Verano Fq21

Cintica Qumica y Biolgica
I N G E N I E R A B I O Q U M I C A
C U R S O D E V E R A N O
CINTICA QUMICA y BIOLGICA
Ingeniera de Reac!re"
La gran diversidad de productos de consumo directo o que sirven como materia prima
para la obtencin de otros productos, requieren para su uso de alguna transformacin
qumica. A travs de la Termodinmica, Cintica Qumica y Catlisis se pretende
describir si una reaccin qumica es factible de llevarse a cabo y con qu rapidez.
En la bsqueda de favorecer la realizacin de la reaccin, la catlisis juega un papel muy
importante, permitiendo que muchas reacciones que a pesar de que la termodinmica
indique que s se pueden llevar a cabo, si no fuese por la catlisis no tendran algn
sentido prctico.
El trmino catlisis agrupa al conjunto de procedimientos y conocimientos que permiten
que la velocidad con la que trascurre una reaccin se incremente in-situ. Bajo tal
condicin la catlisis es una rama de la cintica qumica.
La cintica qumica se ocupa del estudio dinmico de las reacciones qumicas tomando en
cuenta el mecanismo en el nivel molecular de tales transformaciones. El concepto de
velocidad de reaccin traduce la rapidez con la que en un sistema se produce una
transformacin qumica. La reaccin qumica global se lleva a cabo a travs de etapas
las cuales en su conjunto constituyen el mecanismo de reaccin. La velocidad se
define en trminos de parmetros que pueden ser medidos durante la transformacin;
as, podemos definirla como la variacin de la concentracin de uno de los reactivos
que desaparece, o de uno de los productos que aparece, en el sistema respecto del
tiempo.
A partir de estas tres ramas de la ciencia es posible reproducir una transformacin qumica
en un medio altamente controlado; en nuestro caso, este medio ser el recipiente que
llamamos el Reactor Qumico, el cual dispondr de su medio de calentamiento o
enfriamiento para que la reaccin se lleve a cabo a una temperatura apropiada. En
sistemas homogneos requerir de un sistema de agitacin para tratar de controlar que la
rapidez de reaccin se lleve a cabo en cierto valor y en el caso de sistemas catalticos
heterogneos el reactor estar empacado con el catalizador que haya sido previamente
seleccionado.
En reactores de operacin continua el tiempo de reaccin estar predeterminado por el
tamao del reactor, de tal manera que una variable de diseo ser el volumen de dicho
reactor. En operacin discontnua el tiempo de reaccin es el tiempo cronometrado desde
que la reaccin inicia. En ambos tipos de operaciones el tiempo requerido en una
Emilio Mrquez Paz 1
reaccin es determinado por la conversin requerida. Ambas variables tiempo y
conversin estn ntimamente relacionadas y una puede ser calculada a partir de la otra;
para el caso de operacin contnua el tiempo se denominar tiempo de residencia.
La aplicacin de la ngeniera Bioqumica tendr como finalidad determinar el tamao del
reactor, el sistema de transferencia de calor (si se requiere) y el sistema de agitacin, a
partir de los requerimientos de mercado y de la informacin bsica obtenida del uso de la
termodinmica, la cintica qumica, de la catlisis y en su caso de fenmenos de
transporte. Las variables de operacin de proceso sern: Temperatura, Presin,
Composicin y Flujo msico inicial o masa inicial. Las variables de diseo sern Tiempo y
Conversin.
Los factores principales en que se fundamenta el diseo de reactores son:
1. Las fases implicadas.
2. El intervalo de temperaturas.
3. La presin de operacin.
4. El tiempo de residencia o la velocidad espacial.
5. La corrosin.
6. La transmisin del calor.
7. El control de la temperatura.
8. La agitacin para lograr la uniformidad o el control de temperatura.
9. El funcionamiento discontinuo o continuo.
10. La velocidad de produccin.
Para conseguir el control adecuado de una reaccin, la temperatura debe mantenerse
dentro de lmites moderados por el empleo de intercambiadores de calor. En los aparatos
industriales no siempre es posible mantener condiciones exactamente isotrmicas, pero
puede lograrse una velocidad de reaccin satisfactoria por regulacin del intercambio de
calor, conjuntamente con el ajuste de las temperaturas y concentraciones iniciales, y el
empleo de catalizadores o inhibidores. Las condiciones de intercambio dependen de la
superficie de transmisin del calor, del coeficiente global de transferencia de calor.

Figura 1.- Mtodos caractersticos de transmisin de calor.
Emilio Mrquez Paz 2
Con los mtodos 1 y 2 es evidente que no es posible mantener la temperatura
absolutamente constante sino dentro de un intervalo determinado.
UNIDAD I#
CINTICA QUMICA
1.- En la mayora de los procesos qumicos, el reac!r representa el corazn de la planta.
Desde un punto de vista integrado, la secuencia bsica de un $r!ce"! %&'ic! considera
a una etapa de reaccin seguida por una etapa de separacin y purificacin; en algunos
casos hay varias etapas de separacin, adems de que tambin podra requerirse la
purificacin de la alimentacin. El reactor pone en contacto ntimo a los reactivos y el
catalizador, de manera que "e $r!$icien (a" c!ndici!ne" a$r!$iada" para que se
lleve(n) a cabo la(s) reaccin(es) qumica(s). El diseo apropiado de un reactor debe
permitir la agitacin y mezclado de los componentes del "i"e'a reacci!nane, disipar la
energa de los alrededores hacia el sistema o viceversa, ya sea que se trate de una
reaccin endotrmica o exotrmica, para obtener la conversin mxima.
2.- Los !)*ei+!" de la cintica qumica, relacionados al diseo de reactores es: Proponer
un modelo cintico para una reaccin qumica, demostrar la validez del modelo propuesto
con datos obtenidos experimentalmente y determinar los valores de las constantes
cinticas.
Para ilustrar el procedimiento, consideremos que la experimentacin se hace en un reactor
intermitente.
a. Primero se deen determinar la temperatura ! presin de la reaccin. Estos
parmetros usualmente dependen de consideraciones termodinmicas" por
e#emplo$ necesitamos cierta temperatura para alcan%ar la energa de activacin
requerida para que la reaccin suceda. Consideraciones de propiedad fsica por
e#emplo$ necesitamos cierta temperatura para reducir la viscosidad$ o cierta presin
para mantener a los reactivos en la fase lquida. Consideraciones del proceso
glo!al$ como la temperatura ! presin de la alimentacin$ o la temperatura !
presin del sistema reaccionante a la salida. Estas consideraciones conducen a
valores estimados de la temperatura ! presin de la reaccin.
. &tra consideracin importante$ aunque no siempre es ovia$ es sore la forma en
que se va a mantener la temperatura ! presin constante en los e'perimentos$ as
como el tipo de unidad a escala industrial que dee ser dise(ada para mantener
constante estos parmetros. El calor requerido por las reacciones endotrmicas o el
generado por las reacciones e'otrmicas dee ser a(adido al sistema reaccionante
o disipado )acia un lquido de enfriamiento$ usando alguna versin de intercamio
de calor a travs de una superficie$ como enc)aquetamiento$ serpentines ! otros$ o
controlando la temperatura de la alimentacin al reactor. *i la reaccin es
endotrmica la energa trmica requerida puede ser cedida por el calor latente del
vapor saturado a presiones desde 1 ar )asta 1+ ar. *in importar el mtodo$ la
cantidad de calor a(adido o eliminado durante la e'perimentacin dee ser medido
! registrado$ deido a que estos datos podran ser requeridos para el dise(o del
Emilio Mrquez Paz 3
sistema de intercamio de calor. ,omo un dato importante$ el acero funde a 1-.+/,
pero a ..+/, pierde el .+0 de su resistencia original.
c. Elegidas la temperatura ! presin del sistema reaccionante se lleva a cao la
reaccin oteniendo datos de variacin de concentracin respecto al tiempo.
d. En la siguiente etapa se postula un mecanismo de reaccin. 1 partir de este
mecanismo se propone la etapa determinante de la velocidad de reaccin gloal. 1l
mecanismo de reaccin postulado le corresponde un modelo cintico$ mismo que
ser validado por el a#uste que se otenga de los datos e'perimentales. El modelo
cintico es confirmado ! las constantes cinticas calculadas$ usando los llamados
mtodos integral$ vida media ! diferencial.
3.- Para establecer el '!de(! cin,ic! y conocer los parmetros del mismo, de manera
que podamos optimizar la cantidad de productos deseados y el tiempo de reaccin, es
necesario conocer la cin,ica de (a reacci-n, es decir, si la reaccin es elemental o no
elemental, simple o mltiple, reversible o irreversible, de orden constante o cambiante. La
cintica tambin establece las dependencias de la velocidad de reaccin con la
concentracin a travs del orden de reaccin y de la constante de velocidad de reaccin
con la temperatura.
4.- Hay diferentes ecuaciones para expresar reacciones qumicas: ecuacin
estequiomtrica, de velocidad y molecular. Una ec&aci-n e"e%&i!',rica solo expresa
el balance de materia total, sin que necesariamente establezca el mecanismo de reaccin;
esta ecuacin es la ms fcil de obtener debido a que sus coeficientes pueden ser
determinados por mediciones fsicas de las cantidades de reactivos consumidos y de
productos formados. La ec&aci-n de +e(!cidad expresa la velocidad de formacin o
desaparicin de un componente particular, en trminos de concentracin o de alguna
medicin, ya sea presin a volumen constante, volumen a presin constante, conduccin
elctrica, viscosidad, coeficiente de extincin molecular, presin, desviacin de la luz
polarizada, etc. Hay dos constantes en esta ecuacin: la constante especfica de velocidad
de reaccin (k) y el orden de reaccin (n); para cuantificar ambas constantes se debe
proponer un modelo cintico y comprobarlo experimentalmente. La ec&aci-n '!(ec&(ar
expresa el nmero de molculas de cada reactivo que interaccionan unos con otros para
formar los complejos intermediarios de alta energa, en la etapa limitante de velocidad,
esto es, la reaccin de velocidad ms lenta comparada a la velocidad de las otras
reacciones que forman la reaccin qumica global. Debido a que la ecuacin molecular
representa verdaderas interacciones moleculares, sus coeficientes slo pueden ser
nmeros enteros; esta ecuacin puede ser difcil de determinar, debido a que requiere el
aislamiento de la etapa controlante de la velocidad de reaccin.
El conocimiento del modelo de velocidad de reaccin permitira proponer la etapa
controlante de la velocidad de reaccin global. Si el mecanismo de reaccin fuera simple,
los coeficientes de la ecuacin molecular seran los coeficientes estequiomtricos y por lo
tanto, el orden de reaccin parcial. Si el mecanismo de reaccin fuera complejo, el orden
de reaccin parcial para cada reactivo, podra corresponder al coeficiente estequiomtrico
Emilio Mrquez Paz 4
de cada reactivo en la reaccin cuya velocidad controla a la velocidad de la reaccin
global.
Los tres tipos de ecuaciones son usadas en el di'en"i!na'ien! de( reac!r; la
ecuacin estequiomtrica se necesita para los balances globales de materia y energa;
establece la cantidad de calor que debe disipar el sistema reaccionante. La ecuacin de
velocidad, junto con la molecular, se usan para determinar el tipo de reactor a ser usado.
La ecuacin de velocidad permite el clculo directo del tiempo de residencia requerido y
por lo tanto, el volumen del reactor.
5.- La ley de accin de masas o ley de Guldberg-Waage establece que la velocidad de
reaccin es directamente proporcional al producto de productos de la actividad de las
especies reactivas, elevado cada trmino a un exponente.
(-ri) = ki .(Ci)
ni
Donde: (Ci)
ni
= f(Ci) ki = Constante especfica de velocidad de reaccin
Las reacciones qumicas que siguen un mecanismo de una etapa, se les llama reacciones
elementales; si el mecanismo est formado por ms de una etapa, se les llama reacciones
no-elementales. Las reacciones no-elementales pueden ser consideradas como una serie
de reacciones elementales en las que se forman intermediarios, como radicales libres,
iones, complejos polares, complejos de transicin o molculas completas. Estos
intermediarios pueden convertirse directamente a productos, o servir como elementos
reactivos en las etapas de propagacin de las reacciones en cadena. Para distinguir entre
un mecanismo y otro, se debe tener la ecuacin de velocidad y comparar con la ecuacin
estequiomtrica; si el exponente de la concentracin de cada especie qumica es igual a
su respectivo coeficiente estequiomtrico, tenemos una reaccin elemental. Si esto no se
cumple por lo menos en un trmino de concentracin, tenemos una reaccin no elemental;
en este caso, probablemente la estequiometra resultante del modelo obtenido
correspondera a la estequiometra de la reaccin que forma una especie intermediaria y
que controla la velocidad global de la reaccin. Averiguar la etapa limitante de la velocidad
de reaccin, requiere una familiaridad con los tipos de reacciones. Por lo tanto, an sin
conocer el mecanismo de reaccin, podramos proponer modelos cinticos para las
reacciones qumicas, primero suponiendo que se trata de una reaccin elemental y
comparando el modelo cintico con los datos experimentales; despus de fallar en esta
comparacin y proponer otros modelos, se deber suponer que se trata de una reaccin
no-elemental.
6.- El conocimiento del tipo de reaccin es necesario para analizar datos experimentales,
de manera que los valores numricos de las constantes de velocidad puedan ser
calculados.
Emilio Mrquez Paz 5
Primero hay que averiguar si se trata de una reaccin simple o mltiple. Las reacciones
mltiples pueden ser, en serie, en paralelo, o una combinacin de ambas. La siguiente
distincin es si la reaccin es significativamente reversible o puede considerarse como
irreversible; si es irreversible solo necesitamos determinar una sola constante de velocidad
(k1); si es reversible, necesitamos determinar una segunda constante de velocidad para la
reaccin inversa (k2). La tercera distincin es si la reaccin es elemental o no-elemental.
7.- La distincin final de una reaccin, es su clase. Hay dos clases muy amplias:
homogneas (en una sola fase) y las heterogneas (fases mltiples). Este tipo de
clasificacin tiene impacto sobre el tipo de reactor que sera empleado en la operacin
comercial a escala completa.
8.- Presentacin del software POLYMATH y prctica del mismo, calculando velocidades
de reaccin en sistemas intermitentes.
9.- Mtodos analticos para medir el progreso de la reaccin experimental. Aunque el
mtodo ms comn es la determinacin directa de la concentracin de un componente
dado como una funcin del tiempo, a menudo se infiere de otras mediciones como la
presin, volumen, ndice de refraccin o conductividad elctrica.
10.- Obtencin de datos cinticos. Aunque los datos termodinmicos algunas veces
pueden ser obtenidos de la literatura o estimados por algunos mtodos, los datos cinticos
casi siempre deben ser obtenidos experimentalmente. Los valores de concentracin contra
tiempo, son los datos tpicos que se obtienen, y se usan para confirmar el modelo cintico
de la reaccin, as como cuantificar los valores de las constantes de velocidad de reaccin
(ki) y el orden de la reaccin (ni), en la frmula generalizada de la ecuacin de velocidad:
(-ri) = ki f(Ci)
donde f(Ci) = (Ci)
ni
Los mtodos que se usan para comprobar los modelos cinticos son el: integral, vida
media y diferencial.
11.- El mtodo integral es el preferido particularmente cuando se trata con reacciones
relativamente simples. Requiere de un nmero menor de datos y menos precisos. Para
reacciones ms complicadas, el mtodo diferencial es mejor, debido a que no requiere del
usuario la propuesta de una forma de ecuacin de velocidad. Para el mtodo integral, una
vez propuesto el mecanismo de reaccin, el ingeniero predice la forma de ecuacin de
Emilio Mrquez Paz 6
velocidad: (-ri) = ki f(Ci), que se arregla de la siguiente forma:
( )
( )
ri
dCi
f Ci
k dt
i
Esta ecuacin se integra para dar:
( )
( ) ( )
F Ci
dCi
f Ci
dCi
f Ci
k dt k t
Cio
Ci
Ci
Cio
i
t
i

