RPB v20n2

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACuLTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS
Rev. peru. biol. ISSN 1561-0837
PERuANA DE BIOLOGA
REVISTA
VOLumEN 20
DICIEmbRE, 2013
LIMA, PER
NmERO 2
Publicacin cientfica de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Rector Dr. Pedro Atilio Cotillo Zegarra Vicerrector de Investigacin Dr. Bernardino Ramrez Bautista Consejo Superior de Investigacin Dr. Manuel Gngora Prado Decana de la Facultad de Ciencias Biolgicas Mag. Olga Bracamonte Guevara Instituto de Investigacin en Ciencias Biolgicas Antonio Raimondi Mag. Ins Miriam Grate Camacho La Revista Peruana de Biologa es una publicacin cientfica arbitrada, producida por el Instituto de Ciencias Biolgicas Antonio Raimondi, Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Per, y auspiciada por el Vicerrectorado de Investigacin. La Revista es publicada tres veces al ao (abril, agosto y diciembre) y esta dedicada a la publicacin de artculos cientficos originales e inditos de las reas de biodiversidad, biotecnologa, ecologa y biomedicina. La Revista publica los trabajos realizados por acadmicos e investigadores nacionales y extranjeros, en idioma espaol o ingls. Los trabajos recepcionados son evaluados por rbitros segn criterios internacionales de calidad, creatividad, originalidad y contribucin al conocimiento. La Revista es publicada simultneamente en la pgina web de la Universidad.
REVISTA PERuANA DE BIOLOGA
Comit Editor Editor Jefe Leonardo Romero, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Editores asociados Dra. Rina Ramrez, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Dra. Mnica Arakaki-Makishi, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Dra. Diana Silva Dvila, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Dra. Blanca R. Len, Profesora Honoraria, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. The University of Texas at Austin, Geography and the Environment, Faculty Member, Estados Unidos. Dr. Carlos Pea, Laboratory of Genetics, Department of Biology, University of Turku, Finlandia. Cesar Arana, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Jos Roque, Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
Comit consultivo en los recientes nmeros Maximilian Weigend Mnica Romo Freie Universitt Berlin- Alemania Asociacin Peruana para la Conservacin de la Naturaleza- Per Hlio Ricardo da Silva Renato Guevara-Carrasco Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Brazil Instituto del Mar del Per- Per Carlos Frederico Duarte da Rocha Reynaldo Linares-Palomino Universidade do Estado do Rio de Janeiro- Brasil Universidad Nacional Agraria La Molina- Per Fabrcio Rodrigues dos Santos Marcel Gutirrez-Correa Universidade Federal de Minas Gerais- Brasil Universidad Nacional Agraria La Molina - Per Davor Vrcibradic Gretty K. Villena Universidade do Estado do Rio de Janeiro- Brasil Universidad Nacional Agraria La Molina - Per Berta Calonge Camargo Gerardo Lamas Pontificia Universidad Javeriana, Bogot, Colombia Universidad Nacional Mayor de San Marcos- Per Sergio Solari Pablo Ramrez Universidad de Antioquia- Colombia Universidad Nacional Mayor de San Marcos- Per Finn Borchsenius Juan Tarazona Aarhus University- Denmark Universidad Nacional Mayor de San Marcos- Per Julissa Roncal Armando Yarlequ Aarhus University- Denmark Universidad Nacional Mayor de San Marcos- Per Arnaud Bertrand Manuel Tantalen IRD. Institut de recherche pour le dveloppement- Francia Universidad Peruana Cayetano Heredia- Per Francis Kahn Nigel Pitman IRD. Institut de recherche pour le dveloppement, - Francia Duke University- USA Jean-Christophe Pintaud Maria del Carmen Ulloa Ulloa Institut de Recherche pour le Dveloppement- Francia University of Missouri- USA Mutsunori Tokeshi Blanca Len Kyushu University - Japon University of Texas at Austin - USA Francisco Alonso Sols Marn Kenneth Young Universidad Nacional Autnoma de Mxico- Mxico University of Texas at Austin USA Paul Velazco American Museum of Natural History, USA
Facultad de Ciencias Biolgicas, UNMSM- La Revista Peruana de Biologa publica artculos de acceso abierto, distribuido bajo los trminos de la Licencia de Atribucin Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 3.0 de Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/deed.es_ES), que permite el uso no comercial, distribucin y reproduccin en cualquier medio, siempre que la obra original sea debidamente citadas. Para uso comercial, por favor pngase en contacto con editor.revperubiol@gmail.com / decanobio@gmail.com Foto en la caratula: Ganadora del concurso de fotografa por la Semana de Biologa 2013. Gaviota de Cabeza Gris y Zarapitos trinadores, en el humedal Poza la Arenilla, La Punta Callao. Jorge Podesta
Resumida/Indizada (Abstracted/Indexed) en: Peridica (ndice de Revistas Latinoamericanas en Ciencias), LIPECS (Literatura Peruana en Ciencias de la Salud), Zoological Record (BIOSIS), Scielo (Scientific Electronic Library Online), Index to American Botanical Literature (The New York Botanical Garden), BIOSIS Previews, Biological Abstracts (BIOSIS), ProQuest (Biological Science Journals), Redalyc, CABI, AGRICOLA.
Revista Peruana de Biologa Hecho el Depsito Legal 98-3017 Rev. peru. biol. - ISSN-L 1561-0837 Rev. peru. biol. - ISSN 1561-0837 Rev. peru. biol. - ISSN 1727-9933 (on line) http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/rpb/ http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/biologia/biologiaNEW.htm http://redalyc.uaemex.mx/
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REVISTA PErUANA DE BIOLOGA

Rev. peru. biol. ISSN-L 1561-0837
Volumen 20
Diciembre, 2013 CONTENIDO
Nmero 2
OBITUARIO
117 In memoriam Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez: Noviembre 1926 - octubre 2013 In memoriam Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez: November 1926 - October 2013 Leonardo Romero
TRABAJOS ORIGINALES
121 Blakea nareliana (Melastomataceae), a new species from the upper Huallaga in Northern Peru Blakea nareliana (Melastomataceae), una nueva especie del Alto Huallaga, en el norte del Per Rainer W. Bussmann Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae) a new record for the Flora of Peru Eric F. Rodrguez Rodrguez, David A. Neill, Sandra J. Arroyo Alfaro y Jos R. Campos de la Cruz
125 Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae) un nuevo registro para la Flora del Per
129 Revision of the genus Lolliguncula Steenstrup, 1881 (Cephalopoda: Loliginidae) off the Pacific Coast of South America 45 Revisin del gnero Lolliguncula Steenstrup, 1881 (Cephalopoda: Loliginidae) frente a la costa del Pacfico de Amrica del Sur Franz Cardoso1 and Frederick G. Hochberg2 Composicin del zooplancton en cinco lagos de la parte alta del ro Juru, Estado de Acre, Brasil Maria Jos Alencar dos Santos, Erlei Cassiano Keppeler, Lisandro Juno Soares Vieira, Alzenira Jacob Serra and Antonio Sergio Ferraudo Biodegradacin del explosivo tetranitrato de pentaeritritol (PETN) por bacterias aisladas de ambientes mineros Biodegradation of the explosive pentaerythritol tetranitrate (PETN) by bacteria isolated from mining environments Yerson Durn, Christian Andrade, Armando Martnez, Tito Snchez, Fernando De la Cruz, Pablo Ramrez
137 Zooplankton composition in five oxbow lakes from the Upper Juru River, Acre State, Brazil
151 Estudio bioqumico del veneno de Tityus kaderkai (Scorpiones: Buthidae) con notas sobre su distribucin y hbitat en el Per Biochemical study of Tityus kaderkai (Scorpiones: Buthidae) venom with notes on its distribution and habitat in Peru Enrique Escobar, Rosalina Tincopa y Jos A. Ochoa Isolation and characterization of Escherichia coli O157:H7 from ground beef cattle in Lima-Peru Carmen R. Mndez, Germn Vergaray, Hilda Y. Morante, Paulo R. Flores y Roger A. Gamboa La deteccin de Bartonella spp. y Rickettsia spp. en pulgas, garrapatas y piojos recolectados en las zonas rurales de Per Abraham G. Cceres, Carlos P. Padilla Rojas, Javier Arias Stella Gerardo Huatuco Crisanto, Antero Gonzales Prez (Contina...)
159 Aislamiento y caracterizacin de Escherichia coli O157:H7 a partir de carne molida de bovino en Lima-Per
165 Detection of Bartonella spp. and Rickettsia spp. in fleas, ticks and lice collected in rural areas of Peru
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171 Siete nuevos registros de Arctiini (Lepidoptera: Erebidae: Arctiinae) para Per Seven new records Arctiini (Lepidoptera: Erebidae: Arctiinae) to Peru Juan Grados, Carlos Espinoza, Juan Jos Ramrez y Pedro Centeno Brachionidae (Rotifera: Monogononta) from El Paraso albufera and report of Brachionus ibericus in Peru Emily Toscano y Ruperto Severino Biological characteristics of one Pteria sterna population (Bivalvia: Pteriidae) from Zorritos, Tumbes, Peru Elmer Ordinola, Solange Alemn y Manuel Vera
177 Brachionidae (Rotifera: Monogononta) de la albufera El Paraso y el reporte de Brachionus ibericus en el Per
181 Caractersticas biolgicas de una poblacin de Pteria sterna (Bivalvia: Pteriidae) en Zorritos, Tumbes, Per
NOTAS CIENTFICAS
187 Registro de un par madre-cra de ballena franca austral (Eubalaena australis) en la costa de Lima, Per Record of mother-calf pair of southern right whales (Eubalaena australis) off the coast of Lima, Peru Mariana Orihuela y Davis Cortegana-Arias
189 Flotabilidad y similitud del nado de Manta birostris (Elasmobranchii: Myliobatidae) con el ciclo de vuelo de Columba livia (Aves: Columbidae) Buoyancy and similarity of the swimming of Manta birostris (Elasmobranchii: Myliobatidae) with the flying cycle of Columba livia (Aves: Columbidae) Ivn Meza Vlez
197 Ampliacin del rango geogrfico del Escorpin de Agua Curicta scorpio Stl, (Hemiptera: Nepidae) y primer registro para Costa Rica Geographic range extension of the Waterscorpion Curicta scorpio Stl, (Hemiptera: Nepidae) and first record for Costa Rica Federico Herrera Electro bioremedation of oil bottoms tank Graciela N. Pucci, Adrin J. Acua y Oscar H. Pucci
199 Electro bioremediacin de fondos de tanques petroleros
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Rev. peru. biol. 20(2): 117 - 120 (Diciembre 2013) FACULTAD DE C IENCIAS BIOLGICAS UNMSM
IN MEMORiAM Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez

ISSN-L 1561-0837
OBITUARIO In memoriam Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez: Noviembre 1926 - octubre 2013
In memoriam Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez: November 1926 - October 2013
Leonardo Romero
Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Ciudad Universitaria, Av. Venezuela s/n. Apartado postal 110058, Lima 11. Email: lromeroc@unmsm.edu.pe Citacin: Romero L. 2013. In memoriam Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez: Noviembre 1926 - octubre 2013. Rev. peru. biol. 20(2): 117 - 120 (Diciembre 2013)
El doctor Pedro Aguilar Fernndez falleci el 2 de octubre de 2013. Naci en Caete, al sur de Lima, el 28 de noviembre de 1926. Colaborador de nuestra revista y colega. Conocido en el mbito de las ciencias biolgicas peruanas, por su participacin en diferentes actividades acadmicas y profesionales. Los acadmicos e investigadores tendremos muchos motivos para recordar su paso por la vida, encontraremos su presencia en sus trabajos de insectos de las lomas, entomologa agrcola, sobre escorpiones, araas, crustceos y otros ms. Los profesionales bilogos lo recordaremos por su entusiasmo en darle vida a esta labor, fue Pedro Aguilar uno de los miembros fundadores del Colegio de Bilogos del Per, y quien propuso el Da del Bilogo
Los autores. Publicado por la Revista Peruana de Biologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Este es un artculo de acceso abierto, distribuido bajo los trminos de la Licencia de Atribucin Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 3.0 de Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/deed. es_ES), que permite el uso no comercial, distribucin y reproduccin en cualquier medio, siempre que la obra original sea debidamente citadas. Para uso comercial, por favor pngase en contacto con editor.revperubiol@gmail.com.
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Romero
...siendo estudiante del penltimo ao, el 27 de noviembre [1947], en la reunin de homenaje y en agradecimiento al Prof. Augusto Weberbauer, fecha que posteriormente se oficializo con Decreto Ley N. 19364, publicado en El Peruano del 18 de abril de 1972, decreto que crea el Colegio de Bilogos del Per. Pedro Aguilar obtuvo su bachiller en Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos en 1949 con la tesis: Insectos polinizadores de plantas silvestres y asilvestradas de Lima y alrededores, y el grado de Doctor en Ciencias Biolgicas en la misma universidad en 1954 con la tesis: Adaptaciones de los artrpodos a la vida en las lomas de los alrededores de Lima. Ambas tesis contaron con el patrocinio y orientacin de Wolfgang K. Weyrauch. El doctor Aguilar fue docente en la Universidad Nacional Mayor de San Marcos entre 1959 y 1969. Sin embargo fue en la Universidad Agraria La Molina donde desarrollo ms intensamente su labor docente desde 1963 a 1988, llegando a ser Jefe del Departamento de Biologa (1970 1974). Como profesor se encarg de cursos como: Invertebrados Eucelomados, Entomologa, Biologa General, Ecologa General, Zoologa General, Zoologa de Invertebrados. A estas labores acadmicas se sumaban sus labores profesionales de entomlogo agrcola, como Jefe del Servicio Entomolgico en el Valle de Lurn (19541959) y en el Valle de Mala (1960-1964). La formacin acadmica de Pedro Aguilar, su experiencia y su actitud cientfica lo llevaron al trabajo de editor cientfico de revistas, libros y otras monografas. Fue el Director-Editor fundador de la Revista Peruana de Entomologa (1958 1997), la primera revista peruana en el Biological Abstract y que en 1964 recibi de la UNESCO un premio como la mejor revista cientfica de la regin. Tambin fue Director Editor Fundador del Boletn de la Sociedad Entomolgica del Per (1959 1973), Director de Anales Cientficos de la UNALM por diez aos, miembro del Comit de Redaccin del Boletn de Lima por 8 aos. Desde 1996 al 2013 fue Editor Cientfico de las publicaciones seriadas del Instituto del Mar del Per: el Informe, el Boletn IMARPE, la Memoria Institucional, el Anuario Cientfico Tecnolgico y de publicaciones especiales. Tambin fue Editor del Boletn de Investigacin del Instituto Tecnolgico Pesquero del Per (2003 2010). Tuvo a su cargo la conduccin editorial del libro Principios del Control de las Plagas Agrcolas de Fausto H. Cisneros (1980, 1ra. edicin), del Libro Rojo de la Fauna Silvestre del Per de Vctor Pulido (1991), del libro Manual de crianza de algunos insectos benficos a la agricultura peruana de Carlos E. Bartra (1994), del libro Control Qumico de Insectos de Fausto H. Cisneros (2012). Adems, fue el Editor de libros de resmenes de diversos congresos de zoologa, entomologa, ornitologa y variados documentos y monografas de la FAO y miembro del Comit Nacional para Edicin de Publicaciones Cientficas (CONCYTEC, 2002 2007). En honor a su labor acadmica, el doctor Pedro Aguilar fue nominado Profesor Emrito del Departamento de Biologa de la Facultad de Ciencias de la Universidad Nacional Agraria La Molina (27 setiembre de 2002) y Profesor Honorario de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Ricardo Palma (17 agosto de 2007). Tambin, en octubre de 2007 fue reconocido por la Asamblea General Ordinaria de la Sociedad Entomolgica del Per como Co-Presidente Honorario Vitalicio, y por el Colegio de Bilogos del Per como Socio Fundador,
en ocasin del 40 aniversario de la Ley de Creacin del Colegio de Bilogos (18 de abril 2012). Recibi a lo largo de su carrera otras distinciones honorficas y premios, entre los que podemos resaltar el Premio BAYER (1978, 1995) y el Premio WILLE (1989) de la Sociedad Entomolgica del Per, Medalla de Oro Sociedad Entomolgica del Per por 50 aos de actividad entomolgica (1998); Medalla al Mrito Extraordinario por su destacada labor profesional, docente e investigacin en entomologa del Colegio Nacional de Bilogos del Per (2002); y el Premio CAMBIE 2003 por Conservacin del Ambiente otorgado por la Universidad Cientfica del Sur. El doctor Pedro Aguilar fue un caballero, no solamente por su trato cortes, infaltable sonrisa y fuerte apretn de manos al saludarnos, sino por lo que sus obras nos delinean, una persona que senta un compromiso con la sociedad, con el entomlogo, con el bilogo. Dos de sus publicaciones al respecto estn en las pginas de la Revista Peruana de Biologa: El Da del bilogo y su significado en el desarrollo de las ciencias biolgicas en el Per (Rev. peru. Biol. 2001. 7(2):93-101), y Comentarios sobre el desarrollo de la Zoologa en la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Rev. peru. Biol. 2008. 15 (2):7-14), en ellas podemos leer sobre su visin de los bilogos como constructores de grandes obras, de la integracin de sus acciones, la interpretacin de sus logros y xitos, l le proporciona una ilacin a la incipiente historia de la biologa peruana escrita por los bilogos peruanos. Esto nos permite comprender su inters y dedicacin a los grupos donde perteneci acadmica y profesionalmente. En el Per existen pocas revistas cientficas, menos aun de ciencias biolgicas. Pedro Aguilar tuvo la conduccin editorial de notables e importantes revistas cientficas, podramos decir que l fue el primer editor de ciencias biolgicas en el Per. En uno de sus discursos en referencia a Weberbauer l cito a Jorge Basadre: Su paciencia de hormiga llev a Weberbauer a construir fragmento trasfragmento, una obra gigante. Por su cuidado y escrupulosidad en los detalles de ella, parece que hizo suyas las palabras de Goethe: que cada paso sea una meta sin dejar de ser un paso. Resulta profundo por la impotencia para ser superficial. No irradia deslumbradora luz sino precisa claridad. Servidor fiel de la inteligencia, separa lgicamente, distingue, clasifica y luego junta su labor a la que da genial unidad. Es, por encima de los mtodos que le corresponden en su propio campo cientfico, lo contrario de quienes confunden con vehemencia, de quienes citan sin precisin, de quienes se apuran, de quienes se dispersan. En un plano que cabe llamar filosfico, se debe ensalzar su fundamental eficacia. No lo empequeecen ni siquiera la aspereza polmica o el egosmo cientfico. Este hombre menudo y tmido, con pocos amigos y discpulos, que muchas veces conoci la soledad y a veces el hambre, realiz una de las contribuciones ms formidables en el Per del siglo XX."[p:3016, Historia de la Repblica del Per, 1822 1933, Tomo 15, Editada por la Empresa Editora El Comercio S. A. Lima, 2005] Podramos vislumbrar en estas palabras que dedica Basadre a Weberbauer, lo que Aguilar adoptara como el paradigma para l y otros bilogos. Podemos separar en este prrafo directrices para ser escrupulosos en el detalle, sin dejar de saber que an no
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IN MEMORiAM Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez
acaba la obra y que siempre debemos continuarla, ser precisos, profundos, eficaces, ignorar las mezquindades y el egosmo y sobre todo no olvidar que estamos construyendo una obra formidable. La obra del doctor Pedro Aguilar nos quiso decir eso. Esta pequea nota no hubiera podido ser escrita sin la ayuda de Emira Antonietti del Instituto del Mar del Per, a quien le quedo muy agradecido. Publicaciones cientficas del doctor Pedro Aguilar
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Romero
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Rev. peru. biol. 20(2): 121 - 124 (Noviembre 2013) FACULTAD DE C IENCIAS BIOLGICAS UNMSM
BLAKEA NARELiANA a new species from the upper Huallaga

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Blakea nareliana (Melastomataceae), a new species from the upper Huallaga in Northern Peru
Blakea nareliana (Melastomataceae), una nueva especie del Alto Huallaga, en el norte del Per
Rainer W. Bussmann
William L. Brown Center, Missouri Botanical Garden, PO Box 299, Saint Louis, MO 63166-0299, USA. Email Rainer Bussmann: rainer.bussmann@mobot.org
Abstract A new Peruvian species of Blakea (Melastomataceae) is described. Blakea nareliana is a small tree, endemic to the cloud forest zone in the northern Andean Huallaga area of Peru. This region is highly diverse and under-collected due to difficult access. Currently the new species is only known from one population at the type locality. However, extensive collections in the wider region have led to the discovery of many previously unknown populations of other rare Melastomataceae. It is to be hoped that future collecting efforts in the region will yield more material of Blakea nareliana. Keywords: Peru; endemism; montane forest; cloudforest; Blakeeae Resumen Se describe una especie nueva peruana de Blakea (Melastomataceae). Blakea nareliana es un pequeo rbol, endmico de la zona de bosque nublado en la zona del Huallaga en los Andes del norte del Per. Esta regin es conocida por su gran diversidad, pero tambin ha sido poco estudiada debido a su difcil acceso. Actualmente, la nueva especie slo se conoce de una poblacin en la localidad tipo. Sin embargo, expediciones que hemos realizado en toda la extensin de la regin han permitido encontrar nuevas poblaciones de Melastomataceae consideradas anteriormente muy raras, y es de esperar que ms material de Blakea nareliana se pueda encontrar en un futuro prximo. Palabras clave: Per, endemismo, bosque montano, bosque nublado, Blakeeae
Citacin: Bussmann R.W. 2013. Blakea nareliana (Melastomataceae) a new species from the upper Huallaga in Northern Peru. Rev. peru. biol. 20(2): 121 - 124 (Diciembre 2013)
Introduction As historically circumscribed, the Blakeeae (Melastomataceae) include two genera, Blakea P. Browne and Topobea Aubl, both characterized by baccate fruits, axillary flowers with two pairs of decussate bracts, and ovoid to pyramidal seeds. Blakea is characterized by laterally compressed, short, obtuse, anthers with two apical pores (Wurdack, 1980). According to Almeda (1990) these differences seemed to be, however, insufficient for separating the two genera in Central America, although they seemed to be effective in South America (Cotton & Matetzki 2003). Phylogenetic analyses of the Blakeeae (Penneys & Judd 2011, 2013a) have now demonstrated the non-monophyly of the former genera, thus Topobea has been transferred to Blakea (Penneys & Judd 2013b). The Catalogue of Flowering plants and Gymnosperms of Peru (Brako & Zarucchi 1993) lists 18 species of Blakea s.l. Unfortunately the sampling for many species is poor. Northern Peru and southern Ecuador are particularly rich in endemic species. The Huancabamba depression, the lowest section of the central Andean Cordillera, permits an exchange between the floras and faunas of the Amazon basin and the Pacific lowlands. This greatly contributes to its richness in endemic species (Barthlott et al. 1996, Borchsenius 1997, Valencia et al. 2000, Weigend 2002, Cotton et al. 2004; Bussmann 2005, 2006; Bussmann et al. 2010, Bussmann & Paniagua in press), which are well exemplified by the Melastomataceae. The new Blakea described here, following a phenetic/morphological species concept, adds yet another species of Melastomataceae to the rich flora of the region.
Presentado: Aceptado: Publicado online:
09/04/2013 17/05/2013 09/12/2013
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Bussmann
Blakea nareliana Bussmann sp. nov. (Figs. 1 & 2) Haec species BLAKEAE PENDULiFLORAE Almeda similis, foliis menoribus lanceolatus vs. ovatus, pedicelli longissimi (2132 vs. 36 cm), bracteae purpurea, longioribus y amplioribus (4050 x 4050mm vs. 1725 x 1218mm), basis filamentis conatus, styli longioribus (2535 vs. 1718mm) differt. Type: PERU. Region Amazonas, Provincia Chachapoyas, Districto Leymebamba. Cloud forest along trail from La Esperanza to Laguna de Los Condores. Disturbed cloud forest dominated by Weinmannia and Polylepis. 064924S 0774236W, 29003250 m. 30 June 2010. A.E. Glenn, R.W. Bussmann, C. Vega & G. Chait 524 (holotype HAO!, isotypes MO!, NY!). Tree 46 m tall. Young stems and abaxial foliar surfaces with well developed, 0.21 mm long, wooly, dendritic, rusty brown hairs with well developed axis and moderate number of terete short to moderately long arms (Wurdack 1980, indumentum type 26), persistent; Mature leaves of each pair equal in size, 3.55.5 x (8)11.5(13) cm, elliptic-lanceolate, cuspidate apically and acute to obtuse basally, 5-nerved, secondary lateral veins 12 mm distant chartaceous to coriaceous, entire, with broadly revolute margins, brownish green and glabrous adaxially, pale rusty-brown abaxially; petioles 1830 (35) mm long and 1.52.5 mm diameter; petiole length to lamina length 1:(2.2)2.5(4); lamina length to width (1.7)2(3.9):1. Flowers 6-merous, pendent, 12(4) per axil; peduncles 2132 cm long, essentially glabrous. Floral bracts elliptic to elliptic-ovate, entire, purplishred, essentially glabrous, obtuse to rounded apically, free; outer bracts 3540 x 4045 mm, with 57 mm long, 23 mm wide apex; inner bracts 2025 x 1525 mm with 2 mm long, 1 mm wide apex, with prominent venation. Hypanthia (at anthesis) 23 mm long to the torus and 45 mm wide, campanulate, glabrous. Calyx lobes 1012 mm long and 810 mm wide basally between sinuses, persistent and mostly erect to somewhat spreading on mature hypanthia, ovate, entire, sparsely hairy, smooth hairs distributed throughout. Petals 2025 x 2535 mm, obovate, rounded apically, yellowish-green, entire, fleshy, glabrous, more or less concave and imbricate when almost fully expanded. No completely expanded flowers were found. Stamens isomorphic, free; filaments 3.54 x 1.5 mm, fused at the base, forming a 330 degree circle around style, glabrous, ligulate; anthers at anthesis 23.5 mm long and 1.52 mm wide, glabrous, evenly dark purple, laterally compressed, with 2 truncate or somewhat dorsally inclined circular pores; connective thickened dorsally near the point of filament insertion and dilated basally into a short deflexed caudiform appendage. Style 2535mm long, straight, glabrous, conspicuously exserted; stigma truncate. Ovary inferior, 6-locular. Mature berries 1.52cm long, 1.5 cm wide, oval, bright red. Seeds 11.5 mm long, bright red, clavate to narrowly pyriform, smooth. Blakea nareliana most closely resembles Blakea penduliflora Almeda described from Costa Rica (Almeda 1980), and could even be closely related to this species. It differs from Blakea penduliflora in having smaller, elliptic-lanceolate (vs. ellipticovate) leaves, very long peduncles (2030 vs. 3 cm), much larger (4050 mm vs. 25 mm long and wide), reddish-purple bracts, basally fused filaments, much longer styles (2530 vs. 1718mm). Also in B. penduliflora the outer floral bracts are
connate basally for about 23 mm unlike the new species described here and the petals are green with a flush of purple basally on the adaxial surface. The floral peduncles (pedicels) are also conspicuously lenticellate but no mention is made of this in the new species so perhaps they are completely glabrous. Additional specimens examined: PERU. Region Amazonas, Provincia Chachapoyas, Districto Leymebamba. Cloud forest at Laguna de Los Condores. Disturbed cloud forest dominated by Weinmannia and Polylepis. 064924S 0774236W, 3000 m. 20 May 2012. L. Cotrina 002 (HAO!, Herbario INBIA Per, Trujillo). Distribution and conservation status Known only from the type locality in the Peruvian region Amazonas, Chachapoyas province, Leymebamba district on the eastern slopes of the Northern Peruvian Andes. Blekea nareliana was found around in the Lagunas de los Condores area, at 29003250 m. Individuals of Blakea nareliana were found in small groups in three areas in dense cloud forest stands near small creeks and lakes. Blakea nareliana flowers mostly in the wet season from March May and fruits MayJune. The species must be regarded as critically endangered (CR A3B2ab(i,iii,iv)) according to IUCN (2013) because it is known only from a restricted area of less than 10km2 and the entire population is outside protected areas. Etymology Blakea nareliana is named in honor of Narel Paniagua, for her dedication to the study and conservation of the Andean and Amazonian flora and its traditional uses. Acknowledgements The study was financed through funds from William L. Brown Center at Missouri Botanical Garden. We gratefully acknowledge the tireless help of Ing. Carlos Vega Ocaa, INBIAPAERU, for his constant help with the collection of material. Thanks to Barbara Alongi for the line drawings. Literature cited
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BLAKEA NARELiANA a new species from the upper Huallaga
Figure 1. Blakea nareliana: A. Habit. B. Longitudinal section of flower. C./D. Anthers drawn from flower bud. E./F./G. Longitudinal sections of flowers (anthers removed). H. Berry showing 6-locular ovary. with seeds.
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Bussmann
Figure 2. Blakea nareliana: A.Habit and inflorescnece. B. Flower at post anthesis Inflorescence. C. Calyx lobes and ovary apex . D. Ovary locules . E. Longitudinal section of flower. F. Branch node. G. Leaf (Adaxial surface). H. Leaf (Abaxial surface).
Bussmann R.W. & N. Paniagua Zambrana. Axinaea ninakurorum (Melastomataceae) a new species from the northern Peruvian Merianeae hotspot. Arnaldoa. Cotton E. & S. Matezki. 2003. Ecuadorian Novelties in Blakea and Topobea (Melastomataceae). Brittonia, 55(1): 7381 Cotton, E., R.W. Bussmann, & P. Lozano. 2004. Three new Ecuadorian species of Axinaea (Melastomataceae). Nord. J. Bot. 23: 4955. IUCN Standards and Petitions Subcommittee. 2013. Guidelines for Using the IUCN RedList Categories and Criteria. Version 10. Prepared by the Standards and Petitions Subcommittee. Downloadable from http://www.iucnredlist.org/documents/RedListGuidelines.pdf. Penneys, D.S. & W.S. Judd. 2011. Phylogenetics and morphology in the Blakeeae (Melastomataceae). Int. J. Pl. Sci. 172: 78106.
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MAXiLLARiA JOSTii un nuevo registro para la Flora del Per

