL RET ICULO AL APARATO DE GOLGI

La mayor a de las prote nas y de los l pidos que abandonan el ret culo endoplasm atico lo hacen en ves culas o en otros compartimentos membranosos con formas tubulares que se desprenden del ret culo. Tienen como destino el aparato de Golgi y se exportan desde regiones especializadas del ret culo endoplasm atico denominadas zonas de transici on o dominios de exportaci on reticular, cuyas membranas carecen de ribosomas. Estas regiones son numerosas y se encuentran dispersas por las cisternas del ret culo endoplasm atico. En la formaci on de las ves culas o de los compartimentos tubulares participan al menos tres prote nas citos olicas que forman conjuntamente un pol mero denominado COPII. Estas se ensamblan en la supercie citos olica de las membranas de la zona de transici on del ret culo. Las prote nas que forman COPII parecen realizar dos funciones: coopera en la formaci on de las ves culas creando tensiones y pliegues en la membrana y es responsable de seleccionar algunas de las prote nas que han de ser incluidas en las ves culas. El dominio citos olico de las prote nas transmembrana que van a ser transportadas hacia el aparato de Golgi interact ua con la cubierta de prote nas COPII y son ancladas y concentradas en el compartimento de exportaci on naciente. Por tanto las prote nas COPII ser an necesarias para seleccionar las mol eculas transmembrana que van a ser transportadas, adem as de para formar el compartimento de exportaci on. Las prote nas solubles, que se incorpor an en el interior de las ves culas parecen ser reconocidas por receptores transmembrana, los cuales s interact uan mediante su dominio citos olico con la cubierta COPII. Independientemente de ello, cualquier prote na que vaya a ser exportada debe estar apropiadamente plegada. Las que no lo est an son eliminadas antes de que sean englobadas para su exportaci on. Es decir, en el ret culo endoplasm atico se lleva a cabo un control de calidad. Las ves culas recubiertas con COPII liberadas desde las membranas del ret culo pierden su cubierta y se fusionan entre s para formar un compartimento intermedio denominado transportador t ubulo vesicular o ERGIC (endoplasmic reticulum Golgi intermediate compartment), que es dirigido por los microt ubulos (componentes del citoesqueleto) hacia el lado cis del aparato de Golgi, con el que se fusionar a. El compartimento ERGIC madura durante el camino hacia el aparato de Golgi. Esta maduraci on supone una modicaci on de las mol eculas de su

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Figura 5: Las ves culas recubiertas con COPII parten desde la zona de transici on del
ret culo endoplasm atico y se fusionan formando el compartimento ERGIC, el cual se desplaza guiado por los microt ubulos hacia el lado cis del aparato de Golgi. En el lado cis, los compartimentos ERGIC provenientes de diferentes zonas de transici on se fusionan para formar las primeras cisternas del aparato de Golgi. Desde los compartimentos ERGIC se forman ves culas de reciclado recubiertas por COPI que van de vuelta al ret culo endoplasm atico.

membrana y permiten la asociaci on de otras prote nas citos olicas que forman una cubierta denominada COPI. COPI muestra el mismo mecanismo que COPII pero su funci on es formar ves culas y seleccionar mol eculas que se devolver an al ret culo endoplasm atico. Es una v a de reciclado. De esta forma, mientras el compartimento ERGIC se mueve hacia el aparato de Golgi libera ves culas que retornar an al ret culo, tambi en transportadas por los microt ubulos. El sentido de este reciclado es devolver las prote nas que han escapado del ret culo y que realmente tienen su misi on en este org anulo. A estas mol eculas se les denomina residentes del ret culo. Su selecci on en el compartimento ERGIC se realiza de dos maneras. Las prote nas integrales son reconocidas por COPI, mientras que las solubles son reconocidas por un receptor de la membrana denominado 13

receptor para KDEL. En ambos casos se necesitan secuencias de amino acidos que han de ser espec cas. Cuando estas ves culas llegan al ret culo se fusionan con el y dejan all sus mol eculas. El receptor para KDEL alterna entre el ret culo y el compartimento ERGIC, puesto que tambi en viaja en las ves culas recubiertas por COPII, pero en este caso sin unir ligando alguno. El proceso de unir un ligando en un org anulo y liberarlo en el otro es posible porque hay un gradiente de pH entre estos dos compartimentos, m as b asico en el ret culo, que le impide unirse a sus ligandos, y m as acido en el aparato de Golgi, que le permite unirse a sus ligandos. Es decir, la variaci on de pH entre compartimentos modica la anidad del receptor para KDEL por sus ligandos.
Bibliograf a espec ca Antonny B, Schekman R . ER export: public transportation by the COPII coach. 2001. Current opinion in cell biology 13:438-443.

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4.

APARATO DE GOLGI

El aparato de Golgi fue descrito por Camilo Golgi en 1989 y fue cuestionado durante d ecadas. La t ecnica del reactivo de Schi- acido pery odico marca los gl ucidos del Golgi y esto hace que se puede ver con el microscopio optico. Su estructura membranosa fue observada por primera vez al microscopio electr onico por Dalto y Felix (1954). En las c elulas animales es un org anulo que se localiza pr oximo al centrosoma, el cual suele estar en las cercan as del n ucleo. Como el centrosoma es el principal centro organizador de microt ubulos, la posici on central del aparato de Golgi en la c elulas animales depende de la organizaci on del sistema de microt ubulos. Por tanto la existencia de este org anulo en posici on central en la c elulas animales depende de la organizaci on del sistema de microt ubulos. El aparato de Golgi est a formado por una serie de cisternas aplanadas que se disponen regularmente formando pilas. En una c elula puede haber varios de estos apilamientos y algunas cisternas localizadas en pilas pr oximas est an conectadas lateralmente. A todo el conjunto de pilas y sus conexiones se le denomina complejo del Golgi. El n umero (normalmente de 3 a 8) y el tama no de las cisternas en cada pila es variable y depende del tipo celular, as como del estado siol ogico de la c elula. Entre las cisternas, dentro de cada pila, existen numerosas prote nas brosas en las que se encuentran embebidas las cisternas. Este entramado, denominado matriz, podr a ayudar en el mantenimiento de la estructura del org anulo. Sin embargo, se ha demostrado que la integridad del aparato de Golgi depende principalmente de la organizaci on del sistema de microt ubulos, por ejemplo, durante la mitosis desaparece, y tambi en del tr aco vesicular desde el ret culo endoplasm atico, si este se detiene el Golgi tambi en desaparece. En las c elulas vegetales, que no tienen centrosoma, hay numerosas estructuras similares a aparatos de Golgi poco desarrollados dispersas por el citoplasma. En las c elulas vegetales las cisternas del aparato de Golgi son m as peque nas que en las c elulas animales y no est an unidas formando apilamientos, aunque el n umero de cisternas dispersas puede variar entre decenas y m as de cien. Estas cisternas son m oviles gracias a los lamentos de actina. En algunas levaduras, c elulas eucariotas, ni siquiera existen cisternas parecidas a las que se observan en c elulas animales o vegetales. Es un org anulo polarizado y cada pila contiene dos dominios, un lado cis y un lado trans. Entre ambos se encuentran las cisternas intermedias. 15

Figura 6: En las c elulas animales el complejo del Golgi est a formado por varias pilas de
cisternas, localizadas pr oximas al centrosoma, cerca del n ucleo. Algunas de cisternas de pilas adayacentes est an conectadas lateralmente.