0

f2,i3 contiene a las especies qumicas de las que depende la velocidad de reaccin, pero
para obtener la funcin resultante de la integracin F2,i3 o forma integrada, f2,i3 debe
estar en funcin del reactivo limitante. Para esto es til la tabla estequiomtrica siguiente:
Especie Vi Alimentacin Lo Convertido En el Equilibrio
A A NAo,
CAo
PAo
XA.NAo
XA.CAo
XA.pAo
NA = NAo + XA.NAo
CA = CAo + XA.CAo
pA = pAo + XA.pAo
B B NBo
CBo
PBo
b/a.XA.NAo
b/a.XA.CAo
b/a.XA.pAo
NB = NBo + b/a.XA.NAo
CB = CBo + b/a.XA.CAo
PB = pBo + b/a.XA.pAo
P P NPo
CPo
PPo
p/a.XA.NAo
p/a.XA.CAo
p/a.XA.pAo
NP = NPo + p/a.XA.NAo
CP = CPo + p/a.XA.CAo
PP = pPo + p/a.XA.pAo
Q Q NQo
CQo
PQo
q/a.XA.NAo
q/a.XA.CAo
q/a.XA.pAo
NQ = NQo + q/a.XA.NAo
CQ = CQo + q/a.XA.CAo
PQ = pQo + q/a.XA.pAo
La forma integrada del modelo se usa, buscando una buena correlacin con los datos
experimentales, para calcular los valores de (ki) a diferentes valores de (Ci) y (t), o para
trazar una grfica de F2,i3 contra t. Si los valores de (ki) son constantes o alternantes, o
produce una lnea recta, el modelo se considera correcto y puede ser usado para
dimensionar el reactor. Si los valores de (ki) no son constantes o alternantes, o los datos
no se distribuyen linealmente, debe postularse un modelo nuevo y desarrollar una nueva
ecuacin de velocidad para comparar el comportamiento de los datos experimentales
contra este modelo. La secuencia se repite hasta que los datos ajusten a la correlacin.
Para reacciones simples e irreversibles, con la participacin de una especie reactiva, las
formas integradas son relativamente sencillas de obtener.
12.- Las formas integradas para reacciones simples, irreversibles, orden entero y
constante, y elementales estn en el anexo de estas notas.
13.- Para el mtodo diferencial no es necesario integrar la ecuacin de velocidad y
comparar los datos experimentales contra esta forma integrada; el ingeniero busca el
ajuste de los datos experimentales directamente con la ecuacin de velocidad. Con los
datos experimentales de Ci vs t, se calculan o determinan por mtodos numricos, valores
de (-ri) = -dCi/dt. Los valores de ki se calculan para diferentes valores de (-ri) y f(Ci) o se
determinan grficamente trazando (-ri) vs f(Ci) o log(-ri) vs log(f(Ci)).
Emilio Mrquez Paz 7

( ) ( ) Ci f k
dt
dCi
ri
i

14.- Despus de que el modelo de la ecuacin de velocidad se ha confirmado con datos
experimentales obtenidos a temperatura constante y las constantes de velocidad de
reaccin se han calculado, stas sern vlidas slo a esa temperatura. Para tener la
variacin de (k) con la temperatura se propone un modelo. En la mayora de los casos, la
dependencia de k con la temperatura sigue la ley de Arrhenius: k = ko EXP(-Ea/RT), de
manera que el valor de k puede ser calculado a cualquier temperatura si se conoce la
energa de activacin (Ea) y el factor de frecuencia (ko). Si la energa de activacin y el
factor de frecuencia se desconocen, puede ser calculada de una grfica de (lnk) contra
(1/T); la pendiente de esa grfica es igual a (-Ea/R). Los valores de (k) se obtienen
repitiendo los experimentos a otras temperaturas.
15.- Como se mencion en los puntos 5 y 6 de esta unidad, los modelos de ecuacin de
velocidad propuestos corresponden a reacciones elementales. Si an no ha sido posible
tener una ecuacin de velocidad comprobada, debemos proponer modelos para
reacciones no elementales. Recordemos que en las reacciones no elementales, el
exponente de por lo menos una especie reactiva no es igual al coeficiente
estequiomtrico. Por lo tanto, para la misma ecuacin estequiomtrica, podemos proponer
ms de un modelo de ecuacin de velocidad. Es importante repetir, que se trata de la
misma ecuacin estequiomtrica, por lo que se mantienen las relaciones estequiomtricas
entre el consumo de reactivos y formacin de productos.
16.- Las formas integradas para reacciones simples, irreversibles, orden entero o
fraccionario, y no elementales estn en el anexo de estas notas.
17.- Las reacciones qumicas tambin pueden ser reversibles; es decir, los modelos de
ecuacin de velocidad requieren de dos constantes de velocidad. Una constante (k1) hacia
la desaparicin de reactivos y la otra (k2) hacia la formacin de reactivos.
k1
Por ejemplo, para la reaccin: A + B P + Q
K2
El modelo de ecuacin de velocidad, para la reaccin qumica elemental, reversible sera:
(-rA) = k1 CA CB k2 CP CQ
El primer trmino representa a la velocidad de desaparicin de los reactivos:
(-rA) = k1 CA CB
y el segundo trmino representa la velocidad de formacin de los reactivos:
(+rA) = k2 CP CQ
Al principio de la reaccin, el producto de (k2) por las concentraciones de los productos
que se van formando es muy pequeo comparado con el producto de (k1) por las
Emilio Mrquez Paz 8
concentraciones de los reactivos. En la medida que avanza la reaccin, la velocidad global
de desaparicin de A, representada por esta diferencia, se ver ms afectada debido a
que la velocidad de formacin de A va aumentando: (-rA)global = (-rA) - (+rA)
En el equilibrio ambas velocidades se igualan y la velocidad global de desaparicin de A
es cero: (-rA)global = 0; (-rA)e = (+rA)e
De acuerdo a estos criterios, se puede saber si una reaccin es irreversible o reversible.
Una reaccin es irreversible si a un tiempo suficientemente grande, la concentracin del
reactivo limitante se agota. Una reaccin es reversible si a un tiempo suficientemente
grande, la concentracin del reactivo limitante alcanza un valor constante, as como los
dems reactivos, si los hay, y los productos. Es decir, el reactivo limitante no es
consumido en su totalidad.
18.- Los modelos de ecuacin de velocidad para reacciones reversibles tambin pueden
ser demostrados con los mtodos integral y diferencial, de la misma manera como se hizo
con las reacciones irreversibles. Con una modificacin del modelo cintico, podemos
identificar a f2,i3:
k1
A + B P + Q
K2
(-rA) = k1 CA CB k2 CP CQ
(-rA) = k1 [CA CB (k2/k1) CP CQ]
Donde Ke = k1/k2 f2,i3 = [CA CB (k2/k1) CP CQ]
19.- Las formas integradas para reacciones simples, reversibles, orden entero y
elementales estn en el anexo de estas notas.
Emilio Mrquez Paz 9
EXPRESONES CNETCAS NTEGRADAS
REACCONES QUMCAS SMPLES, RREVERSBLES, ELEMENTALES
REACCN QUMCA EXPRESN CNTCA FORMAS NTEGRADAS
k1
1) A Prods; (-rA) = k1 CA

ln
1
1
1
_
,

XA
k t

ln
CAo
CA
k t
_
,

1

t
k
1 2
1
0 693
/
.
k2
2) 2 A Prods; (-rA) = k2 CA

1 1
2
CA CAo
k t

XA
XA
k CAot
1
2

k
t CAo
2
1 2
1
/

t
k CAo
1 2
2
1
/

k3
3) 3 A Prods; (-rA) = k3 CA

1 1
2
2 2 3
CA CAo
k t

2
1
2
2
2 3
2
XA XA
XA
k CAo t

( )

k
t CAo
3
1 2
2
15
.
/

t
k CAo
1 2
3
2
15
/
.

k2
4) A + B Prods; (-rA) = k2 CA CB
Si CBO/CAO = M; CB = CA

ln
( )
( )
M XA
M XA
k CAo M t
_
,

1
1
2

ln ( )
CBCAo
CACBo
k CBo CAo t
_
,

2
Si CBO/CAO = 1; CB/CA = 1

1 1
2
CA CAo
k t

XA
XA
k CAot
1
2

Si CBO CAO; CB = CBO

ln
'
CAo
CA
k t
_
,

2
donde k2' = k2 CAO
k3
5) A + 2 B Prods; (-rA) = k3 CACB
Si CBO/CAO = M; CB/CA = 2

ln
( )
( )
( )
( )
M XA
M XA
XA M
M M XA
k CAo M t
_
,

2
1
2 2
2
2
3
2

Emilio Mrquez Paz 10

ln
( )( )
( )
CAoCB
CBoCA
CAo CBo CBo CB
CBoCB
k CBo CAo t
_
,
+

2
2
3
2

Si CBO/CAO = 2; CB/CA = 2

1 1
8
2 2 3
CA CAo
k t

t
k CAo
1 2
3
3
8
/


ln
'
CAo
CA
k t
_
,

3

k k CBo
3 3
2 '
Si CAO CBO; CA = CAO

1 1
3
CB CBo
k t
''

k k CAo
3 3
''

k3
6) A + B + D Prods; (-rA) = (-rB) = (-rD) = k3 CA CB CD
Si CBO/CAO = M y CDO/CAO = N

( )
1
1
1
1 1
1
1
1
3
2
( )( )
ln
( )( )
ln
( )( )
ln
M N M
M XA
M M N
XA
N M N
N XA
N
k CAo t

_
,

_
,

1 1 1
3
( )( )
ln
( )( )
ln
( )( )
ln
CBo CAo CDo CAo
CAo
CA CBo CDo CBo CAo
CBo
CB CDo CBo CDo CAo
CDo
CD
k t

_
,
+

_
,
+

_
,

Si CAO = CBO = CDO, entonces, CA = CB = CD

1 1
2 2 3
CA CAo
k t

t
k CAo
1 2
3
2
15
/
.

Si CDO CBO y CBO = CAO, entonces, CD = CDO y CB = CA

1 1
3
CA CAo
k t
'

k k CDo
3 3
'
Si CDO CBO; CBO /CAO = M, entonces, CD = CDO y CB = CA

ln
( )
( )
'
M XA
M XA
k CAo M t
_
,

1
1
3

k k CDo
3 3
'

REACCONES QUMCAS SMPLES, RREVERSBLES, NO-ELEMENTALES
kn
9) n A Prods (-rA) = kn CA
n

Para n = 1 log(-rA) = log(kn) + n log(CA)
log(t1/2) = log(A) + (1-n) logCAO

A
k n
n
n
2 1
1
1
( )

10) A + B Prods

10a) (-rA) = k3 CA CB

ln
( ) ( )
( )
M XA
M XA
XA M
XA
k CAo M t
1 1
1
1
3
2 2
_
,
+

( ) ( ) t . 1 - M . C . k
C . C
C C
1 - M C
C
M.C
ln
2 2
Ao 3
Ao A
A Ao
Ao
B
A
1
]
1

+
1
]
1
Si CBO/CAO = 1, entonces CA = CB

1 1
2
2 2 3
CA CAo
k t

10b) (-rA) = k3 CA CB


ln
( )
( )
( )
( )
M XA
M XA
XA M
M M XA
k CAo M t
_
,

1
1
1
3
2 2

ln
( )( )
( )
CAoCB
CBoCA
CBo CB CBo CAo
CBoCB
k CBo CAo t
_
,

3
2


( )
( ) ( ) t . 1 - M . C . k C - C
M.C
1 - M
M.C
C
ln
2 2
Ao 3 B Bo
B A
B

1
]
1
Si CBO/CAO = 1; CA = CB

1 1
2
2 2 3
CA CAo
k t

REACCONES QUMCAS SMPLES, RREVERSBLES, NO-ELEMENTALES
11) A + 2 B Prods
11a) (-rA) = k2 CA CB
Si CBO/CAO = M; CB = 2CA

ln
( )
( )
M XA
M XA
k CAo M t
_
,

2
1
2
2

ln ( )
CAoCB
CBoCA
k CBo CAo t
2
2

Si CBO/CAO = 2; CB = 2CA

1 1
2
2
CA CAo
k t
11b) (-rA) = k3 CA CB
Si CBO/CAO = M; CB = 2CA

2
1
2
2
1
2
3
2 2
ln
( ) ( )
( )
M XA
M XA
XA M
XA
k CAo M t
_
,
+

Si CBO/CAO = 2; CB = 2CA

1 1
4
2 2 3
CA CAo
k t

kn
12) a A + b B Prods (-rA) = kn CA
na
CB
nb

Si CBO/CAO = M; M = b/a entonces CB = (b/a)CA
log(-rA) = log(kn) + na log(CA) + nb log(CB)
Si CBO/CAO = b/a; CB/CA = b/a
(-rA) = kn' CA
n
; donde kn' = kn (b/a)
nb
y n = na + nb

log(t1/2) = log(A) + (1-n) logCAO

A
k n
n
n
2 1
1
1
'
( )

(-rA) = kn CA
na
CBO
nb
= kn' CA
na
; donde kn' = kn CAO
nb
log(-rA) = log(kn') + na log(CA)
Si CAO CBO; CA = CAO
(-rA) = kn CAO
na
CB
nb
= kn'' CB
nb
; donde kn'' = kn CAO
na
REACCONES QUMCAS SMPLES, RREVERSBLES, NO-ELEMENTALES, CUYO ORDEN CAMBA
CON LA CONCENTRACN DEL REACTVO.
13) A Prods

( )
+
rA
k CA
k CA
m
n
1
2
1
donde el orden de la reaccin cambia desde (m-n) cuando k2CA
n
1, hasta m cuando k2CA
n
1
Si m = n = 1, el orden cambia desde cero hasta uno