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae) un nuevo registro para la Flora del Per
Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae) a new record for the Flora of Peru
Eric F. Rodrguez Rodrguez1, David A. Neill2, Sandra J. Arroyo Alfaro1 y Jos R. Campos de la Cruz3
1 Herbarium Truxillense (HUT), Universidad Nacional de Trujillo. Jr. San Martn 392. Trujillo, PER. 2 Missouri Botanical Garden, P.O. Box 299, St. Louis, Missouri 63166-0299, U.S.A. 3 Museo de Historia Natural de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Av. Arenales 1256, Aptdo. 14-0434, Lima-14, PER. E-mail Eric F. Rodrguez: erodriguez@unitru.edu.pe E-mail Sandra J. Arroyo Alfaro: sandrarroyoa@yahoo.com E-mail David A. Neill: david.neill@mobot.org E-mail Jos R. Campos de la Cruz: joricampos@yahoo.es
Resumen
Se presenta a Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae) como una nueva adicin a la Flora del Per procedente de los substratos de roca arenisca de la Cordillera subandina de Huarango (provincia San Ignacio, departamento Cajamarca), una prolongacin surea de la Cordillera del Cndor rica en especies. Maxillaria jostii ha sido considerada como una especie endmica para Ecuador (Zamora-Chinchipe, Morona-Santiago); sin embargo, con el presente estudio se ampla su distribucin geogrfica hacia el Per. Esta nueva contribucin al conocimiento de la flora del pas es el resultado del trabajo de campo y de herbario, gracias al Proyecto Binacional Inventario Botnico de la Regin de la Cordillera del Cndor, Ecuador y Per, 2005-2007, desarrollado entre las instituciones: MO, HUT, LOJA y QCNE. La contrastacin especfica se realiz con las especies documentadas en el Catlogo de las Angiospermas y Gimnospermas del Per (Brako & Zarucchi 1993), Diez aos de adiciones a la flora del Per: 1993-2003 (Ulloa Ulloa et al. 2004) y Nuevas Adiciones de Angiospermas a la Flora del Per (Rodrguez et al. 2006b). Palabras clave: Flora del Per; nuevo registro; Maxillaria jostii; Cordillera del Cndor; Cordillera Huarango; roca arenisca.
Abstract
We present here to Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae) a new addition to the angiosperm Flora of Peru from sandstone substrate of the Sub-Andean Cordillera de Huarango (province of San Ignacio, department of Cajamarca), a southern prolongation to the very biodiverse Cordillera del Condor. Maxillaria jostii has been formerly considered a species endemic to southern Ecuador (Zamora-Chinchipe, Morona-Santiago), but with the present study extends its geographical distribution range to northern Peru. This new contribution to the knowledge of the Flora of Peru is the result of a combined fieldwork and herbarium effort, thanks to Binational Project named Botanical Inventory of the Cordillera del Condor Region of Ecuador and Peru, 2005-2007" and developed by the following scientific institutions: MO, HUT, LOJA and QCNE. The species reported here was compared against the list of species documented in the Catalogue of Flowering Plants and Gymnosperms of Peru (Brako & Zarucchi 1993) and Ten years of additions to the flora of Peru: 1993-2003 (Ulloa Ulloa et al. 2004) and Angiosperms additions to flora of Peru (Rodrguez et al. 2006b). Keywords: Flora of Peru, new record; Maxillaria jostii; Cordillera del Condor; Cordillera Huarango; sandstone substrate.
Citacin: Rodrguez Rodrguez E.F. , D.A. Neill, S.J. Arroyo Alfaro y J.R. Campos de la Cruz. 2013. Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae) un nuevo registro para la Flora del Per. Rev. peru. biol. 20(2): 125 - 128 (Diciembre 2013)
Introduccin Las adiciones a la Flora del Per siguen incrementndose aceleradamente gracias a la exploracin del territorio y por los estudios taxonmicos y sistemticos. A partir de las publicaciones de Brako & Zarucchi (1993) y Ulloa Ulloa et al. (2004) se han dado a conocer diversas contribuciones a la flora peruana; entre ellas, los resultados de las investigaciones desarrolladas por el Missouri Botanical Garden (MO) en colaboracin con el Herbarium Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo (Rodrguez et al. 2004; Rodrguez et al. 2006 a,b,c; Rodrguez et al. 2008; Rodrguez et al. 2011).
Presentado: Aceptado: Publicado online: 24/06/2013 23/07/2013 09/12/2013
Desde el ao 2005 las colecciones en la frontera de Per y Ecuador se han reiniciado y enfatizado, gracias al Proyecto Binacional Inventario Botnico de la Regin de la Cordillera del Cndor, Ecuador y Per, 20052007, desarrollado entre las institu-
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Rodrguez et al.
ciones MO, HUT, LOJA y QCNE (acrnimos en Holmgren et al. 1990). Como resultado de la revisin de las colecciones efectuadas para este Proyecto, procedentes de la Cordillera subandina de Huarango (provincia San Ignacio, departamento Cajamarca) una prolongacin surea del Cndor y rica en especies, se ha encontrado un taxn no listado hasta el presente para la flora del Per: Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae). En este trabajo se describe, ilustra y sustenta a esta especie como un nuevo registro para el Per. Materiales y mtodos El material estudiado corresponde a las colecciones efectuadas por los autores en las diversas expediciones botnicas realizadas a las mesetas de roca arenisca de la Cordillera subandina de Huarango (provincia San Ignacio, departamento Cajamarca), en un esfuerzo conjunto entre el Herbarium Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo, el Herbario del Missouri Botanical Garden (MO), el Herbario Nacional del Ecuador (QCNE) y el Herbario Loja (LOJA) de la Universidad Nacional de Loja, en el marco del Proyecto Binacional Inventario Botnico de la Regin de la Cordillera del Cndor, Ecuador y Per, 20052007. La toma de datos referidos a las caractersticas exomorfolgicas se realizaron in situ y el proceso de herborizacin se efectu siguiendo la metodologa convencional (Rodrguez & Rojas 2006). Adicionalmente al trabajo de campo se fij y conserv material en lquido (alcohol etlico al 70% o AFA) para estudiar la estructura floral. La contrastacin especfica se realiz con las especies documentadas en Brako & Zarucchi (1993), Ulloa Ulloa et al. (2004) y Rodrguez et al. (2006b). En base a la descripcin original (Dodson 2003), y por comparacin con los ejemplares colectados el ao 2001 en Ecuador [colecciones: L. Jost, D. A. Neill, P. E. Berry & J. M. Manzanares 3133 (MO!, QCNE!); D. A. Neill, P. E. Berry, J. M. Manzanares & L. Jost 13106 (MO!, QCNE!)] y con la fotografa 1226 de la coleccin de L. Jost et al. 3133 (Dodson 2002); fueron analizadas las caractersticas morfolgicas de tres colecciones efectuadas en el norte del Per entre los aos 2005 y 2006 [colecciones: E. Rodrguez R., E. Alvitez I. & S. Arroyo A. 2910 (HUT, MO); E. Rodrguez R., S. Arroyo A., J. Nez Z. & L. Campos G. 2958 (HUT, MO, QCNE, USM); E. Rodrguez R., S. Arroyo A. & J. Nez Z. 3083 (HUT, LOJA, MO, QCNE, USM)] [ver tambin las colecciones en W3 TROPICOS - Base de Datos del Missouri Botanical Garden Herbarium (MO) [MBG, http:// www.tropicos.org/; (Solomon 2012)]. Para la especie, se indica: el nombre cientfico en negrita y cursiva con la cita del nombre del autor, seguido de la referencia bibliogrfica original abreviada y del protlogo original del tipo (Dodson 2003; International Plant Names Index [IPNI, http:// www.ipni.org/; (IPNI 2012)]; [MBG, http://www.tropicos.org/; (Solomon 2012)]). El material botnico fue depositado en los herbarios: HUT, LOJA, MO, QCNE y USM (acrnimos en Holmgren et al. 1990). Son presentados, la descripcin (modificada de Dodson 2003), el material examinado (exsiccata), y los herbarios donde se encuentran depositados los especmenes entre parntesis (acrnimos en Holmgren et al. 1990), la discusin taxonmica con sus relacionados, la distribucin geogrfica, ecologa y
estado de conservacin para la especie presente en la provincia San Ignacio (Cajamarca), restringida a la zona fitogeogrfica de Amotape-Huancabamba (Weigend 2002); as como fotografas referidas al hbitat, hbito y vistas de las flores (Fig. 1). Resultados y discusin Maxillaria jostii Dodson Figura 1A-E Harvard Pap. Bot. 7: 437438, f. 1. 2003. Tipo: ECUADOR. Zamora-Chinchipe, cord. Huaracay, al este de cord. Cndor, 2000 m., 21 marzo 2001, L. Jost 3133 (Holtipo: RPSC). Planta cespitosa de hasta 40 cm de alto, rizoma corto; seudobulbos angostamente ovados, ligeramente aplanados, unifoliados en el pice, basalmente abrazados por 1 a 2 vainas foliceas que son dehiscentes en la unin con la lmina de la hoja, de hasta 2.5 cm de largo. Hoja peciolada, peciolo de hasta 2.5 cm de largo; lmina angostamente ovado-oblonga, de hasta 6 x 1.8 cm. Inflorescencia de hasta 23 cm de largo, erecta, terete, abrazada por 4(56)8 vainas ligeramente romas, de hasta 2.8 cm de largo cada una; brctea floral aguda, de hasta 2.7 cm de largo, adpresa al ovario y ms corta que ste; el ovario terete, con el pice encorvado hacia abajo, 2-2.5 cm x 0.30.4 cm en antesis. Flores nutantes, color rosado lustroso; spalos libres, patentes: el dorsal ntimamente asociado con los ptalos para formar una estructura en forma de capucha, de hasta 1.8 x 0.8 cm, ovado, agudo en el pice; spalos laterales oblicuos, oblongos, obtusos en el pice, unidos al pie de la columna, de hasta 2 x 0.7 cm; los ptalos conniventes con el spalo dorsal, mucho ms corto, oblicuos, angostamente ovados, agudos en el pice, de hasta 1.5 x 0.3 cm; el labelo de hasta 0.9 x 0.5 cm, trilobulado, los lbulos laterales erectos, el lbulo apical subterete, obtuso; callo lingiforme, de hasta 0.4 cm de largo; el pie de la columna de hasta 0.5 cm. Fruto cpsula dehiscente encorvada hacia abajo, marrn, de hasta 3.84 x 0.81 cm con las flores secas persistentes en el pice. Material estudiado: PER. Cajamarca, Provincia San Ignacio. Distrito Huarango. Cordillera Huarango, El Romerillo, 051626S 0784155W, 2035 m, 19 julio 2005, E. Rodrguez R., E. Alvitez I. & S. Arroyo A. 2910 (HUT, MO). Distrito Huarango, Cordillera Huarango (prolongacin al sur de la Cordillera del Cndor), Sector El Romerillo, 051611S 0784112W, 2370 2510 m, 22 abril 2006, E. Rodrguez R., S. Arroyo A., J. Nez Z. & L. Campos G. 2958 (HUT, MO, QCNE, USM). Distrito Huarango, Cordillera Huarango (prolongacin al sur de la Cordillera del Cndor), Sector El Romerillo. 051611S 0784112W, 2170 2370 m, 1 mayo 2006, E. Rodrguez R., S. Arroyo A. & J. Nez Z. 3083 (HUT, LOJA, MO, QCNE, USM). Fue descrita para Ecuador [Ecuador: Zamora-Chinchipe, cordillera de Huaracay, al este de cordillera del Cndor, 2000 m., 21 de marzo 2001, L. Jost 3133 (Holtipo: RPSC)] y nombrada en honor al Sr. Lou Jost quien particip en el descubrimiento de la especie (Dodson 2003). Este autor presenta otra publicacin en el ao 2003 en la revista Orquideologa 22(3): 199 (200, 219220; fig. 127; fotogr.) para la misma especie.
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MAXiLLARiA JOSTii un nuevo registro para la Flora del Per
Figura 1. Maxillaria jostii Dodson. (A) y (B) Hbitat natural de la especie en las crestas de roca arenisca de la Cordillera Huarango (prov. San Ignacio, dpto. Cajamarca, Per). (C) Hbito. (D) Flor, vista lateral. (E) Flor, vista ventral. Fotografas del espcimen E. Rodrguez et al. 3083 (HUT). Eric F. Rodrguez R.
Maxillaria jostii pertenece al grupo M. longipes Lindl. y las caractersticas sui gneris son las inflorescencias sumamente largas, las flores rosadas, nutantes, y los spalos arreglados como un parasol que cubren al labio pequeo y la columna (Dodson 2003). Existen ciertas variaciones en tamao entre los ejemplares analizados frente a la descripcin original. Para el nuevo registro el ancho de las hojas es mayor (1.8 versus 1.2 cm); la inflorescencia es ms larga (hasta 23 cm en ejemplares de la coleccin de E. Rodrguez et al. 3083 versus hasta 15 cm); las vainas de la inflorescencia presentan un mayor rango en nmero (48 versus
56) y son ms largas (hasta 2.8 cm versus hasta 2 cm); la brctea floral es tambin ms larga (2.7 versus 2.3 cm); y el ovario en antesis es ms pequeo (22.5 versus 3 cm). As mismo, se indica que el fruto, no visto en la descripcin original, es una cpsula dehiscente encorvada hacia abajo, marrn, de hasta 3.84 x 0.81 cm con las flores secas persistentes en el pice (coleccin: E. Rodrguez et al. 2910, 2958). Se enfatiza que Maxillaria Ruiz & Pav. s.l. proviene de un patrn polifiletico, lo cual ha conllevado a una nueva clasificacin; en este afn Szlachetko et al. (2012), basados en estudios morfolgicos y filogenticos a
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Rodrguez et al.
nivel molecular, han propuesto una nueva combinacin para este taxn: Calawaya jostii (Dodson) Szlach. & Sitko comb. nov. Sin embargo, para efecto de estas notas se conservar el nombre Maxillaria jostii Dodson en su circunscripcin original. Conocida como endmica para Ecuador en las localidades de Zamora-Chinchipe y Morona-Santiago pertenecientes a la Cordillera de Huaracayo (Cordillera del Cndor) [ver colecciones: L. Jost, D. A. Neill, P. E. Berry & J. M. Manzanares 3133 (MO!, QCNE!); D. A. Neill, P. E. Berry, J. M. Manzanares & L. Jost 13106 (MO!, QCNE!)] [MBG, http://www.tropicos.org/; (Solomon 2012)] e incluida en CITES-Apndice II. Con las nuevas colecciones realizadas en el norte del Per, el rango de distribucin geogrfica y poblacional son ms amplios, siendo considerada hasta este momento la Cordillera subandina de Huarango en la provincia de San Ignacio (Dpto. Cajamarca) como el lmite ms sureo (ver material estudiado). Al respecto, Rodrguez et al. (2009) indican que esta Cordillera presenta un vnculo florstico importante con la Cordillera del Cndor; cuyos territorios estn restringidos a la zona fitogeogrfica de Amotape-Huancabamba ubicada entre el sur de Ecuador y Norte del Per, y caracterizada por su elevada riqueza endmica (Weigend 2002). Es una planta terrestre, cespitosa propia de los substratos de roca arenisca (arena blanca) en la cresta de la cordillerra Huarango, asociada con especies de bosque arbustado tpicamente esclerfilo, tales como: Ilex obtusata Triana & Planch. (Aquifoliaceae), Baccharis genistelloides (Lam.) Pers., Dillandia subumbellata V.A. Funk & H. Rob. y Nordenstamia sp. (Asteraceae), Bomarea longipes Baker (Alstroemeriaceae), Pitcairnia truncata L.B. Sm., Puya sp. (Bromeliaceae), Clethra spp. (Clethraceae), Clusia sp. (Clusiaceae), Smilax sp. (Smilacaceae), Weinmannia spp. (Cunoniaceae), Dioscorea sp. (Dioscoreacae), Gaultheria reticulata Kunth y Macleania rupestris (Kunth) A.C. Sm. (Ericaceae), Macrocarpaea ericii J.R. Grant y Symbolanthus mathewsii subsp. vaccinioides J.E. Molina & Struwe (Gentianaceae), Eccremis coarctata (Ruiz & Pav.) Baker (Liliaceae), Miconia sp. (Melastomataceae), Epidendrum stenocalymmum Hgsater & Calatayud (Orchidaceae), Notopleura vargasiana C.M. Taylor (Rubiaceae), Chusquea sp. (Poaceae), Symplocos sp. (Symplocaceae), Araceae, Chloranthaceae, Lauraceae, entre otras. Sin embargo, en el lado peruano el rea que ocupa la especie es pequea y sus poblaciones son reducidas, fragmentadas y muy dispersas. La quema peridica intencional de la vegetacin por pobladores en trnsito (Jan-Romerillo-Nuevo Mundo) hace que esta especie se encuentre amenazada y en peligro. Agradecimientos Los autores expresan su gratitud a los Directores y Curadores de los herbarios HUT, MO, QCNE y USM, por hacer posible la revisin de sus colecciones. EFRR y SJAA agradecen a las autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo y Herbarium Truxillense (HUT), Per; DAN al Missouri Botanical Garden (MO); y JCC al herbario USM por el apoyo, permisos y facilidades brindados en la presente investigacin. A la National Science Foundation (NSF) por el soporte (NSF, proyecto N 0346679) del Proyecto Binacional Inventario Botnico de la Regin de la Cordillera del Cndor, Ecuador y Per, 20052007, al Missouri Botanical Garden (MO) y al Herbarium Truxillense (HUT) instituciones cooperantes, y al Instituto Nacional de
Recursos Naturales (INRENA, Autorizacin N 013 C/C2005-INRENA-IANP). Un agradecimiento especial a nuestros recordados maestros Dr. Arnaldo Lpez Miranda (HUT) y Dr. Abundio Sagastegui Alva (HUT) por sus enseanzas y haber dirigido los trabajos de campo e investigacin en el Norte del Per. Al Dr. Michael O. Dillon (F) e Ing. Rodolfo Vsquez M. (MO) por su constante ayuda en los estudios de la Flora del Per, a la Dra. Betty Milln (Directora del Museo de Historia Natural de la U.N.M. San Marcos) y a la Dra. Hayde Montoya (Jefa del Herbario USM) por la ayuda cientfica para el cuarto autor (JRCC), a Gwendolyn Peyre y Todd Mark por el apoyo logstico, y a los editores de la revista peruana de Biologa por hacer ms fcil el conocimiento de la flora del Per. Literatura citada
Brako L. & J. Zarucchi. 1993. Catlogo de las Angiospermas y Gimnospermas del Per. Monogr. Syst. Bot. Missouri Bot. Garden. 45: 763-867. Dodson C. 2002. Native Ecuadorian Orchids. Volume III. Lepanthopsis Oliveriana. Imprenta Mariscal, Quito, Ecuador. Pg. 557. Dodson C. 2003. A New Maxillaria from Ecuador. Harvard Pap. Bot. (March 2003). 7(2): 437-438. Holmgren P.K., N.H. Holmgren & L.C. Barnett. 1990. Index Herbariorum. Part. I: The Herbaria of the World. 8th. ed. The New York Botanical Garden, Bronx, New York. U.S.A. IPNI. 2012. International Plant Names Index [http://www.ipni.org/]. Rodrguez E., R. Vsquez; R. Rojas & J. Campos. 2004. Nuevas Adiciones de Angiospermas a la Flora Peruana procedente de la Provincia de San Ignacio, Dpto. Cajamarca. En Libro de Resmenes del X Congreso Nacional de Botnica, 2 - 5 Mayo 2004, Trujillo - Per. Pg. 157. Rodrguez E. & R. Rojas. 2006. El Herbario, Administracin y Manejo de Colecciones Botnicas. 2da. Edicin. Edit. por R. Vsquez, Missouri Botanical Garden (MO). Rodrguez E.; D. Neill; E. Alvtez; S. Arroyo; V. Medina & J. Nnez 2006a. Estado Actual de los Estudios de la Flora en la Cordillera de Cndor y reas Adyacentes en el Per. En Libro de Resmenes del XI Congreso Nacional de Botnica, 18 - 21 Setiembre 2006, Puno - Per. Pg. 265. Rodrguez E.; R. Vsquez; R. Rojas; B. Len; G. Calatayud & J. Campos. 2006b. Nuevas Adiciones de Angiospermas a la Flora del Per. Rev. per. biol. 13(1): 129-138. Rodrguez E.; S. Arroyo; V. Medina; D. Neill; R. Vsquez; R. Rojas & J. Campos. 2006c. Nuevas Adiciones de Angiospermas a la Flora del Per procedentes de la Cordillera del Cndor y reas Adyacentes. Arnaldoa. 13 (2): 318-322. Rodrguez E.; D. Neill & S. Arroyo. 2008. Flora Vascular de la Cordillera Huarango, Distrito Huarango, Provincia San Ignacio, Departamento Cajamarca, Per. En Libro de Resmenes del XII Congreso Nacional de Botnica, 18-21 Setiembre 2008, Puerto Maldonado-Madre de Dios, Per. Pg. 262. Rodrguez E.; S. Arroyo; D. Neill; R. Vsquez; R. Rojas; B. Len; J. Campos & M. Mora. 2009. Notas sobre el conocimiento de la flora en la Cordillera del Cndor y reas Adyacentes en el Per. Arnaldoa 16(2): 109-121. Rodrguez E.; A. Hofreiter; J. Campos & D. Neill. 2011. Bomarea longipes y Bomarea spissiflora (Alstroemeriaceae) dos nuevos registros para la flora de Per. Arnaldoa 18(1): 37-46. Solomon J. 2012. W3 TROPICOS - Base de Datos del Missouri Botanical Garden Herbarium (MO) [MBG, http://www.tropicos.org/]. Szlachetko D.L.; M. Sitko; P. Tukallo & J.Mytnik-Ejsmont. 2012. Taxonomy of the subtribe Maxillariinae (Orchidaceae, Vandoideae) revised. Biodiv. Res. Conserv. 25: 13-38. Ulloa Ulloa C.; J. L. Zarucchi & B. Len. 2004. Diez aos de adiciones a la Flora del Per: 1993-2003. Arnaldoa (Edic. Espec., Nov. 2004): 109-156. Weigend M. 2002. Observations on the Biogeography of the AmotapeHuancabamba Zone of Northern Peru. Bot. Rev. 68(1): 38-54.
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the genus LOLLiGUNCULA off the Pacific Coast of South America

