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INSTITUTO ESTATAL DE SEGURIDAD PUBLICA

Maestra en Criminalstica


ESPECTROFOTOMETRIA


Presenta:


Lic. Ma. Dolores Muoz Martnez
Lic. Ma. De Lourdes Lpez Castro
Psic. Dora Martha Rodrguez Valds
Lic. Fernando Ramrez Flores











solo para uso del Colegio Mexicano de Ciencias Forenses A.C. www.mexicoforense.org


Aguascalientes, Ags. Mxico
J unio del 2005



INTRODUCCIN

La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas para la
deteccin especfica de compuestos. Se caracteriza por su precisin, sensibilidad y su
aplicabilidad a molculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomolculas, etc) y
estado de agregacin (slido, lquido, gas). Se refiere a la medida de cantidades de luz
absorbida por una muestra, en funcin de la longitud de onda. Cada componente de una
solucin tiene su patrn de absorcin de luz caracterstica.

Los fundamentos fsico-qumicos de la
espectrofotometra son relativamente sencillos.

Las tcnicas espectroscpicas se empezaron a utilizar en el siglo XIX y no tardaron en
dar sus primeros frutos. As en 1868 el astrnomo francs P.J .C. J anssen se traslad a la
India con el objeto de observar un eclipse de sol y utilizar el espectroscopio,
desarrollado ocho aos antes, para hacer un estudio de la cromsfera solar.
Como resultado de sus observaciones anunci que haba detectado una nueva lnea
espectroscpica, de tono amarillo, que no perteneca a ninguno de los elementos conocidos
hasta ese momento. En el mismo ao, el qumico Frankland y el astrnomo Lockyer dedujeron
que la citada lnea corresponda a un nuevo elemento al que llamaron Helio (del griego helios
que significa Sol) por encontrarse en el espectro solar.
Durante ms de veinticinco aos se pens que el helio slo exista en el Sol, hasta que, en
1895 W. Ramsay lo descubriera en nuestro planeta.

Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de energa
interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el
de la fotosntesis en plantas y bacterias. La Mecnica Cuntica nos dice que la luz est
compuesta de fotones cada uno de los cules tiene una energa:
Efotn = = c/ ,
donde c es la velocidad de la luz, es su frecuencia, su longitud de onda y h= 6.6 10 -34
s es la constante de Planck. Cuando decimos que una sustancia qumica absorbe luz
de longitud de onda , esto significa que las molculas de esa sustancia absorben
fotones de esa longitud de onda.
En esta prctica estudiaremos la absorcin de luz en el ultravioleta cercano 325-420
nm) y en el visible 420-700 nm). Cuando una molcula absorbe un fotn en este
intervalo espectral, se excita pasando un electrn de un orbital del estado fundamental a
un orbital excitado de energa superior. De est manera la molcula almacena la energa
del fotn:
A + A *
E(A * ) =E(A) +Efotn
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Como la energa se conserva, la diferencia de energa entre el estado fundamental de la
molcula (A) y su estado excitado (A * ) debe ser exactamente igual a la energa del
fotn. Es decir, una molcula slo puede absorber fotones cuya energa sea igual a
la energa de un estado molecular excitado. Cada molcula tiene una serie de
estadosexcitados discretos (o bandas) que dependen de su estructura electrnica y que la
distinguen del resto de molculas. Como consecuencia, el espectro de absorcin, es
decir, la luz absorbida en funcin de la longitud de onda, constituye una verdadera sea
de identidad de cada sustancia o molcula.


ESPECTROFOTOMETRIA
Los modelos explicativos de la estructura de la materia que tienen como fundamento las
caractersticas ondulatorias de las partculas que la constituyen proporcionan un marco de
referencia conveniente para describir las interacciones entre la radiacin electromagntica
y la materia. Estas interacciones a su vez son el fundamento de las aplicaciones
espectroscpicas.
La energa radiante se encuentra constituida por fotones cada uno de los cuales tiene
como caracterstica una longitud de onda . Toda la radiacin electromagntica se mueve a
la misma velocidad en el vaco y esa velocidad de desplazamiento en el vaco es la
mxima observada en el universo. En algn medio material la interaccin entre los campos
elctricos y magnticos que existen en la materia y los correspondientes de la radiacin
pueden llegara a reducir esa velocidad de propagacin; por esta razn es solamente en el
vaco en donde se observa esa velocidad mxima.
Si asignamos como ya se dijo una longitud de onda caracterstica a cada tipo de radiacin,
la propagacin de esa onda se har con una frecuencia tal que al multiplicarla por su
longitud debe darnos la velocidad de propagacin. Esto es:

la letra griega lambda minscula representa la longitud de onda y la letra griega nu
minscula representa la frecuencia de esa onda. c=2,9979245810
8
ms
-1
es la velocidad
de la luz en el vaco.
La radiacin electromagntica que constituyen las ondas de radio de banda AM, digamos
de la frecuencia 1000 kHz (kilohercios) tiene, en consecuencia, una longitud de
2,9979245810
8
ms
-1
/1,010
6
s
-1
= 299,8 m. Esta onda se convierte en seal que
interpretamos, mediante el uso de un circuito apropiado que se encuentra en el aparato
receptor de radio.
Ondas mas cortas que la referida antes son las interpretamos en nuestros ojos, sin ayuda
de ningn traductor construido artificialmente . La radiacin electromagntica que se
percibe como color rojo tiene una longitud del orden de los 700 nm, por lo tanto su
frecuencia debe ser 2,9979245810
8
ms
-1
/7,010
-7
m =4,2810
14
s
-1
. Es decir 428 THz
(terahercios).
La energa asociada con cada una de esas ondas, se obtiene mediante la ecuacin de
Planck:
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Para las dos ondas descritas antes las energas respectivas sern: E
RF
=6,626075510
-34
J s1,010
6
s
-1
= 6,62610
-28
J [0,0006626 yJ (yoctoJ ulios)]; y E
roja
= 6,626075510
-34
J s4,2810
14
s
-1
=2,83610
-19
J [0,2836 aJ (attoJ ulios)]




Absorcin y Emisin de Radiacin por Parte de la Materia
Una descripcin simplificada de la estructura de la materia permite explicar los enlaces
entre los tomos para formar molculas en trminos de la localizacin de ciertas partculas
subatmicas, los electrones, entre esos tomos. Esas partculas evidencian sus
caractersticas ondulatorias ya que interactan con la radiacin electromagntica. La
molcula en su forma estable bajo las condiciones ambientales corrientes se encuentra en
un determinado nivel energtico. Si se logra hacer incidir sobre esa molcula un fotn de
radiacin electromagntica con la energa apropiada, la molcula incrementa su contenido
energtico absorbiendo ese fotn. Se dice entonces que la molcula paso a un estado
excitado.
La molcula energizada se encuentra en un estado que no es estable en las condiciones
ambientales corrientes; por lo tanto tiende a regresar a la condicin estable y para lograrlo
emite un fotn con la energa que logr excitarla antes.
La ferrocina es un compuesto policclico que forma un complejo de color prpura con el in
ferroso el color de ese compuesto se debe a la absorcin de radiacin en la regin visible
del espectro electromagntico con un mximo a la longitud de onda de 562 nm. En
cuanto se incrementa la energa del compuesto por absorcin de un mol de esos fotones?
Cada uno de los fotones con esa longitud de onda tiene una energa de 6,626075510
-34
J s(2,9979245810
8
ms
-1
/56210
-9
m) =3,53510
-19
J y en consecuencia un mol de esos
fotones tendrn una energa de 6,022136710
23
mol
-1
3,53510
-19
J = 212858 J mol
-1
;
212,858 kJ mol
-1

La materia absorbe radiacin de diversas regiones del espectro electromagntico
originadas, esas absorciones, en diferentes tipos de interacciones entre la materia y la
radiacin electromagntica. Dependiendo del tipo de interaccin se pueden analizar las
transiciones electrnicas que se pueden causar con la radiacin ultravioleta o visible. La
radiacin infrarroja interacta con los estados rotacionales y vibracinales de las
molculas. Si el fotn que llega a afectar a una molcula tiene un alto contenido de
energa, por ejemplo de la regin de rayos X o de los rayos gamma, no se produce
absorcin que se pueda emitir luego, sino que se modifica la estructura de la sustancia.
ESPECTROFOTOMETRIA
Se refiere a la medida de cantidades relativas de luz absorbida por una muestra, en
funcin de la longitud de onda.
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Cada componente de la solucin tiene su patrn de absorcin de luz caracterstico.
Comparando la longitud de onda y la intensidad del mximo de absorcin de luz de
una muestra versus soluciones standard, es posible determinar la identidad y la
concentracin de componentes disueltos en la muestra (solucin incgnita).
Las ventajas de la espectrofotometra sobre otros mtodos analticos de laboratorio
son varias: es rpida, precisa, verstil, fcil de usar y eficiente en costo. Los
espectrofotmetros se han mejorado en precisin y versatilidad en los ltimos aos
con los avances de tecnologa, y hoy se consideran indispensables en un laboratorio
de qumica analtica.
La espectrofotometra se usa para diversas aplicaciones, como :
anlisis cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de
investigacin,
estandarizacin de colores de diversos materiales, como plsticos y pinturas,
deteccin de niveles de contaminacin en aire y agua,
y determinacin de trazas de impurezas en alimentos y en reactivos.
Un espectrmetro tpico posee cuatro componentes bsicos: una fuente de
radiacin que tiene intensidad constante en el rango de longitud de onda que cubre
( usualmente es lmpara de tungsteno para luz visible,y deuterio para ultravioleta),
un compartimiento para la muestra, un monocromador que separa la banda de
longitud de onda deseada del resto del espectro y la dispersa al compartimiento de
la muestra, y un fotodetector, que mide cuantitativamente la radiacin que pasa
por la muestra.
En general, los espectrmetros miden en % de transmitancia (T) y absorbancia (A).
El porciento de transmitancia se refiere a la cantidad de radiacin que pasa a traves
de la muestra y alcanza el detector. Una solucin lmpida, no absorbente, mostrara
una lectura de 100% de transmitancia en un espectrofotometro calibrado. Las
unidades de absorbancia van de 0 a 2. La absorbancia se relaciona con la
transmitancia como
A =- log 1/T, (logaritmo decimal).
Esta es una traduccion del catalogo de Cole-Parmer.