En el lado cis existe un proceso continuo de formaci on de cisternas con material procedente de la fusi on de compartimentos t ubulo vesiculares denominados ERGIC (endoplasmic reticulum Golgi intermediate compartment), que se forman con material proveniente del ret culo endoplasm atico. El lado trans tambi en posee una organizaci on t ubulo-vesicular denominada TGN (entramado trans del aparato de Golgi o trans Golgi network), donde las cisternas con las mol eculas procesadas se deshacen en ves culas que se dirigen a otros compartimentos celulares. Por tanto se da un trasiego constante de mol eculas desde el lado cis al trans, pero tambi en hay un ujo de reciclado en sentido contrario mediado por ves culas recubiertas con prote nas COPI que parten de las zonas laterales de las cisternas y se dirigen hacia otras cisternas m as pr oximas al lado cis. Es un org anulo en constante renovaci on y el ujo de mol eculas afecta a su organizaci on y a su tama no. Este org anulo est a especialmente desarrollado en c elulas con fuerte secreci on. La direcci on del ujo de sustancias determina una polarizaci on de la distribuci on de las enzimas en las cisternas que est an pr oximas al lado cis o al trans. Por ejemplo, las cisternas del lado cis contienen una mayor concentraci on de la enzima

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transferasa de la N-acetilgalactosamina, las cisternas intermedias contienen la transferasa I de la N-acetilglucosamina, las cisternas del lado trans a la galactosiltransferasa y el TGN a sialiltransferasa.

Figura 7: El aparato de Golgi se divide en varios dominios. El lado cis es donde el

compartimento ERGIC y las ves culas se fusionan para formar las primeras cisternas. El compartimento ERGIC no se puede considerar como un compartimento perteneciente al aparato de Golgi, sino que es intermedio entre el ret culo endoplasm atico y el propio aparato de Golgi. Las cisternas que se encuentran en la zona intermedia de la pila se denominan intermedias. En el lado trans es donde las cisternas se deshacen en ves culas y estructuras tubulares que contienen mol eculas ya procesadas. El TGN es este complejo de ves culas y estructuras tubulares que se forman en el lado trans. Desde las partes laterales de las cisternas se forman ves culas que viajan y se fusionan con cisternas m as pr oximas al lado cis, son ves culas de reciclado. Las echas laterales indican el sentido del reciclado y las centrales el sentido que siguen las mol eculas en su tr ansito por el aparato de Golgi.

Hay distintos modelos para explicar el transporte de sustancias a trav es del aparato de Golgi desde el lado cis al lado trans: a) Modelo de la maduraci on de cisternas. Se postula que los cuerpos t ubulo vesiculares (ERGIC) provenientes del ret culo endoplasm atico se fusionan formando una cisterna en el lado cis. Esta cisterna se mueve progresivamente y madura hasta llegar al lado trans donde se descompone en ves culas para su reparto a otros compartimentos celulares. Hoy en d a se tiende a aceptar este modelo porque hay observaciones que son explicadas el pero no por otros modelos. Por ejemplo, las mol elulas de procol ageno miden unos 300 nm de longitud y no caben f sicamente en ves culas, pero s pueden viajar dentro de las cisternas. Adem as, las ves culas COPI que est an entre las cisternas del aparato de Golgi contienen mayoritariamente prote nas que deben reciclarse al ret culo endoplasm atico 17

y no mol eculas que est an proces andose, luego s olo act uan como una v a de reciclado. El modelo de maduraci on de cisternas se ha demostrado en las levaduras. b) Modelo de los compartimentos estables. En este modelo los cuerpos t ubulo vesiculares (ERGIC) provenientes del ret culo endoplasm atico se unen al lado cis y desde esas cisternas salen ves culas que transportan material a la siguiente cisterna, y as sucesivamente hasta llegar al lado trans donde son empaquetadas en ves culas para su reparto. c) Modelo de la conexi on de t ubulos. Se ha visto con el microscopio electr onico que en ocasiones existen conexiones tubulares entre cisternas no adyacentes. Estas conexiones parecen pasajeras y dependientes del tipo de material a secretar.

Figura 8: Modelos de transporte de mol eculas (color naranja) a trav es del aparato de
Golgi. En el modelo de maduraci on de cisternas (arriba) las cisternas se crean en el lado cis y se desplazan, mientras van madurando, hacia el lado trans donde se transforman en ves culas. En el modelo de cisternas permanentes (abajo) las mol eculas viajan de una cisterna a la cisterna contigua, en direcci on hacia el lado trans, englobadas en ves culas (ves culas de color naranja). Las ves culas celestes representan el proceso de reciclaje hacia el lado cis, que es incluido por los dos modelos.

El aparato de Golgi realiza funciones esenciales para la c elula: a) Es uno de los principales centros de glucosidaci on en la c elula. Se a naden y modican gl ucidos que formar an parte de las glucoprote nas, proteoglucanos, glucol pidos y polisac aridos como la hemicelulosa de las plantas. Muchos de los gl ucidos de las glucoprote nas que se modican en el aparato de Golgi han sido a nadidos previamente en el ret culo endoplasm atico. La glucosidaci on en las prote nas puede ser de dos tipos: a) Los sac aridos ricos en manosa a nadidos en el ret culo endoplasm actico 18

(glucosidaci on tipo N) son posteriormente modicados en el aparato de Golgi mediante la adici on de nuevos az ucares. b) En el aparato de Golgi se a nade oligosac aridos con uni on tipo O a los grupos hidroxilos de amino acidos como la serina, la treonina y la hidroxilisina. Este tipo de glucosilaci on ocurre en los proteoglucanos. Tambi en se a naden los grupos sulfatos a los glucosaminoglucanos. Entre los az ucares espec cos que se a naden en el aparato de Golgi est a el acido si alico. Adem as de unir mol eculas de az ucares a las prote nas tambi en se forman mol eculas de acido hialur onico, un polisac arido, que quedar a libre en la matriz extracelular. En el aparato de Golgi tambi en se producen otras modicaciones adem as de la glucosidaci on y sulfataci on, como son fosforilaci on, palmitoilaci on, metilaci on y otras. Todas las funciones relacionadas con los gl ucidos las llevan a cabo las enzimas glucosiltransferasas (a naden gl ucidos) y las glucosidasas (eliminan gl ucidos). Existen unos 200 tipos de estas enzimas en el aparato de Golgi. Las diferentes cisternas del aparato de Golgi tienen papeles espec cos dentro del procesamiento de los gl ucidos, que es una reacci on secuencial. Hay evidencias de que existe un gradiente de enzimas relacionadas con la glucosidaci on desde el lado cis al trans, estando m as concentradas cerca del lado cis aquellas enzimas implicadas en los primeros pasos del proceso de glucosidaci on. La s ntesis de pol meros de sac aridos es muy diferente a la de las prote nas o a la de los acidos nucleicos. Mientras que los dos u ltimos se sintetizan a partir de un molde y con la participaci on un solo tipo de enzima, los sac aridos necesitan un enzima para cada paso que deben realizar en un momento preciso dentro de una cadena de reacciones. Dado que es una v a extremadamente complicada y costosa es de suponer que las glucoprote nas y los glucol pidos son de extremada importancia. b) En el aparato de Golgi se terminan de sintetizar las esngomielinas y los glucoesngol pidos. La ceramida sintetizada en el ret culo endoplasm atico es la mol ecula sobre la que trabajan las enzimas del aparato de Golgi para formar dichos tipos de l pidos de membrana. A estos l pidos se les ha prestado recientemente mucha atenci on puesto que se les atribuye el papel de crear microdominios de membrana gracias a su asociaci on con el colesterol, las denominadas balsas de l pidos, las cuales pueden crear compartimentos en las membranas y por tanto se convierten en zonas con unas caracter sticas siol ogicas diferentes. c) Es un centro de reparto de mol eculas que provienen del ret culo endoplasm atico o que se sintetizan en el propio aparato de Golgi. Desde el lado trans saldr an ves culas con mol eculas seleccionadas hacia la membrana plasm atica en dos rutas: la exocitosis constitutiva y la 19

