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MICROENCAPS ULACIN DE PAP ANA CON GOMA CARBOXIMETILADA DE SEMILLAS DE FLAMBOYN ( Deloni x regia ) Chel-Guerrero Lui s; Pacheco-Aguirre Jesse

; Ca stellanos-Ruelas Arturo; Betancur-Ancona David Facultad de Ingeniera Qumica. Campus de Ingenieras y Ciencias Exactas. Perifrico Nort e, Km 33. 5, Tablaje Catastral 13615. Chuburn de Hidalgo Inn. CP. 97203. Mrida, Yucatn, Mxico. Email: cguerrer@uady.mx RESUMEN El flamboyn ( Delonix regia ), usualmente solo es usado como planta ornamental, siendo la s emilla una fuente de goma. Esta requiere una modificacin qumica que permita ampliar su funcionalidad tecnolgica, siendo una posibilidad de uso como agent e encapsulante. La aplicacin de esta tcnica se presenta til en la industria alimentaria dado el potencial de proteccin de algn agente bioactivo y control de la liberacin del mismo. Se evalu la capacidad de la goma carboximetilada de flamboyn (GCF) como agent e encapsulante de papana, como modelo con potencial de aplicac in en aliment os 3 nutraceticos. Se emple un diseo factorial 2 empleando 4 puntos c entrales, siendo los factores y niveles la concentracin de GCMF de 1 y 3% (p/ v), FeCl 3 de 0.05 y 0.15 M y el tiempo de endurecimiento en solucin catinica de 20 y 30 min. El atrapamient o de papana por la GCMF se confirm mediante calorimet ra diferencial de barrido (DS C) y la variable de respuesta de cada tratamiento fue la cantidad de papana liberada in vit ro. Asimismo, se evalu la morfologa de las microcpsulas, su capacidad de flujo y su tamao. Los resultados indicaron que solamente el factor CG tuvo efecto significativo tanto en la formacin de microcpsulas as como en los dems parmetros evaluados, presentando una endoterma atribuida a la papana. La concentracin ms alt a de CG fue la que brind una mayor liberacin a pH intestinal. Las microc psulas fueron amorfas con el 2% y es fricas con el 3% de CG y stas presentaron mejor capacidad de flujo. El tamao promedio de las microcps ulas fue de 2.86 0.14 m m. La GCMF result efectiva como agent e encapsulante de papana, el cual pudiera ser un sistema efectivo en alimentos funcionales, para suministrar sustancias bioactivas para el tratamiento o prevencin de enfermedades. ABSTRACT Use of gums for microencapsulation has inc reased in the nutraceutical industry. Microcapsule behavior and properties differ bet ween gums and description of non-conventional sources is needed to identify their potential applications. Flamboyant tree ( Delonix regia ) seed is not currently used as a commercial gum source, but carboxymethylated flamboyant seed gum (CFG) has properties similar to those of carboxymethylat ed guar gum. The effectiveness of CFG in microencapsulating papain was evaluated with 3 a 2 factorial design and 4 cent ral points. The CFG microcaps ules were analyzed with differential scanning calorimetry (DS C) to evaluate particle size, morphology, flow capacity and in vitro papain release. The CFG effectively captured papain. Microcapsule morphology was amorphous when using 2% CFG and spherical when using 3% CFG. Concentration had a significant (p<0.05) effect on microcapsule behavior with the higher concentration providing better protection in a gastric pH. In an intestinal pH, papain release was higher in the lower concentration CFG microcapsules. This model is a potential controlled delivery system for bioactive substances with several possible industrial applications. Palabras clave: Microencapsulacin, papana, goma de flamboyn, carboximetilacin INTRODUCCIN Actualmente la industria de alimentos nutracuticos ha empleado hidrocoloides para encapsular sustancias con actividad biolgic a o funcional, protegindolos del medio y regulando el tiempo de trnsito gastrointestinal y proporcionando mayor efectividad y precisin en la dosificacin. Se deben considerar ciertos factores intrnsecos y extrns ecos para la liberacin de las s ustancias encapsuladas, como el tipo y la concentracin de goma, la carga inica, el tipo de iones presentes en solucin y el tiempo de endurecimiento de las cpsulas. Las semillas del rbol de flamboyn ( Delonix regia), utilizado como ornamento en Yucatn, Mxico, tiene una goma de tipo galactomanano, similar a las gomas de guar (Cyamopsis tetragonalobus ) y

