Universidade Federal do Rio Grande FURG Instituto de Oceanografia IO Laboratrio de Microcontaminantes Orgnicos e Ecotoxicologia Aqutica

Controle de Qualidade em Amostras de POPs

Prof. Dr. Gilberto Fillmann gilberto@pq.cnpq.br

Quality Assurance X Quality Control (QA & QC)

Quality Assurance (QA)
Plano de manejo amplo que garante a integridade dos dados (Todo Sistema Envolvido)

Quality Control (QC)

Uma srie de medidas analticas usadas na avaliao da qualidade do data analtico gerado (Ferramentas)

Programas de QA/QC garantem a gerao de dados analticos precisos e exatos

Procedimentos de QA
Procedimentos de Operao Padro cada mtodo laboratorial claramente
descrito em um procedimento de operao padro. Estes mtodos so periodicamente revisados e atualizados.

Treinamento as anlises so realizadas por pessoal treinado. Cada membro deve

atingir critrios de performance antes de realizar as anlises.

Equipamentos Confiveis e Bem Conservados Cada equipamento operado

por pessoal treinado . Livros de manuteno so mantidos para cada equipamento. Os equipamentos so calibrados conforme instrues dos fabricantes e procedimentos de operao padro. Balanas, pipetas e outros instrumentos de medidas so calibrados com freqncia.

Rastreabilidade Padres analticos usados so rastreveis para verificar a

certificao. Materiais de referncia internos so checados quanto a praticidade tcnica e econmica.

Reviso Anual dos Resultados do QC Os resultados dos testes de proficincia e

QC so avaliados anualmente para verificar tendncias. Um controle estatstico usado para verificar a variabilidade relativa dos dados. Este controle feito tambm com materiais de referencia e amostras fortificadas para avaliar a acurcia das medidas.

Amostras de QC
Brancos um brancos de procedimento analisado a cada conjunto de amostras
processado. Inclui o extrato obtido ao longo de todo procedimento analtico.

Duplicatas pelo menos 10% das amostras deve idealmente ser processados em
duplicata. Os valores das duplicatas no devem variar mais do que 8% entre si.

Materiais de Referncia Padro Ao menos um material de referncia padro

deve ser analisados em cada conjunto de amostras e os resultados devem ser expressos no relatrio final. Amostras devem ser realizadas caso os resultados do material de referncia padro estiverem dentro dos aceitveis.

Amostras Fortificadas Devem ser regularmente utilizadas para verificas a exatido

dos procedimentos analticos, especialmente aqueles que necessitem uma extensiva manipulao (vrias etapas de extrao, purificao, fracionamento, etc.), ou para amostras no convencionais.

Programas de Intercalibrao e Certificao O laboratrio deve participar de

programas de intercmbio de amostras e de proficincia analtica. Deve atender as exigncias locais de certificao.

Valores Verdadeiros vs Medidos

Valores Verdadeiros
O valor conhecido e aceito de algo quantificvel

Valores Medidos
O resultado de medidas individuais de algo quantificvel

Exatido vs Preciso
Exatido O quanto uma medida concorda com um valor aceito para a medida Preciso O quanto uma srie de medidas concordam entre si

Exatido vs Preciso

Nem preciso, nem exato

Baixa exatido mas no preciso

Preciso mas no exato

Preciso e exato

Erro Sistemtico vs Aleatrio

Erro Sistemtico
Erro passvel de ser evitado com o controle de variveis de uma medida.

Erros Aleatrio
Erro no passvel de ser evitado que esta sempre presente em qualquer medida. Impossvel de eliminar!

Controle de Qualidade - Pr-Controle

(infra-estrutura adequada, SMS, limpeza, avaliao pureza, )

- Coleta
(pessoal treinado, material adequado, controle de amostra)

- Armazenamento
(local adequado, etiquetas adequadas, controle de chegada)

- Processamento das Amostras

(brancos, duplicatas, matrizes fortificadas, material de referncia, etc.)

- Quantificao/Identificao dos Analitos

(padres certificados, padro interno, etc.)

- Outros procedimentos
(intercalibraao, proficincia, certificao)

Pr-Controle - adequao da infra-estrutura

(bancadas impermeveis/inertes, piso e parede no porosa, capelas adequadas, armazenamento adequado de gases, solventes e reagentes e resduos, qualidade do ar, controle de temperatura e umidade)

- SMS
(equipamentos de segurana, sinalizao e placas indicativas, restrio de acesso, capelas, luvas, guarda-p, culos proteo, chuveiro, lava olhos, etc.)

