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Lic. Biunayki Reyes Daz1*, Ing Caridad A Gasmuri Gonzlez1, MSc Gudelia Prez2, MSc Ania Daz Ferrer2, Lic Yadira Mora Lpez2, Tc. Noelia Baltrell Mena1, Tec Suanai Brown Valds1, Tec Amaury Hierrezuelo Malberty1, Tec Mirelys Cespedes Prez1, Tec Dayanna Ramos Prez1, Ing. Lazaro Snchez Gonzlez1, Tec Caridad E Isla1, Tc Dorelis Ortiz1, Tc Olga L Gonzalez1, y Lic. Luciano Francisco Hernndez3. 1Departamento Control de Procesos. Grupo Control Microbiolgico, 2Direccin Aseguramiento de la Calidad. 3Direccin de Produccin. Centro de Ingeniera Gentica y Biotecnologa P.O. Box 6162, Habana 10600, Cuba

Tener un plan de validacin de limpieza para los procedimientos de limpieza de la planta es una de las actividades que nos agrega valor, pues nos da seguridad sobre los productos que estamos elaborando,

reas Limpias, control e higienizacin despus de un cambio

no de los problemas principales a los cuales la industria farmacutica se enfrenta en la actualidad, involucra demostrar el cumplimiento con los estndares ambientales en sus reas de trabajo, principalmente en reas consideradas como reas Limpias. Por los controles requeridos para este nivel y su compromiso con la elaboracin de medicamentos con la calidad microbiolgica requerida, por este motivo es crtico e indiscutible que cualquier empresa, en este rubro, siga las normas de las Buenas Prcticas de Fabricacin [BPF] (en nuestra industria la cual se dedica a la obtencin de productos Biotecnolgicos estamos regidos fundamentalmente por las normas ISO, y por diferentes guas regulatorias como son: Centro Estatal de Calidad de los Medicamentos (CECMED), Food and Drug Administration (FDA), Organizacin Mundial de la Salud (OMS), International Conference on Harmonization (ICH) y la European Medicines Agency (EMEA). La validacin es una parte esencial de las Buenas Prcticas de Fabricacin. Hay dos principales fuentes de referencia en la

documentacin de la OMS en relacin con la validacin. En primer lugar, el texto de BPF de la OMS que cubre la validacin en la Parte Uno, Seccin 5 recalca que la validacin debe conducirse de conformidad con protocolos predenidos. Deben prepararse y almacenarse informes escritos que resuman los resultados y las conclusiones registradas. Los procesos y procedimientos deben establecerse sobre la base de un estudio de validacin. Debe realizarse una revalidacin peridica para asegurar que los procesos y los procedimientos sigan siendo capaces de lograr los resultados concebidos. Especial atencin debe prestarse a la validacin del proceso, los ensayos y los procedimientos de limpieza. Siempre que se habla de un proceso de validacin, referido por las Guas de BPF o los diferentes artculos publicados, se indica la planicacin de la revalidacin, en todos los casos solo es mencionado, y como se conoce no existe una receta, cada laboratorio y/o institucin rige sus bases, o mecanismos; ejemplo de estas guas donde se indica que se debe realizar revalidacin

pudiramos mencionar, algunas como: Guide to Cleaning Validation in API plant. Cleaning Validation in Active pharmaceutical Ingredient manufacturing plants. September 1999 APIC, donde en su acpite 6. Poltica de Validacion de limpieza, menciona que debe existir la poltica de revalidacin, as como tambin en el acpite, referido al informe final de la validacin plantea Any recommendations based on the results or relevant information obtained during the study including revalidation practices if aplicable. Anexo 15 to the EU Guide to Good Manufacturing Practice Cualificacin y validacin Revalidacin 45. Las instalaciones, sistemas, equipos y procesos, incluida la limpieza, se evaluarn peridicamente para confirmar que siguen siendo vlidos. Cuando no se hayan producido cambios significativos respecto al estado validado, esta necesidad de revalidacin se cubrir con una revisin que demuestre que las instalaciones, sistemas, equipos y procesos

Tabla 1. Concentracin de partculas en el aire permitidas para cada grado de clasicacin de las reas. Tabla 2. Clasicacin de aire de reas limpias y niveles de accin recomendados para la calidad microbiolgica. Gua de Normas de Correcta Fabricacin de Medicamentos de Uso Humano y Veterinario Anexo I Fabricacin de medicamentos estriles. Agencia espaola de medicamentos y productos sanitarios, 2009.

