IES SARDIEIRA ENSAYOS BIOTECNOLGICOS Noelia Deibe Prez Alba Gndara Crespo Paula Prez Morandeira LACC2 M1

Curso 2013/2014

Fago
Imagen del gel:

FECHA INICIO:

FECHA FINALIZACIN:

TIEMPO EMPLEADO (SESIONES)

29/01/2014
ELABORADO POR:

30/01/2014
REVISADO POR:

6
APROBADO POR:

CONTROLADA: SI [ ] / NO [ }

Pgina 2 de 9

M1

LACC2

Carlos de Paz

Fago
Recorrido de las bandas de ADN*:
Mesa 2: M=Marcador Bandas 1 2 3 4 5 6 Recorrido (mm) 8,1 9,7 11,6 17,2 18,5 Pares de base reales 23130 9416 6557 4361 2322 2027 L=ADN lambda Recorrido (mm) 6,3 Pares de base estimados 38000 P=PstI Recorrido (mm) 7,9 12,1 15,2 16,5 Pares de base estimados 24800 6200 4700 4000 E=EcoRI Recorrido (mm) 8,2 10,4 11,9 Pares de base estimados 22000 8000 6400 H=HindIII Recorrido (mm) 7,7 9,3 10,9 Pares de base estimados 26600 12000 7100

FECHA INICIO:

FECHA FINALIZACIN:

TIEMPO EMPLEADO (SESIONES)

29/01/2014
ELABORADO POR:

30/01/2014
REVISADO POR:

6
APROBADO POR:

CONTROLADA: SI [ ] / NO [ }

Pgina 3 de 9

M1

LACC2

Carlos de Paz

Fago
Mesa 3: M=Marcador Bandas 1 2 3 4 5 6 Recorrido (mm) 8,1 9,7 11,6 17,2 18,5 Pares de base reales 23130 9416 6557 4361 2322 2027 L=ADN lambda Recorrido (mm) 7,6 Pares de base estimados 27000 P=PstI Recorrido (mm) 9,1 12,7 15,7 17,2 Pares de base estimados 15000 5900 4500 4360 E=EcoRI Recorrido (mm) 8,2 10,5 11,6 12,5 Pares de base estimados 22000 7900 6560 6100 H=HindIII Recorrido (mm) 8,4 10,0 11,4 Pares de base estimados 20500 8300 6800

FECHA INICIO:

FECHA FINALIZACIN:

TIEMPO EMPLEADO (SESIONES)

29/01/2014
ELABORADO POR:

30/01/2014
REVISADO POR:

6
APROBADO POR:

CONTROLADA: SI [ ] / NO [ }

Pgina 4 de 9

M1

LACC2

Carlos de Paz

Fago
Mesa 4: M=Marcador Bandas 1 2 3 4 5 6 Recorrido (mm) 8,1 9,7 11,6 17,2 18,5 Pares de base reales 23130 9416 6557 4361 2322 2027 L=ADN lambda Recorrido (mm) 8,5 Pares de base estimados 20000 P=PstI Recorrido (mm) 8,6 12,6 16,0 16,9 17,6 Pares de base estimados 19000 6000 4300 3800 3000 E=EcoRI Recorrido (mm) 8,1 10,6 11,8 12,6 Pares de base estimados 23130 7800 6400 6000 H=HindIII Recorrido (mm) 6,4 Pares de base estimados 37000

FECHA INICIO:

FECHA FINALIZACIN:

TIEMPO EMPLEADO (SESIONES)

29/01/2014
ELABORADO POR:

30/01/2014
REVISADO POR:

6
APROBADO POR:

CONTROLADA: SI [ ] / NO [ }

Pgina 5 de 9

M1

LACC2

Carlos de Paz

Fago
Efecto de las enzimas de restriccin sobre el ADN:
Como se puede observar tanto en la imagen del gel como en las tablas de recogida de datos, el efecto de las enzimas de restriccin es evidente. As, vemos que las distintas enzimas empleadas cortan el ADN en distintos puntos dando lugar a fragmentos de ADN de diferentes tamaos con unos patrones de migracin caractersticos para cada uno de ellos.