excocitosis regulada, hacia los endosomas de reciclaje o hacia la ruta de los endosomas tard os/cuerpos multivesiculares/lisosomas. Unas vez procesadas, las diferentes mol eculas son seleccionadas y empaquetadas en ves culas diferentes para dirigirse a sus respectivos destinos. En TGN es la plataforoma desde la cual salen las ves culas para los distintos compartimentos. Las v as principales son hacia la membrana plasm atica mediante exocitosis y a los endosomas tard os desde donde se llega a los lisosomas. Tambi en desde el TGN se env an ves culas de reciclado hacia cisternas del propio aparato de Golgi y existen algunas observaciones que sugieren una proyecci on directa hacia el ret culo endoplasm atico puesto que se han observado cisternas del ret culo asociadas estrechamente con el TGN. Pero el TGN es tambi en un compartimento que recibe ves culas de los endosomas y parece participar en los procesos de reciclado de mol eculas entre la membrana y compartimentos internos como los endosomas. Por tanto este dominio participa en las v as de exocitosis y endocitosis.

20

5.

EXOCITOSIS

Desde el TGN (trans Golgi network) del aparato de Golgi salen ves culas con diferentes direcciones: hacia las cisternas previas del propio aparato de Golgi, hacia los endosomas y hacia la membrana plasm atica. Vamos a centrarnos en la fusi on de las ves culas con la membrana plasm atica, mientras que la ruta hacia los endosomas las veremos en el apartado dedicado a estos org anulos y en el que trata de los lisosomas. La exocitosis es la fusi on de ves culas producidas principalmente por el aparato de Golgi con la membrana plasm atica. Las ves culas se forman en el TGN del aparato de Golgi y viajan hasta la membrana plasm atica con quien se fusionan. Hay dos tipos de exocitosis: constitutiva y regulada. La exocitosis constitutiva se produce en todas las c elulas y se encarga de liberar mol eculas que van a formar parte de la matriz extracelular o bien sirven para regenerar la propia membrana celular. Es un proceso constante de producci on, desplazamiento y fusi on, con diferente intensidad de tr aco seg un el estado siol ogico de la c elula. La exocitosis regulada se produce s olo en aquellas c elulas especializadas en la secreci on, como por ejemplo las productoras de hormonas, las neuronas, las c elulas del epitelio digestivo, las c elulas glandulares y otras. En este tipo de exocitosis se liberan mol eculas que realizan funciones para el organismo como la digesti on o que afectan a la siolog a de otras c elulas que est an pr oximas o localizadas en regiones alejadas en el organismo, a las cuales llegan a trav es del sistema circulatorio, como es el caso de las hormonas. Las ves culas de secreci on regulada no se fusionan espont aneamente con la membrana plasm atica sino que necesitan una se nal que es un aumento de la concentraci on de calcio. Adem as, necesitan ATP y GTP. Las ves culas de la secreci on regulada se acumulan en el citoplasma y cuando reciben la se nal para su liberaci on se dirigen hacia regiones concretas de la membrana de la c elula, luego es un proceso dirigido no s olo en el tiempo sino tambi en en el espacio. Las c elulas nerviosas representan un ejemplo extremo. Una vez empaquetadas las ves culas en el soma neuronal tienen que ser dirigidas hacia el terminal presin aptico, que en algunas neuronas puede estar a cent metros de distancia. Adem as de las neuronas existen otras c elulas polarizadas, como es el caso de las del epitelio digestivo, que poseen una parte apical y otra basal. Ser a un desastre que las c elulas epiteliales intestinales fusionasen las ves culas y liberasen las enzimas digestivas que contienen en la regi on de la membrana celular orientada hacia los tejidos internos y no hacia la luz del tubo digestivo. La direccionalidad del camino de estas ves culas 21

est a determinada por la orientaci on del citoesqueleto, el cual, mediante la intervenci on de las prote nas motoras, las transporta hasta su lugar de fusi on apropiado.

Figura 9: Desde el TGN del aparato de Golgi salen ves culas con diferentes destinos.
Hacia la membrana plasm atica parten dos rutas. Una denominada exocitosis constitutiva, que poseen todas las c elulas, y otra, exocitosis regulada, que est a presente en las c elulas secretoras. En esta u ltima se necesita una se nal, aumento de la concentraci on de calcio, para que se produzca la fusi on de las ves culas con la membrana plasm atica. Las otras dos rutas desde el TGN van hacia los endosomas, se forman mediadas por una cubierta proteica de clatrina, y hacia cisternas m as pr oximas al lado cis del propio aparato de Golgi, se forman por mediaci on de cubiertas COPI.

Como se ha visto anteriormente existe una exocitosis constitutiva y otra regulada. Los dos tipos de exocitosis empaquetan mol eculas diferentes, luego el complejo TGN debe arregl arselas para separar ambos tipos de cargas. Parece ser que las mol eculas que no tienen una se nal espec ca ser an empaquetadas en ves culas de exocitosis constitutiva. Las prote nas 22

del interior de estas ves cula son liberadas en el medio extracelular mientras que las integrales formar an parte de la membrana plasm atica. En el caso de las ves culas de secreci on regulada se forman inicialmente peque nas ves culas que una vez en el citosol se fusionan entre s para formar otras m as grandes que permanecen en el interior celular hasta que llega una se nal que permite la fusi on con la membrana plasm atica. C omo se seleccionan las mol eculas para las ves culas de exocitosis regulada? El mecanismo se basa en la formaci on de agregados moleculares. Estos agregados est an formados por las mol eculas que ser an liberadas y que tienen actividad siol ogica, as como por las enzimas que se encargan de su procesamiento. Hay que tener en cuenta que muchas de las mol eculas que se liberan por exocitosis regulada son incorporadas a las ves culas en formas no activas, por ejemplo prop eptidos, que son procesadas a sus formas activas una vez que las ves culas se han formado. Estos agregados est an formados por mol eculas que no han sido secuestradas por las ves culas cubiertas de clatrina, que van a los endosomas, ni por las ves culas cubiertas por COP-I, que se dirigen hacia el lado cis del aparato de Golgi.