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cumplen las exigencias obligatorias. Health Products and Food Branch Inspectorate Guidance Document Cleaning Validation Guidelines Date issued: 2000-05-01 Date of implementation: 2000-05-01 7.0 Documentation A cleaning validation protocol should describe the procedure used to validate the cleaning process. It should include in addition to other information. acceptance criteria with rationales and conditions for revalidation. La revalidacin est fraccionada en dos categoras: 1. La revalidacin despus de algn cambio. 2. La revalidacin peridica. En la categora anterior, los cambios caractersticos que requieren revalidacin incluyen cambios en una materia prima o el material de envase, los cambios en los parmetros del proceso, los cambios en el equipo, incluidas reparaciones mayores y los cambios en los locales Los cambios en un proceso de limpieza validado, y los cambios en un proceso de fabricacin o equipos que pueden afectar a un proceso de limpieza validado, deben hacerse de conformidad con los procedimientos aprobados para el control de cambio. Este cambio puede dar lugar a pruebas adicionales para demostrar que los procesos de limpieza permanecen en un estado de control. Aunque es un requerimiento regulatorio designado formalmente y bien reconocido, la validacin de la limpieza contina siendo un problema para muchos fabricantes e inspectores. Puede ser una exigencia compleja, ya que requiere de una comprensin profunda del proceso, materiales, y los productos qumicos involucrados en la limpieza. Para un mejor entendimiento de estos procesos damos a conocer algunas consideraciones importantes para llevar a cabo una tarea como la de reevaluar el proceso de limpieza e higienizacin de una rea limpia, despus de producido algn cambio. Primero refrescaremos algunos trminos importantes: VALIDACIN DE LIMPIEZA: prueba documentada de que un procedimiento de limpieza consistentemente reducir los residuos de ingredientes farmacuticos activos (IFA), los agentes de limpieza (AdL) y sanitizacin, las endotoxinas bacterianas y la carga microbiana en las supercies de los equipos, que tienen contacto directo con
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Tabla 3. Tabla de Ejemplo de operaciones para preparacin asptica

Tabla 4.

el producto, a niveles aceptables para el procesamiento de medicamentos. REvALIDACIN: Repeticin de la validacin de limpieza para garantizar que los cambios introducidos de conformidad con los procedimientos de control de cambios no afectan negativamente el procedimiento de limpieza. CONTrOL DE CAMBIOS: Procedimiento escrito que describe la(s) accin(es) a tomar si se propone un cambio de instalaciones, materiales, sistemas, equipos y/o procesos usados en la fabricacin, envasado o ensayo de un producto farmacutico o que puede afectar la operacin del sistema de gestin de la calidad o de apoyo. Su objetivo es determinar las acciones necesarias para garantizar y documentar que el sistema se mantiene en un estado validado. LIMPIEZA: Se dene como el grado de aceptacin de sustancias, partculas y microorganismos no deseables cuyo efecto sea adverso al producto o proceso. HIGIENIZACIN: Proceso que se realiza en las reas limpias clasicadas con vistas a reducir la contaminacin microbiolgica a un nivel permisible segn los resultados histricos del control o a un nivel de referencia segn los establecidos. rEA LIMPIA: rea que cuenta con un control denido del ambiente respecto a la contaminacin microbiana o por partculas, con instalaciones construidas y usadas de tal manera que se reduzca la introduccin, generacin y retencin de contaminantes dentro del rea. PLAN DE MONITOrEO: Este debe establecerse por medio de una Evaluacin del Riesgo y con base en el tipo de instalacin, las posibles causas de contaminacin y el impacto de la contaminacin en el producto o proceso, que se lleva a cabo en el cuarto. Clasicacin de salas limpias y dispositivos de aire limpio Las salas limpias y los dispositivos de aire limpio deben clasicarse segn la norma
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LA VAlIDACIN ES UNA PARTE ESENCIAl DE lAS BUENAS PRCTICAS DE FAbRICACIN

