Guia de Analisis Bromatologico

Facultad de Ciencias
Agropecuarias
Universidad de
Panam

Autor:
Manuel De Gracia, Ph.D.

Apoyo en Revisin:
Alvis Gallardo

GUA PARA EL
ANLISIS
BROMATOLGICO
DE MUESTRAS DE
FORRAJES

2
Gua para el Anlisis Bromatolgico de Muestras de
Forrajes

Laboratorio de Nutricin Animal

Facultad de Ciencias Agropecuarias
Universidad de Panam

Autor:
Manuel S. De Gracia, Ph.D.

Apoyo en revisin:
Alvis Gallardo

2011

TABLA DE CONTENIDO
Pgina No.
I. INTRODUCCIN .......................................................................................................................................... 1
II. TOMA DE MUESTRAS ............................................................................................................................... 2
A. PASTURAS ..................................................................................................................................... 3
B. HENOS ............................................................................................................................................ 3
C. ENSILAJE Y SUBPRODUCTOS DE FERMENTACIN ................................................................ 3
D. GRANOS O MEZCLAS DE CONCENTRADOS ............................................................................. 4
III. MEZCLA DE LAS MUESTRAS E IDENTIFICACIN ............................................................................... 4
IV. PRESECADO Y MOLIENDA ..................................................................................................................... 6
V. PROCEDIMIENTOS ANALTICOS ............................................................................................................ 7
VI. DETERMINACIN DE LA MATERIA SECA .......................................................................................... 11
A. MATERIA SECA PARCIAL O A 60 C ......................................................................................... 11
B. MATERIA SECA TOTAL O A 105 C ........................................................................................... 12
C. MATERIA SECA TOTAL A 135 C ............................................................................................... 13
D. DETERMINACIN DE HUMEDAD POR DESTILACIN CON TOLUENO ................................. 14
E. MTODOS ADICIONALES PARA DETERMINAR HUMEDAD ................................................... 15
F. DETERMINACIN DE HUMEDAD EN DOS PASOS ................................................................... 16
VII. DETERMINACIN DE CENIZAS ........................................................................................................... 17
VIII. DETERMINACIN DE NITRGENO .................................................................................................... 18
IX. DETERMINACIN DEL EXTRACTO ETREO ...................................................................................... 24
X. DETERMINACIN DE FIBRA .................................................................................................................. 26
A. DETERMINACIN DE LA FIBRA CRUDA ................................................................................... 26
B. DETERMINACIN DE LA FIBRA DETERGENTE NEUTRO (FDN) O CONSTITUYENTES
DE LA PARED CELULAR. ........................................................................................................... 29
C. DETERMINACIN DE LA FIBRA DETERGENTE CIDO (FDA). .............................................. 32
D. DETERMINACIN DE FIBRA POR ANLISIS ENZIMTICO .................................................... 35
XI. DETERMINACIN DE LIGNINA ............................................................................................................. 40
XII. DETERMINACIN DE MINERALES ..................................................................................................... 43
A. DETERMINACIN DE CALCIO .................................................................................................... 44
B. DETERMINACIN DE FSFORO ................................................................................................ 48
C. DETERMINACIN DE POTASIO ................................................................................................. 50
XIII. LITERATURA CONSULTADA .............................................................................................................. 54

Gua para el Anlisis Bromatolgico de Muestras de Forrajes

1
I. INTRODUCCIN

La nutricin como ciencia basa su aplicacin en el conocimiento de las demandas nutricionales de los
animales en cada uno de sus estados fisiolgicos y en la oferta de los nutrimentos para satisfacer estas
necesidades en las cantidades y calidad adecuadas. Resulta imposible poder formular una racin para el
consumo animal que maximice la respuesta de un grupo diverso de animales. De acuerdo con la
distribucin normal de una determinada poblacin, habrn animales con mayores o menores demandas
nutricionales en comparacin con el promedio general del grupo, por lo que la racin que se formule
deber cubrir los requerimientos nutricionales de un alto porcentaje de los animales, y solo en el caso de
aquellos animales ms exigentes, se formularn raciones especiales si el valor econmico de los animales
lo amerita. El formular raciones con un exceso de nutrimentos para cubrir las necesidades de todos los
animales puede acarrear una sobrealimentacin de algunos o de muchos segn sea el caso, y por
consiguiente disminuir los beneficios econmicos, as como la competitividad de la actividad.

Para lograr formular una racin que se adecue a satisfacer los requerimientos nutricionales de la mayora
de los animales en un lote tenemos que utilizar como punto de partida la composicin qumica de los
diferentes alimentos o ingredientes que sern utilizados en la formulacin de la racin. Debe quedar claro
que el solo conocimiento de la composicin qumica de los ingredientes no puede predecir la respuesta
animal, pues se dan otros factores como lo son la gentica de los animales, condiciones ambientales,
estado de salud de los animales, nivel de consumo de la racin, digestibilidad de la racin o de los
diversos ingredientes de la misma, entre otros. No obstante, se han desarrollado diversas ecuaciones
matemticas que pretenden predecir el valor nutritivo de los alimentos en funcin de su composicin y de
esta manera, indirectamente, predecir parcialmente la respuesta animal.

Con la composicin qumica de los alimentos se puede establecer una clasificacin relativa del valor de
cada uno de ellos, ya sea como fuente de nitrgeno o de energa, dos de los principales componentes en
cualquier racin que se desee formular. El aporte de minerales, vitaminas, as como el de fibra cruda,
Fibra Detergente Neutro, Fibra cido Detergente y de cidos grasos esenciales, entre otros, tambin
resulta importante, pero dependen de la especie animal y del estado fisiolgico. Igual resulta importante en
especies como porcinas y aves el aporte de amino cidos esenciales en la racin. Adicionalmente,
dependiendo del lugar, la forma de produccin y el procesamiento, entre otros, de los ingredientes
podemos obtener variaciones en la composicin qumica, lo que implicara realizar peridicamente anlisis
de los alimentos cada vez que tengamos sospecha de que se puedan dar variaciones significativas que
pudieran alterar la composicin final de la racin, y por consiguiente obtener resultados diversos en la
respuesta animal.

Con lo anterior podemos indicar que un anlisis exhaustivo de la composicin qumica de un alimento
sera lo mejor y tendra muchas ventajas al momento de formular una racin, sin embargo, esto sera muy
costoso, por lo que en forma prctica, resulta ms econmico realizar ciertos anlisis especficos y utilizar
valores de referencia de la literatura para ciertos componentes, cuyo anlisis demanda cierto tipo de
equipo y son mas costosos y difciles de realizar. En el caso que se detecten variaciones significativas con
los valores de referencia, pudiera procederse a verificar la composicin de forma peridica.

Finalmente, a lo largo de los aos, se han desarrollado diversas tcnicas de anlisis, as como equipo ms
sensible, que han permitido determinar con mayor exactitud la composicin qumica de los alimentos. Se
han estandarizado procedimientos, entre los cuales se pueden indicar los de la AOAC International,
National Forage Testing Association, Japan Livestock Technology Association, o los de la USDA.
Igualmente, se proceden a certificar laboratorios donde se comprueba la veracidad de los resultados de
los anlisis contra patrones establecidos y se comparan y validan total o parcialmente la composicin de
ciertos alimentos.

En el curso de Nutricin Animal I el estudiante podr conocer y realizar algunos de los procedimientos
analticos ms comunes que se aplican a los alimentos o forrajes utilizados en la nutricin animal de las
especies domsticas de inters econmico en el pas. Esperamos que este documento sirva de apoyo
para la realizacin de estas actividades y sirva de material de referencia al estudiante durante sus
prcticas de laboratorio. En el documento se ha respetado el derecho de autor de la informacin

2
presentada, y este documento no pretende sustituir la fuente original utilizada para la elaboracin del
mismo.

II. TOMA DE MUESTRAS

La toma de muestra tiene como objetivo principal proveer de material para determinar algn aspecto de
inters de una poblacin o universo. Para la realizacin de la mayora de los anlisis de laboratorio se
utilizan entre uno a dos gramos de muestra. Si comparamos esta cantidad de material con el total del
material de donde proviene, en muchos casos parece insignificante, por lo que se deduce la importancia
de poder contar para los anlisis de laboratorio con una muestra que sea representativa del material que
queremos analizar.

Por lo anterior podemos indicar que la toma de muestra es un paso importante, pues del mismo depender
nuestra inferencia sobre el resto de material que ser utilizado para la formulacin de raciones para los
animales. Se considera que la toma de muestra es una de las mayores fuentes de variacin durante los
procesos de anlisis, por lo que se debe tener un gran cuidado en esta etapa. Si la muestra no representa
fielmente el material a utilizar podemos sub o sobreestimar la oferta de nutrimentos a los animales en la
racin, y por consiguiente pudiramos no encontrar las respuestas deseadas en trminos de produccin y
productividad biolgica, as como en trminos econmicos. Por lo tanto, es importante conocer que las
mediciones que se van a obtener en la muestra son correspondientes a una distribucin que posee una
media o promedio determinado, y que el valor estimado desde la muestra no posee ningn sesgo y sea
preciso. No obstante, toda medicin posee un grado de error, conocido como error estndar, y entre
menor es este error mayor es la precisin. Esta ltima puede aumentarse o disminuirse en funcin del
nmero de muestras que se tomen, o cambiando el tamao de la muestra, lo que est limitado por los
recursos que se poseen.

La forma como obtengamos la muestra del campo va a depender del tipo de material que queremos
analizar. As podemos tener materiales desde gramneas de piso, decumbentes, erectas, de corte, como
tambin leguminosas de tipo arbustivo, rastreras, trepadoras, entre otras. Adicionalmente, en muchas
oportunidades nos encontramos con cultivos donde se desea utilizar parte del mismo o en su totalidad
como el caso del maz y el sorgo para ensilaje, o en su defecto los rastrojos y subproductos de la cosecha
del grano. Para el caso de alimentos semi o totalmente procesados nos encontramos con diversidades de
formas de almacenamiento, ya sea a granel, en sacos, tanques u otro tipo de envase, as como en forma
lquida o semilquida, o con altos niveles de humedad, como el caso de la melaza, subproductos de
destilera, pulpas, entre otros.

En muchos casos, existe la posibilidad que el material provenga de un solo lote o fecha de siembra, sin
embargo, se dan casos donde el material a utilizar es elaborado en diferentes fechas, por lo que se deben
tomar muestras de cada lote de elaboracin si se desea mantener un control sobre los alimentos utilizados
en la formulacin de las raciones. Finalmente, la cantidad preliminar de muestra que debe enviarse al
laboratorio deber tomar en consideracin la cantidad original de material. As tenemos que para el caso
de pasturas, la cantidad y puntos donde se tome la muestra estar influenciada por la cantidad de
hectreas que comprende el rea a utilizar por los animales, que a su vez estar influenciada por la
uniformidad de las caractersticas del suelo, tanto en composicin fsico-qumica como de topografa. Para
muestras envasadas, tal como se mencionara anteriormente, no solo influir el lote de fabricacin o
procesamiento, sino tambin la cantidad de material producido, y la forma del envase.

Algo muy importante en lo que se refiere al tratamiento de las muestras para anlisis, es que se debe
minimizar el tiempo entre la toma de la muestra y su acondicionamiento para anlisis en el laboratorio. No
se deben guardar las muestras bajo condiciones que pueden alterar su composicin, tales como alta
humedad, elevadas temperaturas, luz solar, entre otras. Si la muestra no va a ser acondicionada dentro de
las siguientes 24 horas de su recoleccin, es aconsejable colocarla en refrigeracin hasta que llegue al
laboratorio. A continuacin, algunas sugerencias sobre la toma de muestras de algunos alimentos
utilizados en la nutricin animal.


3
A. PASTURAS

La obtencin de muestra de pasturas debe realizarse con mucho cuidado y hay que tomar en
consideracin varios factores, por lo que se podrn encontrar en la literatura diversas metodologas y
mtodos para la recoleccin de muestras de acuerdo a cada situacin. Lo importante es asegurarse que
se est tomando una muestra representativa del rea utilizada. Por lo general la muestra debe ser cortada
a la altura con que frecuentemente los animales la consumen, en caso de que sean utilizadas en pastoreo
directo, que por lo general esta entre los 10 a 15 cm de altura. Uno de los mtodos ms comunes es el
uso de cuadrantes o marcos de metal o madera que cubren 0.5 m
2
de rea. Los cuadrantes se arrojan
dentro del rea al azar y se corta todo el material que se encuentra dentro del cuadrante. En caso de
parcelas experimentales pequeas se deben evitar los bordes y tomar la muestra en el centro de la misma.
Cuando estamos frente a mayores extensiones se puede aplicar una sectorizacin del rea de acuerdo a
las caractersticas de la parcela, y dentro de cada sector determinar visualmente cuadrantes y de los
cuales, de forma aleatoria, se tomaran muestras de algunos para obtener una muestra representativa de la
pastura. Por hectrea el rango de muestras vara desde 10 hasta 25 muestras.

Cuando son pasturas de crecimiento erecto, por lo general la altura de corte se puede incrementar hasta
unos 25 cm, ya que este tipo de pasturas por lo general es ms susceptible a la defoliacin severa,
adems de que por lo general los animales no las consumen extensamente. En el caso de especies para
corte se seleccionan plantas consecutivas dentro de varias hileras del material sembrado, que muestren
un crecimiento promedio del campo, y se cortan a alturas inferiores a los 10 cm o a ras del suelo, para
permitir el crecimiento de nuevo material. Para especies arbustivas la seleccin de la muestra depender
de lo que se ofertar a los animales, ya sea hojas u hojas mas tallos jvenes entre diversas plantas de la
parcela.

En todos los casos anteriores, todo el material cortado es pesado individualmente, de forma que pueda
estimarse posteriormente la cantidad de material producido por hectrea. Dependiendo del nmero de
muestras tomadas en campo, se pueden tomar submuestras del material cortado en cada localidad para
conformar una, dos o tres muestras finales del campo, o bien tomar todo el material cortado para preparar
la muestra que ser enviada al laboratorio.

B. HENOS

Existen diversos dispositivos para tomar muestras de heno, el mas comn consiste en una especie de
tubo de acero inoxidable de aproximadamente 45 cm de largo y 3 cm de dimetro con un extremo con
bordes cortantes. La toma de muestra depender de la forma de henificacin y de la cantidad de material
henificado. Si es un heno de montn se debern tomar muestras tanto de la parte externa como de la
parte interna. De la parte externa se deben tomar a una profundidad de aproximadamente 10 cm. Para el
caso de pacas se toman tambin muestras del interior, o en algunos casos se abren las pacas y se toman
sectores o franjas interiores en su totalidad.

Se puede asumir que cada muestra representar el total de la paca y tomando un nmero suficiente de
muestras de diversas pacas se obtiene una representatividad del heno. No se debe tratar de separar las
hojas de los tallos cuando se toma este tipo de muestra. El nmero de pacas utilizadas para obtener la
muestra depender del volumen de pacas obtenidas en campo y en algunos casos de la uniformidad del
material recolectado. De cada paca seleccionada se podrn tomar hasta cinco submuestras, que luego se
mezclan para seleccionar la muestra a enviar al laboratorio para anlisis. Se dan procesos donde el heno
se oferta en forma de pequeos cubos. En estos casos su comercializacin se hace en bolsas o sacos y
hasta en tanques, por lo que la toma de muestra de este tipo de material debe hacerse de forma muy
similar a la que se aplica para granos y otros productos que se envasan en el mismo sistema.

C. ENSILAJE Y SUBPRODUCTOS DE FERMENTACIN

Una vez se procede a abrir el silo, se deben tomar muestras de las reas expuestas, que estn libres de
daos visibles (color oscuro, hongos o mohos). Se pueden tomar muestras del material cuando este es
transportado hacia los comederos, y se debe evitar tomar muestras muy cerca de los bordes superior,
inferior o los lados de la estructura. Para silos en bolsa, se pueden tomar muestras de cada bolsa segn

4
se estn utilizando, y en el caso de silopress tomar muestras a medida que se avance en su abertura. En
el caso de ensilaje se recomienda tomar muestras del silo por varios das consecutivos, las cuales se
congelan hasta que se mezclen todas y se vayan a enviar al laboratorio las submuestras. Si las
submuestras no sern procesadas inmediatamente, las mismas debern ser envasadas en recipientes que
permiten excluir la mayor cantidad de aire posible y congelarlas. Al igual que con los otros materiales
utilizados en la alimentacin animal se debern tomar tantas muestras como se considere necesario de
acuerdo con el tamao del silo y las caractersticas del material ensilado, tales como estado de madurez,
diferencias de crecimiento en campo, entre otros.

Para el caso de otros materiales con alto contenido de humedad y subproductos de procesos
fermentativos, como los residuos de cervecera, se deben tomar muestras de acuerdo a como se van
utilizando, de igual manera que con los ensilajes. Para la conservacin de las submuestras, aunque no se
requiere la exclusin de aire, se debe proceder a su congelamiento si no van a ser procesadas de
inmediato. En estos materiales no se debe tratar de extraer los lquidos por presin, puesto que muchas
veces estos son consumidos por el animal cuando se ofrecen frescos, y solo se pierde lquido por
almacenamiento o transporte de forma normal, pero no por presin externa.

D. GRANOS O MEZCLAS DE CONCENTRADOS

Las muestras de granos o mezclas de alimentos que estn envasados en bolsas se pueden tomar con un
dispositivo o probador adecuado para tal propsito. Se deben tomar de cada saco un par de muestras del
centro del saco, o hay quienes prefieren tomar muestras de la parte superior, inferior y del medio del saco,
pues se da la tendencia que material mas fino, as como el mas denso, si los sacos han sido manipulados,
se segreguen hacia el fondo o costados, si estn estibados. No obstante, en el mejor de los casos es
mejor tomar la muestra en el momento en que el material se esta vaciando. La AOAC
1
indica que para
lotes de una a diez bolsas debern tomarse muestras de todas las bolsas, para lotes mayores a 11 bolsas
tomar muestras de al menos diez bolsas al azar. Las bolsas se colocan horizontalmente y se toman
muestras diagonalmente, una de cada bolsa, y para menos de 4 bolsas tomar de cinco a mas muestras
diagonalmente.

En caso de que el material este a granel, se pueden tomar muestras de diferentes lugares, incluyendo el
centro del mismo, lo que puede resultar en la toma de mas de 10 muestras, o en su defecto tomar
muestras a medida que el material esta siendo utilizado. De igual forma, estas muestras deben ser
mezcladas totalmente y luego tomar las submuestras para el laboratorio.

III. MEZCLA DE LAS MUESTRAS E IDENTIFICACIN

En todos los casos anteriores si la muestra ser utilizada para anlisis de minerales se recomienda el uso
de tijeras u otro material de acero inoxidable, tanto para su recoleccin como para su conservacin. Para
facilitar la mezcla del material cortado, este se corta a 3 cm de longitud aproximadamente y se mezcla
completamente. Posteriormente se puede utilizar el mtodo del fraccionamiento en cuartos. Esto consiste
en distribuir la muestra total sobre una superficie limpia y dividirla en cuartos, los cuartos opuestos
diagonalmente se desechan y los restantes se mezclan, y se vuelven a dividir. Se repite la operacin hasta
que se obtiene una muestra de aproximadamente 1.5 kg para material fresco y ensilajes, y de 300 g para
henos, concentrados, y otros. Otro mtodo utilizado, recomendado por la AOAC consiste en colocar todo
el material en un solo montn y con una pala u otro instrumento ir tomando alternadamente muestras, es
decir, tomar una muestra y rechazar la siguiente. El nuevo montn que queda se somete al mismo
procedimiento, y as sucesivamente, hasta llegar a la cantidad que ser enviada al laboratorio.

Durante el proceso de mezclado y seleccin de la submuestra se debe tener especial cuidado que el
material no se contamine o sufra algn tipo de degradacin que altere los resultados De cada muestra de
campo se pueden enviar dos o tres submuestras para anlisis al laboratorio. Esto no invalida el uso de
repeticiones en el laboratorio, pues a cada una de las submuestras en cada corrida o anlisis se debern
incluir repeticiones. Cada muestra deber ser identificada adecuadamente, de manera que se puedan
conocer las condiciones bajo las cuales se obtuvo el material y asociar su composicin con estas. Para

1
AOAC International. Official Methods of Analysis. 17
th
Ed. W. Horwitz, Editor. 2000.

5
identificar las muestras se puede incluir en el detalle parte de lo que se conoce como el Nombre
Internacional utilizado por el National Research Council y basado en la propuesta de Harris y col.
2
, que
permite estandarizar la identificacin de los distintos alimentos utilizados en la alimentacin animal.
Igualmente deber indicarse la fecha de recoleccin, la localidad y si se desea el nombre de la persona
que recolect el material.