- solventes e reagentes
(validade, grau de pureza, controle de pureza do lote (pr-concentrao))

- calibrao regular de equipamentos

(manuteno preventiva de equipamentos, calibrao de balanas, pipetas, vidraria)

Coleta - pessoal treinado - protocolos escritos - equipamento adequado

(conforme a matriz em estudo, pr-limpeza )

- brancos de coleta e de transporte - identificao correta do material - controle de entrada e manuseio de amostras
(registro de entrada, codificao, manuteno de duplicatas, controle de estocagem)

Armazenamento - local adequado - recipientes adequado - brancos de estocagem - identificao/etiquetagem correta do material - controle de recebimento e armazenamento

Processamento das Amostras - mtodo padro / protocolo escrito e disponvel - limpeza de vidraria, pureza de reagentes e solventes (validade, grau de pureza, pureza do lote (pr-concentrao)) - codificao das amostras - controle de padres (controle de peso, registro de uso, validade, anlise) - branco - branco fortificado e branco fortificado duplicata - matriz fortificada e matriz fortificada duplicata - duplicatas de amostras - material de referncia (certificados ou no)

Branco
Frequncia: Um branco a cada conjunto de amostras (10-20) Critrio: No mximo 5% por analitos com concentrao maior que 3 vezes o limite de deteco. Medida corretiva: reextrao

Duplicata
Frequncia: Uma a cada conjunto de amostras (10-20) Critrio: variao 25% para 95% dos analitos cuja concentrao na amostra seja superior a dez vezes o limite de deteco; Medida corretiva: reintegrao dos cromatogramas, reinjeo das amostras, manuteno do instrumento, recalibrao do instrumento ou reextrao do lote de anlise

Branco Fortificado
Frequncia: Um a cada conjunto de amostras (10-20) Critrio: recuperao entre 40-120% para 80% dos analitos identificados como fortificado vlido Medida corretiva: reintegrao dos cromatogramas, reinjeo das amostras, manuteno do instrumento, recalibrao do instrumento ou reextrao do lote de anlise

Branco Fortificado Duplicata

Frequncia: Um a cada conjunto de amostras (10-20) Critrio: variao 25% para 95% dos analitos cuja concentrao na amostra seja superior a dez vezes o limite de deteco; Medida corretiva: reintegrao dos cromatogramas, reinjeo das amostras, manuteno do instrumento, recalibrao do instrumento ou reextrao do lote de anlise

Matriz Fortificada
Frequncia: Uma a cada conjunto de amostras (10-20) Critrio: recuperao entre 40-120% para 80% dos analitos identificados como fortificado vlido Medida corretiva: reintegrao dos cromatogramas, reinjeo das amostras, manuteno do instrumento, recalibrao do instrumento ou reextrao do lote de anlise

Matriz Fortificada Duplicata

Frequncia: Uma a cada conjunto de amostras Critrio: variao 25% para 95% dos analitos cuja concentrao na amostra seja superior a dez vezes o limite de deteco; Medida corretiva: reintegrao dos cromatogramas, reinjeo das amostras, manuteno do instrumento, recalibrao do instrumento ou reextrao do lote de anlise

Material de Referncia (NIST, IAEA, ASTM)

Frequncia: Uma a cada conjunto de amostras Critrio: recuperao em torno de 35% da faixa de concentrao certificada para 80% dos analitos cuja concentrao no material de referncia seja superior a dez vezes o limite de deteco Medida corretiva: reintegrao dos cromatogramas, reinjeo das amostras, manuteno do instrumento, recalibrao do instrumento ou reextrao do lote de anlise

IAEA International Atomic Energy Agency ASTM - American Society for Testing and Materials NIST National Institute of Standards and Technology

Quantificao - branco do instrumento - padres externos (certificados e no certificados) - curva de calibrao - verificao contnua da curva de calibrao - padro de recuperao (surrogate) e padro interno (quantificao) - limite de deteco do equipamento e do mtodo (LDE e LQM) - limite de quantificao (LQ)

Outros procedimentos - validao interna dos mtodos antes da aplicao

(figuras de mrito conforme literatura (SANCO, 2009), International Conference on Harmonisation (ICH), International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC), International Organization for Standardization (ISO), INMETRO, ANVISA, etc.)

- exerccios de intercalibrao (padres e amostras)

(UNEP, Rede Metrolgica, rede de laboratrios, etc.)

- ensaios de proficincia analtica

(CALA, QUASIMEME, etc.)

- certificao (ISO 9000.., BPL, etc.)

(INMETRO, rgos ambientais, etc.)

SANCO (2009) Method validation and quality control procedures for pesticide residues analysis in food and feed. Document No. SANCO/10684/2009. 53 p.

Boas Prticas de Laboratrio (BPL)

GLP = Good Laboratory Practice

Sistema de qualidade a ser usado por laboratrios e organizaes para planejar, executar, monitorar, registrar, arquivar e relatar seus estudos. Esse sistema visa assegurar a uniformidade, consistncia, confiana, reprodutibilidade, qualidade e integridade dos dados. As BLPs ajudam as autoridades reguladoras a assegurar que os dados gerados/reportados so resultado obtidos so confiveis e podem ser usados para anlises de risco.