EN ISO 14644-1. La clasicacin debe diferenciarse claramente de la monitorizacin ambiental del proceso en funcionamiento. En la tabla 1 se muestra la mxima concentracin de partculas en el aire permitidas para cada grado. Para clasicar las zonas en grado A debe tomarse en cada punto de muestreo un volumen mnimo de muestra de 1 m3. Para el grado A, la clasicacin de partculas del aire es la ISO 4.8 que indica un lmite de tamao de partcula 5,0 m. Para el grado B (en reposo), la clasicacin de partculas del aire es la ISO 5 para los dos tamaos de partculas considerados; Para el grado C (en reposo y en funcionamiento), la clasicacin de partculas del aire es la ISO 7 y la ISO 8, respectivamente. Para el grado D (en reposo), la clasicacin de partculas del aire es la ISO 8. La norma EN/ISO 14644-1 describe la metodologa a seguir a la hora de clasicar, la cual dene el nmero mnimo de puntos de muestreo y el tamao de la muestra, basados en el lmite de clase para el mayor tamao de partcula tomada en consideracin y en el mtodo de evaluacin de los datos recogidos. Es imprctico y caro establecer un mnimo de puntos a monitorear basado exclusivamente en el rea del cuarto en m2. Este mtodo trabaja para la certicacin, sin embargo deben establecerse lineamientos independientemente del proceso y con base en la Evaluacin del Riesgo siendo extremadamente importante para determinar qu y donde monitorear. El enfoque del programa de pruebas es monitorear el desempeo de una instalacin, con el propsito de identicar cambios signicativos en la eciencia. Este

proceso asegurar que los cambios pueden evaluarse, antes de que se conviertan en una fuente de contaminacin importante, que afecte la calidad, productividad y rendimiento. Las designaciones ISO 14644-1 proporcionan los valores uniformes de concentracin de partculas para reas limpias en mltiples industrias. Una concentracin de partculas ISO 5 es igual a una Clase 100 y aproximadamente igual a un Grado A de la Unin Europea. Lmites recomendados para la monitorizacin microbiolgica de las zonas limpias en Operacin y en descanso. Segn European Medicines Agency Cuando se realicen operaciones aspticas, la monitorizacin debe ser frecuente utilizando mtodos como placas de sedimentacin, muestreo volumtrico del aire y de supercies (por ejemplo, hisopos y placas de contacto). Los mtodos de muestreo utilizados en funcionamiento no deben interferir en la proteccin de la zona. Los resultados de la monitorizacin deben estudiarse al revisar la documentacin del lote para la liberacin del producto terminado. Las supercies y el personal deben supervisarse tras las operaciones crticas. Tambin es necesario realizar una monitorizacin microbiolgica adicional distinta a la de produccin como, por ejemplo, tras la validacin de sistemas, limpieza y desinfeccin. Revalidaciones / Control de Cambios Los protocolos deben establecer cuando se necesitar realizar la revalidacin del sistema o de un proceso. La revalidacin est vinculada al control de procesos y el control de cambios EL DESAFO ES MANTENEr EL PrOCESO VALIDADO Los cambios son inevitables y siempre acabarn por aparecer. Se deben identicar las fuentes y mantener procedimientos adeFARMESPAA INDUSTRIAL

cuados para su control. La complejidad de los procesos y la exigencia de mantenerse al da para ser competitivo se traducen en una mayor necesidad de cambios. Existe un procedimiento escrito para describir las acciones que se deben realizar si se propone un cambio en el entorno (o la instalacin) de fabricacin, el mtodo de limpieza e higienizacin, o cualquier otro que pueda afectar a la calidad del producto. Si los cambios puede que inuyan en la calidad del producto se solicitarn, documentarn y aceptarn formalmente. Se evaluar y se har un anlisis de riesgos de los posibles efectos que sobre el producto originara un cambio de instalaciones, sistemas o equipos. Deber determinarse la necesidad de una nueva revalidacin, y el alcance de la misma. Los procedimientos de limpieza e higienizacin, se evaluarn peridicamente para conrmar que siguen siendo vlidos cada 2 aos. Cuando no se hayan producido cambios signicativos respecto al estado validado, esta necesidad de revalidacin