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Revision of the genus Lolliguncula Steenstrup, 1881 (Cephalopoda: Loliginidae) off the Pacific Coast of South America
Revisin del gnero Lolliguncula Steenstrup, 1881 (Cephalopoda: Loliginidae) frente a la costa del Pacfico de Amrica del Sur
Franz Cardoso1 and Frederick G. Hochberg2
1 Laboratorio de Biologa y Sistemtica de Invertebrados Marinos, Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Apdo. 11-0058, Lima 11, Per. 2 Department of Invertebrate Zoology, Santa Barbara Museum of Natural History, 2559 Puesta del Sol, Santa Barbara, California 93105-2936, USA. Email Franz Cardoso: fcardosop@unmsm.edu.pe
Abstract
In the present paper the species from the genus Lolliguncula Steentrup, 1881 (Cephalopoda: Loliginidae) in Southeastern Pacific Ocean are reviewed. The presence of Lolliguncula (Lolliguncula) panamensis Berry, 1911, Lolliguncula (Loliolopsis) diomedeae Hoyle, 1911 and Lolliguncula (Lolliguncula) argus Brakoniecki and Roper, 1985 are confirmed from Mexican waters to Per and the species Lolliguncula (Lolliguncula) argus collected during a cruise of the R/V Anton Bruun from 1966 off the coast of South America is recorded for the first time in Peruvian waters. A key to identification of Pacific species is given. We report a diagnostic feature with taxonomic remarks of these species. Updated information on the distribution, biology, and fisheries of each species also is discussed. Keywords: Lolliguncula; taxonomy; distribution; biology; Southeastern Pacific.
Resumen
En el presente trabajo las especies del gnero Lolliguncula Steentrup, 1881 (Cephalopoda: Loliginidae) en el Ocano Pacfico Sudeste son revisados. La presencia de Lolliguncula (Lolliguncula) panamensis Berry, 1911, Lolliguncula (Loliolopsis) diomedeae Hoyle, 1911 y Lolliguncula (Lolliguncula) argus Brakoniecki & Roper, 1985 son confirmados desde aguas Mexicanas hasta Per y la especie Lolliguncula (Lolliguncula) argus colectados durante el crucero R/V Anton Bruun de 1966 frente a la costa de Amrica del Sur se registra por primera vez en aguas peruanas. Una clave para la identificacin de las especies del Pacfico es proporcionada. Se presenta los caracteres de diagnstico con las observaciones taxonmicas de estas especies. Informacin actualizada sobre la distribucin, biologa y pesquera de cada especie tambin se discute. Palabras claves: Lolliguncula; taxonoma; distribucin; biologa; Pacfico Sudeste.
Citacin: Cardoso F. & F.G. Hochberg. 2013. Revision of the genus Lolliguncula Streenstrup, 1881 (Cephalopoda: Loliginidae) off the Pacific Coast of South America. Rev. peru. biol. 20(2): 129 - 136 (Diciembre 2013)
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Introduction The family Loliginidae Lesueur, 1821 includes many species that are important in fisheries world-wide (Nesis 2003, Okutani 2005, Jereb et al. 2010) and in the southeastern Pacific Ocean (Cardoso 1991, Rocha & Vega 2003). At present the phylogenetic taxonomy of the Loliginidae is very confusing, resulting in a number of taxonomic problems that need to be critically resolved. The family according to Jereb et al. (2010) includes ten genera and nine subgenera: Loligo Lamarck, 1798 (Eastern Atlantic and Mediterranean Sea); Sepioteuthis Blainville, 1824 (Western Atlantic and Indo-West Pacific); Loliolus (Loliolus) Steenstrup, 1856 (Indo-West Pacific); Loliolus (Nipponololigo) Steenstrup, 1856 (Indo-West Pacific); Lolliguncula (Lolliguncula) Steenstrup, 1881 (Eastern Pacific and West Pacific); Lolliguncula (Loliolopsis) Steenstrup, 1881 (Eastern Pacific); Doryteuthis (Doryteuthis) Naef, 1912 (Western Atlantic); Doryteuthis (Amerigo) Naef, 1912 (Eastern Pacific and Western Atlantic); Alloteuthis Wlker, 1920 (Eastern Atlantic and Mediterranean Sea); Uroteuthis (Uroteuthis) Rehder, 1945 (Western Pacific); Uroteuthis (Photololigo) Rehder, 1945 (Indo-West Pacific); Uroteuthis (Aestuariolus) Rehder, 1945 (Eastern Australian); Pickfordiateuthis Voss, 1953 (Western Atlantic and Eastern Pacific); Heterololigo Natsukai, 1984 (Northwestern Pacific) and Afrololigo Brakoniecki, 1986 (Atlantic coast of Africa).
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Cardoso & Hochberg
The genus Lolliguncula is distinguished from all other loliginids based on the following characters: the mantle lacks a posterior tail-like elongation; fins broadly rounded; and spermatophores have a long cement body. Species in this genus are found both in warm, shallow, inshore waters and brackish waters off the coast of the Americas (Vecchione 1991, Vecchione et al. 1998). They are caught as bycatch in trawl shrimp fisheries and sold in local seafood markets (Cardoso 1991, Filippova et al. 1997, Jereb et al. 2010). The genus Lolliguncula comprises two subgenera and four species of small-sized squids which inhabit the tropical and subtropical West Atlantic, and the tropical eastern Pacific oceans (Okutani 2005, Jereb et al. 2010). Lolliguncula (Loliolopsis) diomedeae (Hoyle, 1904), Lolliguncula (Lolliguncula) panamensis (Berry, 1911) and Lolliguncula (Lolliguncula) argus (Brakoniecki & Roper, 1985) are found on the Eastern Pacific Ocean, whereas Lolliguncula (Lolliguncula) brevis (Blainville, 1823) is the only species of the genus that occur in the Western Atlantic Ocean, about 45N to 28S (Jereb et al. 2010). In the coastal waters off Peru, two species were previously reported and documented by Castellanos & Cazzaniga (1980), L. diomedeae collected off Punta Sal and L. panamensis collected off both Caleta La Cruz and Paita. The objective of this paper is to update the taxonomy, distribution and biology of the genus Lolliguncula in the southeastern Pacific Ocean. We describe the morphological features of the three species from the eastern Pacific Ocean and make taxonomic remarks. A key to the species of the genus Lolliguncula is presented. Materials and method Morphological examination was conducted on preserved material, including type specimens, during numerous visits to museums and collections in the United States and Peru. The measurements (in mm) and indices used in the work are as defined by Roper & Voss (1983): mantle length (ML); mantle width index (MWI); fin length index (FLI); fin width index (FWI); and hectocotylized arm length index (HcLI). Abbreviations of collections: USNM, National Museum of Natural History, Smithsonian Institution, Washington, D.C.; UMML, University of Miami, Rosenstiel School of Marine and Atmospheric Sciences, Miami, Florida; SBMNH, Santa Barbara Museum of Natural History, Santa Barbara, California; LACMNH, Los Angeles County Museum of Natural History, Los Angeles California; CASIZ, California Academy of Sciences, San Francisco, California; IMARPE, Instituto del Mar del Peru, Callao, Peru; MUSM, Museo de Historia Natural, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru. Taxonomic section FaMilY: LOLIGINIDAE Lesueur, 1821 Genera: LOllIGUNCUlA SteenstruP, 1881 Type Species. Loligo brevis Blainville, 1823; by original designation. Diagnosis. Posterior tail-like elongation of mantle absent. Posterior fins broadly rounded; fin width greater than length in adults. Tentacular clubs expanded; suckers small; arranged in 4 rows. Arm sucker rings with square, plate-like teeth around entire margin. Hectocotylized arm without crest: suckers redu-
ced, sucker stalks elongated to form papillae on either dorsal or both dorsal and ventral rows. Buccal membrane with or without suckers. Photophores absent on ventral ink sac. Spermatophores with long cement body. Eggs small. LOllIGUNCUlA (LOllIGUNCUlA) SteenstruP, 1881 Type Species. Loligo brevis Blainville, 1823; by original designation. Diagnosis. Length of modified portion of hectocotylus less than entire arm length; proximal portion not modified; hectocotylized arm slightly elongate. Lolliguncula (Lolliguncula) argus Brakoniecki & Roper, 1985 (Figs. 1AB) Lolliguncula argus Brakoniecki & Roper 1985: 47, figs. 1, 2; Brakoniecki 1986: 49, 92, 120, fig. 3D; Nesis 1987: 146; Roper et al. 1995: 326, 5 figs; Okutani 2005: 122. Lolliguncula (Lolliguncula) argus, Vecchione et al. 2005: 25; Jereb et al. 2010: 84, figs. 115116. Type material examined. Holotype. 1 male 29 mm ML; Ecuador, La Plata Island, 0116S, 8105W; coll. M/V Argosy, Station 85, night light dipnet, 10 Oct 1961; USNM 815750. Paratypes. 2 males 20.829.6 mm ML + 1 female 39 mm ML; Ecuador, La Plata Island, 0116S, 8105W; coll. M/V Argosy, Station 85, night light dipnet, 10 Oct 1961; UMML 31.1822. Other material examined. 81 males 2330 mm ML + 9 females 2231 mm ML; Ecuador, La Plata Island, 0116S, 8105W; coll. R/V Argosy, station 79, 9 October 1961; UMML 31.1828. 16 males, 2937 mm ML + 15 females, 3545 mm ML; Peru, 0455S, 8119W, 70 m; coll. R/V Anton Bruun , cruise 18B, station 762A, 08 September 1966; USNM. 1 male 38 mm ML + 2 females 2261 mm ML + 2 juveniles 1315 mm ML; Mexico, Baja California, off Cape San Lucas; coll. Orca expedition, night light dip net, 17 March 1953; SBMNH 60043. Diagnostic features. Morphometric characters are given in Table 1. Mantle short, bluntly pointed posteriorly. Fins small, nearly elliptical in outline, length about 25% of mantle length. Tentacles short, compressed. Buccal suckers absent. Arm suckers with about 5 blunt teeth on distal margin of sucker rings. Right ventral arm hectocotylized in males, about 60% distal part of dorsal row of suckers modified by loss of suckers and development of pedicels. Holotype. 1 male 28.6 mm ML; USNM 815750. Type locality. Ecuador, La Plata Island, 0116S, 8105W, surface depth. Distribution. Known to occur in the eastern Pacific Ocean from the lower Gulf of California, Mexico, to La Plata Island, Ecuador (Brakoniecki 1986, Jereb et al. 2010). Depths range from 070 m. Size. Very small-sized squid; maximum mantle lengths 37 mm for males and 45 mm for females. The mantle length of a female specimen in SBMNH collection measured 61 mm.
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Figure 1. Lolliguncula (Lolliguncula) argus. (A) Ventral view, male 29 mm ML. (B) Lateral view of hectocotylized arm showing modified suckers.
Table 1. Measurements and indices of bodily proportions of Lolliguncula (Lolliguncula) argus Character Number of individuals ML (mm) MWI FLI FWI HcLI Males 4 32.6 (28.335.4) 30.6 (27.033.1) 29.6 (28.830.2) 39.3 (36.441.3) 57.4 (52.960.7) The present study Females 4 40.2 (37.442.0) 28.6 (25.829.9) 29.0 (25.831.0) 38.4 (33.442.4) 10 26.8 (20.829.6) 33.5 (31.135.6) 27.0 (24.831.3) 48.4 (44.453.1) 62.6 (56.967.2) Brakoniecki&Roper (1985) Males Females 10 32.3 (20.638.8) 30.4 (25.734.0) 27.3 (24.329.9) 49.0 (45.252.2)
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Cardoso & Hochberg
Habitat and biology. A coastal species. The biology and ecology of this species are unknown. Interest to fisheries. Of no current market value. Remarks. A total of 130 specimens were examined in this study including those seen by Brakoniecki (USNM 815750, UMML 31.1822 and UMML 31.1828). In addition, specimens from Peru were compared with the type specimens of L. argus that are housed in the USNM and UMML collections. Specimens from the two localities are identical. Based on these new records we extend the distribution range from the type locality in Ecuador (0116S) south to Peru (0455S). Lolliguncula (Lolliguncula) panamensis Berry, 1911 Lolliguncula (?) panamensis Berry 1911: 100, figs. 17, pl. 6, figs. 1,2. Lolliguncula panamensis, Voss 1971: 8; Castellanos & Cazzaniga, 1980: 24, fig. 2; Voss 1982: 8; Nesis 1982: 136, fig. 35; Roper et al. 1984: 118, 4 figs; Brakoniecki 1986: 46, 92, 120, fig. 3B; Hess 1987: 212; Nesis 1987: 146, fig. 35H; Cardoso 1991: 9, fig. 2c; Roper et al. 1995: 327, 5 figs; Filippova et al. 1977: 102, fig. 59; Okutani 2005: 121. Lolliguncula tydeus Brakoniecki 1980: 424, figs. 12; Nesis 1982: 136, fig. 35; Nesis 1987: 146, figs. 35 E, F; Cardoso & Valdivieso 1988: 303, fig. 1. Lolliguncula (Lolliguncula) panamensis, Vecchione et al. 1998: 218; Paredes et al. 1999: 34; Vecchione et al. 2005: 25; Jereb et al. 2010: 85, figs. 117118. Material examined. 2 males 4349 mm ML + 4 females 4597 mm ML; Colombia, 0340.2N, 7717.8W, 10 m; coll. B/I Choco, cruise 7001, station 165, 25 January 1970; USNM 730087. 2 males 4447 mm ML + 1 female 43 mm ML; Colombia, 0339N, 7721W, 18.2 m; coll. L. Knapp, R/V Inderena, cruise 7009, station 336 702LK, 22 October 1970; USNM. 1 female 73 mm ML; Ecuador, 0238S, 8023W; coll. I. PerezFarfante, 1963; USNM 730086. 33 males 3263 mm ML + 44 females, 3177 mm ML; Ecuador, 0339S, 8041W, 13 m; coll. R/V Anton Bruun, cruise 18B, station 768, 10 September 1966; USNM. 1 male 74.8 mm ML; Peru, 0328S, 8036W, 520 fms [936 m]; coll. J. McLean & D. Shasky, shrimp boat Maria Elena, 1314 April 1972; LACMNH. 1 female 74 mm ML; Peru, Puerto Pizarro, Cherre; coll. E. del Solar, 18 March 1970; USNM 288458. 1 male 39 mm ML; Peru, Tumbes, off Zorritos [0340S]; coll. L. Merron, 02 August 1954; UMML
1219. 1 female 45 mm ML; Peru, Piura, off Paita [0505S]; coll. E. del Solar, R/V SNP1, station 43, 22 January 1969; USNM 288458. 3 females 63103 mm ML; Peru, Tumbes, off Caleta La Cruz, 14.4 m; coll. J. Velez, A. Kameya & V. Rivadeneira, 02 December 1987; MUSM. 1 male 70 mm ML + 1 female 119 mm ML; Peru, Callao, Playa El Carpayo; coll. J. Bautista, 28 September 1998; MUSM. 1 female 50 mm ML + 2 males 5897 mm ML; Peru, 1625.1S, 7333.4W, 130 m; coll. R/V SNP1, cruise 7201, 26 January 1972; IMARPE. 1 male 61 mm ML; Peru, 0624.5S, 8107.1W, 105 m; coll. BIC Humboldt, cruise 8304, 27 April 1983; IMARPE. 2 males 5065 mm ML; Peru, possibly Chimbote; coll. G. Voss & V. Valdivieso, 15 September 1981; IMARPE. 1 female 117 mm ML; Peru, Callao, Playa El Carpayo; coll. A. Chipollini & A. Kameya, 22 February 1984; IMARPE. Diagnostic features. Morphometric characters are given in Table 2. Mantle short, robust, and cylindrical. Fins large, and rounded; lengths 5360% of mantle length. Tentacles moderately long, robust, sucker rings with 2027 small, sharp, triangular teeth. Buccal membrane with 14 suckers. Arms moderately short, sucker rings with 1115 truncate teeth, prominent distally. Left ventral arm hectocotylized in males, 15% distal part of dorsal row of suckers modified by loss of suckers and development of pedicels. Holotype. 1 female 101 mm ML; CASIZ 537. Type locality. Gulf of Panama, Panama. Distribution. Known to occur in the eastern Pacific Ocean from the west coast of Baja California and Gulf of California, through Mexico to northern Peru (Jereb et al. 2010); Caleta La Cruz, Tumbes to Atico (1625S), Peru (Cardoso & Valdivieso, 1988). Filippova et al. (1997) and Okutani (2005) stated that the southern distribution limit was restricted to Ecuador. For the specimens at hand depths range from 9130 m. The species is most abundant in waters less than 50 m deep off the west coast of Mexico (Sanchez 2003). However, in the Gulf of California Arizmendi-Rodriguez et al. (2012) reported greater abundances in waters deeper than 80 m. Size. Small-sized squid; maximum mantle lengths to 119 mm in females and 97 mm in males. Arizmendi-Rodriguez et al. (2012) reported maximum mantle lengths to 110 mm in males and 115 mm in females. Habitat and biology. Nectobenthic species, living at temperatures between 2329 C (Cardoso & Valdivieso, 1988). Arizmendi-Rodriguez (2010) reported two different groups of females spawning in February and July. Females are larger than
Table 2. Measurements and indices of bodily proportions of Lolliguncula (Lolliguncula) panamensis Character Number of individuals ML (mm) MWI FLI FWI HcLI The present study Males 6 69.2 (50.396.8) 35.8 (28.940.3) 53.1 (47.858.8) 66.7 (60.476.9) 15.2 (13.316.2) Females 5 77.7 (35.3117.0) 34.3 (30.340.3) 53.6 (48.756.4) 68.4 (54.976.6) Brakoniecki (1980), as L. tydeus Males 7 33.3 (26.040.0) 33.5 (30.035.3) 46.0 (38.550.0) 64.1 (60.067.6) 12.8 (11.414.7) Females 1 46.0 36.9 47.8 69.6
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males. The sizes of sexes at first maturation in Colombia are 7679 mm ML for females and 40 mm ML for males (Barragan 1977b). The diet consists of fishes and crustaceans (Barragan 1977a). Arizmendi-Rodriguez et al. (2011) also identified fishes and crustaceans but most notably found samples of juvenile of Pacific sardine (Sardinops sagax). Interest to fisheries: Taken as bycatch in shrimp trawl fisheries in Panama, Colombia (Barragan 1977a), off the Pacific coast of Mexico (Alejo-Plata et al. 2001), and off Ecuador and Tumbes, Peru. Small quantities are found in local seafood markets. Remarks: The expansion of the species to the south of Peru (1625S) is related to the incursion of warm waters caused by El Nino event (Paredes et al. 2004). LOllIGUNCUlA (LOlIOlOPSIS) BerrY, 1929 Type species. Loligo diomedeae Hoyle, 1904; by monotypy and synonymy with original designation, Loliolopsis chiroctes Berry, 1929. Diagnosis. Hectocotylized arm greatly elongate, modified along entire length. Lolliguncula (Loliolopsis) diomedeae (Hoyle, 1904) Loligo diomedeae Hoyle 1904: 29, pl. 5, fig. 13, pl. 6, figs. 17; Castellanos & Cazzaniga 1980: 24, fig. 1 Loliolopsis chiroctes Berry 1929: 267, pl. 32, figs. 12, pl. 33, figs. 16. Loliolopsis diomedeae, Voss 1971: 7; Nesis 1982: 131, fig. 34; Toll 1982: 41, pl. 3c; Roper et al. 1984: 119, 4 figs; Alamo & Valdivieso 1987: 169; Nesis 1987: 143, fig. 34 KN; Cardoso et al. 1989: 90, fig. 1; Okutani 1995: 63, fig. 79 ac; Roper et al. 1995: 325, 4 figs; Filippova et al. 1997: 102, fig. 60. Lolliguncula diomedeae, Brakoniecki 1986: 48, 92, 120, fig. 3A; Cardoso 1991: 7, fig. 2b. Lolliguncula (Loliolopsis) diomedeae, Vecchione et al. 1998: 218; Paredes et al. 1999: 34; Okutani 2005: 122; Vecchione et al. 2005: 25; Jereb et al. 2010: 86, figs. 119120. Type material examined. Holotype- 1 female 85 mm ML; Mexico, off Acapulco, 164730N, 995930W, 141 fm [253 m], green mud; coll. R/V Albatross, station 3422, 12 April 1891; USNM 574847. Other material examined. 1 male 42 mm ML + 7 females 5676 mm ML; Humboldt Bay, Colombia, 0700N, 7745W, 40 fm [72 m]; coll. Cacique commercial vessel, 02 March 1970; USNM 730085. 1 female 44 mm ML; Colombia, 0635.5N, 7733W, surface; 1516 June 1972; UMML 1501. 1 male 59 mm ML; Colombia, 0448N, 8117W, 16 m; coll. R/V Anton Bruun, cruise 16, station 624B, 02 June 1966; USNM. 2 females 5357 mm ML; Colombia, 0406N, 8109W, 90 m; coll. R/V Anton Bruun, cruise 18B, station 764, 08 September 1966; USNM. 6 males 4653 mm ML + 6 females 5575 mm ML; Colombia, 0343N,7735W, 80 m; coll. R/V Anton Bruun, cruise 18B, station 782, 16 September 1966; USNM. 1 female 80 mm ML; Colombia, 0339N, 7721W, 18.2 m; coll. L. Knapp, R/V Inderena, cruise 7009, station 336, 22
October 1970; USNM. 23 males 3653 mm ML + 60 females 3381 mm ML; Colombia, 0335N,7835W, 7080 m; coll. R/V Anton Bruun, cruise 18B, station 783, 16 September 1966; USNM. 1 male 49 mm ML + 59 females 5482 mm ML; Ecuador, 0058N,8008W, 100 m; coll. R/V Anton Bruun, cruise 18B, station 779, 13 September 1966; USNM. 1 female 67 mm ML; Ecuador, 35 mi NW Pasado; coll. W. L. Klawe, night light dip net, 03 April 1962; UMML 2104. 1 female 71 mm ML; Ecuador, 0057S, 8057W, 120150 m; coll. R/V Anton Bruun, cruise 18B, station 776, 12 September 1966; USNM. 1 female 77 mm ML; Peru, Paita; coll. E. del Solar, R/V SNP1, station 43, 22 January 1969; USNM 288458. 4 females 7496 mm ML; Peru, 0352.5S, 8055W; coll. E. del Solar, R/V SNP1, cruise 6901, 22 January 1969; IMARPE. 1 male 51 mm ML + 4 females 5763 mm ML; Peru, 0324S, 8038W, 50 m; coll. R/V SNP1, cruise 6905, station 5, 08 May 1969; IMARPE. 1 male 66 mm ML; Peru, off Reventazon, 105 m; coll. fishing vessel Audaz, 30 May 1969; IMARPE. 1 female 92 mm ML; Peru, Tumbes, northwest Bocapn; coll. fishing vessel Ilo, station 8, 08 April 1970; IMARPE. 15 females 7496 mm ML; Peru, 0333S, 8044.5W, 72 m; coll. R/V SNP1, cruise 700809, 31 August 1970; IMARPE. 1 female 72 mm ML; Peru, 0333S, 8054W, 130 m; coll. R/V SNP1, cruise 700809, 31 August 1970; IMARPE. 4 females 82101 mm ML; Peru, 1625.1S, 7333.4W, 130 m; coll. R/V SNP1, cruise 7201, 26 January 1972; IMARPE. 2 males 6573 mm ML + 13 females 69104 mm ML; Peru, 0539.8S, 8105W, 65 m; coll. R/V SNP1, cruise 7205, 13 May 1972; IMARPE. 2 males 6476 mm ML + 1 female 91 mm ML; Peru, 0703S, 8032.5W, 65 m; coll. R/V SNP1, cruise 7205, 15 May 1972; IMARPE. 1 female 113 mm ML; Peru, 0521S, 8110W, 62 m; coll. R/V Professor Mesyatsev, cruise 7210, 09 October 1972; IMARPE. 1 male 67 mm ML + 3 females 86114 mm ML; Peru, 0720S, 8019W, 100 m; coll. R/V TAREQ II, cruise 7605, 18 May 1976; IMARPE. 2 males 62 mm ML + 4 females 6368 mm ML; Peru, 0404.15S, 8108.13W, 115 m; coll. R/V TAREQ II, cruise 7605, 30 May 1976; IMARPE. 1 male 56.2 mm ML + 1 female 77 mm ML; Peru, 0328.8S, 8242.9W, 55 m; coll. R/V Professor Siedlecki, cruise 791112, 05 December 1979; IMARPE. 1 female 94 mm ML; Peru, 0541.6S, 8109.3W, 78 m; coll. BIC Humboldt, cruise 8007, 30 July 1980; IMARPE. 3 females 8490 mm ML; Peru, Tumbes, off Caleta La Cruz, 11 m; 15 November 1982; IMARPE. 2 females 9798 mm ML; Peru, 1053.6S, 7745.8W, 35 m; coll. BIC Humboldt, cruise 8301, 13 January 1983; IMARPE. 1 male 69 mm ML; Peru, 0914.9S, 7835.9W, 64 m; coll. BIC Humboldt, cruise 8301, 15 January 1983; IMARPE. 1 male 61 mm ML; Peru, 0654.7S, 8038.6W, 73 m; coll. BIC Humboldt, cruise 8301, 21 January 1983; IMARPE. 4 females 8799.7 mm ML; Peru, 0620.6S, 8052.9W, 62 m; coll. BIC Humboldt, cruise 8301, 21 January 1983; IMARPE. 1 female 92 mm ML; Peru, 0503.6S, 8115.8W, 115 m; coll. BIC Humboldt, cruise 8301, 22 February 1983; IMARPE. 1 female 100 mm ML; Peru, Tumbes, off Caleta La Cruz, 11 mm; 24 June 1987; IMARPE. 1 male 77 mm ML + 1 female 82 mm ML; Panama, 0800N, 7931.1W, 9995 m; coll. R/V Pillsbury, station 518, 04 May 1967; UMML 1836. Diagnostic features. Morphometric characters are given in Table 3. Mantle elongate, narrow, with slightly pointed
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Cardoso & Hochberg

Table 3. Measurements and indices of bodily proportions of Lolliguncula (Loliolopsis) diomedeae Character Number of individuals ML (mm) MWI FLI FWI HcLI Males 12 64.2 (51.175.6) 24.9 (21.827.4) 33.3 (30.735.8) 44.0 (39.747.9) 25.2 (21.229.6) The present study Females 64 86.9 (57.0114.2) 24.0 (19.429.3) 36.6 (30.540.8) 45.2 (36.856.1) Berry (1929), as Loliolopsis chiroctes Males 5 48.0 (45.050.0) 27.7 (27.028.7) 32.0 (30.034.0) 49.7 (47.854.0) 27.6 (25.029.3) Females 3 56.5 (53.561.0) 22.8 (21.323.6) 33.0 (31.834.4) 48.3 (46.750.8)
posterior end. Fins short with rounded heartshaped profile, length 3040% of ML. Females with larger body, relatively shorter arms and fins larger than males. Tentacles short, sucker rings with about 24 square teeth. Buccal membrane with 410 suckers. Arm sucker rings with 1011 square teeth, prominent distally. Both ventral arms conspicuously modified in males. Left ventral arm hectocotylized in males, very long, whiplike in appearance, 6 or 7 rows of small suckers present at base, of arm, devoid of suckers medially, distal end of arm with row of papillae. Right ventral arm with broad, membranous flap, and suckers of reduced size. Holotype. Female 85 mm ML, USNM 574847. Type locality. Mexico, off Acapulco, 164730N, 995930W, 141 fm [253 m], green mud. Distribution. Known range in the eastern Pacific Ocean from off the west coast of Baja California and Gulf of California, to southern Peru (Cardoso et al. 1989, Jereb et al. 2010). Depths range from 0150 m but off the coast of Mexico specimens were most abundant in deeper waters, between 50200 m (Sanchez 2003). Size. Small sized-squid; maximum mantle lengths of females to 114 mm and males to 76 mm. Habitat and biology. Nectobenthic species, living at temperatures between 2128 C (Cardoso et al. 1989). Females are present in greater proportion than males and the males are typically smaller than females (Cardoso et al. 1989). Interest to fisheries. Taken as bycatch in shrimp trawl fisheries in Panama (Voss 1971), off the Pacific coast of Mexico (AlejoPlata et al. 2001) and off Tumbes, Peru. Small quantities are found in local seafood markets. Discussion Vecchione et al. (1998) verified that L. argus is a valid loliginid species. However, they failed to conclude whether L. argus should be assigned to the genus Loligo or to Lolliguncula. Vecchione et al. (2005) later confirmed that the spermatophores of L. argus have long cement bodies and by consensus they determined that the species should be placed in the subgenus Lolliguncula (Lolliguncula). Brakoniecki (1980) differentiated Lolliguncula panamensis from Lolliguncula tydeus based on the relative length of the hectocotylized arm, which in L. panamensis is about equal in length to its opposite arm. Because no male L. panamensis were examined, L. brevis (from the western Atlantic Ocean) was used for comparison because it is morphologically nearly identical to
L. panamensis. Later Brakoniecki (1986) considered Lolliguncula tydeus to be conspecific with Lolliguncula panamensis, of which previously he had seen only females. Vecchione et al. (1998) verified that panamensis is a valid loliginid species. They also assigned L. panamensis to the subgenus Lolliguncula (Lolliguncula). Hoyle (1904) described Loligo diomedeae based upon a single female collected off Acapulco, Mexico. Later, Berry (1929) described another loliginid species, which he named Loliolopsis chiroctes based on multiple specimens collected off Baja California, Mexico on which he based his new genus Loliolopsis. As these species are synonymous (based on Voss 1971), Hoyles species name has priority as the type species of Berrys genus. Vecchione et al. (1998) verified that L. diomedeae is a valid loliginid species. They assigned diomedeae to the subgenus Lolliguncula (Loliolopsis). We question reports of the presence of Lolliguncula (Loliolopsis) diomedeae in waters off Valparaiso, Chile (Boone 1938, Thore 1959, Rocha 1997) and instead agree with Nesis (1973), who identified loliginid squids found in Chile as Doryteuthis (Amerigo) gahi dOrbigny, 1835. Sales et al. (2013) using sequences of mitochondrial and nuclear genes by studying the squids of the familiy Loliginidae in the southern Atlantic detected the not monophyly of Lolliguncula, but they when using just mitochondrial tree, Lolliguncula is sister to Doryteuthis. The three species of the Eastern Pacific, Lolliguncula (Loliolopsis) diomedeae, Lolliguncula (Lolliguncula) panamensis and Lolliguncula (Lolliguncula) argus apparently would have no problem except the status of Lolliguncula tydeus as a synonym of L. panamensis requiring genetic studies to substantiate the points made by Brackoniecki (1986). The status Lolliguncula (Lolliguncula) brevis, a species that inhabits western Atlantic Ocean waters and the Caribbean has been questioned by Simone (1997), reporting morphological and morphometric differences between squid Brazil's southern coast (the probable type locality) and the north; however Jereb et al. (2010) considered to be "morphotypes" probably intraspecific variation. Key to the species of Lolliguncula la. Both ventral arms of the male hectocotylized, arms modified along their entire length; arm sucker rings with 1011 square teeth; with 4 to 10 suckers on lobes of buccal mambrane; restricted to the eastern Pacific Ocean. ......................... Lolliguncula (Loliolopsis) diomedeae lb. Single ventral arm of male hectocotylized, less than entire arm modified, proximal portion not modified.
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.................................. Lolliguncula (Lolliguncula). 2 2a. Restricted to the western Atlantic Ocean. Left ventral arm hectocotylized; arm sucker rings with 7 or 8 broad flat teeth; with 3 to 5 suckers on lobes of buccal membrane..................................... Lolliguncula (L.) brevis 2b. Restricted to the eastern Pacific Ocean................. 3 3a. Left ventral arm hectocotylized; arm sucker rings with 11 to 15 blunt teeth; with 1 to 4 suckers on lobes of buccal membrane. ................................... Lolliguncula (L.) panamensis 3b. Right ventral arm hectocotylized; arm sucker rings with about 5 long, bunt teeth; suckers absent on lobes of buccal membrane. ............................................. Lolliguncula (L.) argus Acknowledgments The author first grateful to the individuals and institutions that have loaned or made available collections, types and supplementary material for this study: Clyde F.E. Roper, Michael Vecchione and Michael Sweeney, Division of Molluscs, National Museum of Natural History, Smithsonian Institution, Washington D.C.; Nancy A. Voss, University of Miami, Rosenstiel Scholl of Marine and Atmospheric Science, Miami, Florida; Juan Velez and Albertina Kameya, Instituto del Mar del Peru, Callao, Peru. Literature cited
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136
Zooplankton composition in oxbow lakes from the Upper Juru River

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Zooplankton composition in five oxbow lakes from the Upper Juru River, Acre State, Brazil
Composicin del zooplancton en cinco lagos de la parte alta del ro Juru, Estado de Acre, Brasil
Maria Jos Alencar dos Santos1, Erlei Cassiano Keppeler1, Lisandro Juno Soares Vieira2, Alzenira Jacob Serra1 and Antonio Sergio Ferraudo3
1 Federal University of Acre, Forest Campus Water analyses and Microbiology laboratories, Cruzeiro do Sul, AC, Brazil. CEP 69980-000. 2 Federal University of Acre, Rio Branco Campus - Center for Biological Sciences and Nature, BR 364 km 04 - Industrial District - Rio Branco, Acre, Brazil. 69915-900 3 So Paulo State University - Faculty of Agriculture and Veterinary Sciences - Jaboticabal, SP, Brazil. CEP 14870-000 Email Erlei Cassiano Keppeler: erleikeppeler@gmail.com
Abstract
This work was conducted in five oxbow lakes located between Cruzeiro do Sul and Rodrigues Alves counties (Acre State, Brazil), to provide additional information about the composition of zooplankton assemblages in the Upper Juru River. Samples were collected from May 2009 to May 2010, and fixed with 4% formalina. The numeric density (ind.m-3) was obtained from subsequent sub-samples (1 mL). The study recorded 19 zooplankton families. Rotifers showed higher species richness (81 species), followed by cladocerans (3 species) and various forms of copepods and other organisms. Higher zooplankton means of numeric density was found in Novo Lake, with rotifers (1879 ind.m-3), cladocerans (207 ind.m-3), copepods (870 ind.m-3). Diversity and numeric density were similar to other Neotropical aquatic ecosystems. Keywords: Rotifera, diversity, numerical density, oxbow lake, Neotropical.
Resumen
Este estudio se realiz en cinco lagos, situados entre Cruzeiro do Sul y Rodrigues Alves, y proporcionan informacin sobre la composicin de las comunidades del zooplancton de la parte alta del Ro Juru. Se realizaron muestreos mensuales desde mayo de 2009 a mayo de 2010. El material se recolecto con una red de plancton con abertura de malla de 55 m de malla. Fueron observadas 19 familias zooplancton. Los rotferos tuvieron la mayor riqueza de especies (81), seguido por los cladceros (3) y coppodos y otros organismos. La mayor densidad promedio se observ en el lago Novo, con 1879 ind.m-3 de rotferos, 207 ind.m-3 de cladceros, y 870 ind.m-3 de coppodos. La diversidad y la densidad numrica fueron similares a otros ecosistemas acuticos del Neotrpico. Palabras clave: rotferos, diversidad, densidad numrica, lago marginal, neotropical.
Citacin: Santos M.J.A. dos, E.C. Keppeler, L.J.S. Vieira, A.J. Serra and A.S. Ferraudo. 2013. Zooplankton composition in five oxbow lakes from the Upper Juru River, Acre State, Brazil. Rev. peru. biol. 20(2): 137 - 144 (Diciembre 2013)
Introduction The inland waters of the world present, in total, about 1570 species of rotifers (Segers, 2007b), 620 species of Cladocera (Forr et al. 2008) and 2814 species of Copepoda (Boxshall and Defaye, 2007). In Brazil, 800 species of Rotifera (Souza-Soares et al. 2011), 142 of Cladocera (Smith et al. 2011) and 124 of Copepoda (Silva & Matsumura-Tundisi 2011, Matsumura-Tundisi & Tundisi 2011) have been recorded. In the Amazon, a total of 300 species of these groups have been found (Robertson & Hardy 1984, Keppeler & Gomes 2012). Organisms are distributed heterogeneously in space and time, interacting with abiotic and biotic factors, and these interactions depend on contingencies (Scheiner & Willig 2008). This distribution is associated with severe costs and benefits, such as the occurrence of predation, optimal feeding and environmental conditions (Iglesias et al. 2007). These interactions can structure local communities (Cottenie et al. 2003) of zooplankton, especially in lakes (Jos de Paggi & Devercelli 2011). River dynamics, including the formation and extinction of oxbow lakes, are associated with the dynamic work of the rivers (hydro-sedimentation). This way, erosion processes are continuous, although within the limits of the floodplain, and these lakes present high biodiversity, including rare and endemic species (Wantzen et al. 2008).
18/06/2013 08/10/2013 09/12/2013
137
Santos et al.
Figure 1. Locations of the five studied lakes: Cigana, Moju, Novo, Verde and Santo Elias. Font: IBGE 2006; ZEE/AC 2006. Datum: D WGS 1984.
The present diversity of zooplankton species may be directly related to the large spatial heterogeneity of the floodplains and to seasonal changes in water level fluctuation. These two characteristics favor the occupation of different floodplain habitats, which remain isolated or connected according to the season, thereby providing an exchange of species between the water systems (Lansac-Tha et al. 2004). The Juru river presents in its course several oxbow lakes that are lakes shaped like a horseshoe. According to Junk (2001), the channel of the river acts as axis of migration, local dispersal routes and as refuge for organisms in the period of low waters. The lower courses of very large rivers often represent a fairly homogeneous area with a low number of habitats specific to lotic species that depend partly, on the input of organic matter from the floodplain. The degree to which these water level fluctuations influence the lake ecosystems depends deeply on the morphology of the lake, so that shallow lakes or with large shallow margins are the most sensitive. This paper presents new information on the species richness and numeric density of zooplankton assemblages in five oxbow lakes of the Upper Juru River. Material and methods Study area.- The five lakes studied are oxbow lakes connected to the Juru river by side channel spillways, located in the municipalities of Cruzeiro do Sul and Rodrigues Alves, Acre State, Brazil (Fig. 1). Novo Lake (74401S; 723756W ) has a length of 1690 m and maximum width of 120 m, Verde Lake (75002S; 723821W) has a length of 3370 m and maximum width of 130 m, St. Elias Lake (74619S; 723637W ) has a length of 2730 m and maximum width of 140 m, Moju Lake
(74851S; 723637W ) has a length of 5040 m and maximum width of 180 m, and the Cigana Lake (73415S; 723757 W ) has a length of 2820 m and maximum width of 170 m. Methods.- Samples were collected trimonthly between May 2009 and May 2010, in littoral and pelagic regions of each lake. However, was carry out at the beginning of the samplings a t-test analysis between the two zones (pelagic and littoral), as there was no statistical significance (p <0.05), and a low number density, we chose to consider only a collection point. Each zooplankton sample was obtained by the filtration of 200 liters of water in a plankton net (55 m mesh-size), followed by fixation with 4% formalin. Species richness of the zooplankton assemblage was determined using optical microscopy, and species identification was based on Koste (1978), Koste and Robertson (1983), ElmorLoureiro (1997) and Korovchinsky (1992). The frequency of occurrence (FO) was calculated as FO = O x 100/TO, O is the number of occurrences of the category in analysis, and TO is the total number of occurrences of all categories (Zar 1996). For determining numerical densities (ind.m-3), ten subsequent subsamples (1 mL) were collected with a pipette and analyzed in Sedgewick Rafter Counting Chambers, in which were counted at least 80 individuals from each sample. In samples with low density, individuals were counted in full. Data quantitative were expressed as mean and standard deviation. This study was conducted with authorization of the Chico Mendes Institute for Biodiversity-ICMBio, Biodiversity Information System (SISBIO), under the license number 13435-2. The collected material is deposited in the collection of the Federal University of Acre.
138
Statistical Analysis.- The characterization regarding the composition of the five lakes was performed using hierarchical cluster analysis, adopting the Euclidean distance as the coefficient of similarity between the lakes and Ward's algorithm as a method of connection between the groups and the component analysis, resizing the initial set into smaller ones and preserving the variance considered relevant. The new dimensions are formed by the eigenvectors generated from eigenvalues of the original covariance matrix (Hair et al. 2005). All analyzes were processed in the statistical software Statistica, version 7.0, by Statsoft (Statsoft 2004). Temporal analysis using curve tests for all lakes were conducted in order to find the best fit for them. Results Table 1 shows the results regarding the zooplankton composition in the lakes Novo, Verde, Cigana, Moju and St. Elias. The five lakes presented 81 species of rotifers, three species of cladocerans, and various forms of copepods and other organisms. The zooplankton composition of the five lakes presented 19 families (Fig. 2). Rotifers predominated and were distributed in 15 families (Table 1): the most frequent genera of Rotifera in this study were Lecane and Brachionus. Cladocerans were represented only by Bosminidae (1 sp.) and Moinidae (2 spp.) and occurred in all lakes, except Moina sp., that did not occur in the Novo Lake, and Bosminopsis deitersi, absent in the lakes Cigana and Moju. The rotifers Asplanchna cf. herrickii, Brachionus budapestenensis, Keratella lenzi heliaca, Keratella sp., Lecane cf. stichae verecunda, L. closterocerca amazonica, L. lauterboni, and Testudinella tridentata were recorded only in the Novo Lake; Asplanchna brightwelli, Platyas quadricornis, Gastropus stylifer, Testudinella cf. aspis, and Trichocerca chattoni, only in the Verde Lake; Testudinella mucronata hauerensis occurred only in the Cigana Lake, while Epiphanes sp., Lecane acus, L. papuana, L. imbricata , L.
(Frequency of occurrence (%))
0 Brachionidae Lecanidae Trichocercidae Keratellidae Lepadellidae Testudinellidae Asplanchnidae Filiniidae Notommatidae Synchaetidae Epiphanidae Gastropodidae Hexarthridae Flosculariidae Proalidae Moinidae Bosminidae Cyclopidae Chaoboridae 5 10 15 20 25
luna, Lepadella acrobeles, L. ovalis, Trichocerca myersi, and T. bidens occurred only in the Moju Lake. Cladocerans appeared in more than one lake, but Moina cf. minuta was the only species present in all lakes. As for copepods, only the larval forms (nauplius and copepodite) were frequent and appeared in the five studied environments. This study found five occurrences new to the Acre State: Asplanchna cf. herricki (Novo Lake), Anuraeopsis coelata (Lakes Novo and Verde) Testudinella cf. aspis (Verde Lake), Floscularia sp. (Lakes Novo, Verde and Cigana), and Lepadella acrobeles (Moju Lake). As for frequency of occurrence, the most frequent species in the Novo Lake was Brachionus falcatus (100%), followed by Notomata (75%). On the other hand, in the Verde Lake the most frequent species was Brachionus caudatus (75%). In the Cigana Lake, the most frequent species were Notomata (75%), Trichocerca similis (75%), Polyarthra vulgaris (100%), and young forms of copepodites. In the Moju Lake, the most frequent species was Brachionus caudatus (100%), Brachionus dolabratus, and Brachionus falcatus (75%). In St. Elias Lake, the most frequent species were Brachionus caudatus (100%), Brachionus dolabratus (100%), Notomata (100%), Polyarthra vulgaris (100%) and Brachionus falcatus (75%). The Novo Lake showed the highest density of organisms, with average and standard deviation of 18793166 ind.m-3 of Rotifera, Cladocera (207412 ind.m-3), Copepoda (87044 ind.m-3) and Chaoboridae (0 1.0 ind.m-3). The Verde Lake presented highest density of Rotifera (13571917 ind.m-3), followed by Cladocera (275 550 ind.m-3), Copepoda (106 212 ind.m-3) and Chaoboridae (94 187 ind.m-3). Lake St. Elias presented Rotifera as the highest density (1040 687 ind.m-3), followed by Copepoda (4173 ind.m-3) and Cladocera (3 6 ind.m-3).The Moju Lake totaled 1687201 ind.m-3 of Rotifera, Copepoda (1413 ind.m3) and Cladocera (5 10 ind.m-3) ind.m3), Copepoda (13.0 12 ind.m-3), and Chaoboridae (20 28). The Cigana Lake had the lowest density of individuals, with Rotifera being the highest density (407 108 ind.m3) followed by Copepoda (10 8), Cladocera (4 5 ind.m-3) and Chaoboridae (12 ind.m-3) The species with the largest number of individuals were the rotifers Keratella cochlearis, Polyarthra vulgaris and Trichocerca similis. The dendrogram in Figure 3 shows a group structure of the studied lakes, considering the most abundant species.
8
Rotifera
Euclidean distance
7 6 5 4 3 2 1 Lake Moju Lake Cigana Lake Santos Elias Lake Verde Lake Novo
Cladocera Copepoda Diptera
Figure 2. Frequency of occurrence (%) of the families of Rotifera, Cladocera, Copepoda and Diptera found in the five studied lakes of the Upper Juru River, Acre.
Figure 3. Dissimilarity dendrogram of the five lakes in Upper Juru River, Acre State, Brazil.
139
Santos et al.
PC2 - 27.85%
02
Cigana Novo Moju
01
Kercoch Ascov Keramer Klenz Polvul Filinpe
00
PC1 - 49.65%
Bcaud Filinopol Filinterm Bfalca Lectum Bracdola
-01
Lecpyrif
-02
Santos Elias
-03 -05 -04 -03 -02 -01 00
Verde
Figure 5. Double-entry chart presenting the zooplankton species distribution in the five lakes located in upper Juru River, Acre State, Brazil.
01
02
03
04
Figure 4. Biplot displaying the results of principal components analysis performed with the species found in the five lakes, located in Upper Juru River, Acre State, Brazil.
The species with the highest discriminatory power in the first principal component were Keratella lenzi (-0.99), Filinia pjeleri (-0.95) and Ascomorpha ovalis (-0.91), located to the left of the biplot graph (Fig. 4), while the species discriminated in the second principal component were Notomata (-0.92) and Filinia opoliensis (-0.82) (Figs. 4 and 5). The temporal variation of each lake is shown in Figure 6 (a, b, c, d, e). It is noted that there showed pattern of variation, fitting a polynomial curve. Discussion Rotifera was the dominant phylum in the five lakes studied. The most frequent families in this study were Lecanide, Lepadellidae, Keratellidae, Testudinellidae and Trichocercidae. These families were also present in the studies by Pecorari et al. (2006)
16000
Numerical density (Ind.m )
-3
Lake Novo
y = 188.79x - 498725x + 3E+08 R 2 = 0.9755
2
14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000
(a)
0 May/2009 October/2009 February/2010 May/2010 6000