El nombre internacional de la NRC de los alimentos se compone de los siguientes componentes:
- Nombre cientfico: esto incluye el gnero y especie del alimento (Zea mays, Digitaria
decumbens, Gossypium spp., como ejemplo)
- Variedad o clase: esto incluye las diversas lneas o variedades que se obtienen por lo general
con la manipulacin gentica (var identata, var Marand, var Libertad, como ejemplo)
- Nombre comn del alimento: esto corresponde al nombre vulgar conocido ampliamente en la
regin o a nivel internacional (maz, pasto pangola, algodn, como ejemplo)
- Parte de la planta, animal o subproducto: En este caso se identifica la porcin de la planta o el
animal, y en todo caso el subproducto que es utilizado en la formulacin de la racin (parte rea,
tallos, semilla con cscara, como ejemplo)
- Proceso(s) y tratamiento(s) que sufri antes de consumirlo el animal: aqu se seala si el
alimento ha sido previamente procesado para ser incluido en la racin o consumido por el animal
(ensilado, fresco, fertilizado, extrado por prensa solvente, horneado a 110 C, como ejemplo)
- Estado de madurez: Es importante sealar que muchas veces utilizamos edad de corte por edad
fisiolgica de la planta, aunque son dos fenmenos diferentes. En este componente se debe
identificar el estado de madurez fisiolgico de la planta (floracin, antes de la floracin, recin
germinado, como ejemplo)
- Corte o cosecha: Bajo este componente es que se indica la edad al momento del corte o cosecha.
En muchos cultivos, para los cuales se dan los rebrotes se puede indicar si es primero, segundo u
otro corte. Igualmente en otras latitudes se indica si el corte pertenece a determinada estacin del
ao.
- Grado o designacin de calidad: Para ciertos granos o materiales se pueden dar indicaciones
ms exactas sobre el grado o contenido de ciertos nutrientes importantes, para los cuales el
alimento es utilizado. As tenemos que se puede indicar el nivel de protena, fibra cido detergente,
entre otros.
- Clasificacin: Para la clasificacin se utiliza un agrupamiento de los alimentos en funcin de
ciertas caractersticas muy particulares, las cuales no son rgidas en extremo. Hay circunstancias
donde un alimento bien pudiera ser clasificado o excluido de cierto grupo dada ciertas condiciones
al momento de su uso. Las clasificaciones utilizadas son:
Forrajes secos y alimentos toscos (1): Esta clasificacin incluye los henos, tanto de
gramneas como leguminosas, algunos henos de cultivos de cereales, las pajas y residuos de
cosecha, rastrojos, y otros productos que tienen como caracterstica principal poseer un
contenido de fibra cruda mayor al 18%. Este nivel de fibra es el que se utiliza para clasificar en
esta categora todos los productos cuyo contenido en base seca exceda dicho nivel. Tambin
forman parte de este grupo las cscaras y vainas, el bagazo de la caa, las cascarillas y la
tuza del maz
Forrajes de fibra utilizados verdes (2): Se incluye en esta categora todos los forrajes que
son utilizados frescos, an cuando hayan sido cortados, ya que algunos autores incluyen en la
misma los pastos de corte. Tambin se incluyen algunos residuos de cultivos alimenticios. Sin
embargo, se mantiene como parmetro para clasificarlos como forrajes el hecho de que en
base seca poseen ms de 18% de fibra cruda. Tal como se mencionara anteriormente, hay
productos que son difciles de clasificar, tal es el caso del ensilaje de maz, el cual con un
contenido de fibra mayor al 18% posee un contenido de Nutrientes Digeribles Totales (NDT)
cerca de 70% lo que lo hace bastante digerible, a diferencia de los alimentos incluidos en esta
categora. En el caso de las leguminosas, estas poseen un contenido de protena cruda
superior en muchos casos al 20% y se clasifican en esta categora.

2
Harris, L., J. Malcon A. y E.W. Crampton. An International Feed nomenclature and methods for summarizing and using feed
data to calculate diets. Utah. Agr. Expt. Sta. Bul. 479. 1968

6
Ensilajes (3): Como su nombre lo indica, aqu se incluyen todos los materiales que han sido
preservados mediante la tcnica del ensilaje o fermentacin anaerbica. Existen ensilajes de
gramneas, cereales como el maz, sorgo y otros alimentos.
Concentrados energticos (4): a esta clasificacin pertenecen todos los alimentos que
contienen menos de 20% de protena cruda y menos de 18% de fibra cruda. Aqu se incluyen
los granos de cereales, subproductos de la molienda de los cereales, melazas, pulpas y
subproductos de ctricos, lpidos de origen animal y vegetal, suero, subproductos de
cervecera, desechos de algunas plantas de alimentos, frutas, vegetales, nueces, races y
tallos reservantes, desechos de panadera, banano de desecho, entre otros.
Concentrados proteicos (5): Aqu pertenecen todos los alimentos con ms de 20% de
protena cruda. Existen dentro de esta categora productos de origen animal como los son las
harinas de carne, de sangre y de carne y hueso, harinas de pescado, as como los
subproductos de animales como la gallinaza y la cerdaza. Entre los de origen vegetal tenemos
las harinas de las oleaginosas como la semilla de algodn, de soya, man, entre otros. Se
incluyen las harinas de algas, algunos subproductos de la molienda de cereales, granos
desecados de la destilera y cerveceras, leguminosas deshidratadas, fuentes unicelulares por
bacterias, levaduras, as como los nitrogenados no proteicos como la urea.
Suplementos minerales (6): Como su nombre lo indica a este grupo pertenecen todos los
productos que contienen los minerales necesarios en la alimentacin animal, en sus diferentes
formas. Aqu se incluye la harina de hueso, de concha, entre otros.
Suplementos vitamnicos (7): Al igual que en la clasificacin anterior se incluyen todas las
formulaciones o productos que poseen un alto contenido, casi puro, de las diversas vitaminas
que se utilizan en la alimentacin animal.
Aditivos (8): Aqu corresponden la diversidad de productos, que an cuando no aportan
ningn nutrimento a la alimentacin animal, ayudan a ser ms eficientes algunos aspectos del
metabolismo animal, aumentar el nivel de ingesta o prevenir ciertas enfermedades.
- Nmero Internacional: Este se compone de 6 dgitos, X-XX-XXX, donde el primero corresponde
a su clasificacin, y los dems son asignados de acuerdo a su inclusin dentro de la tabla de
composicin de alimentos que norma la NRC, tambin se le conoce como el Nombre Numrico.
Este nmero es utilizado cuando se trabaja con sistemas de cmputo.

IV. PRESECADO Y MOLIENDA

Dependiendo del nivel de humedad del material colectado para muestra se deber tener el cuidado de
poder disminuir el contenido de agua hasta niveles donde se pueda conservar en el laboratorio sin que el
material se deteriore hasta el momento de su anlisis o para conservarlo para determinaciones futuras
adicionales. En el caso de materiales como heno, rastrojos, concentrados, granos cosechados y secados
previo almacenamiento, entre otros, que en su mayora llegan al laboratorio con un 90 a 95% de materia
seca, pueden ser molidos directamente y el material puede ser conservado en frascos con tapa o en
bolsas plsticas con cierre hermtico bajo condiciones normales de laboratorio o bodegas refrigeradas.
Estos recipientes debern contar con una adecuada identificacin y llevar un registro de las mismas en un
banco de datos. En la figura 1 se muestra un esquema del tratamiento de las muestras de acuerdo a su
nivel inicial de humedad.

Para los forrajes verdes, cosechados frescos, no se acostumbra guardarlos en su forma natural, por lo que
se someten a un presecado a temperaturas de 60 C por aproximadamente 18 a 24 horas en hornos de
aire forzado caliente. Para el caso de muestras con altos niveles de humedad, tales como ensilajes,
subproductos de fermentacin, pulpas, alimentos lquidos, inclusive aceites y grasas, entre otros, si no se
desea disminuir el nivel original de humedad debern conservarse a temperaturas de congelamiento,
donde se eviten fermentaciones u oxidaciones adicionales por la presencia de bacterias, hongos, mohos y
oxgeno. Estos materiales por lo general poseen menos de 85% de materia seca. La reduccin del
contenido de humedad de las muestras permite que se elimine el medio ms general de reaccin, el agua.
Una vez se disminuye la cantidad de agua libre es muy difcil que las reacciones ocurran, y si
adicionalmente se le reduce la temperatura ambiental, se reducen mucho ms las posibilidades de que el
material sufra cambios mientras permanezca almacenado. Durante el presecado, se debe tener en cuenta
que no se ha eliminado totalmente el contenido de agua del material, lo que se elimina en gran parte es lo

7
que se conoce como agua libre. Esta prdida de agua en el presecado deber tomarse en cuenta cuando
se determine la humedad total, que se realiza a temperaturas cercanas a los 100 C.

De manera general, todas las muestras que sern sometidas a anlisis deben ser molidas. Los materiales
colectados en campo, en especial los forrajes, poseen partculas de gran tamao, por lo que se debe
reducir su tamao para realizar los anlisis correspondientes. La reduccin en el tamao de las partculas
permite que la submuestra utilizada para el anlisis sea representativa de todo el material colectado. En
muchos casos, existe la posibilidad de que el material pueda sufrir un calentamiento adicional en el molino,
por lo que se debe ser muy cuidadoso en el tamao de partcula que se desea obtener y el tiempo que
tome la muestra en el molino. En este procedimiento se puede perder una cantidad adicional de humedad.
Para proceder a moler la muestra esta debe tener no ms de un 12% de humedad, aproximadamente.

Las partculas grandes se reducen para que puedan colocarse en el molino, esto se puede realizar con
algn instrumento de acero inoxidable para no contaminar las muestras. Cuando las partculas de la
muestra son muy grandes, se aconseja molerlas inicialmente utilizando mallas que permitan obtener un
tamao de partcula entre 4 a 6 mm. Por lo general, para la molienda final, se utilizan mallas en el molino
que permitan reducir el tamao de las partculas entre 0.75 hasta 1 mm. En muestras que tengan
tendencia a perder humedad, la AOAC recomienda que se utilicen mallas de 2 mm, para minimizar el
tiempo en el proceso. El tipo de molino a utilizar depender del tipo de muestra y su nivel de humedad. El
molino de cuchillas o martillo trabaja bien para muestras con 80 a 85% de materia seca, sin embargo el de
bolas o tipo cicln requiere que las muestras tengan entre 90 a 95% de materia seca para poder ser
molidas sin problemas. Una vez molida las muestras se procede a guardarlas en envase de vidrios o
bolsas plsticas a temperatura de laboratorio, donde se minimice su exposicin al aire, calor y luz, y se
evite su deterioro. Finalmente se procede a la identificacin apropiada de la muestra.

V. PROCEDIMIENTOS ANALTICOS

La determinacin de la composicin qumica de los alimentos utilizados en la alimentacin animal se basa
en diversos procesos qumicos que tienen como finalidad determinar cuantitativamente la presencia de
determinado elemento, compuesto o fraccin de la estructura del material. En base a la composicin, es
decir la presencia cuantitativa de un elemento, compuesto o fraccin determinada, se realizan inferencias
sobre los beneficios que tiene determinado alimento sobre la nutricin animal. Hay otros tipos de anlisis
Figura 1. Esquema para la preparacin de la muestra para
anlisis.

8
que permiten estimar la calidad del alimento, pero esto se considera como una evaluacin un tanto
subjetiva y en muchos casos sus valores son relativos y no absolutos, pues solo permiten comparar el
valor de un alimento con respecto a otro o un grupo de alimentos. Adicionalmente, la composicin
cuantitativa no refleja la eficiencia o el nivel de aprovechamiento con la cual el alimento es utilizado por
determinada especie. Factores como la digestibilidad, absorcin y el uso a nivel tisular de cada nutrimento
de determinado alimento, consumido solo o combinado, varan entre las especies, y an dentro de ellas,
para los diferentes estados fisiolgicos de los animales. Por tal motivo, se han diseado ensayos
biolgicos que permiten medir la biodisponibilidad, o sea la cantidad de un nutrimento que el animal
realmente aprovecha. Estos mtodos son generalmente ms complicados y costosos.

A pesar de todo lo anterior, el anlisis del alimento nos sirve de gua para determinar el nivel de
incorporacin de un alimento en la formulacin de raciones para cada especie, y conocer cuales son los
aportes en trminos de nutrimentos y como poder complementarlos con otra fuente, ya sea natural o
artificial. La disponibilidad de nutrimentos en un alimento es esencialmente determinada por la
composicin qumica del alimento: primero con respecto a la concentracin de los componentes
disponibles y no disponibles y segundo a travs de las estructuras orgnicas e inhibidores que pueden
limitar la disponibilidad de sus componentes con los cuales estn asociados. Los anlisis de laboratorio
son requeridos como un medio rpido y econmico para el control de calidad de alimentos y predecir la
respuesta animal en diferentes situaciones de alimentacin. Existen los anlisis qumicos y los de la
digestin in vivo e in vitro utilizando bacterias ruminales o enzimas. Esta ltima provee de estimaciones
ms directas de digestibilidad pero es mas larga, cara y se indica que es menos reproducible.

El anlisis proximal de la materia seca en uso por ms de 100 aos, se atribuye su desarrollo en
Alemania a Henneberg y Stohmann
3
, y es conocido como el mtodo Weende. El mismo consiste de los
siguientes pasos:
Materia seca a los 100 C: Calentamiento de la muestra hasta un peso constante a temperaturas
por encima del punto de ebullicin del agua (100 C). Esto remueve el agua, por consiguiente la
prdida de peso equivale al contenido de agua. Fuentes de error son el hecho de que cualquier
material que se volatiliza a esta temperatura se pierde (ensilajes u otros productos fermentados).
Algunos lquidos se oxidan cuando se calientan y por consiguiente aumentan de peso. Se utiliza la
determinacin con tolueno, secado al vaco y secado en congelamiento, como mtodos alternos.
Lpidos: Extraccin con ter del residuo para estimacin de lpidos por 4 h. La prdida de peso
luego del secado corresponde a los lpidos.
Fibra Cruda: Reflujo del residuo del extracto etreo por 30 m con cido sulfrico al 1.25% seguido
por 30 m con hidrxido de sodio al 1.25%. El residuo insoluble se seca, pesa e incinera, y la
materia orgnica insoluble se denomina fibra cruda, que est constituida por hemicelulosa,
celulosa y lignina insoluble.
Determinacin de nitrgeno: mtodo del Kjeldhal. Pequeas muestras son digeridas en cido
sulfrico concentrado y toda la materia orgnica es destruida. El nitrgeno en forma de sulfato de
amonio, luego es neutralizado con hidrxido de sodio, destilado y el amonio es llevado a una
solucin cida estndar y titulado.
Cenizas: incineracin por dos horas a 600 C. Las altas temperaturas pueden alterar la forma de
algunos minerales y pueden volatilizar algunos como el cloro, zinc, selenio y yodo.
Extracto Libre de Nitrgeno: El clculo de esta fraccin se considera como la materia seca no
determinada por la suma del extracto etreo, fibra cruda, cenizas y protena (N x 6.25). compuesto
principalmente de carbohidratos altamente disponibles, tales como azcares y almidn, pero
tambin puede contener hemicelulosa y lignina, especialmente en forrajes.

Este sistema es la base para los clculos del NDT (Nutrientes Digeribles Totales) asumiendo lo siguiente:
El extracto etreo recolecta los lpidos y grasas que contienen 2.25 veces el contenido energtico
de los carbohidratos
Todo el nitrgeno est en forma de protena que contiene 16% de nitrgeno
La fibra cruda recolecta la porcin fibrosa y material estructural menos digerible del alimento
El extracto libre de nitrgeno representa carbohidratos altamente digeribles.

3
Maynard, L. A. y J. K. Loosli. Animal Nutrition. 6ta. Edicin. McGraw Hill, 1973, McDonald, P., R. A. Edwards y J. F. Greenhalg.
Animal Nutrition. 2da. Edicin. Longman, 1977 y Van Soest, P. J. Nutritional Ecology of the Ruminant. O & B Books, 1982.

9
Ninguna de las anteriores asunciones es cierta y el grado de error vara considerablemente, sin embargo
es uno de los mtodos mas utilizados. El extracto etreo incluye ceras, aceites voltiles, clorofila y
pigmentos con poco valor y no recupera los jabones en las heces que son la forma en la cual cidos
grasos indigeribles son excretados. Los forrajes no poseen triglicridos y los galactolpidos de las hojas
contienen menos energa que lo que implica el factor 2.25. Puede ser ignorado en el anlisis de muchos
forrajes y alimentos para rumiantes. Los constituyentes nitrogenados incluyen: protenas, cidos nucleicos,
nitrgeno no proteico soluble en agua y fracciones muy insolubles asociadas con la lignina. El contenido
de nitrgeno de las plantas vara de 15 a 16%. La protena verdadera solo representa el 70% del nitrgeno
del forraje y poco o nada del nitrgeno fecal. El nitrato no es convertido a sales de amonio por este
procedimiento. Muchos anlisis de heces indican cantidades considerables de extracto libre de nitrgeno
pero ordinariamente no contienen carbohidratos hidrosolubles. Almidn insoluble es el nico carbohidrato
no estructural que aparece en las heces y solo en grandes ingestas aparece con cantidades sustanciales.
El extracto libre de nitrgeno contienen los errores acumulados de todas las otras determinaciones.
Mayormente debido a la solubilidad y prdida de lignina y hemicelulosa en la preparacin de la fibra cruda.
An la celulosa no es totalmente recobrada y el comportamiento de diferentes materiales es variable.

Posteriormente, durante 1930 surge nuevamente el inters por el anlisis de la fibra. Bajo el auspicio de
L.A. Moore se desarrolla el mtodo de Van Soest que corrige un tanto las deficiencias en las
determinaciones de fibra cruda y el extracto libre de nitrgeno. Predecir el valor nutritivo a partir del
proximal es un problema, en especial con aquellos alimentos fibrosos. En este anlisis se dividen los
nutrimentos que se encuentran en los tejidos vegetales en dos grandes compartimentos basado en su
disponibilidad nutricional, el contenido celular que es fcilmente disponible para todos los animales, y un
segundo compartimiento constituido por las paredes celulares las cuales son menos disponibles y cuya
digestibilidad es controlada por la concentracin de lignina y celulosa. Este mtodo puede repetirse con
mayor facilidad que el mtodo de la fibra cruda, adems asla una fraccin del alimento que generalmente
los animales utilizan en forma muy ineficiente. Existen otros mtodos especficos y sofisticados para
determinar cada uno de los componentes qumicos pero obviamente requieren de equipo sofisticado y son
ms tediosos. Estos anlisis sirven para complementar los anlisis obtenidos por el mtodo de Weende o
de Van Soest. El mismo autor indica el carcter dual nutritivo de la materia seca de la planta (contenido
celular y constituyentes de la pared celular) contraindican el uso de un nico factor para predecir la
totalidad de la digestibilidad de la materia seca. Estos componentes son denominados entidades
nutritivas por Lucas (1961)
4
debido a que estos dos componentes fsicos tienen su propia disponibilidad
nutritiva caracterstica.

En la figura 2 se muestra una comparacin de cmo se distribuyen los constituyentes del tejido vegetal en
las diferentes fracciones segn el anlisis utilizado. Se debe indicar, que de acuerdo con el mtodo de Van
Soest, es posible determinar el contenido de nitrgeno en cada una de las fracciones, y en cierta forma
determinar su biodisponibilidad. Mtodos enzimticos tambin han sido evaluados para analizar la
composicin de los forrajes, en especial su componente fibroso. Uno de los mtodos que est siendo
ampliamente aceptado es el desarrollado por el Dr. Abe
5
, en el cual se utiliza o-amilasa y una proteasa
para separa la fraccin soluble o contenido celular (CC) de la fraccin insoluble o pared celular (PC).
Posteriormente, se trata la fraccin insoluble con una celulasa lo que separa una fraccin de fibra
altamente digerible de una fibra de baja digestibilidad. En ambas fracciones se puede determinar la
fraccin orgnica si ambas son incineradas y la diferencia de las cenizas se considera materia orgnica de
la fibra altamente digerible (Oa) y materia orgnica de fibra de baja digestibilidad (Ob), cuyas fracciones
sumadas nos proveen del contenido orgnico de la pared celular
6
.

4
Mott, G.O. y J.E. Moore. Forage Evaluation Techniques in Perspective. Proceedings of the National Conference on forage
Quality Evaluation and Utilization, September 3-4, 1969, L-1-l-10.
5
Abe, T. The studying data of the Livestock Experiment Station. Vol. 2. 1988
6
Japan Livestock Technology Association. Technical Manual for Feed analysis. S. Tanabe, Ed., March, 2000.
Gua para Anlisis de Muestras de Forrajes

10
Figura 2. Comparacin entre Dos sistemas de Anlisis de los Componentes de la Materia Orgnica del Forraje
7

Van Soest
Componentes del Forraje
Weende
Nitrogenado No nitrogenado

Contenido Celular
8

(Solubles en Detergente
Neutro)

Lpidos Extracto Etreo
Nitrgeno No Proteico Solubles en Agua

Extracto Libre
de Nitrgeno

Protena soluble

Pectina, Almidn

Constituyentes de la
Pared Celular
9
(Fibra
Detergente Neutro)

Soluble en cido
Detergente

Protena Insoluble

Hemicelulosa

Lignocelulosa
(Fibra Detergente cido)
Nitrgeno Lignificado Lignina Soluble en lcali
Lignina insoluble
10

Fibra Cruda
Celulosa
11

7
Adaptado de Maynard, L. A. y J. K. Loosli. Animal Nutrition. 6ta. Edicin. McGraw Hill, 1973 y Jurgens, M. H. Animal Feeding and Nutrition. Kendall/Hunt Publishing Company, 4ta. Ed.,
1978.
8
Incluyen azcares, almidn, carbohidratos solubles, pectina, protena, nitrgeno no proteico, lpidos, vitaminas y otros.
9
Incluye celulosa, hemicelulosa, lignina, slice, protena daada por el calor
10
Determinada por incineracin a 500 C
11
Soluble en H2SO4 al 72%

11
VI. DETERMINACIN DE LA MATERIA SECA

Es muy comn que la gran mayora de los alimentos utilizados en la alimentacin animal cuando son
utilizados para la formulacin de raciones posean cierto nivel de humedad. Este nivel de humedad vara
an dentro de un mismo tipo de material debido a las condiciones donde se obtuvo. As tenemos que en
los forrajes, de acuerdo a su madurez fisiolgica van perdiendo humedad y se encuentra pastos con
contenidos elevados de humedad cuando jvenes y con muy poca humedad cuando viejos. En los
subproductos agroindustriales, de acuerdo al procesamiento al cual son sometidos los materiales, la
prdida de agua vara de acuerdo al mtodo de extraccin o secado. Igual sucede con el almacenamiento
de granos, que aunque se estandarizan, no todo el tiempo poseen el mismo grado de humedad.

Al tomar una muestra para analizar su composicin es importante que la muestra no sufra deterioro o
alteraciones durante el tiempo que permanece en laboratorio para su anlisis o mientras se guarde para
futuros anlisis. Tal como se mencionara con anterioridad, la remocin de la humedad libre en el material
recin recolectado restringe la actividad enzimtica y previene la actividad biolgica de cualquier bacteria,
hongo u otro microorganismo presente en el material. Esto es quizs uno de los puntos mas importantes al
momento de acondicionar la muestra para su anlisis. Por otra parte, la variabilidad en el contenido de
humedad dificulta un tanto la comparacin que se pueda realizar entre los distintos materiales que se
utilizan en la alimentacin animal. Por lo que resulta muy conveniente, expresar el contenido de
nutrimentos como porcentaje de la materia seca, o lo que se conoce como Composicin en Base Seca.
Cuando se conoce el contenido original de humedad del material la composicin se expresa como
Composicin Tal como Ofrecido o Composicin en Base Fresca.