LA VAlIDACIN DE lA
lIMPIEZA CONTINA SIENDO UN PROblEMA PARA MUCHOS fAbRICANTES E INSPECTORES

se cubrir con una revisin estadstica histrica que demuestre que los procesos de limpieza cumplieron en el perodo analizado las exigencias y criterios de aceptacin pre-establecidos. Calicacin en Proceso En este punto el procedimiento puede ser realizado teniendo en cuenta el Protocolo de la Validacin de limpieza e higienizacin, que anterior al cambio ya fue aprobado por Aseguramiento de Calidad, solamente se reajustaron los puntos a muestrear pues al ampliar el rea y aumentar por ejemplo la cantidad de paredes, puertas, mesas de trabajo y otros materiales que anteriormente no existan, la selec-

cin de los puntos a ser muestreados debe ser reajustada, con la inclusin de nuevos puntos. El Diseo experimental para realizar el procedimiento pudiera ser de la siguiente forma: Inicialmente, antes de la limpieza, se realiza un muestreo por placa de contacto de cada uno de los puntos denidos en la Hoja de Datos diseada para la recogida de estos (ver Tabla 4). Para la realizacin de la validacin y revalidacin de higienizacin y limpieza de las reas el diseo sera: 1. La limpieza ser supervisada por el Jefe de la planta a ser validada. 2. La frecuencia de limpieza ser la habitual acorde al Programa de Higienizacin y Limpieza y los Procedimientos y el muestreo de las supercies de las reas y del equipamiento ser de 3 veces, teniendo en cuenta que hasta el momento es lo generalmente se utiliza para denir el proceso validado, al menos en cuanto limpieza se reere:

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Muestrear antes de la limpieza e higienizacin Muestrear 1 hora despus de la limpieza e higienizacin Muestrear 8 y 10 horas despus de la limpieza e higienizacin para demostrar la conservacin de la limpieza en el tiempo. Se considerar adecuada la conservacin de la limpieza si para todos los puntos se cumple el criterio de aceptacin una vez transcurrida las 24 horas, coincidiendo con la hora cero del da siguiente de realizada la limpieza e higienizacin 3. Se tomar la correspondiente muestra de la solucin desinfectante a preparar segn lo establecido en el procedimiento de preparacin de soluciones 4. Se realizar este monitoreo por 3 das consecutivos quedando de la siguiente forma El criterio de aceptacin es el cumplimiento, en todos los puntos, del criterio establecido para supercies en correspondencia con la clasicacin del rea (Clase A, < 3 UFC/25cm2, Clase B, < 5 UFC/25cm2 y Clase C, < 25 UFC/25 cm2). Para la supercie exterior de las cortinas de ujos laminares de techo; as como de las cabinas, los lmites estarn en correspondencia con el rea que rodee a las mismas. Qu mtodo es el utilizado para el monitoreo de las supercies? Control Microbiolgico de Supercies El control microbiolgico de supercie nos proporciona informacin sobre la cantidad de microorganismos presentes sobre una supercie, la cual puede ser un equipo, mesa, ropa, manos del personal, etc. Esta evaluacin generalmente se hace utilizando: Placas de contacto (RODAC) Las placas de contacto o RODAC (Replicate Organism Direct Agar Contact) son placas de 55-60 mm de dimetro llenas con medio de cultivo hasta obtener una supercie convexa. Estas placas pueden preparase en el laboratorio o adquirirse comercialmente, en nuestra industria contamos con un grupo de trabajo que estn altamente especializados en la preparacin de las placas, recientemente publicamos nuestro trabajo en LifeScienceLab correspondiente al #006 Sept-Oct Evaluacin de la productividad de dos medios de cultivo para el muestreo ambiental microbiolgico Cmo Procesar los Datos Obtenidos? El resultado de los Controles Microbiol6 NOVIEMBRE/DICIEMBRE09
Tabla 5. Ejemplo de un rea Clase C muestreado por placa de contacto, para evaluar higienizacin del rea, trabajo publicado en FarmaEspaa Industrial mayo-junio, 2009.