( )
+
rA
k CA
k CA
1
2
1

1 1 1
1
2
1
( )
+
rA k CA
k
k

( )
( )

rA
k
k k
rA
CA
1
2 2
1

ln
CAo
CA
CAo CA
k k
t
CAo CA
_
,
2 1

REACCONES QUMCAS SMPLES, REVERSBLES, ELEMENTALES

k1
14) A P (-rA)global = k1 CA - k2 CP ; Si CPO/CAO = R
k2

ln
( ) ( )
XAe
XAe XA
k
R
XAe
t
2
1
1
k1
15) A P + Q (-rA)global = k1 CA - k2 CP CQ ; Si CPO/CAO = R y CQO/CAO = S
k2

ln
( ( ))
( )( )
XAe A XAe XA XAe
A XAe XAe XA
k CAo
A XAe XAe
XAe
t
+ +
+

+
1 2
1
2
2
donde A = R+S+RS
k1
16) A 2 P (-rA)global = k1 CA - k2 CP

; Si CPO/CAO = P

k2

ln
( ( ))
( )( )
XAe A XAe XA XAe
A XAe XAe XA
k CAo
A XAe XAe
XAe
t
+ +
+

+
4 4 1
4
8 4
1
2
2
donde A = 4P+P
k1
17) A + B P (-rA)global = k1 CA CB - k2 CP ; Si CBO/CAO = M y CPO/CAO = P
k2

ln
( )( )
( ( )) ( )( )
XAe XA A PXAe
XAe A PXAe XA P XAe
k
XAe PXAe A
XAe M XAe
t

+

+

2
2
2
1
donde A = P+PM+M
REACCONES QUMCAS SMPLES, REVERSBLES, ELEMENTALES

k1
18) 2 A Q (-rA)global = k1 CA - k2 CQ ; Si CPO/CAO = P
k2

ln
( )( )
( ( . ))
.
( )
XAe XA A PXAe
XAe A PXAe XA P XAe
k
PXAe A XAe
XAe
t

+

+
05
2 05
1
2 2
2
2
donde A = 0.5+2P
k1
19) A + B P + Q (-rA)global = k1 CA CB - k2 CP CQ
;
Si CBO/CAO = M, CPO/CAO = R, CQO/CAO = S
k2

ln
( ( ))
( )( ) ( )( )
XAe AXAe C XA A BXAe
AXAe C XAe XA
k CAo
AXAe C BXAe
XAe M XAe
t
+ +
+

+

2
2
2
1

donde A = M-RS; B = R+S+M+1; C = MR+MS+RS+MRS
k1
20) A + B 2 P (-rA)global = k1 CA CB - k2 CP ; Si CBO/CAO = M y CPO/CAO = P
k2

ln
( ( ))
( )( ) ( )( )
XAe A BXAe XA B CXAe
A BXAe XAe XA
k CAo
A BXAe CXAe
XAe M XAe
t
+ +
+

+

2
2
2
1
donde A = P+PM+4PM; B = 4M-P; C = 4P+4+4M
k1
21) 2 A P + Q (-rA)global = k1 CA - k2 CP CQ ; Si CPO/CAO = R y CQO/CAO = S
k2

ln
( )( )
( ( )) ( )
A BXAe XAe XA
k CAo
CXAe BXAe A
XAe
t

+

+
2
2
2
2
1
donde A = 2RS+R+S; B = RS-1; C = R+S+2
k1
22) 2 A 2 P (-rA)global = k1 CA - k2 CP ; Si CPO/CAO = P
k2

ln
( ( ))
( )( ) ( )
A BXAe XAe XA
k CAo
A BXAe CXAe
XAe
t
+ +
+

+
2
2
2
2
1
donde A = P+2P; B = 1-P; C = 2+2P


UNIDAD II
CAT.LISIS /ETEROGNEA
,lasificacin4 De acuerdo con las condiciones en las que se llevan a cabo las
reacciones es posible separar el fenmeno cataltico en tres dominios independientes.
a3 ,atlisis )omognea4 5onde todas las especies cinticamente activas$ comprendido el
catali%ador$ constitu!en una misma fase$ con una velocidad de reaccin similar en
todos los puntos. *e considera tamin en esta rama el caso en que uno de los
reactivos es un gas ! que los otros$ con el catali%ador$ pertenecen a una misma fase
lquida. 5eido a la soluilidad del gas la transformacin se produce en todo el lquido !
no en la interfase gas-lquido. La naturale%a de los productos tampoco influ!e. En este
tipo de catlisis las velocidades son generalmente elevadas$ los venenos inofensivos !
la posiilidad de estudio de mecanismos de reaccin ms fcil para poder aislar las
especies intermedias.
3 ,atlisis )eterognea4 El catali%ador es insolule en los sistemas qumicos en los
cuales provoca la transformacin ! forma una fase distinta mu! a menudo slida.
E'isten dos fases ! una superficie de contacto. La reaccin se lleva a cao en esta
superficie de contacto ! el fluido es una reserva de molculas por transformar o que !a
reaccionaron. ,omo la reaccin qumica se pasa en dos dimensiones$ al menos uno de
los reactivos dee ser adsorido qumicamente. La catlisis )eterognea est limitada
al estudio de reacciones provocadas en las molculas por el campo de fuer%a del slido
! se limita a algunos angstroms. 5ee )acerse notar que la ma!or parte de
catali%adores slidos son metales$ 'idos$ sulfuros metlicos o sales 2sulfatos silicatos$
fosfatos3 con alta energa reticular.
c3 ,atlisis en%imtica4 6ecie su nomre del catali%ador$ que es una me%cla o molcula
orgnica que generalmente contiene una protena que forma un coloide lioflico. 5ada la
naturale%a particular del catali%ador$ la catlisis en%imtica no pertenece clara !
definitivamente al dominio de la catlisis )omognea. Est caracteri%ada por
selectividades mu! elevadas ! a#as temperaturas. *e puede afirmar con ase$ que sin
la catlisis en%imtica no sera posile la vida. Es suficiente decir que el proceso ase
de la actividad vital$ la asimilacin del ,&7 por la clorofila de las plantas es un proceso
fotoqumico ! cataltico. La transformacin por las clulas$ de al8minas$ grasas
caro)idratos as como la sntesis de otras molculas son catalticas. La formacin de
las cadenas de 691$ que es la ase del cdigo gentico depende de la presencia de
ciertas en%imas. La actividad cataltica de las en%imas es muc)simo ma!or que los
catali%adores inorgnicos4 1 mol de alco)ol )idrogenasa transforma por segundo :7+
moles de alco)ol en cido actico a 7./, mientras que a 7++/, los catali%adores
industriales como Pt$ transforman +.1 a 1 mol de alco)ol por mol de catali%ador. 1 +/,
la catalasa descompone 7+++++ moles de ;7+7 por mol de en%ima ! por segundo en
tanto que el inorgnico ms activo$ Pt$ descompone a 7+/,$ 1+ a <+ moles de ;7+7 por
mol de catali%ador por segundo.
Aplicaciones ndustriales
La mayora de los procesos en catlisis utilizan catalizadores slidos. Estos slidos, de
composicin altamente compleja (en ocasiones llegan a tener 10 o ms elementos en su
frmula), pueden ser sin embargo descritos en forma de tres componentes elementales: la
fase activa, el soporte y el promotor.
La fase activa, como su nombre lo indica, es la directamente responsable de la actividad
cataltica. Esta fase activa puede ser una sola fase qumica o un conjunto de ellas, sin
embargo, se caracteriza porque ella sola puede llevar a cabo la reaccin en las
condiciones establecidas. Sin embargo, esta fase activa puede tener un costo muy
elevado, como en el caso de los metales nobles (platino, paladio, rodio, etc.) o puede ser
muy sensible a la temperatura (caso de los sulfuros de molibdeno y cobalto), por lo cual se
requiere de un soporte para dispersarla, estabilizarla y proporcionarle buenas propiedades
mecnicas.
El soporte es la matriz sobre la cual se deposita la fase activa y el que permite optimizar
sus propiedades catalticas. Este soporte puede ser poroso y por lo tanto presentar un
rea superficial por gramo elevada.
Esto es importante si la reaccin qumica es suficientemente lenta; el soporte tambin
debe tener resistencia mecnica elevada si se usan flujos muy rpidos, o tener resistencia
trmica si la reaccin es llevada a cabo en altas temperaturas. En algunos casos como en
la reformacin de gasolinas el soporte acta tambin como una fase activa la cual sumada
a la del platino permite el proceso completo de deshidrociclizacin (transformacin de
molculas lineales de bajo octanaje como el hexano o el heptano en molculas cclicas
aromticas como el benceno o el tolueno). La forma fsica de este soporte tambin est
definida por las condiciones de reaccin (diseo del reactor) y puede ser en forma de
esferas, palitos, anillos, mallas, hojuelas e inclusive monolitos en forma de panal. Los
soportes pueden ser amorfos (SiO2, carbn), o cristalinos, como las zeolitas o la almina.

El promotor es aquella substancia que incorporada a la fase activa o al soporte en
pequeas proporciones, permite mejorar las caractersticas de un catalizador en
cualquiera de sus funciones de actividad, selectividad o estabilidad. Se conocen dos tipos
de promotores: te'turales los que contribuyen a dar mayor estabilidad a la fase activa, y
electrnicos, los que aumentan la actividad. Los casos ms conocidos como promotores
son el potasio (electrnico) y la almina (textural) en el catalizador de hierro para la
sntesis del amoniaco.

Figura 2.- Aspecto fsico de soportes para catalizadores.
Los slidos catalticos poseen en general fuertes campos interatmicos del tipo inico o
metlico. En general compuestos orgnicos covalentes no son catalticos. Un
requerimiento fundamental es que la estructura cataltica sea estable bajo las
condiciones de reaccin, por ejemplo el metal debe permanecer en estado metlico y
no formar un compuesto (inactivo) con la molcula reaccionante.
Los metales que catalizan las reacciones de hidrogenacin usualmente quimisorben el
hidrgeno no muy fuerte y lo disocian homolticamente. Son esencialmente metales del
grupo V (Fe, Co, Ni, Pt, Pd, Rh, etc.) y el cobre en el grupo V. Tambin algunos
metales catalizan oxidaciones porque quimisorben oxgeno, pero la mayora de los
metales en general no pueden ser usados como tal ya que se oxidan. Sin embargo en
forma de xido muchos metales s son buenos catalizadores de oxidacin (FeO, NiO,
CuO, Cr2O3, etc). El oxgeno es ms fuertemente adsorbido por los metales que el
hidrgeno, de manera que se forman compuestos estables. Adems los enlaces metal-
oxgeno requieren energas ms elevadas que los enlaces metal-hidrgeno para ser
rearreglados y por lo tanto temperatura ms elevadas.
Los catalizadores xidos pueden ser clasificados en dos tipos: por estructura o por su
enlace con el oxgeno. Aquellos que son de estructura inica en los cuales los tomos
de oxgeno son fcilmente transferidos, la substancia puede ser un buen catalizador de
oxidacin parcial; en general la movilidad de los tomos de oxgeno causa que se
formen xidos no estequiomtricos, por ejemplo MoO3 y mezclas de algunos xidos
como Sb2O3 - SnO2 Bi2O3 - MoO3, y MoO3 - V2O5. Los xidos en los cuales el oxgeno
est ms fuertemente unido, son estables an en presencia de hidrgeno y pueden
actuar como catalizadores de deshidrogenacin en condiciones en las cuales los
metales, tradicionalmente usados para estas reacciones, son fcilmente desactivados
por depsitos carbonceos, por ejemplo Cr2O3, Fe2O3.
Otro tipo de slidos catalticos son aquellos que pueden contener en su superficie
grupos cidos debido al gradual removimiento de agua en los tratamientos trmicos.
Dentro de este grupo estn incluidas las zeolitas (alumino-silcatos con estructura
cristalina bien definida y con cavidades peridicas dentro de su estructura, figura 3.
La reaccin qumica ocurre en etapas, que son, figura 4:
a3 1dsorcin de reactivos sore la superficie$
3 6eaccin superficial$
c3 5esadsorcin de los productos.

Figura 3.- Estructura de una zeolita (a) tipo A y (b) tipo X o Y. Figura 4.- Etapas de una reaccin cataltica.
Qu causa que la superficie de un slido adsorba a la molcula reaccionante,
rearregle sus enlaces y desadsorba los productos de su superficie?
Todos los slidos no son uniformes en el sentido que las propiedades fsicas y
qumicas varan con la localizacin en la superficie. Aun en un metal puro los tomos
en dislocaciones, esquinas y aristas son diferentes a los tomos de las caras. La
heterogeneidad de las superficies catalticas puede ser fcilmente mostrada por varios
mtodos como adsorcin, envenenamiento, etc. Esta heterogeneidad condujo a H.S.
Taylor en 1948 a proponer que la reaccin cataltica slo se lleva a cabo en algunos
lugares especficos los cuales llam sitios activos. Estos sitios pueden ser activos para
una reaccin pero no para otra y es difcil de identificarlos claramente en una reaccin.
Sin embargo, s es posible estimar su nmero y se calcula que en los metales es del
orden de 10
15
tomos/cm
2
y en los catalizadores cidos de 10
11
tomos/cm
2
. La
aplicacin industrial de un catalizador heterogneo requiere de la optimizacin de las
tres principales caractersticas de un catalizador: actividad, selectividad y estabilidad.
La actividad es la consecuencia directa del efecto acelerador, y se define como una
velocidad de reaccin en moles transformados por segundo y por gramo de catalizador.
En el caso de algunos catalizadores se prefiere dar esta velocidad corregida por el rea
del catalizador o mejor an normalizada por el nmero de tomos de catalizador que
estn en contacto con la reaccin (turnover numer). Esta ltima expresin de la
velocidad ha sido muy til para establecer una clasificacin de las reacciones
catalticas. Reacciones "fciles" o insensibles a la estructura y reacciones "exigentes" o
sensibles a la estructura. En el primer tipo de reacciones la velocidad depende tan slo
del nmero total de tomos de catalizador en contacto con el fluido, mientras que en el
segundo caso depende slo de algn tipo de tomo en particular, como por ejemplo
tomos en las esquinas de los cristales de catalizador, un arreglo geomtrico de
tomos (dos o tres), etc.
La selectividad de un catalizador est relacionada con el efecto orientador de la
reaccin en una direccin preferente. Esta cualidad es debida a que el catalizador abre
nuevos caminos de reaccin con menor energa de activacin, los cuales desembocan
en una mayor cantidad del producto o en nuevos productos. Un catalizador es ms
selectivo mientras da mayor cantidad del producto deseado. La selectividad se puede
definir como la cantidad de producto constituido en funcin de la velocidad total de
formacin de productos.
En la reaccin: A B + C
La selectividad hacia B ser:

La estailidad de un catalizador es la variable final a optimizar en su aplicacin
industrial y la que se relaciona directamente con la vida til del catalizador. La vida de
operacin de un catalizador debe ser evaluada en funcin de la cantidad de productos
formados, de manera que en el mnimo de tiempo debe permitir amortizar el costo del
catalizador y la operacin del proceso. Si bien en las condiciones de uso de los
catalizadores en la actualidad casi todos stos sobrepasan largamente este mnimo de
vida til, se requiere de una serie de prevenciones para evitar que el catalizador se
desactive prematuramente.
El fenmeno de la desactivacin est ntimamente ligada a la estabilidad del
catalizador. Las principales causas de desactivacin son:
13 Envenenamiento de la superficie cataltica por una molcula que se adsore fuertemente.
73 ,oquificacin 2formacin de carn3 de la superficie por des)idrogenacin de algunos
)idrocaruros cclicos.
-3 6econstruccin trmica de la superficie con disminucin del rea activa 2sinteri%acin3.
=3 Prdida de la fase activa por desgaste del catali%ador.
Cuando algunos catalizadores se desactivan pueden ser regenerados para recuperar sus
propiedades (totalmente o en parte). El proceso de regeneracin est ligado al proceso de
desactivacin. Algunos catalizadores de procesos como el de desintegracin cataltica se
desactivan muy rpido por la formacin de carbn en su superficie y deben ser
continuamente regenerados. El proceso de fluidizacin de la desintegracin cataltica
obedece a la necesidad de trasladar continuamente el catalizador del reactor al
regenerador y viceversa.
Las principales caractersticas que distinguen a un catalizador son:
a3 >n catali%ador no puede actuar en reacciones termodinmicamente imposiles
2"?
o
@+3. Esto literalmente significa que un catali%ador no )ace milagros. 5e la misma
forma que la termodinmica estalece que no puede e'istir la mquina de movimiento
perpetuo$ tamin delimita el campo de accin de los catali%adores.
3 Para una reaccin en equilirio$

el catali%ador no modifica el valor de la constante de equilirio Ae B C1DC7. ,omo
consecuencia de lo anterior$ un aumento de la velocidad en una direccin 2C13 viene
acompa(ado por un aumento similar en la constante de velocidad de la reaccin inversa
2C73. En un sentido prctico esto quiere decir que un catali%ador de una reaccin lo es
igualmente para la reaccin inversa. Esta condicin se aplica igualmente al mecanismo
cataltico a#o el principio de microrreversiilidad que dice que la reaccin dee seguir los
mismos pasos en un sentido o en el otro.
c3 El catali%ador puede tener uno o dos efectos sore un sistema$ un efecto acelerador o
un efecto orientador. En el segundo caso$ la funcin cataltica se oserva en la variacin de
los valores de selectividad de un proceso cuando varias direcciones son
termodinmicamente posiles. 1s por e#emplo$ el alco)ol etlico puede descomponerse
seg8n las reacciones siguientes

E
EE
La utili%acin de 'ido de %inc como catali%ador conduce casi e'clusivamente a la
reaccin #. *i se emplea core como catali%ador$ la reaccin ## se produce en ma!or
e'tensin.
El hecho de que el catalizador abra una nueva ruta de reaccin tambin se puede
traducir en que la reaccin llegue a otro lugar diferente del que desebamos!
En general esto se corrige estudiando muchos catalizadores de los cuales escogemos
el que mejor nos rinde el producto deseado.
d3 El catali%ador tiene una vida limitada$ sin emargo$ en lapsos cortos$ se puede decir
que permanece inalterado" esta caracterstica es de suma importancia para estudios
cinticos.
El nmero de molculas que transforma un catalizador por cada sitio cataltico (nmero
de recambio) generalmente es muy elevado, lo cual hace que al cabo de algunas horas
el sitio cataltico haya sido usado miles de veces. En algunos procesos industriales la
vida til del catalizador puede ser de varios aos para transformar una molcula de
reactivo. Algunas veces esas molculas que reaccionaron no salen de la superficie,
cubrindola y provocando una disminucin del nmero de sitios activos.
Existen algunas sustancias que tienden a "frenar" las reacciones a travs de un efecto
llamado "inhibicin", sin embargo, estas especies cinticamente activas no son
especies catalticas, no se trata de un fenmeno cataltico en s, ya que no se ponen en
juego el mismo tipo de factores energticos. Esto significa que no existe una catlisis
negativa.
Un ejemplo experimental sencillo de la accin de un catalizador en fase homognea
gaseosa es el de la descomposicin del ter etlico (comnmente ter). La reaccin sin
catalizador a 700K da lugar a los siguientes productos:
C2H50C2H5 2CH4 + C2H4 + CO
Se midi para esta reaccin una energa de activacin (barrera de energa para pasar de
reactivos a productos) de 51.8 kcal/mol. Posteriormente bajo las mismas condiciones se
introdujo iodo como catalizador, observndose que la desaparicin del ter etlico fue
10000 veces ms rpida, generando productos diferentes a los obtenidos en la reaccin
sin catalizador. La reaccin con el catalizador fue:
C2H5OC2H5 C2H6 + CH4 + CO

Con una energa de activacin de 34.0 kcal/mol de manera que la presencia de iodo
cambi la velocidad y la selectividad (orientacin) de la reaccin. El aumento en la
velocidad debe relacionarse con la disminucin en la barrera de energa que separa los
reactivos de los productos y que baj a 34 kcal/mol en presencia del catalizador. Como las
dos reacciones se efectuaron en condiciones similares se pueden relacionar sus
velocidades a partir de las ecuaciones de Arrhenius:

De donde se observa que el aumento en velocidad depende de k0 y k'0 y es
exponencialmente proporcional a la diferencia en energas de activacin. Si se asume
que k0 y k0' son iguales, entonces el aumento que debera observarse es de 345000
veces. Este no es el caso, ya que slo se observ un aumento de 10000 veces, por lo
tanto hay un factor 34.5 menor que debe ser atribuido a la diferencia en las constantes
k y k'0. De acuerdo a la teora cintica de los gases esas constantes dependen del
nmero de choques entre las molculas de reactivo en el momento de la reaccin; en
el caso de la reaccin sin catalizar es el nmero de choques entre molculas de ter
etlico, y en el caso de la reaccin catalizada es el nmero de choques de las
molculas de ter etlico con el iodo.
Como la concentracin de catalizador es muy baja (aproximadamente 10) el nmero
de choques es menor para la reaccin catalizada, y por eso es que se presenta el
factor 34.5 favorable a la reaccin sin catalizador:
ko = 34.5 ko
Sin embargo esta disminucin en el nmero de choques efectivos se ve ampliamente
compensada por el abatimiento en la energa de activacin que al encontrarse en el
trmino exponencial conduce a un aumento de 345000 veces en la velocidad. As el
aumento neto observado por la presencia del catalizador es de 10000 veces.
En la prctica este aumento de velocidad en presencia del catalizador es aprovechado
para obtener la misma velocidad, o ligeramente superior, pero a temperaturas mucho
ms bajas que las utilizadas en el caso de la reaccin sin catalizador. Adicionalmente,
lo que resulta en ocasiones mucho ms valioso, es que por accin del catalizador se
obtienen productos que no pueden obtenerse de otra forma.
Hemos visto que el fenmeno cataltico heterogneo requiere de la adsorcin qumica
en la superficie del catalizador de al menos uno de los reactivos. Dado que la reaccin
se lleva a cabo en la superficie del catalizador, el conocimiento de la cantidad de
molculas adsorbidas en esta superficie reviste gran importancia. Debemos recordar
que el sistema cataltico heterogneo est constituido por un fluido que es una reserva
de molculas por transformar o ya transformadas y una superficie (catalizador). La
concentracin de reactivo adsorbido se relaciona por lo tanto con la concentracin
(presin) del reactivo en la fase gas (fluido). Para encontrar esta relacin supongamos
un slido al cual se le suministra una cierta cantidad de gas (por ejemplo hidrgeno).
Parte del gas se adsorber en la superficie del slido y parte quedar en la fase gas.
Cuando la adsorcin se ha completado y se alcanza el equilibrio, la relacin entre la
concentracin de gas adsorbido y la presin del gas con la que est en equilibrio a
temperatura constante se denomina isoterma de adsorcin.

Figura 4. soterma de adsorcin de Langmuir.
La isoterma de adsorcin tiene la forma que se muestra en la figura 4. maginando el
fenmeno, dos magnitudes pueden ser fcilmente reconocidas: x, la cantidad
adsorbida a una cierta presin P de la fase fluida, y xmax que sera la cantidad mxima
que la superficie puede adsorber; definimos entonces la fraccin de superficie
recubierta como 0:
0 1 232'a2
Para encontrar la relacin matemtica entre el grado de recubrimiento 0 y la presin de
equilibrio del gas imaginemos una superficie que consiste en n FsitiosF donde en cada
"sitio" puede adsorerse una ! slo una molcula del gas. El equilibrio que habamos
considerado anteriormente es de tipo dinmico entre adsorcin-desorcin. El equilibrio
puede representarse como:
adsorcin (ka)
A + S A.S

desorcin (kd)
La velocidad de adsorcin viene dada por la expresin: Vads = ka [A] [S] y la velocidad
de desorcin por: Vdes = kd [A.S]
Donde [A] es la concentracin del reactivo A y que podemos sustituir por la presin PA
al equilibrio, [S] representa la concentracin de sitios vacos y que podemos
reemplazar por (1-0), [A.S] es la concentracin de sitios ocupados, la cual sustituimos
por n0. Cuando el equilibrio se alcanza, las velocidades de adsorcin y desorcin son
iguales, por lo que obtenemos: Ka PAn(1- 0) = kdn0
Haciendo un poco de rearreglo nos queda:
donde b = ka/kd se denomina coeficiente de adsorcin de A en el slido utilizado. Este
trmino no es otra cosa que una constante de equilibrio cuya magnitud refleja la fuerza
con que se adsorbe A, es decir, si b es muy grande, la molcula A se adsorbe
fuertemente en la superficie. La relacin entre el grado de recubrimiento y la presin
fue derivada por rving Langmuir y se le conoce comnmente como la isoterma de
Langmuir. El valor de b afecta a la forma de la isoterma de adsorcin. Mientras ms
grande sea el valor de esta constante, mayor ser el grado de recubrimiento a una
presin de equilibrio dada. No todas las adsorciones obedecen la isoterma de
Langmuir. Esto se debe a muchas razones pero la ms importante es que se considera
para su derivacin el que todos los sitios en la superficie son energticamente
equivalentes, lo cual rara vez se encuentra en la prctica. Ms an, el calor de
adsorcin, en cual est cercanamente ligado a la fuerza del enlace entre la especie
adsorbida y la superficie, disminuye al aumentar el grado de recubrimiento. De esta
manera, otras isotermas han sido derivadas para eliminar la suposicin de la
equivalencia energtica de los sitios.
LA CNTCA DE REACCONES HETEROGNEAS CATALZADAS
Cualquier reaccin que tome lugar en una superficie comprende 5 pasos consecutivos,
figura 5:
13 5ifusin de reactivos a la superficie
73 1dsorcin de los reactivos
-3 6eaccin en superficie
=3 5esorcin de los productos
.35ifusin de productos )acia la fase fluida.
Usualmente los pasos 1 y 5 son rpidos por lo tanto cualquiera de los pasos 2, 3 o 4
puede ser el paso limitante (el ms lento) en cualquier reaccin heterognea. Langmuir
asumi que el paso 3, la reaccin en superficie es el paso lento del proceso, por lo que
no es de extraar que se utilice la isoterma de Langmuir para estimar la concentracin
de especies adsorbidas.

Figura 5. Pasos involucrados en una reaccin de superficie.
La determinacin de parmetros cinticos en una reaccin catalizada es importante
desde muchos puntos de vista. Por ejemplo, la determinacin de los rdenes de
reaccin respecto a reactivos y productos es esencial para el establecimiento del
mecanismo de la reaccin cuyo conocimiento es indispensable para optimizar el
catalizador. Asimismo, la informacin concerniente a los rdenes de reaccin se utiliza
para el diseo de reactores, tamao y forma del lecho cataltico, etc. Otro parmetro
cintico de gran importancia, la energa de activacin, nos da informacin acerca de
cmo la temperatura afectar la velocidad de la reaccin.
En la cintica de reacciones heterogneas se asume que la reaccin en superficie es el
paso limitante en la mayora de las reacciones catalticas heterogneas, por lo que el
conocimiento de la concentracin de reactivo adsorbido en la superficie es un dato
indispensable para derivar cualquier expresin cintica. La isoterma de Langmuir nos
provee de tal informacin.
UNIDAD III
CINTICA EN4IM.TICA
1.- La ecuacin de Michaelis-Menten expresa la velocidad instantnea o velocidad inicial (-
rA)i en relacin a la velocidad mxima (Vmax) para cierta concentracin inicial de sustrato.
Esta ecuacin es vlida solo si (-rA) es medida a un tiempo suficientemente corto, de
manera que CA permanezca esencialmente constante. Esto requiere que no ms del 5%
del sustrato sea utilizado en el ensayo de la actividad enzimtica
Para explicar la cintica de una reaccin catalizada por enzimas, Briggs y Haldane as
como Henri, Michaelis y Menten propusieron el mecanismo de reaccin para las
reacciones en que la enzima cataliza la transformacin de un sustrato:
k1 k3
E+A E.A E+P
k2 k4
donde la primera reaccin es reversible con k1 y k2; la segunda reaccin es irreversible ya
que se considera que k3 es mucho mayor que k2 y k4. Si la cantidad total de enzima (CEt)
est presente en cantidades catalticas, entonces CA es mucho mayor que CEt y en un
tiempo muy corto se alcanza el estado estacionario en el que CE.A permanece constante en
el tiempo. Considerando estos parmetros, se deduce la conocida ecuacin de Michaelis-
Menten:

( )
.

+
rA
Vmax C
KM C
A
A

( )
+
rA
Vmax
C
KM C
A
A

donde
A E
E A
M
C
C C
k
k k
K
. 1
3 2
.

La KM es una constante dinmica que expresa la relacin entre las concentraciones reales
en estado estacionario y relaciona la velocidad de una reaccin catalizada por enzimas a
la concentracin de sustrato
2.- Por qu determinar el KM? El KM establece un valor aproximado para el nivel
intracelular del sustrato. Es poco probable que la concentracin del sustrato sea mucho
mayor o mucho menor que el KM. Si la concentracin intracelular del sustrato fuera mucho
menor que el KM, la velocidad de reaccin sera muy sensible a los cambios en CA, pero la
mayora del potencial cataltico de la enzima se gastara debido a que la velocidad de
reaccin pudiera ser mucho menor que la Vmax. No tiene sentido fisiolgico en mantener CA
mucho mayor que el KM debido a que la velocidad de reaccin no puede exceder la Vmax y
la diferencia entre la velocidad de reaccin a CA = KM y CA = 1000 KM solo es de dos veces.
Tambin, si CA es mucho mayor que el KM, la velocidad de reaccin sera insensible a
pequeos cambios en CA. Debido a que el KM es una constante para una enzima dada, su
valor numrico proporciona un medio de comparar enzimas con orgenes diferentes
(animal, vegetal, microbiano) o de diferentes tejidos o del mismo tejido en diferentes
etapas de desarrollo. De esta forma podramos determinar si una enzima E1 es idntica a
la enzima E2, o si son diferentes protenas que catalizan la misma reaccin. La velocidad
mxima, Vmax, no es una constante, depende de (kcat) que s es una constante y de la
concentracin de enzima en el ensayo. Un cambio en el valor efectivo de KM inducido por
un ligando, es un modo de regular la actividad de una enzima; si el KM determinado in
vitro resulta ser ms alto que el fisiolgico, entonces se podra investigar buscando la
presencia de activadores que funcionen in vivo para disminuir el KM efectivo. Midiendo el
efecto de diferentes compuestos sobre el KM de la enzima, podramos identificar
inhibidores fisiolgicamente importantes.
Si conocemos el Km para una enzima actuando sobre un sustrato, podramos ajustar las
condiciones experimentales del ensayo de manera que la concentracin del sustrato sea
mucho mayor que el Km y por lo tanto determinar la velocidad mxima que en cierta
manera representa una medida de la concentracin total de enzima, CEt. La constante de
Michaelis indica lo adecuado que un sustrato resulta para una enzima particular,
comparado con otros sustratos alternos. Esto es, el sustrato con el KM ms bajo tiene la
afinidad aparente ms alta por la enzima. El mejor sustrato es el que tiene la relacin
(Vmax/KM) ms alta.
Para calcular los parmetros cinticos de una reaccin catalizada por enzimas,
modificamos la ecuacin de Michaelis-Menten, con el propsito de linealizarla obteniendo:
Ecuacin de Lineweaver-Burk:
A max
M
max A
C
1
.
V
K
V
1
) r (
1
+

Ecuacin de Hanes-Woolf:
max
M
A
max A
A
V
K
.C
V
1
) r (
C
+

Ecuacin de Wolf-Augustinsson-Hofstee:
A
A
M max A
C
) r (
. K V ) r (

Ecuacin de Eadie-Scatchard:
) r .(
K
1
K
V
C
) r (
A
M M
max
A
A

3.- Problema:
Con los datos experimentales obtenidos para la reaccin qumica catalizada por una
enzima: A P calcular los parmetros cinticos de la enzima.