Numerical density (Ind.m -3)
12000
Lake Verde
R 2 = 0.9774
10000 8000 6000 4000 2000
y = 138.67x 2 - 366264x + 2E+08
Lake Cigana
y = 929.5x 2-3673.5x + 5124 R2 = 1
5000 4000 3000 2000 1000
(b)
0 May/2009 October/2009 February/2010 May/2010
(c)
0 October/2009 February/2010 May/2010
2500
2000
y = 8.0763x 2 - 21452x + 1E+07 R 2 = 0.688
Lake Moju
14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000
Lake Santo Elias

y = 101.26x 2 - 267383x + 2E+08 R 2 = 0.8644
1500
1000
500
(d)
0 october/2009 February/2010 May/2010 October/2011
(e)
0 May/2009 October/2009 February/2010 May/2010
Figure 6. Temporal variation in five lakes from the Upper Juru River, Acre State, Brazil. (a) Novo Lake, (b) Verde Lake, (c) Cigana Lake, (d) Moju Lake and (e) St. Elias Lake.
140
and Jos de Paggi and Devercelli (2011), in the floodplain of the Middle Paran River, and lakes of Amazonia (Robertson & Hardy 1984). The most common genus of Rotifera in this study was Lecane, which was likewise the most diverse genus in the Santa Fe Lake, Argentina (Jos de Paggi & Devercelli 2011), and in the study by Oliveira et al. (2010) in the small Preto River and in an artificial pond in Cruzeiro do Sul (Acre), proving it to be a genus with wide geographic distribution, occurring in tropical and subtropical regions. The genus Brachionus (Brachionidae), considered endemic in the Neotropics, as well, the most frequent in three urban lakes in Joo Pessoa (PB) (Jos de Paggi & Paggi 2007). The most frequent species found by this research were Brachionus falcatus, Brachionus dolabratus, Notomata sp., and Polyarthra vulgaris. In general, they did not appear to be restricted to only one of the lakes, occurring commonly in oxbow lakes, as in lakes Pirapora and Amap (Keppeler 2003, Keppeler & Hardy 2004). Brachionus falcatus also has records in the Amazon rivers, such as the Solimes, Amazonas, White, Negro, Tapajs, Tocantins, and Nhamund (Robertson & Hardy 1984). Brachionus dolabratus was recorded in the rivers Solimes, Madeira and Tapajs (Robertson & Hardy 1984) Asplanchna cf. herrickii and Anuraeopsis coelata are also mentioned in African tropical regions, Australia, the Neotropics, Nearctic, East and paleo-Arctic region (Segers 2007), being considered cosmopolitan. Testudinella cf. aspis has not been mentioned in the Neotropics, while Lepadella akrobeles was found in the Brgida River in Pernambuco (Melo Jnior et al. 2007). The species with the largest number of individuals were Keratella cochlearis, Polyarthra vulgaris and Trichocerca similis, which also showed a high numerical density in the lakes Pirapora and Amap (Keppeler 2003, Keppeler & Hardy 2004). These organisms were also abundant in other ecosystems of Brazil, such as the Alto Tiet River (Lucinda et al. 2004), a reservoir in Curitiba (Serafim-Jnior et al. 2010), and in sub-tropical and tropical areas, like the limnic ecosystems of Pernambuco (Melo Jnior et al. 2007), which are tropical. The studied lakes, in general, showed distinct compositions, with only the Lakes Moju and Cigana showing high similarity. The Novo Lake showed a different pattern regarding the species found, since there is a division separating the lakes Moju and Cigana from St. Elias and Verde. This separation was also evident in principal component analysis considering the first two components, managing to retain 77.5% of the original variation. This difference in lakes is possibly associated with the migration of species from the river for the lakes or contrariwise. Several species showed high discriminatory power: Keratella lenzi, Filinia pjeleri, Ascomorpha ovalis (factor 1) Notomata and Filinia opoliensis (factor 2). Keratella lenzi was also dominant in the oxbow lake Massacar, originated from the Paraopeba River, So Francisco Basin in Minas Gerais (Sampaio & Lpez 2000), as well as Ascomorpha ovalis in the Sapuca River, Furnas reservoir, also in Minas Gerais. Filinia pjeleri was also the dominant species in the Amap Lake, Acre (Keppeler & Hardy 2004). In the same lake were also dominant Filinia opoliensis, which were also dominant in the Bra Reservoir (Rodriguez & Matsumura-Tundisi 2000).
The richness and density of zooplankton species in the studied lakes is equivalent to what is usually observed in other tropical and sub-tropical systems, showing the wide geographical distribution presented by the Rotifera. Species richness was different between the lakes, because of the combination of a number of factors and conditions. This could have been due to differences in morphology, considering size and width. This influences the migration of species from rivers to lakes and vice versa. Another factor that contributed to species richness was the low presence of Chaoboridae, zooplankton predators. This was observed in the steady dominance of small rotifers. The organisms are not only heterogeneously distributed in space, but also in time. Each lake had its peculiarities, presenting a distinct composition and dominance. Only 7% of all organisms occurred in 75 to 100% of the samples, which is possibly associated with species migration from the river to the lake. Acknowledgement The authors thank the Brazilian Ministry of Fisheries and Aquaculture (Senate budget amendment), the Secretary of Agriculture of the State of Acre, Cruzeiro do Sul office, for their support on collections, and to technician William Monteiro Ayache for his support for carry out samplings in the field. Scholarship to the students were provides by CNPq/UFAC for the develop of work. Literature cited
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Table 1. Zooplankton composition in the studied environments; + indicates presence, - indicates absence. Family / Species ROTIFERA Asplanchnidae Asplanchna cf. herrickii De Gueme, 1850 Asplanchna brightwelli Gosse, 1950 Asplanchna sieboldi Leydig, 1854 Asplanchna sp. Brachionidae Anuraeopsis navicula Rousselet, 1910 Anuraeopsis coelata De Beauchamp, 1932 Anuraeopsis sp. Brachionus angularis Gosse, 1851 Brachionus budapestenensis Daday, 1885 Brachionus caudatus Barrois e Dady,1894 Brachionus dolabratus Harring, 1914 Brachionus falcatus Zacharias, 1898 Brachionus havanaensis Rousselet, 1911 Brachionus plicatilis O. F. Muller 1786 Brachionus urceolaris O. F. Muller, 1773 Platyias quadricornis (Ehreberg, 1832) Plationus patulus O.F. Muller, 1786 Epiphanidae Epiphanes pelagica Jennings, 1900 Epiphanes sp. Filiniidae Filinia longiseta (Ehrenberg, 1834) Filinia opoliensis (Zacharias, 1898) Filinia pejleri Hutchinson, 1986 Filinia cf. terminalis (Forsyth & James, 1991) Novo Verde Cigana Moju Elias
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Table 1. Continuation Family / Species Flosculariidae Floscularia sp. Gastropodidae Ascomorpha ovalis (Bergendal, 1892) Ascomorpha sp. Gastropus stylifer Imohof, 1891 Hexarthridae Hexarthra intermedia (Wiszniewski, 1929) Hexartha sp. Keratellidae Keratella americana Carlin, 1943 Keratella cochlearis cochlearis Plate, 1886 Keratella hspida ( Lauterborni, 1900) Keratella lenzi heliaca Berzins, 1955 Keratella lenzi lenzi Hauer ,1953 Keratella sp. Keratella tropica tropica (Apstein, 1907) Lecanidae L. cf stichaea verecunda Harring &Myers, 1926 L. closterocerca amazonica Koste, 1978 Lacane quadridentata (Ehrenberg, 1832) Lecane acus Harring, 1913 Lecane lauterborni Hauer, 1924 Lecane elsa Hauer, 1931 Lecane papuana (Murray, 1913) Lecane closterocerca Schmarda, 1859 Lecane decipiens (Murray, 1913) Lecane imbricata Carlin, 1939 Lecane luna O. F. Muller, 1776 Lecane lunares constricta (Murray, 1913) Lecane lunaris lunaris (Ehrenberg, 1832) Lecane monostyla (Daday, 1897) Lecane pyriformis Daday, 1905 Lecane sp . Lepadellidae Lepadella akrobeles Myers, 1934 Lepadella cf. benjamini Harring, 1916 Lepadella ovalis (O. F. Miiller 1786) Lepadella patella similis Lucks, 1912 Lepadella princisi Berzins, 1943 Lepadella sp. Notommatidae Cephalodella sp. Cephalodella gibba (Ehrenberg, 1938) Cephalodella mira Myers, 1934 Notommata sp. Proalidae Proales cf. Synchaetidae Polyarthra bicerca Wulfert, 1956 Polyarthra dolichoptera Idelson, 1925 Polyarthra vulgaris Carlin, 1943 Testudinellidae Testudinella mucronata hauerensis Gillard, 1967 Testudinella patina (Hermann, 1783) Testudinella cf. aspis Carlin, 1939 Testudinella patina intermedia (Anderson, 1889) Testudinella sp. Testudinella tridentata (Smirnov, 1931) Trichocercidae Trichocerca myersi (Hauer, 1931)
Novo
Verde
Cigana
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Elias
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Table 1. Continuation Family / Species Trichocerca bicristata (Gosse, 1886) Trichocerca tenuior Gosse, 1886 Trichocerca bidens (Lucks, 1912) Trichocerca similis (Wierzejski, 1893) Trichocerca chattoni (de Beauchamp, 1907) Trichocerca sp. CRUSTACEA CLADOCERA Bosminidae Bosminopsis deitersi Richard, 1895 Moinidae Moina cf. minuta (Hansen, 1800) Moina sp. COPEPODA Cyclopidae Nauplii Copepodite DIPTERA Chaoboridae Chaoborus sp. Novo Verde Cigana Moju Elias
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Biodegradacin de PETN por bacterias aisladas de ambientes mineros

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Biodegradacin del explosivo tetranitrato de pentaeritritol (PETN) por bacterias aisladas de ambientes mineros
Biodegradation of the explosive pentaerythritol tetranitrate (PETN) by bacteria isolated from mining environments
Yerson Durn, Christian Andrade, Armando Martnez, Tito Snchez, Fernando De la Cruz, Pablo Ramrez*
Laboratorio de Microbiologa Molecular y Biotecnologa, Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Per. Apartado postal 110058, Lima 11, Per. *Autor para correspondencia Pablo Ramrez E-mail: pramirezr@unmsm.edu.pe Email Yerson Durn: yersonduran26@gmail.com Email Christian Andrade: chris_bio571@hotmail.com Email Armando Martnez: biologia.b10@hotmail.com Email Tito Libio Snchez: bioambiente@hotmail.com Email Fernando DelaCruz: fernandodelacruzcalvo@gmail.com
Resumen
El tetranitrato de pentaeritritol (PETN) es el detonante ms energtico y recalcitrante empleado en la actividad minera ya que posee cuatro grupos nitro unidos mediante enlaces ster; adems es un contaminante orgnico persistente segn el Convenio de Estocolmo. En el presente trabajo es evaluada la eficiencia de degradacin del PETN por bacterias aisladas de ambientes mineros. En primer lugar se seleccion las cepas con mayor crecimiento durante tres subcultivos en medio mnimo con PETN como nica fuente de nitrgeno. Luego, se identific mediante anlisis del gen RNAr 16S las cepas Bacillus sp. J8A2 y Enterobacter sp. M1B. Las velocidades especficas de crecimiento fueron de 0.057 h-1 para J8A2 y 0.042 h-1 para M1B, y las velocidades especficas de degradacin de 0.72 y 1.16 mmol de PETN/g de protena.h, respectivamente. Adems, el extracto crudo de la cepa J8A2 mostr una actividad especfica (U) de 1.03 mmol de PETN/h y una actividad especfica por protena (U/g) de 138.6 mmol de PETN/g.h. Palabras clave: Tetranitrato de pentaeritritol; contaminacin; minera; biodegradacin; Bacillus; Enterobacter.
Abstract
Pentaerythritol tetranitrate (PETN) is the most energetic and recalcitrant detonating used in mining activity being that it has four nitro groups linked by ester bounds, also is considered a persistent organic pollutant in agreement with the Stockholm Convention. In this work the degradation efficiency of PETN by bacteria isolated from mining environments is evaluated. At first, strains that showed growth during three subcultures with PETN as unique source of nitrogen were selected. Before, we identified Bacillus sp. J8A2 and Enterobacter sp. M1B by the 16S rRNA gene partial sequences analysis. Specific growth rate were 0.057 h-1 for J8A2 and 0.042 h-1 for M1B, and specific rate of PETN degradation were 0.72 and 1.16 mmol of PETN/g of protein.h respectively. Moreover, crude extract of J8A2 strain showed a specific activity (U) of 1.03 mmol of PETN/h and a specific activity per protein (U/g) of 138.6 mmol of PETN/g.h. Keywords: pentaerythritol tetranitrate; contamination; mining; biodegradation; Bacillus; Enterobacter.
Citacin: Durn Y., C. Andrade, A. Martnez, T. Snchez, F. De la Cruz & P. Ramrez. 2013. Biodegradacin del explosivo tetranitrato de pentaeritritol (PETN) por bacterias aisladas de ambientes mineros. Rev. peru. biol. 20(2): 145 - 150 (Diciembre 2013)
Introduccin La contaminacin por explosivos es una preocupacin muy importante en los lugares donde son producidos y almacenan, pero sobretodo donde se emplean (Binks et al. 1996, French et al. 1998, Ibeanusi et al. 2009, Singh et al. 2012), porque no son comunes en el ambiente y son recalcitrantes. Entre los explosivos ms energticos est el tetranitrato depentaeritritol (PETN), el cual se sintetiza mediante la nitrificacin de derivados de alcoholes formando enlaces ster de difcil degradacin (White et al. 1996). Adems, su estabilidad en el ambiente a 30 C expresado en vida media extrapola un valor de 12 millones de aos (Fotlz 2012). El PETN est clasificado dentro del Grupo A de explosivos primarios o iniciadores segn la clasificacin del sistema UN (Naciones Unidas) y ha sido designado con el cdigo UN 150 y clasificado de riesgo 1.1D (Global security 2011). Es un detonante que no reacciona por movimiento brusco o la ignicin a presin atmosfrica normal, sino que es sensible a la friccin, ms que otros explosivos como el 2,4,6 trinitrotolueno (TNT) y el tetril (Jaw & Lee 2008). Sin embargo, la reactividad del PETN no est
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Durn et al.
asegurada por sus caractersticas qumicas, por lo que algunos dispositivos explosivos en la industria minera o petrolera pueden no explosionar por problemas tcnicos y constituirse en un riesgo para el ambiente y las personas (Nyanhongo et al. 2008). Las caractersticas recalcitrantes, xenobiticas y el riesgo para la salud del hombre y el ambiente que causa la contaminacin por PETN fue contemplado en el Convenio de Estocolmo sobre Contaminantes Orgnicos Persistentes (COPs), y donde el Per es parte comprometida a tomar medidas jurdicas y administrativas para la eliminacin de estos contaminantes (SINIA 2007). En respuesta a este problema global se han estudiado microorganismos degradadores de PETN como Enterobacter cloacae PB2 y Agrobacterium radiobacter, los cuales son capaces de degradar otros explosivos como el TNT y sus derivados (French et al. 1998), y que han sido reportados como carcinognicos (Esteve-Nez et al. 2001). Es as que microorganismos capaces de degradar ambos compuestos seran los ms efectivos durante el empleo del pentolito (mezcla de TNT y PETN), cuyo uso es comn en nuestro pas cuando se emplea ANFO (mezcla de nitrato de amonio y combustible) para voladuras (Estudios mineros, 2011). En este contexto, en el presente trabajo se informa de la seleccin de bacterias degradadoras de PETN aisladas de ambientes mineros, su identificacin molecular y la determinacin de su eficiencia en la degradacin de PETN, con la perspectiva de desarrollar tcnicas de control de contaminacin y riesgos por explosivos en el Per. Material y mtodos Material biolgico.- Diecinueve cepas bacterianas del cepario del Laboratorio de Microbiologa Molecular y Biotecnologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos fueron evaluadas. Las cepas fueron aisladas de ambientes mineros de las regiones La Libertad, Junn y Lima. Seleccin de cepas que degradan PETN.- Las cepas fueron cultivadas durante 12 16 horas en caldo TSB a 28 C y lavadas en solucin salina al 0.85%. Se inocul al 0.5% en Caldo PETN (Binks et al. 1996, White et al. 1996) compuesto por (g/L): K2HPO4 3.5, KH2PO4 1.5, MgSO4 0.124, NaCl 0.5, glucosa 10 y PETN 0.316 como nica fuente de nitrgeno y 0.73 mL/L de glicerol y el pH fue ajustado a 7.02; se adicion 1 mL/L de solucin de trazas al medio de cultivo (White et al. 1996). Se incub a 28 C a 200 rpm por 7 das. Al cabo de los 7 das se midi el crecimiento por densidad ptica a 600 nm (DO600) y se verific su pureza en agar tripticasa soya (TSA) y agar mnimo P compuesto por (g/L): K2HPO4 3.5, KH2PO4 1.5, MgSO4 0.124, NaCl 0.5, glucosa 10, NH4NO3 0.24, pH 7.02 y agaragar al 1.5%. Se seleccionaron las cepas que mostraron mayor densidad ptica. Para determinar las caractersticas fenotpicas y moleculares se sigui lo establecido en el Manual de Bacteriologa Sistemtica de Bergey (Brenner et al. 2005, De Vos et al. 2009). Amplificacin del gen RNAr 16S.- Para la extraccin de DNA genmico, las cepas fueron cultivadas en caldo TSB por 12-16 horas a 28 C y se aplic el protocolo de purificacin del Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega). Para la PCRse emplearon los iniciadores 27F (5-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3) y 519R (5-GWATTACCGCGGCKGCTG-3) para amplificar las 500pb correspondiente al extremo 5 del gen RNAr 16S (Weisburg et al. 1991). En la
PCR se emplearon las indicaciones de la KOD HOT start DNA polymerase (Novagen) y el programa fue: desnaturalizacin inicial 95 C por 2 minutos, 33 ciclos de desnaturalizacin a 95 C por 30 segundos, hibridacin a 62 C por 10 segundos, amplificacin a 70 C por 10 segundos, y amplificacin final a 70 C por 10 minutos. Los productos de PCR fueron evidenciados en geles de agarosa 1% en tampn TAE 0.5X, teidas con bromuro de etidio al 0.5% y reveladas en transiluminador UV. Se emple como marcador de peso molecular 1 kb plus DNA Ladder (Promega). El secuenciamiento parcial del gen RNAr 16S se realiz segn el protocolo del BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit en el secuenciador Automatic Sequencer 3730xl por MACROGEN KOREA. Determinacin de la relacin filogentica.- Las secuencias consenso del gen RNAr 16S de las cepas seleccionadas fueron comparadas con la Base de Datos del GenBank/EMBL/DDBJ usando la plataforma del programa local de alineamiento de secuencias BlastN versin 2.0 (Altschul et al. 1990). Luego se realiz un alineamiento mltiple con el programa Bioedit v7.0.9 (Hall 1999) con secuencias que presentaron similitud mayor o igual a 97%, adems de secuencias de otras especies relacionadas. Finalmente, se infiri el rbol filogentico con el programa Mega v5.2 (Kumar et al. 2008) empleando el modelo Neighbor-Joining, el mtodo de substitucin nucleotdica Maximum Composite Likelihood y 1000 rplicas de Bootstraps (Tamura et al. 2011). Cintica de degradacin de PETN.- Los ensayos se realizaron por triplicado en Caldo PETN modificado compuesto (g/L): K2HPO4 1.68, MgSO4 0.124, NaCl 0.5, succinato 6.80, KOH 7.5, PETN 0.316 y Tween 80 al 0.1%, y se incub durante 82 horas a 28 C y 200 rpm. Se tom muestras cada 12 horas para cuantificar PETN residual y protenas totales como se describe a continuacin. Cuantificacin de PETN residual y protenas totales.- Se cuantific el PETN residual segn el Mtodo Oficial 964.25 de la AOAC (2002): tetranitrato de pentaeritritol en medicamentos. Brevemente, a 1 mL de cultivo se adicion 99 mL de cido actico glacial y 4 mL de cido fenoldisulfnico, se homogeniz y dej en reposo por 30 minutos en oscuridad. Luego, se adicion 60 mL de agua destilada y 15 mL de hidrxido de amonio concentrado, se agit suavemente y se dej enfriar, se midi la absorbancia a 408 nm. Para la cuantificacin de protenas totales, se mezcl 1 mL de cultivo con 1 mL de acetona y se centrifug a 13000 rpm por 3 minuto, luego se repiti este procedimiento en 100 L de acetona y se resuspendieron las clulas en hidrxido de sodio 0.1 M y se incub a 80 C por 5 minutos (Trott et al. 2003). Seguido, se emple el mtodo de Bradford (1976) para la cuantificacin de protenas totales. Cuantificacin de la actividad PETN reductasa.- Se obtuvieron extractos crudos de las cepas en fase exponencial tarda cultivadas en caldo PETN modificado. Luego, se colectaron las clulas a 4500 rpm por 10 minutos y se emple tampn bis-tris propano (50 mM, pH 7.0) para lavar y resuspender las clulas. Luego stas fueron lisadas por sonicacin por tres veces a 15 segundos alternados con 15 segundos de enfriamiento en hielo. Finalmente, se centrifug a 13000 rpm por 10 minutos a temperatura ambiente y se filtr el sobrenadante en membrana de nitrocelulosa de 0.45 nm (Binks et al. 1996).
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J8A2 94 97 49 100 81 Bacillus licheniformis Pb - WC09001 Bacillus licheniformis Bacillus licheniformis BB10 Bacillus licheniformis ATCC 14580 T
57 76
Bacillus subtilis 168 ATCC 23857 T Bacillus subtilis XF - 1 Bacillus amyloliquefaciens ATTC 23350 T
Bacillus subtilis BSn5
100
88 Bacillus amyloliquefaciens BCRC 14193 Bacillus anthracis CDC 684 NRRL 3495 T Bacillus cereus ATCC 10987 T Bacillus megaterium DSM 319 T Bacillus megaterium PPB7 100
Brevibacillus laterosporus DSM 25 T
0.01
Figura 1. Relacin filogentica de la cepa J8A2 (HF568785.1) () inferida a partir de 491pb del gen RNAr 16S aplicando el modelo NeighborJoining, el mtodo de substitucin nucleotdica Maximum Composite Likelihood con 1000 rplicas de Bootstraps. La cepa J8A2 conforma un clado con la especie Bacillus licheniformis. La barra representa el porcentaje de substituciones nucleotdicas. El smbolo T seala especie tipo.
Posteriormente, para medir la actividad PETN reductasa se emple un volumen final de reaccin de 3:2 mL del extracto crudo filtrado, 1 mL de tampn bis-tris propano (pH 7.0), 0.2 mM de NADPH (concentracin final) y 760 M de PETN (6 L de 380 mM PETN en acetona). La reaccin se llev a cabo en bao mara a 28 C por 45 minutos. A continuacin se realiz la inactivacin del NADPH por adicin de cianuro frrico 0.5 mM y metosulfato de fenazina 0.2 mM concentracin final, seguidamente se midi la produccin de nitritos mediante la reaccin de Griess (Binks et al. 1996). La oxidacin de NADPH fue monitoreada a 350 nm al inici y al final de la reaccin y la cantidad de protena en el filtrado se cuantific mediante la reaccin de Bradford (1976). Para realizar los clculos una unidad de actividad enzimtica fue definida como la cantidad de moles de NADPH oxidado por minuto y se consider que por cada molcula de PETN se liberaban dos molculas de nitrito basado en los resultados obtenidos por Binks et al. (1996). Resultados Cepas degradadoras de PETN.- De las 19 cepas evaluadas se seleccionaron la J8A2 y M1B como las ms eficientes en la degradacin de PETN. La cepa J8A2 mostr DO600 de 0.173, 0.146 y 0.141 durante tres subcultivos, mientras que la M1B mostr DO600 de 0.132, 0.120 y 0.125, respectivamente. Anlisis filogentico.- La secuencia consenso del gen RNAr 16S de J8A2 (HF568785.1) fue comparada con la Base de Datos del GenBank/EMBL/DDBJ mediante el programa BLASTn 2.0, y se obtuvo como resultado una identidad de 99% y una similitud de 97% con Bacillus licheniformis Pb-WC09001 (HM006901.1), B. licheniformis BB10 (JN391533.1), B. licheniformis (AY479984.1) y con otras secuencias del gnero Bacillus no cultivables. Estas secuencias del gen RNAr 16S de Bacillus licheniformis ATCC 14580 (CP000002.3), Bacillus subtilis 168 ATCC 23857 (AL009126.3), Bacillus subtilis XF-1 (P004019.1), Bacillus subtilis BSn5 (CP002468.1), Bacillus amyloliquefaciens ATTC 23350 (FN597644.1), Bacillus amyloliquefaciens BCRC 14193 (EF433408.1), Bacillus anthracis CDC684 NRRL 3495 (CP001215.1), Bacillus cereus ATCC 10987 (AE017194.1), Bacillus megaterium DSM319
(CP001982.1), Bacillus megaterium PPB7 (HM771662.1) y Brevibacillus laterosporus DSM 25 (AB112720.1) como grupo externo fueron alineadas y analizadas con el programa Mega 5.2 para inferir la respectiva relacin filogentica en el cual se denota que la cepa J8A2 conforma un clado con 94% de probabilidad con la especie Bacillus licheniformis (Fig. 1). Por otro lado, el anlisis de la secuencia parcial del gen rRNA 16S de la cepa M1B (HF568786.1) con el programa BLASTn 2.0 mostr 100% de identidad y 95% de similitud con Enterobacter asburiae KNUC5007 (JQ682630.1), Enterobacter sp. Gg10 (JN020643.1), Enterobacter sp. AAP4 (JF276427.1), as como con secuencias de Enterobacter no cultivables. Dado que el anlisis del gen RNAr 16S, generalmente no discrimina especies dentro de la familia Enterobactereaceae (De Angelis et al. 2011) no fue imprescindible realizar el anlisis filogentico de la cepa M1B. Caractersticas fenotpicas.- La cepa J8A2 presenta las siguientes caractersticas fenotpicas a 28 C: bacilo corto Gram negativo (24 horas en agar TSA), motil, utiliza citrato como nica fuente carbono, no hidroliza almidn, produccin de indol negativo, sin produccin de H2S, fermentacin de glucosa con produccin de acidez y gas, crecimiento en anaerobiosis, crecimiento en NaCl al 7%, rojo de metilo positivo y VogesProskauer negativo. Caractersticas culturales de colonia en agar TSA a 28C por 24 horas: plana, translcida, con centro amarillo claro, sin pigmento difusible, borde irregular y un promedio de 3.0 mm de dimetro. Adems, en algunas ocasiones present la apariencia de un cultivo mixto con colonias de borde regular, convexas, mucoides y opacas. Por otro lado, la cepa M1B present las siguientes caractersticas fenotpicas a 28 C: bacilo Gram negativo (24 horas en agar TSA), mvil, citrato negativo, indol negativo, lisina descarboxilasa, arginina y ornitina dehidrolasa, sin produccin de H2S, fermentacin de glucosa con produccin de acidez y sin gas, rojo de metilo positivo dbil y Voges-Proskauer negativo. Caractersticas culturales de colonia en agar TSA a 28 C por 24 horas: convexa, blanca opaca, sin pigmento difusible, borde regular, lisas y un promedio de 2 mm de dimetro.
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20 18 16 Protena (mg/L) 14 12 10 8 6 4 2 0 80 60 40 20 0 180 160 140
Protena (mg/L)
20 18 16 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0
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Figura 2. Cintica de degradacin de PETN por Bacillus sp. J8A2 incubado por triplicado a 28C y 200rpm en caldo PETN modificado. Concentracin de PETN residual (), concentracin de protena total (), concentracin de PETN en caldo sin inocular (). Barras verticales: error estndar del promedio de tres repeticiones.
Figura 3. Cintica de degradacin de PETN por Enterobacter sp. M1B incubado por triplicado a 28C y 200rpm en caldo PETN modificado. Concentracin de PETN residual (), concentracin de protena total (), concentracin de PETN en caldo sin inocular (). Barras verticales: error estndar del promedio de tres repeticiones.
Cintica de degradacin del PETN.- Con este fin se optimiz la composicin del caldo PETN modificado recomendado por Park et al. (2003) (resultados no publicados). Las cepas J8A2 (Fig. 2) y M1B (Fig. 3) mostraron velocidades especficas de crecimiento de 0.057 h-1 y 0.042 h-1 respectivamente. La concentracin de PETN se redujo al 50% en menos de 35 horas, obtenindose un rendimiento especfico de degradacin de 1.16 mmol de PETN/g de protena.h para M1B y 0.72 mmol de PETN/g de protena.h para J8A2; y un rendimiento por sustrato 21.56 1.5 g de protena/mol de PETN para M1B y de 39.7 2.1 g de protena/mol de PETN para J8A2. Despus de 60 horas de cultivo se registr la mayor concentracin de protena de 16.74 g/L para ambas cepas, sin embargo la cepa M1B present valores de 4.27 g/L de PETN residual en comparacin con J8A2 que mostr 51.56 g/L de PETN residual. Por otro lado, a las 72 horas de la cintica se observ la reduccin en la cantidad de protena, a 7.96 g/L para J8A2 y 9.15 g/L para M1B. Posteriormente, a las 82 horas se registr un nuevo incremento de la concentracin de protena y la menor concentracin de PETN, 2.12 mg/L para M1B y 4.25 mg/L para J8A2. Adicionalmente, a los 5 das de incubacin se observ que el medio de cultivo de la cepa J8A2 vir a amarillo. Actividad PETN reductasa del extracto crudo.- La velocidad especfica de liberacin de nitritos obtenida fue 4.6 mol/min.mg a partir de 1.54 mol de nitritos liberados por 7.43 g de protena total en 45 minutos y a 28 C; y se registr la oxidacin de 1.59 mol de NADPH calculndose una velocidad especfica de oxidacin de NADPH de 4.7 mol/ min.mg. Por otro lado, los controles sin NADPH registraron valores inferiores de liberacin de nitritos con un promedio de 1.5 mol/min.mg. Considerando que se libera dos molculas de NO-2 de cada molcula de PETN se calcul que 1.54 mol de nitritos fueron liberados a partir de 0.77 mol de PETN. Por lo tanto, la acti-
vidad especfica (U) fue de 1.03 mmol de PETN/h a partir de 7.43 mg de protena total y la actividad especfica por protena (U/g) fue de 138.6 mmol de PETN/g.h. Discusin Identificacin de las cepas degradadoras de PETN.- La secuencia parcial del gen RNAr 16S de la cepa J8A2 permiti ubicarla dentro del clado de la especie Bacillus licheniformis con 94% de probabilidad segn el rbol filogentico (Fig. 1). Bacillus licheniformis forma parte del grupo filogentico 1 determinado en base a la secuencia del gen RNAr 16S y que incluye a especies como B. subtilis, B. pumilus, B. amyloliquefaciens, entre otras (Wang ySun 2009). Por otro lado, segn las caractersticas fenotpicas de la cepa J8A2 y las registradas en el Manual de Bacteriologa Sistemtica de Bergey (De Vos et al. 2009), el uso de citrato como fuente de carbono, el crecimiento en 7% de NaCl y el crecimiento en anaerobiosis lo relacion presuntivamente con B. licheniformis, sin embargo, la coloracin Gram negativa, la ausencia de actividad amiloltica y la inhibicin del crecimiento a 50 C no permiti relacionarlo taxonmicamente con ninguna especie. Asimismo, la secuencia del gen RNAr 16S de la cepa M1B slo permiti identificarla dentro del gnero Enterobacter pero no especie, ya que este marcador no es suficiente para diferenciar especies de la familia Enterobacteriaceae (Sprer et al. 1999). La cepa M1B concord fenotpicamente con las caractersticas generales del gnero Enterobacter del Manual de Bacteriologa Sistemtica de Bergey (Brenner et al. 2005). Slo con Enterobacter cloacae y E. kobei comparti el mayor nmero de caractersticas: Voges-Proskauer negativo, indol negativo, arginina dehidrolasa y ornitina decarboxilasa. En conclusin, nuestros resultados indican que la cepa M1B es Enterobacter sp. Cabe resaltar que el gnero Bacillus incluye especies Gram positivas, Gram negativas y Gram variables (De Vos et al. 2009). Entre las especies haloflicas Gram negativas se ha reportado a Bacillus horti (Yumoto 1998), as como se ha
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PETN(mg/L)
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caracterizado cepas Gram negativas de este gnero con capacidad de degradar queratina, como Bacillus sp. PW-1 (Joshi 2007) que comparte las siguientes caractersticas fenotpicas con la cepa J8A2: motilidad, uso de citrato como nica fuente carbono, sin actividad amiloltica, no produce H2S y fermenta glucosa con produccin de acidez y gas. Adems, los cambios morfolgicos de colonia registrados son caractersticas muy particulares dentro del grupo relacionado con Bacillus subtilis y sobre todo en el caso de Bacillus licheniformis (De Vos et al. 2009, Waldeck 2006, Carlisle 1989). Finalmente, podemos afirmar que la cepa J8A2 mantiene una similitud significativa con la especie Bacillus licheniformis a nivel de la secuencia parcial del gen RNAr 16S, sin embargo algunas de las caractersticas fenotpicas son incongruentes con dicha especie por lo que la cepa J8A2 ha sido designada como Bacillus sp. Evaluacin de la cintica de degradacin de PETN.- Las velocidades especficas de crecimiento de las cepas M1B y J8A2, 0.057 h-1 y 0.042 h-1 respectivamente, son comparables entre s; mientras que la velocidad especfica de crecimiento de E. cloacae PB2 fuede 0.112 h-1 (Binks et al. 1996), 1.9 veces ms que M1B y 2.7 veces ms que J8A2. Sin embargo, el rendimiento de J8A2, 39.7 g de protena por mol de PETN, fue 1.8 veces ms que M1B que signific mayor cantidad de grupos NO2 del explosivo incorporado al metabolismo de J8A2. Por otro lado, E. cloacae PB2 registr un rendimiento de 43.6 2.4 g de protena por mol de PETN (French et al. 1998), 1.09 veces ms que el rendimiento obtenido por J8A2, lo cual los hace comparables en rendimiento. Sin embargo, las condiciones de incubacin ensayadas fueron de 30 C de temperatura y 170 rpm, mientras que en el presente estudio se realiz a 28 C y 200 rpm. Ambas cepas redujeron a la mitad la concentracin de PETN en un promedio de 35 horas, mientras que E. cloacae PB2 es capaz de reducir la misma cantidad en menos de 30 horas; sin embargo, se debe tener en cuenta que la concentracin inicial en el presente estudio fue de 158 mg/L, mientras que en la cintica de E. cloacae PB2 fue de 32 mg/L aproximadamente. Las velocidades especficas de degradacin obtenidas, 1.16 mmol de PETN/g de protena.h para M1B y 0.72 mmol de PETN/g de protena.h muestran que la cepa M1B fue capaz de convertir en protena 1.6 veces ms PETN por hora que la cepa J8A2, mientras que Enterobacter cloacae PB2 mostr un velocidad especfica de degradacin de 1.03 mmol de PETN/g de protena.h similar al de M1B, pero 1.4 veces ms que J8A2. La enzima PETN reductasa posee un grupo prosttico de FMN (Flavin mononucletido), comn en la familia de las flavoenzimas y evidencia un color amarillo claro con la mayor absorbancia a 470 nm cuando es purificado. Esta caracterstica se ha reportado en el estudio de las old yellow enzime (OYE) homlogos de Pseudomonas putida, XenA, XenB, XenC, XenE y XenF, relacionados con la degradacin de compuestos nitroaromticos como TNT (Van Dillewijnet al. 2008). Adems, el ciclo cataltico de la PETN reductasa comprende una reaccin de dos pasos. La primera es reductiva, donde la enzima es reducida por el NADPH hasta obtener la forma dihidroquinona del grupo prosttico FMN de la enzima. Luego, en la segunda reaccin
oxidativa la FMN es oxidada por grupos NO2 del explosivo (Khan et al. 2002, Khan et al. 2004). Por otro lado, otro reporte afirma que los cristales de PETN en estado reducido son incoloros y en su estado oxidado son amarillos brillantes (Khan et al. 2005), por lo que el PETN reducido no aporta cambio de color en el medio. Entonces, el cambio de color del cultivo podra deberse a la produccin de flavoenzimas y la completa oxidacin de los grupos prostticos FMN que en consecuencia pigmentan el medio de amarillo. Evaluacin de la actividad PETN reductasa.- Tanto la velocidad especfica de liberacin de NO-2 como la velocidad especfica de oxidacin de NADPH, 4.6 mol/min.mg de protena y 4.7 mol/min.mg de protena demuestran que se requiere de una molcula de NADPH para liberar una molcula de nitrito, tal y como se ha reportado con E. cloacae PB2 que mostr 4.6 mol/min.mg de velocidad especfica de liberacin de NO-2 y 4.2 mol/min.mg de velocidad especfica de oxidacin de NADPH. Esto demuestra la dependencia de un cofactor de esta naturaleza para la degradacin de PETN, lo cual fue confirmado por los controles sin NADPH que registraron velocidad especfica de liberacin de NO2 de 1.5 mol/min.mg, 3.1 veces menos que los ensayos con NADPH. La actividad especfica por protena (U/g) de E. cloacae PB2 sugiere una liberacin lenta de nitritos al medio durante su crecimiento, pero su velocidad especfica de crecimiento y degradacin sugieren una incorporacin rpida de estos a su metabolismo, lo cual podra impedir una acumulacin de nitritos en el medio disminuyendo as la concentracin y toxicidad de ste (Tilak et al. 2007, Cabrera & Velzquez 1998). En cambio, la cepa J8A2 mostr un comportamiento contrario reflejado en una mayor actividad especfica por protena (U/g), pero una menor velocidad especfica de crecimiento y degradacin por la acumulacin de nitritos en el medio. Esto explicara la limitacin de crecimiento de la cepas J8A2 y M1B durante las cinticas ensayadas (Figs. 2 y 3) alcanzando a producir slo 16.74g/L de protena total. Agradecimientos El presente trabajo fue financiado parcialmente por la Universidad Nacional Mayor de San Marcos a travs del Vicerrectorado de Investigacin con el proyecto No 131001161. Literatura citada
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150
bioqumica del veneno de TiTYUS KADERKAi y notas sobre su distribucin en el Per