goma de algarrobo (P rosopis chilensis ) (Matsuhiro y col., 2006), que es pot encialmente til para la microencapsulacin (Morochi y col., 1999; Morochi y Shiomi, 1999). Una de las des ventajas de la goma de flamboyn es su estructura con polisacridos neutros, por lo que su modificacin qumica es de inters ya que ofrece una may or capacidad de dis persin a temperatura ambient e y su funcionalidad (Sankalia y col., 2004). En el presente estudio se evalu la capacidad de la goma de flamboyn carboximetilada para encapsular papana como modelo de sustancia bioactiva para su potencial uso en las Industrias de alimentos o biotecnolgica. MATERI ALES Y MTODOS Recoleccin de las semillas de flamboyn. Las semillas de flamboyn (Delonix regia ) se recolectaron aleatoriamente de vainas ent eras y secas de rboles procedent es de cuat ro z onas de la ciudad de Mrida, Yucatn, Mxico. Obtencin de la harina del endospermo. La obtencin de la harina de endospermo se realiz por una adapt acin del mtodo de Morochi y col. (1999). Obtencin de la goma en su estado nativo y su modificacin La obtencin de la goma nativa de flamboyn (GNF) se realiz por una adaptacin del mtodo de Azero y Andrade (2006). La GNF fue modificada por carboximetilacin usando cloroacet ato de sodio (CAS) (Bahamdan y Daly, 2005). El grado de sustitucin (GS ) de la goma carboximetilada de flamboyn (GCMF) se determin por el mtodo descrito por Bahamdan (2005). Evaluacin de GCMF como agente encapsulante de sustancias nutracutica s. Se llev a cabo basndose en el mt odo de Sankalia y c ol. (2004) empleando un diseo 3 factorial 2 con 4 rplicas al tratamiento central. Los factores y niveles evaluados para este diseo fueron la concentracin de GCMF (A) de 1 y 3% (p/ v), la concentracin de FeCl 3 (B) de 0.05 y 0.15 M y el tiempo de endurecimiento en solucin catinica (C) de 20 y 30 min. Se emple calorimet ra diferencial de barrido (CDB ) de las microcpsulas para corroborar el atrapamiento

de papana de acuerdo al mtodo de S ankalia y col. (2004). La respuesta de cada trat amient o fue la cantidad de papana liberada in vitro por una adaptacin del mtodo de Takagi y col. (2003). Caracterizacin de las microcpsula s. El tamao de part cula y morfologa de las microcpsulas se determin por un microscopio ptico LE ICA DMLS usando un objetivo de 40x. La capacidad de flujo de las microcpsulas se realiz a t ravs de la medicin del ngulo de reposo segn Sankalia y col. (2004). RESULTADOS Y DISCUSIN Obtencin y modificacin de la GNF. El rendimiento en la extraccin de la goma nativa de la semilla de flamboyn (GNF) obtenida a partir de la harina del endospermo fue de 40%. El contenido de protena (2.16% ) presente en la GNF fue similar a lo indicado por Fras y Sgarbieri (1998) para la goma guar con 2.16% y por Trejo (1997) para la goma tamarindo con 2.4%. El extracto libre de nitrgeno (95.31% ) del endospermo de la semilla de flamboy n fue similar al report ado por Morochi y col. (1999). La carboximetilacin de la GNF present un GS de 0.33, valor que repres enta el 11% de la sustitucin carboximet lica. Evaluacin de GCMF como agente encapsulante de sustancias nutracutica s. La int eraccin de los tres factores estudiados fue significativa (p<0.05) en la formacin de microcpsulas. En algunos tratamientos no se formaron y las dems que contenan papana, exhibieron temperat uras de fusin diferentes (75.92 a 81.52 C) de aquellas sin ella (68.96 C). La papana sola exhibi dos dominios de diferente estabilidad trmica (95.76 y 103.58 C) que coincide con los res ultados reportados por Shah y col. (2010). La interaccin de los tres factores fue significativa (p<0.05) en la cantidad de prot ena y enzima liberada en el medio gstrico (GpH) con una menor cantidad de sta para los tratamientos 5 y 6. En el caso de la liberacin de protena en medio intestinal (IpH), solo se obtuvo efecto significativo (p<0.05) para A con una mayor cantidad para el tratamiento 6 con 37.79%. Reddy y Tammishetti (2002), reportan una liberacin de prot ena menor al de la GCMF en un IpH para la GCMG con 34%.