Calculando las diferentes coordenadas, segn la ecuacin a utilizar, tenemos:

Trazando las grficas correspondientes, tenemos:


4.- nhibicin de enzimas: Cualquier sustancia que reduce la velocidad de una reaccin
catalizada por enzimas, se puede considerar como un inhibidor. La inhibicin de la
actividad enzimtica es uno de los medios de regulacin de las clulas vivas y uno de los
ms importantes procedimientos diagnstico de los enzimlogos. Los estudios de
inhibicin a menudo nos dan informacin respecto a la especificidad de una enzima, la
arquitectura fsica y qumica del sitio activo y el mecanismo cintico de la reaccin. En
nuestra vida diaria, los inhibidores de las enzimas pueden encontrarse disfrazados como
medicamentos, antibiticos, conservadores, venenos y toxinas.
5.- nhibicin competitiva: El inhibidor competitivo es una sustancia que se une a la enzima
libre aumentando el valor del KM y manteniendo constante la velocidad mxima. Por
aumentar el KM, se entiende que el inhibidor se une al sitio activo de la enzima libre, de
manera que el sustrato e inhibidor son mutuamente excluyentes, debido a la verdadera
competencia por el mismo sitio activo. El inhibidor podra ser un anlogo no metabolizable
o derivado de un sustrato verdadero o un producto de la reaccin. Para confirmar el
mecanismo de inhibicin debemos usar las grficas ya descritas para calcular los
parmetros cinticos; para el inhibidor competitivo, la Vmax no cambia y los valores del KM
deben ser diferentes cuando se comparan los experimentos llevados a cabo con diferentes
concentraciones de inhibidor con el experimento sin inhibidor. En las ecuaciones de
Lineweaver-Burk, Hanes-Woolf, Woolf-Augustinsson-Hofstee y Eadie-Scatchard debemos
sustituir K'M por KM, de manera que las lneas correspondientes se modifican segn se
vean afectadas por el K'M.
6.- nhibicin no-competitiva: Un tipo clsico de sustancia no tiene efecto sobre la unin
del sustrato, por lo tanto, KM = K'M y viceversa. El sustrato y el inhibidor se unen
reversiblemente al azar e independientemente a sitios diferentes, esto es, el inhibidor se
une a la enzima y al complejo E.A, el sustrato se une a la enzima y al complejo E.; sin
embargo, el complejo resultante en ambos casos, E.A. es inactivo catalticamente. A
cualquier concentracin del inhibidor, una concentracin de sustrato infinitamente alta no
podra desplazar al inhibidor para generar E.A, po lo tanto, se puede predecir que la
velocidad mxima en ausencia de inhibidor siempre ser mayor que la velocidad mxima
en presencia del inhibidor. El valor del KM no vara debido a que a cualquier concentracin
de inhibidor no-competitivo, las formas de enzima que pueden unir al sustrato (E y E.)
tienen la misma afinidad por el sustrato. El efecto del inhibidor no-competitivo es como si
hubiera menos enzima total presente. Para confirmar el mecanismo de inhibicin debemos
usar las grficas ya descritas para calcular los parmetros cinticos; para el inhibidor no-
competitivo, el KM no cambia y los valores de la Vmax deben ser diferentes cuando se
comparan los experimentos llevados a cabo con diferentes concentraciones de inhibidor
con el experimento sin inhibidor. En las ecuaciones de Lineweaver-Burk, Hanes-Woolf,
Woolf-Augustinsson-Hofstee y Eadie-Scatchard debemos sustituir V'max por Vmax, de
manera que las lneas correspondientes se modifican segn se vean afectadas por la
V'max.
7.- nhibicin incompetitiva: Una sustancia que se une reversiblemente al complejo E.A
produciendo un complejo inactivo E.A.; el inhibidor no se une al enzima E. La inhibicin
incompetitiva pura puede ser rara en reacciones con un sustrato y es comn en
reacciones multisustrato. Representa un ejemplo simple de la adicin secuencial de dos
ligandos enzimticos en un orden obligado. La inhibicin sera incompetitiva con respecto
a un sustrato dado si el inhibidor se une a la enzima slo despus de que el sustrato se
une. A cualquier concentracin de inhibidor, una concentracin infinita de sustrato no
podra liberar al complejo E.A. para dar E.A; algo del complejo E.A. improductivo siempre
estar presente. Se predice que la velocidad mxima disminuye, pero a diferencia del
inhibidor no-competitivo, el KM tambin disminuye. Para determinar el mecanismo de
inhibicin debemos usar las grficas ya descritas para calcular los parmetros cinticos;
para el inhibidor incompetitivo, cambian los valores tanto de la Vmax como del KM, cuando
se comparan los experimentos llevados a cabo con diferentes concentraciones de
inhibidor con el experimento sin inhibidor. En las ecuaciones de Lineweaver-Burk, Hanes-
Woolf, Woolf-Augustinsson-Hofstee y Eadie-Scatchard debemos sustituir K'M por KM y V'max
por Vmax, de manera que las lneas correspondientes se modifican segn se vean
afectadas por V'max y K'M.
8.- nmovilizacin de Enzimas. Fundamentos, Mtodos y Aplicaciones
La inmovilizacin de enzimas permite una mejora significativa de su estabilidad, lo que
hace posible su empleo en la produccin industrial de productos qumicos, farmacuticos,
alimentos; en el tratamiento de resduos; en el diagnstico y tratamiento de enfermedades,
y otras muchas aplicaciones.
En los ltimos aos, la biotecnologa ha experimentado grandes avances y, tambin sus
aplicaciones industriales en la obtencin de productos qumicos, en la industria alimentaria
y farmacutica.
Los procesos catalizados por enzimas en la industria son cada da ms numerosos, ya
que presentan una serie de ventajas frente a los catalizadores convencionales no
biolgicos:
1. Presentan una gran actividad cataltica"
7. Muestran una gran especificidad de sustrato 2incluso estereoselectividad !
regioespecificidad3"
-. *on mu! activos a temperatura amiente ! presin atmosfrica.
A pesar de estas claras ventajas, el empleo de enzimas no se ha generalizado en los
procesos qumicos industriales debido a que la mayora de las enzimas no son estables en
las condiciones de trabajo. Por otra parte al ser solubles en agua, su separacin de los
sustratos y productos es difcil, y por tanto, no se pueden reutilizar.
Con la inmovilizacin de las enzimas se han podido superar estos ltimos inconvenientes,
permitiendo que el proceso biotecnolgico sea econmicamente rentable.
9.- Aspectos Generales sobre la inmovilizacin de Enzimas
La inmovilizacin de enzimas es un proceso en el que se confina o localiza a la enzima en
una regin definida del espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen su
actividad cataltica y que pueden ser reutilizadas repetidamente. Posteriormente esta
definicin se ha ampliado a aquel proceso por el cual se restringen, completa o
parcialmente, los grados de libertad de movimiento de enzimas, organelas, clulas, etc.
por su unin a un soporte.
Como ventajas del empleo de enzimas inmovilizadas podemos destacar:
1. El aumento de la estailidad de la en%ima"
7. La posile reutili%acin del derivado$ por lo que disminu!en los costos del proceso.
-. La posiilidad de dise(ar un reactor en%imtico de fcil mane#o ! control$ adaptado a la
aplicacin de la en%ima inmovili%ada. Estos reactores con en%imas inmovili%adas permiten
el empleo de cargas elevadas de en%ima$ la cual mantendr su actividad durante ms
tiempo. Estos sistemas pueden incluir el reciclado$ lo que permite la otencin de
productos con ma!or pure%a.
Los principales inconvenientes del proceso de inmovilizacin son:
1. La alteracin de la conformacin de la en%ima respecto de su estado nativo.
7. La gran )eterogeneidad del sistema en%ima-soporte donde pueden e'istir distintas
fracciones de protenas inmovili%adas con un diferente n8mero de uniones al soporte.
-. *iempre suele )aer una prdida de actividad de la en%ima durante la inmovili%acin.
=. El iocatali%ador es ms caro que la en%ima nativa.
En general, los mtodos de inmovilizacin se suelen clasificar en dos grandes categoras:
6etencin fsica. 2) >nin qumica.
10.- Mtodos de nmovilizacin de Enzimas por Retencin Fsica
1trapamiento
Consiste en la retencin fsica de la enzima en las cavidades interiores de una matriz
slida porosa constituida generalmente por prepolmeros fotoentrucruzables o polmeros
del tipo poliacrilamida, colgeno, alginato, carraginato o resinas de poliuretano. El proceso
de inmovilizacin se lleva a cabo mediante la suspensin de la enzima en una solucin del
monmero. Seguidamente se inicia la polimerizacin por un cambio de temperatura o
mediante la adicin de un reactivo qumico. El atrapamiento puede ser en geles o en
fibras, que suelen ser ms resistentes que los geles. En el primer caso, la enzima queda
atrapada en el interior de un gel, mientras que en el segundo caso la enzima se encuentra
ocluda dentro de las microcavidades de una fibra sinttica. El atrapamiento, de gran
sencillez desde el punto de vista experimental, requiere poca cantidad de enzima para
obtener derivados activos. Como ventaja adicional, la enzima no sufre ninguna alteracin
en su estructura. De todas formas, el atrapamiento requiere un control riguroso de las
condiciones de polimerizacin, as como la comprobacin de que la naturaleza qumica del
proceso no altera los grupos reactivos de la protena.
Enclusin en memranas
Dividida en dos tipos:
13 Microencapsulacin4 En esta tcnica$ las en%imas estn rodeadas de memranas
semipermeales que permiten el paso de molculas de sustrato ! producto$ pero no de
en%ima. Estas memranas semipermeales pueden ser permanentes 2originadas por
polimeri%acin interfacial3 o no permanentes 2generadas por surfactantes$ tamin
llamadas Gmicelas inversasH3. Las microcpsulas otenidas son de forma esfrica$ con
tama(os comprendidos entre 1 ! 1++ mm de dimetro. Mediante este mtodo se pueden
encapsular simultneamente una gran variedad de en%imas$ clulas o iomolculas$
permitiendo que se lleven a cao determinadas reacciones que suceden en m8ltiples
pasos.
73 6eactores de memrana4 El desarrollo de reactores o sistemas que contengan en%imas
atrapadas )a despertado gran inters en la industria. Estos reactores emplean memranas
permeales al producto final$ permeales o no al sustrato inicial ! oviamente
impermeales a la en%ima. Mediante una oma se estalece un flu#o lquido de sustrato
que atraviesa el reactor.
En general, en esta metodologa, se procede inicialmente a la adsorcin de la enzima
sobre la membrana que formar el reactor. Esta adsorcin se puede realizar de dos
formas:
13 Mediante el paso de una solucin amortiguada de en%ima a travs de la memrana"
73 Por contacto continuo de una solucin de en%ima con la memrana.
11.- Mtodos de nmovilizacin de Enzimas por Unin Qumica
>nin a soportes
Son los mtodos de inmovilizacin ms utilizados y de los que se dispone de una mayor
informacin. La eleccin del soporte y del tipo de enlace resultan determinantes en el
comportamiento posterior del biocatalizador. Se debe procurar que la inmovilizacin
incremente la afinidad por el sustrato, disminuya la inhibicin, ample el intervalo de pH
ptimo y reduzca las posibles contaminaciones microbianas. Adems el soporte debe
tener resistencia mecnica adecuada a las condiciones de operacin del reactor y ser
fcilmente separable del medio lquido para que pueda ser reutilizado. Se han utilizado
una gran variedad de materiales como soportes para la inmovilizacin de numerosas
enzimas. Estos materiales difieren en tamao, densidad, porosidad y forma, aunque
generalmente nos los encontramos en forma de cilindro, hojas, fibras y ms
corrientemente en forma de esferas. Los soportes pueden clasificarse en dos grandes
grupos:
1. *oportes inorgnicos. 5entro de este grupo tenemos una gran variedad de soportes$ que
pueden ser naturales 2arcillas como la entonita$ piedra pme%$ slice$ etc.3 o materiales
manufacturados 2'idos de metales ! vidrio de tama(o de poro controlado$ vidrio no
poroso$ al8mina$ cermicas$ gel de slice$ etc.3
7. *oportes rganicos. *e pueden clasificar en4
Polmeros naturales4 a su ve% divididos en4 polisacridos 2celulosa$ almidn$ de'tranos$
agar-agar$ agarosa$ alginatos$ quitina$ c)itosan$ etc3$ protenas firosas 2colgeno$
queratina$ etc3.
Polmeros sintticos4 divididos en4 poliolefinas 2como el poliestireno3$ polmeros acrlicos
2poliacrilatos$ poliacrilamidas$ polimetacrilatos$ etc.3 ! otros tipos 2alco)ol polivinlico$
poliamidas$ etc3.
Las enzimas se pueden unir a estos soportes mediante adsorcin o por unin covalente.
1dsorcin
En la adsorcin, la enzima se une a un soporte sin funcionalizar mediante interacciones
inicas, fuerzas de Van der Waals y por puentes de hidrgeno. Los principales factores
que influyen en la adsorcin, son:
1. El p; del medio: controla el nmero y la naturaleza de las cargas que presenta la superficie
de la protena y del slido;
2. La fuer%a inica: al aumentar la fuerza inica se produce la desorcin de la enzima, ya que
los iones inorgnicos se unen con ms fuerza al soporte que la protena;
3. El dimetro de poro: debe ser aproximadamente dos veces el tamao del eje mayor de la
enzima;
4. La presencia de iones que acten como cofactores de la enzima, ya que pueden
incrementar la carga enzimtica del derivado.
Como principales venta#as de este mtodo destacan:
1. *u preparacin sencilla$
7. *u a#o costo$
-. 9o )a! camios de especificidad en%imtica$
=. Los derivados son estales en medios de traa#o con a#o contenido en agua.
Los inconvenientes de la adsorcin son principalmente:
1. La optimi%acin de las variales que controlan la adsorcin$
7. Los derivados otenidos son poco estales desde el punto de vista mecnico$
-. La unin al soporte es dil.
Una variante dentro de la tcnica de la adsorcin consiste en emplear resinas de
intercamio inico, las cuales contienen grupos funcionales y contraiones mviles. Estos
contraiones se pueden intercambiar reversiblemente por otros iones de la misma carga,
sin que se produzcan cambios en la matriz insoluble.
>nin covalente
La unin covalente de una enzima a un soporte es quiz el mtodo de inmovilizacin ms
interesante desde el punto de vista industrial. La metodologa de la unin covalente se
basa en la activacin de grupos qumicos del soporte para que reaccionen con nuclefilos
de las protenas. De entre los 20 aminocidos diferentes que se encuentran en la
estructura de las enzimas, los ms empleados para la formacin de enlaces con el soporte
son principalmente la lisina, la cistena, la tirosina y la histidina, y en menor medida la
metionina, el triptfano, la arginina y los cidos asprtico y glutmico. El resto de
aminocidos, debido a su carcter hidrfobo, no se encuentran expuestos hacia el exterior
de la superficie proteica, y no pueden intervenir en la unin covalente. Este mtodo
presenta las siguientes venta#as4
1. La manipulacin de los derivados inmovili%ados es sencilla"
2. La carga de en%ima permanece constante despus de la inmovili%acin"
3. Los derivados pueden utili%arse en reactores en continuo$ empaquetados$ de lec)o
fluidi%ado o tanque agitado.
4. >na ma!or resistencia a la desactivacin por el efecto de la temperatura$ de los disolventes
orgnicos o del p;$ al tener estaili%ada su estructura terciaria.
En cambio la inmovilizacin por enlace covalente tambin presenta una serie de
inconvenientes4
1. Es necesario conocer la densidad de grupos activos por unidad de superficie$ !a que
condiciona el n8mero de uniones en%ima-soporte ! su geometra$ que puede ser