Figura 10: En el modelo de kiss-and-run (besa y corre) se propone que para la liberaci on
del contenido vesicular no es necesaria una fusi on completa de la ves cula con la membrana plasm atica, sino una fusi on de un a rea peque na que forma un poro pasajero por donde se libera el contenido.

La liberaci on de mol eculas al exterior celular supone la fusi on de la membrana de la ves cula con la membrana plasm atica, de la cual terminar a por formar parte. Sin embargo, en base a las im agenes obtenidas con el microscopio electr onico se ha propuesto otro modelo de exocitosis 23

denominado besa y corre(kiss-and-run). Aqu la ves cula no se fusiona completamente con la membrana sino que lo hace de una manera incompleta formando un poro que comunica el interior de la ves cula con el exterior celular por donde liberar a su contenido. Posteriormente se cierra el poro quedando la ves cula vac a en el citosol. Este tipo de excocitosis se ha propuesto para las sinapsis y para las c elulas cromanes.

Figura 11: En la membrana plasm atica se forman ves culas, endocitosis, que se fusionan
con los endosomas tempranos. Desde estos org anulos parten ves culas de reciclado que se fusionan con la membrana citoplasm atica.

Figura 12: En los terminales presin apticos se produce un ciclo local de formaci on de
ves culas y exocitosis. Se forman en la membrana plasm atica lateral del terminal, se rellenan de neurotransmisor por transportadores y se fusionan con la membrana citoplasm atica en la zona de fusi on, densidad sin aptica, liberando su contenido.

No todas las ves culas que se fusionan con la membrana plasm atica provienen del aparato de Golgi. Los endosomas tempranos son org anulos 24

especializados en recibir ves culas formadas en la membrana plasm atica, proceso denominado endocitosis. Tras su fusi on con el endosoma parte del contenido vesicular es reciclado y llevado de vuelta a la membrana plasm atica por medio de ves culas que se forman en el propio endosoma. Otro ejemplo lo tenemos en los terminales sin apticos del sistema nervioso. Estos sitios de exocitosis est an muy alejados del aparato de Golgi, localizado en el soma neuronal. La liberaci on de neurotransmisores en la sinapsis no puede depender en exclusiva del empaquetado de estos en el TGN, ser a una comunicaci on nerviosa muy ineciente y demasiado lenta. En los terminales nerviosos existe un reciclado de ves culas que permite una exocitosis permanente e independiente del TGN. En el terminal presin aptico se produce la exocitosis en la zona de liberaci on, mientras que en la membrana plasm atica lateral del propio terminal se producen ves culas por invaginaci on que se volver an a llenar con neurotransmisores gracias a la existencia de transportadores espec cos en sus membranas. Estas ves culas rellenadas sufren un nuevo proceso de exocitosis. Normalmente liberan neurotransmisores peque nos con v as de s ntesis poco complejas. De este modo existe un proceso constante de exocitosis y formaci on de ves culas localizado en el propio terminal presin aptico.
Bibliograf a espec ca Dikeakos, J.D., Reudelhuber, T.L . Sending proteins to dense core secretory granules: still a lot of sort out. 2007. Journal of cell biology. 177: 191-196.

25

6.

ENDOCITOSIS

La incorporaci on de sustancias externas por parte de las c elulas animales es esencial para su supervivencia puesto que son heter otrofas. Ya vimos que algunas mol eculas salvan la barrera que supone la membrana plasm atica mediante difusi on o a trav es de canales, mediante transportadores o por bombas (Transporte a trav es de membrana). Sin embargo, hay una manera de incorporar grandes cantidades de mol eculas al interior de la c elula de una sola vez: endocitosis o incorporaci on de mol eculas englobadas en ves culas. De la misma manera que hay un viaje de ida y fusi on de ves culas con la membrana plasm atica existe un proceso de formaci on de ves culas en la membrana plasm atica, las cuales se fusionan posteriormente con compartimentos internos, principalmente con los endosomas. En esta incorporaci on masiva, las mol eculas extracelulares pueden entrar al interior de la ves cula de forma inespec ca, en soluci on, o de forma espec ca unidas a receptores de membrana. El t ermino pinocitosis se reere a este tipo de endocitosis inespec ca de mol eculas disueltas. Sin embargo, en la mayor a de las rutas de endocitosis existe un proceso de incorporaci on de mol eculas de manera espec ca, bien por la acci on de receptores de membrana o por su asociaci on con ciertos dominios lip dicos de membrana que favorecen la atracci on de determinadas mol eculas. No cabe duda de que parte del contenido de cualquier ves cula que se forme en la membrana plasm atica tendr a mol eculas disueltas que se hayan colado en el interior de la ves cula de manera inespec ca. Por tanto, en mayor o menor medida todas las rutas de endocitosis realizan pinocitosis. Este material en disoluci on es mayoritario en la macropinocitosis, donde la incorporaci on inespec ca de mol eculas es su principal caracter stica, como veremos m as adelante. Hay que tener en cuenta que durante cualquier tipo de endocitosis tambi en se incorporan l pidos y prote nas de la membrana plasm atica, que son las que forman la membrana de la propia ves cula. Al mecanismo de incorporaci on de mol eculas espec cas reconocidas por receptores de la membrana plasm atica se le llama endocitosis mediada por receptor. Se han descrito unos 25 tipos de receptores que act uan en este tipo de endocitosis. Con ellos la c elula puede incorporar de forma muy eciente mol eculas o part culas que se encuentran disueltas a bajas concentraciones. Estas mol eculas se unen a sus receptores y los complejos receptor-ligando convergen en una zona de la membrana plasm atica donde se produce la formaci on de la ves cula que posteriormente viaja hacia el 26

Figura 13: Las mol eculas pueden ser incorporadas por endocitosis de forma espec ca
unidas a receptores de la membrana plasm atica o de manera inespec ca en disoluci on o pinocitosis.

interior celular. El ejemplo m as llamativo es la captaci on de colesterol por parte de las c elulas, el cual se transporta en la sangre unido a prote nas formando las lipoprote nas de baja densidad (LDL). Las LDL son unos complejos que contienen una gran cantidad de mol eculas de colesterol rodeadas por una monocapa lip dica y poseen una mol ecula proteica que sobresale al exterior. Cuando una c elula necesita colesterol sintetiza receptores para los LDL y los traslada a la membrana plasm atica. Entonces se produce el reconocimiento entre receptor y LDL, ambos se unen y se agrupan en una zona de la membrana plasm atica donde se produce una invaginaci on. Una vez formada la ves cula, se dirige a org anulos intracelulares donde las LDL son digeridas y el colesterol es liberado y metabolizado. Cuando se produce alg un impedimento en la captaci on de colesterol, fundamentalmente por fallos en el reconocimiento por parte de los receptores de LDL o por su ausencia, el colesterol se acumula en la sangre y puede producir arterioesclerosis e infarto de miocardio. Se han descrito diversos tipos de endocitosis dependiendo del tama no de la ves cula, la naturaleza del material a incorporar y del mecanismo de formaci on de la ves cula, pero nosotros los vamos a grupar en: endocitosis mediada por ves culas recubiertas de clatrina, endocitosis mediada por caveolas, endocitosis mediada por ves culas no recubiertas y macropinocitosis. Vamos a estudiar tambi en a la fagocitosis, una endocitosis un tanto especial porque es un proceso de incorporaci on de grandes part culas como bacterias o restos celulares, tambi en englobados en membranas.