A. MATERIA SECA PARCIAL O A 60 65 C

Para la molienda de ciertos materiales y obtener el tamao de partcula ideal para los anlisis de
laboratorio, algunas muestras deben ser presecadas, as como tambin reducir su humedad para su
conservacin. Para estos efectos se acostumbra secar la muestra en un horno de conveccin de aire
caliente a una temperatura de 60 -65 C por 18 a 24 horas. Todas las muestras debern ser procesadas
por duplicado. A continuacin los pasos a seguir:

PROCEDIMIENTO
- Todo el proceso debe realizarse en duplicado.
- Use una bandeja de aluminio limpia.
- Pese la bandeja de aluminio vaca con exactitud. P
1

- Agregue el material de muestra hasta que llene la bandeja y registre el peso de la bandeja mas la
muestra hmeda. P
2

- Coloque la bandeja con la muestra hmeda en el horno de conveccin de aire forzado con
temperatura de 60 - 65 C por un periodo no menor a las 18 horas.
- Luego del periodo indicado con anterioridad, retire la bandeja con la muestra parcialmente seca del
horno y colquela sobre la mesa dejando que se equilibre con la humedad del aire del laboratorio por
lo menos durante 30 minutos.
- Pese la bandeja con la muestra parcialmente seca y registre este valor. P
3

Peso (gramos)
Duplicado 1 Duplicado 2
P
1
. Peso de la bandeja vaca
P
2
. Peso de la bandeja mas la muestra fresca
P
3
. Peso de la bandeja mas la muestra parcialmente seca
P
4
. Peso de la muestra fresca (P
2
P
1
)

El contenido de humedad del material se determina por la diferencia de peso entre el material fresco y el
material parcialmente seco. Para obtener el contenido parcial de materia seca a 60 65 C, utilice la
siguiente ecuacin:

12

El contenido parcial de humedad se obtiene por diferencia:

Con los pesos de los duplicados se obtiene un promedio, y ambos no deben variar mas de 1.5% de la
diferencia de ambos valores. Esta muestra parcialmente seca es molida y se conserva, debidamente
identificada, en envases de vidrio con tapa o en bolsas de plstico con cierres hermticos, para los futuros
anlisis.

Las muestras no son secadas a 105 C para extraer totalmente la humedad desde su inicio debido a que a
dicha temperatura se pueden provocar reacciones indeseables, tales como la Reaccin de Maillard o de
empardecimiento
12
, donde los grupos aminos de los aminocidos, protenas y aminas, tal como el c-amino
de la lisina pueden llegar a reaccionar con carbohidratos, aldehdos y cetonas ligndose, y alterando los
resultados posteriores. Las reacciones subsecuentes como los rearreglos de Amadori y la formacin de los
pigmentos de melanoidinas dan como producto final el empardecimiento de los alimentos.

B. MATERIA SECA TOTAL O A 105 C

La remocin parcial de la humedad libre del material permite la conservacin del mismo disminuyendo su
deterioro o alteraciones qumicas. No obstante el material an conserva cierto nivel de humedad que esta
ligada a ciertas estructuras y compuestos, la cual debe ser removida para determinar con exactitud el
contenido total de agua del material. En el caso de materiales que no han sido presecados a 60 65 C y
que han sido molidos, se puede realizar la determinacin de la humedad total directamente. Para
determinar el contenido total de humedad proceda con los siguientes pasos:

PROCEDIMIENTO
- Coloque un crisol de porcelana con tapa con capacidad de 50 ml en un horno de conveccin de aire
forzado a 105 C por 16 horas por lo menos. Si las muestras no sern utilizadas para la
determinacin de cenizas, se pueden utilizar pequeos envases de aluminio no muy profundos con
tapa, de aproximadamente 50 mm de dimetro y 40 mm de profundidad.
- Remueva el crisol de porcelana del horno, utilizando pinzas de metal, y lo coloca en un desecador, el
cual debe poseer un agente secante en el fondo. Coloque la tapa del desecador sin cerrarlo
completamente. Si lo cierra completamente provocara un vaco dificultando la remocin posterior de
la tapa. Espere por lo menos dos minutos y proceda a colocar la tapa de manera que cierre
hermticamente el desecador. Espere cinco minutos para que se enfre el crisol.
- Remueva el crisol y su tapa del desecador con unas pinzas de metal y proceda a registrar su peso.
El peso debe registrarse en una balanza analtica hasta cerca del 0.0001 g. P
1

- Sin remover el crisol de la balanza, agregue con cuidado 2 g de muestra y registre el peso con la
mayor exactitud hasta 0.0001 g. P
2

- Retire el crisol de la balanza y lo coloca en un horno de conveccin de aire forzado a 105 C durante
24 horas. Algunos procedimientos indican un trmino de 3 horas solamente.
13

- Al final del periodo de secado, remueva el crisol del horno y lo coloca cerrado con su tapa en un
desecador, con las mismas precauciones indicadas con anterioridad. Djelo enfriar.
- Registre el peso del crisol mas la muestra seca con exactitud hasta 0.0001 g. P
3

12
Eskin, N.A.M., H.M. Henderson y R.J. Townsend. Biochemistry of Foods. Academic Press, New York. 1971
13
Undersander, D., D.R. Mertens and N. Thiex. Forage Analyses Procedures. National Forage Testing Association, 2001.
www.foragetesting.org
x100
4
P
1
P -
3
P
SECA TE PARCIALMEN o C
0
60 A SECA MATERIA DE % =
C 60 SECA A MATERIA DE % - 100 C 60 A PARCIAL HUMEDAD DE %
O O
=

13
El contenido de humedad del material se determina por la diferencia de peso entre el material fresco y el
material seco. Para obtener el contenido de materia seca a 105 C, utilice la siguiente ecuacin:

Peso (gramos)
P
1
. Peso del crisol vaco
P
2
. Peso del crisol mas la muestra fresca
P
3
. Peso del crisol mas la muestra seca
P
4
2
P
1
)

El contenido de humedad se obtiene por diferencia:

Tal como en el caso anterior, la diferencia de los valores de los pesos de los duplicados no deben superar
mas del 1.5% de las diferencias de ambos con el promedio. Estas muestras secas se conservan en los
crisoles para la determinacin del contenido de cenizas. No obstante, estas muestras no deben utilizarse
para la determinacin de la fibra, lignina o nitrgeno insoluble en la fibra cido detergente. Igualmente, en
este procedimiento se pierden compuestos voltiles, en especial de los ensilajes.

C. MATERIA SECA TOTAL A 135 C

En algunos casos un procedimiento ms rpido para la determinacin de la materia seca total es aceptado
por la AOAC
14
. En este caso las muestras son colocadas en hornos de conveccin de aire caliente a
temperatura de 135 C. Este procedimiento no se recomienda para muestras donde se desea realizar
anlisis de lpidos, o en materiales con urea, alto contenido de azcares, materiales ensilados, productos
lcteos con contenido de azcar mayor al 4% o productos que contengan algunos de estos compuestos,
debido a que pueden ocurrir reacciones que alteren la muestra y adems puedan provocar la prdida de
material dada la elevada temperatura utilizada durante el anlisis. Para determinar la humedad por este
procedimiento siga los siguientes pasos:

PROCEDIMIENTO
- Coloque un pequeo envase de aluminio no muy profundo con su respectiva tapa en un horno de
conveccin de aire forzado a 135 C por 2 horas por lo menos.
- Remueva el envase de aluminio y su tapa, utilizando pinzas de metal, y lo coloca en un desecador, el
cual debe poseer un agente secante en el fondo. Coloque la tapa del desecador sin cerrarlo
completamente. Si lo cierra completamente provocara un vaco dificultando la remocin posterior de
la tapa. Espere por lo menos dos minutos y proceda a colocar la tapa de manera que cierre
hermticamente el desecador. Espere cinco minutos para que se enfre el envase de aluminio.
- Remueva el envase de aluminio y su tapa del desecador con unas pinzas de metal y proceda a
registrar su peso. El peso debe registrarse en una balanza analtica hasta cerca del 0.0001 g. P
1

- Sin remover el envase de aluminio de la balanza, agregue con cuidado 2 g de muestra y registre el
peso con la mayor exactitud hasta 0.0001 g. Remueva la muestra hasta que se distribuya
uniformemente en el fondo del envase. P
2

- Retire el envase de aluminio de la balanza y lo coloca en un horno de conveccin de aire forzado a
135 C durante 2 horas, sin colocarle la tapa.

14
th
x100
P
P - P
C 105 A SECA MATERIA DE PORCENTAJE
4
1 3 0
=
C 105 SECA A MATERIA DE % - 100 C 105 A HUMEDAD DE %
O O
=

14
- Al final del periodo de secado, remueva el envase de aluminio del horno, le coloca la tapa y lo coloca
en un desecador, con las mismas precauciones indicadas con anterioridad. Djelo enfriar.
- Registre el peso del envase de aluminio con tapa mas la muestra seca con exactitud hasta 0.0001 g.
P
3

El contenido de humedad del material se determina por la diferencia de peso que se da entre el material
fresco y el material seco luego del secado en el horno. Para obtener el contenido de materia seca a 135 C,
utilice la siguiente ecuacin:

Peso (gramos)
P
1
. Peso del envase de aluminio vaco
P
2
. Peso del envase de aluminio mas la muestra fresca
P
3
. Peso del envase de aluminio mas la muestra seca
P
4
2
P
1
)

Al igual que en casos anteriores el contenido de humedad se obtiene por diferencia:

D. DETERMINACIN DE HUMEDAD POR DESTILACIN CON TOLUENO

Algunas muestras poseen una cantidad variable de compuestos voltiles, los cuales pueden eliminarse si
la muestra se calienta a las temperaturas utilizadas para determinar materia seca en hornos de conveccin
de aire forzado. En muchos casos estas prdidas pueden ser insignificantes, mientras que para otras
puede resultar elevada, y se puede sobreestimar el contenido de humedad. Este es el caso de los
ensilajes, donde si se coloca el material en un horno convencional se pueden peder los cidos actico,
propinico y butrico, as como el amonia. Igualmente, algunos carbohidratos se pueden descomponer y
las protenas pueden ligarse y formar compuestos insolubles en otros materiales.

Para evitar este tipo de errores en la determinacin de humedad se utiliza el mtodo de destilacin por
tolueno o mtodo de Dean y Stark. En este caso, se toma en consideracin que el solvente y el agua son
inmiscibles, que el solvente posea un punto de ebullicin mayor que el agua, sea menos denso que el
agua y seguro de utilizar. Durante la destilacin, el tolueno y el agua del material se evaporan y condensan
en conjunto, y los cidos grasos voltiles u otro material voltil permanece en la muestra, disueltos en el
solvente orgnico, lo que permite que no se sobreestime el contenido de humedad del material. Algunos
autores indican que la humedad remanente, cerca de 3 a 5%, son el equivalente de la prdida de cidos
grasos voltiles durante el secado convencional
15
. Para el procedimiento se indica lo siguiente:

PROCEDIMIENTO
- Conecte un baln de fondo redondo con capacidad de 250 ml y un destilador Leibig de 500 mm de
altura a un recibidor de humedad tipo Bidwell-Sterling con un recibidor de 5 ml de capacidad. Ver
figura 3.

15
Undersander, D., D.R. Mertens and N. Thiex. Forage Analyses Procedures. National Forage Testing Association, 2001.
www.foragetesting.org
x100
4
P
1
P -
3
P
C
0
135 A SECA MATERIA DE PORCENTAJE =
C 135 SECA A MATERIA DE % - 100 C 135 A HUMEDAD DE %
O O
=

15
- Destile una cantidad conocida de agua para determinar la exactitud de la
columna hasta 0.01 ml.
- Se limpia el tubo receptor y el condensador con una mezcla de cido
crmico, luego con suficiente agua, luego alcohol y finalmente lo seca al
horno para eliminar todo vestigio de agua.
- Pese suficiente cantidad de muestra que le permita extraer por lo menos
de dos a cinco mililitros de agua de la muestra. El peso debe ser exacto
con una exactitud de 0.0001 g.
- Introduzca la muestra en el baln y agregue suficiente tolueno grado
analtico hasta cubrir completamente la muestra.
- Llene el tubo recibidor con tolueno, agregndolo por la parte superior del
condensador.
- Caliente hasta el punto de ebullicin y destile lentamente,
aproximadamente dos gotas por segundo, hasta que toda el agua haya
sido extrada, y luego eleve la tasa de destilacin hasta cuatro gotas por
segundo.
- Cuando toda el agua haya sido aparentemente extrada, lo que puede
tomar cerca de una hora, lave el condensador adicionando tolueno desde
la parte superior y contine la destilacin para ver si se destila alguna
cantidad adicional de agua. Si ocurre, repite la operacin.
- Si permanecen algunas gotas de agua en el condensador, remuvalas
cepillando el interior del condensador con un cepillo saturado con tolueno,
lavando igualmente con tolueno.
- Deje que el contenido se enfre a temperatura ambiente. Fuerce cualquier
gota de agua hacia el recibidor utilizando un alambre de cobre cubierto con
una banda de hule al final
- Mide el volumen de agua con exactitud de 0.1 ml, y realice los clculos
para obtener el porcentaje de humedad.

El porcentaje de humedad se obtiene por diferencia.

E. MTODOS ADICIONALES PARA DETERMINAR HUMEDAD

A lo largo de los aos se han desarrollado nuevos mtodos para determinar el contenido de humedad de
los alimentos. El uso de cada uno de los mtodos depender del tipo de material y de las facilidades con
que se cuente en el laboratorio. Lo importante es mantener un procedimiento confiable y que sea
reproducible para poder obtener resultados exactos y precisos. Entre los mtodos aprobados por la AOAC
esta el Espectroscopia utilizando la reflexin de ondas del Infrarrojo cercano (NIRS)
16
. Otro mtodo
es el de Karl Fischer, en el cual el agua se extrae de la muestra con metanol y se titula con el reactivo de
Karl Fischer. El mtodo se basa en la siguiente reaccin:

2H
2
O + SO
2
+ I
2
H
2
SO
4
+ 2HI

Debido a que el HI es incoloro y el I
2
es de color rojizo, este cambio en coloracin permite determinar la
reaccin del agua con los reactivos. Para evitar la prdida de SO
2
y I
2
de la solucin, se le agrega piridina.

16
th
)x100
(g) Muestra la de Peso
(ml) agua de Volumen
1 ( SECA MATERIA DE PORCENTAJE =
Figura 3 Esquema del
sistema para
determinacin de
humedad por
destilacin con
tolueno.
SECA MATERIA DE % - 100 HUMEDAD DE % =

16
Se han propuesto mtodos donde se utilizan microondas. Este mtodo igualmente no es adecuado para
muestras que se desean analizar para fibra, lignina y anlisis insoluble de nitrgeno en fibra o para NIRS.
Para este caso se requiere que el microondas posea un mnimo de 600 watts, con bandeja giratoria
preferiblemente. Las muestras son colocadas una y otra vez por espacio de tres minutos,
aproximadamente, hasta que no se registre cambio de peso. Existen algunos microondas que tienen
integrado una balanza de manera que se pueda monitorear el cambio de peso de las muestras.

Existe el mtodo donde se coloca la muestra debajo de una lmpara infrarroja. En este caso, como la luz
puede penetrar el material, el agua al absorber la energa se evapora y el cambio de peso se registra
como prdida de humedad. No obstante, en este procedimiento se debe estandarizar hasta la distancia de
la lmpara a la muestra as como el tamao de la muestra para obtener resultados reproducibles. Es un
mtodo relativamente rpido, donde se puede tardar entre 10 a 25 minutos para determinar el contenido
de humedad.

Para el caso de muestras con alto contenido de humedad se utilizan hornos de conveccin de aire forzado
caliente pero con reduccin en la presin interna, por lo general debajo de 50 mm de Hg. Esto tiene la
ventaja de poder reducir la temperatura del aire hasta 70 C, minimizando reacciones indeseables entre
los componentes de los alimentos. Igualmente existe el procedimiento de Secado en congelamiento o
liofilizacin. En este procedimiento el agua se sublima en cmaras donde se controla la temperatura, un
condensador donde se atrapa el agua que se remueve del producto, un sistema de refrigeracin y un
sistema de vaco para reducir la presin dentro de la cmara. En el procedimiento es importante
inicialmente congelar el agua libre del producto, la manera lenta o rpida de congelamiento afecta el
tiempo inicial de secado. Luego al material se le reduce la presin en la cmara y se calienta para que el
agua se sublime. Esto se debe realizar lentamente para que no se pierda material por el movimiento del
vapor de agua, y si se calienta muy rpido el material puede fundirse o colapsar. Luego que el agua libre
se ha evaporado se eleva la temperatura para evaporar el agua ligada y se realiza a la mxima capacidad
de vaco del equipo.

Tambin hay sondas trmicas, hay sondas que utilizan la conductancia elctrica, y otras, de las cuales
algunas estn an en prueba y no han sido aprobadas oficialmente. No obstante, en algunas industrias las
utilizan por su versatilidad y rapidez.

F. DETERMINACIN DE HUMEDAD EN DOS PASOS

Este procedimiento es cuando se utiliza el presecado de la muestra, a temperaturas s 60 C, que se
denomina materia seca parcial, y luego se somete la muestra u otra porcin de la muestra a la extraccin
total de agua por otro mtodo, en particular los de horno de conveccin forzada con aire caliente a
temperaturas > 105 C durante periodos de mas de 16 horas o a 135 C por menos tiempo, por lo general
no mas de dos horas. En este caso, la cantidad total de humedad de la muestra bajo anlisis se obtiene
multiplicando el porcentaje de humedad obtenido durante el presecado por el contenido de humedad
obtenido en el segundo paso o secado total. Como ejemplo, utilizamos la materia seca parcial a 60 C y la
obtenida a 105 C.

El contenido de humedad se obtiene por diferencia:

SECA MATERIA DE TOTAL PORCENTAJE - 100 HUMEDAD DE PORCENTAJE =
C 105 SECA A MATERIA DE % x C 60 SECA A MATERIA DE % SECA MATERIA DE TOTAL %
O O
=

17
VII. DETERMINACIN DE CENIZAS

Los minerales que estn presentes en los alimentos, de muy diversas formas, constituyen la materia
denominada inorgnica, la cual se obtiene como residuo de la incineracin del material o cenizas. El
residuo de la incineracin puede variar de acuerdo con el grado de contaminacin de la muestra, una
muestra altamente contaminada con suelo u otro material mineral nos da como resultado un alto contenido
de cenizas. Dado que la cantidad de cenizas formar parte del total de la materia seca, una alteracin en
su porcentaje afectar la composicin estimada de los dems nutrimentos que conforman el alimento.

El procedimiento para determinar las cenizas requiere que el material se incinere a temperaturas entre los
500 y 600 C, temperatura a la cual algunos minerales se volatilizan, tales como el yodo y el selenio.
Igualmente se recomienda que no se utilice este procedimiento para materiales con alto contenido de
azcares o lquidos. Siga el siguiente procedimiento para la determinacin de cenizas:

PROCEDIMIENTO
- El crisol y la muestra seca utilizada para la determinacin de humedad a 105 o 135 C se coloca en
un incinerador fro, donde se ha preestablecido como temperatura mxima los 600 C.
- Si no se ha realizado la determinacin de humedad de la muestra y se har directamente la
determinacin de cenizas, realice lo siguiente:
Coloque un crisol de porcelana en un incinerador a 600 C por espacio de dos horas.
Retire el crisol del incinerador y djelo enfriar por aproximadamente 60 m en un desecador y
determine con exactitud su peso hasta 0.0001 g. P
1

Coloque el crisol en una balanza analtica y agregue aproximadamente 2 g de muestra con
exactitud de 0.0001 g. P
2

- Coloque el crisol con la muestra en el incinerador
17
, cierre la puerta y encienda el incinerador.
- Cuando la temperatura alcance los 600 C deje las muestras por espacio de dos horas.
- Apague el incinerador y deje que la temperatura descienda por debajo de los 200 C.
- Con mucho cuidado abra la puerta del incinerador para no crear corrientes de aire y remueva los
crisoles hacia un desecador, utilizando pinzas y guantes de asbesto, para que se enfren. Esto puede
durar cerca de una hora.
- Pese los crisoles mas las cenizas con exactitud hasta 0.0001 g y realice los clculos para obtener el
porcentaje de cenizas. P
3

Peso (gramos)
P
1
. Peso del crisol vaco
P
2
. Peso del crisol mas la muestra fresca o parcialmente seca
P
3
. Peso del crisol mas la cenizas
P
4
. Peso de la muestra fresca o parcialmente seca (P
2
P
1
)

Si la muestra no ha sido presecada, el clculo anterior nos brinda el Porcentaje de Cenizas Tal como
Ofrecido o en Base Fresca, para obtener el Porcentaje de cenizas en base seca cuando utilizamos una
muestra que ha sido presecada o parcialmente seca a 60 C, se debern realizar los correctivos para
ajustar el contenido y se debe realizar la siguiente operacin:

17
En algunos casos se recomienda precalentar e incinerar la muestra en una campana sobre una plancha caliente hasta que deje de
emanar humo y luego se transfiere al incinerador. Esto aumenta la manipulacin de la muestra y puede aumentar
el grado de error.
x100
P
P - P
CENIZAS DE PORCENTAJE
4
1 3
=
100 x
C
o
105 SECA A MATERIA DE %
SECA TE PARCIALMEN CENIZAS DE %
SECA BASE EN CENIZAS DE % =

18
VIII. DETERMINACIN DE NITRGENO

En muchas partes este anlisis es conocido como el de determinacin de protena cruda, debido a que
por convencin, el porcentaje de nitrgeno determinado en el anlisis se multiplica por el factor 6.25 para
obtener el porcentaje de protena cruda. Este factor esta relacionado con el hecho de que la protena, en
trminos generales, contiene un 16% de nitrgeno, por lo que el factor se obtiene de la relacin 100/16.Sin
embargo, es conocido que esto no es tan cierto, puesto que se conoce que el porcentaje de nitrgeno en
las protenas vara desde un 15.5 hasta un 18%, por lo que habra que aplicar un factor diferente para
cada tipo de protena. Como ejemplo tenemos que el complejo de protenas de la leche da 15.7% en
promedio, por lo que el factor debe ser 6.38, en cambio en la harina de trigo es de 17.5% por lo que el
factor debe ser 5.71
18
, para otros granos es 6.25, para arroz es 5.95,
19
y un valor de 3.44 para la cafena.