Cuadro 1. Cantidad de protena (%) y actividad enzimtica liberada a pH del tracto gstrico (1.2) e intestinal (6.8). Protena Acti vidad Factor Liberada (%) Enzimtica (%) Trat. A B C 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 + GpH 0 59.72 0 0 19.54 22.07 0 35.85 24.92 37.74 42.84 41.36 IpH 0 27.57 0 0 28.83 37.79 0 32.89 34.96 27.78 28.42 28.04 GpH 0 3.20 0 0 1.16 3.46 0 1.13 2.54 2.05 2.56 2.50 IpH 0 26.80 0 0 33.61 37.69 0 21.42 28.26 22.53 23.88 28.16

que se emple una concentracin de GCMF del 1% no formaron mic rocps ulas definidas, sino pelculas de muy poca consistencia por lo que no fueron evaluadas.

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Figura 1. Morfologa de las microcpsulas de goma carboximetilada de flamboyn (GCMF) (D: dimetro de la microcpsula). El tamao promedio de las microcpsulas fue de 2.86 0.14 mm (Figura 1), siendo este valor mayor al report ado por Sankalia y col. (2004), para las microcpsulas con alginato de sodio al 2% esto probablemente debido al efecto del tamao de salida de la gota de goma. La morfologa de las microcpsulas no fue afectada por el tamao de la salida de la gota de goma; sin embargo, si se tuvo un efecto c onsiderable por la concentracin de la GCMF. Los tratamientos con una concentracin de 2% de GCMF mostraron una morfologa de tipo irregular (Kirby, 1991) con tendencia a aglomerarse. Sankalia y col. (2004) manifiestan que este tipo de estructura se debe a una baja fuerza mecnica o de at raccin inica, por lo que se forman de manera irregular. Asimismo, cuando se increment la conc entracin de GCMF a un 3%, la morfologa de las microc psulas se modific cambiando a una forma es frica simple segn la clasificacin de Kirby (1991). La capacidad de flujo de las microcpsulas se presenta en el Cuadro 2, donde s e puede observar que los tratamientos con mayor concentracin de GCMF (3% ) mostraron una capacidad de flujo adecuada segn la clasificacin de Swarbrick (1997) para frmacos ingeridos va oral para los tratamientos 6 y 8 ya que las microcpsulas con forma esfrica simple ejerce una menor resistencia a la friccin durante el trayecto gastrointestinal (Kirby, 1991).

A: concentracin goma, B: Concentracin sol. Catinica, C: Tiempo de Endurecimiento;+ in dica niv el ms alto, -indica niv el ms bajo y 0 punto central del tratamiento.

La cantidad de enzima liberada en GpH mostr un efecto significativo para la interaccin A y B. En el caso de la liberacin enzimtica en IpH, como en el caso de liberacin de protena, solo fue significativo el factor A, indicando que a mayor concent racin de GCMF s e obtuvo un aumento en la enzima liberada con 37.69% para el tratamiento 6. Caracterizacin de las microcpsula s. Las microcpsulas obtenidas para cada tratamiento fueron agrupadas de acuerdo a las caractersticas que describe Kirby (1991) y se muestran en la Figura 1. Los tratamientos en los

Cuadro 2. Capacidad de flujo de microcpsulas segn su ngulo de reposo. Tratamientos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Angulo de reposo ND 37.66 5.62 ND ND 40.15 2.10 45.22 5.08 ND 42.66 5.66 46.95 2.60 46.90 2.10 46.91 1.95 46.91 2.30

las

Capacidad de flujo ND Regular ND ND Regular Aceptable ND Aceptable Pobre Pobre Pobre Pobre

obtuvieron las mejores condiciones de liberacin para un sistema intestinal simulado, donde el principal factor fue la concentracin de GCMF, indicando que a mayor concentracin de goma hay mayor liberacin de enzima. Tambin la concentracin de la goma propici un cambio en la morfologa de las microcpsulas, as como en su capacidad de flujo, teniendo valores ptimos al aumentar dicha concentracin. Por lo tanto esta fuente de goma no convencional proporciona un sistema de microencapsulacin eficaz que podra usarse con agentes similares a la pepsina de tipo nutracutico o teraputico AGRADECIMI ENTO Se agradece el apoyo recibido por el Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa, Fondo Sectorial de Investigacin para la Educacin (clave 106605), para realizar esta investigacin en el marco del proyecto: Bioactividad y propiedades fisicoquimicas de sistemas hidrocoloides mixtos integrados por prot einas hidrolizadas de frijol lima (P haseolus lunatus ) y goma modificada de flamboyan (Delonix regia ).