distorsionante ! conducir a derivados inactivos.
7. El proceso de inmovili%acin puede alterar la estructura del centro activo. Para evitar esta
posile alteracin$ se reali%a la inmovili%acin en presencia de un in)iidor que loquee el
centro activo.
-. La inmovili%acin covalente no es aconse#ale en aquellas en%imas mu! sensiles a
camios de p;$ fuer%a inica$ etc.
6eticulado
Tambin denominado entrecruzamiento o cross-linCing, es una tcnica que ha sido
ampliamente utilizada en la estabilizacin de muchas enzimas. El mtodo del reticulado
consiste en uso de reactivos bifuncionales que originan uniones intermoleculares entre las
molculas de enzima. Como reactivos bifuncionales se pueden emplear dialdehdos,
diiminosteres, diisocianatos, sales de bisdiazonio e, incluso, diaminas si estn activadas
con carbodiimida. El resultado del reticulado son enzimas con enlaces intermoleculares
irreversibles capaces de resistir condiciones extremas de pH y temperatura.
El co-reticulado, permite eliminar las prdidas de actividad enzimtica debidas a efectos
difusionales, mediante el entrecruzamiento de las enzimas con una protena sin actividad
enzimtica y rica en residuos de lisina (por ejemplo, la albmina bovina). Un procedimiento
mixto de inmovilizacin muy comn consiste en inmovilizar la enzima por adsorcin sobre
una resina de intercambio inico o un soporte polimrico (con lo que se consigue una
elevada carga enzimtica) y posteriormente aadir el reactivo bifuncional.
Actualmente el mtodo ms novedoso de cross-linking consiste en la cristalizacin de
enzimas y su posterior reticulado con glutaraldehdo (Cross-Linked Enzyme Crystals o
CLECs). El aumento de estabilidad se basa en la obtencin de un entramado cristalino,
donde las molculas de enzima estn rodeadas exclusivamente por otras molculas de
protena. De esta manera la propia enzima acta como soporte, y su estructura terciaria
est estabilizada por las uniones covalentes intermoleculares. La estructura cristalina
posee canales microscpicos (20-50) que permiten el paso de sustratos hasta el centro
activo de la enzima donde se cataliza la reaccin. Estos cristales pueden soportar
temperaturas elevadas y pH extremos, as como la accin de las proteasas. Esta
tecnologa se ha aplicado a enzimas muy diferentes, las cuales se han utilizado en la
obtencin de compuestos enatiomricamente puros y en la sntesis de pptidos.
12.- Efectos de la nmovilizacin
A menudo, la inmovilizacin altera significativamente el comportamiento de las enzimas.
En primer lugar se producen cambios en su estabilidad. En segundo lugar, la enzima
inmovilizada es un sistema heterogneo en el cual todos los componentes que intervienen
en el proceso cataltico (pH, sustratos, productos, inhibidores, cofactores, activadores,
etc.) se encuentran en interfase: en el medio de reaccin y en la fase constituida por el
soporte con la enzima. Como consecuencia, la actividad enzimtica se ve afectada por
efectos de tipo difusional, estrico y del microentorno.
Efectos en la estailidad
Generalmente se observa un incremento en la estabilidad de las enzimas despus de su
inmovilizacin, que se debe principalmente a las siguientes razones:
1. >na estaili%acin conformacional de la en%ima deido a la e'istencia de uniones
multipuntuales en%ima-soporte. La estructura terciaria de la en%ima adquiere una ma!or
rigide% ! se )ace ms resistente a la desactivacin trmica o qumica. Este tipo de
estaili%acin se otiene 8nicamente en aquellos mtodos en los que intervienen enlaces
de tipo covalente$ como el reticulado o la unin a soportes. La inmovili%acin covalente
multipuntual se puede cominar con la adicin de reactivos ifuncionales que den ma!or
rigide% a la estructura de la en%ima.
2. >na proteccin frente a las proteasas en el medio. *e )a visto que la unin de proteasas a
un soporte elimina su capacidad proteoltica$ ! evita su autolisis.
3. *e evita la agregacin intermolecular al mantener las molculas de en%ima retenidas en
una determinada regin del espacio.
4. E'iste una alteracin del microentorno del en%ima deida a la interaccin de la en%ima con
el soporte. Por e#emplo$ si una en%ima sensile al o'geno 2como las nitrogenasas$
)idrogenasas$ etc.3 se sit8a en la superficie de un soporte cargado$ la fuer%a inica efectiva
en el microentorno de la en%ima ser mu! alta !$ como consecuencia$ la concentracin de
o'geno disuelto ser muc)o menor en esa %ona que en el medio de reaccin. En otros
casos el soporte tiene un efecto amortiguador de tal manera que mantiene el p; ptimo de
la en%ima en su microentorno$ aunque en la disolucin se produ%can camios importantes
de p;. Por otra parte$ en aquellas reacciones catali%adas por en%imas inmovili%adas en
presencia de disolventes orgnicos$ la GacuofiliaH del soporte o su capacidad para retener
agua$ regula la actividad de la en%ima. ,uanto ma!or es la acuofilia del soporte$ ms agua
adsore ! la en%ima poseer la cantidad necesaria de agua en su microentorno para
mantener su conformacin activa.
Efectos en la actividad en%imtica
Tras la inmovilizacin, la actividad de la enzima puede disminuir e incluso perderse por
diversas razones. Si pierde totalmente la actividad enzimtica puede ser debido a que:
1. La unin al soporte se produce de tal forma que el paso del sustrato al centro activo est
impedido$
7. Los grupos reactivos del soporte reaccionan con alg8n aminocido que forme parte del
centro activo o que sea esencial para la actividad cataltica de la en%ima$
-. La inmovili%acin puede originar un camio conformacional que da lugar a una forma
inactiva$
=. Las condiciones e'perimentales del proceso causan la desnaturali%acin o desactivacin
de la en%ima.
Si la prdida de actividad no es total despus de la inmovilizacin, los cambios
(disminucin o aumento de la actividad enzimtica) se debern principalmente a efectos
difusionales, electrostticos, estricos y/o del microentorno.
1. Efectos difusionales4 ,omo consecuencia de la inmovili%acin$ la difusin de los sustratos
)acia el centro activo de la en%ima puede estar impedida por resistencias de tipo e'terno e
interno.
6esistencias difusionales e'ternas4 si el soporte es insolule en el medio de reaccin$ el
sustrato deer atravesar la pelcula lquida estacionaria 2capa de 9ernst o de
disfusin3 que rodea el soporte. En las pro'imidades de un soporte no cargado$ la
concentracin de sustrato es menor que en el resto de la disolucin$ puesto que e'iste
un gradiente de concentracin a travs de la %ona de difusin. Por tanto$ los valores de
Cm para las en%imas inmovili%adas son siempre aparentes 2AMI3"
6esistencias difusionales internas4 deida a que los sustratos tienen que atravesar el
interior del gel$ microcpsula$ fira o poro del soporte donde se encuentra la en%ima
inmovili%ada. E'isten diversas maneras de minimi%ar estos efectos difusionales$ como
por e#emplo4 disminuir el tama(o del iocatali%ador$ aumentar la concentracin de
sustrato$ incrementar la agitacin o el flu#o en el reactor$ etc. ,on estas medidas se
consigue reducir el grosor de la capa de 9ernst$ ! como consecuencia$ el valor de AMI
disminu!e.
7. Efectos electrostticos entre el sustrato ! el soporte$ de tal manera que$ si tienen la misma
carga e'iste una repulsin mutua$ mientras que si las cargas son opuestas )a! atraccin.
,uando el sustrato ! el soporte tienen cargas opuestas$ el valor de AMI aparente puede
verse reducido )asta varias veces por dea#o del otenido en disolucin. ;orn! ! cols.
desarrollaron una e'presin matemtica que permite calcular la actividad de las en%imas
inmovili%adas$ teniendo en cuenta tanto los factores de difusin como los electrostticos.
La e'presin de Mic)aelis-Menten en este caso es4
J
Krmino de Krmino
5ifusin electrosttico
5onde4
L B Espesor de la capa de 9ernst"
5 B ,oeficiente de difusin"
K B Kemperatura 2MA3"
N B Oalencia del sustrato"
F B ,onstante de Farada!"
6 B ,onstante universal de los gases !
O B ?radiente de potencial en el soporte.
*e puede disminuir el valor de AMI$ variando tanto el trmino de difusin como el trmino
electrosttico. En el primer caso$ la disminucin del valor de AMI se consigue al disminir el
tama(o del soporte 2con lo que disminu!e el trmino G'H3 o al aumentar el flu#o o la
agitacin. En el trmino electrosttico$ si G%H ! GOH tienen el mismo signo$ es decir si el
soporte ! el sustrato tienen la misma carga$ el trmino electrosttico es menor de 1 ! AMI
aumenta. *i tienen cargas opuestas$ la AMI disminu!e. *i no poseen carga$ AMI slo
depender del trmino de difusin.
-. Empedimentos estricos o de tama(o de sustrato. En un principio$ cualquier en%ima puede
ser inmovili%ada sin que )a!a una prdida apreciale de su actividad. Este )ec)o suele ser
vlido en el caso de que el sustrato sea de a#o peso molecular$ pero si se trata de
sustratos con pesos moleculares elevados$ la actividad de la en%ima inmovili%ada
disminu!e drsticamente. Por e#emplo$ muc)as )idrolasas unidas covalentemente a
soportes slidos$ a pesar de que son mu! activas frente a sustratos peque(os$ muestran
una actividad mu! a#a )acia protenas$ polisacridos ! cidos nuclicos. Este Gefecto
estricoH se puede evitar mediante una inmovili%acin covalente a travs de un ra%o
espaciador en%ima-soporte ms largo.
=. Efectos en el microentorno4 La en%ima inmovili%ada se encuentra en un entorno diferente al
)aitual$ especialmente cuando el soporte tiene grupos cargados elctricamente. El efecto
oservado suele ser un despla%amiento en el valor del p; ptimo de la catlisis en%imtica
!$ muc)as veces$ un ensanc)amiento en el intervalo de p; en el cual la en%ima puede
actuar. Por e#emplo$ una en%ima unida a un soporte cargado negativamente por e#emplo$
,M-sep)ade'$ tendr en su microentorno una concentracin ma!or de )idrogeniones que
en el medio de reaccin. ,omo resultado$ la en%ima inmovili%ada ser ms activa a un p;
ms alcalino. La en%ima sera ms activa a p; ms cidos si estuviera unida a un soporte
cargado positivamente por e#emplo$ 5E1E-sep)ade'.
13.- Eleccin del Mtodo de nmovilizacin
Aunque se han desarrollado y aplicado muchas tcnicas de inmovilizacin a numerosos
enzimas, se reconoce que no existe un mtodo universal vlido para todos los enzimas en
todos los casos. No obstante, gracias a toda la informacin disponible en la actualidad, se
pueden hacer generalizaciones sobre cada mtodo de inmovilizacin (Tabla 1) y as,
podremos seleccionar el ms adecuado para cada aplicacin especfica. La eleccin ha de
tomar en cuenta las condiciones de la reaccin biocatalizada, el tipo de reactor que se
vaya a utilizar, el tipo de sustrato que tenga que ser procesado y otros factores.
Ta)(a 5# Comparacin de los diferentes mtodos de inmovilizacin
MTODO NCLUSN DE
MEMBRANAS
ATRAPAMENTO RETCULADO ADSORCN UNN
COVALENTE
Preparacin ntermedia Difcil ntermedia Sencilla Difcil
Fuerza de unin Dbil Media Dbil-Media Media Fuerte
Actividad
enzimtica
Media-Alta Baja Baja Media Alta
Regeneracin
del soporte
Posible mposible mposible Posible Difcil
Costo del
proceso
Medio-Alto Medio Medio Bajo Alto
Validez General General Limitada General Limitada
Resistencia
microbiana
S S S No No
Estabilidad Media Alta Alta Baja Alta
En general, los mtodos de preparacin difcil y de mayor costo proporcionan
biocatalizadores ms estables y duraderos; en cambio aquellos mtodos ms sencillos
como el atrapamiento o la adsorcin, donde la unin de la enzima con el soporte es dbil,
originan derivados inmovilizados que presentan prdidas de actividad y que deben ser
repuestos continuamente. Una vez elegido el mtodo ms conveniente, los derivados que
preparemos deben estar caracterizados segn las indicaciones establecida por el PorCing
Part! on Emmoili%ed Qiocatal!sts (Guidelines for the characterization of immobilized
biocatalysts. En%!me Micro Kec)nol 6: 304-307, 1983).
Caracterizacin de un Derivado nmovilizado
Descripcin general
1. Esquema de reaccin
7. En%imas a insoluili%ar
-. Kipo de soporte empleado
=. Mtodo de inmovili%acin
Preparacin
1. ,ondiciones de reaccin
2. 6endimiento en peso seco
3. 1ctividad residual del sorenadante
Caracterizacin fisico-qumica
1. ,onfiguracin del iocatali%ador
7. ?rado de )inc)amiento
-. ?rado de compresiilidad en columna
=. 1rasin en sistemas de agitacin
.. Oelocidad mnima de fluidi%acin
Cintica
1. Estailidad de la en%ima almacenada
7. Estailidad operacional
-. Posiilidad de reutili%acin
=. ?rado de conversin
.. Limitaciones difusionales
14.- Aplicaciones de la Enzimas nmovilizadas
Las aplicaciones ms importantes de las enzimas inmovilizadas se pueden clasificar en:
1. 1plicaciones analticas4 iosensores.
2. 1plicaciones mdicas4 tratamientos con en%imas inmovili%adas.
3. 1plicaciones industriales4 en la industria qumica$ farmacutica$ alimentaria ! de
tratamiento de residuos.
Qiosensores
Los biosensores son una herramienta imprescindible tanto en medicina (los niveles sricos
de glucosa, lactato y cido rico se pueden detectar mediante electrodos enzimticos
disponibles comercialmente; la L-asparaginasa se utiliza en el tratamiento de leucemias y
cnceres diseminados que requieren asparragina para desarrollarse) como en el control
de calidad de los alimentos (grado de contaminacin microbiana, o cuantificar el azcar
presente en bebidas) y en el control medioambiental (detectar la presencia de residuos
txicos, pesticidas, herbicidas como contaminantes en el agua). En principio, se puede
disear un biosensor para cualquier tipo de compuesto que sea capaz de interaccionar
especficamente con un sistema biolgico. El biosensor contiene una molcula biolgica
inmovilizada (enzimas, clulas, anticuerpos) prxima a un traductor que, en contacto con
el analito, transformar la seal qumica producida en una seal elctrica o de otro tipo
(ptica, calorimtrica, acstica, etc.
Los mtodos de inmovilizacin ms utilizados en el diseo de biosensores son la inclusin
en membranas semipermeables y la unin covalente a membranas. En ambos casos, las
enzimas inmovilizadas van adheridas a la superficie sensible del electrodo.
1plicaciones en la Endustria Farmacutica
La ndustria Farmacutica trabaja con molculas lbiles, y en muchos casos con
molculas quirales. El empleo de enzimas inmovilizadas es una alternativa seria a la
sntesis qumica en pasos clave, donde no conviene trabajar a temperaturas altas o se
requiere una elevada especificidad de sustrato. Las enzimas son unos reactivos quirales
estrictos, es decir, biocatalizadores con una estructura tridimensional asimtrica definida
que permiten la obtencin de productos de gran pureza ptica. Se trata de una ventaja
fundamental cuando las reglamentaciones exigen la sntesis de compuestos pticamente
puros, ya sean frmacos, hormonas o antibiticos.
&tencin de antiiticos R-lactmicos
Los antiiticos R-lactmicos semisintticos$ se sinteti%an a partir del cido S-amino
penicilnico 2S-1P13 ! del cido :-amino cefalospornico 2:-1,13 o el cido :-amino
desaceto'i-cefalospornico 2:-15,13. El S-1P1$ precursor de las penicilinas semisintticas
2amo'icilina$ ampicilina$ etc.3$ se otiene industrialmente mediante la )idrlisis de la
penicilina ? catali%ada por las penicilina ? acilasas inmovili%adas de E. coli o Qacillus
megaterium. *e calcula que la produccin anual mundial de S-1P1 mediante este mtodo
fue de :.++ toneladas en 1TT7.