Adicionalmente, en el procedimiento conocido como Mtodo Kjeldhal
20
, todo el nitrgeno presente en la
muestra, exceptuando los nitratos y nitritos, se convierten en amonio que a su vez es liberado del medio
de reaccin en forma gaseosa y atrapado con un cido dbil para su titulacin. Esto implica que el
nitrgeno determinado de esta manera, y expresado como protena cruda, estara disponible para los
animales, sin embargo, los animales de estmago simple o monogstricos no pueden hacer un uso
eficiente de todas las formas de nitrgeno, y requieren especficamente de ciertos aminocidos presentes
en la protena verdadera, estos son los denominados aminocidos esenciales. Para el caso de los
animales de estmagos compuestos o rumiantes, esta determinacin se relaciona mucho mejor con la
capacidad que tienen estos animales de utilizar la gran diversidad de fuentes de nitrgeno gracias al
fenmeno de fermentacin ruminal que realizan las bacterias y otros organismos que habitan el retculo-
rumen. Entre los compuestos nitrogenados de tipo no proteico que se incluyen en esta determinacin
estn las amidas, sales de amonio y la urea, entre otros.

El mtodo de anlisis para la determinacin del nitrgeno involucra bsicamente tres pasos. El primero
implica la digestin de la muestra donde el nitrgeno de la materia orgnica se descompone por la accin
de una solucin concentrada de cido. Esto se logra por el calentamiento de la muestra en cido sulfrico,
obtenindose una solucin de sulfato de amonio. En el segundo paso ocurre la destilacin donde al
agregar un exceso de una base, el amonia inico se convierte en amonia gaseoso el cual se libera del
medio por ebullicin y el gas se condensa y atrapa en una solucin con un cido dbil. Finalmente, el
tercer paso implica la titulacin donde se cuantifica la cantidad de amonio presente en la solucin
resultante. En el caso de la titulacin esta la determinacin directa y la indirecta, en esta ltima se utiliza,
por lo general, cido brico. La serie de reacciones que toman lugar durante la determinacin de nitrgeno
en los alimentos son:

El equipo diseado para este anlisis ha variado en los ltimos aos, no obstante el mtodo convencional
utiliza los balones tipo Kjeldhal, hornillas para calentar durante la digestin y destilacin, el sistema de
condensacin y recoleccin de amonia y los erlenmeyer, llevndose a cabo el proceso de digestin y
destilacin bajo una cmara de gases.

18
Maynard, L.A., J.K. Loosli, H.F. Hintz y R.G. Warner. Nutricin Animal. 7. Ed. 4ta. En Espaol. McGraw-Hill.1998.
19
Labconco Corporation. Guide to Kjeldahl Nitrogen Determination Methods and Apparatus. 2-41-9/98-JCON-5M-R3. Kansas
City, Missouri. 1998
20
El cientfico dans Johan Kjeldahl introdujo este anlisis en 1883.
Cl NH BO H HCl BO )H (NH
(exceso) BO H BO )H (NH BO H NH
O 2H NH OH NH
SO Na OH 2NH 2NaOH SO ) (NH
OS SUBPRODUCT OTROS CO O H SO ) (NH SO H N CON ORGNICA MATERIA
4 3 3 3 2 4
3 3 3 2 4 3 3 3
2 3
Calor
4
4 2 4 4 2 4
2 2 4 2 4 4 2
+ +
+ +
+ |
+ +
+ + + +

19
En la Figura 4 se muestra un
sistema integrado para anlisis
de nitrgeno utilizando el mtodo
de Kjeldhal
21
. Como se observa
en la figura 4, en la parte inferior
estn los calentadores elctricos
(6) sobre los cuales se colocan
los balones con la muestra, el
H
2
SO
4
, la mezcla de
catalizadores y las perlas de
ebullicin u otra material utilizado
para evitar el sobrecalentamiento
y saltos durante la ebullicin de la
mezcla. Los balones se apoyan
inclinados sobre un sistema de
extraccin de gases (3, 5). Esta
parte constituye el complejo de
digestin de la muestra.

En la parte superior del sistema
se encuentra otra serie de
calentadores elctricos (6) sobre
los cuales se colocan los balones
con la muestra digerida. Estos
balones se unen al sistema de
condensacin (2), en cuyo
extremo posterior e inferior, tal
como se muestra en el esquema
sobre una plataforma (4) reposan
los erlenmeyer que contienen el cido brico con los indicadores que
recibirn el destilado con el amonia. En la parte superior de los balones
Kjeldhal se encuentran unos bulbos conectores (8) que permiten la
separacin de los gases que se condensaran y el lquido que se pueda
formar antes de la condensacin. En este esquema integrado se indica la
cabina o cmara (7) donde se encuentra el sistema, as como parte del
sistema de ventilacin y extraccin de gases (3, 4).

Tambin existe un procedimiento similar pero denominado MicroKjeldhal,
donde se utilizan menores cantidades de muestra, pero el procedimiento
implica los mismos pasos que cuando se utilizan mayores cantidades de
muestra. El uso de menores cantidades de muestra en el anlisis implica
que esta debe representar con bastante exactitud toda la cantidad de
alimento que se va a utilizar. Se indica que para este tipo de anlisis es
crtico el tamao y la uniformidad de la muestra que se va a analizar,
puesto que se puede alterar los resultados significativamente. En la
figura 5 se muestra el aparato utilizado para la destilacin con este
mtodo. Igualmente, para este proceso los balones de digestin son de

21
Adaptado de: Labconco Corporation. Guide to Kjeldahl Nitrogen Determination Methods and Apparatus. 2-41-9/98-JCON-5M-
R3. Kansas City, Missouri. 1998
Figura 4. Esquema de sistema integrado para anlisis de nitrgeno por el
mtodo de Kjeldhal.
1. Termostato o controlador de temperatura
2. Sistema de condensacin
3. Abanico del sistema de extraccin de gases
4. Plataforma para sostener erlenmeyer receptores de destilado
5. Sistema de extraccin de gases
6. Calentadores elctricos
7. Cmara externa del sistema
8. Bulbo conector separador de gases y lquidos

1
2
3
4
5
6
6
7
8
Figura 5. Sistema para
destilacin por mtodo
MicroKjeldhal.

20
menor capacidad, de aproximadamente 30 a
100 ml, capacidad menor a la de los utilizados
en el sistema macro.

Igualmente, se han diseado nuevos sistemas
para la digestin de la muestra. En estos
sistemas, en lugar de utilizar los balones
Kjeldhal se utilizan tubos que son colocados en
bloques que alcanzan altas temperaturas
permitiendo la descomposicin de la muestra
en el medio cido. Estos son denominados digestores
rpidos debido a que el tiempo de digestin vara entre
25 a 45 minutos dependiendo del tipo de muestra y el
tipo de catalizador. En la figura 6 se muestra uno de
estos sistemas. En la figura se aprecian los tubos
utilizados y algunos elementos adicionales del sistema
de control de calor.

Con este sistema se ha automatizado igualmente el
sistema de destilacin. En este sistema en un circuito
cerrado, donde se mantienen reservorios con las
soluciones, se agrega el agua, el NaOH, y se genera el
vapor para la destilacin, y se recoge el destilado en un
erlenmeyer, donde por ajuste gravimtrico, se suspende
la destilacin cuando se alcanza determinado volumen.
En la figura 7 se muestra uno de estos sistemas
automatizados donde la destilacin puede tomar de
cinco a diez minutos por muestra, solamente.

A continuacin se indican los reactivos que se utilizan
en el anlisis de nitrgeno por el mtodo Kjeldhal,
donde se utiliza el CuSO
4
como catalizador y el cido brico al 4% como solucin para atrapar el amonia
producto del proceso de digestin y destilacin.

REACTIVOS:
- cido Sulfrico: Se utiliza cido sulfrico concentrado con pureza de 96 a 98%, grado analtico, d =
1.84.
- Hidrxido de sodio al 40%: Disuelva lentamente cerca de 400 g de NaOH bajo en N en agua, deje
enfriar y diluya hasta completar un litro de solucin. Tambin puede utilizar una solucin de NaOH
con d > 1.36
- cido Brico al 4%: Disuelva cerca de 400 g de cido brico en agua destilada y adicionar 170 ml
de la mezcla de solucin indicadora y lleve todo hasta diez litros de solucin.
- Solucin indicadora: Disuelva 0.1 g de verde de bromocresol en 100 ml de etanol y 0.1 g de rojo de
metilo en 100 ml de etanol. Mezcle 70 ml de la solucin de rojo de metilo con 100 ml de la solucin
de verde de bromocresol. Esta mezcla final se agrega y a diez litros de cido brico.
Figura 6. Bloques para calentamiento de tubos utilizado para
la digestin de muestras para anlisis por el
mtodo Kjeldhal.
Figura 7. Destilador automatizado para el anlisis
Kjeldhal.

21
- cido Clorhdrico 0.1 N: Disuelva lentamente cerca de 86.0 ml de cido clorhdrico 36.5 a 38.0% en
un litro de agua, luego diluya todo hasta 10 litros de solucin. Estandarice esta solucin de la
siguiente manera:
Tome 40 ml de la solucin cida a estandarizar con una pipeta volumtrica de 40 ml y descrtela.
Esto es para lavar la pipeta.
Tome una alcuota de 40 ml de la solucin cida a estandarizar y transfirala a un erlenmeyer de
250 a 300 ml que ha sido lavado con agua libre de CO
2
. Haga esto en triplicado.
Lave una bureta con NaOH estandarizado con aproximadamente la misma concentracin del
cido que se va a estandarizar. Llene la bureta con la solucin de NaOH y espere, por lo menos
un minuto, hasta que repose el lquido de las paredes y tome la lectura inicial. Recuerde siempre
leer la bureta al nivel del ojo y en el borde inferior del menisco.
Utilice el indicador que se utilizara en el mtodo de Kjeldhal para titular en la solucin cida.
Agregue gota a gota la solucin de NaOH, siempre con agitacin.
Titule hasta el cambio de coloracin de rojo a naranja a amarillo.
Cuando ha logrado el punto final, remueva cualquier gota de la punta de la bureta y lave los lados
del erlenmeyer con agua libre de CO
2
y observe si la coloracin persiste. Si no persiste agregue
otra gota de NaOH y verifique el color.
Calcule la normalidad y ajuste con HCl o agua si fuese necesario. Mezcle y verifique la
estandarizacin segn lo indicado con anterioridad.
- Solucin de NaOH 0.1 N: Diluya cerca de 54 ml de una solucin 1:1 p/p de NaOH en agua destilada
libre de CO
2
para obtener 10 litros de solucin. Estandarice esta solucin de la siguiente manera:
Pese con la mayor exactitud cerca de 0.4 g de Ftalato cido de potasio seco y transfiralo a un
erlenmeyer de 300 ml.
Aada 50 ml de agua destilada libre de CO
2
y disuelva completamente.
Titule hasta pH 8.6 con la solucin a ser estandarizada utilizando ya sea electrodos de vidrio o
fenolftalena. Para el caso de utilizar fenolftalena, aada tres gotas a un recipiente que contenga
50 ml de solucin amortiguadora con pH 8.6 y tpela. Este recipiente se utilizara como referencia
del punto final para un pH de 8.6 en la titulacin.
Determine el volumen requerido para lograr el punto final en una solucin blanco que contenga 50
ml de agua libre de CO
2
y tres gotas de fenolftalena.
Reste el volumen necesario para titular el blanco del volumen utilizado para titular el Ftalato cido
de potasio y calcule la normalidad. Esta normalidad debe estar un poquito elevada.
Ajuste a la concentracin deseada, mezcle adecuadamente y verifique la estandarizacin de la
forma mencionada anteriormente.
- Catalizador: Se mezcla sulfato de potasio (K
2
SO
4
) y sulfato de cobre (CuSO
4
5H
2
O) en una relacin
de 9:1. Tambin se puede mezclar 15 g de K
2
SO
4
con 0.04 g de CuSO
4
anhidro. En el caso de que
se utilice TiO
2
como parte del catalizador, se mezclan 0.01 g de este reactivo con 16.7 g de K
2
SO
4
y
0.01 g de CuSO
4
anhidro.
2223
Esta mezcla permite elevar la temperatura de ebullicin del H
2
SO
4
, de
330 a 390 C aproximadamente, y acelerar la reaccin de descomposicin.
- Perlas de ebullicin
- Piedra pmez

Para verificar la normalidad de las soluciones de NaOH y del HCl se deben realizar las siguientes
operaciones:

22
th
23
En el mercado se pueden obtener mezclas de catalizadores en tabletas. Dependiendo de las indicaciones del vendedor se pueden
utilizar de una hasta tres tabletas por muestra.
erlenmeyer en HCl de ml
ada estandariz NaOH de Normalidad x ada estandariz NaOH de ml
HCl de Normalidad =
204.229 x NaOH de ml
1000 x O H KHC de g
NaOH de Normalidad
4 4 8
=

22
A continuacin el procedimiento que se debe seguir para la determinacin de nitrgeno utilizando cido
brico al 4% en la captura del amonia.

PROCEDIMIENTO
- En un papel filtro o encerado libre de Nitrgeno pese aproximadamente de 0.25 a 1.0 g de muestra
con exactitud de 0.0001 g.
24

- Coloque la muestra con el papel dentro del baln tipo Kjeldhal, evitando que se pierda algo de
muestra.
- Aada los catalizadores o la mezcla de ambos al baln. Se aade el equivalente de
aproximadamente 15.0 g de K
2
SO
4
con 0.04 g de CuSO
4
anhidro, u otra proporcin seleccionada.
- Aada con mucho cuidado 20 ml de H
2
SO
4
concentrado al baln y rote levemente el mismo para que
humedezca completamente el papel con la muestra.
25
.
- Coloque las perlas de ebullicin y piedra pmez. Esto es para evitar saltos bruscos del baln y
recalentamiento del mismo.
- Encienda el calentador de manera que la solucin entre en ebullicin en cinco minutos. Esta
temperatura es aquella que puede llevar 250 ml de H
2
O de 25 C a ebullicin en cinco minutos.
- Durante este periodo se observara un humo blanco dentro del baln, se pierde CO
2
, y la mezcla del
baln pasa de un color oscuro hasta quedar completamente clara o ligeramente verdosa, y se dejan
de emitir vapores.
- Contine calentando por espacio de 90 minutos, dndole giros ocasionales al baln. Se podr
observar la condensacin de H
2
SO
4
en el cuello del baln.
- Terminado el periodo, apague el calentador y deje enfriar los balones. Coloque los balones sobre
soportes adecuados y djelos enfriar un poco mas.
- An tibios, agregue lentamente al baln aproximadamente 250 ml de H
2
O tratando de lavar las
paredes, y deje enfriar a temperatura ambiente. Asegrese de que no se le han formado cristales en
el baln. Esto puede reducir la recuperacin de nitrgeno, as como provocar bolsones de cido que
reaccionan violentamente al agregarse el NaOH.
- Aada al baln lentamente, sin agitar, aproximadamente 20 ml de NaOH al 40%. No permita que se
caliente bruscamente la solucin.
- Coloque el baln sobre el calentador del sistema de destilacin y en el extremo opuesto del sistema
de condensacin coloque un erlenmeyer con aproximadamente 25 ml de la solucin de cido brico
e indicadores correspondientes, de manera que el extremo del tubo recolector quede inmerso en la
solucin.
- Gire el baln de manera que la solucin de NaOH se mezcle completamente con el contenido del
baln.
- Encienda el calentador y destile a una temperatura donde se logre el punto de ebullicin en
aproximadamente 7.5 minutos.
- Destile hasta haber recolectado cerca de 150 ml de destilado. Retire el erlenmeyer de manera que la
punta del tubo recolector quede fuera de la solucin pero no fuera del erlenmeyer. La solucin debe
haber cambiado de un color rojo a verde.
- Apague el calentador, y siga recogiendo destilado por cerca de un minuto adicional hasta que cese
completamente. Si no retira el tubo recolector de la solucin en el erlenmeyer, al enfriarse el
baln se dar un reflujo de solucin del erlenmeyer hacia el baln y se perder la muestra.
- Retire el erlenmeyer y titule el destilado con la solucin estandarizada de HCl y calcule el porcentaje
de Nitrgeno en la muestra. Durante la titulacin el color cambiara de color verde a un gris casi
transparente. Registre el volumen utilizado de cido.
- Se debe correr blancos en duplicado donde se coloca igual cantidad de reactivos, inclusive hasta un
trozo del papel utilizado para pesar las muestras. En algunos casos se recomienda utilizar como
muestra lisina hidroclrica como patrn para realizar ajustes en los clculos y verificar la confiabilidad
del proceso.

24
En algunos caso se recomienda utilizar de 0.3 a 0.7 g para alimentos, 0.2 a 0.5 para suplementos y 10 ml para orina.
25
Se recomienda aadir 1.0 ml adicional de H2SO4 por cada 0.1 g de grasa o cada 0.2 g de material si la muestra es mayor a 1.0 g.

23
- Al volumen utilizado para titular la muestra se resta el volumen utilizado en el blanco y calcule el
contenido porcentual de nitrgeno en la muestra.

Para el clculo de protena cruda se multiplica el contenido de nitrgeno por el factor 6.25 o en su defecto
el factor que mas se adecua al tipo de material analizado, segn se indic con anterioridad.

Para el clculo del contenido de nitrgeno o protena cruda en base seca se debe realizar el siguiente
ajuste:

En el caso de utilizar muestras que no han sido secadas parcialmente, solo se debe utilizar en lugar de %
de protena parcialmente seca el valor obtenido directamente en el anlisis y corregirlo por el contenido
de materia seca a 105 C.

(g) muestra la de Peso
HCl] de N x blanco) de HCl de ml - muestra de HCl de [(ml x 0.014
NITRGENO DE % =
6.25 x NITRGENO DE % CRUDA PROTENA DE % =
100 x
C
o
SECA TE PARCIALMEN PROTENA DE %
SECA BASE EN PROTENA DE % =

24
IX. DETERMINACIN DEL EXTRACTO ETREO

Al utilizar algn tipo de solvente orgnico se espera que los compuestos grasos o lpidos se disuelvan y
puedan ser removidos del material. No obstante, se conoce que otros compuestos, tales como ceras,
aceites voltiles, clorofila y pigmentos, que no aportan mucha energa a la nutricin de los animales,
tambin pueden ser extrados con este procedimiento, por lo que de acuerdo a la cantidad presente de
estos compuestos se puede sobreestimar el aporte energtico de la fraccin de lpidos del alimento
evaluado.

El mtodo para la determinacin de la fraccin de lpidos se basa en la evaporacin continua de un
solvente orgnico, en muchos casos ter etlico, que luego de condensarse pasa por la muestra
extrayendo los materiales solubles. El extracto se recoge en un recipiente y el ter se destila y recoge,
dejando como residuo el extracto etreo al cual se seca y se le determina el peso. Para el caso de algunas
muestras que poseen grandes cantidades de compuestos solubles en agua, tales como carbohidratos,
urea, cido lctico, glicerol entre otros, se recomienda extraer cinco veces 2 g de la muestra con 20 ml de
agua en un pequeo papel filtro y secarla, antes de la extraccin.
26
El mtodo anterior es conocido como
mtodo directo, mientras que en el mtodo indirecto el residuo se seca y se pesa, determinando el
porcentaje de extracto etreo como el peso perdido en la muestra.

El anlisis de extracto etreo, dado el tipo de solvente que se utiliza, debe ser realizado en cmara
extractora de gases y tener mucho cuidado con el uso de cualquier material o equipo que pueda provocar
una combustin de manera accidental. A continuacin se indican los pasos que se deben seguir para la
determinacin del extracto etreo por el mtodo directo en la muestra:

PROCEDIMIENTO
- Un vaso qumico, de aproximadamente 100 ml, diseado para el aparato Goldfisch que se muestra
en la figura 8, se coloca en un horno a 105C por espacio de dos horas como mnimo. Se deja enfriar
en un desecador y se obtiene su peso con exactitud de 0.0001 g. P
1

- En el vaso qumico se coloca de 30 a 40 ml del solvente orgnico que se va a utilizar. Se recomienda
no utilizar solventes cuyo punto de ebullicin exceda los 85 C.
- Para el caso del ter etlico este debe ser anhidro y libre de perxidos
27
o ter de petrleo.
28

- Se pesan cerca de 2.0 g de muestra con exactitud de 0.0001 g y se colocan en los dedales de
extraccin a base de celulosa. P
3

- Se puede colocar el dedal con la muestra en el horno a 105 C por dos horas o secar una porcin de
la muestra a esta temperatura previa al anlisis.
- Coloque el dedal con la muestra dentro del extractor del sistema Goldfisch.
- Conecte el vaso al sistema, y active el sistema de enfriamiento para la condensacin del ter, eleve y
encienda las hornillas. Las hornillas no necesariamente tienen que hacer contacto con el vaso
qumico.
- Si se establece una tasa de condensacin de cinco a seis gotas por segundo, el proceso puede
tomar cerca de cuatro horas. Durante este periodo verifique constantemente el volumen de ter y si
observa alguna disminucin significativa por escape puede aadir, con mucho cuidado, una porcin
adicional de ter al vaso qumico.
- Luego de las cuatro horas, retire el calentador y permita que se seque el dedal. Deje que se enfre.