Princpio das Boas Prticas de Laboratrio (BPL)

- Pessoal e organizao da unidade operacional (pessoal preparado e
equipamentos adequados)

- Programa de garantia da qualidade (QA/QC documentado) - Unidades operacionais (instalaes adequadas) - Equipamentos, material e reagentes (calibraes, limpeza, identificao) - Sistema-teste (rastreamento, separao de material) - Substncia-teste e substncia de referncia (controle de padres usados) - Procedimentos operacionais padro (protocolos disponveis) - Execuo do estudo (plano de ao) - Relatrio do estudo (relatrio final detalhado) - Arquivo de registros e armazenamento de material (plano de trabalho,
dados brutos, relatrio final)

Programa Internacional de Proficincia Analtica

(Canadian Association for Laboratory Accreditation CALA)

Validao dos Mtodos

SANCO (2009). Method validation and quality control procedures for pesticide residues analysis in food and feed. Document No. SANCO/10684/2009. 53 p.

Rs = 2

Validao dos Mtodos

- Resoluo Cromatogrfica - Curva Analtica - Linearidade - Limite de Deteco e Quantificao - Exatido - Preciso (repetitividade e preciso intermediria) - Efeito Matrix

t R 2 t R1 Wb1 + Wb 2

Rs = 2

Validao dos Mtodos

Resoluo Cromatogrfica
A resoluo de uma separao cromatogrfica entre dois picos adjacentes representa a eficincia do mtodo e calculada a partir da distncia que separa os pontos mximos dos picos e da soma das larguras de suas respectivas bases (Ribani et al., 2004).

t R 2 t R1 Wb1 + Wb 2

tR1 e tR2 = tempo de reteno de picos adjacentes Wb1 e Wb2 = largura dos picos na base, em unidades de tempo. Rs > 1 indicam boa separao
Ribani et al. (2004). Validao em mtodos cromatogrficos e eletroforticos.Qumica Nova 27, 771-780.

Rs = 2

Validao dos Mtodos

Curva Analtica e Linearidade
A curva analtica consiste na determinao da resposta de determinado instrumento em relao a vrias concentraes do analito (mnimo 5-6 concentraes); O limite inferior deve ser igual ao limite de quantificao do mtodo e o limite superior depender do sistema de resposta do equipamento; A linearidade definida como sendo a faixa de concentraes onde a sensibilidade constante; Calibration Curve for DDT Verificao diria da linearidade.
500

t R 2 t R1 Wb1 + Wb 2

Peak area x 106

400

R2 = 0.9989 y = 9.3005x + 4.3313

300

200

100

0 0 10 20 30 40 50 60

Parts per trillion DDT

Rs = 2

Validao dos Mtodos

Limite de deteco do equipamento (LDE)
definido como a menor concentrao de um analito que pode ser detectada Trs mtodos de clculo: - visual; - rinal/ruido (LD 3:1; LQ 10:1) - baseado na curva analtica (equao)

t R 2 t R1 Wb1 + Wb 2

s o coeficiente linear da equao S o coeficiente angular da curva analtica

Ribani et al. (2004). Validao em mtodos cromatogrficos e eletroforticos.Qumica Nova 27, 771-780.

Rs = 2

Validao dos Mtodos

Limite de deteco (LDM) e Limite de quantificao (LQM)
definido como a menor concentrao de um analito que pode ser detectada (LDM), e quantificada e reportada (LQM)na amostra a ser analisada. Leva em considerao o fator de concentrao ao longo do procedimento analtico

t R 2 t R1 Wb1 + Wb 2

Rs = 2

Validao dos Mtodos

Exatido
definida pela concordncia entre um resultado de um ensaio e o valor de referncia aceito por conveno com verdadeiro Mtodos de avaliao da exatido: - ensaios de recuperao; - uso de materiais de referncia e; - adio de padro.

t R 2 t R1 Wb1 + Wb 2

Recuperao - 70 e 120 % (anlise de resduos) - 40 e 120 % (>>complexidade analtica e da matriz)

Rs = 2

Validao dos Mtodos

Preciso (repetitividade e preciso intermediria)
Repetitividade (% RSDr) o grau de concordncia entre os resultados de medies repetidas de uma mesma medida, efetuadas sobre as mesmas condies de medio (mesmo procedimento de medio, analista, instrumento usado nas mesmas condies, local e curto espao de tempo) (n7) Preciso intermediria (% RSDpi) refere-se preciso avaliada sobre a mesma amostra, utilizando o mesmo mtodo, no mesmo laboratrio ou em laboratrios diferentes, variando uma das seguintes condies: diferentes analistas, diferentes equipamentos ou diferentes tempos.

t R 2 t R1 Wb1 + Wb 2

s = estimativa do desvio padro absoluto; Xm = mdia de uma srie de medidas (replicatas).

Validao dos Mtodos

Efeito Matrix
Ocorre quando substncias inerentes matriz coeluem com os compostos de interesse. Esta diretamente relacionado com a eficincia das etapas de extrao e purificao dos extratos. Pode aumentar ou suprimir a resposta do detector, mascarar o pico de interesse ocasionando um falso negativo, erro na identificao de picos que podem fragmentar-se como o do analito de interesse, ocasionando falso positivo. Anlise de solues analticas no solvente puro e no extrato da matriz (equao) ou anlise de curvas analticas na matriz.

Sm = coeficiente angular da curva preparada na matriz; Ss = coeficiente angular da curva preparada no solvente

Controle de Qualidade em Amostras de POPs

PERGUNTAS ???