&tencin de frmacos pticamente puros
La actividad iolgica$ la to'icidad$ la distriucin ! el metaolismo de un frmaco
dependen en gran medida de su estereoqumica. En algunos casos$ un enantimero
presenta actividad mientras que el otro no tiene efecto farmacolgico" uno es t'ico frente
al otro que demuestra ser seguro ! activo" e incluso )a! casos en los que uno es agonista
frente al otro que se comporta como antagonista. 1 pesar de todo$ la ma!ora de estos
frmacos se )an vendido como me%clas racmicas )asta )ace poco al no e'istir una
normativa clara al respecto$ ni mtodos econmicos para reali%ar la separacin de
enantimeros. La Endustria Farmacutica )a empe%ado a superar este 8ltimo prolema
introduciendo mtodos en%imticos en la otencin de frmacos pticamente puros. >n
e#emplo es el empleo de lipasas microianas inmovili%adas en la otencin de
antiinflamatorios no esterodicos. El ismero * de estos cidos 2iuprofeno$ napro'eno o
Cetoprofeno3 es el que posee actividad teraputica.
1plicaciones en la Endustria 1limentaria
Son muchas las enzimas que se emplean en el procesado, la preparacin y la
conservacin de los alimentos. Normalmente, las enzimas solubles aadidas son
inactivadas por calentamiento una vez que el tratamiento ha concluido. En ocasiones se
permite que contine su actividad para que los alimentos desarrollen el aroma y la textura
deseados, pero nunca se reutilizan. La inmovilizacin permite que las enzimas puedan ser
reutilizadas repetidamente en operaciones contnuas o discontnuas. De todas maneras,
existen limitaciones a su empleo relacionadas con los requisitos econmicos y sanitarios
inherentes al procesado de alimentos
En la )idrlisis de protenas
Las en%imas proteolticas se emplean en la modificacin del contenido proteico de los
alimentos. 5e esta forma se )an conseguido )idroli%ados de protenas de trigo mediante el
uso de pepsina ! proteasa coinmovili%adas en quitosana. &tras proteasas inmovili%adas
)an sido empleadas en la disminucin del contenido de lactogloulina en la lec)e$ en la
industria quesera ! en la soluili%acin de concentrados protenicos de pescado.
En la )idrlisis de )idratos de carono
La presencia de lactosa en la lec)e 2=.--=..03 ! en algunos derivados lcteos es
per#udicial para aquellas personas que carecen de lactasa intestinal$ ! su ingesta provoca
diarreas ! diversos trastornos intestinales. La eliminacin de este a%8car se puede
conseguir tratando la lec)e con R-galactosidasa de levaduras inmovili%ada en firas de
acetato de celulosa ! es de gran importancia en la preparacin de productos lcteos
dietticos. *u eliminacin tamin es interesante en la preparacin de )elados$ !a que la
lactosa tiende a cristali%ar a temperaturas a#as.
El proceso de degradacin del almidn$ procedente de diversas fuentes vegetales como el
ma%$ se reali%a mediante la utili%acin de amilasa$ glucoamilasa ! glucoisomerasa
inmovili%adas. 5e esta manera$ se consigue un #arae enriquecido en fructosa$ que sirve
de edulcorante en eidas refrescantes como la ,oca,ola o Pepsi,ola.
La pectinasa se emplea para )idroli%ar la pectina$ componente estructural de frutas !
verduras. Esto permite la otencin de un #ugo menos viscoso ! ms concentrado. La
pectinasa se emplea inmovili%ada sore diferentes soportes 2PO,$ politeres$
poliacrilamidas$ al8mina$ etc.3.
Las lipasas inmovili%adas de diversos microorganismos se )an empleado en la
interesterificacin de aceites ! grasas. Este mtodo permite transformar el aceite de palma
en un sucedneo de la manteca de coco$ componente principal del c)ocolate. El c)ocolate
contiene apro'imadamente un -+0 de manteca de coco$ por lo que este proceso es
potencialmente mu! interesante en la industria. Mediante el empleo de la lipasa
inmovili%ada adecuada$ se puede sustituir el cido palmtico de las posiciones 1 ! - del
aceite de palma por cido esterico.
1plicaciones en la Endustria Uumica
>n e#emplo lo protagoni%a la otencin industrial de acrilamida$ compuesto ampliamente
utili%ado en la preparacin de diferentes polmeros$ aditivos ! en el tratamiento del petrleo.
Para ello se emplean clulas de 6. r)odoc)rous inmovili%adas en un gel de poliacrilamida.
Este microorganismo es rico en nitrilo )idratasa$ una en%ima que es capa% de convertir el
acrilonitrilo en acrilamida.
La otencin de productos de alto valor a(adido es tamin un campo importante para la
sntesis catali%ada por en%imas inmovili%adas. ,omo e#emplos podramos citar la sntesis
de pptidos$ fragancias e insecticidas.
Kratamientos de aguas residuales
6ecientemente$ se )a desarrollado un mtodo para la reduccin de nitratos a nitritos en
aguas residuales que emplea en%imas inmovili%adas. El enceno es otro compuesto mu!
t'ico que puede ser degradado mediante clulas de Pseudomonas putida atrapadas en
geles de poliacrilamida.
Lecturas recomendadas:
Pingard$ L.Q. 21T:73 En%!me Engineering$ Enterscience Pulis)ers$ 9eV WorC. Ka!lor$ 6.F. 21TT13 Protein
Emmoili%ation4 fundamentals and applications$ Marcel 5eCCer$ 9eV WorC.
Alianov$ 1.M. 21T<-3 Emmoili%ed en%!mes and cells as practical catal!sts. *cience $%&' :77-:7:. ?oldstein$
L. 21T:S3 Ainetic e)aviour of immoili%ed en%!me s!stems. Met)ods En%!mol. ((' -T:-==-.
PorCing Part! on Emmoili%ed Qiocatal!sts 21T<-3 ?uidelines for t)e c)aracteri%ation of immoili%ed
iocatal!sts. En%!me Micro. Kec)nol. )4 -+=--+:.
Margolin$ 1.L. 21TT-3 En%!mes in t)e s!nt)esis of c)iral drugs. En%!me Micro. Kec)nol. %)' 7SS-7<+.
;onda$ W." AaCo$ M." 1iCo$ A." *ogo$ W. 21TT-3 Endustrial 1pplication of immoili%ed en%!mes$ KanaCa$ 1. et al.
eds. Marcel 5eCCer$ pg. 7+T-7-=.
UNIDAD IV
CINTICA MICROBIANA
1.- Sistemas de Cultivo y Aspectos Generales de Biorreactores
El equipo donde se realiza el proceso se denomina biorreactor o fermentador. El mismo
provee todos los servicios que son necesarios para el cultivo, tales como mezclado,
termostatizacin, suministro de oxgeno, entradas para adicin de nutrientes, control del
pH, etc. Por otra parte, cuando se habla de sistemas de cultivo o, tambin, mtodos de
cultivo, se hace referencia al modo de operar el biorreactor, esto es en forma continua o
discontinua.
Sistemas de cultivo
Para un componente cualquiera del cultivo, incluida la biomasa, se puede plantear el
siguiente balance de materia en el biorreactor (ver Fig. 15).
Velocidad de = velocidad de - velocidad + velocidad - velocidad
Acumulacin ingreso de salida de formacin de consumo

(1)
donde V es el volumen de cultivo, F1 es caudal de alimentacin, F2 el de salida, Ci1 la
concentracin del componente "i" en la alimentacin y Ci la concentracin en el caudal de
salida, la que, si el cultivo esta bien mezclado, se puede asumir idntica a la que hay
dentro del biorreactor. Los restantes trminos, (+rfi) y (-rci) se refieren a la velocidad de
formacin y consumo del componente "i" respectivamente.

Por otra parte el volumen de cultivo variar en el tiempo segn sean F1 y F2 .Suponiendo
que la densidad del cultivo y de la alimentacin son iguales resulta:
(2)
Ahora bien, dependiendo de como sean F1 y F2 surgen, bsicamente, tres sistemas de
cultivo:
1. Cultivo continuo
Ambos caudales son iguales y por la ec. (2) V es constante, por lo tanto la ec. (1) se
reduce a:
.(3)
2. Batch alimentado
El caudal de salida, F2 , es nulo, por lo que V aumentar en el tiempo en funcin del
caudal de entrada.
(4)
y en el balance de materia se anula el trmino F2 Ci resultando:
(5)
Debe destacarse que en este caso V permanece dentro del operador diferencial pues
varia con el tiempo segn la ec. (4). Por tal motivo el batch alimentado, a diferencia del
caso anterior, tiene duracin limitada en el tiempo ya que el volumen no puede
incrementarse ms all del volumen til que posee el biorreactor.
3. Batch
Ambos caudales son nulos por lo que V es constante y en la ec. (1) se anulan los trminos
F1 Ci1 y F2 Ci
(6)
La duracin del cultivo batch es, por supuesto, tambin limitada en el tiempo y depende
esencialmente de las condiciones iniciales del cultivo. Una vez inoculado el medio, la
concentracin de biomasa aumenta a expensas de los nutrientes y cuando el sustrato que
limita el crecimiento se agota, finaliza el batch.
Analizaremos ahora con ms detalle cada uno de los sistemas vistos aplicando en
particular los balances de materia a la biomasa X, al producto P, y al sustrato limitante de
crecimiento S. Para los dos primeros slo es necesario considerar la cintica de formacin
(+rX) y (+rp) respectivamente, con lo cual rci = 0 en ambos casos. Para el sustrato se tiene
el caso inverso y slo deber considerarse la velocidad de consumo (-rs). Si por las
caractersticas del proceso, la lisis celular o la descomposicin del producto son
importantes, deber incluirse en el balance un trmino adicional que contemple este
aspecto.
2.- Cultivo continuo
Para poner en marcha un cultivo continuo, se realiza previamente un cultivo batch y en un
momento dado se comienza a alimentar con medio fresco a un caudal F y por un rebalse
se mantiene el volumen constante. El caudal de salida contendr clulas, medio de cultivo
parcialmente agotado y, eventualmente, algn producto. Si alimentamos con medio fresco
significa que X1 = 0 y P1 = 0, por lo que slo deberemos considerar la concentracin de
sustrato limitante del crecimiento S1, en la alimentacin. En base a estas consideraciones
los balances de materia para X, S y P sern (ver ec. (3)):
(7)
(8)
(9)
En estado estacionario las concentraciones dentro del biorreactor permanecern
constantes en el tiempo, lo que significa igualar a cero las ecs. (7), (8) y (9). De la primera,
y teniendo en cuenta que (+rX) = x, resulta:
(10)
donde D es la velocidad de dilucin. Si se reemplaza por la ec. (19) del captulo 5 resulta
que la concentracin de S en estado estacionario es:
(11)
donde S representa la concentracin en estado estacionario. De la ec. (8) surge:
(12)
Por la ec. (26) del captulo 5:

adems = D, por lo tanto la concentracin de biomasa en estado estacionario es:
(13)
Si en particular S es la fuente de carbono y energa, (-rs) vendr dado por la ec. (29) del
captulo 5 y X ser:
(14)
Cuando ms = 0, la ecuacin (14) se reduce a la ec. (13).
La Fig. 16 muestra como varan la concentracin de sustrato en estado estacionario en
funcin de la velocidad de dilucin. La curva superior corresponde a la ec. (13) y la inferior
a la ec. (14), pudindose observar en este ltimo caso que el efecto del mantenimiento
celular se hace notable a bajas velocidades de dilucin. En ambos casos puede apreciarse
que existe un valor de D por encima del cual X = 0, con lo que, por la ec. (13) o (14)
S = S1. Si se reemplaza este valor en la ec. (11) se obtiene la velocidad de dilucin crtica
Dc .
(15)

