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TOMADEMUESTRAS
Muestrasenmalestado,sinidentificar, cantidadinsuficiente,contaminadas..
Prof. JM. Snchez-Vizcano
Universidad Complutense of Madrid Centro Visavet Laboratorio de Referencia de la OIE jmvizcaino@visavet.ucm.es
NOSIRVEN
Requisitosdelasmuestras
Muestrasdebenserlasadecuadas,decalidady representativasdelproceso.Porello,antesde empezardebepensarse: Tipodemuestra sospecha Finalidaddelmuestreo vigilancia Ordenmuestreo Volumenocantidadnecesaria Material!! Temperaturaycondicionesalmacenamiento Envo??
Dequanimales?
Segn elobjetivo delmuestreo (vigilancia,sospecha de enfermedad,etc). a)Encaso desospecha deenfermedad: Animales muertos enlas ltimas 1224horas Animales sospechosos (fiebre.Sntomatologa clnica,en contacto conlosmuertos)
Ordendemuestreo
Si los animales enfermos estn en transicin. Pordnde empezamos??
MARCADOOBLIGATORIODELOSANIMALESMUESTREADOS
04/12/2013
Qumuestras?
Manuales prcticos incluyen toda lainformacin detallada:
Sangre(EDTA) Suero rganos:
ganglios, Bazo Hgado Pulmones Rin leo distal Epitelio Hisopos cloacales Heces
Cuntas?
Nmerodemuestras funcindelnivelde confianzayprevalenciaesperada
Informacinaremitir
Listadocompletodelasmuestrasremitidasconinformacinclarasobrela edad,categorayexplotacindeorigendeloscerdosdequeprocedanlas muestras,ascomosuubicacinenlaexplotacin Nombreydireccincompletadelpropietariodelosanimales. Enfermedaddelaquesesospecha. Especiesanimalespresentesenlaexplotacinyladuracindesu estancia. Incorporacinyfechadeanimalesoespecies nuevasenlaexplotacin. Fechadelosprimerossntomas. Distribucindelaenfermedadenlaexplotacin:nmero,edadysexode losanimalesafectados.Nmerodecasos. Descripcindesntomasylesionessilashubiere. Tipodealojamientoysistemadeproduccin. Medicacinyvacunaciones administradas.
MATERIAL GENERAL
Botas limpias o mejor de la explotacin Mono desechable Nevera desechable Guantes desechable Desinfectante Gorro Lazo. Explotacin
DOCUMENTACINDENTROYFUERADELACAJA
MATERIALNECESARIO
Envaseshermticos(rganos) Tubosestriles(con/sinEDTA) Agujas Cuchillo,bistur,pinzas,tijeras,eutansico(material suficienteparanecropsia) Hisopos Mediodetransporteencasosespecficos(FAepitelio, salivayfluidovesicular;hisoposenIA) Rotuladoresresistentes Envasesecundario Envaseexterior Qumaterialdebemos meterenlagranja? Materialrefrigerante
1. SANGRE: Cerda adulta Cerdo de cebo Lechn grande Lechn pequeo 2. HECES: Con guante Con hisopo
3. RASPADO CUTNEO:
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4. LECHE:
1. EXTRACCIN DE SANGRE
Material: Jeringuillas monovette Agujas de 4 tamaos Rotulador
5. ORINA:
6. MUCOSAS: Nasal Vaginal Hoja de bistur Tubo con separador de suero 7. NECROPSIA: Toma de muestras de diferentes rganos
Para cerdos de menor tamao utilizamos una aguja de menor calibre LUGARES DE EXTRACCIN: Vena cava Vasos de la cola Vena yugular Seno Venoso orbitario Vena ceflica Puncin cardiaca Venas auriculares El animal es sujetado por un operario. La cabeza debe estar bien sujeta para que el animal no se mueva
VASOS DE LA COLA:
En cerdas de gran tamao. Se hace un pequeo corte con el bistur. Se recoge en un tubo tapval sin anticoagulante. Para parar la hemorragia presionamos sobre el corte.
2.EXTRACCIN DE HECES
Material: Guantes Hisopos sin medio de transporte Botes estriles
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PARA ANLISIS COPROLGICO: Las heces se recogen con guante invertido. Directamente del recto del animal. No es necesaria la refrigeracin. No se deben congelar.
PARA CULTIVOS BACTERIANOS: (E. coli, Salmonella, Brachyspira.) Condiciones de esterilidad. hisopos con medio de transporte. Se envan refrigeradas y en el menor tiempo posible.
Se introduce el dedo en el recto del animal para estimularlo. Recogemos las heces y le damos la vuelta al guante.