Conclusiones y observaciones:
Observando los patrones de migracin para cada una de las cuatro muestras, vemos que la velocidad de migracin de la muestra de ADN que no ha sido cortada es mucho menor que la de aquellas muestras que s lo han sido. Esto se debe a que bajo las mismas condiciones electroforticas, la velocidad de migracin de las molculas de ADN con la misma conformacin depende exclusivamente de su tamao, viajando mucho ms rpido aquellos fragmentos de ADN de tamao menor, puesto que estos son capaces de atravesar los poros del gel con mayor facilidad. Por otro lado sabemos que la digestin del ADN lambda con HindIII produce 8 fragmentos de ADN, la digestin con EcoRI genera 6 fragmentos y la enzima de restriccin PstI produce 29 fragmentos (ver imagen adjunta). Es evidente que en nuestro gel no hemos podido ver todos estos fragmentos, lo que se debe a diversos factores entre los que destacan, por ejemplo, que algunas de las bandas estn tan prximas entre s que no acertemos a distinguirlas, que el tamao de algunos de los fragmentos de ADN no sea lo suficientemente grande como para que los podamos ver con el tipo de tincin empleado o que los fragmentos tengan un tamao tan semejante que no puedan ser separados con las condiciones de gel empleadas. De este modo, y para poder obtener mejores resultados y ahondar ms en el estudio del efecto de las enzimas de restriccin sobre el ADN lambda, cambios en la concentracin de agarosa, la ejecucin de los geles durante perodos de tiempo ms largos y el uso de una tincin de ADN mucho ms sensible permitiran la deteccin de ms bandas de ADN.

FECHA INICIO:

FECHA FINALIZACIN:

TIEMPO EMPLEADO (SESIONES)

29/01/2014
ELABORADO POR:

30/01/2014
REVISADO POR:

6
APROBADO POR:

CONTROLADA: SI [ ] / NO [ }

Pgina 6 de 9

M1

LACC2

Carlos de Paz

Fago

Cabe destacar tambin que en el segundo pocillo empezando por la derecha se ha observado un resultado anmalo puesto que la muestra ha corrido como si se tratara de ADN sin digerir cuando en realidad se trataba de ADN lambda digerido con HindIII. Esto puede ser debido a un tratamiento incorrecto de la muestra o a alguno de los condicionantes del proceso mencionados anteriormente, lo que tambin explicara que para la misma muestra, tratada por los distintos grupos de trabajo, aparezcan ms o menos bandas o que las mismas tengan un mayor o menor recorrido.

FECHA INICIO:

FECHA FINALIZACIN:

TIEMPO EMPLEADO (SESIONES)

29/01/2014
ELABORADO POR:

30/01/2014
REVISADO POR:

6
APROBADO POR:

CONTROLADA: SI [ ] / NO [ }

Pgina 7 de 9

M1

LACC2

Carlos de Paz

Fago
Insistiremos adems en el hecho de que el que no aparezcan ms bandas no quiere decir que no existan pero, debido a las limitaciones del procedimiento, no se pueden observar y que, en algunos casos, las bandas ms que verse con claridad se intuyen. Tambin diremos que a la hora de estimar el tamao de los fragmentos de ADN en las muestras se ha tenido en cuenta el marcador de la izquierda debido a que con el de la derecha, muchos de los fragmento obtenidos se salan del rango al no observarse en el mismo 3 bandas. Finalmente, y comparando los datos obtenidos para los tamaos de los distintos fragmentos de ADN con los de la bibliografa, diremos que en la mayora de los casos los unos no se corresponden con los otros lo que tambin puede ser debido a las ya mencionadas limitaciones del mtodo.

Fuentes de informacin:
Manual: Restriction Digestion and Analysis of Lambda DNA Kit. http://www2.uah.es/bioquimica/f-bmig/practics/plasmido.pdf http://www.dnai.org/geneboy/ (Usando genboy slo se poda realizar la restriccin con EcoRI, por lo que se us otra herramienta online) http://enlacesbmp.cragenomica.es/utilidades.html http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/215104 http://www.diversidadmicrobiana.com/index.php?option=com_content&view=article&id=544&Itemid=608 http://www.restrictionmapper.org/ *Medidas de recorrido tomadas con Autocad

FECHA INICIO:

FECHA FINALIZACIN:

TIEMPO EMPLEADO (SESIONES)

29/01/2014
ELABORADO POR:

30/01/2014
REVISADO POR:

6
APROBADO POR:

CONTROLADA: SI [ ] / NO [ }

Pgina 8 de 9

M1

LACC2

Carlos de Paz

Fago

Anexo

Video procedimiento

FECHA INICIO:

FECHA FINALIZACIN:

TIEMPO EMPLEADO (SESIONES)

29/01/2014
ELABORADO POR:

30/01/2014
REVISADO POR:

6
APROBADO POR:

CONTROLADA: SI [ ] / NO [ }

Pgina 9 de 9

M1

LACC2

Carlos de Paz