26
th
27
Si no se posee ter anhidro, proceda de la siguiente manera:
Lave el ter con dos o tres porciones de agua, y aada NaOH o KOH slido.
Deje reposar hasta que la mayor cantidad de agua sea removida del ter.
Decante el ter a un envase totalmente seco y aada pequeas piezas de Na metlico y deje en reposo hasta que cese la
liberacin de hidrgeno. CUIDADO CON LA MANIPULACIN DEL SODIO METLICO.
Guarde el ter de esta forma en botellas con las tapas ligeramente cerradas.
28
Se recomienda ter de petrleo con punto inicial de ebullicin de 35 a 38 C, gravedad especfica a 15.5 C de 0.630 0.660,
residuo luego de evaporacin s 0.002% y > 95% destila a 54 C.

25
- Remueva la muestra con el dedal de celulosa y coloque el tubo de recoleccin de ter bajo el
condensador. Coloque nuevamente el vaso qumico y caliente nuevamente hasta que casi todo el
ter se haya evaporado del vaso y recogido en el tubo colector.
- Justo cuando todo el ter se ha casi evaporado, retire los calentadores y permita que se enfren los
vasos. Recoja el ter para un uso futuro.
- Complete la evaporacin del ter en la cmara extractora de gases a temperatura ambiente hasta
que no se sientan los vapores de ter.
- Una vez no se tengan residuos de ter en los vasos, coloque los vasos qumicos con los residuos del
extracto etreo en el horno de aire caliente de conveccin forzada a 105 C por 30 minutos, retrelos
y colquelos en un desecador. Djelos enfriar y obtenga el peso del vaso ms el residuo con una
2

- Estime el contenido de extracto etreo.
- Para el mtodo indirecto, coloque el dedal con la muestra a secar y determine la prdida de peso.

Peso (gramos)
P
1
. Peso del vaso qumico vaco
P
2
. Peso del vaso qumico mas el extracto etreo
P
3
. Peso de la muestra fresca o parcialmente seca

Para el clculo del contenido de extracto etreo en base seca se debe ajustar el valor obtenido con la
muestra parcialmente seca con el siguiente ajuste:

En la figura 8 se muestra un esquema del instrumento
utilizado para el anlisis de extracto etreo del tipo
Goldfisch. En la parte inferior se observan las hornillas o
calentadores que poseen los controles de temperatura,
as como un sistema que permite ajustarlos verticalmente
para ajustar el vaso que contiene el solvente utilizado
para la extraccin. En la parte superior se encuentra el
sistema de enfriamiento de agua, que luego del ajuste
del vaso permite la condensacin continua del solvente
que pasa a travs de la muestra para el proceso de
extraccin de los lpidos u otro compuesto soluble en el
solvente utilizado.

Figura 8. Instrumento para determinacin de
extracto etreo tipo Goldfisch.
Calentadores Vaso qumico
Sistema de condensacin
100 x
C
o
SECO TE PARCIALMEN ETREO EXTRACTO DE %
SECA BASE EN ETREO EXTRACTO DE % =
x100
P
P - P
ETREO EXTRACTO DE PORCENTAJE
3
1 2
=

26
X. DETERMINACIN DE FIBRA

Tal como se mencionara al inicio, la fibra ha sido uno de los componentes del tejido vegetal, en especial
de los forrajes, que ha causado gran controversia tanto en su definicin como en su determinacin. Para la
clasificacin de los forrajes se utiliza un nivel de 18% de fibra para separar los forrajes de los concentrados
o suplementos proteicos y los energticos. No obstante, se conoce que alimentos con valores superiores
de fibra, como el caso del ensilaje, son alimentos de alto valor energtico, donde la fibra no es una
limitante para su consumo y digestibilidad. Si se utiliza el mtodo de anlisis proximal o de Weende la
fraccin resultante identificada como fibra cruda no esta constituida de manera uniforme por compuestos
especficos, y se dan casos donde pueden retenerse o perderse compuestos que no son propiamente
parte de la fibra del alimento.

En trminos generales se consideraba que la fibra formaba la mayor parte del material indigerible de los
alimentos. Gran parte de esta fraccin pasaba a travs del tracto digestivo con muy pocas alteraciones
qumicas y su aporte a la nutricin del animal era mnimo o casi nulo. En muchos casos esto resultaba
cierto para animales de estmago simple. No obstante, para animales de estmago compuesto o
rumiantes, este principio no es valedero, puesto que las bacterias y otros organismos que estn presentes
en el retculo rumen de estos animales poseen enzimas capaces de degradar parte de los compuestos
que conforman la fibra, tales como la celulosa y la hemicelulosa. En algunos casos, de animales
herbvoros no rumiantes parte de la fibra puede ser digerida a nivel del ciego y colon, obtenindose alguna
utilidad de la misma.

Dada esta discrepancia se desarroll el mtodo de anlisis de fibra o de las paredes celulares de Van
Soest. En este mtodo, con el uso de soluciones detergentes, el forraje se divide en dos fracciones
principales, el contenido celular (CC) y la pared celular (PC). De acuerdo con los cientficos estas son
unidades uniformes, donde el contenido celular, indistintamente del tipo de animal, es totalmente digerible
y disponible para su digestin y absorcin. En cambio, la pared celular se puede dividir en fracciones
donde se pueden aislar e identificar de manera uniforme las fracciones digeribles y las indigeribles, tal
como la lignocelulosa. El Dr. Abe ha diseado un sistema de anlisis donde por mtodos enzimticos, se
separa la fraccin digerible (Oa) y la no digerible (Ob).

Para el caso de los humanos, la fraccin fibrosa de los alimentos, determinada por el mtodo de anlisis
proximal, conlleva otra serie de implicaciones, puesto que como tal, la fibra ayuda a la eliminacin de
ciertos compuestos y elementos nocivos para la salud humana, y a la vez estimula los movimientos
peristlticos facilitando el avance del material indigerible en la porcin inferior del sistema digestivo. De
esta manera, aunque no aporta beneficios nutritivos al organismo ayuda en la nutricin al eliminar
sustancias no deseables.

Un mtodo que ha sido aprobado por la AOAC y que ha tenido aceptacin en el anlisis de la fibra, una
vez se cuente con el equipo adecuado, es la determinacin utilizando la Espectroscopia utilizando la
reflexin de ondas del Infrarrojo cercano (NIRS)
29
. Con este mtodo, adems de poder determinar el
contenido de humedad de la muestra, se pueden determinar una serie de componentes de los alimentos.
Se ha considerado que para el caso de la fibra se obtienen valores con alta precisin y alta correlacin con
los mtodos de anlisis qumicos
30
. A continuacin se indicarn tres de los procedimientos que se utilizan
para la determinacin de la fibra y parte de sus componentes en los forrajes.

A. DETERMINACIN DE LA FIBRA CRUDA

Este anlisis corresponde al mtodo proximal o de Weende. Se basa en la digestin de la muestra en
soluciones cidas y bsicas, donde el peso perdido de la muestra luego de la incineracin del residuo se
considera la fibra cruda. Este mtodo tambin ha sufrido una serie de modificaciones con el tiempo, en
especial lo que respecta al instrumental utilizado. Muchos lo consideran muy inexacto por la manipulacin
de la muestra y adems su poca uniformidad en los resultados. La muestra ha utilizar debe ser una
muestra libre o con muy poco contenido de lpidos. Tal como se indic con anterioridad, el proceso trata de

29
th
30
Japan Livestock Technology Association. Technical Manual for Feed analysis. S. Tanabe, Ed., March, 2000.

27
simular el proceso digestivo de los forrajes en el tracto de los animales. En este procedimiento no deben
utilizarse muestras que han sido secadas en horno a temperatura > 60 C.

REACTIVOS:
- cido Sulfrico al 1.25%: Se utiliza una solucin de cido sulfrico 0.128 0.003 M. Esto se logra
disolviendo 1.25 g de H
2
SO
4
concentrado en 100 ml de agua. La concentracin debe verificarse por
titulacin.
- Hidrxido de sodio al 1.25%: Se utiliza una solucin de hidrxido de sodio 0.313 0.005 M. Esto se
logra disolviendo 1.25 g de NaOH en 100 ml de agua. Se debe verificar la concentracin por
titulacin.
- Alcohol: Se utiliza alcohol etlico al 95% grado reactivo, as como metanol o propanol.
- Solucin limpiadora
31
: Cuando se utilizan crisoles porosos para la filtracin es conveniente que
peridicamente sean sometidos a una limpieza, dado que partculas de la muestra pueden obstruir
parcialmente los poros. La solucin se prepara mezclando:
Solucin cida: Disolver volmenes iguales de cido clorhdrico concentrado y agua.
Solucin alcalina: Disolver 5 g de Na
2
H
2
EDTA, 50 g de Na
2
HPO
4
y 200 g de KOH en agua hasta
completar un litro.
Mantenga las soluciones en recipientes de boca ancha con capacidad para dos a tres litros donde
puedan sumergirse y mantener los crisoles.
- Agente antiespumante: Se puede utilizar alcohol amlico u otra solucin comercial con esta
propiedad.

PROCEDIMIENTO
- Se puede utilizar para este procedimiento la muestra proveniente de la determinacin del extracto
etreo, segn procedimiento detallado con anterioridad, o la muestra parcialmente seca.
- Coloque en el horno de conveccin forzada de aire caliente a 105 C por espacio de cuatro horas un
crisol de porcelana tipo Gooch con fondo poroso de 40 a 50 ml de capacidad
32
. Retire del horno y
deje enfriar en un desecador.
- En un sistema de filtracin por succin coloque un embudo tipo Bchner
33
con una malla de 200
mesh que selle completamente el rea de filtracin.
34

- Coloque en el vaso qumico tipo Berzelius con capacidad de 600 ml aproximadamente 2.0 g de
muestra pesada con exactitud de 0.0001 g. P
3

- Caliente la solucin de H
2
SO
4
al 1.25% hasta punto de ebullicin y transfiera, con la ayuda de
guantes de asbesto y mucho cuidado, 200 ml al vaso qumico Berzelius que contiene la muestra,
asegurndose que toda la muestra quede humedecido y no se adhiera a las paredes.
- Mantenga en punto de ebullicin aproximadamente un litro de agua destilada.
- Se puede aadir al vaso qumico una solucin antiespumante, como ejemplo una a dos gotas de
alcohol amlico o cualquier otro producto comercial con propiedades antiespumantes.
- Proceda a colocar el vaso sobre las hornillas, encienda el sistema de condensacin y enfriamiento
de agua, y encienda las hornillas. La temperatura debe ser ajustada de manera que se pueda llevar
desde 25 C hasta punto de ebullicin 200 ml de agua en 15 2 minutos. Luego mantenga la
temperatura de manera que se logre una ebullicin estable, pero leve sin formacin de mucha
espuma

31
Para el lavado de los crisoles, se sumergen inicialmente por espacio de > 5 minutos en la solucin alcalina, lavar con agua caliente,
a continuacin sumerja los crisoles en la solucin cida por espacio de > 5 minutos, lave con agua caliente y finalmente con
agua destilada caliente. Luego de haber utilizado los crisoles en tres a cuatro determinaciones, lvelos invertidos con agua
cerca del punto de ebullicin.
32
Una de las alternativas utilizadas para filtrar es utilizar paos de tela, tipo manta sucia. En este caso, luego de la filtracin con
ayuda de una esptula se raspa el material y se transfiere nuevamente al vaso qumico Berzelius para la segunda digestin
con la solucin de NaOH.
33
La AOAC ha propuesto el uso de un embudo tipo Bchner tipo California de plstico de dos piezas, al cual se le coloca una malla
de 200 mesh que selle totalmente el rea de filtracin.
34
Para el caso de materiales extremadamente finos se sugiere que se selle la malla utilizando una mezcla de 60 a 75 ml de HsSO4 al
1.25% con 1.5 g de fibra de cermica, la cual ha sido previamente mezclada con agua (mezcla de 60 g de fibra con 800 ml de
agua licuada por un minuto a baja revolucin)

28
- Para el caso de varias muestras, se recomienda colocar los vasos a intervalos de cinco minutos.
Permita que la solucin se mantenga en ebullicin durante 30 minutos. Peridicamente rote los
vasos de manera que la muestra no se adhiera a las paredes, y se mantenga en solucin. En caso
de que parte de la muestra se adhiera a las paredes, con una botella lavadora que contiene solucin
de H
2
SO
4
al 1.25 % caliente, lave con cuidado las paredes hasta que toda la muestra permanezca en
solucin.
- Cuando se esta terminando el periodo de reflujo, pase agua caliente por el embudo Bchner,
encienda el sistema de succin de manera que se alcance una presin de succin de 25 mm
aproximadamente.
- Retire el vaso de la hornilla, con cuidado utilizando guantes de asbesto, decante el lquido
sobrenadante sobre el embudo y lave el residuo del vaso utilizando el mnimo de agua caliente, con
ayuda de una botella lavadora. Filtre hasta que este seco, y luego proceda a lavar el residuo de
cuatro a cinco veces con aproximadamente 40 a 50 ml de agua caliente, cercana al punto de
ebullicin. Al adicionar el agua de lavado no aplique succin. Este proceso deber eliminar la
mayor cantidad de residuo cido de la muestra.
- Trasvase el residuo del filtro hacia el vaso qumico Berzelius utilizando solucin a punto de ebullicin
de NaOH al 1.25%. Luego de lavar el filtro, aada suficiente solucin de NaOH al 1.25% para
completar aproximadamente 200 ml. Coloque los vasos a intervalos de cinco minutos y proceda a
mantener la solucin en ebullicin por espacio de 30 minutos.
alcohol amlico o cualquier otro producto comercial con propiedades antiespumantes. Tambin se
pueden utilizar las denominadas perlas de ebullicin para evitar el sobrecalentamiento y ebullicin
brusca de la solucin.
- Peridicamente rote los vasos de manera que la muestra no se adhiera a las paredes, y se
mantenga en solucin. En caso de que parte de la muestra se adhiera a las paredes, con una botella
lavadora que contiene solucin de NaOH al 1.25 % caliente, lave con cuidado las paredes hasta que
toda la muestra permanezca en solucin.
- Cuando se esta terminando el periodo de reflujo, pase agua caliente por el crisol tipo Gooch,
encienda el sistema de succin de manera que se alcance una presin de succin de 25 mm
aproximadamente.
- Retire el vaso de la hornilla, con cuidado utilizando guantes de asbesto, decante el lquido
sobrenadante sobre el crisol tipo Gooch y lave el residuo del vaso utilizando el mnimo de agua
caliente, con ayuda de una botella lavadora.
- Eleve el nivel de vaco y proceda a lavar el residuo una sola vez con aproximadamente 25 a 30 ml de
la solucin de H
2
SO
4
al 1.25% cercana al punto de ebullicin, y posteriormente dos veces con
aproximadamente 25 a 30 ml de agua caliente, cercana al punto de ebullicin. Al adicionar el agua
de lavado no aplique succin. Filtre hasta sequedad. En algunos casos se recomienda lavar una
vez con alcohol y luego proceder a secar la muestra.
- Coloque el crisol con el residuo en un horno de conveccin forzada de aire caliente a una
temperatura de 110 C durante la noche. Luego de este periodo colquelos en un desecador para
enfriarlos y pese con exactitud de 0.0001 g. P
2

- Posteriormente coloque el crisol en un incinerador, cuya temperatura mxima sea de 550 C 10 C,
por espacio de dos horas. Al trmino de este periodo, deje enfriar el incinerador por debajo de los
250 C, coloque el crisol en un desecador para enfriarlo y posteriormente registre su peso con
1

- Se recomienda procesar al menos dos blancos por cada 24 muestras analizadas.
- Determine el contenido de fibra cruda.

Peso (gramos)
P
1
. Peso del crisol tipo Gooch mas cenizas
P
2
. Peso del crisol tipo Gooch mas residuo
P
3


29
Para el caso de ajuste por los anlisis de los blancos, reste la prdida promedio de peso (B) obtenida
luego del secado e incinerado de los crisoles con los blancos a la prdida de peso de la muestra analizada.

Para el clculo del contenido de fibra cruda en base seca se debe realizar el siguiente ajuste:

En la figura 9 se muestra el diagrama del instrumento utilizado, de manera general, para la determinacin
de fibra cruda. Se basa en el mismo
principio del instrumento utilizado para
el anlisis de extracto etreo, con la
diferencia que la muestra se
encuentra en constante contacto con
la solucin del detergente que se
encuentra en ebullicin. Este equipo
se utiliza igualmente para la
determinacin de la fibra neutro (FDN)
y detergente cido (FDA) del mtodo
de anlisis de fibra segn Van Soest,
as como para cualquier otro tipo de
determinacin en la que se requiera
mantener una solucin en ebullicin y
reflujo, minimizando la prdida de la
solucin. En la actualidad se han
ideado otros sistemas para la
digestin donde se minimiza la
manipulacin de la muestra. En un
esquema cerrado, luego de colocar la muestra, la adicin sucesiva de la solucin cida y la alcalina, as
como los lavados intermedios y finales con agua ocurren de manera automatizada.

B. DETERMINACIN DE LA FIBRA DETERGENTE NEUTRO (FDN) O CONSTITUYENTES DE LA
PARED CELULAR.

Segn el mtodo de anlisis de la fibra propuesto por Van Soest, el tratamiento del forraje o material
vegetal con una solucin neutro detergente, permite que todo el contenido celular del material se extraiga
y el residuo de la digestin lo constituya la pared celular. En este contexto, el residuo lo componen la
celulosa, la hemicelulosa, la lignina, as como otros compuestos que se encuentran ligados a la pared
celular, entre los que se incluye parte de los compuestos nitrogenados, que en algunos casos son
protenas y algunos minerales. La fraccin orgnica es conocida como fibra detergente neutro.

El procedimiento se puede utilizar en la mayora de los forrajes, no obstante, cuando la muestra tiene alto
contenido de almidn, tales como concentrados, ensilaje de maz y heces, se recomienda modificar el
proceso utilizando una amilasa para facilitar la filtracin durante el anlisis. El almidn puede quedarse
como parte del residuo por lo que se puede sobreestimar el contenido de fibra. A continuacin se indicarn
los reactivos y procedimientos para el mtodo simple y en el que utiliza amilasa. En este procedimiento
no deben utilizarse muestras que han sido secadas en horno a temperatura > 60 C.

x100
P
B ) P - (P
CRUDA FIBRA DE PORCENTAJE
3
1 2

=
100 x
C
o
SECA TE PARCIALMEN CRUDA FIBRA DE %
SECA BASE EN CRUDA FIBRA DE % =
Vaso qumico tipo Berzelius Hornillas elctricas
Sistema de enfriamiento de agua
Figura 9. Instrumento para determinacin de fibra cruda.

30
REACTIVOS:
- Solucin Detergente Neutro: Mezcle 540 g de sulfato sdico de lauril
35
, 335 g de EDTA disdico,
123 g de borato sdico (Na
2
B
4
O
7
10H
2
O) hasta un volumen de 10 litros de agua destilada.
Asegrese que todo se ha disuelto. En un litro de agua destilada disuelva 82 g de fosfato sdico
dibsico (Na
2
HPO
4
) y mezcle las soluciones. Luego aada a esta solucin 180 ml de ter monoetil
etilen glicol y lleve hasta un volumen final de 18 litros con agua destilada. El sulfato sdico de lauril
se precipita a bajas temperaturas por lo que la solucin debe calentarse con agitacin hasta que este
todo disuelto y totalmente transparente.
- Solucin de amilasa:
(a) Disuelva 2 g de la enzima en 90 ml de agua y filtre la solucin resultante a travs de un filtro
#541 y aada a la solucin 10 ml de ter monoetil etilen glicol. Guarde la solucin en refrigeracin
a 5 C. La enzima es obtenida del Bacillus subtilis, es de tipo III y con actividad ptima a pH 6.9
y 80 C.
(b) Prepare una solucin amortiguadora de cido fosfrico disolviendo 60.4 g de KH
2
PO
4
y 19.9 g
de Na
2
HPO
4
12H
2
O en agua destilada hasta cinco litros de solucin. Ajuste el pH a 5.8. Disuelva
1 mg de o-amilasa en 20 ml de solucin amortiguadora de cido fosfrico inmediatamente antes
de ser utilizada.
propiedad. Un agente conocido es Decalin o decahidronaftaleno.
36
: Cuando se utilizan crisoles porososos para la filtracin es conveniente que
2
H
2
EDTA, 50 g de Na
2
HPO
4
completar un litro.
- Acetona: Utilice acetona grado reactivo.
- Papel filtro #410

PROCEDIMIENTO
- Coloque en el horno de conveccin forzada de aire caliente a 105 C por espacio mayor de cuatro
horas un crisol de porcelana tipo Gooch con fondo poroso de 40 a 50 ml de capacidad. Retire del
horno, deje enfriar en un desecador y pese con exactitud de 0.0001 g. Esto es necesario si el residuo
ser utilizado para la determinacin de fibra cido detergente. Si solo es para fibra detergente neutro
se puede utilizar papel filtro #410 y un sistema de filtracin con embudos unidos a un sistema de
succin El papel filtro debe ser colocado igualmente en un horno a 105 C por espacio de cuatro
horas. Terminado el periodo de secado colquelo en un desecador para enfriarlo y pselo con
exactitud de 0.0001 g. Para este procedimiento se deber igualmente secar un crisol y pesarlo con
3

muestra pesada con exactitud de 0.0001 g. P
6

- Transfiera 100 ml de la solucin detergente neutro al vaso qumico Berzelius que contiene la
muestra, asegurndose que toda la muestra quede humedecida y no se adhiera a las paredes.