3. RASPADO CUTNEO
Material: Kit comercial para la deteccin de sarna. Tambin se puede utilizar la hoja de un bistur.
Mtodo: Permiten el diagnstico de ectoparsitos e infecciones bacterianas y fngicas. El raspado debe hacerse suavemente, recogiendo pelo, raspado de piel. Envo al laboratorio: Contenedor estril cerrado Hisopo con medio A temperatura ambiente
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6. OBTENCIN DE EXUDADOS
Material: Hisopos con medio de transporte. Lazo para sujetar al cerdo.
MUCOSAS NASALES:
MUCOSA VAGINAL: Desinfeccin previa. Se coge el rabo y el labio vulvar con una mano. Con la otra introducimos el hisopo.
FLUIDOSORALES
Componentes del fluido oral (FLO)
Exudadossricos,componentesdelas clulasInflamatorias,secrecionesnasales, expectoracionesbronquiales,bacteriasy virus,yotroscomponentescelularesy salivares
Adaptado de J. Zimmerman
FLUIDOORALENELDIAGNSTICO VETERINARIO..
Adadehoyampliamenteutilizadaenprogramasdevigilancia enfermedadesporcinas(PRRS,PCV2,Influenza)
Numerososestudiosestnsiendollevadosacaboparala estandarizacindeldiagnsticoenestasenfermedadesmediante fluidooral
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DatosHistoricos delFLO
1909. Primera deteccin de anticuerpos (Brucella melitensis en individuos enfermos con las fiebres de Malta) 1976. Primera deteccin de anticuerpos en saliva de cerdos infectados experimentalmente con PPC 1984. Aislamiento del virus del VIH y deteccin de Ac frente al virus en saliva de pacientes infectados con SIDA
DiagnsticodePPA
Muchastcnicasdiagnsticasdisponibles;funcionan adecuadamentedetectandolos22genotiposdescritos. Tcnicasserolgicas:buenaopcinparadeteccintemprana, Vigilancia,ControlyErradicacin.
Novacunasdisponibles Ac=INFECCIN PersistenciadeAc,inclusoduranteaos Screeningtestsagranescala,automatizadosyfcilesdellevaracabo
FLUIDOORALENELDIAGNSTICO VETERINARIO..
Lastcnicasde diagnsticoparaPPA estnsiendooptimizados parafluidooral. Buenosresultadosen ELISAencondiciones experimentales(Muret al.,2013) INDIVIDUALES COLECTIVOS
FLUIDOORALENELDIAGNSTICO VETERINARIO..
Ascomoencampo (PPAenCerdea)
PROCEDIMIENTOPARARECOGIDADEFLUIDOORAL
1.ENTRENAMIENTO DELOSCERDOS
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PROCEDIMIENTOPARARECOGIDADEFLUIDOORAL
PROCEDIMIENTOPARARECOGIDADEFLUIDOORAL
RESULTADOSDELEXPERIMENTO
FUTURASLNEASDEINVESTIGACIN Estandarizacindeprotocolosderecogidademuestras Optimizacindetests diagnsticosparasuusoenfluidooral tests comerciales,PCR Realizacindeestudiosagranescalaengranja evaluacin delniveldedeteccin Estabilidaddelfluidooral Estudioscostebeneficiodelsistema Otrasenfermedades??
IMMUNUNOPEROXIDASA TEST
FLUIDO ORAL FLUID vs SUERO
Optimizacin delprotocoloparamuestrasdefluidooral (FO): Dobleconcentracin deantgeno (1/800) Usodemuestras FOsindiluir Incubacin durante todalanochea4Cdemuestras deFO 5xconcentracin deconjugado
VENTAJASdelfluidooraleneldiagnsticodeenfermedades porcinas 1. Permite la evaluacin del estado sanitario de una poblacin de forma rpida y sencilla 2. Permite estudiar patrones de infeccin y/o efectividad de vacunas de forma conjunta en la poblacin 3. Reduce los riesgos derivados de la toma de sangre 4. Reduce el personal, material, tiempo y coste necesario para el muestreo de los animales 5. Respeta el bienestar animal
Idneoparaprogramasdevigilanciaycontrolde enfermedades
6. NECROPSIA
Material: Sierra Cuchillos Bistur Guante metlico
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Buenasprcticasennecropsia
Seleccindellugaradecuado(fcildelimpiar, aisladodelrestodeanimalessusceptibles) Plsticoomaterialpararecogersangre.
Buenasprcticasennecropsia
Cambiodematerialentreanimales (contaminaciones) Recomendadoapagarventilacinasistida Usodeinsecticidas
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EXTRACCIN DE LA PIEL
NECROPSIA EXPRES
ATENCIN CON SANGRE E INSECTOS
ARTICULACIONES: Extraemos lquido articular para estudios bacteriolgicos. El lquido se extrae de la articulacin de la cadera.
