UNAM, FQ, Farmacognosia Equipo 1

OBTENCIN DEL CRUDO ALCALOIDEO A PARTIR DE LA ESPECIE Datura stramonium

Se trat el material vegetal con potasa porque los alcaloides en el vegetal no estn en forma neutra, sino como sales de cido, haciendo solubles los alcaloides en fase orgnica

Material Vegetal
Tratado previamente con KOH Triturar Macerar en 500 mL de CH2Cl2 por 7 das Decantar

Residuo Slido

Residuo Lquido
Concentrar a presin reducida. Disolver el extracto con 30 mL de CH2Cl2

Desechar
Usando HCl para el proceso de reparto, los alcaloides se protonan y son solubles en agua.

Proceso de Reparto
3x30 mL HCl 1 N

Fase Acuosa

Fase Orgnica

Al usar NH4OH se desprotona el Agregar NH4OH alcaloide, hacindolo de concentrado, llevar a naturaleza neutra y soluble en pH= 10 solventes orgnicos.

Juntar las fases orgnicas

Proceso de Reparto
3x100 mL CH2Cl2

Fase Orgnica

Secar con Na2SO4

Desechar
Cromatografa en Capa Fina con soporte de gel de Slice, usando como referencias Atropina y Escopolamina y eludo con CHCl3-MeOH-NH4OH (9:1:1)

Fase Acuosa
Concentrar a Presin Reducida

Identificacin Cromatogrfica del Crudo Alcaloide

Crudo Alcaloideo

Revelar con Reactivo de Dragendorff

Contiene I, Bi y K; el bismuto forma compuestos de coordinacin con el nitrgeno de los alcaloides, los complejos formados precipitan.

El mtodo de extraccin usado en la prctica fue la maceracin. La maceracin consiste en dejar en contacto el material vegetal con un disolvente por un tiempo determinado y a temperatura ambiente, para que el disolvente penetre bien la estructura celular y disuelva los principios solubles. La operacin debe repetirse hasta agotar principios solubles. El procedimiento es muy usado para extraer aquellas materias primas que posean poca estructura celular. El mtodo tiene como desventaja que se prolonga el tiempo de extraccin y requiere grandes cantidades de disolvente. En la experimentacin se usaron 500 mL de diclorometano como disolvente y la extraccin tard 7 das. El toloache es conocido entre las etnias que habitan el territorio mexicano como una especie peligrosa; debe aclararse que el trmino toloache es usado indistintamente en las diferentes especies del gnero Datura, las ms conocidas son: Datura stramonium, Datura inoxia y Datura lanosa. El uso etnobotnico en Mxico es para tratamiento de dolor de huesos, reumas, artritis (en solucin hidroalcohlica o en ungentos) y sirve tambin para mitigar dolores en vsperas del parto. En la prctica el objetivo fue obtener el crudo de alcaloides a partir del extracto orgnico de las partes areas de Datura stramonium, aplicando un proceso de reparto cido-base. Tambin se estableci la identidad de los componentes mayoritarios presentes en el crudo alcaloideo (atropina y escopolamina) mediante la prueba de de Vitali Morin y por comparacin de propiedades cromatogrficas.

ANLISIS DE RESULTADOS DATOS El peso de frutos, semillas, hojas y tallos de Datura stramonium utilizado para la obtencin del crudo alcaloide fue de 100.061 g. Se realiz un ensayo de identidad de la planta, mediante la reaccin de Vitali Morin, que identifica alcaloides del tipo atropina. La reaccin consiste en la nitracin de los alcaloides con cido ntrico fumante, se forma una coloracin en presencia de hidrxido de potasio con los derivados nitrados en solucin alcohlica, la presencia de acetona estabiliza la coloracin. Para el experimento se us 1 g de muestra vegetal (500 mg tallo y hojas y 500 mg de semillas), la muestra fue tratada con H2SO4 0.1 N, se filtr y se agreg NH4OH concentrado y agua, tambin se adicion ter y se llev a agitacin. Se evapor la fase etrea, al residuo obtenido se le agreg HNO3 fumante y se evapor a sequedad. Se agreg acetona e KOH al 3%. Hubo coloracin violeta, ya que hubo formacin de azaoxonol, siendo la prueba a alcaloide de tipo tropnico positiva.

El mecanismo general de la reaccin de Vitali Morin es:

En la identificacin del extracto alcaloideo obtenido, se contrast por medio de una cromatografa en capa fina el contenido de los principales alcaloides producidos por Datura stramonium (Atropina y Escopolamina). El sistema cromatogrfico se eluy con la mezcla CHCl3-MeOH-NH4OH (9:1:1), terminada la elucin se llev la placa a luz UV y se procedi a revelar con reactivo de Dragendorff, que es un revelador especfico en compuestos nitrogenados. La cromatoplaca obtenida despus del revelado fue:

del= 4.2 cm

des= 0.8 cm dat= 0.3 cm

El Factor de Retencin (Rf) la atropina se calcul con los datos de la distancia recorrida por la muestra (dat) y la distancia recorrida por el eluyente (del):

El Factor de Retencin (Rf) de escopolamina se calcul con los datos de la distancia recorrida por la muestra (des) y la distancia recorrida por el eluyente (del):

Con los datos anteriores se entiende que la atropina es ms polar quela escopolamina, puesto que posee menor valor de retencin. En la zona de franjas del extracto alcaloideo las marcas de las franjas estuvieron a la altura de los estndares de escopolamina y atropina, es decir que el material vegetal con el cual se trabaj en laboratorio contena estos compuestos alcaloideos mayoritarios. Existieron otras franjas que no coinciden con los componentes mayoritarios, puesto que son compuestos de tipo alcaloideo diferentes a los dos estndares utilizados, por su acomodo en la placa se intuye que son menos polares que la atropina y algunos otros ms polares que la escopolamina.

CONCLUSIN Mediante la maceracin se elabor un extracto de la parte area de Datura stramonium, del cual se obtuvo un crudo alcaloideo mediante un proceso de particin cido-base. Se pudo establecer la identidad del material vegetal mediante el resultado positivo a la Reaccin de Vitali Morin, usando tambin la cromatografa en capa delgada con los estndares alcaloideos derivados del tropano: atropina y escopolamina.

REFERENCIAS http://enes.unam.mx/?lang=es_MX&cat=medicina&pl=toloache-planta-poco-conocida-en-mexico 04 OCT 2013 http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/termino.php?l=1&t=toloache 04 OCT 2013