35
Se puede reemplazar por detergente Orvus. Utilice 100 ml de la solucin de Orvus por cada litro de solucin detergente neutro.
Para los 18 litros se deben utilizar 1800 ml de Orvus. Esta solucin debe calentarse hasta que este clara y luego la aade al
resto de la solucin. Al momento de utilizar la solucin detergente neutro se hace necesario mantenerla tibia para que todos los
ingredientes se mantengan en solucin. No utilice la solucin neutro detergente si esta turbia.
36

31
alcohol amlico o cualquier otro producto comercial con propiedades antiespumantes como el
Decalin.
de agua, y encienda las hornillas. La temperatura debe ser ajustada de manera que se pueda llegar
al punto de ebullicin rpidamente, esto es elevar de 25 C a ebullicin 100 ml de agua en 4 a 5
minutos. Luego mantenga la temperatura de manera que se logre una ebullicin estable, pero leve.
Esto debe permitir el movimiento significativo de las partculas en el vaso sin formacin de mucha
espuma.
Permita que la solucin se mantenga en ebullicin durante una hora. Peridicamente rote los vasos
de manera que la muestra no se adhiera a las paredes, y se mantenga en solucin. En caso de que
parte de la muestra se adhiera a las paredes o al bulbo de condensacin, con una botella lavadora
que contiene solucin neutro detergente, lave con cuidado hasta que toda la muestra permanezca en
solucin.
Con muestras con alto contenido de almidn, agregue inicialmente 50 ml de la solucin detergente
neutro al vaso con la muestra y lleve a ebullicin. Luego de 30 minutos, desde el comienzo de la
ebullicin, agregue otros 50 ml de la solucin detergente neutro y 2 ml de la solucin enzimtica
(a). Coloque nuevamente el vaso sobre la hornilla y lleve a ebullicin por espacio de 30 minutos
adicionales. No puede utilizar el sistema de papel de filtro en este procedimiento.
Una modificacin a este procedimiento implica lo siguiente: en un erlenmeyer con capacidad para
100 ml agregue 20 ml de agua junto con un gramo de muestra pesada con exactitud de 0.0001 g.
Caliente la mezcla de manera que el almidn se gelatinice, la cual debe completarse una vez la
solucin alcanza el punto de ebullicin. Luego de enfriar, aada los 20 ml de la solucin de o-
amilasa (b) y mantenga en agitacin por 16 horas a temperatura de 40 C. Finalizada la hidrlisis
filtre en papel N5 y lave completamente con agua destilada de tres a cuatro veces. Transfiera el
residuo al vaso qumico Berzelius utilizando el mnimo de solucin detergente neutro.
- Cuando se esta terminando el periodo de reflujo, pase agua caliente por el crisol o embudo con el
papel filtro, encienda el sistema de succin con una presin leve.
- Al trmino del tiempo de reflujo, lave toda la muestra que pueda estar adherida al bulbo de reflujo y
toda aquella que se encuentra en las paredes del vaso. Retire el vaso de la hornilla, con cuidado
utilizando guantes de asbesto, decante el lquido sobrenadante sobre el embudo y lave el residuo del
vaso utilizando el mnimo de agua caliente, con ayuda de una botella lavadora. Maximice la presin
de succin, y luego proceda a lavar el residuo de cuatro a cinco veces con aproximadamente 40 a 50
ml de agua caliente, cercana al punto de ebullicin, esto debe remover los residuos de la solucin
detergente neutro.
37

Si se dan problemas en la filtracin con las muestras de alto contenido de almidn, aada de uno
a dos mililitros adicionales de solucin enzimtica al residuo, as como 30 ml de agua caliente,
con temperatura aproximada de 80 C. Deje reposar por 10 a 15 minutos. Encienda la succin
nuevamente. Proceda a lavar con agua caliente dos a tres veces.
- Proceda a lavar tres o cuatro veces con acetona y filtre hasta a secar la muestra. Asegrese que en
la muestra no se sientan vapores de acetona.
- Coloque el crisol o el papel filtro con el residuo en un horno de conveccin forzada de aire caliente a
una temperatura de 105 C durante la noche. Luego de este periodo colquelos en un desecador
para enfriarlos y pese con exactitud de 0.0001 g. P
1

- Posteriormente coloque el crisol o el papel de filtro en un crisol de porcelana, en un incinerador cuya
temperatura mxima sea de 550 C 10 C, por espacio de dos horas.
38
Al trmino de este periodo,
deje enfriar el incinerador por debajo de los 250 C, coloque el crisol en un desecador para enfriarlo y
posteriormente registre su peso con exactitud de 0.0001 g. P
2

- Determine el contenido de fibra detergente neutro por la prdida de peso.

37
En algunos casos es recomendable cerrar el vaco y permitir que repose por tres a cinco minutos el agua caliente en el crisol, y con
ayuda de una varilla de vidrio agite y rompa la capa de material del fondo del crisol, y vuelva a aplicar succin.
38
Para el caso de utilizar papel de filtro se recomienda precalentar e incinerar la muestra en una campana sobre una plancha caliente
hasta que deje de emanar humo y luego se transfiere al incinerador. Esto aumenta la manipulacin de la muestra y puede
aumentar el grado de error.

32
- Se recomienda procesar al menos dos blancos por cada 24 muestras analizadas, en especial
cuando se utiliza el mtodo con la solucin enzimtica y con papel filtro.

Peso (gramos)
P
1
. Peso del crisol o papel filtro mas residuo
P
2
. Peso del crisol mas cenizas
P
3
Peso del crisol o papel solo.
P
4
Peso del residuo (P
1
P
3
)
P
5
Peso de las cenizas (P
2
P
3
)*
P
6
* Para el caso del procedimiento donde se utilizo papel filtro, el peso del crisol corresponde al peso del crisol utilizado para la
incineracin.

Para el caso de ajuste por los anlisis de los blancos, reste el promedio de peso (B) obtenido luego del
secado e incineracin de los crisoles con los blancos a los pesos de los residuos y cenizas de la muestra
analizada.

Para el clculo del contenido de fibra detergente neutro en base seca se debe realizar el siguiente ajuste:

de la fibra detergente neutro (FDN), como se observa es similar o es el mismo utilizado para la
determinacin de fibra cruda y fibra detergente cido (FDA) del mtodo de anlisis de fibra segn Van
Soest, as como para cualquier otro tipo de determinacin en la que se requiera mantener una solucin en
ebullicin y reflujo, minimizando la prdida de la solucin.

C. DETERMINACIN DE LA FIBRA DETERGENTE CIDO (FDA).

Por este procedimiento, la fraccin menos digerible de la pared celular, la cual esta compuesta
principalmente de celulosa, hemicelulosa, lignina, parte de las protenas ligadas a la pared celular y el
slice, se separa del contenido celular, que se estima es alta y completamente disponible a los animales.
Este procedimiento utiliza un detergente catinico en una solucin de H
2
SO
4
que disuelve o remueve los
carbohidratos lbiles, protena que no esta ligada por la reaccin de Maillard y lpidos. Se da una limitacin
en la accin de la solucin detergente cido cuando la muestra posee un contenido de lpidos superior al
5%, por lo que se recomienda la extraccin de l muestra cuando se excede este porcentaje. Este
procedimiento puede repetirse con mayor facilidad que el mtodo de fibra cruda, adems que asla una
fraccin que bsicamente es utilizada con poca eficiencia por los animales.

Con este procedimiento, casi toda la hemicelulosa es hidrolizada, aunque la fraccin cristalina de la
celulosa no lo es. Adicionalmente, la lignina, presente en esta fraccin, no es digerida, por lo que la
fraccin la constituye lo que se conoce como lignocelulosa. En esta fraccin queda retenida igualmente
protena ligada y slice. La protena ligada es aquella que en el caso de productos vegetales y de origen
animal se ha daado por efecto del calor al cual fue sometido el producto durante su procesamiento. De
esta manera la fraccin orgnica es identificada como la fibra detergente cido. Esta fraccin puede
posteriormente ser digerida para identificar el contenido de cada uno de sus componentes, a saber
celulosa, lignina y slice. En este procedimiento no deben utilizarse muestras que han sido secadas
en horno a temperatura > 60 C.

100 x
C
o
SECA TE PARCIALMEN FDN DE %
SECA BASE EN FDN DE % =
x100
P
) B - (P - ) B - (P
NEUTRO DETERGENTE FIBRA DE PORCENTAJE
6
cenizas
5
residuo
4
=

33
REACTIVOS:
- Solucin Detergente cido: Mezcle 504 ml de H
2
SO
4
39
en 10 litros de agua destilada y aada
posteriormente 360 g de bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB). Finalmente lleve la solucin hasta
18 litros.
propiedad. Un agente conocido es Decalin o decahidronaftaleno.
40
2
H
2
EDTA, 50 g de Na
2
HPO
4
completar un litro.
- Papel filtro #410 o #541
41

PROCEDIMIENTO
- Coloque en el horno de conveccin forzada de aire caliente a 105 C por espacio mayor de cuatro
horas un crisol de porcelana tipo Gooch con fondo poroso de 40 a 50 ml de capacidad.
42
Retire del
horno, deje enfriar en un desecador y registre su peso con exactitud de 0.0001 g. Se puede utilizar
papel filtro #410 o #541 y un sistema de filtracin con embudos unidos a un sistema de succin. El
papel filtro debe ser colocado igualmente en un horno a 105 C por espacio de cuatro horas.
Terminado el periodo de secado colquelo en un desecador para enfriarlo y pselo con exactitud de
0.0001 g. Para este procedimiento se deber igualmente secar un crisol y pesarlo con exactitud de
0.0001 g. P
3

muestra pesada con exactitud de 0.0001 g.
43
P
6

- Transfiera 100 ml de la solucin detergente cido al vaso qumico Berzelius que contiene la muestra,
asegurndose que toda la muestra quede humedecida y no se adhiera a las paredes.
alcohol amlico o cualquier otro producto comercial con propiedades antiespumantes como el
Decalin.
de agua, y encienda las hornillas. La temperatura debe ser ajustada de manera que se pueda llegar
al punto de ebullicin rpidamente, esto es elevar de 25 C a ebullicin 100 ml de agua en 4 a 5
minutos. Luego mantenga la temperatura de manera que se logre una ebullicin estable, pero leve.
Esto debe permitir el movimiento significativo de las partculas en el vaso sin formacin de mucha
espuma.
Permita que la solucin se mantenga en ebullicin durante una hora. Peridicamente rote los vasos
de manera que la muestra no se adhiera a las paredes, y se mantenga en solucin. En caso de que

39
H2SO4 con gravedad especfica 1.634 a 20 C o 12.0 M.
40
41
Papel filtro #541 debe ser utilizado si se desea determinar contenido de nitrgeno en la fibra detergente cido.
42
El crisol con filtro poroso se utiliza si se desea determinar el contenido de lignina en la fibra detergente cido.
43
Muestras con un contenido de lpidos > 5% deben ser procesadas con acetona, ter etlico o ter de petrleo. En este
procedimiento puede colocarse la muestra pesada con exactitud de 0.0001 g en el crisol de fondo poroso que ser utilizado
para la determinacin de fibra detergente cido. Agregue cuatro veces cerca de 30 a 40 ml de acetona, dejando reposar por
cerca de tres a cinco minutos cada vez y filtrando por succin. Seque al aire por 10 a 15 minutos y transfiera el residuo al vaso
qumico Berzelius para proceder al anlisis.

34
parte de la muestra se adhiera a las paredes o al bulbo de condensacin, con una botella lavadora
que contiene solucin cido detergente, lave con cuidado hasta que toda la muestra permanezca en
solucin.
- Cuando se esta terminando el periodo de reflujo, pase agua caliente por el embudo, encienda el
sistema de succin con una presin leve.
- Al trmino del tiempo de reflujo, lave toda la muestra que pueda estar adherida al bulbo de reflujo y
toda aquella que se encuentra en las paredes del vaso. Retire el vaso de la hornilla, con cuidado
utilizando guantes de asbesto, decante el lquido sobrenadante sobre el embudo y lave el residuo del
vaso utilizando agua caliente, con ayuda de una botella lavadora. Maximice la presin de succin, y
luego proceda a lavar el residuo de cuatro a cinco veces con aproximadamente 40 a 50 ml de agua
caliente, cercana al punto de ebullicin, esto debe remover los residuos de la solucin detergente
cido.
- Proceda a lavar tres o cuatro veces con 30 a 40 ml de acetona y filtre hasta a secar la muestra.
Durante los lavados con acetona deje reposar de tres a cinco minutos antes de aplicar la succin, en
los ltimos lavados el filtrado debe ser incoloro. Asegrese que en la muestra no se sientan vapores
de acetona luego del ltimo filtrado.
- Coloque el crisol o el papel filtro con el residuo en un horno de conveccin forzada de aire caliente a
una temperatura de 105 C durante la noche. Luego de este periodo colquelos en un desecador
para enfriarlos y pese con exactitud de 0.0001 g. P
1

- Determine el contenido de fibra detergente cido. Como alternativa se puede llevar el residuo a
incineracin y se estima el contenido de fibra detergente neutro por la prdida de peso como se
detalla a continuacin.
- Coloque el crisol o el papel de filtro en un crisol de porcelana, en un incinerador cuya temperatura
mxima sea de 550 C 10 C, por espacio de dos horas.
44
Al trmino de este periodo, deje enfriar
el incinerador por debajo de los 250 C, coloque el crisol en un desecador para enfriarlo y
2

- Determine el contenido de fibra detergente cido por la prdida de peso.
- Se recomienda procesar al menos dos blancos por cada 24 muestras analizadas, en especial
cuando se utiliza el mtodo con papel filtro.

Peso (gramos)
P
1
. Peso del crisol o papel filtro mas residuo
P
2
P
3
Peso del crisol o papel solo.
P
4
Peso del residuo (P
1
P
3
)
P
5
2
P
3
)*
P
6
incineracin.

secado e incineracin de los crisoles con los blancos a los pesos de los residuos y cenizas de la muestra
analizada.

Para el clculo del contenido de fibra detergente cido en base seca se debe realizar el siguiente ajuste:

44
x100
P
) B - (P - ) B - (P
CIDO DETERGENTE FIBRA DE PORCENTAJE
6
cenizas
5
residuo
4
=

35

de la fibra detergente cido (FDA), como se observa es similar o es el mismo utilizado para la
determinacin de fibra cruda y fibra detergente neutro (FDN) del mtodo de anlisis de fibra segn Van
Soest, as como para cualquier otro tipo de determinacin en la que se requiera mantener una solucin en
ebullicin y reflujo, minimizando la prdida de la solucin.

En este procedimiento se asume que, luego de la incineracin del residuo, las cenizas corresponden al
contenido de slice, por lo que se puede aplicar el siguiente procedimiento y ecuaciones para determinar el
contenido de slice de la muestra. Esta determinacin no se puede realizar si se desea obtener el
contenido de lignina de la muestra, puesto que, para este caso, el residuo del anlisis de la Fibra
Detergente cido se tratar posteriormente, con una solucin de H
2
SO
4
o KMnO
4
para eliminar la lignina,
quedando como residuo la celulosa.

Peso (gramos)
P
2
P
3
. Peso del crisol solo.
P
4
2
P
3
)*
P
6
Peso de la muestra fresca o parcialmente seca
incineracin.

secado e incineracin de los crisoles con los blancos a los pesos de las cenizas de la muestra analizada.

Para el clculo del contenido de slice en base seca se debe realizar el siguiente ajuste:

D. DETERMINACIN DE FIBRA POR ANLISIS ENZIMTICO
45

La utilizacin de enzimas ha sido propuesto como mtodo analtico para tratar de simular el tipo de
reaccin que ocurre en el tracto digestivo de los animales. Existen una diversidad de mtodos y enzimas
que han sido utilizadas para este propsito, no obstante, son muy pocos los anlisis que han logrado una
estandarizacin, no solo dentro de un laboratorio, sino entre distintos laboratorios. Es un mtodo complejo
que requiere de mucho cuidado en la manipulacin de las enzimas y la determinacin del grado de
actividad de la misma, si se desea lograr una buena exactitud y repetibilidad en el anlisis.

Como se mencionara anteriormente, recientemente se ha propuesto un mtodo enzimtico, que esta
siendo aceptado por diversos laboratorios y presenta cierto grado de facilidad y repetibilidad entre
muestras. En este procedimiento la muestra es sometida a una digestin enzimtica donde se separa el
contenido celular (CC) de la pared celular (PC). Adicionalmente, la fraccin determinada como pared

45
Adaptado de Japan Livestock Technology Association, Technical Manual for Feed Analysis. S. Tanabe, Ed., March, 2000.
100 x
C
o
SECA TE PARCIALMEN FDA DE %
SECA BASE EN FDA DE % =
x100
6
P
) cenizas B -
4
(P
SLICE DE PORCENTAJE =
100 x
C
o
SECA TE PARCIALMEN SLICE DE %
SECA BASE EN SLICE DE % =

36
celular se somete a una segunda digestin enzimtica donde se obtienen dos fracciones: fibra altamente
digerible (Oa) y la fibra de baja digestibilidad (Ob).

REACTIVOS:
- Solucin de o-amilasa en amortiguador de cido fosfrico: Prepare una solucin amortiguadora
de cido fosfrico disolviendo 60.4 g de KH
2
PO
4
y 19.9 g de Na
2
HPO
4
12H
2
O en agua destilada
hasta cinco litros de solucin. Ajuste el pH a 5.8. Disuelva 1 mg de o-amilasa en 20 ml de solucin
amortiguadora de cido fosfrico y finalmente aada 5 ml de la solucin de acetato de calcio por
cada litro de solucin inmediatamente antes de ser utilizada.
- Solucin de acetato de calcio: Disuelva 7.0 g de Ca(CH
3
COO)
2
3H
2
O en agua destilada hasta un
litro de solucin.
- Solucin de proteasa: Prepare una solucin amortiguadora de fosfato mezclando 9.0 g de KH
2
PO
4

y 95.4 g de Na
2
HPO
4
12H
2
O en agua destilada hasta cinco litros de solucin. Ajuste el pH a 7.4.
Aada posteriormente proteasa
46
en una relacin de 0.02% (peso/peso) a la solucin amortiguadora
que se le ha agregado solucin de acetato de calcio en una relacin de 5 ml por litro de solucin.
- Solucin de celulasa: Prepare una solucin amortiguadora de acetato disolviendo 12.9 g de
Ca(CH
3
COO)
2
3H
2
O en agua destilada a la cual se ha aadido con anterioridad 24.3 g de cido
actico (CH
3
COOH) y se lleva la solucin hasta cinco litros. Ajuste el pH a 4.0. Disuelva celulasa
47
a
razn de 1% peso por peso.
- Solucin de o-amilasa en amortiguador de acetato: Prepare una solucin amortiguadora de
acetato disolviendo 63.2 g de Ca(CH
3
COO)
2
3H
2
O en agua destilada a la cual se ha aadido con
anterioridad 2.1 g de cido actico (CH
3
COOH) y se lleva la solucin hasta cinco litros. Ajuste el pH a
5.8.
- Solucin de o-amilasa/celulasa: Disuelva 1 mg de o-amilasa y 8 mg de celulasa en 20 ml de la
solucin amortiguadora de acetato, aadiendo solucin de acetato de calcio a razn de 5 ml por litro
de solucin.
48
2
H
2
EDTA, 50 g de Na
2
HPO
4
completar un litro.
- Papel filtro N5A

PROCEDIMIENTO
1. Determinacin del contenido orgnico de la pared celular (OCW)
- Coloque 0.5 g de muestra con exactitud de 0.0001 g en un vial con capacidad de 50 ml con tapa
de rosca junto con 20 ml de agua destilada. P
7

- Caliente el vial junto con la mezcla en una hornilla de manera que se gelatinice el almidn
presente en la muestra. Esto se completa cuando la solucin llega al punto de ebullicin.
- Deje reposar y enfriar. Aada 20 ml de la solucin de o-amilasa en solucin amortiguadora de
fosfato. Cierre el vial y verifique que no se pueda derramar la solucin.
- Coloque el vial en agitacin a 40 C por espacio de 16 horas para que ocurra la hidrlisis del
almidn.

46
Proteasa conocida comercialmente como Actinasa E.
47
Celulasa conocida comercialmente como Celulasa P1500 para anlisis de alimentos.
48

37
- Luego de terminado el periodo, lave el contenido del vial con agua destilada en un vaso qumico
con capacidad para 300 ml y lleve el volumen hasta los 300 ml con agua destilada y deje reposar
por un periodo de > tres horas.
- Decante el filtrado sobre un embudo con papel filtro N5 y proceda a filtrar la solucin bajo
succin. Lave de tres a cuatro veces el residuo con agua destilada.
- Pase el residuo del papel filtro hacia el vial utilizado con anterioridad, lavando el papel filtro con el
mnimo de la solucin de proteasa, para lo que puede utilizar una botella lavadora. Llene el vial
con la solucin de proteasa. Cierre el vial y verifique que no se pueda derramar la solucin.
- Coloque el vial en agitacin a 40 C por espacio de 16 horas para que ocurra la digestin de la
protena.
- Decante el filtrado sobre un embudo con papel filtro N5, que ha sido previamente secado y
pesado con exactitud de 0.0001 g (P4), y proceda a filtrar la solucin bajo succin. Lave de tres a
cuatro veces el residuo con agua destilada. Finalmente lave con porciones de acetona por lo
menos tres veces y deje secar el residuo a temperatura ambiente.
- Cuando no se sientan vapores de acetona en la muestra, lleve el papel filtro a un horno de
conveccin de aire forzado a temperatura de 135 C por espacio de dos horas. Retire y deje
enfriar en un desecador por espacio de 30 minutos y pese con exactitud de 0.0001 g. P
3

- Coloque el papel de filtro en un crisol de porcelana, que ha sido previamente secado y pesado con
exactitud de 0.0001 g, (P
2
) en un incinerador cuya temperatura mxima sea de 600 C 10 C,
por espacio de dos horas.
49
Al trmino de este periodo, deje enfriar el incinerador por debajo de
los 250 C, coloque el crisol en un desecador para enfriarlo, por espacio de 60 minutos, y
posteriormente registre su peso con exactitud de 0.0001 g. Determine el contenido orgnico de la
pared celular (OCW) por la prdida de peso.

Peso (gramos)
P
1
P
2
P
3
. Peso del papel filtro ms residuo.
P
4
. Peso del papel filtro solo.
P
5
. Peso del residuo (P
3
P
4
).
P
6
1
P
2
)*
P
7

Para el clculo del contenido del contenido de pared celular orgnica en base seca se debe realizar el
siguiente ajuste:

Para la determinacin de la fraccin orgnica de baja digestibilidad identificada como Ob, se procede a
utilizar el residuo proveniente de la determinacin de la fraccin orgnica de la pared celular u OCW. Este
procedimiento se aplica a aquellas muestras donde el residuo de contenido de pared celular es de
aproximadamente 0.3 g. De esta manera, antes de que se proceda a lavar con acetona el residuo luego de
la digestin con la solucin de proteasa se procesa el residuo con la solucin de celulasa.