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Estudio bioqumico del veneno de Tityus kaderkai (Scorpiones: Buthidae) con notas sobre su distribucin y hbitat en el Per
Biochemical study of Tityus kaderkai (Scorpiones: Buthidae) venom with notes on its distribution and habitat in Peru
Enrique Escobar1, Rosalina Tincopa1 y Jos A. Ochoa2
1 Laboratorio de Bioqumica de Toxinas Naturales. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Apartado 10058, Lima 11, Per. Email Enrique Escobar: eescobarg@unmsm.edu.pe 2 Frankfurt Zoological Society - Peru, Residencial Huancaro, Los Cipreses H-21, Santiago, Cusco, Per. Email Jos A. Ochoa: jaochoac2000@yahoo.com
Resumen
Se ha estudiado bioqumicamente el veneno del escorpin Tityus kaderkai Kovaik, 2005 del departamento de Madre de Dios. El veneno soluble contiene 47.6% de protena y por PAGESDS muestra cinco bandas proteicas. Las protenas del veneno fueron separadas, a partir de 12.9 mg de veneno, mediante cromatografa de intercambio catinico en CM Sephadex C-25 con buffer acetato de amonio 0.05 M pH 7, obtenindose 7 picos proteicos (I VII). Los ensayos de toxicidad han permitido identificar tres toxinas que afectan a Mus musculus y que se encuentran asociadas a los picos IV, V y VII; asimismo, se ha detectado toxicidad sobre Gryllus sp. en los picos IV, V, VI y VII. Entre las actividades enzimticas ensayadas, se ha encontrado actividad proteoltica sobre casena en el pico I y actividad de hialuronidasa en el pico IV con una actividad especfica de 205.6 g/min/mg. Tanto en el veneno soluble como en las fracciones colectadas no se encontr actividad de fosfolipasa, anticoagulante ni hemoltica. El trabajo incluye notas sobre la distribucin y el hbitat de la especie. Palabras claves: veneno; escorpin; toxina; enzima; Tityus kaderkai.
Abstract
The biochemistry of the venom of Tityus kaderkai Kovaik, 2005 from Madre de Dios department, has been studied. The soluble venom contains 47.6% of protein. The venom proteins were separated from 12.9 mg of venom using cationic exchange chromatography in CM Sephadex C-25 with a 0.05 M ammonium acetate buffer pH 7.0. The chromatography profiles show seven peaks of proteins (I VII) and five protein bands were distinguished in the crude venom, by PAGE-SDS. The toxicity assays allowed the identification of three toxins affecting Mus musculus which were associated to peaks IV, V and VII. Toxic proteins to Gryllus sp. were also found associated to peaks IV, V, VI and VII. Through the enzymatic activity, the presence of proteolytic activity over casein was found related to the first peak. Hyaluronidase activity has also been found in the peak IV with a specific activity 205.6 g/min/mg. However, the crude venom and collected fractions did not show any phospholipase, anticoagulant, nor hemolytic activity. Notes on the distribution pattern and habitat are also included. Keywords: venom; scorpion; toxin; enzyme; Tityus kaderkai.
Citacin: Escobar E, R. Tincopa y J.A. Ochoa. 2013. Estudio bioqumico del veneno de Tityus kaderkai (Scorpiones: Buthidae) con notas sobre su distribucin y hbitat en el Per. Rev. peru. 20(2): 151 - 158 (Diciembre 2013)
13/07/2013 17/10/2013 09/12/2013
Introduccin Los escorpiones son arcnidos venenosos que existen desde hace ms de 400 millones de aos y cuyas caractersticas morfolgicas se han mantenido casi inalteradas en el tiempo. Todos ellos son muy activos durante la noche, alimentndose principalmente de insectos, otros artrpodos y en algunos casos de pequeos vertebrados que atrapan con sus pedipalpos, e inmovilizan o matan con su veneno (Polis 1990). El veneno de escorpin est constituido principalmente por toxinas y enzimas de naturaleza proteica. Estas toxinas actan sobre el sistema nervioso a nivel de los canales inicos de sodio, potasio, calcio o cloro, y producen la parlisis de la presa; son los componentes ms estudiados porque sirven como excelentes modelos de estructura y funcin biolgica, y tambin porque son letales a varios organismos incluyendo al hombre. Adems, algunas toxinas tienen un potencial uso como sustancias bioinsecticidas o antimicrobianas (Torres-Larios et al. 2000, Pimenta et al. 2001, Jiang et al. 2001, Mejri et al. 2003,
151
Escobar et al.
Bosmans et al. 2005). En relacin a las enzimas, se considera que los venenos de escorpiones son pobres en estas protenas; sin embargo, algunas enzimas han sido detectadas en diversos venenos, entre ellos Heterometrus gravimanus (Pocock, 1894), Heterometrus scaber (Thorell, 1876), Tityus serrulatus Luz & Mello, 1922 y Tityus bahiensis (Perty, 1833) (Pessini et al. 2001, Almeida et al. 2002, Morey et al. 2006). El gnero Tityus C.L. Koch, 1836, contiene 210 especies descritas hasta la fecha y es el grupo ms numeroso de la familia Buthidae (Fet & Lowe 2000, Loureno 2006). Estos escorpiones se distribuyen en parte de Amrica Central y zonas tropicales de Sudamrica. La toxicidad de sus venenos est relacionada con la presencia de pptidos que afectan los canales inicos (Barhanin et al. 1982, Becerril et al. 1997). La especie brasilera T. serrulatus, es considerada una de las ms peligrosas para el ser humano, y su letalidad se debe a la presencia de toxinas y tambin a una hialuronidasa que permite la rpida difusin del veneno (Couraud et al. 1982, Pessini et al. 2001). Otros venenos que se han estudiado son los de Tityus bahiensis (Becerril et al. 1996, Pimenta et al. 2001), T. stigmurus (Torell, 1876), T. cambridgei Pocock, 1897, T. zulianus GonzalezSponga, 1981, T. fasciolatus Pessa, 1935, T. discrepans (Karsch, 1879), T. trivitattus Kraepelin, 1898 y T. costatus (Karsch, 1879) (Becerril et al. 1996, Batista et al. 2000, 2002; Murguia et al. 2004, Diego-Garca et al. 2005, Borges et al. 2004, Wagner et al. 2003, DSuze et al. 2004, Coronas et al. 2003). En estos estudios se han purificado toxinas especficas para artrpodos (DSuze et al. 2004), insectos (Pimenta et al. 2001) y mamferos (Borges et al. 1990); en algunos casos tambin se han encontrado toxinas con accin tanto sobre insectos como mamferos (Pimenta et al. 2001). Adems, tambin se han reportado algunas actividades enzimticas como la de hialuronidasa (Pessini et al. 2001) y actividad gelatinoltica (Almeida et al. 2002). Nuestro laboratorio, desde el ao 2002 ha venido trabajando en la purificacin y estudio de algunas protenas de ciertos venenos de escorpiones del Per tales como los de Hadruroides lunatus (L. Koch, 1867), H. bustamantei Ochoa & Chaparro, 2008, Centruroides margaritatus (Gervais, 1841) y Brachistosternus ehrenbergii (Gervais, 1841). En estos venenos se han identificado toxinas de naturaleza bsica que afectan a Porcelio laevis, Gryllus sp. y Mus musculus. Asimismo algunas enzimas como la fosfolipasa se han encontrado en los venenos de H. lunatus, H. bustamantei y B. ehrenbergii ms no en el veneno de C. margaritatus (Escobar et al. 2002; Escobar et al. 2003a, 2003b, Rivera et al. 2004, Velsquez y Escobar 2004, Ramos y Escobar 2007). Asimismo, ciertos pptidos con accin antibacteriana tambin han sido descritos (Escobar et al. 2008, Rivera et al. 2010). En el Per han sido reportadas 84 especies de escorpiones, siendo el gnero Tityus representado al menos por 16 especies, distribuidas principalmente en valles interandinos y en la cuenca Amaznica peruana (Ochoa, 2005). Las especies del gnero Tityus, como ya se mencion, son particularmente importantes porque muchas de ellas son extremadamente peligrosas para el hombre (Borges 1996, Freire-Maia et al. 1994). Desde el ao 2005, hemos realizado expediciones a diferentes localidades de la Amazona peruana, registrando varias especies de escorpiones. Entre las especies ms abundantes en el departamento de Madre de Dios encontramos a Tityus
kaderkai Kovaik 2005, un escorpin conocido hasta ahora slo para Bolivia. Ejemplares vivos de esta especie fueron llevados al laboratorio donde se procedi a estudiar su veneno, mientras que otros fueron colectados y depositados en el Museo de Historia Natural de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco para su determinacin taxonmica. Este trabajo no solamente representa el primer estudio bioqumico sobre el veneno de una especie del gnero Tityus en el Per sino que constituye adems, el primer registro de esta especie para el pas, ampliando su distribucin hasta el sur este peruano en la regin Madre de Dios. Material y mtodos Material biolgico.- Escorpiones de ambos sexos de la especie Tityus kaderkai procedentes de Madre de Dios. - Ratones albinos Balb/c de 18g. - Grillos recolectados en la localidad de Huaura, Lima. - Araas del gnero Kukulcania recolectadas en la ciudad universitaria de la UNMSM, para alimentar a los escorpiones. Recoleccin y mantenimiento de los escorpiones.- Se utilizaron 79 escorpiones de la especie Tityus kaderkai provenientes del departamento de Madre de Dios, ro Los Amigos (123407S, 700557W, 260 280 m, marzo 2005, J.A.Ochoa & J.C.Chaparro). En el laboratorio los escorpiones se mantuvieron juntos en un envase de plstico de 65 x 37 x 30 cm; se les aliment cada dos semanas con araas o grillos, y constantemente se les proporcion algodones humedecidos con agua, de acuerdo al mtodo de Candido y Lucas (2004). Obtencin del veneno.- El veneno, obtenido por estimulacin elctrica con 20 voltios, fue recibido en capilares y depositado en una placa Petri para su desecado al vaco. El veneno se mantuvo a -18 C hasta su uso. Tratamientos de los ratones.- Los ratones fueron adquiridos en el Instituto Nacional de Salud de Lima y transportados al laboratorio para su uso inmediato en los ensayos de toxicidad. Los procedimientos con los ratones se realizaron de acuerdo con la Gua de manejo y cuidado de animales de laboratorio: ratn del Instituto Nacional de Salud de Lima (Fuentes 2008); y la ley de proteccin a los animales domsticos y a los animales silvestres mantenidos en cautiverio (Ley 27265). Separacin cromatogrfica de las protenas del veneno.Para la separacin de las protenas, 12.9 mg de veneno se disolvieron en 600 L de buffer acetato de amonio 0.05 M pH 7, durante 30 minutos con ayuda de un vortex. Luego se centrfug a 6000 rpm por 30 minutos y se descart el precipitado, aplicndose 490 L del sobrenadante a una columna cromatogrfica de intercambio catinico de CM Sephadex C-25 de 13.5 x 1.1 cm equilibrada con buffer acetato de amonio 0.05 M a pH 7.0 (Escobar et al. 2002). Se colectaron fracciones de 1 mL y las protenas retenidas en la columna se eluyeron con el mismo buffer conteniendo NaCl 0.2 M y 0.6 M. La corrida se realiz a temperatura ambiente y a un flujo de 11 mL/h. Cuantificacin de protenas.- Para todos los ensayos el contenido proteico se determin midiendo la absorbancia a 280
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nm, segn el mtodo de Warburg y Christian (1941). Solo para determinar el contenido proteico del veneno soluble se utiliz el mtodo de Lowry et al. (1951). Electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (PAGE-SDS).- El perfil electrofortico del veneno soluble y las fracciones obtenidas se determinaron por PAGESDS de acuerdo al mtodo de Schgger y Von Jagow (1987). Como protenas estndares se usaron citocromo C (12.4 kDa) y aprotinina (6.5 kDa). Toxicidad sobre Mus musculus.- Ratones albinos machos de 18 g de peso fueron inoculados intraperitonealmente con 0,1 mL de veneno soluble diluido (7.65g) o de las fracciones colectadas. La toxicidad se evalu durante 3 horas despus de la inoculacin, en base a la aparicin de ciertos sntomas tales como temblores, hipersalivacin, hiperlacrimacin, dificultad para respirar, parlisis de extremidades y muerte. En total se realizaron dos ensayos y cada uno por triplicado. Toxicidad sobre Gryllus sp.- La toxicidad sobre los grillos se evalu por la inoculacin con una jeringa Hamilton, de 5 L del veneno soluble (0.22 mg/mL) o 15 L de las fracciones colectadas, en la parte ventral, entre el segundo y tercer par de patas. La toxicidad se determin por la parlisis o la muerte de los especmenes durante los primeros minutos despus de la inoculacin. Actividad de fosfolipasa.- Se determin por el mtodo de Marinetti (1965), para lo cual se prepar una emulsin de yema de huevo con buffer acetato de amonio 0,05 M pH 7,0 de modo que tuviera una absorbancia inicial a 920 nm de aproximadamente 0,600. A 1,5 mL de esta emulsin se le agreg 100 L del veneno soluble o 10 L de las fracciones colectadas y se midi la disminucin en la absorbancia a 920 nm durante 4 minutos. Actividad proteoltica.- La actividad proteoltica se determin sobre casena, para lo cual se incub a 37 C, 20 L de casena 8mg/mL con 10 L de la fraccin, durante 15, 30, 60, 120 y 180 minutos. La evaluacin de la actividad proteoltica se realiz por PAGE-SDS (Laemmli, 1970). Asimismo, tambin se midi la actividad proteoltica sobre albmina y hemolinfa de grillo. Para esta prueba se mezcl, por separado, 5 L de albmina bovina 2 mg/mL o hemolinfa de grillo (diluida 1:3) con 5 L de la fraccin con actividad proteoltica. Esta mezcla se incub a 37 C por 90 minutos y la evaluacin de la protelisis se realiz por PAGE-SDS (Laemmli 1970). Actividad de hialuronidasa.- La actividad de hialuronidasa del veneno soluble y las fracciones colectadas se determin por turbidimetra segn el mtodo de Di Ferrante (1988). La mezcla de reaccin contena 300 L de buffer acetato pH 6, 100 L de cido hialurnico (0.5 mg/mL en buffer acetato) y 100 L de las fracciones colectadas o 30 L de veneno soluble. La mezcla fue incubada durante 20 minutos a 37 C y la reaccin se detuvo con 1 mL de bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) al 2.5% (diluido en NaOH 2%). La absorbancia se ley a 400 nm y la actividad especfica se expres como los microgramos de cido hialurnico hidrolizados por minuto y por miligramo de protena. Actividad hemoltica.- La actividad hemoltica del veneno soluble y de las fracciones colectadas se evalu en forma directa e indirecta sobre eritrocitos humanos.
Directa.- La mezcla de reaccin contena 200 L de glbulos rojos al 0.5% en buffer Tris 0.1 M NaCl 0.15 M pH 7.5 y 50 L del veneno soluble o las fracciones colectadas. Se incub a 37 C por 2 horas y despus se centrifug a 6000 rpm por 15 minutos. Finalmente se separ el sobrenadante y se ley a 541 nm. Indirecta.- La mezcla de reaccin contena 200 L de glbulos rojos al 0.5%, 25 L de emulsin de yema de huevo (4 veces diluido en buffer Tris 0.1 M NaCl 0.15 M pH 7.5) y 100 L del veneno soluble o las fracciones colectadas. Se incub a 37 C durante 2 horas y despus se centrifug a 6000 rpm durante 15 minutos. Finalmente se separ el sobrenadante y se ley la absorbancia a 541 nm. Actividad anticoagulante.- La mezcla de reaccin conteniendo 100 L de plasma humano citratado y 50 L de veneno soluble o de las fracciones colectadas se incub a 37 C durante 15 minutos. Luego se agreg 50 L de CaCl2 0.08 M y se midi el tiempo de coagulacin. La actividad anticoagulante se determin midiendo el retraso en el tiempo de coagulacin del plasma, con respecto a un control sin veneno. Resultados y discusin Contenido proteico, separacin de las protenas y PAGESDS.- Para realizar este trabajo se utilizaron 12.9 mg de veneno provenientes de tres extracciones en tres meses sucesivos. En cada extraccin se obtuvo 5.7, 4.4 y 2.8 mg de veneno, de 74, 56 y 39 escorpiones respectivamente, obtenindose en promedio 0.075 mg de veneno por cada escorpin. Adicionalmente, durante las extracciones de veneno, se midi que cada escorpin expulsa en promedio aproximadamente 1 L de veneno. De acuerdo al mtodo de Lowry, se ha determinado que el veneno soluble de Tityus kaderkai contiene 47.6% de protena. En otros venenos de escorpiones de la familia Buthidae se han reportado porcentajes variados de contenido proteico; como por ejemplo, 54.1% en Buthotus judaicus y 81% en Centruroides margaritatus (Zlotkin et al.1982, Escobar et al. 2003b). Luego de pasar el veneno soluble de Tityus kaderkai por la columna de CM-Sephadex C-25 a pH 7 se obtuvo un perfil cromatogrfico con siete picos proteicos (del I al VII), de los cuales los tres primeros salieron con el buffer inicial de corrida. Al agregar NaCl 0,2 M eluyeron tres picos adicionales y finalmente con NaCl 0.6 M se obtuvo un pico ms, tal como se muestra en la Figura 1. Considerando que a pH 7 este gel est cargado negativamente, debido a los grupos carboximetil que posee, se puede decir que las protenas de los tres primeros picos tienen igual carga que el gel o son elctricamente neutras, mientras que las protenas de los cuatro ltimos picos estn cargadas positivamente y por ello slo salen despus de aplicar NaCl, quedando en evidencia su naturaleza bsica. Una caracterstica comn de los venenos de escorpiones es que la mayora de sus toxinas son de naturaleza bsica, lo cual se tiene en cuenta para separarlas con geles de intercambio catinico con quienes fcilmente interactan (Borges et al. 1990). Adicionalmente, la purificacin total de estos componentes se obtiene generalmente mediante cromatografa lquida de alta presin (HPLC) en fase reversa. La PAGE-SDS segn el mtodo de Schgger y Von Jagow (1987) mostr la presencia de al menos 5 bandas proteicas en el
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Escobar et al.
1.8 1.5
Absorbancia a 280nm
1.2 0.9 0.6 0.3 0 0 10 20 30
NaCl2 0.2M
NaCl2 0.6M
II III
40 50 60
IV
70
V
80
VI
90 100 110 120 130
VII
140 150
N de fraccin
Figura 1. Cromatografa en CM Sephadex C-25. Se aplic 0.490 mL (10.5 mg) de veneno soluble de Tityus sp. a la columna de intercambio catinico (13.5 x 1.1 cm) equilibrada con buffer acetato de amonio 0.05M pH 7.0. Se colectaron fracciones de 1 mL. Los nmeros en romanos indican los siete picos de protena obtenidos.
veneno soluble, de las cuales la de menor peso molecular fue la ms gruesa y notoria, lo que indica que la mayora de protenas del veneno de Tityus kaderkai son de bajo peso molecular (menor o igual a 6.5 kDa), lo cual es una caracterstica general de los venenos de escorpiones de la familia Buthidae. Adicionalmente al analizar electroforticamente los picos I y IV, se pudo ver que en el pico I se encontraban las bandas proteicas de alto y mediano peso molecular del veneno soluble y en menor medida las protenas de bajo peso molecular, pero con un patrn muy parecido al del veneno total. En cambio el pico IV mostr una sola banda proteica de 6.5 kDa. Los dems picos proteicos no se pudieron analizar electroforticamente debido a la baja concentracin proteica. Estos resultados se pueden ver en la Figura 2 y corroboran el hecho de que los venenos de escorpiones, en general, y los del gnero Tityus en particular, poseen una gran cantidad de pptidos de bajo peso molecular. Cabe sealar que la nica banda proteica correspondiente al pico IV, no necesariamente nos indica que se trata de una sola protena; lo ms probable es que contenga
varios tipos de pptidos con diversas actividades pero muy parecidos en el peso molecular. Algo muy ilustrativo al respecto es lo encontrado en otros venenos de escorpiones del gnero Tityus, como por ejemplo en el veneno de Tityus costatus donde se han encontrado por lo menos 84 componentes de bajo peso molecular (Diego-Garca et al. 2005). Toxicidad sobre Mus musculus y Gryllus sp.- La toxicidad sobre Mus musculus se encontr tanto en el veneno soluble como en los picos IV, V y VII de la corrida cromatogrfica. El efecto txico del veneno soluble se manifest por signos de irritabilidad, saltos descoordinados, secrecin lacrimal e inmovilidad de las patas posteriores. Asimismo el efecto txico del pico IV se evidenci por irritabilidad, exceso de secrecin lacrimal y convulsiones, mientras que el pico V caus hiperactividad e irritabilidad. Finalmente el pico VII produjo pequeos temblores, excesiva salivacin y secrecin lacrimal, inmovilidad de las patas posteriores y falla respiratoria, muriendo todos los ratones aproximadamente 1 hora despus. La muerte producida por el pico VII fue causada con 0.909 g/g de ratn. Respecto a la toxicidad sobre insectos, tanto el veneno soluble como las fracciones correspondientes a los picos IV, V, VI y VII, mostraron ser txicas en Gryllus sp. La cantidad de protena que afect a los grillos fue de 1.1 g en el veneno soluble, y de 0.32 a 1.97 g para las fracciones separadas. La toxicidad en el insecto se manifest por la lentitud y descoordinacin al caminar, con el cuerpo desplazado hacia un lado, hasta quedar completamente paralizado, todo lo cual se produjo casi inmediatamente despus de la inoculacin. El pico VII mostr la mayor toxicidad pues la parlisis producida fue irreversible, en cambio con los otros picos se observ que 10 minutos despus de la parlisis algunos grillos empezaban a recuperarse lentamente. El efecto temporal o reversible de estas toxinas no sera contraproducente, ya que igual ellas, como componentes del veneno, cumpliran su funcin de contribuir a paralizar a la presa.
Figura 2. PAGE-SDS del veneno soluble y los picos I y IV. De izquierda a derecha se puede ver el patrn electrofortico de las protenas estndares (std), el veneno soluble, el pico I y el pico IV en los carriles 1, 2, 3 y 4 respectivamente.
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Tityus, sino una caracterstica general de la familia Buthidae, pues todos los escorpiones arriba mencionados pertenecen a sta familia. En otros escorpiones como Hadruroides lunatus, Hadruroides bustamantei y Brachistosternus ehrenbergii, que pertenecen a otras familias, s se ha reportado la presencia de fosfolipasa (Escobar et al. 2002, Velsquez y Escobar 2004, Rivera et al. 2004). Con respecto a la actividad proteoltica, se encontr que slo el pico I de protena mostr actividad enzimtica sobre casena. La evaluacin de esta actividad por PAGE-SDS (Laemmli 1970) mostr una hidrlisis progresiva de la casena en funcin del tiempo de incubacin, la misma que fue evidente desde los 15 minutos de incubacin (Fig. 3). Sin embargo, no se detect actividad proteoltica sobre albmina ni hemolinfa de grillo tal como se muestra en la Figura 4, donde se puede ver que el patrn electrofortico de la albmina y de la hemolinfa no variaron por accin de la proteasa del veneno. De acuerdo a estos resultados se puede concluir que el veneno de Tityus kaderkai posee actividad proteoltica sobre casena, pero no tiene actividad sobre albmina ni hemolinfa de grillo. A diferencia de Tityus kaderkai, los venenos de T. serrulatus y T. bahiensis no tienen actividad proteoltica sobre casena, pero s sobre gelatina (medida en geles de poliacrilamida con gelatina incorporada). Se ha sugerido que las proteasas del veneno podran actuar como agentes difusores del veneno al incrementar la permeabilidad de los tejidos facilitando as la difusin de las protenas del veneno; sin embargo la mayora de venenos de escorpiones carecen de esta actividad lo que indicara adems que los venenos no contribuyen en la digestin proteoltica de la presa. Otra de las hiptesis sobre la funcin de estas proteasas en los venenos de escorpiones es que modificaran a las toxinas posttraduccionalmente (Almeida et al. 2002). Igualmente es importante sealar que mas recientemente se ha reportado que una metaloproteinasa del veneno de Tityus serrulatus es capaz de hidrolizar a VAMP, una protena de membrana de vesculas que participa en los procesos de fusin de membranas (Fletcher et al. 2010). En relacin a la actividad de hialuronidasa, esta actividad se encontr en el veneno soluble y en las fracciones correspondien-
Figura 3. Actividad proteoltica sobre casena. Desde los 15 minutos de incubacin se not la hidrlisis de la casena la cual fue ms evidente a mayores tiempos de incubacin.
Las toxinas de venenos de escorpiones con accin sobre el sistema nervioso han sido ampliamente estudiadas, especialmente en escorpiones de la familia Buthidae, ya que algunos de ellos son letales al hombre. Estas toxinas se caracterizan, al igual que las detectadas en este trabajo, por ser de naturaleza bsica y con pesos moleculares entre 6500 y 8500 Da. Su toxicidad se debe principalmente a que son capaces de modular los canales inicos de sodio operados por voltaje, distinguindose las -toxinas, las cuales se une al sitio 3 del canal y prolongan su inactivacin, y las -toxinas, las cuales se unen al sitio 4 del canal y aceleran su activacin. Entre las -toxinas, se distinguen toxinas especficas para mamferos, toxinas especficas para insectos y toxinas con accin sobre mamferos e insectos (Rodrguez de la Vega y Possani, 2005). Como ya se indic, la mayora de toxinas de esta clase han sido estudiadas en venenos de escorpiones de la familia Buthidae; existiendo slo una toxina caracterizada en el escorpin Anuroctonus phaiodactylus de la familia Chactidae (Valdez-Cruz et al. 2004). En el caso de escorpiones de nuestro pas, toxinas con accin sobre roedores han sido detectadas y parcialmente purificadas a partir de los venenos de Hadruroides lunatus y Brachistosternus ehrenbergii (Escobar et al. 2002, 2003a, Ramos y Escobar 2007). Segn los resultados obtenidos en los ensayos de toxicidad, los picos IV, V y VII afectan tanto a Mus musculus como a Gryllus sp., lo cual muy probablemente se deba a la presencia de toxinas especficas, unas con accin sobre Mus musculus y otras con accin sobre Gryllus sp. Sin embargo, no se descarta la posibilidad de que ambos efectos sean responsabilidad de una misma toxina, tal como se ha indicado mas arriba para el caso de algunas -toxinas; as por ejemplo, en el veneno de Tityus bahiensis la toxina Tb2-II afecta tanto a mamferos como a insectos (Pimenta et al. 2001). Actividades enzimticas.- Tanto en el veneno soluble como en las fracciones colectadas no se encontr actividad de fosfolipasa. Este resultado coincide con lo reportado para los venenos de Tityus serrulatus, T. bahiensis, T. stigmurus (Venancio et al. 2013), Androctonus crassicauda, Mesobuthus eupeus (Khodadadi et al. 2012) y Centruroides margaritatus (Escobar et al. 2003b), en donde tampoco se ha detectado actividad de fosfolipasa. La fosfolipasa es una enzima que se encuentra ampliamente distribuida en diversos venenos de origen animal, includo los escorpiones; sin embargo la ausencia de esta enzima parecera ser una caracterstica comn no solo de los venenos del gnero
Figura 4. Actividad proteoltica sobre albmina y hemolinfa de grillo. En los carriles 1 y 3 se muestran los controles de albmina y hemolinfa, mientras que en los carriles 2 y 4 se muestran los incubados de la albmina y hemolinfa con la proteasa, respectivamente. Como se puede ver no hay accin proteoltica sobre la albmina ni la hemolinfa del grillo.
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Escobar et al.
Figura 5. Ejemplares en vivo de Tityus kaderkai Kovaik, 2005, macho (A), hembra (B).
tes al pico IV lo cual nos indica que esta enzima es de naturaleza bsica. Luego de la separacin cromatogrfica, la hialuronidasa se purific 3,6 veces con un rendimiento de 6.1%. La presencia de hialuronidasa en diferentes venenos se ha asociado con una mayor capacidad de difusin de la ponzoa, debido a que la hidrlisis del cido hialurnico, un polisacrido muy abundante de la matriz extracelular, permitira una mayor diseminacin de los componentes txicos del veneno. De hecho, se ha demostrado que la toxicidad de los venenos de escorpiones est relacionada al contenido de hialuronidasa, pues la presencia de esta enzima como un factor difusor, hace al veneno ms txico. As por ejemplo, en Tityus serrulatus, la hialuronidasa parece ser la responsable de la rpida tasa de absorcin que tiene el veneno de esta especie en los tejidos, en comparacin a otros venenos del mismo gnero (Pessini et al. 2001). Actividad hemoltica y anticoagulante.- Los resultados mostraron que tanto el veneno soluble como las fracciones colectadas carecen de actividad hemoltica directa o indirecta. En algunos venenos de escorpiones se ha visto que la actividad hemoltica directa depende de ciertos pptidos con capacidad de daar la membrana de los eritrocitos y que en algunos casos muestran tambin actividad antibacteriana. La actividad hemoltica indirecta se debe a la accin de la fosfolipasa tipo A2 que al actuar sobre el fosfolpido, libera un cido graso ms lisolecitina, una sustancia detergente y hemoltica. El hecho que no se haya encontrado actividad de fosfolipasa en el veneno de T. kaderkai, guarda relacin con la ausencia de hemlisis indirecta. La actividad anticoagulante tampoco se encontr en el veneno soluble ni en las fracciones colectadas. La actividad anticoagulante se debe a ciertas proteasas que pueden hidrolizar el fibringeno o algn otro factor de coagulacin y que por lo tanto afectan la coagulacin sangunea; igualmente algunas fosfolipasas que hidrolizan fosfolpidos que participan en la coagulacin de la sangre, tambin retrasan la coagulacin. En este sentido se puede decir que probablemente la proteasa del veneno de Tityus kaderkai no es capaz de hidrolizar ningn factor de coagulacin. Cabe indicar que muy pocos venenos de escorpiones tienen actividad anticoagulante, entre los que se puede indicar a Heterometrus gravimanus y Leiurus quinquestriatus (Hamilton et al. 1974).
Notas sobre la distribucin de la especie.- Tityus kaderkai fue descrito originalmente para la localidad de Rurrenabaque en el departamento de Beni en el noreste de Bolivia (Kovaik, 2005) siendo hasta la fecha, la nica localidad conocida para la especie. Expediciones realizadas en la Amazona del sureste peruano durante los ltimos 8 aos nos han permitido registrar varias especies de escorpiones de los gneros Bothriurus Peters, 1861, Ananteris Thorell, 1891 y Tityus incluyendo la presencia de T. kaderkai en el departamento de Madre de Dios. A pesar de la pobre descripcin original en el trabajo de Kovaik, el anlisis morfolgico de los ejemplares de Madre de Dios nos permiti confirmar que son conspecficos con la especie boliviana. Tityus kaderkai, conocido por los pobladores de la zona como "escorpin moteado" es un escorpin pequeo, de hasta 37 mm de longitud, siendo los machos ligeramente ms grandes que las hembras. La coloracin es amarilla ocrcea con pigmentacin evidente en todo el cuerpo que le dan una apariencia moteada. La ltima porcin del metasoma es negruzca, y los ejemplares machos poseen el V segmento caudal ms abultado que las hembras (Fig. 5). Esta especie es muy abundante en la Amazona de Madre de Dios, se encuentra principalmente en bosque secundario, aunque tambin es posible hallarla en bosque primario. La mayora de los ejemplares fueron encontrados en la hojarasca (debajo de las hojas o en pequeas ramitas cadas), pocos individuos estaban trepados en los troncos. Habita entre 250 a 500 m de altitud en localidades pertenecientes a las cuencas de los ros Alto Madre de Dios, Manu, Madre de Dios, Pariamanu, Los Amigos, Tambopata y en la cuenca del ro Heath (Fig. 6). Literatura citada
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Per
100 km 10S
Ucayali
11S
Brasil
Madre de Dios
12S
Cusco
13S
72W
71W
70W
69W
Figura 6. Distribucin de T. kaderkai en Madre de Dios. La flecha indica la localidad Los Amigos, de donde proceden las muestras para los estudios de veneno.
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ESCHERiCHiA COLi O157:H7 en carnes molidas de bovino en Lima-Per