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Figura 14: Distintos tipos de endocitosis. Ves culas recubiertas de clatrina. Es el principal mecanismo por el que se incorporan prote nas integrales y l pidos de la membrana plasm atica, as como macromol eculas extracelulares que generalmente no exceden los 156 nm, incluyendo algunos virus. Las ves culas se forman en areas de la membrana plasm atica donde se encuentra la prote na clatrina, que es citos olica. En los broblastos estas areas suponen un 2 % del total de la supercie de la membrana plasm atica. La clatrina posee una estructura con tres brazos que se ensamblan entre s formando pent agonos. Su estructura y su manera de asociarse parece que ayudan a la invaginaci on y cierre de la ves cula. La polimerizaci on de la clatrina forma ves culas de unos 120 nm. Entre la clatrina y la membrana celular se disponen otras prote nas denominadas adaptadoras que ayuda al ensamblaje de las mol eculas de clatrina para formar una especie de cesta que engloba a la ves cula. Las prote nas adaptadoras son las que realmente van a decidir qu e tipo de receptores de la membrana plasm atica, junto con sus ligandos, van a formar parte de las ves culas, puesto que interaccionan con el dominio citos olico de las prote nas integrales. Una vez que la ves cula se ha cerrado e internalizado, la clatrina de desensambla y la ves cula puede ir a org anulos espec cos dentro de la c elula, normalmente endosomas tempranos. Caveolas. Se describieron hace unos 50 a nos por P. Palade gracias im agenes de microscop a electr onica. Son unos peque nas invaginaciones en la membrana plasm atica (45-80 nm) presentes en la mayor a de las c elulas eucariotas que posteriormente se transforman en ves culas. Su membrana se caracteriza por poseer una prote na llamada caveolina, adem as de prote nas perif ericas ancladas a glicosilfosfatidil-inositoles, esngol pidos (esngomielina y glicoesngol pidos) y colesterol. La propia existencia de caveolina hace que las c elulas formen caveolas. Hay de 100 a 200 mol eculas 28

de caveolina por caveola y existen diferentes tipos en una sola caveola. La caveolina 1 se expresa en el m usculo liso y en la mayor a de las c elulas no musculares, y es esencial para la formaci on de las caveolas en estas c elulas. La caveolina 2, que se expresa junto con la caveolina 1, no es necesaria para la formaci on de las caveolas. La caveolina 3 se expresa en el m usculo estriado, cardiaco y algunas otras c elulas no musculares. Es esencial para formar caveolas en estas c elulas. No s olo se forman caveolas en la membrana plasm atica sino que tambi en se observan en el aparato de Golgi. As que podr a funcionar como mecanismo de transporte entre el aparato de Golgi y la membrana plasm atica para determinados tipos de mol eculas. Cuando se internan desde la membrana plasm atica, las ves culas resultantes de las caveolas se fusionan con los endosomas tempranos, aunque algunos autores consideran que lo hacen con un tipo especial de endosoma denominado caveosoma. Mol eculas como la toxina col erica, el acido f olico y otras mol eculas entran a la c elula gracias a las caveolas. Adem as, son tambi en un lugar de regulaci on de la comunicaci on celular puesto que contienen numerosos receptores en sus membranas que son eliminados de la supercie celular como los receptores tirosina quinasa. Tambi en participan en la incorporaci on de l pidos, incluso se han postulado en los mecanismos de supresi on de algunos tumores. Endocitosis de ves culas que no dependen de la clatrina ni de la caveolina. Estas v as se han descubierto porque se siguen produciendo procesos de endocitosis cuando se bloquean selectivamente las v as mediadas por clatrina y por caveolina. Algunas toxinas como las del c olera entran preferentemente por esta v a. No se conoce en detalle cuales son los mecanismos por los que este tipo de endocitosis selecciona a las mol eculas que transportan. Se sospecha que se pueden concentrar e incorporar mol eculas gracias a la acci on de las balsas de l pidos. Tampoco se conoce si la formaci on de estas ves culas es un proceso regulado o no. Macropinocitosis. Es un proceso mediante el cual se incorporan grandes cantidades de uido extracelular. En la supercie celular se crean evaginaciones a modo de ola cuyo frente cae sobre la membrana plasm atica y se fusiona con ella formando una gran ves cula interna o macropinosoma. El mecanismo de formaci on de los macropinosomas involucra a los mismos componentes que act uan durante la fagocitosis: los lamentos de actina y las prote nas motoras miosina. La macropinocitosis no s olo se utiliza para captar alimento, como ocurre en las amebas, sino que tambi en sirve para renovar la membrana plasm atica, se activa durante el movimiento celular para transportar grandes porciones de membrana hacia el frente de avance, incluso algunas bacterias son capaces de inducirla para introducirse en los 29

macropinosomas y as evitar la fagocitosis. Fagocitosis. Es un tipo especial de endocitosis que consiste en la incorporaci on de part culas de gran tama no como son bacterias, restos celulares o virus. Este mecanismo lo llevan a cabo c elulas especializadas como son los macr ofagos, neutr olos y las c elulas dendr ticas. Un ejemplo claro son los macr ofagos que fagocitan a los complejos formados por inmunoglobulinas unidas a otras part culas que pueden ser virus o bacterias. Tambi en son los encargados de eliminar miles de gl obulos rojos al d a. Los protozoos utilizan este mecanismo para alimentarse. El proceso de fagocitosis supone un reconocimiento de la part cula por parte de la c elula mediante receptores de membrana y la emisi on de unas protuberancias laminares o pseud opodos de citoplasma rodeados por membrana. Este proceso est a mediado por los lamentos de actina y las prote nas motoras miosina. Tales protuberancias rodean a la part cula, fusionan sus frentes de avance y encierran a la part cula formando una gran ves cula o fagosoma que se separa de la supercie y se interna en la c elula para ser digerida. La fagocitocis requiere de una se nal de reconocimiento para disparar el proceso. Una vez formado el fagosoma se fusionar a con los lisosomas para la degradaci on de su contenido.
Bibliograf a espec ca Mayor, S., Pagano, R.E . Pathways of clathrin-independent endocytosis. 2007. Nature reviews in molecular and cell biology. 8:603-612.

30

7.