infrarrojo
El espectro infrarrojo de un compuesto proporciona gran informacin sobre sus
propiedades internas (composicin qumica, impurezas, interaccin entre sustituyentes,
anlisis de grupos funcionales, etc.), por lo que es de gran importancia en anlisis
cualitativo.
La tcnica tambin es til para anlisis cuantitativo, dado que por su gran selectividad se
puede cuantificar una sustancia en una mezcla compleja sin la realizacin de mucho trabajo
previo de preparacin.
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Las aplicaciones son mltiples: anlisis de polmeros, aditivos, estudios forenses,
identificacin de contaminantes ambientales, medicina, diversas reas de la qumica
(organometlica, orgnica, inorgnica, agrcola, industrial), etc.









de onda, constituye una verdadera sea
de identidad de cada sustancia o molcula.


















LA LUZ

La luz emitida por el Sol proviene de la fotosfera. Esta
es la capa visible del Sol. Debido a sus altas
temperaturas aqu se generan ondas de luz.


Cul es la naturaleza de la luz?

Algunas veces la luz se manifiesta como onda. Otras veces se manifiesta como
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partcula. Todo depende de las circunstancias.




LA LUZ COMO ONDA
Sabemos que la luz se comporta como onda cuando se producen los efectos
de interferencia y difraccin. Esto ocurre por ejemplo cuando dos ondas se
encuentran en el mismo lugar y como resultado se anulan en unas partes y se
refuerzan en otras, formando as un patrn caracterstico de interferencia.

Cmo medimos una onda?

En una onda electromagntica, por ejemplo, el campo elctrico cambia en
intensidad de manera cclica as:




Cada ciclo de la onda se repite en intervalos separados por una longitud
de onda
La frecuencia mide el nmero de estos ciclos que ocurren cada
segundo.
En la luz, la longitud de onda determina el color de la luz (por ejemplo la
longitud de onda correspondiente al color verde es de 550 nanmetros)








EL ESPECTRO PTICO
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La luz blanca est compuesta de ondas de diversas frecuencias. Cuando un
rayo de luz blanca pasa por un prisma se separa en sus componentes de
acuerdo a la longitud de onda as:













EL FOTN: LA LUZ COMO PARTCULA
A muy altas energas, por ejemplo cuando la luz puede interactuar con un
tomo se observan comportamientos muy diferentes. La luz se comporta como
una partcula golpeando electrones fuera del tomo. A esta partcula elemental
se le llama fotn.
El fotn se puede entender como un paquete de energa electromagntica, o
luz. ste fue propuesto por Albert Einstein para explicar el efecto fotoelctrico
(cuando la luz golpea con un electrn de un tomo y lo saca fuera del tomo).

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Tipos de ondas

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Ya sabemos que cuando hacemos pasar la luz a travs de un prisma ptico se produce el
efecto llamado dispersin que consiste en la separacin de las distintas longitudes de onda
que forman el rayo incidente.
La luz blanca produce al descomponerla lo que llamamos un espectro contnuo, que
contiene el conjunto de colores que corresponde a la gama de longitudes de onda que la
integran.

Sin embargo, los elementos qumicos en estado gaseoso y sometidos a temperaturas
elevadas producen espectros discontinuos en los que se aprecia un conjunto de lneas que
corresponden a emisiones de slo algunas longitudes de onda. El siguiente grfico
muestra el espectro de emisin del Na (sodio):

El conjunto de lneas espectrales que se obtiene para un elemento concreto es siempre el
mismo, incluso si el elemento forma parte de un compuesto complejo y cada elemento
produce su propio espectro diferente al de cualquier otro elemento. Esto significa que cada
elemento tiene su propia firma espectral.
Si hacemos pasar la luz blanca por una sustancia antes de atravesar el prisma slo
pasarn aquellas longitudes de onda que no hayan sido absorbidas por dicha sustancia y
obtendremos el espectro de absorcin de dicha sustancia. El grfico siguiente muestra el
espectro de absorcin del sodio:

Observ que el sodio absorbe las mismas longitudes de onda que es capaz de emitir.
La regularidad encontrada en los espectros discontinuos supone un apoyo muy importante
para comprender la estructura de los tomos.
En el siguiente grfico pods ver los espectros de emisin de algunos elementos:

Como habrs deducido las ondas producidas por la piedra en el estanque son ondas
transversales.
El sonido es un ejemplo de onda longitudinal. Cuando hacemos vibrar un objeto, ste
transmite la vibracin a las molculas de los gases que componen el aire que se
encuentran prximas a l. A su vez las molculas que han sufrido la perturbacin se la
transmiten a sus molculas vecinas, de forma que la onda se va alejando del foco sonoro.
Observa las siguientes imgenes, en las que representamos las zonas de compresin y de
dilatacin tpicas de una onda sonora:

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CONCLUSIONES


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