49
x100
P
) P - (P
(OCW) ORGNICA CELULAR PARED DE PORCENTAJE
7
6 5
=
100 x
C
o
SECA TE PARCIALMEN OCW DE %
SECA BASE EN (OCW) ORGNICA CELULAR PARED DE % =

38
PROCEDIMIENTO
2. Determinacin de la fraccin orgnica de baja digestibilidad de la pared celular (Ob).
- Si requiere determinar la fraccin Ob con una nueva muestra, calcule la cantidad de muestra a
utilizar mediante la siguiente relacin [0.3/(Peso del residuo/Peso de la muestra)]. Pese la
cantidad a utilizar con exactitud de 0.0001 g (P
7
). Si va a utilizar el residuo de la determinacin de
OCW, utilizando una botella lavadora que contenga la solucin de celulasa en amortiguador de
acetato, transfiera el residuo luego de la digestin con proteasa a un vial con capacidad de 50 ml
y con tapa de rosca.
50

- Llene el vial con la solucin de celulasa, cierre el vial y verifique que no se pueda derramar la
solucin.
- Coloque el vial en agitacin a 40 C por espacio de 16 horas para que ocurra la digestin de la
celulosa y hemicelulosa.
- Luego que terminado el periodo de digestin, coloque los viales sobre una hornilla y caliente la
solucin hasta una temperatura > 80 C, temperatura a la cual se inactiva la celulasa. No deje
que la solucin en el vial entre en ebullicin.
- Decante el filtrado sobre un embudo con papel filtro N5, que ha sido previamente secado y
pesado con exactitud de 0.0001 g (P
4
), y proceda a filtrar la solucin bajo succin. Lave de tres a
cuatro veces el residuo con agua destilada. Finalmente lave con porciones de acetona por lo
menos tres veces y deje secar el residuo a temperatura ambiente.
- Cuando no se sientan vapores de acetona en la muestra, lleve el papel filtro a un horno de
conveccin de aire forzado a temperatura de 135 C por espacio de dos horas. Retire y deje
enfriar en un desecador por espacio de 30 minutos y pese con exactitud de 0.0001 g. P
3

- Coloque el papel de filtro en un crisol de porcelana, que ha sido previamente secado y pesado con
exactitud de 0.0001 g (P
2
), en un incinerador cuya temperatura mxima sea de 600 C 10 C,
por espacio de dos horas.
51
Al trmino de este periodo, deje enfriar el incinerador por debajo de
los 250 C, coloque el crisol en un desecador para enfriarlo, por espacio de 60 minutos, y
1

- Determine el contenido orgnico de baja digestibilidad de la pared celular (Ob) por la prdida de
peso.
- Si se resta el valor de Ob del valor de OCW se obtiene el valor de la fraccin orgnica de la pared
celular de lata digestibilidad.

Peso (gramos)
P
1
P
2
P
3
. Peso del papel filtro ms residuo.
P
4
. Peso del papel filtro solo.
P
5
. Peso del residuo (P
3
P
4
).
P
6
1
P
2
)
P
7

Para el clculo del contenido de pared celular orgnica de baja digestibilidad en base seca se debe
realizar el siguiente ajuste:

50
Si requiere determinar la fraccin Ob con una nueva muestra, calcule la cantidad de muestra a utilizar mediante la siguiente
relacin 0.3/(Peso del residuo/Peso de la muestra). Pese la cantidad a utilizar con
51
x100
P
) P - (P
IDAD(Ob) DIGESTIBIL BAJA DE ORGNICA CELULAR PARED DE PORCENTAJE
7
6 5
=

39

Finalmente el contenido de pared celular orgnica de alta digestibilidad se obtiene de la siguiente manera:

Ob OCW IDAD(Oa) DIGESTIBIL ALTA DE ORGNICA CELULAR PARED DE PORCENTAJE =
100 x
C
o
SECA TE PARCIALMEN Ob DE %
SECA BASE EN (Ob) IDAD DIGESTIBIL BAJA DE ORGNICA CELULAR PARED DE % =

40
XI. DETERMINACIN DE LIGNINA

Luego de la determinacin de la fibra detergente cido, uno de los componentes de esta fraccin lo
constituye la lignina. La lignina se determina al disolver u oxidar el componente orgnico de la fraccin
detergente cido con una solucin de H
2
SO
4
al 72% por peso o una solucin de KMnO
4
. La accin del
cido o el permanganato es la disolucin de la lignina dejando como residuo lo que sera la celulosa. Se
calcula el contenido de lignina por la prdida de peso del material luego del tratamiento con cualquiera de
las soluciones antes mencionadas. Para el caso del permanganato de potasio, se utiliza adicionalmente
una solucin decolorante, que remueve los residuos de permanganato, tambin conocida como solucin
demineralizadora.

REACTIVOS:
1. Determinacin del contenido de lignina con H2SO4
- cido sulfrico al 72%: Utilice H
2
SO
4
grado reactivo de gravedad especfica 1.634 a 20 C o 12.0
M. Disuelva 1200 g de H
2
SO
4
en 440 ml de agua destilada en un baln volumtrico tratando de
mantener fra la solucin. Estandarice la solucin a 1634 g/l a 20 C removiendo la solucin y
adicionando o quitando agua o cido sulfrico segn se requiera.

2. Determinacin del contenido de lignina con KMnO
4

- Solucin saturada de Permanganato de potasio: Disuelva 50 g de KMnO
4
grado reactivo en un
litro de agua destilada. Mantenga esta solucin alejada de la luz solar. Es preferible almacenarla en
botella de color mbar o en una botella clara envuelta en papel de aluminio. Preferiblemente dentro
de un anaquel.
- Solucin amortiguadora para lignina: En 100 ml de agua destilada disuelva 6.0 g de
Fe(NO
3
)
3
9H
2
O y 0.15 g de AgNO
3
. Prepare 500 ml de cido actico glacial que contengan 5.0 g de
acetato de potasio. Finalmente, mezcla las dos soluciones anteriores y aada 400 ml de alcohol ter-
butlico. Mezcle completamente toda la solucin.
- Solucin demineralizadora: En 700 ml de alcohol etlico al 95% disuelva 50 g de cido oxlico.
Aada 50 ml de HCl 12 N y 250 ml de agua destilada. Mezcle completamente.
- Etanol al 80%: Utilice etanol grado reactivo y disuelva 80 ml de alcohol etlico al 95% con 200 ml de
agua destilada.
- Acetona

PROCEDIMIENTO
1. Determinacin del contenido de lignina con H
2
SO
4

- El residuo del crisol donde se determino la Fibra Detergente cido se utiliza para la determinacin
de lignina.
- Coloque el crisol dentro de una bandeja de vidrio o vaso qumico.
- Agregue suficiente solucin de H
2
SO
4
al 72% para cubrir el contenido del crisol. La solucin de
cido sulfrico debe estar a temperatura del laboratorio, cerca de 15 C.
- Agite con una varilla de vidrio el contenido y la solucin de manera que todo el material reaccione
con el cido y se rompan los grumos.
- Contine agregando la solucin de cido sulfrico hasta llenar la mitad del crisol y contine
revolviendo.
- Verifique constantemente el volumen de cido del crisol y agregue segn disminuya el volumen.
Realice esta operacin durante tres horas, agitando siempre con la misma varilla de vidrio.
Mantenga la reaccin entre los 20 a 23 C, puede enfriar si fuese necesario.
- Al finalizar las tres horas, filtre al vaco y lave el crisol con agua destilada caliente hasta que la
solucin filtrante no contenga residuos de cido. Pruebe con papel para prueba de pH.
- Lave las partes laterales del crisol y la varilla de vidrio.
- Coloque el crisol en un horno de aire caliente de conveccin forzada a 100 C por un tiempo
mnimo de 16 horas. Luego de este periodo coloque en un desecador para enfriar y registre el
peso con exactitud de 0.0001 g. P
3


41
- Coloque el crisol con el residuo en un incinerador cuya temperatura mxima sea de 500 C e
incinere el residuo por espacio de dos horas. Al trmino de este periodo, deje enfriar el incinerador
por debajo de los 250 C, coloque el crisol, an caliente, en un horno de aire caliente de
conveccin forzada a 100 C por una hora. Transfiera el crisol a un desecador para enfriarlo y
1

Peso (gramos)
P
1
P
2
. Peso del crisol solo
52
.
P
3
. Peso del residuo
53
.
P
4
1
P
2
)*
P
5
54

secado e incineracin de los crisoles con los blancos a los pesos de las cenizas de la muestra analizada.

Para el clculo del contenido de lignina en base seca se debe realizar el siguiente ajuste:

PROCEDIMIENTO
2. Determinacin del contenido de lignina con KMnO4
- Todo lo anterior debe realizarse en duplicado.
- El residuo del crisol donde se determino la Fibra Detergente cido se utiliza para la determinacin
de lignina.
- Coloque el crisol dentro de una bandeja de vidrio o vaso qumico que contenga en el fondo una
pequea lmina de agua destilada.
- Mezcle la solucin saturada de KMnO
4
y la solucin amortiguadora para lignina en una relacin de
volmenes de 2:1.
- Agregue 25 ml de la mezcla de KMnO
4
para cubrir el contenido del crisol.
- Agite con una varilla de vidrio el contenido y la solucin de manera que todo el material reaccione
y se rompan los grumos.
- Adicione agua a la bandeja o vaso de manera que se restrinja el flujo de solucin de KMnO
4
fuera
del crisol. Contine revolviendo.
- Verifique constantemente el volumen de solucin en el crisol y agregue segn disminuya el
volumen. La solucin debe permanecer de color prpura durante todo el periodo. Realice esta
operacin durante aproximadamente 90 minutos, agitando siempre con la misma varilla de vidrio.
- Al finalizar los 90 minutos, filtre al vaco. No lave el crisol.
- Coloque nuevamente el crisol en la bandeja o vaso limpio y agregue la solucin demineralizadora
hasta la mitad de la capacidad del crisol. Deje reposar por 15 minutos. Filtre al vaco.
- Aada nuevamente suficiente solucin demineralizadora para llenar la mitad del crisol, lave las
paredes del crisol con solucin demineralizadora con ayuda de una botella lavadora si fuera

52
Es el mismo peso del crisol utilizado para la determinacin de Fibra Detergente cido
53
Es el mismo peso del residuo resultante en la determinacin de Fibra Detergente cido
54
Es el mismo peso de la muestra utilizada para la determinacin de Fibra Detergente cido
x100
5
P
) cenizas B -
4
(P -
3
P
LIGNINA DE PORCENTAJE =
100 x
C
o
SECA TE PARCIALMEN LIGNINA DE %
SECA BASE EN LIGNINA DE % =

42
necesario. Deje reposar por espacio de 20 a 30 minutos durante los cuales el residuo dentro del
crisol debe estar de color blanco.
55

- Filtre al vaco y lave tres veces el contenido con alcohol etlico al 80%. Lave las partes laterales del
crisol y la varilla de vidrio, y finalmente lave dos veces con acetona.
- Cuando no se sientan vapores de acetona en la muestra, lleve el crisol a un horno de conveccin
de aire forzado a temperatura de 100 C por espacio de 16 horas. Retire y deje enfriar en un
desecador por espacio de 30 minutos y pese con exactitud de 0.0001 g. P
1

Peso (gramos)
P
1
. Peso del crisol mas residuo de celulosa
P
2
Peso del crisol vaco
56

P
3
Peso del residuo o celulosa (P
1
P
2
)
P
4
. Peso del residuo de Fibra Detergente cido
57
.
P
5
58

Para el clculo del contenido de lignina en base seca se debe realizar el siguiente ajuste:

55
Para el caso de que el residuo este un tanto amarillo repita la operacin de decoloracin. Esto es comn con muestras que poseen
ms de 35% de lignina en la Fibra Detergente cido.
56
Es el mismo peso del crisol utilizado en la determinacin de Fibra Detergente cido
57
Es el mismo peso del residuo resultante en la determinacin de Fibra Detergente cido
58
Es el mismo peso de la muestra utilizada para la determinacin de Fibra Detergente cido
100 x
C
o
SECA TE PARCIALMEN LIGNINA DE %
SECA BASE EN LIGNINA DE % =
x100
5
P
3
P -
4
P
LIGNINA DE PORCENTAJE =

43
XII. DETERMINACIN DE MINERALES

Los animales requieren consumir una serie de elementos minerales para el adecuado funcionamiento
metablico. Los componentes minerales que se encuentran en los alimentos estn distribuidos en el tejido
en diferentes formas, ya sea en forma inica, formando sales y otros compuestos, as como formando
parte estructural de compuestos orgnicos. De acuerdo a la cantidad relativa de las necesidades de los
minerales, estos se dividen en macro y microminerales. Entre estos ltimos, gracias a los avances
tecnolgicos, principalmente su sensibilidad, se ha encontrado la presencia de ellos en los tejidos
animales, pero de algunos no se conoce an su rol en el metabolismo.

En un principio, los mtodos para la determinacin cuantitativa de minerales especficos, se basaba en la
digestin y/o incineracin de la muestra, para luego aplicar alguna tcnica analtica entre las cuales
tenemos las gravimtricas y por titulacin. Posteriormente, con el avance del uso de los
espectrofotmetros se desarrollaron tcnicas colorimtricas, donde se conoce la longitud de onda donde el
mineral puro o un compuesto determinado que contiene el mineral en estudio presentan su mayor
absorcin. El nivel o grado de absorcin se compara con una serie de patrones o estndares y se
determina la cantidad de mineral presente en la muestra. Estos mtodos son todava aceptables para la
determinacin de elementos que se encuentran presentes en grandes cantidades en la muestra.

La fotometra de llama, mas propiamente denominada espectrometra de emisin atmica de llama, es un
mtodo analtico rpido, simple y sensitivo para la determinacin de iones de elementos trazas en solucin.
Debido a sus muy angostas y caractersticas lneas de emisin de la fase gaseosa atmica en la llama de
plasma, el mtodo est relativamente libre de interferencias de otros elementos. La precisin y exactitud
tpica del anlisis de soluciones acuosas diluidas estn cerca de 1-5% relativamente.

El mtodo es adecuado para muchos elementos metlicos, especialmente para aquellos metales que son
fcilmente excitados a mayores niveles de energa a temperaturas de la llama: Na, K, Ca, Rb, Cs, Cu, Ba.
Los no-metales, generalmente no producen tomos neutrales aislados en una llama, por lo que para ellos
no es adecuada la determinacin por espectroscopia de emisin de llama.

La fotometra de llama es un mtodo emprico de anlisis, esto es que se debe calibrar el mtodo
cuidadosamente. Muchas diferentes variables experimentales afectan la intensidad de la luz emitida por la
llama. Por consiguiente, calibraciones frecuentes y cuidadosas son necesarias para buenos resultados.

Uno de los instrumentos utilizados para estos anlisis es Coleman Flame Photometer, Model 21, con un
quemador de consumo total que utiliza gas natural y oxgeno. El aislamiento de la longitud de onda se
realiza por el uso de un simple filtro de interferencia. La luz de la llama se concentra hacia el final del cable
de fibra ptica (tubo de luz) el cual transmite la luz hacia un fotodiodo en una pequea caja electrnica
en el fotmetro de llama. La electrnica all convierte la salida del diodo en una emisin digital.

CUIDADO. Aunque la llama es bastante pequea, tiene tan elevada temperatura que el contacto de la piel
con an el borde externo de la llama producira instantneamente una quemadura de tercer grado.
Exceptuando por el encendido de la llama, las manos deben mantenerse completamente fuera de la
cmara durante el tiempo que la llama est ardiendo, an si se ha disminuido su intensidad bastante entre
los anlisis.

El principio se basa en que cualquier substancia cuando se expone a una suficiente alta temperatura ser
forzada a un estado excitado por colisin trmica. Debido a que estos estados son inestables, los tomos
excitados o molculas regresaran a su estado basal, disipando la energa absorbida de varias formas, una
de ellas es la emisin de luz. Cada tomo o molcula tiene asociada a s mismo una seria de niveles
discretos de energa. En el estado separado atomizado, por consiguiente, los tomos excitados emitirn
un caracterstico juego de longitudes de onda denominados espectros. La intensidad de la luz as emitida
es directamente proporcional al nmero de tomos que han sufrido dicha transicin. De esta manera,
monitoreando selectivamente una longitud de onda caracterstica de un elemento volatilizado y excitado en
una llama, se puede medir la concentracin de dicho elemento directamente.


44
Los metales alcalinos del Grupo 1 de la Tabla Peridica tienen niveles bajos de energa de excitacin y por
tal motivo son bien adecuados para anlisis por emisin de llama. Sodio y Potasio ambos pueden ser
analizados por fotometra de llama en menor tiempo, a bajas concentraciones y con gran precisin y
exactitud que por cualquier otra tcnica. Cambios al azar en la temperatura de la llama o tasas de
aspiracin y varias interferencias qumicas pueden causar fluctuaciones en la seal de emisin, dando una
respuesta bastante inestable. Para compensar por esta inherente inestabilidad en la salida, el Litium se
aade en una cantidad constante tanto en muestras como estndares como un estndar interno La
electrnica compara la seal de las concentraciones variables de Sodio y Potasio en la muestra contra la
seal de la concentracin constante y muestra la razn de estas dos cantidades directamente en unidades
de concentracin del elemento analizado. Fluctuaciones al azar en la llama pueden pues afectar tanto los
estndares internos y al Sodio y Potasio igualmente, la razn permanece sin afectacin, y se puede
obtener una lectura exacta y estable.

Posteriormente el desarrollo de nuevos equipos como el espectrofotmetro de absorcin atmica se
pueden medir pequeas diferencias en concentraciones, as como determinar concentraciones de
elementos trazas. Este equipo permite analizar el contenido de determinado elemento en una sustancia
midiendo el nivel de absorcin de longitudes de onda especficas al analizar la llama que se produce al
quemar la sustancia a altas temperaturas donde alcanza su disociacin atmica. El nivel de energa
absorbida se relaciona con la cantidad del elemento presente. Otro mtodo utiliza el horno de grafito para
muestras en estado slido.

Dado que algunos de estos equipos son costosos, muchos de los mtodos gravimtricos, por titulacin y
colorimtricos son utilizados en algunos laboratorios en forma rutinaria. La precisin y exactitud de estos
mtodos depende del cuidado que se tenga en el procedimiento, en especial la contaminacin durante el
mismo. En muchos casos, el contenido de minerales de una muestra obtenida en campo, tales como heno,
pastos de corte, entre otros, contienen minerales provenientes de la contaminacin por el contacto con el
suelo, por lo que el contenido de minerales se eleva. Otra fuente de contaminacin puede ser el
instrumento con el cual se obtuvo la muestra, por lo que se recomienda el uso de instrumentos de acero
inoxidable.

A. DETERMINACIN DE CALCIO

Entre los elementos que revisten cierta importancia en la nutricin animal se encuentra el calcio, que gran
parte del mismo se encuentra como constituyente de los huesos y dientes. No obstante, el calcio posee
otras funciones en el metabolismo y fisiologa animal Los mtodos pueden ajustarse si la medicin se
desea realizar en una mezcla mineral o en un alimento. En este procedimiento el calcio presente en la
muestra es forzado a formar un precipitado de oxalato de calcio por la adicin de una solucin saturada de
oxalato de amonio a la solucin de las cenizas del material evaluado. Este precipitado se lava
completamente con hidrxido de amonio para eliminar el exceso de oxalato de amonio. Por la accin del
cido sulfrico, el oxalato de calcio forma cido oxlico y sulfato de calcio. El cido oxlico es determinado
utilizando una solucin estandarizada de KMnO
4
.

Las reacciones involucradas en el proceso para la determinacin del contenido de calcio de la muestra son
las siguientes:

REACTIVOS:
1. Determinacin de calcio en mezcla mineral
- cido Clorhdrico 3 N: Diluya cido clorhdrico concentrado 12 N en una relacin 1:3 en agua
destilada. Esto es 250 ml de HCl concentrado y llevar hasta un litro de solucin. Concentracin
aproximada 3 N.
- cido ntrico concentrado: Utilice cido ntrico concentrado 15.9 N grado reactivo.
- cido sulfrico concentrado: Utilice cido sulfrico concentrado 36.0 N grado reactivo.
- Solucin de rojo de metilo (indicador)
O 8H 10CO SO K 2MnSO 2KMnO O C 5H SO 3H
O C H CaSO SO H O CaC
2 2 4 2 4 4 4 2 2 4 2
4 2 2 4 4 2 4 2
+ + + + +
+ +

45
- Hidrxido de amonio:
Solucin de hidrxido de amonio 7.25 N: Diluya hidrxido de amonio concentrado (14.5 N) en
una relacin 1:1 en agua destilada.
Solucin de hidrxido de amonio 0.3 N: Diluya hidrxido de amonio concentrado (14.5 N) en
una relacin 1:50 en agua destilada.
- Solucin saturada de oxalato de amonio: Prepare una solucin al 4.2% de oxalato de amonio
utilizando agua destilada.
- Permanganato de potasio 0.1 N: Diluya 3.16 g de KMnO
4
, grado reactivo, en un litro de agua
destilada. Mantenga esta solucin alejada de la luz solar. Es preferible almacenarla en botella de
color mbar o en una botella clara envuelta en papel de aluminio. Preferiblemente dentro de un
anaquel.
2. Determinacin de calcio en forrajes
- Permanganato de potasio 0.05 N: Diluya 1.58 g de KMnO4, grado reactivo, en un litro de agua
destilada. Mantenga esta solucin alejada de la luz solar. Es preferible almacenarla en botella de
color mbar o en una botella clara envuelta en papel de aluminio. Preferiblemente dentro de un
anaquel.