sible a la presencia de puntos lejanos que lo que es una ANOVA de una va y debe usarse cada vez que la suposicin de normalidad dentro de las muestras no sea razonable. Segn escribi Flickinger en Pharmaceutical Formulation and Quality (1996); La Validacin de Limpieza suena lo sucientemente simple, pero lo es engaosamente. Porque si la cantidad de enorme trabajo que es requerida para validar los procedimientos de limpieza, no es realizada correctamente y con adecuada planicacin y justicacin cientca, los resultados nales pudieran ser menos de lo que es pretendido. Y esto se convierte en tiempo y dinero perdido. El resultado nal es que lo van a tener que repetir todo de nuevo. Conclusin Tener un plan de validacin de limpieza para los procedimientos de limpieza de la planta es una de las actividades que nos agrega valor, pues nos da seguridad sobre los productos que estamos elaborando, debemos seguir la secuencia correcta de las actividades, que cada paso que damos nos agregue valor. La validacin de limpieza provee el signicado de probar que los niveles de contaminacin han sido reducidos por debajo de los lmites de aceptacin establecidos. El programa de validacin de limpieza debera contener un programa de monitoreo racional para mantener el estado validado. La buena preparacin y una apropiada implementacin de las herramientas de la validacin de limpieza (matrices y tablas) es un factor determinante para el xito del programa de validacin de limpieza.

Tabla 6.

LOS PROCEDIMIENTOS DE
lIMPIEZA E HIGIENIZACIN, SE EVAlUARN PERIDICAMENTE PARA CONfIRMAR QUE SIGUEN SIENDO VlIDOS CADA

2 AOS

gicos se expresa en Unidades formadoras de Colonias (UFC), esta medida no es apta para Grcos de Controles convencionales, ya que en general la presencia de microorganismos no es un fenmeno lineal, si no que es muy dependiente de la naturaleza del Microorganismo, de la presencia de ellos y de su capacidad de crecimiento. Cuando observamos los resultados de control ambiental gran cantidad de estos resultados son igual a 0 ufc, con algunos valores intercalados de 1 y de vez en cuando algn valor anormalmente alto (150) (en la siguiente tabla ponemos un ejemplo de esto valores), por lo tanto calcular media y desviacin estndar tpica con tales conjuntos de valores carece de signicado fsico real. Todo esto nos hace que su estadstica sea un poco difcil, pero no imposible. Uno de los mtodos que usamos ms frecuente son los No paramtricos con comparacin de mltiples variables, mediante el paquete estadstico STATGRAPHICS Centurin versin XV. Empleando Pruebas de Wruskal-Wallis y Friedman las cuales son una alternativa para el anlisis estndar de varianzas que compara medianas de grupo en lugar de medias; esta prueba es mucho menos sen-

Bibliografa 1.  FDA Guidance for Industry. Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing -Current Good Manufacturing Practice. September 2004. 2.  Annexes to EU GMP Guide to Good Manufacturing Practice for Medicinal Products. Pharmaceutical Inspection Convention. Pharmaceutical Inspection Cooperation Scheme. PE 009-6 (Annexes), 5 April 2007. 3.  WHO Expert Committee on Specications for Pharmaceutical Preparations. Fortieth Report. Geneva, World Health Organization, 2006, Annex 2 (WHO Technical Report Series, No. 937). 4.  International Clean room Standards, ISO 14644. Geneva, International Organization for Standardization. 5.  PROYECTO de Norma Ocial Mexicana PROY-NOM059-SSA1-2004 (modica a la NOM-059-SSA1-1993, publicada el 31 de julio de 1998). 6.  ISPE Pharmaceutical Engineering Guides for New and Renovated Facilities. Vol. 3 Sterile Manufacturing Facilities, 1st Ed. January 1999. 7.  Flickinger B. Charting a Course for Cleaning Validation. The Best of Pharmaceutical Formulation and Quality (1996): www.pharmaquality.com/ validatn.html. 8.  QassureNews. Boletn No33- marzo-abril 2007

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