REFERENCI AS BIBLI OGRFI CAS - Azero, E.G. y Andrade, C. T. (2006). Characterisation of Prosopis juliflora seed gum and the effect of its addition to -carrageenan systems. Journal of B razilian Chemical Society, 17, (5) 844-850. - Bahamdan, A., y Daly, W. (2005). Poly(mxyalkylene) grafts/guar gum with applications in hy draulic fracturing fluids. Polymers for Advanc ed Technologies , 17, 679681. - Frias, A.C.D. y Sgarbieri, V.C. (1998). Guar gum effects on food intake, blood serum lipids and glucose levels of Wistar rats. Plant Foods for Human Nutrition, 53, 15 28. - Kirby, C. (1991). Microencaps ulation and controlled delivery of food ingredients. Food Science and Technology Today, 5, 74 78. - Matsuhiro, B., Presle, L. C., Saenz, C., Urzua, C.C. (2006). Structural determination and chemical modifications of the polysaccharide from seeds of P rosopis Chilensis Mol. (Stuntz). Journal of Chilensis Chemical Society, 51, 1-6.

ND: No detectado por no haber formado microcpsulas

Los tratamientos con una c oncentracin de 2% de GCMF formaron microcpsulas con un flujo pobre, esto puede deberse a que su morfologa es de tipo irregular. La liberacin de prot ena fue significativa (p>0.05) con respecto al tipo de goma empleada, al c omparar la GCMG contra la GCMF a un pH intestinal, dando como resultado una mayor cantidad de protena liberada para la GCMF con un valor de 37.8%. Asimismo, la actividad enzimtica evaluada para la GCMF y GCMG fue significativamente diferent e con 37.7 y 11.5% respectivamente CONCLUSIONES Se confirm la presencia de papana en las microcpsulas en t odos los tratamientos y se

- Morochi, D., San Martin, E. y Ordoez, D. (1999). Estudio sobre la extraccin y caracterizacin de la goma de flamboyn (Delonix regia ). Ciencia y Tecnologa de los Alimentos , CIDTA-UAGRM, 1, 59-61. - Moroc hi, D. y Shiomi, N. (1999). Identificacin de los componentes del polisacrido de la goma flamboyn ( Delonix regia) y su estudio toxicolgico. Ciencia y Tecnologa de los Alimentos , CIDTA-UAGRM, 1,11-16. - Reddy, T., y Tammishetti, S. (2002). Gastric resistant microbeads of metal ion crosslinked carboxymethyl guar gum for oral drug delivery. Journal of Microencapsulation,19, 311 318. - Sankalia, M.G., Maseru, R.C., Sandalia, J.M. y Sutariya, V.B. (2004). E valuacin y optimizacin simultnea de papana inmovilizada en grnulos de alginato entrecruzado mediante un diseo Factorial 3x3 y la funcin de deseabilidad. Ars Pharmaceutica, 45, (3) 253-279. - Shah, V., Sharma, M., Parmar, V., Upadhyay, U. (2010). Formulation of sildenafil citrate loaded nasal microsphers: An in vitro, ex vivo characterization. Int ernational Journal of Drug Delivery, 2, 213220. - Swarbrick, J. (1997). Encyclopedia of pharmaceutical technology. In James Boylan (Ed.), New York: Marcel Dekker INC. - Takagi, K., Teshima, R., Okunuki, H., Sawada, J. (2003). Comparative study of in vitro digestibility of food proteins and effect of preheating on the digestion. Pharmaceutical Society of Japan. Biological Pharmaceutics Bulletin, 26, 969973. - Trejo, A.R. (1997). Obtencin y determinacin de la composicin proximal de la goma de Tamarindo (Tamarindos indica L.). Tesis Qumico Industrial. Facultad de Ingeniera Qumica. UADY, Mrida, Mxico.

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