ENDOSOMAS

Cualquiera que sea la ruta de endocitosis, las ves culas formadas en la membrana plasm atica se fusionar an con los endosomas o formar an un org anulo similar a ellos, como es el caso de la fagocitosis y macropinocitosis. Son unos compartimentos membranosos de forma irregular con aspecto de grandes bolsas t ubulos membranosos. Se comportan en la v a de endocitosis de manera similar al TGN (trans Golgi network) en la v a de exocitosis, es decir, son una estaci on de llegada, clasicaci on y reparto de mol eculas que se comunica con otros compartimentos de la c elula. En los endosomas convergen las ves culas que provienen del TGN del aparato de Golgi y, sobre todo, las que provienen de la membrana plasm atica v a endocitosis. De los endosomas salen ves culas hacia otros endosomas camino de los lisosomas, hacia el aparato de Golgi y hacia la membrana plasm atica, estos dos u ltimos son procesos de reciclado. Hay dos propuestas sobre la organizaci on del compartimento endosomal. En la primera se propone la existencia de diferentes subcompartimentos endosomales: a) endosomas tempranos pr oximos a la membrana plasm atica que reciben las ves culas de endocitosis; b) endosomas de reciclaje desde los que parten ves culas a la membrana plasm atica y al aparato de Golgi; c) los endosomas tard os y cuerpos multivesiculares que se localizan en zonas m as internas de la c elula y reciben ves culas cargadas de hidrolasas acidas desde el TGN del aparato de Golgi, y env an otras recicladas de vuelta al TGN. Los endosomas tard os ser an resultado de la maduraci on de los cuerpos multivesiculares y en ellos se produce el inicio de la degradaci on de las mol eculas incorporadas por endocitosis que terminar a en los lisosomas. Todos estos tipos de endosomas estar an comunicados por ves culas. En la segunda propuesta se propone que la convergencia y fusi on de las ves culas de endocitosis crean endosomas pr oximos a la membrana que se desplazar an hacia el interior celular. Durante su trayecto van madurando y produciendo ves culas de reciclado hacia la membrana plasm atica y al TGN, y nalmente se convierten en los lisosomas. De manera que todos los tipos de endosomas descritos son s olo estados de un proceso continuo de maduraci on. Todav a no est a resuelto cual de las dos propuestas es la correcta, o si ambos mecanismos act uan simult aneamente. Los endosomas tempranos son los encargados de recibir las ves culas de endocitosis. Desde ellos o desde los endosomas de reciclaje se da un intenso proceso de reciclado de mol eculas que vuelven a la membrana plasm atica, pudiendo representar hasta el 90 % de las prote nas y el 60 % 31
2

Figura 15: pos de endosomas y principales rutas de comunicaci on vesicular en las que
participan.

de los l pidos endocitados. No est a totalmente clara la diferencia entre los endosomas tempranos y los de reciclaje. Unos autores proponen que los endosomas de reciclado est an m as pr oximos al n ucleo y son la verdadera estaci on de reparto que reciben el material de los endosomas tempranos, mientras que otros proponen que los endosomas tempranos act uan tambi en como endosomas de reciclaje. Incluso que ambos son dos manifestaciones del mismo tipo de endosoma. El interior del compartimento endosomal se mantiene a pH m as acido (aproximadamente 6.5) que el del citosol (aproximadamente 7.2) gracias a las bombas de protones dependientes de ATP que se encuentran en sus membranas. El medio acido del endosoma permite que muchos receptores provenientes de la membrana plasm atica liberen su carga en el interior del endosoma. Los receptores sin ligando vuelven a la membrana plasm atica en ves culas de reciclado y el ligando sigue hacia otros compartimentos para su degradaci on. Normalmente la salida de estas ves culas recicladas se realiza en un dominio del endosoma f sicamente segregado del resto del espacio endosomal. En realidad se propone que el endosoma temprano posee varios dominios en sus membranas: uno donde se fusionan las ves culas de endocitosis procedentes de la membrana plasm atica, otro desde donde se reciclan ves culas hacia la

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membrana plasm atica, otro desde donde parten complejos membranosos que forman los cuerpos multivesiculares, otro desde el que parten ves culas al aparato de Golgi y algunos autores proponen la existencia de otros menos conocidos. Los cuerpos multivesiculares y posteriormente los endosomas tard os son la antesala de la degradaci on de las mol eculas endocitadas, la cual se realiza nalmente en los lisosomas. Las mol eculas destinadas a la degradaci on las reciben desde los endosomas tempranos (bien mediante ves culas o bien mediante la transformaci on de los endosomas tempranos en cuerpos multivesiculares). La manera de poner en contacto estas mol eculas con las enzimas hidrol ticas acidas es mediante la llegada de ves culas cargadas con dichos enzimas desde el TGN del aparato de Golgi hasta los cuerpos multivesiculares o endosomas tard os. Desde estos se producir a un u ltimo reciclado mediante ves culas hacia endosomas tempranos y hacia el TGN del aparato de Golgi. La acci on de las bombas de protones localizadas en las membranas de estos endosomas ir an acidicando m as el pH interno y por tanto favoreciendo la acci on de las hidrolasas acidas, cuya actividad optima se da a un pH pr oximo a 5, el cual se alcanza en los lisosomas. El aspecto multivesicular que se observa a microscop a electr onica de los cuerpos multivesiculares se debe a que en sus membranas se producen invaginaciones que dar an ves culas en su interior. De esta manera se pueden degradar las mol eculas que forman parte integral de las membranas, aunque en dichas invaginaciones entra adem as parte del uido citos olico, que tambi en ser a degradado. Como dijimos anteriormente los endosomas tard os se forman por maduraci on de los cuerpos multivesiculares. El empaquetado en ves culas de las hidrolasas acidas, necesarias para la degradaci on en los lisosomas, hacia los cuerpos multivesiculares y endosomas tard os se produce en el TGN gracias a un mecanismo de reconocimiento por receptor. As , estas enzimas son sintetizadas en el ret culo endoplasm atico y al pasar por el lado cis del aparato de Golgi son modicadas por otras enzimas que le a naden una manosa-6-fosfato. En el TGN son segregadas del resto de mol eculas de la v a de exocitosis gracias a la existencia de un receptor transmembrana que reconoce este residuo gluc dico. El complejo receptor-hidrolasa se concentra en zonas recubiertas con clatrina y son nalmente incorporados en ves culas. Estas ves culas viajan hasta los cuerpos multivesiculares y endosomas tard os con quienes se fusionan. El pH m as acido de estos endosomas respecto al que hay en el TGN hace que las hidrolasas se desliguen de su receptor, el cual puede volver a ser incluido en ves culas de reciclado que se dirigen de nuevo al 33

TGN del aparato de Golgi.

Figura 16: Ruta de las hidrolasas a cidas. Estas enzimas se sintetizan en el ret culo endoplasm atico (1) y son trasladadas hasta el aparato de Golgi (1) donde se le a nade un grupo fosfato a un residuo de manosa (2). En el TGN esta manosa-6-fosfato es reconocida por receptores espec cos (3), receptor-hidrolasa son englobadas en ves culas (3) y transportadas hasta los cuerpos multivesiculares y endosomas tard os. En estos org anulos hay una acidez mayor que hace que la hidrolasa se desligue de su ligando (4). El receptor es devuelto al TGN en ves culas de reciclado (5).

El destino de las mol eculas del interior de los endosomas tard os es ser degradadas en los lisosomas. Hay dos maneras no excluyentes en que esto puede ocurrir: una maduraci on de los endosomas tard os que con la disminuci on del pH se convierten en lisosomas o mediante la fusi on de endosomas tard os con lisosomas ya existentes en el citoplasma. En algunos tipos celulares existe una ruta vesicular adicional denominada transcitosis. En estas c elulas las mol eculas unidas a receptor que llegan a los endosomas tempranos no se desligan de su receptor y ambos, receptor y ligando, son de nuevo empaquetados en otras ves culas para ser transportadas a otros lugares de la membrana citoplasm atica, donde se fusionan y liberan su contenido al espacio extracelular. Esta ruta suele darse en las c elulas polarizadas como las epiteliales. As , se incorporan mol eculas unidas a sus receptores en ves culas formadas en la

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membrana apical que se fusionan con los endosomas y desde aqu el complejo ligando-receptor es de nuevo empaquetados en otras ves culas que viajan hasta las membranas plasm aticas basales y laterales de la c elula donde se fusionan y liberan su contenido. Por este mecanismo se incorporan elementos como el hierro en el organismo, que va asociado a una mol ecula denominada transferrina.