PROCEDIMIENTO
1. Determinacin de calcio en mezcla mineral
- Coloque un crisol de porcelana en un incinerador a 600 C por espacio de dos horas.
- Retire el crisol del incinerador y djelo enfriar por aproximadamente 60 m en un desecador.
- Coloque el crisol en una balanza analtica y agregue aproximadamente 2 g de muestra, finamente
molida, con exactitud de 0.0001 g (P
1
) o puede utilizar el residuo de la determinacin de cenizas
- Coloque el crisol con la muestra en el incinerador, cierre la puerta y encienda el incinerador.
crisoles hacia un desecador, utilizando pinzas y guantes de asbesto, para que se enfren. Esto
puede durar cerca de una hora.
- Aada al crisol 40 ml de HCl (1:3) y unas gotas de HNO
3
concentrado.
- Coloque el crisol en una plancha caliente y lleve hasta punto de ebullicin debajo de una campana
extractora de gases.
- Transfiera la solucin a un frasco volumtrico de 250 ml, deje enfriar y lleve hasta la marca de 250
ml con agua destilada. Tape el volumtrico y mezcle completamente.
- Deje reposar y transfiera una alcuota de 25 ml de la solucin a un vaso qumico y agregue 75 ml
de agua destilada. Aada dos gotas de rojo de metilo.
- Aada, gota a gota, solucin de NH
4
OH 7.5 N hasta lograr un pH de 5.6 o hasta que la coloracin
de la solucin sea chocolate-anaranjada. Si se pasa del color, agregue unas gotas de HCl 7.5 N
para corregir y volver al color naranja. Finalmente, al llegar al color deseado, aada dos gotas
adicionales de HCl 7.5 N. La coloracin debe cambiar a rosado, no naranja, y el pH debe estar
entre 2.5 a 3.0.
- Diluya hasta 150 ml con agua destilada.
- Lleve la solucin a punto de ebullicin sobre una hornilla y aada lentamente 10 ml de solucin
saturada caliente de oxalato de amonio. El color puede cambiar a anaranjado o amarillo, si este
fuera el caso, aada unas gotas de la solucin de HCl 3 N hasta que la solucin vuelva a tomar el
color rosado.
- Deje reposar toda la noche para que se asiente el precipitado.
- Filtre el sobrenadante en papel filtro o en un crisol tipo Gooch, y lave varias veces el precipitado
con la solucin de NH
4
OH 0.3 N.
- Coloque el papel filtro o crisol en el mismo vaso qumico donde se obtuvo el precipitado y aada
125 ml de agua destilada y 5 ml de cido sulfrico. Asegurarse de haber disuelto todo el
precipitado.

46
- Caliente la solucin hasta los 70 C y titule con la solucin de KMnO
4
0.1 N hasta que el color de la
solucin cambie levemente a rosado. La temperatura de la solucin no debe bajar de 60 C.
59

- Corrija el volumen utilizado con lo consumido por los blancos.
- Calcule el porcentaje de calcio.

2. Determinacin de calcio en forrajes
- Coloque el crisol en una balanza analtica y agregue aproximadamente 2.5 g de muestra,
finamente molida, con exactitud de 0.0001 g (P
1
) o puede utilizar el residuo de la determinacin de
cenizas
60

crisoles hacia un desecador, utilizando pinzas y guantes de asbesto, para que se enfren. Esto
puede durar cerca de una hora.
- Aada al crisol 40 ml de HCl (1:3) y unas gotas de HNO
3
concentrado.
- Transfiera la solucin a un frasco volumtrico de 250 ml, deje enfriar y lleve hasta la marca de 250
ml con agua destilada. Tape el volumtrico y mezcle completamente.
- Deje reposar y transfiera una alcuota de 25 ml de la solucin a un vaso qumico y agregue 75 ml
de agua destilada. Aada dos gotas de rojo de metilo.
61

- Aada, gota a gota, solucin de NH
4
OH 7.5 N hasta lograr un pH de 5.6 o hasta que la coloracin
de la solucin sea chocolate-anaranjada. Si se pasa del color, agregue unas gotas de HCl 7.5 N
para corregir y volver al color naranja. Finalmente, al llegar al color deseado, aada dos gotas
adicionales de HCl 7.5 N. La coloracin debe cambiar a rosado, no naranja, y el pH debe estar
entre 2.5 a 3.0.
- Diluya hasta 150 ml con agua destilada.
- Lleve la solucin a punto de ebullicin sobre una hornilla y aada lentamente 10 ml de solucin
saturada caliente de oxalato de amonio. El color puede cambiar a anaranjado o amarillo, si este
fuera el caso, aada unas gotas de la solucin de HCl 3 N hasta que la solucin vuelva a tomar el
color rosado.
- Deje reposar toda la noche para que se asiente el precipitado.
- Filtre el sobrenadante en papel filtro o en un crisol tipo Gooch, y lave varias veces el precipitado
con la solucin de NH
4
OH 0.3 N.
- Coloque el papel filtro o crisol en el mismo vaso qumico donde se obtuvo el precipitado y aada
125 ml de agua destilada y 5 ml de cido sulfrico. Asegurarse de haber disuelto todo el
precipitado.
- Caliente la solucin hasta los 70 C y titule con la solucin de KMnO
4
0.05 N hasta que el color de
la solucin cambie levemente a rosado. La temperatura de la solucin no debe bajar de 60 C.
6263

- Corrija el volumen utilizado con lo consumido por los blancos.
- Calcule el porcentaje de calcio.

59
Cuando utiliza papel filtro, este puede causar la prdida de color en pocos segundos.
60
En algunos casos se recomienda precalentar e incinerar la muestra en una campana sobre una plancha caliente hasta que deje de
emanar humo y luego se transfiere al incinerador. Esto aumenta la manipulacin de la muestra y puede aumentar el grado de
error.
61
Se recomienda utilizar una alcuota de 100 ml para granos.
62
Cuando utiliza papel filtro, este puede causar la prdida de color en pocos segundos.
63
Para precisin en el mtodo se debe ajustar el peso de la muestra, el tamao de la alcuota y la concentracin de KMnO4 de
manera que se consuman cerca de 20 ml de KMnO4.

47
Para el clculo del contenido de calcio en base seca se debe realizar el siguiente ajuste:

x100
alicuota de Volumen x P
250 x 0.020 x N x KMnO de ml
CALCIO DE PORCENTAJE
1
KMnO 4
4
=
100 x
C
o
SECO TE PARCIALMEN CALCIO DE %
SECA BASE EN CALCIO DE % =

48
B. DETERMINACIN DE FSFORO

Otro de los minerales que tiene gran importancia en la nutricin animal lo constituye el fsforo. Este es otro
elemento que se encuentra formando parte estructural en tejidos, como huesos y dientes, as como de
otros compuestos que tienen que ver con el metabolismo y fisiologa, tales como el ADP, protenas, lpidos,
entre otros. Uno de los mtodos mas utilizados para la determinacin del fsforo es el colorimtrico,
aunque tambin pueden utilizar otras tcnicas como la espectrofotometra atmica. En este procedimiento,
el fsforo, como cido fosfrico, reacciona con el molibdato de amonio y vanadato de amonio dando como
resultado la formacin, en un medio cido, del complejo de amoniofosfomolibdato y vanadio de color
amarillo. Este complejo se reduce dando paso a lo que se conoce como azul de molibdeno, encontrndose
una alta correlacin entre la intensidad del color azul con la concentracin de fsforo.

REACTIVOS:
- Reactivo de molibdenovanadato: Disuelva 27 g de molibdato de amonio en 400 ml de agua
destilada caliente y deje reposar para enfriar. Prepare una solucin de 1.12 g de metavanadato de
amonio (NH
4
VO
3
) en 300 ml de agua caliente y deje reposar para enfriar. Aada posteriormente a la
solucin de molibdato 250 ml de cido ntrico. Finalmente, aada lentamente la solucin de
molibdato a la solucin de vanadato y lleve el volumen final a un litro. Guarde la solucin resultante
en una botella mbar.
- Solucin estndar de fsforo: Disuelva 4.394 g de KH
2
PO
4
en agua y lleve a un litro de solucin.
Esta solucin contiene 1000 ppm o 1 mg/ml de fsforo. Se preparan distintas soluciones tomando
alcuotas de 0, 5, 10. 15, 20, 25, 30, 35 y 40 ml que contienen 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 y 40 ppm
de fsforo, las que se transfieren a volumtricos de 50 ml y agregue los reactivos en la secuencia
que se aplicaran a la alcuota de la muestra.

PROCEDIMIENTO
1
- Aada al crisol 40 ml de HCl (1:3) y unas gotas de HNO3 concentrado.
- Con ayuda de un papel filtro, transfiera la solucin a un frasco volumtrico de 250 ml, deje enfriar y
lleve hasta la marca de 250 ml con agua destilada. Tape el volumtrico y mezcle completamente.
- Tome una alcuota de 10 ml y transfirala a un volumtrico de 50 ml, adale 5 ml de la solucin de
molibdenovanadato. Tape el volumtrico y mezcle completamente. Lleve hasta el aforo de 50 ml con
agua destilada, tape el volumtrico y mezcle completamente.
64

- Deje reposar por 10 minutos y lea la absorbancia a los 400 nm, tanto de la muestra en duplicado
como de las soluciones patrones.
- Determine la ecuacin de regresin con las lecturas de las soluciones estndares y determine la
concentracin de fsforo en la muestra.

Existen diferentes programas para computadoras o ciertas calculadoras que pueden realizar algunas
operaciones de tipo cientfico o estadsticas que permiten estimar directamente la ecuacin de regresin

64
En este momento proceda a realizar la adicin de la solucin de molibdatovanadato a las alcuotas de las soluciones estndares de
fsforo.

49
que se adecue a los datos obtenidos en la determinacin de fsforo en la muestra. Un mtodo ms simple,
consiste en utilizar una hoja milimetrada o cuadriculada donde se colocan las lecturas de absorcin
obtenidas para cada concentracin de las soluciones estndares, se traza la lnea recta que contenga el
mayor nmero de puntos, luego se proceda a interpolar la lectura obtenida para la muestra y determinar
su concentracin. Esto implica que existe la posibilidad de que cada persona pueda trazar una lnea
diferente, y por consiguiente obtener diferentes valores para la muestra.

Al no contar con una calculadora o computadora es posible determinar el valor de la ecuacin de regresin
realizando las operaciones que se describen en la siguiente tabla. Esto permitira estimar la concentracin
de fsforo en la muestra, con la sustitucin de la lectura en la ecuacin obtenida. En esta tabla r
corresponde al coeficiente de correlacin, b al coeficiente de regresin o pendiente de la curva, a al
intercepto o valor de y para x = 0, y Y
= a + bX corresponde a la ecuacin de regresin, donde X es la

concentracin a determinar para cada muestra. Por consiguiente, una vez obtenida la lectura para la
muestra, su concentracin corresponder a: X = ( Y
- a)/b, donde Y
es reemplazado por la lectura de

absorbancia obtenida de la muestra.

Concentracin Absorbancia
XY X
2
Y
2

x y
Xy x
2
y
2

ppm (X) % (Y)
X - X Y - Y

X = Y= XY = X
2
= Y
2
= xy = x
2
= y
2
=
X = Y =
(XY)/n =
(X)
2
/n = (Y)
2
/n =
r
2
= (xy)
2
/(x
2
y
2
)
r =
2
r
b = xy/x
2

a =Y - b X Y
= a + bX

Una vez determinada la concentracin de fsforo en la alcuota, se calcula la concentracin de fsforo en
la muestra de acuerdo a la siguiente ecuacin:

Para el clculo del contenido de fsforo en base seca se debe realizar el siguiente ajuste:

x100
ml 1 x 10 x P
ml 250 x Fsforo de ppm
FSFORO DE PORCENTAJE
6
1
=
100 x
C
o
SECO TE PARCIALMEN FSFORO DE %
SECA BASE EN FSFORO DE % =

50
C. DETERMINACIN DE POTASIO

Un mtodo por el cual se puede analizar el contenido de potasio en una muestra es utilizando el Fotmetro
de Llama. A continuacin un procedimiento comn empleado para el anlisis con este mtodo.

De forma general el Uso del Fotmetro de llama es como se detalla a continuacin.

- Lea inicialmente las instrucciones para el uso y proteccin adecuadas del equipo.
- Cuando est listo con las muestras y patrones, llame al Tcnico de Laboratorio para que encienda la
llama.
- Se estabiliza el fotmetro de llama.
- Aspire agua deionizada por lo menos dos minutos para limpiar y estabilizar el equipo.
- Mientras se aspira el agua deionizada coloque el control en CERO en la unidad de lectura a 0.0
unidades.
- Podr darse algunas variaciones de lectura en el lector.
- Aspire primeramente la solucin estndar ms concentrada, y use el botn de GANANCIA (GAIN)
para establecer la lectura en 100.0 unidades.
- Verifique nuevamente el CERO con agua deionizada y la lectura de 100 con la concentracin
estndar mas concentrada.
- Ahora proceda a aspirar todas las concentraciones estndar y los desconocidos uno a uno,
aspirando agua deionizada entre cada lectura para limpiar la unidad.
- El quemador mostrara un efecto de memoria.
- Repita todos los pasos de lectura nuevamente por una segunda vez para obtener una buen juego de
lecturas duplicadas.
- Repita todo por una tercera vez si fuera necesario para un tercer juego de lecturas.
- Cuando termine, aspire agua deionizada por lo menos dos minutos.
- Llame al Tcnico de Laboratorio para que apague la unidad.
- Limpie el rea de trabajo

Entre los mecanismos principales para el uso de este mtodo estn el principio de que las soluciones de
las muestras son atomizadas o aspirados como fina neblina hacia la llamas. El principio es la conversin
de las soluciones de muestra en aerosoles por un atomizador. Esto no implica un cambio qumico en la
muestra en este estado. El atomizador no convierte nada en tomos. Seguidamente, el calor de la llama
vaporiza los constituyentes de la muestra, pero an no ocurre ningn cambio qumico. Por el calor de la
llama mas la accin del gas reductor (combustible) las molculas e iones de las muestras son
descompuestas y reducidas para dar tomos. Ejemplo: Na
+
+ e
-
Na
0
. El calor de la llama causa
excitacin de algunos tomos hacia altos niveles electrnicos. Los tomos excitados se revierten hacia su
estado basal por la emisin de energa lumnica o fotones, , de una caracterstica longitud de onda
medida por un detector. En la figura 10 se presenta un esquema de un Fotmetro de llama.

Los tomos en el estado de vapor presentan una
lnea espectral, no una banda, debido a que no hay
enlaces covalentes por lo que no hay subniveles
vibracionales para causar una amplitud en la lnea.
Un filtro de vidrio coloreado es usualmente capaz de
aislar la lnea de un elemento analtico si este ha
sido bien separado de otras lneas de emisin. Por
ejemplo para medir Na y K en una muestra que
contenga ambos esta es la separacin de las lneas.

Emisin de
Na ||
K ||

___________________________________
400 500 600 700 800
(nm)
Figura 10. Esquema general de un fotmetro de llama.
Rendija Filtro
Fotodetector
Lente
Aerosol entra en la llama
Espejo
Combustible
Aire del
compresor
Sumidero

Muestra

51
La fotometra de llama cuantitativa se obtiene analizando la relacin de la intensidad de la emisin en
funcin de la concentracin de iones de la muestra en solucin que se est midiendo. Est relacin es
lineal sobre un amplio rango pero se da una desviacin a bajas y altas concentraciones tal como se
muestra en la figura 11.

A muy bajas concentraciones la emisin cae por debajo de lo
esperado. Debido a la ionizacin (algunos tomos vuelven a iones,
ejemplo: K K
+
+ e
-
.Y adems hay una insignificante ionizacin a
altas temperaturas. No obstante hay una regin lineal.Se da una
desviacin negativa a altas concentraciones debido a una
autoabsorcin. Los fotones emitidos por los tomos excitados son
parcialmente absorbidos por los tomos en su estado basal en la
llama.

Una mezcla de propano y aire o gas natural y aire dan una buena llama, un elevado nivel de calor, y una
mnima emisin de luz de fondo. Pero siempre se requiere correr un blanco con el solvente para
establecer la emisin a cero. Las soluciones diluidas, como se indic con anterioridad, tienden a salirse de
la parte lineal de la curva de emisin. Se puede calibrar con estndares adecuadamente, por ejemplo de
0.05 hasta 0.25 mM de K
+
. El uso de soluciones de muy bajas concentraciones de Na
+
y K
+
dan problemas
para evitar contaminacin. Especialmente el Na
+
que se libera lentamente de vidrio, contacto con la piel,
en algunos casos.

Los efectos de interferencia de aniones y cationes pueden causar errores, aumento o disminucin. El
efecto de amortiguamiento de la radiacin por la dilucin de estndares y muestras promueven
inconsistencias. El uso de fotometra de llama como una herramienta cuantitativa puede remontarse hasta
los trabajos de Kirchhoff y Bunsen en los aos de 1860. Pero su uso e historia moderna se inicia en los
aos de 1940 cuando los instrumentos se hicieron mayormente disponibles para resolver
satisfactoriamente los problemas de introduccin de muestras reproducibles y deteccin. La fotometra de
llama rpidamente se desarrollo en una herramienta analtica confiable para la determinacin de diversos
cationes de inters farmacutico, notablemente Sodio, Potasio y Litio. La tcnica es til en el anlisis de
drogas voluminosas, formas de dosis y muestras clnicas tales como sangre y orina. Hay fotometra de
llama tradicional o de baja temperatura de la llama. La fotometra de alta temperatura ha evolucionado
hacia otras tcnicas diversas tpicamente identificadas por sus fuentes de temperatura. Por ejemplo
Espectrometra de emisin atmica acoplada a plasma inductiva (ICP-AES por sus siglas en ingls).

PROCEDIMIENTO
1
- Cuando la temperatura alcance los 600 C deje las muestras por espacio de dos horas o una noche.
- Aada al crisol HCl (1:1).
- Con ayuda de un papel filtro, transfiera la solucin a un frasco volumtrico de 50 ml, deje enfriar y
lleve hasta la marca de 50 ml con agua destilada. Tape el volumtrico y mezcle completamente.
- Tome una alcuota de 1 ml y transfirala a un volumtrico de 10 ml, afore con 9 ml de agua destilada.
Tape el volumtrico y mezcle completamente. Dilucin 1:10

Concentracin
Intensidad de
emisin

52
- Tome una alcuota de 1 ml de la dilucin anterior y transfirala a un volumtrico de 10 ml, afore con 9
ml de agua destilada. Tape el volumtrico y mezcle completamente. Dilucin 1:100
- Proceda a calibrar el fotmetro de llama con las soluciones patrones de Potasio. El ero se calibra con
agua destilada y el 100% de emisin con la solucin patrn de 30 ppm de potasio.
- Determine el porcentaje de emisin de los patrones de Potasio para la construccin de la grfica de
anlisis. % de emisin vs ppm de Potasio en los patrones.
- Los patrones se preparan tomando alcuotas de 5, 10, 15, 20, 25 y 30 ml de una solucin valorada
de 100 ppm de Potasio y transfiriendo cada alcuota a matraces volumtricos de 100 ml,
procedindose a completar o aforar el volumen con agua destilada.
- Lea la emisin de la muestra primero en el extracto original y luego en las diucones se requiere.
- Determine la ecuacin de regresin con las lecturas de las soluciones estndares y determine la
concentracin de Potasio en la muestra.

Existen diferentes programas para computadoras o ciertas calculadoras que pueden realizar algunas
operaciones de tipo cientfico o estadsticas que permiten estimar directamente la ecuacin de regresin
que se adecue a los datos obtenidos en la determinacin de potasio en la muestra. Un mtodo ms simple,
consiste en utilizar una hoja milimetrada o cuadriculada donde se colocan las lecturas de absorcin
obtenidas para cada concentracin de las soluciones estndares, se traza la lnea recta que contenga el
mayor nmero de puntos, luego se proceda a interpolar la lectura obtenida para la muestra y determinar
su concentracin. Esto implica que existe la posibilidad de que cada persona pueda trazar una lnea
diferente, y por consiguiente obtener diferentes valores para la muestra.

Al no contar con una calculadora o computadora es posible determinar el valor de la ecuacin de regresin
realizando las operaciones que se describen en la siguiente tabla. Esto permitira estimar la concentracin
de potasio en la muestra, con la sustitucin de la lectura en la ecuacin obtenida. En esta tabla r
corresponde al coeficiente de correlacin, b al coeficiente de regresin o pendiente de la curva, a al
intercepto o valor de y para x = 0, y Y
= a + bX corresponde a la ecuacin de regresin, donde X es la

concentracin a determinar para cada muestra. Por consiguiente, una vez obtenida la lectura para la
muestra, su concentracin corresponder a: X = ( Y
- a)/b, donde Y
es reemplazado por la lectura de

absorbancia obtenida de la muestra.

Concentracin Absorbancia
XY X
2
Y
2

x y
Xy x
2
y
2

ppm (X) % (Y)
X - X Y - Y

X = Y= XY = X
2
= Y
2
= xy = x
2
= y
2
=
X = Y =
(XY)/n =
(X)
2
/n = (Y)
2
/n =
r
2
= (xy)
2
/(x
2
y
2
)
r =
2
r
b = xy/x
2

a =Y - b X Y
= a + bX

Una vez determinada la concentracin de fsforo en la alcuota, se calcula la concentracin de potasio en
la muestra de acuerdo a la siguiente ecuacin:

alicuota de Volumen x P
0.25 x Potasio de ppm
POTASIO DE PORCENTAJE
1
=

53
Para el clculo del contenido de potasio en base seca se debe realizar el siguiente ajuste:

Por interpolacin se puede obtener el % de potasio de la muestra interpolando el porcentaje de emisin en
la grfica construida y realizar las siguientes operaciones:

donde F es igual a 1, si la lectura es del extracto original, 10, si la lectura es de la primera dilucin (1:10) y
100 si la lectura es de la segunda dilucin (1:100)

100 x
C
o
SECO TE PARCIALMEN POTASIO DE %
SECA BASE EN POTASIO DE % =
1000
F 25 de M pp
de %
K
= K

54
XIII. LITERATURA CONSULTADA

Abe, T. The studying data of the Livestock Experiment Station. Vol. 2. 1988

th

Chapman, H, y Prat, P. Mtodos de Anlisis para Suelos, Plantas y Aguas. Editorial Trillas, Mxico, 195
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1971

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= a + bX corresponde a la ecuacin de regresin, donde X es la

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