INSPECCIN DE ARTICULACIONES
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Corazn
Hgado
Colon
Intestino delgado
CAVIDAD TORCICA Extraccin de pulmones, corazn, esfago y trquea. Examen de las tonsilas farngeas y pericardio. Examen de ganglios mediastnicos.
Bazo
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CAVIDAD ABDOMINAL Examen del peritoneo. Extraccin de hgado, vescula biliar, bazo y riones. Para extraer el estmago atamos para no perder el contenido gstrico. El estmago se enva entero. Atamos de nuevo para extraer el leon. Extraemos el yeyuno para ver los ganglios mesentricos. Tambin tomamos muestra del I. grueso.
Urteres
Riones
CEREBRO
CEREBELO
Meninges
Encfalo
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Lbulo parietal
Lbulo frontal
Hay que enviar las muestras bien cerradas y en una nevera. Se debe especificar el nombre de la granja, rgano que se enva
TIPOSDEESTUDIOS
Seroprevalenciadeunaenfermedad Situacinserolgicadevariasenfermedades endiferentesfasesdelaproduccin Evolucindetratamientoy/ovacunacin Diagnsticoenfermedad Diagnsticomuerte Programasdevigilancia
Controldeenfermedad: OBJETIVO: Reducirlaprevalenciadeuna enfermedad MEDIOS: Vacunacin Tests Sacrificio Desinfeccin... Vigilanciaepidemiolgica: OBJETIVOS: Produccindeinformacin sobrelaINFECCIN (enfermedad) MEDIOS: Tomadedatos Procesado Anlisis Diseminacindelainformacin obtenida
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Controldeenfermedades
Convivenciaconlaenfermedad Reduccindeprevalencia Niveladmisiblesanitario/econmico Nlimitadodecasosofocos Patgenossiguen Control>Erradicacin 1 2 tecnologadiagnstico
2010
Resp 2 56 7 0 5 0 0 Particip an tes 11 22. .. 33 Votos 44 55 66 % 77 88 99 10 1 22 33 44 15 8 99 20 1 22 33 5 44 25 66 77 88 99 30 1 7 2 3 44 35 6 77 88 99 1 40 Resp 2 5 0 Particip Resp Votos % 25 56 50 0 72 5 3 140 00 0 Participan antes tes 1 2 3 Votos 4 5 6% 7 8 9 10 10 1 1 2 3 4 15 15 6 7 7 8 8 9 20 20 1 1 2 35 4 25 25 6 7 8 9 30 30 1 17 2 3 4 35 35 6 6 7 8 91 40
A2 3 41 4 45 6 77 88 99 50 1 22 33 44 55 6 77 88 99 60 1 22 33 44 65 6 77 88 99 70 1 22 33 44 75 6 77 88 99 80 41 2 A 41 A 2 3 3 4 4 45 45 6 6 7 8 9 50 50 1 1 2 3 4 55 55 6 6 7 8 9 60 60 1 1 2 3 4 65 65 6 6 7 8 9 70 70 1 1 2 3 4 75 75 6 6 7 8 9 80 80
0 0 0
Tiemp o Tiemp Tiempo o
0 0 0
Restan te Restan Restante te
81 2 33 44 85 6 77 88 99 90 1 22 33 44 95 6 77 88 99 100 1 22 33 44 105 6 77 88 99 110 1 22 33 44 115 6 77 88 99 120 81 81 2 2 3 4 85 85 6 6 7 8 9 90 90 1 1 2 3 4 95 95 6 6 7 8 9 100 100 1 1 2 3 4 105 105 6 6 7 8 9 110 110 1 1 2 3 4 115 115 6 6 7 8 9 120 120
61 64 68 83 84 85 86 87 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 61 62 62 63 63 64 65 65 66 66 67 67 68 69 69 70 70 71 71 72 72 73 73 74 74 75 75 76 76 77 77 78 78 79 79 80 80 81 81 82 82 150 8311 84 86155 87 88 88 89 89 90 90160 121 22 85 33 44 121 22 33 44 125 125 66 77 88 99 130 130 11 22 33 44 135 135 66 77 88 99 140 140 11 22 33 44 145 145 66 77 88 99 150 155 66 77 88 99 160
121 2 D D
D E
11 11
3
4 125 6
12 12
7
9 130 1
13 13
14 14
4 135 6
15 15
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9 140 1
16 16
2 3
4 145 6
17 17
7
9 150 1
18 18
19 19
4 155 6
20 20
8
9 160
0 0 0
0 0 0
E E 3 161 2 493 165 66 95 77 8 9 170 11 2 33 44101 175 66 103 77 88 99 105 180 11 2 33108 44 109 185 66 77 88 112 99 113 190 11 22115 33 116 44 195 66 77 119 88 120 99 200 161 2 3 165 8 170 2 175 180 2 185 190 195 91 94 102 118 161 2 92 3 4 4 165 6 95 7 96 8 17098 1 99 2 100 3 4101 175 6 103 7 104 8 9 105 180106 1 107 2 3108 4 109 185 110 6 111 7 8 112 9 113 190 114 1 2115 3 116 4 117 195 6 7 119 8 120 9 200 200 91 92 93 94 96 97 98 99 100 102 104 106 107 110 111 114 117 118 91 92 93 94 95 96 9997 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120