Figura 17: Liberaci on de las ves culas internas de los cuerpos mutivesiculares por fusi on
con la membrana plasm atica, que una vez en el exterior celular se denominan exosomas.

Algunos tipos celulares como las c elulas hematopoy eticas, los linfocitos, las c elulas dendr ticas, las c elulas epiteliales intestinales, los mastocitos y las c elulas tumorales, realizan un tipo de tr aco vesicular un tanto extra no. Los cuerpos multivesiculares, en vez de convertirse en lisosomas, se fusionan con la membrana plasm atica liberando sus ves culas internas (de 30 a 60 nm de di ametro) al espacio extracelular. A estas ves culas liberadas se les denomina exosomas y poseen una composici on molecular distinta a otros compartimentos intracelulares, por ejemplo poseen mucho colesterol y esngomielina.

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8.

LISOSOMAS

Las mol eculas que se incorporan por endocitosis cuyo destino es la degradaci on ser an conducidas hasta los lisosomas. Metchniko y sus colaboradores articularon a nales del siglo XIX la idea de que el material fagocitado era digerido en compartimentos intracelulares acidicados. Estos compartimentos fueron denominados lisosomas y aparecen en todas las c elulas eucariotas. Son corp usculos generalmente esf ericos de dimensiones variables, con una unidad de membrana. Su pH interno es acido, en torno a 5, y es en ese valor donde las enzimas lisosomales muestran su m axima actividad, por lo que se llaman hidrolasas acidas. Se han encontrado aproximadamente 40 tipos de enzimas lisosomales que degradan prote nas (proteasas), l pidos (lipasas), sac aridos (glucosidasas) y nucle otidos (nucleasas). La membrana de los lisosomas protege al resto de la c elula de esta actividad destructora, pero si esta se rompiese el pH citoplasm atico, pr oximo a 7,2, ser a un obst aculo para la actividad de estas enzimas. No todos los lisosomas son iguales y pueden contener juegos diferentes de enzimas. Cualquier defecto en alguna de las enzimas que existen en los lisosomas puede acarrear graves consecuencias, puesto que los productos que ellas deber an degradar quedar an almacenados en la c elula como productos residuales. Por ejemplo, la enfermedad de la glucogenosis tipo II. En estos individuos la -glucosidasa, que cataliza la degraci on del gluc ogeno, est a ausente y por ello hay grandes ac umulos de gluc ogeno en los org anos, que suelen ser letales. Los lisosomas reciben distintos nombres seg un el estado de degradaci on de las mol eculas que contienen: primarios, secundarios y cuerpos residuales. Los cuerpos residuales contienen material que ya no puede ser degradado y quedan almacenados en el interior celular o, como veremos m as adelante, se fusionan con la membrana plasm atica expulsando dicho material el medio extracelular. Los lisosomas contienen transportadores de membrana espec cos que van a permitir que los productos de la degradaci on, tales como amino acidos, az ucares, nucle otidos, puedan ser transportados al citosol. Tambi en poseen en su membrana una bomba de protones para permitir su acidez interior. C omo se protegen las prote nas que se encuentran en la membrana de ser digeridas? Estas prote nas est an fuertemente glucosidadas y parece que ello les proporciona protecci on. Hay tres v as por donde llegan a los lisosomas las mol eculas que se tienen que degradar: a) Los lisosomas son considerados como la estaci on nal de la v a endoc tica. La mayor a de las mol eculas que van a ser degradadas por esta 36

v a tienen que pasar previamente por los endosomas. Las prote nas que no se reciclan de nuevo a la membrana plasm atica o al TGN del aparato de Golgi desde los compartimentos endosomales son degradas en los lisosomas. La formaci on de los lisosomas es un asunto controvertido. Unos autores proponen que se forman por gemaci on o maduraci on a partir de los endosomas tard os que ya contienen todas las enzimas degradativas necesarias as como las mol eculas a degradar.Otros autores proponen que los lisosomas son org anulos independientes de los endosomas y que reciben ves culas desde los endosomas o se producen fusiones entre endosomas tard os y lisosomas. Para que las prote nas integrales de la membrana plasm atica sean dirigidas a los lisosomas se ha de producir una ubiquitinaci on de su parte citos olica, es decir, la adici on de una mol ecula denominada ubiquitina. Ello es necesario para que las prote nas de membrana interaccionen con la maquinaria de reparto que se encuentran en los endosomas y no vuelvan a la membrana citoplasm atica en ves culas de reciclado. Las interacciones con diversos complejos proteicos mantienen a las prote nas ubiquitinadas en zonas limitadas de la membrana endosomal, que poseen una cubierta en la que est a presente la clatrina. Todo ello hace que sean retenidas en los endosomas tempranos y depu es transportadas a los cuerpos multivesiculares, a los endosomas tard os, y de ah a los lisosomas, donde se degradan. Este mecanismo afecta a receptores, transportadores, canales, etc etera. Los receptores que no son ubiquitinados pero s endocitados, cuando llegan a los endosomas tempranos suelen reciclarse hacia la membrana celular. b) Las part culas obtenidas por fagocitosis siguen una v a propia. Las part culas como bacterias o restos celulares quedan en el interior celular englobadas por membrana formando un compartimento que madurar a y se convertir a en el denominado fagosoma. La degradaci on de estas part culas se produce cuando se fusionan los fagosomas con los lisosomas. c) Una tercera v a de llegada de mol eculas a los lisosomas es la autofagia. Es un proceso ubicuo por el que los org anulos deteriorados o material interno celular son eliminados. Pero adem as a los lisosomas han de llegar las hidrolasas acidas encargadas de la degradaci on. Estas se empaquetan en ves culas en el TGN del aparato de Golgi, las cuales se fusionar an con los endosomas tard os y desde ah llegan a los lisosomas. El mecanismo de selecci on de estas enzimas lo vimos en el apartado dedicado a los endosomas . En el aparato de Golgi se a nade a las enzimas lisosomales un grupo gluc dico fosfatado, la manosa-6-fosfato, que es reconocido por un receptor en el TGN del 37