Si como ocurre normalmente S1 Ks se tiene que Dc = m, lo cual es un criterio muy til en
el momento de seleccionar un valor de D apropiado, ya que deber cumplirse que D < m.
En caso contrario ocurrir el "lavado" del cultivo, debido a que la velocidad de salida de las
clulas del biorreactor ser mayor que la de crecimiento. Debe tenerse en cuenta que la
Fig. 16 se representa en caso que S1 est dado por la ecuacin de Monod, pero si en el
medio del cultivo hay sustancias inhibidoras del crecimiento, o son formados por los
microorganismos, o el sustrato limitante es el inhibidor, debern emplearse las
expresiones de correspondientes.
Formacin de producto:
En estado estacionario, la ecuacin (9) se reduce a:
(16)
o bien
(17)
donde P representa la concentracin de producto en estado estacionario. Dependiendo de
como sea la cintica de formacin del producto ser la forma de la curva P vs. D.
Alternativamente puede emplearse, y de hecho se emplea, el cultivo continuo para
elucidar qu tipo de relacin existe entre qp y , ya que es uno de los factores a tener en
cuenta para planear la estrategia de produccin.
Determinacin de los parmetros de crecimiento: El cultivo contnuo es sumamente til
para determinar parmetros de crecimiento tales como Ks , m o Y'x/s . As reordenando la
ec. (11) se obtiene:
(18)
Graficando 1/D en funcin de 1/S, los puntos debern ajustarse a una recta cuya
interseccin con el eje 1/D dar el valor de 1/m y la pendiente Ks/ m; si es que el cultivo
puede ser representado por una cintica como la de Monod.
Por otra parte reordenando la ec. (14) resulta:
(19)
de donde la grfica de D (S1-S) /X en funcin de D permitir estimar 1/Y'x/s y ms.
Obviamente en este caso el sustrato considerado es la fuente de carbono y energa.
3.- Batch. alimentado
Para iniciar un batch alimentado valen las mismas consideraciones que se hicieron para
iniciar un cultivo contnuo, salvo que en este caso supondremos que se inicia la
alimentacin del cultivo cuando el sustrato limitante se ha agotado.
Si bien ste no es un requisito indispensable, permite simplificar el tratamiento matemtico
y adems es un buen punto de partida con respecto al objetivo del batch alimentado, es
decir: controlar la velocidad de crecimiento mediante la velocidad de alimentacin.
Tambin supondremos que alimentamos con medio de cultivo fresco, es decir que X1 = 0 y
P1 = 0. Luego los balances de materia para X, S y P sern (ec. (5)):
(20)
(21)
(22)
A fin de no extender innecesariamente el tratamiento matemtico discutiremos solamente
la formacin de biomasa y el consumo de sustrato. De todos modos, si (+rp) es conocida,
el procedimiento no vara mayormente.
Si en la ec. (21) se reemplaza (-rs) por (+rx)/Yx/s y se tiene en cuenta la ec. (20) resulta:
(23)
Si deseamos que la velocidad de crecimiento est controlada por la de alimentacin, sta
deber ser tal que en todo momento sea S = 0 y por lo tanto d(SV)/dt = 0. Esto equivale a
decir que el sustrato es consumido totalmente en cuanto ingresa al biorreactor. Luego:
(24)
e integrando
(25)
donde Xo y Vo representan la concentracin de biomasa y el volumen de cultivo en el
momento de iniciar la alimentacin. La variacin de V con el tiempo se obtiene integrando
la ec. (4).
(26)
El criterio para disear una alimentacin adecuada se obtiene combinando las ecs. (20) y
(24), de donde a t = 0, resulta:
(27)
La ec. (27) se puede emplear para cualquier valor de hasta m, por lo tanto la ec.(27)
puede reescribirse como:
(28)
Como criterio adicional conviene seleccionar el valor de S1 tan alto como sea posible y F
relativamente pequeo a fin de evitar la excesiva dilucin del cultivo.
La contrapartida es que la duracin del batch alimentado puede prolongarse
excesivamente, por lo que normalmente se trata de encontrar la solucin de compromiso,
donde intervienen adems, aspectos econmicos.
El valor de durante el batch vara permanentemente, ya que por la ec. (20) es:
(29)
Sustituyendo las ecs. (24) y (25) en la ec. (29) resulta:
(30)
Por tanto disminuye con el tiempo. Esto es vlido solamente para el caso tratado aqu,
es decir con F y S1 constantes, pero nada impide hacer alimentaciones con F = F(t) o
S1 = S1 (t), con lo cual puede lograrse, por ejemplo, que se mantenga constante o bien
que aumente hasta valores cercanos a m. La diversidad de alimentaciones posibles que
pueden emplearse es, quizs, una de las caractersticas ms apreciables del batch
alimentado. La otra es que este sistema de cultivo es muy apropiado para obtener altas
concentraciones de biomasa, muy superiores a las que se podran obtener en un batch,
donde la limitacin est dada por la concentracin inicial de nutrientes del medio de cultivo
que pueden tolerar los microorganismos.
Si se considera el mantenimiento celular, el valor de (-rs) para la fuente de carbono y
energa vendr dado por la ecuacin (29) del captulo 5, y mediante un proceso similar al
descrito resulta:
(31)
Resolviendo la ecuacin diferencial se obtiene:
(32)
Tambin se demuestra que en este caso el criterio para calcular la alimentacin est dado
por:
(33)
En la Figura 17 se representa la ec. (32) para distintos valores de ms, y la ec. (25) que
corresponde al caso en que ms = 0. Se observa claramente que cuanto mayor es ms
menor es la cantidad de biomasa obtenida, adems las curvas con ms distinto de 0 tienden
asintticamente a un valor mximo que est dado por:
(34)
Este valor se obtiene directamente de la ec. (31) haciendo d(XV)/dt = 0. En estas
condiciones la totalidad de la fuente de carbono y energa que ingresa al biorreactor se
utiliza para mantenimiento celular y por lo tanto ya no es posible aumentar la cantidad de
biomasa. Alternativamente, si el cultivo se realiza con el objeto de obtener un producto
perteneciente al grupo (asociado al metabolismo energtico), convendr trabajar siempre
en las condiciones indicadas, ya que toda la fuente de carbono suministrada se
transformar en el producto deseado.

4.- Batch
Aplicando la ec. (6) a la biomasa, al producto y al sustrato resulta:
(35)
(36)
(37)
Suponiendo que no se forma producto y que la relacin entre y S puede ser
representada por la ecuacin de Monod surge que:
(38)
(39)
El sistema formado por las ecs. (38) y (39) posee solucin analtica, pero en sta no
aparece X en forma explcita por lo que resulta de escasa utilidad.
En cambio es posible analizar casos particulares haciendo algunas suposiciones.
Por ejemplo se puede asumir que durante una buena parte del tiempo se cumplir que
S Ks, por lo tanto las ecs. (38) y (39) se reducen a:
(40)
(41)
Por tanto bajo las condiciones indicadas el crecimiento se llevar a cabo con el mximo
valor de S posible. ntegrando la ec. (40) con la condicin a t = 0, X = Xo, se llega a la
expresin:
(42)
o bien:
(43)
La ec. (42) establece que para S Ks el crecimiento es exponencial (fase exponencial), y
por la ec. (43) es posible calcular el valor de m graficando el lnX en funcin del tiempo.
La variacin de S con t se obtiene introduciendo la ecuacin (42) en la ecuacin (41) e
integrando con la condicin de que a t = 0, S = So:
(44)
A medida que el cultivo transcurre, S disminuye hasta que se llega a la condicin en que S
es comparable a Ks y por lo tanto dX/dt comienza a disminuir (fase de desaceleracin)
hasta hacerse finalmente nula cuando S = 0. En este punto se alcanza la mxima
concentracin de biomasa y finaliza el batch (fase estacionaria).
La concentracin final de biomasa, Xf, se puede calcular si se conoce el Yx/s
(45)
puesto que Sf = 0 resulta:
78 1 79 : ;23" S! (46)
Alternativamente se pueden emplear las ecs. (45) o (46) para calcula el Yx/s.
En la Fig. 18 se representan las distintas fases de crecimiento hasta aqu descritas, que
surgen de suponer vlida a la ecuacin de Monod. Sin embargo antes de la fase
exponencial suele existir otra fase () conocida como fase de retardo, durante la cual la
concentracin de biomasa no se modifica substancialmente, pero ocurren profundos
cambios en la composicin macromolecular y en el "estado fisiolgico" de las clulas,
ambos tendientes a adaptarlas al nuevo entorno. Si se considera esta fase, debe aplicarse
una correccin ala ec. (43), lo que esencialmente consiste en restarle al tiempo real el
tiempo transcurrido hasta que efectivamente comienza el crecimiento
(47)
donde t,. da cuenta de la duracin de la fase de retardo.
Normalmente esta fase no es deseable ya que significa una prdida de tiempo, por lo que
usualmente se trata de minimizarla. Una forma de lograrlo consiste en hacer crecer el
inculo en un medio de cultivo igual al que se va a emplear posteriormente, y adems
transferirlo cuando las clulas se encuentran en plena fase exponencial.
Por otra parte despus de la fase estacionaria sobreviene la fase de declinacin (V) que
consiste en una disminucin de la concentracin de biomasa debida a la lisis celular. Esta
fase puede representarse considerando una cintica adicional en el balance de materia,
aspecto que ya fue discutido.

El cultivo tipo "batch", si bien es quizs el ms difundido, es el que menos posibilidades de
control ofrece. Una vez sembrado el medio de cultivo y fijada la temperatura, las clulas
quedan "libradas a su propia suerte" o, dicho de otro modo, a su propia potencialidad, que
se manifiesta creciendo a la mxima velocidad que le permite el medio de cultivo
empleado, siendo el operador un mero espectador de los acontecimientos. En este
aspecto tanto el cultivo continuo como el "batch" alimentado superan ampliamente al
"batch".
5.- Biorreactores
El biorreactor, es sin duda, uno de los equipos fundamentales de la microbiologa
industrial. Es el recipiente donde se realiza el cultivo, y su diseo debe ser tal que asegure
un ambiente uniforme y adecuado para los microorganismos.
Las "tareas" que realiza el biorreactor pueden resumirse del siguiente modo:
a3 Mantener las clulas uniformemente distriuidas en todo el volumen de cultivo a fin
de prevenir la sedimentacin o la flotacin.
3 Mantener constante ! )omognea la temperatura.
c3 Minimi%ar los gradientes de concentracin de nutrientes.
d3 *uministrar o'geno a una velocidad tal que satisfaga el consumo.
e3 El dise(o dee ser tal que permita mantener el cultivo puro" una ve% que todo el
sistema )a sido esterili%ado ! posteriormente semrado con el microorganismo
deseado.
Para satisfacer los cuatro primeros puntos es necesario que el biorreactor est provisto de
un sistema de agitacin, adems para el punto d) se requiere de un sistema que inyecte
aire en el cultivo. Describiremos brevemente dos tipos de biorreactores de uso muy
difundido: el tanque agitado y el "air lift". En el primero de ellos (Figura 19) la agitacin se
realiza mecnicamente mediante un eje provisto de turbinas accionado por un motor.

El aire se inyecta por la parte inferior del tanque y es distribuido por una corona que posee
pequeos orificios espaciados regularmente. El chorro de aire que sale de cada orificio es
"golpeado" por las paletas de la turbina inferior generndose de este modo miles de
pequeas burbujas de aire, desde las cuales difunde el 02 hacia el seno del lquido. El
sistema de agitacin se completa con cuatro o seis deflectores que tienen por finalidad
cortar o romper el movimiento circular que imprimen las turbinas al lquido, generando de
este modo mayor turbulencia y mejor mezclado. El tanque est rodeado por una camisa
por la que circula agua, lo que permite controlar la temperatura. Para tanques mayores
que 1000 2000 litros este sistema ya no es eficiente y es reemplazado por un serpentn
que circula adyacente a la pared interior del tanque. Debe tenerse en cuenta que a medida
que es mayor el volumen de cultivo tambin lo es la cantidad de calor generado, por lo que
se hace necesario una mayor rea de refrigeracin. Los tanques son de acero inoxidable y
estn pulidos a fin de facilitar la limpieza y posterior esterilizacin. El aire que ingresa al
biorreactor debe estar estril, lo que se consigue hacindolo pasar por un filtro cuyo
dimetro de poro es de 0.45 micrones, que impide el paso de microorganismos y esporas.
En los reactores de tipo "air lift" (Figura 20) es el mismo aire inyectado al cultivo lo que
promueve la agitacin. Bsicamente consiste en dos cilindros concntricos y por la base
de uno de ellos, por ejemplo el interior, se inyecta aire. De este modo se genera una
circulacin de lquido ascendente en el compartimento interno y descendiente en el
externo, lo que favorece el mezclado.

6.- Transferencia de oxgeno
La velocidad de transferencia de oxgeno, OTR o RO2, desde el seno de la fase gaseosa
(burbujas) hasta la fase lquida est dada por la siguiente ecuacin:
(48)
donde KLa es el coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, C es la concentracin
de oxgeno disuelto en el seno del lquido y C* la concentracin de oxgeno disuelto que.
estara en equilibrio con la presin parcial de oxgeno de la fase gaseosa. El KLa depende
del diseo del biorreactor, de las condiciones de operacin (caudal de aire, agitacin) y de
la viscosidad del cultivo. A mayor viscosidad menor KLa. El KLa es una medida de la
capacidad que posee un biorreactor para suministrar O2 y el rango de valores usuales est
comprendido entre 50 h
-1
y 1000h
-1
.
Es til en este punto retomar el ejemplo visto al final del captulo 5 y calcular el KLa
necesario para que la velocidad de transferencia de 02 sea igual a la de consumo; esto
significa que R02 deber ser igual a 1526 mg L
-1
h
-1
. Asumiendo que C* = 7.8 mg L
-1
y C
= 0.5 mg L
-1
, resulta

Por tanto valores de KLa iguales o superiores al calculado asegurarn, para el ejemplo
visto, que el cultivo no est limitado por oxgeno. Cuando la velocidad de consumo del
oxgeno vara con el tiempo, como ocurre por ejemplo en un cultivo "batch", el clculo de
KLa necesario se realiza empleando el mximo valor de RO2 esperado, a fin de asegurar un
adecuado suministro de 02 durante todo el cultivo.
Con estos conceptos finaliza el tratamiento de los aspectos fundamentales de los
procesos de fermentacin. Resta tratar las aplicaciones de la Microbiologa ndustrial y las
posibilidades que pueden presentarse en el futuro. Como ejemplo de esas aplicaciones se
pueden mencionar a los procesos correspondientes a la produccin de levadura de
panificacin, penicilina y otro correspondiente al tratamiento de efluentes. La produccin
de levadura es un proceso clsico de las primeras etapas del desarrollo de la
Microbiologa ndustrial, mientras que el de penicilina representa un cambio fundamental
en la evolucin de nuestra disciplina, a partir de 1945. En ambos procesos se demuestra
la integracin de varios de los aspectos bsicos tratados con anterioridad.
Finalmente la eleccin del tema de tratamiento de efluentes industriales responde a la
trascendencia cada vez ms importante que tiene el problema de la contaminacin
ambiental y a las soluciones que ofrece la Microbiologa ndustrial para encararlo.
Lecturas recomendadas4
Principles of microe and cell cultivation. S.J.Pirt. Blackwel l Scientific Publications 21T:.3
Fermentation Cinetics and modelling. C.G.Sinclair and B. Kristiansen. Ed. J.D. Bu'Lock. Open University Press
21T<:3.
Qioc)emical Engineering Fundamentals. J.E. Bailey and D.F. Ollis. Mc Graw-Hill Book Company 21T<S3.
Qioc)emical Engineering. *. Aiba, A.E. Humprey and N.F. Millis. Academic Press,1T:-.

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