GUIA PRACTICA LABORATORIO MICROBIOLOGA ORAL

Dr. Felipe Capponi B Dr. Jorge Magarios S

SESION N1 Introduccin al laboratorio de Microbiologa

-Objetivos del Prctico -Explicacin y Modalidad de Trabajo -Distribucin y Asignacin Seminarios -Entrega Gua

SESION N2 Seminario: 1-Conceptos de esterilizacin, desinfeccin, antisepsia y pasteurizacin. 2-Bioseguridad en la clnica odontolgica *Test de salida.

SESION N3 Bioseguridad, prcticas de laboratorio y manejo del instrumental en Microbiologa. Objetivos: Reconocer los diferentes elementos e instrumentos que se utilizan en el Laboratorio de microbiologa y aprender su uso correcto en el contexto de normas de bioseguridad y prcticas de laboratorio. Demostrar la presencia de microorganismos (no patgenos) tanto en el medio ambiente que nos rodea como sobre nuestros tegumentos; como tambin reconocer las diversas vas de transmisin de los microorganismos. Materiales: -Placas de Petri con Agar TSI (60) -Placas Rodac con Agar TSI (30) -Desinfectante Manos -Plumon Permanente (vidrio)

Mtodo: 1. El docente a cargo, mostrar los elementos de uso habitual en el Laboratorio de Microbiologa y su correcta manipulacin 2. Para demostrar la presencia de microorganismos ambientales, se dejarn 2 placas Petri con Agar Plate Count abiertas y expuestas al aire por 15 mins. Se cierra, se rotula debidamente y se incuba a 36 C por 48 h. 3. Para el control de superficies lisas se utilizar el mtodo de placas RODAC (Replicate organism direct agar contact), el alumno utilizar una trula estril para tomar una muestra y luego proceder a la siembra. Luego la placa se incuba a 36 C por 24- 48 h. 4. Para la toma de muestras de manos se pasarn las manos sin lavar sobre la superficie del agar de una placa Petri conteniendo agar Plate Count, se debe tener la precaucin de no romper el agar. Posteriormente el alumno se lavar las manos con desinfectante y realizar la misma operacin con las manos limpias. Se incubarn las placas a 36 C por 24 - 48 h. 5. Para demostrar el mecanismo directo sin contacto fsico el alumno toser sobre una placa de Petri de agar Plate Count directamente. Se realizar el mismo procedimiento de rotulacin e incubacin. NOTA: todas las placas sembradas, deben ser claramente rotuladas en la base y colocadas en una bandeja en forma invertida para ser llevadas a la estufa Pasteur a 36 C.

SESION N 4 Seminario: 1-Naturaleza, preparacin y tipos de medios de cultivo para uso microbiolgico. Test de salida

SESION N 5 Preparacin y Esterilizacin de Medios de Cultivo Objetivos: Conocer los diversos medios de cultivo, sus caractersticas, propiedades y diferenciacin en su utilizacin. Materiales: Medios cultivo. Balanza. Esptula. Papel de aluminio. Tiras control esterilizacin. Frascos de 250cc con tapa rosca. Vasos precipitados de 1L. Probeta de 1 L. Agua destilada Mtodo: 1. El docente evaluar mediante interrogacin a los alumnos sobre la preparacin y constitucin de los medios de cultivo. 2. El docente interrogar a los alumnos sobre medios de cultivo. 3. El docente y los alumnos comentarn sobre las particularidades y utilidad de cada uno de los Medios de Cultivo. 4. Para la preparacin del medio de cultivo se debe seguir las indicaciones del fabricante. Cuando el agar ya se encuentra listo se distribuye en porciones que no ocupen ms de 1/3 del envase. Estos debern llevar un control de esterilizacin en autoclave a 121 C por 15 mins. 5. Los medios sern puestos en placas Petri para sesin de siembra

NOTA: Los alumnos que no manejen conocimiento terico durante la evaluacin no podrn participar de la sesin prctica.