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Aislamiento y caracterizacin de Escherichia coli O157:H7 a partir de carne molida de bovino en Lima-Per
Isolation and characterization of Escherichia coli O157:H7 from ground beef cattle in Lima-Peru
Carmen R. Mndez1, Germn Vergaray1, Hilda Y. Morante2, Paulo R. Flores1 y Roger A. Gamboa1
1 Laboratorio de Control de Calidad de Alimentos, Aguas y Ambientes; Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Ciudad Universitaria de San Marcos, Av. Venezuela s/n, Lima 01. Correspondencia: Calle Laredo 372- Centro Comercial Monterrico- Surco. Lima 33. 2 Laboratorio de Qumica de los Alimentos, Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Carmen R. Mndez: cmendezf08@hotmail.com Germn Vergaray: germanvergaray@gmail.com Hilda Y. Morante: hildamoranteo@gmail.com Paulo R. Flores: flopaulo@gmail.com Roger A. Gamboa: roggeiro17@hotmail.com
Resumen El objetivo del estudio fue aislar y caracterizar E. coli O157:H7 a partir de carne molida fresca de bovino obtenida en diferentes mercados de abastos. Se analizaron 195 muestras; para el aislamiento y enumeracin de E. coli se utiliz la tcnica del Numero Ms probable mediante tubos mltiples; para el aislamiento y caracterizacin de E. coli O157:H7 el enriquecimiento selectivo y el anlisis bioqumico, las colonias caractersticas se confirmaron mediante pruebas serolgicas. Para determinar la presencia de shigatoxina (stx1, stx2) e intimina (eae A) se emple la tcnica de PCR multiplex en tiempo real y para enterohemolisina la prueba de hemlisis. El 87.18% de la muestras fue positivo para E. coli y el 77.95% present un recuento igual o superior a 50 NMP/g. Se obtuvieron 3 (1.54%) cepas de E. coli O157:H7, una stx1 +/ stx2 +/ eaeA y enterohemolisina -, una stx1 +/ stx2 -/ eaeA + y enterohemolisina y la otra stx1 -/ stx2 -/ eaeA y enterohemolisina +. Tambin se obtuvieron 4 cepas (2.05%) de E. coli O157 no H7, ninguna present factores de virulencia. El estudio revel el riesgo potencial de que E. coli O157:H7 afecte a la poblacin de Lima. Palabras clave: Escherichia coli O157:H7, bovino, carne molida, factores de virulencia. Abstract The aim of the study was to isolate and characterize E. coli O157: H7 from fresh ground beef obtained in different food markets. 195 samples were analyzed, for isolation and enumeration of E. coli was used most probable number technique using multiple tubes, for the isolation and characterization of E. coli O157: H7 selective enrichment and biochemical analysis, characteristic colonies were confirmed serologically. To determine the presence of shigatoxin (stx1, stx2) and intimin (eaeA) was done with multiplex real time PCR and for enterohemolysin the hemolysis test. The 87.18% of the samples were positive for E. coli and 77.95% had a count greater than or equal to 50 NMP/g. Were obtained 3 (1.54%) strains of E. coli O157: H7, one stx1 +/stx2 +/eaeA - and enterohemolysin -, one stx1 +/stx2 -/eaeA + and enterohemolysin and the other stx1 -/stx2 -/eaeA - and enterohemolysin +. Also obtained 4 (2.05%) strains of E. coli O157 non H7, no virulence factors presented. The study found that the risk potential E. coli O157: H7 affecting the population of Lima. Keywords: Escherichia coli O157:H7, cattle, ground beef, virulence factors.
Citacin: Mndez C., G. Vergaray, H.Y. Morante, P.R. Flores y R. A. Gamboa. 2013. Aislamiento y caracterizacin de Escherichia coli O157:H7 a partir de carne molida de bovino en Lima-Per. Rev. peru. biol. 20(2): 159 - 154 (Diciembre 2013)
Introduccin Aunque Escherichia coli es una bacteria que habita el intestino humano y de animales de sangre caliente y usualmente se comporta como comensal, en las ltimas dcadas han aparecido grupos que causan patologas diarreicas, denominadas E. coli diarreognicas o E. coli patgenas. Las cepas patgenas poseen factores de virulencia que sumados al tipo de enfermedad que producen han permitido agruparlas en patotipos (Nataro & Kaper 1998): E. coli enteropatgena (EPEC), E. coli enterotoxignica (ETEC), E. coli enteroinvasiva (EIEC), E. coli de adherencia difusa (DAEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) y E. coli shigatoxignica (STEC).
Bajo el nombre de Escherichia coli shigatoxignica (STEC) se conoce a un grupo de bacterias asociadas a enfermedades transmitidas por alimentos y reportadas tanto en pases desarrollados como en vas de desarrollo (Frenzen et al. 2005, Rivas 2008, Clark
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Mndez et al.
et al. 2010). En el humano pueden causar colitis hemorrgica, sndrome urmico hemoltico (SUH) y prpura trombocitopnica por las citotoxinas denominadas toxinas Shiga, cuya sntesis est codificada por genes stx de bacterifagos lisognicos que se insertan en su genoma en forma estable (Strockbine et al. 1986). Las toxinas Shiga (stx1, stx2 y variantes) estn relacionadas estructural y funcionalmente con la toxina Shiga de Shigella dysenteriae, y daan el endotelio vascular, principalmente de los pequeos vasos del coln, rin y sistema nervioso central; constituyen los principales factores de virulencia responsables de la patogenicidad de la cepa (Obrien & Hornes 1987, Karmali 1989, Phillips et al. 2000, Pistone et al. 2006, Morato Bergamini et al. 2007). El grupo STEC presenta otros 2 factores de virulencia que aumentan su patogenicidad. La intimina que es una protena de membrana externa de 97 KDa codificada por el gen cromosomal (eae), y es responsable de la adherencia ntima a las clulas epiteliales y del barrido de las microvellosidades de la mucosa colnica (lesin por adherencia y esfacelacin A/E). El otro factor es la enterohemolisina, que es una protena de la familia RTX de las citolisinas formadoras de poros, es codificada por el gen ehxA del plsmido de 60 MDa-pO157 (Karch et al. 1987, Donnenberg et al. 1993, Schmidt et al. 1995). El subgrupo EC enterohemorrgico (EHEC) es el serotipo ms agresivo para el humano y segn la WHO, una cepa STEC para ser considerada EHEC deber producir intimina y enterohemolisina; existen ms de 150 serotipos, el ms frecuente a nivel mundial es E. coli 0157:H7. Escherichia coli O157:H7 fue reconocido como patgeno humano despus del brote de colitis hemorrgica ocurrido en 1982 en Estados Unidos de Norteamrica, y que tuvo como vehculo de transmisin a hamburguesas de carne de bovino, el serotipo fue aislado de los pacientes y del alimento (Riley et al. 1983). Desde entonces se han reportado numerosos brotes de colitis hemorrgica y sus complicaciones en Estados Unidos de Norteamrica, Canad, Reino Unido, Dinamarca, Suecia, Alemania, Espaa y Japn; pases donde E. coli enterohemorrgica O157:H7 ha sido la principal causa (Dorn 1995, Siegler 1995, Mead & Griffin 1998, Michimo et al. 1999, Blanco et al. 2003). Los rumiantes domsticos son portadores asintomticos de E. coli O157:H7 y el ganado bovino es el principal reservorio para infecciones en humanos, en Europa y en Estados Unidos de Norteamrica alcanzan prevalencias de 12 y 28%. Caballos, cerdos y conejos tambin son considerados como portadores, pero no en el nivel de los rumiantes (Orskov et al. 1987, ICMSF 1996, Mora et al. 2003). La carne de ganado bovino picada o molida e insuficientemente cocida, como la que se utiliza en hamburguesas, ha sido el vehculo ms frecuente en los brotes epidmicos (Riley et al. 1983, Barret et al. 1994). En Argentina, se ha reportado E. coli O157:H7 en carne picada fresca (2.7%, Marzocca et al. 2006), y molida (1.2%, Roldn et al. 2007); en Uruguay en carne picada fresca (1.8%, Varela et al. 2008); en Colombia en carne molida (10%, Piedrahita et al. 2001); en Venezuela de carne molida (1.94% Bravo & Villalobos de Bastardo 2002) y en Paraguay en hamburguesas crudas (dos cepas [40%] Copes et al. 2009).
En el Per, el primer hallazgo de E. coli O157:H7 se hizo en las heces de una lactante que provena de Tacna, la cepa present los 3 factores de virulencia (Huapaya et al. 2001, Huguet et al. 2002). Mora et al. (2007) en un estudio de 102 muestras de carne molida de bovino en Lima metropolitana encontraron un 22.55% (23) positivo para E. coli O157; del total de positivos se analizaron 10 (43.48%) cepas, comprobndose que todas eran E. coli O157:H7 productoras de los 03 factores de virulencia. El objetivo del presente estudio es determinar la presencia de cepas de E. coli O157:H7 en muestras de carne fresca molida de ganado bovino que se expende en diferentes distritos de Lima Metropolitana y determinar la presencia de factores de virulencia. Material y mtodos Entre junio del 2009 y enero del 2011 se analizaron 195 muestras de carne fresca molida de ganado bovino colectadas en 65 puestos de venta elegidos al azar, ubicados en 33 mercados de abastos, localizados en 17 distritos de Lima metropolitana. En cada puesto se colectaron tres muestras, una cada seis meses. La carne era abastecida por tres frigorficos y dos camales y estaba lista para su venta al pblico. Para el aislamiento y enumeracin de cepas de Escherichia coli se utiliz la tcnica completa del nmero ms probable mediante tubos mltiples FDA - BAM, (http://www.fda.gov/Food/ FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm064948.htm). Para la caracterizacin y serotipificacin de E. coli O157:H7 se emple la metodologa FDA - BAM, (http://www.fda.gov/ Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm070080. htm) realizndose las etapas de enriquecimiento y siembra, la primera con caldo EHEC suplementado con cefixime, cefsulodin y vancomicina y la segunda en Agar Mc Conkey sorbitol con cefixime y telurito. Se seleccionaron 10 colonias sospechosas de cada muestra, por ser sorbitol negativas; se transplantaron a agar TSYE y luego a agar EMB; se aislaron las colonias cuyas caractersticas eran de E. coli y se sometieron a las pruebas bioqumicas de indol (+), actividad de -glucoronidasa (MUG) (-); TSI (A/A + Gas), citrato (-), LIA (A/A), Sorbitol (-). Las colonias presuntivas fueron tipificadas con antisueros 0157 y H7 Probac. Se seleccionaron entre 5 a 7 colonias de cada muestra y se sembraron en Agar Mc Conkey. Para determinar los factores de virulencia Shigatoxina (stx1, stx2) e intimina (eaeA) se emple el mtodo de PCR multiplex en tiempo real validado (Guion et al. 2008). Previamente se realiz la extraccin del DNA a partir de un pool de 5 a 7 colonias tpicas sembradas en agar Mc Conkey (Barletta et al. 2009); se le adicion 100 L de agua para PCR Finnzyme en un tubo Eppendorf y se someti a 100 C por 15 minutos, se dej reposar a temperatura ambiente por 15 minutos y se centrifug a 13000 rpm durante 15 minutos; luego se tom 50 L del sobrenadante y se almacen a -20 C para su conservacin y uso posterior. Para la prueba de PCR se emple una alcuota de 2 L del lisado (utilizado como DNA molde), a la cual se le adicion 23 L de la mezcla maestra de PCR constituida por: 0.5 U de la enzima Phusion polymerase (Hot-Start DNA Polimerasa, Finnzyme), Phusion buffer con 200 M de trifosfatos desoxinuclesidos, 4 mM MgCl2 y los primers previamente validados (Stx1: F: CTGGATTTAATGTCGCATAGTG, R: AGAACGCCCACTGAGATCATC, Amplicn 150 pb, Tm 87 C; Stx2 F: GGCACTGTCTGAAACTGCTCC, R: TCGCRev. peru. biol. 20(2): 159 - 164 (Diciembre 2013)
160

1300 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 70 72 74 76 78 80 82 84 86 88 90 92 94 96
eaeA
-d(RFU)/dT
stx1
Temperatura C Figura 1. PCR mltiplex en tiempo real. Picos mximos de fluorescencia generados por los genes eaeA y stx1 de Escherichia coli O157:H7 (Cepa CE 002). El primer pico pertenece al gen eaeA (248pb y Tm = 83.83C) y el segundo a stx1 (150bp y Tm = 87.37C).
CAGTTATCTGACATTCTG, Amplicn 255 pb, Tm 89.1 C y eaeA F: ATGCTTAGTGCTGGTTTAGG, R: GCCTTCATCATTTCGCTTTC, Amplicn 248 pb y Tm 83.4 C) y el agente SYBR green I como fluorocromo para el DNA. Los productos formados se diferencian por su temperatura de denaturacin (Tm) y fueron graficados mediante el software Opticon Monitor como picos de fluorescencia despus de 25 ciclos. La produccin de enterohemolisina (EHEC ehxA) se demostr indirectamente mediante la prueba de hemlisis, para lo cual las colonias se sembraron en placas de agar sangre desfibrinada de carnero al 5% suplementado con 10 mM de cloruro de calcio. Las placas se incubaron a 37 C durante 18 a 24 horas. Se emple como control positivo la cepa E. coli ATCC 918026 y como control negativo E. coli ATCC 25922. Resultados De las 195 muestras de carne fresca molida de bovino, el 87.18% (170) fue positivo para Escherichia coli y el 77.95% (152) present un recuento igual o superior a 50 NMP/g.
Del total de muestras, el 1.54% (03) present E. coli O157 :H7; se les denomin cepas CE 001, CE 002 y CE 003; los tres aislamientos se obtuvieron de muestras colectadas en mercados de los distritos de Comas, La Victoria y San Juan de Miraflores, respectivamente. Las tres cepas presentaron colonias sorbitol negativo, glucorinadasa negativo, movilidad positiva, indol positivo, hidrgeno sulfurado negativo, citrato negativo, Lisina descarboxilasa positiva y fermentacin de glucosa y lactosa. El 2.05% (04) present E. coli O157 no H7. De las E. coli O157:H7 la cepa CE 001 fue stx1 +/stx2 +/ eaeA -/enterohemolisina -; la cepa EC 002 fue stx1 +/stx2 -/eaeA +/enterohemolisina -, y la cepa CE 003 fue stx1 -/stx2 -/eaeA -/enterohemolisina +. De las cepas E. coli O157 no H7, todas fueron negativas para los factores de virulencia. En el PCR multiplex en tiempo real, se evidenci la presencia de stx1 y eaeA en la cepa CE 002, mediante la formacin de picos de fluorescencia generados por los genes stx1 y eaeA; el primer pico pertenece a eaeA y el segundo a stx1 (Fig. 1). En el caso de la cepa CE 001 se evidenci el pico generado por el
1000 900 800 700 600
stx1
-d(RFU)/dT
500 400 300 200 100 0

-100 -200 -300
70 72 74 76 78 80 82 84 86 88
stx2
90
92
94
96
Temperatura C Figura 2: PCR mltiplex en tiempo real. Picos mximos de fluorescencia generados por los genes stx1 y stx2 de Escherichia coli O157:H7 (Cepa CE 001). El primer pico corresponde a stx1 (150pb, Tm = 87.37C) y el segundo, a stx2 (255pb, Tm = 89.65C).
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Mndez et al.
Figura 3. Prueba de Hemolisina. Escherichia coli O157:H7; (cepas CE 001, CE 002, CE 003)
gen stx1 y un segundo pico de fluorescencia generado por el gen stx2 (Fig. 2). En la cepa CE 003 se observ un halo de hemlisis alrededor del cultivo (Fig. 3). Discusin Se decidi analizar la carne molida fresca de bovino debido a que dicho ganado es considerado como el principal reservorio de E. coli O157:H7 a nivel mundial y a que la carne picada o molida insuficientemente cocida es considerada como el vehculo ms frecuente de los brotes de colitis hemorrgica y de sndrome urmico hemoltico. La carne molida debido a la destruccin de sus fascies protectoras, aumento de sus superficies de contaminacin y mayor manipulacin es ms susceptible a la contaminacin microbiana que la carne entera. En Lima metropolitana es elevado el consumo de carne de bovino principalmente picada o molida, posiblemente por la variedad de sus preparaciones y por su menor costo; dicha carne se considera estril cuando el animal est vivo; sin embargo, nuestro estudio demostr que un elevado porcentaje (87.18%) de las muestras de carne molida que se expende en Lima est contaminada con E. coli y que un porcentaje algo menor (77,95%) tiene una contaminacin superior a 50 NMP/g de E. coli, lmite establecido por la Norma Tcnica Sanitaria Peruana (R.M. N. 591-2008-MINSA), por lo que es considerada inaceptable para el consumo humano y pone en evidencia las deficientes condiciones higinicas en las que se ha procesado el alimento. Un porcentaje menor de contaminacin con E. coli (55.8%) se report en Argentina (Cicuta et al. 2006), lo cual pone de manifiesto que con la aplicacin de buenas prcticas de manipulacin, disminuye la contaminacin microbiana y mejora la calidad del alimento.
El 1.54% (03) de las muestras present el serotipo O157:H7; posiblemente una bsqueda ms exhaustiva siguiendo otros procedimientos como la separacin inmunomagntica o el VIP (Visual Immunoprecipitate Assay Eight Hours Method) (Blanco et al. 1996, Feldsine et al. 2002, Leotta et al. 2005, US/FIS 2005, Mora et al. 2007) podra haber aumentado el nmero de aislamientos. Este porcentaje es de inters epidemiolgico para el Per, aunque por ahora no es importante en salud pblica (Huguet et al. 2002, Ochoa et al. 2011); sin embargo no se debe ignorar su elevada prevalencia a nivel mundial que incluye a pases vecinos (Barret et al. 1994, Michimo et al. 1999, Blanco et al. 2004, Fernndez & Padola 2012). De las cepas aisladas ninguna present los 3 factores de virulencia (stx, eaeA y ehxA) considerados como caractersticos de E. coli O157:H7 y que se presentan con elevada frecuencia en las cepas aisladas en la mayora de los pases del mundo (Blanco et al. 2004, Luksov et al. 2004, Varela et al. 2008). Por ello, las cepas aisladas por nosotros de acuerdo a la WHO (1997), no se incluirn en el grupo E. coli enterohemorrgico, porque para serlo deberan tener los 3 factores; adems la cepa EC 003 no se incluye en el grupo E. coli shigatoxignica por no presentar el gen stx. Se debe agregar la posibilidad de que mediante la PCR multiplex en tiempo real que empleamos no se detecte stx1 y stx2, tal como reportaron Varela et al. (2008), quienes obtuvieron positividad con ensayos de citotoxicidad y neutralizacin en cultivo de clulas Vero; nosotros no empleamos dichas tcnicas. En Lima, Mora et al. (2007) encontraron una elevada prevalencia (22.55%) en 102 muestras de carne molida de bovino, todas las cepas analizadas (10) produjeron los 03 factores de
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virulencia; Rivera et al. (2012) encontraron el serotipo E. coli O157 en el 1.75% (02) de 114 muestras de heces de bovino, una de las cepas produca stx1 y eaeA, y la otra slo stx1. El muestreo de Mora et al. se efectu entre Octubre del 2000 y Febrero del 2001, el de Rivera et al. entre Noviembre y Diciembre del 2010 y el de nuestro estudio entre Junio del 2009 y Enero del 2011. En los ltimos 15 aos no se han presentado brotes de la enfermedad en Lima, por lo que podra suponerse que se trat de una diseminacin temporal del serotipo. Los genes que codifican los factores de virulencia provienen de fagos y plsmidos; pueden no estar presentes (Wetzel & Le Jeune 2007), adquirirse (Muniesa & Jofre 2004) o perderse (Feng et al. 2001). Por lo tanto, es explicable que en pases en los cuales no causan enfermedad o su prevalencia es baja se encuentren cepas de E. coli O157:H7 negativas a uno o ms factores de virulencia como se demostr en Paraguay donde a partir de hamburguesas se aislaron 2 (40%) cepas: stx1 -/stx2 -/eae + y ehxA - (Copes et al. 2009); lo cual tambin se evidenci en nuestro estudio. Sin embargo, las cepas que carecen de factores de virulencia podran adquirirlos por transferencia horizontal de genes, en el intestino del humano o de animales, especialmente rumiantes o en desages domsticos (Muniesa & Jofre 2004). Echerichia coli debido a la plasticidad de su genoma es capaz de generar combinaciones de genes que conducen a la aparicin de cepas muy agresivas (Blanco 2012). La presencia de cepas de E. coli O157 no H7, tambien fue reportado en el Per por Huguet et al. (2002), quienes analizaron siete cepas que provenan de heces humanas y que carecan de factores de virulencia, como en nuestro estudio. Se recomienda profundizar los estudios y aplicar un programa de vigilancia epidemiolgica que permita detectar oportunamente la presencia de cepas de E. coli enterohemorrgica O157:H7 en carne de bovinos, tomando en consideracin la que proviene de pases en donde su prevalencia es elevada, con la finalidad de evitar la diseminacin de dichas cepas cuya presencia es frecuente en el mundo e inclusive en pases de Amrica del Sur y que en un futuro cercano podran constituir un problema importante de salud en el Per. Agradecimientos Al Laboratorio de Referencia Nacional de Enteropatgenos/ CNSP/ Instituto Nacional de Salud y al Laboratorio de Enfermedades Entricas y Nutricin Instituto de Medicina Tropical A. von Humboldt de la UPCH, por su colaboracin en la deteccin de los factores de virulencia. Al Vicerrectorado de Investigacin y a Fundacin San Marcos por haber contribuido al financiamiento del estudio y al manejo de los recursos econmicos. Literatura citada
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Detection of BARTONELLA and RiCKETTSiA in fleas, ticks and lice of Peru