201 2 33 44 205 6 77 88 99 210 1 22 33 44 215 6 77 88 99 220 1 22 33 44 225 6 77 88 99 230 1 22 33 44 235 6 77 88 99 240 201 201 2 2 3 4 205 205 6 6 7 8 9 210 210 1 1 2 3 4 215 215 6 6 7 8 9 220 220 1 1 2 3 4 225 225 6 6 7 8 9 230 230 1 1 2 3 4 235 235 6 6 7 8 9 240 240
Fin Ver In icio Ver In Fin Fin Inicio icio Ver Votacin Votacin Grf ica Grf Votacin Votacin Votacin Grfica ica Votacin
H2 3 241 4 245 6 77 88 99 250 1 22 33 44 255 6 77 88 99 260 1 22 33 44 265 6 77 88 99 270 1 22 33 44 275 6 77 88 99 280 241 2 H 241 H 2 3 3 4 4 245 245 6 6 7 8 9 250 250 1 1 2 3 4 255 255 6 6 7 8 9 260 260 1 1 2 3 4 265 265 6 6 7 8 9 270 270 1 1 2 3 4 275 275 6 6 7 8 9 280 280
21 23 25 26 27 28 29 30 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 76 77 79 80 82 84 85 87 90 92 93 95 97 98 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99100 76 77 78 7822 7948 80 81 81 82 83 83 24 8451 85 86 86 87 88 88 89 89 90 91 91 9256 93 94 94 95 96 96 9759 98 99100 99100 46 46 47 49 50 52 53 54 55 57 58 60 46 47 47 48 48 49 49 50 50 51 51 52 52 53 53 54 54 55 55 56 56 57 57 58 58 59 59 60 60 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180
151 II 152 151 152 153 153 154 154 155 155 156 156 157 157 158 158 159 159 160 160 161 161 162 162 163 163 164 164 165 165 166 166 167 167 168 168 169 169 170 170 171 171 172 172 173 173 174 174 175 175 176 176 177 177 178 178 179 179 180 180 I
JJ J
Prrrog a Can celar Avan zar Prrrog Prrroga a Can Cancelar celar Avan Avanzar zar Tiemp o Votac. sig u ien te Tiemp Votac. Tiempo o Votac. sig sigu uien iente te
281 2 33 44 285 6 77 88 99 290 1 22 33 44 295 6 77 88 99 300 1 22 33 44 305 6 77 88 99 310 1 22 33 44 315 6 77 88 99 320 281 281 2 2 3 4 285 285 6 6 7 8 9 290 290 1 1 2 3 4 295 295 6 6 7 8 9 300 300 1 1 2 3 4 305 305 6 6 7 8 9 310 310 1 1 2 3 4 315 315 6 6 7 8 9 320 320
OBJETIVOEXTICA: Detectarlapresenciadela infeccin/enfermedad MEDIO: Informardecualquier brote/sospecha Investigarorigen Animalescentinelas ALERTA Ej:FA,PPC
Erradicacindeenfermedades
Eliminacintotal dela enfermedadpor eliminacintotaldesu causa
Casos(inc.subclin.) Patgeno Nonuevoscasos Noportadores
Eliminacinde enfermedades
Desaparicindetodoslos casosclnicosenunrea
DETECCIN DEL FOCO DIAS PARCIALES CUMULADO Sacrificio del ganado............................................7 d.............................7 das Limpieza y desinfeccin.....................................40 d............................47 das Control con centinelas........................................35 d............................82 das Introduccin del primer lote de primerizas.......7 d...........................89 das Primeras cubriciones de primerizas..................50 d..........................139 das Primeros partos.................................................115 d.........................254 das Primeros destetes................................................21 d..........................275 das Primeros lechones a cebo...................................42 d..........................317 das Primeros animales a matadero 120 d 437
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Agradecimientos:
MartaNoval ClaudioLecocq LinaMur Porsusaportacionesenla elaboracindeestapresentacin.
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