aparato de Golgi. La interacci on del dominio citos olico de este receptor con la cubierta de clatrina permite englobar al receptor m as la hidrolasa en ves culas que se dirigir an hacia los endosomas tard os, y desde ah hasta los lisosomas. Aunque este sea el mecanimso principal existen otras prote nas que no requieren la fosforilaci on de las manosas para ir a los lisosomas. Estas prote nas son las integrales de la membrana. Estas prote nas contienen una secuencia de amino acidos de destino que se encuentra en la cara citos olica de la prote na. Se ha cre do tradicionalmente que los lisosomas tienen una intercomunicaci on muy limitada en la ruta vesicular cuando se compara con cualquier otro compartimento membranoso y se han considerado como un compartimento terminal. Durante los u ltimos a nos se han ido acumulando evidencias acerca de otra funci on de los lisosomas: su capacidad de participar en una exocitosis regulada. Por ejemplo, en el h gado se secretan enzimas lisos omicas a la bilis. Tambi en se ha observado la exocitosis de org anulos con caracter sticas similares a los lisosomas como es el caso de los melanocitos (los gr anulos de melanina que pasar an a los queratinocitos que dar an el color moreno a la piel). El acrosoma de los espermatozoides, una ves cula cargada de numerosas enzimas hidrol ticas, se libera durante la fecundaci on. Se ha propuesto desde hace tiempo que las c elulas eucariotas son capaces de eliminar las sustancias que no pueden degradas m as y esto ser a posible si los lisosomas terminan por expulsar su material cuando se fusionan con la membrana plasm atica. En las c elulas de mam feros donde s olo se produce secreci on constitutiva se ha visto que bajo ciertas condiciones pueden realizar exocitosis regulada, por ejemplo, por una elevaci on de la concentraci on de calcio intracelular, lo cual ocurre, por ejemplo, durante las peque nas roturas de la membrana citoplasm atica, como vimos en el apartado dedicado a las membranas (Asimetr a y reparaci on).

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9.

EN CELULAS VEGETALES

Las rutas de tr aco vesicular en las c elulas vegetales siguen el mismo esquema b asico que el de las c elulas animales. Sin embargo, presentan algunas diferencias. As , en las c elulas vegetales destacan las vacuolas, org anulos que realizan funciones esenciales y que necesitan comunicarse con otros org anulos celulares. Adem as, los procesos de endocitosis y exocitosis est an menos desarrollados que en las c elulas animales. La pared celular es una barrera importante a la difusi on de mol eculas entre c elulas y por ello las c elulas vegetales comunican sus citoplasmas de forma directa a trav es de unas estructuras que se denominan plasmodesmos. Las vacuolas son org anulos delimitados por una unidad de membrana con diversas funciones (digesti on, almacenamiento, mantenimiento de la presi on h drica, etc etera), formas y tama nos. Hay dos grandes categor as: las l ticas y las de almacenamiento. Aunque funcionalmente distintas, pueden fusionarse y formar una gran vacuola central. Las vacuolas l ticas son equivalentes a los lisosomas de las c elulas animales y se encargan de degradar materiales de desecho. Las de almacenamiento son importantes durante la germinaci on de semillas o para la respuesta de los vegetales a se nales ambientales. Al igual que en las c elulas animales, el ret culo endoplasm atico es el lugar de s ntesis de nuevas prote nas, l pidos y algunos az ucares que entran en la ruta vesicular. El mecanismo de s ntesis de prote nas es dirigido por la existencia de un p eptido se nal y por translocadores localizados en la membrana reticular. En el ret culo se dan tambi en procesos de control de calidad de las prote nas sintetizadas. Estas mol eculas viajar an hacia el aparato de Golgi englobadas en ves culas. Asimismo, existe un proceso de transporte de reciclaje desde el aparato de Golgi hasta el ret culo endoplasm atico. Esta comunicaci on bidireccional tiene caracter sticas diferentes en las c elulas vegetales puesto que ambos org anulos se encuentran muy pr oximos y hay dos modelos propuestos para el paso de mol eculas entre ambos: mediado por ves culas o mediante la formaci on de puentes tubulares pasajeros entre ellos que permiten una comunicaci on directa. En cualquier caso no existe un aparato de Golgi centralizado como ocurre en las c elulas animales sino varios dispersos por la c elula. Adem as de hacia el aparato de Golgi, el ret culo endoplasm atico puede enviar ves culas directamente hacia las vacuolas. Esta ruta se ha demostrado porque en algunas vacuolas de almacenamiento la mayor a de

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Figura 18: Esquema resumido del tr aco vesicular en una c elula vegetal (Modicado de
Hawes et al., 1999).

las prote nas no est an glucosidadas. Esta comunicaci on es indirecta puesto que las ves culas del ret culo endoplasm atico se fusionan con un compartimento denominado prevacuolar desde el que se originan ves culas que se fusionar an con las vacuolas de almacenamiento. Tambi en existen indicios de que existe una v a directa desde el ret culo endoplasm atico hasta la membrana plasm atica, aunque no est a completamente demostrado. La v a por defecto es la que lleva desde el ret culo endoplasm atico al aparato de Golgi. Este org anulo es muy importante para las plantas puesto que en el se sintetizan los componentes gluc dicos de la pared celular, excepto la celulosa. Desde el aparato de Golgi se env an ves culas hacia la vacuolas, tanto l ticas como de almacenamiento, as como hacia la membrana plasm atica. Sin embargo, la ruta hacia las vacuolas no es directa sino mediada por un compartimento prevacuolar, tanto aquellas que van hacia las vacuolas l ticas como las que van hacia las vacuolas de almac en. Se cree que estos dos tipos de vacuolas se fusiona en las c elula adultas modicando por tanto las rutas de tr aco vesicular. Existe tambi en una v a de reciclado desde el compartimento prevacuolar al 40

aparato de Golgi. Tanto las prote nas destinadas a las ves culas de almacenamiento como a las l ticas necesitan se nales que las etiqueten hacia sus destinos, pero las que van a la membrana no necesitan se nal y no se conoce el mecanismo por el cual son empaquetadas hacia la membrana. El destino por defecto desde el aparato de Golgi es la membrana plasm atica con la funci on principal de renovar sus mol eculas y esta es tambi en la principal misi on de la endocitosis. Las ves culas de endocitosis se fusionan con el compartimento prevacuolar, con el aparato de Golgi o directamente con las vacuolas. La endocitosis en plantas es poco conocida y parece que su importancia es menor que en los animales. Sin embargo, hay evidencias de la existencia de endocitosis y su maquinaria en plantas. Del mismo modo, no existe una caracterizaci on clara de los endosomas tempranos y el reciclado de membrana es poco conocido, aunque parecen existir m ultiples v as que involucrar an a los endosomas tempranos, como ocurre en las c elulas animales. Algunas observaciones apuntan a la existencia de al menos dos tipos de endosomas: endosomas tempranos localizados pr oximos a las membranas celulares y cuerpos multivesiculares. Los primeros involucrados en el reciclado de la membrana y y los segundos como pasos previos en la ruta hacia las vacuolas degradativas. Las c elulas vegetales no poseen lisosomas, pero s procesos degradativos que se dan en dichas vacuolas digestivas. En plantas existe otro compartimento membranoso que es pasajero y que se forma durante la divisi on celular. Se denomina placa celular y posteriormente se transformar a en el fragmoplasto. El fragmoplasto es la estructura a partir de la cual se formar an las membranas plasm aticas de dos c elulas durante la citocinesis y tambi en formar a la l amina media de la pared celular que las separar a. Su creaci on est a condicionada por la actuaci on del citoesqueleto, el cual dirige las ves culas que previenen desde el aparato de Golgi hasta la placa celular, donde se fusionan para formar el fragmoplasto. Esta es el ruta vesicular por defecto cuando la c elula se est a dividiendo.
Bibliograf a espec ca Hawes, C.R., Brandizzi, F., Andreeva, A.V. Endomembranes and vesicle tracking. 1999. Current opinion in plant biology. 2:254-461.

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