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Detection of Bartonella spp. and Rickettsia spp. in fleas, ticks and lice collected in rural areas of Peru
La deteccin de Bartonella spp. y Rickettsia spp. en pulgas, garrapatas y piojos recolectados en las zonas rurales de Per
Abraham G. Cceres1, 2, Carlos P. Padilla Rojas3, Javier Arias Stella4, Gerardo Huatuco Crisanto5, Antero Gonzales Prez6
1 Departamento de Microbiologa Mdica, Facultad de Medicina Humana, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima - Per. Autor para correspondencia E-mail Abraham G. Cceres: acaceres31@hotmail.com 2 Laboratorio de Entomologa, Instituto Nacional de Salud, Lima - Per 3 Laboratorio de Biotecnologa y Biologa Molecular, Instituto Nacional de Salud, Lima - Per 4 Instituto de Patologa y Biologa Molecular Arias Stella, Lima - Per 5 Centro de Salud de San Ignacio, Sub Regin de Salud Jan, Direccin Regional de Salud Cajamarca, Cajamarca - Per 6 Hospital de Apoyo Santiago Apstol Utcubamba, Red de Salud Unidad Ejecutora 404 Utcubamba, Direccin Regional de Salud Amazonas, Amazonas - Per
Abstract
Bartonellosis and rickettsiosis are commonly reported in Peru. In order to detect Bartonella sp. and Rickettsia sp. in fleas, ticks and lice, specimens from five distinct locations in Peru (Marizagua, Cajaruro, Jamalca, Lonya Grande and El Milagro) were collected and screened for the presence of these bacteria using PCR and later confirmation by DNA sequencing. The specimens collected were distributed in 102 pools (76 Ctenocephalides felis, 2 Ctenocephalides canis, 16 Pulex irritans, 5 Pediculus humanus, 2 Rhiphicephalus sanguineus, and 1 Boophilus spp.), where Bartonella was detected in 17 pools (6 of C. felis, 9 of P. irritans, 1 of C. canis, and 1 P. humanus). Also, Rickettsia was detected in 76 pools (62 C. felis, 10 P. irritans, 2 P. humanus, and 2 C. canis). Bartonella clarridgeiae was detected in C. felis, C. canis and P. irritans pools at 5.3%, 50% and 12.5%, respectively. Bartonella rochalimae was detected in one C. felis and two P. irritans pools at 1.3% and 12.5%, respectively. Furthermore, B. henselae was detected in one C. felis pool and one P. humanus pool corresponding to 1.3% and 20%, respectively; and Bartonella spp. was also found in 5 pools of P. irritans at 31.3%. Additionally, R. felis was detected in C. felis, C. canis and P. irritans pools at 76.3%, 100% and 37.5%, respectively; and Rickettsia spp. was detected in C. felis, P. irritans and P. humanus pools at 5.3%, 25% and 40%, respectively. These results demonstrate the circulation of these bacteria in Peru. Keywords: Bartonella; Rickettsia; arthropods; PCR detection; Peru.
Resumen
Citacin: Cceres A.G., C.P. Padilla Rojas, J. Arias Stella, G. Huatuco Crisanto, A. Gonzales Prez. 2013. Detection of Bartonella spp. and Rickettsia spp. in fleas, ticks and lice collected in rural areas of Peru. Rev. peru. biol. 20(2): 165 - 169 (Diciembre 2013)
La Bartonellosis y la Rickettsiosis son enfermedades comnmente reportadas en Per. Con el propsito de detectar Bartonella sp. y Rickettsia sp. especmenes de pulgas, garrapatas y piojos de cinco localidades del Per (Marizagua, Cajaruro, Jamalca, Lonya Grande and El Milagro) fueron colectadas y analizadas. Para la deteccin se us PCR y una posterior confirmacin con secuenciamiento de DNA. Los especmenes colectados fueron agrupados en 102 pools (76 Ctenocephalides felis, dos Ctenocephalides canis, 16 Pulex irritans, cinco Pediculus humanus, dos Rhiphicephalus sanguineus, y un Boophilus spp.). Bartonella fue detectada en 17 pools (seis de C. felis, nueve de P. irritans, uno de C. canis, y uno de P. humanus). Rickettsia fue detectada en 76 pools (62 de C. felis, 10 de P. irritans, dos de P. humanus, y dos de C. canis). Bartonella clarridgeiae fue detectada en C. felis (5.3% especmenes), C. canis (50%) y P. irritans (12.5%). Bartonella rochalimae fue detectada en C. felis (1.3%) y P. irritans (12.5%). Adems, se detect B. henselae en C. felis (1.3%) y P. humanus (20%). Bartonella spp. tambin se encontr en P. irritans (31,3%). Adems, se detect R. felis en C. felis (76.3%), C. canis (100%) y P. irritans (37.5%), y Rickettsia spp. se detect en C. felis (5,3%), P. irritans (25%) y P. humanus (40%). Estos resultados demuestran la circulacin de estas bacterias en el Per. Keywords: Bartonella; Rickettsia; arthropods; PCR deteccin; Per.
15/04/2013 15/09/2013 09/12/2013
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Cceres et al.
Introduction Human bartonellosis is caused by various species of Bartonella. Nowadays, there are several species of this genus that can infect humans including B. bacilliformis, B. henselae, B. quintana, B. rochalimae, B. elizabethae, B. vinsonii subsp. arupensis, B. vinsonii subsp. berkhoffii, B. grahamii, B. koehlerae, B. washoensis, B. alsatica, and B. tamiae (Billeter et al. 2008, Daly et al. 1993, Kerkhoff et al. 1999, Roux et al. 2000, Eremeeva et al. 2007, Kosoy et al. 2008). Only B. bacilliformis, B. vinsonii, B. quintana, B. rochalimae, B. elizabethae and B. cladrrigeiae have been reported in Peru (Billeter et al. 2008, Eremeeva et al. 2007, Parola et al. 2002, Roux & Raoult 1999, Raoult et al. 1999). Bartonella is believed to be transmitted by an arthropod vector, and infection can result in Carrions disease, cat scratch disease, trench fever, endocarditis, neuroretinitis, bacillar angiomatosis, hepatic granulomatosis, arthritis, osteomelitis, and sepsis (Billeter et al. 2008, Breitschwerdt & Kordick 2000). Rickettsia spp. are gram negative coco-bacilli and intracellular pathogens and most of them are transmitted transtadially by a wide variety of arthropod hosts including fleas, lice and ticks. Infections with these pathogens can cause diverse human diseases such as endemic typhus, scrub typhus, erhlichiosis and others rickettsiosis (Raoult & Roux 1997). In Peru, rickettsiosis occurs sporadically along the coast, highlands and jungle. The exposure to rickettsiosis was confirmed by immunofluorescence assay (IFA) in regions of Peru (Raoult et al. 1999, Blair et al. 2004a) and Rickettsia species were detected in ticks and fleas (Schoeler et al. 2005, Jiang et al. 2005). Several arthropods belonging to the orders Diptera (Noguchi et al. 1929, Caceres et al., 1997), Anoplura (Ellis et al. 1999), Siphonaptera (Brouqui et al. 1999; Higgins et al. 1996) and Parasitiformes (Schouls et al. 1999, Angelakis et al. 2010) have been implicated in the transmission of Bartonella spp. Previous experimental studies have demonstrated that Lutzomyia verrucarum (sandfly) are competent vectors of B. bacilliformis, which causes Carrions disease (Breitschwerdt & Kordick 2000, Maguia et al. 2009). In order to detect Bartonella spp. and Rickettsia spp. in fleas, lice and ticks, specimens
were captured from humans, domestic and wild animals in five distinct locations in Peru, where Carrions disease is endemic. The presence of Bartonella spp. in these specimens was evaluated by polymerase chain reaction (PCR) and confirmed by DNA sequencing. Materials and methods Study sites and specimen collections. Samples were collected from random houses in different places: San Ignacio (Marizagua) of Cajamarca departament; Cajaruro, Jamalca, Lonya Grande and El Milagro of Amazonas departament in July 2000 to September 2001 (Table 1, Fig. 1). These samples were obtained from different pets such as dogs, cats, and guinea pigs (considered as a food source); moreover, foxes found near the neighborhood were trapped in cages for later sample collection. Specimens such as fleas were collected by hand from animals; but lice were collected from people (head, body and clothes) and ticks were collected only from dogs. These were then stored in vials containing 70% ethanol, and organized according to host and place of collection. The taxonomic classification was done in the Entomology Laboratory at the Daniel A. Carrin Tropical Medicine Institute, of the Universidad Nacional Mayor de San Marcos in Lima, using entomological keys (Jonson 1957, Lewis 1972). After taxonomic classification, the specimens were grouped into pools of 6 to 20 specimens, each pool from one or two hosts, to reduce the processes for analysis (see Table 1). DNA extractions from specimens. The whole specimens were grouped in pools and washed with 1X Phosphate Buffered Saline (PBS). They were then triturated with a micro-pestle in 100 L of PBS. DNA was extracted using a Tissue DNA Purification Kit (QIAGEN) following the standard procedure recommended by the manufacturer. DNA amplification of the gltA gene by PCR. The gltA gene of Bartonella was amplified using the BhCS.781p and BhCS.1137 primers (Norman et al. 1995). The same specimens
Ecuador Ecuador Amazonas
Per
San Ignacio San Ignacio Amazonas
Cajamarca
Cajamarca
El Milagro Utucubamba
Cajaruro
Jamalca
25 km
Lonya Grande
Figure 1. Localities of the north of Peru where it was collected specimens of arthropods for Bartonellosis and Rickettsiosis study.
166

Table 1. Arthropods collected from cats, dogs, guinea pigs, foxes and humans from San Ignacio (Cajamarca) and Utcubamba (Amazonas) in Peru. Department/ Province/ District Number of specimens 119 34 499 77 92 20 190 1 33 5 1 1 494 20 35 84 5 12 32 4 1758 Number of pools 7 2 26 4 5 1 10 1 2 2 1 1 25 1 2 5 1 1 3 2 102 November, 2000 June, 2001 September, 2001 September, 2001 July, 2000
Host (Number) cat (10)
Species Ctenocephalides felis Ctenocephalides canis Ctenocephalides felis Pulex irritans Pulex irritans Ctenocephalides felis Ctenocephalides felis Pulex irritans Ctenocephalides felis Rhiphicephalus sanguineus Boophilus spp. Pulex irritans Ctenocephalides felis Pulex irritans Ctenocephalides felis Pediculus humanus Ctenocephalides felis Pulex irritans Pulex irritans Ctenocephalides felis
Capture Date
Cajamarca/ San Ignacio/ San Ignacio (Marizagua)
cat (2) dog (45) dog (6) guinea pig (1) guinea pig (1)
Amazonas/ Utcubamba/ Cajaruro Amazonas/ Utcubamba/ Jamalca
dog (8) dog (1) dog (3) dog (1) dog (1) dog (1) dog (45) dog (1)
Amazonas/ Utcubamba/ Lonya Grande
cat (3) human (6) guinea pig (1) guinea pig (1)
Amazonas/ Utcubamba/ El Milagro TOTAL
fox (3) fox (1)
were analyzed using the Rp877p and Rp1258n primers, theses primers amplified the gltA gene of Ricketsia (Regnery et al. 1991). The amplification reactions consisted of 5 L of amplification buffer 10X, 5 L (10 M) of each primer, 5 L (25 mM) of magnesium chloride, 2 L (10 mM) of nucleotide triphosphates, 0.2 L (5 UL) of AmpliTaq Gold DNA polymerase (Applied Biosystems Inc.) and 5 L of purified DNA to each tube. The final volume of the amplification reaction was 50 L. Purified DNA from B. bacilliformis strain ATCC 35685 and a Rickettsia felis characterized culture were used as positive controls. The amplications were performed on a 9700 Applied Biosystems thermocycler, and the cycles were as follows: 1 cycle for 95 C for 10 min; 35 cycles at 95 C for 0.5 min, 50 C for 0.5 min, and 72 C for 1 min; 1 cycle at 72 C for 5 min; and a nal soaking at 4 C until analysis. The amplified products were analyzed by electrophoresis in agarose gels, stained with ethidium bromide and visualized in a UV transilluminator. The amplified products were then purified using QIAQuick Gel extraction Kit (QIAGEN Inc.) and sequenced using a Big Dye DNA terminator Kit (Applied Biosystems Inc.) on an ABI310 sequencer (Applied Biosystems) at the Peruvian National Institute of Health and following standard procedures. The sequences obtained were analyzed with GenBank using BLAST software (www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST). Clustalw software (http://align.genome.jp/) was used for alignment and comparison of sequences.
Results A total of 1758 specimens were captured from humans, cats, dogs, guinea pigs and foxes (Table 1). Of these, 1399 (79.58 %) samples were identified as Ctenocephalides felis (collected from dogs, cats, guinea pigs and foxes). 235 (13.37%) specimens were Pulex irritans (collected from dogs, guinea pigs and foxes); 84 specimens (4.78%) were Pediculus humanus (collected from humans); 34 specimens (1.93%) were Ctenocephalides canis (collected from cats); 5 specimens (0.28%) were Rhiphicephalus sanguineus (collected from dogs); and 1 specimen (0.06%) was identified as Boophilus spp. (collected from a dog) (Table 1). One hundred two pools were processed by PCR. Of these, 17 pools (16.67%) were PCR-positive using primers for Bartonella genera. These pools were confirmed as Bartonella by DNA sequencing. Bartonella clarridgeiae (accession number AY836149) was detected in 4 pools of C. felis collected from three cats and one guinea pig, 1 pool of C. canis collected from a cat and 2 pools of P. irritans collected from a fox (all 100% homologous with each other). The AY836149 nucleotide sequence was compared with GenBank Database showing 100% homology with B. clarridgeiae Houston-2 cat strain (U84386) (Table 2). Bartonella rochalimae was detected in 1 pool of C. felis collected from a cat and 2 pools of P. irritans collected from guinea pigs (all 100% homologous to GenBank accession number GU583842). The GU583842 nucleotide sequence was 100%
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Cceres et al.
Table 2. Species of Bartonella detected in lice, fleas and ticks from San Ignacio (Cajamarca) and Utcubamba (Amazonas) in Peru. Arthropod/ bacteria C. felis 2 cat (MZ), 1 cat (LG) 1 guinea pig (MZ) 1 cat (MZ) C. canis P. irritans P. humanus R. sanguineus Total
Bartonella clarridgeiae
1 cat (MZ)
2 fox (EM) 2guinea pig (MZ) 4 guinea pig (3 MZ, 1 LG) 1 dog (MZ)
B. rochalimae
1 human (LG)
B. henselae
1 cat (MZ)
Bartonella sp.
homologous with human isolated B. rochalimae BMGH strain (DQ683195) (Table 2). Bartonella henselae was detected in 1 pool of C. felis collected from a cat and 1 of P. humanus collected from humans (accession numbers AY840994 and GU583844). Both AY840994 and GU583844 nucleotide sequences showed 100% homology with B. henselae strains: BR01 (GU056191), BCF01 (GU056188) and CS3 (FJ832097) (Table 2). Bartonella spp. was detected in 5 pools of P. irritans: four pools collected from guinea pig and one from a dog, all 100% homologous to GenBank accession N GU583846. The GU583846 nucleotide sequence showed 96.3% and 96.6% homology with Bartonella spp. DNA detected in a flea and blood collected from Sigmodon hispidus with GenBank accession numbers EF616666 and AF082322, respectively (Table 2). Seventy-six pools (74.51%) were PCR positive using primers for Rickettsia. Of these, 66 pools were positive for Rickettsia felis (58 pools of C. felis, 2 pools of C. canis and 6 pools of P. irritans; all 100% homologous to GenBank no. GU583847). The GU583847 nucleotide sequence showed 100% homology with Rickettsia felis collected from C. felis (EU853837), Liposcelis bostrychophila (GQ329877, GQ329873), and Pulex echidnophagoides (GU447233) (Table 3). Ten pools were positive for Rickettsia spp. (4 pools of C. felis, 4 pools of P. irritans and 2 pools of P. humanus), where one of the pools was reported as GenBank no. GU583848 and the other nine pools were 100% homologous to GU583849 (Table 3). The nucleotide sequence GU583848 showed 100% homology with Rickettsia spp. collected from Pulex irritans (EU853838),
Echidnophaga gallinacea (DQ166938), C. canis (AF516333) and C. felis (AY953289); also the nucleotide sequence GU583849 showed 100% homology with Rickettsia sp. collected from C. felis (AY953288) and C. canis (AF516331). DNA of Bartonella and Rickettsia werent detected in ticks. Discussion In this study, only 17 pools were confirmed as Bartonella species by DNA sequencing: Bartonella clarridgeiae (7 pools), B. rochalimae (3 pools), B. henselae (2 pools), and uncultured Bartonella spp. (5 pools). Bartonella DNA was also detected in fleas in other regions of Peru. Parola and colleagues (Parola et al. 2002) reported the detection of B. clarridgeiae-like (potentially B. rochalimae) DNA (Eremeeva et al. 2007) and B. vinsonii DNA in fleas near the city of Cuzco. In addition, Raoult and collaborators (Raoult et al. 1997) also reported the detection of B. quintana DNA in lice collected in Calca, Cuzco. In this study, a potentially new species of Bartonella in Pulex irritans collected from guinea pigs was found. The nucleotide sequence of Bartonella sp. showed 96% homology with Bartonella sp. DNA, which was detected in a flea and blood collected from Sigmodon hispidus (Abbot et al. 2007). There are also previous reports of Rickettsia spp. in Peru. In the region of Sapillica, Piura; Rickettsia felis was detected in C. felis (2 pools of 59 samples) from dogs and the Rickettsia massilae group was detected in Amblyomma maculatum (one tick from a dog and one from a horse), Anocenter nitens (one tick from a horse) and Ixodes boliviensis (one tick from a horse) (Blair et al. 2004b). Also in this area, Rickettsia of the spotted
Table 3. Species of Rickettsia detected in lice, fleas and ticks from San Ignacio (Cajamarca) and Utcubamba (Amazonas) in Peru. MZ: Marizagua, LG: Lonya Grande, EM: El Milagro, CJ: Cajaruro, JM: Jamalca Arthropod/ bacteria C. felis 1 guinea pig (MZ) 8 cat (7 MZ, 1 LG) 48 dog (26 MZ, 15 LG, 1 JM, 6 CJ) 1 fox (EM) 4 dog (2 CJ, 1 JM, 1 LG) C. canis P. irritans P. humanus R. sanguineus Total
Rickettsia felis
2 cat (MZ)
2 dog (MZ) 3 guinea pig (MZ) 1 fox (EM) 2 dog (MZ, LG) 2 guinea pig (MZ, LG)
66
Rickettsia sp.
2 human (LG)
10
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fever group (SFG) was detected in four febrile patients by PCR analysis; the detected SFG in this study was approximately 95% homologous with R. conorii and R. akari (Blair et al. 2004b). Other reports indicated the presence of anti-Rickettsia antibodies in habitants of Piura, Junin and Cusco (Schoeler et al. 2005). Although a higher proportion of positive pools for R. felis (66 positive pools out of 102) were obtained, previous reports are congruent with the results found. In addition, we detected Rickettsia sp in Peru, which are 100% homologous with Rickettsia spp. detected in fleas from other countries. Also this sequence showed 95% homology with candidatus R. andeanea reported in fleas collected from Sullana in northwestern Peru (Blair et al. 2004a). In conclusion, the results indicate the presence of several Bartonella species, and Rickettsia in Peru. The clinical and epidemiological significance of possible infections in similar endemic areas in Peru should continue to be investigated and these results should be considered for the epidemiologic and entomologic surveillance. Furthermore, the possible transmission to humans should also be evaluated in the future. Acknowledgments This work is dedicated in memory of Dr. Hugo Vizcarra Franco, principal professor of Medicine Faculty of Universidad Nacional Mayor de San Marcos, he was member of our research team and died during project development. We thank villagers from Marizagua, El Ron, Aserradero, Jamalca, El Valor, Yungasuyo, Pucallpa and Danja for permit the sampling in his animals. We specially thank Dr. Michael Kosoy and Sara Billeter from CDC, Colorado USA; and Dr. Audrey Lenhart from Liverpool Scholl of Tropical Medicine of England for critically reading the manuscript. This work was supported by a grant from the Fundacion Hipolito Unanue of Lima, Peru. Literature cited
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Cceres et al.
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Nuevos registros de Arctiini para Per

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Siete nuevos registros de Arctiini (Lepidoptera: Erebidae: Arctiinae) para Per
Seven new records Arctiini (Lepidoptera: Erebidae: Arctiinae) to Peru
Juan Grados1, Carlos Espinoza2, Juan Jos Ramrez3 y Pedro Centeno4
1 Departamento de Entomologa, Museo de Historia Natural, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Apartado 14-0434, Lima 14, Per. 2 Universidad Nacional San Agustn, Arequipa, Per. 3 Universidad Nacional de la Amazona Peruana, Iquitos, Per. 4 Botanical Research Institute of Texas, 500 E. 4th St., Fort Worth, TX 76102. Email Juan Grados: gradosjuan@hotmail.com Email Carlos Espinoza: cespinoza16@gmail.com Email Juan Jos Ramrez:macrodontia@hotmail.com
Resumen
Se presenta siete nuevos registros de Arctiini (Erebidae: Lepidoptera) para Per. Algunas de las especies son raras en colecciones. Cada nuevo reporte pertenece a gneros diferentes, proporcionando para cada gnero las especies que ocurren en el Per, basado en colecciones y las fuentes bibliogrficas de las descripciones originales. Se da a conocer un nuevo sinnimo para Agyrtiola niepelti Gaede, 1926. Palabras clave: Arctiini, Erebidae, Lepidoptera, nuevo sinnimo, Per.
Abstract
Seven new Arctiini (Erebidae: Lepidoptera) are reported for Peru. Some of the species are rare among collections. Each new report belongs to different genera and the species given for each genus are those occurring in Peru, according to collections and literature references from their original descriptions. A new synonym is also reported for Agyrtiola niepelti Gaede, 1926. Keywords: Arctiini, Erebidae, Lepidoptera, new synonym, Peru.
Citacin: Grados J., C. Espinoza, J.J. Ramrez & P. Centeno. 2013. Siete nuevos registros de Arctiini (Arctiinae: Erebidae: Lepidoptera) para Per. Rev. peru. biol. 20(2): 171- 176 (Diciembre 2013)
Introduccin El conocimiento de la riqueza de especies de los Arctiini (Erebidae) para la Regin Neotropical ha sido registrada y revisada por Hampson (1901), Zerny (1912) y Watson y Goodger (1986).. Sin embargo, la existencia de sinnimos y confusiones taxonmicas han llevado a plantear que es un grupo donde se han sobreestimado los gneros y especies (Lamas y Grados 1996, Grados 2002, Cerda 2008). Por otro lado, es escasa la informacin acerca de la distribucin geogrfica de la mayora de las especies de este grupo, donde muchas de las especies han sido descritas de ejemplares nicos, conocindose solo su presencia en la localidad tipo. Hasta la ltima dcada del siglo pasado, nuestro conocimiento de este grupo de lepidpteros provenan de varios colectores que recorrieron territorio peruano por diferentes circunstancias, entre los que encontramos a viajeros, exploradores, militares, artistas, antroplogos, capellanes, naturalistas y colectores profesionales. Los colectores que quizs ms contribuyeron al conocimiento de los Arctiini del Per fueron E. Bttger y G. R. Ockenden. Emil Bttger (18631936) llega con sus padres y hermanos a Huancabamba (Pasco) en 1875, luego de dos momentos de colonizacin de los migrantes alemanes a Pozuzo (18571858; 18681869) (Sobrevilla 2001, Arona [1891]1971). Bttger colect varios grupos de fauna, entre ellos los insectos en el valle de Huancabamba y otras localidades de lo que ahora forman parte del Parque Nacional Yanachaga-Chemilln. El material fue enviado probablemente a Hermann Rolle (18641929), comerciante alemn radicado en Berln, de quien se conoce tena material de Huancabamba y Pozuzo (Selva central), o quizs haya enviado material directamente a Lionel Walter Rothschild (18691937) del Tring Museum en Inglaterra (Jordan 1938, Lamas 1980). Todo el material de Bttger provena de los alrededores de Huancabamba y no como en muchas publicaciones se menciona Huancabamba, norte de Per. Son muchas las
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Rev. peru. biol. 20(2): 171- 176 (December 2013)
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Grados et al.
Figura 1. Aphyle onorei Toulgot, 1988. Macho. Escala 1 cm.
Figura 2. Zatrephes irrorata Rothschild, 1909. Macho. Escala 1 cm.
especies de Arctiini que fueron descritas con material colectado por Bttger, algunas de ellas endmicas y que actualmente estan depositadas en colecciones de diferentes museos. En el sudeste de Per, la labor de exploracin biolgica de George Richard Ockenden (Brighton, Inglaterra, 1868 Puno, Per, 1906) fue muy importante. Sus colectas las llev a cabo en varios lugares como La Oroya, Santo Domingo, Oconeque, Agualani, Ro Huacamayo, La Unin, Limbani, Chirimayo y Tinguri, todos cercanos al alto ro Inambari, departamento de Puno. Ockenden recorri por varios aos estos parajes, aprovechando las vas de comunicacin que tena la Inca Mining Company y la Rubber Mining Company, desde la localidad de Tirapata (Puno) hasta Astillero, esta ltima en la boca del ro Tvara (Bailey 1906, Harter 1907, Bachmann 1918) casi lmite entre los departamentos de Puno y Madre de Dios. El material colectado fue enviado a W.F.H. Rosenberg de Londres (Harter 1907). En la actualidad su material se encuentra en las colecciones del Museo Britnico (BMNH) y en las del museo de la Universidad de Oxford (UMO). Los nuevos registros presentados en este trabajo tienen relevancia porque en algunos casos amplan la distribucin geogrfica de especies raras y en otros porque proceden de zonas geogrficas de difcil accesibilidad. Materiales Las colectas fueron llevadas a cabo entre los aos 2004 y 2009, utilizando trampas de luz, utilizando lmparas de luz mixta (LLM) o de vapor de mercurio (LVM) y redes entomolgicas para las especies de hbitos diurnos. Las muestras fueron procesadas y depositadas en la coleccin del Museo de Historia Natural, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima (MUSM). Los acrnimos empleados en este trabajo siguen a Heppner y Lamas (1982), habiendo sido revisadas las siguientes colecciones: AMNH: American Museum of Natural History, New York. MHNP: Musum National dHistoire Naturelle, Paris. MUSM: Museo de Historia Natural, UNMSM, Lima. USNM: United States National Museum, Smithsonian Institution, Washington. ZMHB: Zoologisches Museum, Humboldt Universitt, Berln.
Todos los nuevos registros pertenecen a diferentes gneros, por lo que tambin se proporciona una lista de las especies que ocurren en el Per, indicndose entre parntesis si existen ejemplares en la coleccin del Museo de Historia Natural de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, y en caso no est representada en la coleccin, se seala donde se encuentra. Las especies que son reportadas en base a fuentes bibliogrficas estn sealadas con asterisco, adicionando el lugar exacto de colecta y el departamento si est especificado en la publicacin. Taxonoma Orden: LePidoPtera FaMilia: Erebidae SubfaMilia: Arctiinae Tribu: Arctiini Subtribu: PHaegoPterina 1. Aphyle onorei Toulgot, 1988 (Fig. 1) Especie muy llamativa por la coloracin que presentan las alas. Fue descrita por Herv de Toulgot de un macho proveniente de Coca, Napo (Ecuador), colectada por G. Onore en el mes de enero (1988), a quien fue dedicada la especie. Colectas llevadas a cabo en el departamento de Loreto han permitido registrar la especie ms hacia el sur de su localidad tipo. El presente registro es el segundo macho que se conoce. La hembra es desconocida por ahora. Material examinado: PER: LORETO; 1 , Agua Blanca, 0356S / 7328W, 130m, 29.iv.2004 (J.J. Ramrez). Otras especies del gnero registradas para Per son: affinis Rothschild, 1909 (Aphyle)(Carabaya, Puno)* cuneata Hampson, 1905 (Aphyle) (MUSM) margaritaceus Walker, 1855 (Aphyle) (MUSM) 2. Zatrephes irrorata Rothschild, 1909 (Fig. 2) Una especie aparentemente rara, habiendo sido descrita de un slo ejemplar macho proveniente de Fonte Boa, Ro Amazonas (Brasil), colectado en el mes de agosto (1906) por S.M. Klages.
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Figura 3. Aclytia ventralis (Gurin-Mneville, 1843). Macho. Escala 1 cm.
Figura 4. Ctenucha tapajoza Dognin, 1923. Macho. Escala 1 cm.
Este primer registro para Per proviene de una exploracin biolgica en la Cordillera Sierra del Divisor, frontera entre Per y Brasil. Slo se logr colectar un ejemplar macho, el segundo que se conoce de la especie en todo el mundo. Material examinado: LORETO: 1 , 37 km NE Monte Alegre, Ro Tapiche, 062301S / 740435W, 175m, 1819.x.2008 (A. Garca). Otras especies del gnero registradas para Per son: afenestrata Toulgot. 1987 (Zatrephes)(MUSM) bicolorata (Druce, 1906)(Apatelodes)(Santo Domingo, Puno)* bilineata Rothschild, 1909 (Zatrephes)(Carabaya, Puno)* brunnea Rothschild, 1909 (Zatrephes)(Carabaya, Puno)* crocos (Cramer, 1773) (Phalaena) (MUSM) cruciata Rothschild, 1909 (Zatrephes) (MUSM) nitida (Cramer, 1780) (Phalaena) (MUSM) ockendeni Rothschild, 1909 (Zatrephes)(La Oroya, Puno)* propinqua (Rothschild, 1909) (Automolis)(Carabaya, Puno)* pseudopraemolis (Rothschild, 1909) (Automolis) (MUSM) trailli Butler, 1877 (Zatrephes) (MUSM) trilineata peruviana Rothschild, 1910 (Zatrephes) (Carabaya y Santo Domingo, Puno)* variegata (nr.) Rothschild, 1909 (Zatrephes) (MUSM) Subtribu: CtenucHina
Piura. Este el registro es el ms meridional de la especie. Material examinado: PIURA: 1 , Canchaque, 0522S / 7936W, 1200m, 29.vi.2005 (J. Grados). Otras especies del gnero registradas para Per son: gynamorpha Hampson, 1898 (Aclytia)(MUSM) heber (Cramer. 1780) (Sphinx) (MUSM) hoffmannsi Rothschild, 1912 (Aclytia) (MUSM) klagesi Rothschild, 1912 (Aclytia) (MUSM) petra Schaus, 1892 (Aclytia)(USNM) pydna Druce, 1899 (Aclytia) (MUSM) reducta Rothschild, 1912 (Aclytia) (MUSM) punctata Butler, 1876 (Aclytia)(MUSM) 4. Ctenucha tapajoza Dognin, 1923 (Fig. 4) El gnero Ctenucha Kirby consta de ms de 30 especies, con varias de ellas circunscritas por encima de los 3000m en la Cordillera de los Andes. La especie Ctenucha tapajoza fue descrita de dos ejemplares machos capturados por el clebre colector alemn Anton Heinrich Fassl (18761922) del Ro Tapajoz, Brasil. El nuevo registro proviene de colectas llevadas a cabo en la Cordillera Sierra del Divisor, frontera entre Brasil y Per. Material examinado: LORETO: 2 , Zona Reservada Sierra del Divisor, Qda. Nubuya, 065946.55S / 735843.9W, 205m, 5-8.iii.2009 (C. Espinoza); 2 , Zona Reservada Sierra del Divisor, 12.5 km E Puerto Venus, Ro Tapiche, 065721.66S / 740127.85W, 225m (C. Espinoza). Otras especies del gnero registradas para Per son: albipars Hampson, 1901 (Ctenucha) (MUSM) aymara (Schaus, 1892) (Gangamela)(Per)* biformis Dognin, 1907 (Ctenucha)(USNM) cajonata Dognin, 1923 (Ctenucha)(USNM) cyaniris Hampson, 1898 (Ctenucha) (MUSM) garleppi Rothschild, 1912 (Ctenucha)(Cusco)*
3. Aclytia ventralis (Gurin-Mneville, 1843) (Fig. 3) conspicua Druce, 1884:70 (Aclytia). Sinnimo. lucania (Schaus, 1889): 89 (Glaucopis). Sinnimo. La especie fue descrita de ejemplares colectados en Mxico. De acuerdo a la bibliografa, la especie tiene como rea de distribucin Mxico, Guatemala, Costa Rica y Panam (Druce, 1884; Hampson, 1898). El nuevo registro proviene de colectas de exploracin biolgica llevadas a cabo en el Noroeste de Per, departamento de
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Grados et al.
Figura 5. Agyrtiola niepelti Gaede, 1926. Macho. Escala 1 cm.
Figura 6. Metaloba argante Druce, 1897. Macho. Escala 1 cm.
mortia Schaus, 1901 (Ctenucha)(AMNH) nantana (Walker, 1864) (Ammalo) (MUSM) projecta Dognin, 1904 (Ctenucha) (MUSM) reducta Rothschild, 1912 (Ctenucha)(Oconeque, Agualani, Limbani, Puno)* refulgens Dognin, 1899 (Ctenucha) (MUSM) rubrovenata Rothschild, 1912 (Ctenucha) (MUSM) venosa Walker, 1854 (Ctenucha) (MUSM) Subtribu: EucHroMiina
localidad, So Paulo de Olivena (Brasil) y porque al analizar ambas especies en su morfologa externa, presentan los mismos caracteres, incluyendo las patas posteriores ensanchadas con abundante vellosidad. Se diferencia de Agyrtidia uranophila (Walker) porque presenta penacho de pelos en la parte interna de las alas posteriores y presencia en el fmur, tibia y el primer segmento del tarso de las patas posteriores de abundante vellosidad. Las diferencias a nivel de genitalia las encontramos en Machado & Barros (1970). Material examinado: LORETO: 1 , San Juan de Poli, 0337S / 7324W, 120m, 19.x.2010 (J.J. Ramrez)(Colectado de da con red). 6. Metaloba argante Druce, 1897 (Fig. 6) El gnero consta de slo dos especies, habiendo sido descrita la especie M. argante Druce, 1897 de Sarayacu, Ecuador, de un ejemplar macho y una hembra colectados por Clarence Buckley, que colect varios grupos de fauna en Ecuador y Bolivia. Buckley colect varias especies de lepidpteros, algunas consideradas raras, ayudado en sus viajes por aquel pas por el ecuatoriano Manuel Villagomes (Sclater y Salvin 1876, Hewitson 1870, Vane-Wright 1991). Algunas especies fueron descritas por Herbert Druce (1846-1913). Los ejemplares estn actualmente en la coleccin del Museo Britnico (BMNH). Al parecer la especie es poco comn, conocindose pocos ejemplares en colecciones en todo el mundo. El nuevo reporte proviene del departamento de Madre de Dios, en el Sudeste de Per. Material examinado: MADRE DE DIOS: 1 , CICRA, Ro los Amigos, 123336.3S / 700617.3W, 380m, 23.xi.2005 (P. Centeno); 1 , mismos datos que el anterior excepto 04.ix.2005. 7. Mystrocneme atavia Hampson, 1898 (Fig. 7) La especie fue descrita de un ejemplar macho y una hembra proveniente de Fonte Boa, Ro Amazonas (Brasil).
5. Agyrtiola niepelti Gaede, 1926 (Fig.5) Agyrtidia olivensis Machado & Barros, 1970. Nuevo sinnimo. El gnero es monotpico y la especie fue descrita de un macho capturado en So Paulo de Olivena (Brasil) por Herrn Niepelti, a quien fue dedicada la especie. La especie es algo rara, siendo aloptricas con Agyrtidia uranophila (Walker, 1866), con la que es muy parecida en el patrn de coloracin alar. No se conoce las hembras de esta especie, pero es posible que haya pasado desapercibida con hembras de A. uranophila (Walker). Planteamos a Agyrtidia olivensis como nuevo sinnimo de Agyrtiola niepelti. Los holotipos de ambas provienen de la misma
Figura 7. Mystrocneme atavia Hampson, 1898. Macho. Escala 1 cm.
El nuevo reporte proviene de colectas realizadas en el este de