SESION N 6 Seminario: 1-Tipos de Siembra, Reconocimiento de colonias y Tinciones en microbiologa

SESION N 07 Reconocimiento de colonias Objetivos: 1- El alumno deber observar las colonias de la siembra anterior (3 medios). Materiales: Mtodo: 1- El alumno mediante la lupa observar realizando un anlisis del aspecto colonial de los cultivos. (Tamao, Forma, Pigmento, Bordes, Consistencia, Apariencia). 2- El alumno realizar un informe de la sesin. Lupa Placas y tubos sembrados

SESION N 08 Tincin de GRAM Objetivo: 1- El alumno debe realizar una tincin de GRAM con las colonias obtenidas de la siembra en el prctico anterior. Materiales: Placas Contaminadas con colonias. Cristal violeta. Lugol. Alcohol acetona. Safranina. Agua destilada. Portaobjetos.

Mtodo:

Aceite de inmersin. Microscopio ptico. Asa. Mechero Bunsen. Alcohol de 70 C. Toalla Papel. Recipiente para desecho portaobjetos. Alcohol etlico puro.

1- El docente encargado mostrar a los alumnos como se realiza una tincin de GRAM. 2- Los alumnos procedern a realizar y observar en el microscopio una tincin de GRAM. 3- El alumno deber dibujar e interpretar la observacin al microscopio. Informe grupal escrito

SESION N09 Seminario: Cultivo Anaerobios

SESION N 10 Siembra de Bacterias Anaerobias Objetivos: 1- El alumno debe conocer y aplicar mtodos de aislamiento bacteriano en anaerobiosis. Materiales: Agar sangre Hemina Menadiona Hisopo estril Guantes de procedimiento Cmara de anaerobiosis Sobres GasPack Indicador de anaerobiosis Mechero Bunsen Alcohol 70

Toalla de Papel

Mtodo: - El alumno tomar una muestra a su compaero Intraoral con un hisopo estril, esta muestra se sembrar sobre una placa con agar sangre Hemina Menadiona la que ser incubada en anaerobiosis durante 48 h. a 37C. SESION N11 Lectura e interpretacin de resultados. Los alumnos podrn realizar tincin de GRAM para ver agrupacin y morfologa bacteriana de la siembra obtenida en la sesin N 13 *Entrega informe grupal escrito. . SESION N 12 Seminario: 1-Hongos y Virus SESION N 13 Siembra Hongos y Control ambiental Objetivos: Demostrar al alumno los mtodos de siembra Hongos Hacer que el alumno practique la metodologa de siembra de Hongos (mohos y levaduras)

Materiales: -Mascarillas. - 60 Placas Agar Saboureau con cloranfenicol. -Asas. -Mechero Bunsen. -Alcohol 70.

-Toalla Papel. -Muestras de Mohos y Levaduras.

Mtodo: 1- Para demostrar la presencia de hongos ambientales, se dejarn 2 placas Petri con Placas Agar Saboureau con cloranfenicol abiertas y expuestas al aire por 15 mins. Se cierra, se rotula debidamente y se incuba a 25 C por 5 a 7 das. 2- El docente encargado demostar a los alumnos como sembrar en las placas de Agar Saboureau una muestra de moho o levadura. 3- Los alumnos debern sembrar una muestra de hongo e incubarn sus placas a 25 C por 5 a 7 das.

SESION N 14 Lectura y diferenciacin de Hongos Objetivos: El alumno deber diferenciar las colonias de mohos y levaduras.

Materiales: 1234567Mtodo: El alumno deber realizar las preparaciones en portaobjetos. El alumno observar las colonias e identificar que tipo de hongo se encuentra presente. Lupa. Portaobjeto. Cubreobjeto. Asa. Suero Fisiolgico. Mechero. Mascarilla.

*entrega informe grupal escrito.