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Per, cerca con la frontera con Brasil. Esta es la segunda especie que se registra para el pas. Material examinado: LORETO: 1 , 37 km NE Monte Alegre, Ro Tapiche, 062301S / 740435W, 175m, 1819.x.2008 (A. Garca): 4 , 12 km SSE Lontananza, Ro Yaquirana, 061450S / 731732W, 165m, 0406.x.2008 (A. Garca). La otra especie que ha sido registrada para el Per es: varipes (Walker, 1854) (Euchromia) (MUSM) Agradecimientos Deseamos agradecer a Patrick Blandin por la ayuda en visitar la coleccin del Musum National dHistoire Naturelle, Paris (MHNP) y a Joel Minet por la facilidades brindadas en la accesibilidad a la coleccin de Arctiini (Lepidoptera) formadas por Herv de Toulgot. Lo propio conWolfram Mey por la accesibilidad a la coleccin del Zoologisches Museum, Humboldt Universitt, Berln (ZMHB). El Ministerio de Agricultura proporcion los respectivos permisos de colecta. Los trabajos dentro de la Zona Reservada Sierra del Divisor fueron realizados con la autorizacin N038 C/C-2008-INRENA-IANP. Literatura citada
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Grados et al.
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Brachionidae de la albufera El Paraso y el reporte de BRACHiONUS ibERiCUS en el Per

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Brachionidae (Rotifera: Monogononta) de la albufera El Paraso y el reporte de Brachionus ibericus en el Per
Brachionidae (Rotifera: Monogononta) from El Paraso albufera and report of Brachionus ibericus in Peru
Emily Toscano y Ruperto Severino
Laboratorio de Protozoologa e Invertebrados acelomados y pseudocelomados, Departamento de Zoologa, Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Apartado postal 11-0058, Lima, 11, Per. Email Emily Toscano: ema.tg27@gmail.com
Resumen
En este trabajo se reportan las especies de Brachionidae reconocidos en las muestras recogidas en octubre de 2010 en la albufera Laguna El Paraiso, Huacho (1113' 11 10'S, 77 35' 7740'W). Cinco especies fueron determinadas: Keratella tropica, Brachionus quadridentatus, B. urceolaris, B. angularis y B. ibericus Ciros-Prez 2001. Este ltimo es un nuevo reporte para el Per y ampla su distribucin a nivel mundial. Palabras clave: Zooplancton; especie cosmopolita; especie crptica; complejo Brachionus plicatilis.
Abstract
Citacin: Toscano E. & R. Severino. 2013. Brachionidae (Rotifera: Monogononta) de la albufera El Paraso y el reporte de Brachionus ibericus en el Per. Rev. peru. biol. 20(2): 177 - 180 (Diciembre 2013)
This paper reports the Brachionidae species recognized in samples collected in October 2010 in the albufera Laguna El Paraiso, Huacho (1113 1110'S , 7735' 7740'W). Five species were determined: Keratella tropica, Brachionus quadridentatus, B. urceolaris, B. angularis and B. ibericus Ciros-Prez 2001, which is a new report for Peru and this report expanding its worldwide distribution. Keywords: Zooplankton; cosmopolitan species; cryptic specie; Brachionus plicatilis complex.
Introduccin Los Rotifera son componentes del zooplancton y especies importantes en las cadenas trficas de los ecosistemas de aguas continentales. Su distribucin geogrfica es muy amplia, pueden encontrarse desde el mar hasta charcos estacionales de agua (Wallace 2002). Se han descrito ms de de 2000 especies de rotferos y la mayora con tamaos entre 100 1000 m de longitud. La regin Neotropical, es la tercera ms diversa, presentando 566 especies de la clase Monogononta, destacando la familia Brachionidae con 71 especies (Brachionus con 32 y Keratella con 18) y 116 especies de la clase Bdelloidea (Segers 2008). Dentro del phylum Rotifera, el gnero Brachionus inluye el 80% de las especies del phylum (Segers 2007), y es conocido como el ratn blanco de los rotferos, siendo objeto de mltiples estudios, desde ecoevolutivos hasta bioqumicos, y utilizado como modelo en estudios fisiolgicos y toxicolgicos (Gallardo et al. 2006, Lee et al. 2010, Ciros-Prez et al. 2001) Sin embargo, el estudio de Brachionus ha tenido dificultades debido a la variacin fenotpica que presentan algunas especies (Yin & Niu 2007), as como a la ocurrencia de especies simptricas morfolgicamente similares pero con requerimientos distintos, conformando grupos de especies crpticas, tales como el complejo Brachionus plicatilis (Ciros-Prez et al. 2001) afectando de esta manera el conocimiento de su verdadera distribucin geogrfica (Jersabek & Bolortsetseg 2010). En el Per, se conoce poco acerca de la diversidad y distribucin los rotferos. Los primeros reportes en el Per, acerca de la composicin y morfologa de los rotferos fueron dados a conocer por Samanez (1988, 1991), y por Samanez & Riofrio (1995) en estudios realizados en la Amazona peruana. En humedales del departamento de
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Toscano & Severino
Figura 1. Brachionus ibericus. (A) Mediciones de la Lrica. A: Longitud Lrica. B: Ancho Lrica. C: Apertura Ceflica. D: Profundidad de espina central y E: Distancia interespinal (B) Detalle de a) pie elongado, que sale a partir de b)apertura pedial. Aumento: 40X. (C) Esquema de las estructuras de B. ibericus Ab-ped: Abertura pedial. Cc: Corona Ciliar. Cn: Restos de Cordn nervioso. Esp-d: Espina dorsal. Esp-v: Espina ventral. Gvit: Glndula vitelina. Rm: Restos del mstax. RCc: Restos de la Corona ciliar. Rest: Restos estomacales. Sen-d: Seno ventral. Vjg: Vejiga
Lima se han reportado rotferos en trabajos de ndole ecolgico y prospectivo (Iannacone & Alvario 2007, Paredes et al. 2007). La albufera o laguna El Paraso es un humedal costero ubicado en el distrito de Huacho, aproximadamente 145 km de Lima (1113 1110S, 7735' 7740'W). El Paraso forma parte de un conjunto de humedales a lo largo de la costa peruana y representa un refugio para una gran diversidad de aves, de las cuales el 43,2% son migratorias continentales y locales (Cruz et al. 2007). Las colectas de muestras se realizaron en octubre de 2010 en tres puntos del espejo de agua principal, en la superficie del agua y a un metro de orillas con profundidades de ms de un metro. Se uso una red de fitoplancton (40 m) con dos procedimientos, uno realizando un arrastre superficial en forma circular, y un segundo un arrastre vertical desde el fondo a la superficie. Las muestras fueron colocadas en frascos de 100 mL, y fijadas con formol en una concentracin final de 4%. Los anlisis se realizaron con un microscopio ptico a 400 aumentos y una cmara digital Olympus de 12 Mpx. Las claves utilizadas fueron de Grothe y Grothe (1977) y Fontaneto (2008). Se determin la presencia de una especie de Keratella, cuatro especies de Brachionus y una especie crptica, es decir, cuya morfologa es similar a B. plicatilis. Las cuatro especies de Brachionus corresponden a B. angularis, B. quadridentatus, B. ibericus y B. urceolaris. Y el gnero Keratella est representada por K. tropica. Brachionus ibericus Ciros-Prez fue descrita en el 2001 y su distribucin hasta hoy se crea que estaba restringida a Europa y Asia, exactamente en la ecoregin Paleartica occidental y oriental (Jersabek & Bolortsetseg 2010). Nuestros resultados permiten constatar la presencia de B. ibericus, lo que significa un nuevo reporte para el Per y para Amrica, ampliando su distribucin en el mundo. Nuestras observaciones concuerdan con la descripcin de Ciros-Prez et al. (2001) y Jersabek & Bolortsetseg (2010), y tambin son concordantes en relacin a las magnitudes que se mencionan en la Tabla 1 (Fig. 1).
Taxonoma Descripcin de las especies de acuerdo a Ciros-Prez et al. (2001) y Jersabek & Bolortsetseg (2010): PHYLUm: Rotifera CLASE: Monogononta ORDEN: PloiMa FAmILIA: BracHionidae Brachionus ibericus Ciros-Prez 2001 Recolectado a nivel superficial y a profundidad. Es euplanctnico de aguas atalsicas, estanques y lagos ausalinos, presente por temporadas o permanentemente, prefiriendo temperaturas mayores a los 15 C. Su lrica es relativamete suave, lisa y flexible, de forma ovoidea, apertura ceflica medio ancha. Margen dorsal con seis espinas triangulares de tamaos similares, tres a cada lado de un seno en forma de V. Las espinas internas ms prominentes, y las externas menos desarrolladas. Las espinas medias en forma de tringulo equiltero. El margen ventral anterior con dos pares de lbulos flanqueando un seno estrecho a la altura del seno dorsal. Apertura pedial subterminal, sobre una placa ventral (Figs. 1A y B).
Tabla 1. Medidas promedios (m) para Brachionus ibericus segn Ciros-Prez et al. 2001 MEDIDAS Longitud Lrica (LL) Ancho Lrica (AL) Apertura Ceflica (AC) Profundidad de espinas central *LL/AC= *AL/AC= *LL/AL= Ciros-Prez et al. 2001 193.5 2.5 144.5 2.5 99.0 2.5 21 1 1.95 1.46 1.34 Presente trabajo 170.8 124.5 93.0 22.1 1.84 1.34 1.37
*Relaciones entre las magnitudes dadas.
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Brachionidae de la albufera El Paraso y el reporte de BRACHiONUS ibERiCUS en el Per
Figura 2. Brachionus cuadridentatus. (A) Vista dorsal, 6 espinas dorsales, espina centrales prominentes. (B) Vista ventral, detalle el margen ventral de la lrica con el seno medio muy estrecho. Aumento: 40X
Brachionus quadridentatus Herman 1783 Recolectado a nivel superficial. Es una especie bentnica y semiplanctonica entre vegetacin acutica en lagunas de agua dulce, ros, embalses y lagos poco profundos, entre perifiton y macrfitas, tambin de aguas costeras salobres, de hbitat temporal o permanente, en pantano, aguas eurihalina. Lorica con la placa dorsal y ventral moderadamente aplanado dorsoventralmente, por lo general punteado o pustulante. Margen Antero-dorsal con seis espinas, espinas medianas generalmente ms largas, curvadas, granuladas o aserradas. Especie altamente variable debido a las espeinas postero-laterales (Figs. 2A y B). Brachionus angularis Gosse 1851 Recolectado a nivel superficial y a profundidad. Es una especie cosmopolita, euplanctnica en lagos de agua dulce, lagunas, estanques y embalses; ocasionalmente en aguas salobres y aguas salinas atalsicas. Lrica con la placa dorsal y ventral
moderadamente aplanado dorso-ventral y firme. Placa dorsal con un fuerte o muy dbil patrn de crestas. Dos espinas medianas cortas antero-dorsales; espinas intermedias y laterales ausentes o fuertemente reducidas, espinas posteriores ausentes (Fig. 3). Brachionus urceolaris Muller 1773 Punto A superficial. Es cosmopolita, presente en las ecorregiones Antrtida y Pacifico. Bentnicos y semiplanctonicos, predominantemente entre perifiton de macrfitos de agua dulce, estanques, ros, embalses, lagos, llanuras aluviales inundadas, tambin en aguas costeras de agua salobre y atalsicas. Temporales o permanentes, euritermicos, eurihalinos. El cuerpo es aplanado dorso-ventralmente. La lorica es suave, firme y se divide en una placa dorsal y ventral que estn completamente fusionadas lateralmente. Es ovalada, sin placa basal. En el margen dorsal anterior seis espinas puntiagudas son visibles. Las medianas son ms largas que las laterales (Fig. 4).
Figura 3. Brachionus angularis Vista ventral. Aumento 40X

Figura 4. Brachionus urceolaris Vista dorsal.
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Toscano & Severino
Figura 5. Keratella tropica, (A) Vista dorsal, Lorica con estras. (B) Vista lateral. Aumento: 40X
Keratella tropica (Apstein 1907) Recolectado en profundidad. Es una especie que se encuentra ampliamente distribuida en aguas tropicales y se extiende con mucha frecuencia en las zonas subtropicales, con clima en forma de verano. Su forma tpica lleva dos espinas posteriores en la lorica ornamentada, de las cuales la espina izquierda es ms corta que la derecha (Kaya & Altinding 2007) (Fig. 5). Aunque el trabajo se realiz en un da de muestreo, las especies colectadas amplan el conocimiento de la diversidad de rotferos, importante para el manejo cepas tiles en acuicultura que beneficie la produccin acucola as como para su uso como fuentes de investigacin en campos como la ecotoxicologa y ecoevolucin. Agradecimientos Nuestro agradecimiento al Dr. Christian Jersabek del Dept. of Organismal Biology, University of Salzburg, por su ayuda en la identificacin de B. ibericus. A Ricardo Ricce Bazn por su colaboracin en la recoleccin de muestras y a Alberto Lpez Sotomayor por sus recomendaciones para la realizacin de este trabajo. Literatura citada
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Caracterstica de una poblacin de PTERiA STERNA en Zorritos, Tumbes, Per

ISSN-L 1561-0837
TRABAJOS ORIGINALES Caractersticas biolgicas de una poblacin de Pteria sterna (Bivalvia: Pteriidae) en Zorritos, Tumbes, Per
Biological characteristics of one Pteria sterna population (Bivalvia: Pteriidae) from Zorritos, Tumbes, Peru
Elmer Ordinola, Solange Alemn y Manuel Vera
IMARPE, Instituto del Mar del Per Laboratorio Costero de Tumbes, Calle Jos Olaya S/N, C.P. Nueva Esperanza, Zorritos, Contralmirante Villar, Tumbes. Email Elmer Ordinola: elmord@imarpe.gob.pe Email Solange Alemn: saleman@imarpe.gob.pe Email Manuel Vera: mvera@imarpe.gob.pe
Resumen
Entre abril y noviembre de 2011 se analiz una poblacin de Pteria sterna (Gould, 1851) que se encontraba adherida a una red de cerco hundida en Zorritos, Tumbes, Per (34030.7S - 804020.8W). Los individuos presentaron tallas de 5 a 94 mm de altura valvar. La talla promedio se increment hacia finales del periodo evaluado. La estructura de tallas mostr la presencia de reclutas en la mayora de meses evaluados, con mximos en abril y agosto. Se registraron cinco grupos de edad. La proporcin sexual fue 1:1. Los desoves fueron continuos, a excepcin de junio, con un mximo en noviembre. La relacin altura valvar-peso total no mostr diferencias por sexos. El crecimiento de esta especie fue alomtrico negativo. Las dems relaciones (potencial: peso del cuerpo-peso total, y lineales: peso del cuerpo-peso total y peso del talo peso total) presentaron elevadas correlaciones. El rendimiento del msculo (talo) represent el 6.3% del peso total. Palabras clave: Concha perlfera, tallas, desove, rendimiento, Zorritos, Per.
Abstract
Between April and November 2011 was analyzed a population of Pteria sterna (Gould, 1851) which was attached to a sunken purse seine in Zorritos, Tumbes, Peru (340'30.7"S - 8040'20.8"W). Individuals presented from 5 to 94 mm valve height. The average size increased towards the end of the assessment period. The size structure indicated the presence of recruits in most months evaluated, with highest in April and August. There were five age groups. The sex ratio was 1:1. The spawns were continuous, except in June, with highest in November. Valvar height-total weight relationship did not differ by sex. The growth of this species was negative allometric. Other relationships (potential: body weight-total weight, and linear: body weight-total weight and muscle weight-total weight) showed high correlations. Muscle performance accounted for 6.3% of the total weight. Keywords: Pearl shell, sizes, spawning, yield, Zorritos, Peru.
Citacin: Ordinola E., S. Alemn & M. Vera. 2013. Caractersticas biolgicas de una poblacin de Pteria sterna (Bivalvia: Pteriidae) en Zorritos, Tumbes, Per. Rev. peru. biol. 20(2): 181 - 186 (Diciembre 2013)
Introduccin Pteria sterna (Gould, 1851) llamada comnmente concha perla, perlera o perlfera, es un bivalvo que habita en la zona infralitoral marina y en manglares (lamo & Valdivieso 1997), desde el nivel de la ms baja marea hasta 23 m de profundidad (Mora 1990), adherida por medio de un biso a substratos duros (rocas, corales gorgnidos y estructuras metlicas sumergidas) o arena gruesa (Monteforte 2005, Ordinola et al. 2010a). Se distribuye desde California (Mxico) hasta Pimentel (Per) (lamo & Valdivieso 1997), con poblaciones bien identificadas en la costa del Pacfico tropical y subtropical de Amrica, desde el Golfo de California a Talara, Per (Keen 1971, Arizpe 1992, Ordinola et al. 2010a). Excepcionalmente, luego del evento El Nio 1982-83 se han reportado ejemplares de P. sterna en las bahas de Ancn (Lima) e Independencia (Ica) en Per, y Mejillones en Chile (Paredes et al. 1998, Daz & Ortlieb 1993). Es una especie que puede sobrevivir en aguas muy turbias, soportando temperaturas menores a 18 C y mayores a 32 C, y salinidades menores a 34.5 ups y mayores a 37 ups, caractersticas que le confieren una gran diversidad de estrategias para permanecer en una zona o extender su distribucin geogrfica (Araya-Nez et al. 1991, del RoPortilla et al. 1992, Monteforte 2005).
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Ordinola et al.
3.65S N Tumbes 3.66S
Ocano Pacfico
0.5
millas nuticas
3.67S
Santa Rosa
3.68S
Los Pinos
Terminal Pesquero Zonal Zorritos
Zorritos
Tumbes
3.69S 80.70W 80.68W 80.66W
Poblacin estudiada 80.64W
Figura 1.- Ubicacin del banco de concha perlfera Pteria sterna (estrella) en Zorritos, Tumbes, Per.
Figura 3.- Medidas morfolgicas tomadas a los ejemplares de concha perlfera Pteria sterna (Foto: E. Ordinola).
En Per, las poblaciones naturales ms importantes se encuentran en la provincia de Talara, Piura, especficamente frente a Punta Arenas, Negritos y Punta Capullanas, asociados a isotermas de 16.5 a 17 C, isohalinas de 35.1 a 35.15 ups y valores de oxgeno de 2 mL/L (Ordinola et al. 2010a).
En Tumbes, las poblaciones ms importantes de concha perlfera estn asentadas sobre las plataformas de extraccin de petrleo ubicadas en La Cruz, Zorritos y Punta Sal, a profundidades de 3 a 45 m (Robles & Mndez 1989). El objetivo de este estudio fue caracterizar biolgicamente la poblacin de P. sterna asentada en una red de cerco atracada frente a Zorritos, Tumbes, Per. Material y mtodos rea de estudio.- El estudio se efectu al noreste del desembarcadero artesanal de Zorritos (34030,7S - 804020,8W) (Fig. 1). La poblacin estudiada estaba asentada sobre una red de cerco de 38.1 mm de tamao de malla, 1481.6 m de largo y 27.8 m de altura, atracada en el fondo a una profundidad de 4 m, proveniente del naufragio de la embarcacin LA BENDICION DE CRISTO PT-3439-CM [sic] (de 15 t de capacidad de bodega, 10.9 m de eslora, 4.1 m de manga y 1.81 m de puntal), ocurrido el 28 de enero de 2010. Los muestreos iniciaron en abril de 2011 y siguieron hasta septiembre del mismo ao. Los ejemplares se encontraban adheridos a la parte suspendida de la red en la columna de agua, que se dispona de forma envolvente, con la relinga superior expuesta en la superficie del mar (Fig. 2); en la parte de la red que estaba en contacto con el fondo no se encontraron ejemplares. Coleccin de informacin y muestreo.- Los ejemplares fueron colectados por buceo libre. Se identificaron siguiendo a Keen (1971), Mora (1990) y lamo y Valdivieso (1997), y se midieron en su longitud (LV), altura (AV) y espesor valvar (EV), con un malacmetro (graduado en mm), segn las tcnicas descritas por Laevastu (1971), Fischer et al. (1995) y Galdmez et al. (2007) (Fig. 3). Adems, se registr el peso total (PT), peso del cuerpo sin valvas (Pc) y peso del msculo o talo (Pm) de cada ejemplar, utilizando una balanza de 0.01 g de precisin. Pteria sterna presenta sexos separados, que a simple vista no pueden ser identificados. Para determinar el sexo y la madurez gonadal solo en hembras, se empleo la siguiente metodologia: en primer lugar se efectuo un corte transversal entre la union del pie y la masa visceral, luego se extrajo una porcion de la masa gonadal, se coloco en una lamina portaobjeto y se aadio una gota de agua cubriendose inmediatamente con una laminilla cubreobjeto, luego se observo al microspcopio y se determino el sexo, los machos fueron identificados por el movimiento de los espermatocitos y en hembras segun el
Figura 2.- Vista superior de la red de cerco hundida (A) y ejemplares de Pteria sterna adheridos a la misma (B) en Zorritos, Tumbes, Per (Foto: S. Alemn).
182
grado de desarrollo de los ovocitos y trabeculas, se empleo la siguiente escala: I. Inmaduro. Se observan trabculas (especie de saco) que contienen en su parte interna numerosas clulas germinales que darn lugar a los ovocitos. En las paredes de estas trabculas se observan ovogonias y/o ovocitos inmaduros pequeos. II. En Maduracion. Las trabculas son ms grandes. Se observa la presencia de ovocitos ms desarrollados. III. Maduro. Las trabculas son ms grandes y de pared delgada. Numerosos ovocitos de forma redondeada o piriforme. IV. En Evacuacion. Las trabculas de menor tamao. Pocos ovocitos maduros. Puede observarse ovocitos en proceso de reabsorcin (atresia). V. Post-Desove (o en recuperacion).Trabculas de pared bastante gruesa, completamente vacas. Anlisis de datos.- Se obtuvieron los estadsticos para caracterizar la estructura de tallas de la especie mediante la variable AV (promedio, rango, moda y desviacin estndar). Se aplic el ANOVA de una va y prueba de Tukey para determinar diferencias entre los valores mensuales de la altura valvar. Se determinaron los grupos modales mediante descomposicin de frecuencias de AV, usando el mtodo de Bhattacharya de la subrutina homnima del programa FiSAT II (Gayanilo et al.
2003). Las medidas de AV fueron agrupadas en clases de 5 mm. Se determin la proporcin sexual (PS) por meses, mediante la frmula: PS = N machos / N hembras. Para determinar si existen diferencias estadsticas (p< 0.05) se aplic la prueba de Chi-cuadrado (=0.05) (Zar 1999). Se determin el porcentaje mensual de ejemplares hembra segn estadios de madurez gonadal. Se analizaron las relaciones AV-PT y AV-Pm, utilizando las ecuaciones de potencia PT=a(AV)b y Pm=a(AV)b, respectivamente, ajustadas por el mtodo de mnimos cuadrados; y PT-Pc, empleando la ecuacin lineal Pc=a+b(PT). Adems se determin el rendimiento del msculo (Pm) en relacin al PT de cada ejemplar analizado, empleando la ecuacin lineal Pm=a+b(PT). En estas ecuaciones, a y b son constantes de ajuste. Para determinar diferencias por sexo en la relacin AV-PT (p< 0.05), se aplic el ANCOVA. Adems se compararon las pendientes estimadas con la prueba t-Student de dos colas (p< 0.05), para evaluar el valor terico de isometra, b= 3 (Sokal & Rohlf 1969). Resultados Estructura de tallas.- Entre abril y noviembre de 2011, se colectaron 622 ejemplares de concha perlfera (promedio de 89 ejemplares por mes), con rango de talla de 5 a 94 mm AV. La talla media se increment de 50.6 mm AV en abril a 65.4
Frecuencia (%) 25 20 15 10 5 0 25 20 15 10 5 0 25 20 15 10 5 0 30 25 20 15 10 5 0 5- 9 50 - 54 80 - 84 30 - 34 60 - 64 40 - 44 90 - 94 65 - 69 85 - 89 35 - 39 25 - 29 55 - 59 45 - 49 75 - 79 20 - 24 15 - 19 10 - 14 70 - 74
Frecuencia (%)
Abril
25 20 15 10 5 0
Agosto
Mayo
Junio
30 25 20 15 10 5 0
Octubre
Julio
20 15 10 5 0 5- 9
Noviembre
50 - 54
30 - 34
40 - 44
80 - 84
60 - 64
35 - 39
25 - 29
20 - 24
15 - 19
10 - 14
Figura 5.- Estructura de tallas y grupos modales por meses de concha perlfera Pteria sterna, en Zorritos, Tumbes, Per (abril noviembre 2011).
90 - 94
65 - 69
85 - 89
55 - 59
45 - 49
75 - 79
70 - 74
183
Ordinola et al.
Tabla 1.- Estadsticos biomtricos por meses de concha perlfera Pteria sterna, en Zorritos, Tumbes, Per (Abril Noviembre 2011). Rango 12 81 7 81 20 79 5 83 14 75 43 90 28 94 5 94 Media 50.6 54.6 57.8 57.1 57.6 61.3 65.4 57.5 Moda 58 57 67 55 65 61 75 74
Altura valvar (mm) 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Abr May Jun Jul Ago Sep Oct Nov Tiempo (meses)
Mes Abril Mayo Junio Julio Agosto Octubre Noviembre Total
n 92 83 82 116 90 90 69 622
Altura valvar (mm)
DS 13.7 12 11 10.3 14.4 8.6 14 12.7
Varianza 187.4 144 121.4 105.2 207.1 74.6 195.6 160.7
n: nmero de ejemplares, DS: desviacin estndar.
mm AV en noviembre, mostrando una variacin de 14.8 mm durante los siete meses evaluados (+29.2%) (Tabla 1). Se observ una tendencia positiva de la media durante abril a junio, para estabilizarse hasta agosto (invierno), e incrementar nuevamente de octubre a noviembre (Fig. 4). La estructura de tallas indic la presencia de reclutamientos continuos con mximos en abril y agosto (Fig. 5). Grupos modales.- Se diferenciaron como mximo tres grupos modales en abril, mayo, agosto y noviembre (la media desviacin estndar del menor y mayor grupo modal fue, en abril: 38.9 3.25 cm AV y 70.7 6.85 cm AV; mayo: 40.5 4.64 mm AV y 70.0 3,21 mm AV; agosto: 19.5 4.77 y 65.2 4.67 mm AV; y noviembre: 39.5 6.01 mm AV y 75.5 5.13 mm AV). En total se detectaron cinco grupos de edad. El grupo 1 se present en agosto (19.5 4.77 mm AV) y noviembre (39.5 6.01 mm AV), el grupo 2 de julio (43.6 3.37 mm AV) a noviembre (56.7 5.98 mm AV), el grupo 3 de abril (38.9 3.25 mm AV) a noviembre (75.5 5.13 mm AV), el grupo 4 de abril (51.5 5.51 mm AV) a junio (59.8 7.12 mm AV), y el grupo 5 en abril (70.7 6.85 mm AV) y mayo (70.0 3.21 mm AV) (Fig. 5). Proporcin sexual.- Se analizaron 522 ejemplares de concha perlfera, de los cuales 162 fueron machos, 164 hembras, y 196 indeterminados. La proporcin sexual global registrada (una hembra por cada macho) no se diferenci de la proporcin esperada (1 H: 1 M; X2= 0.012; gl= 1; p> 0.05), aunque slo en julio favoreci a los machos (2 M: 1 H; X2= 5.0; gl= 1; p< 0.05) (Fig. 6). Madurez gonadal.- En las 156 hembras analizadas, predo-
Figura 4.- Variacin mensual de la altura valvar (AV, mm), y desviacin estndar, de concha perlfera Pteria sterna, en Zorritos, Tumbes, Per (Abril Noviembre 2011).
minaron los ejemplares maduros en abril, mayo, junio, agosto y octubre. Los mayores porcentajes en evacuacin o desove se registraron en la mayora de meses evaluados a excepcin de junio, siendo noviembre el mes que ms destac con el 55.6%. Hembras en post-desove fueron registradas durante el segundo semestre del ao (julio, agosto, octubre y noviembre) (Fig. 7). Relaciones biomtricas.- Las ecuaciones de la relacin AVPT segn sexos no presentaron diferencias significativas (F= 0.47; p= 0.4913) y mostraron elevadas correlaciones (r> 0.91), siendo la ecuacin general para el perodo evaluado: PT=8.543x10-4(AV)2.629 (n= 522; r= 0.9604) (Fig. 8A). Las pendientes de la relacin AV-PT, tanto por sexo (2.521 en machos y 2.673 en hembras) como para el total de la muestra (2.629), presentaron una relacin alomtrica negativa con respecto a la pendiente hipottica de isometra de 3 (tc>tt; p< 0.05). La relacin AV-Pm estuvo definida por la ecuacin: Pm=1.764x10-5(AV)2.879 (n= 511; r= 0.8711) (Fig. 8B). La relacin PcPT tambin mostr alta correlacin (r= 0,9319). La ecuacin indic que por cada 100 g de peso total se obtuvieron 27.3 g de peso de cuerpo (Fig. 9A). Rendimiento.- El rendimiento del msculo, que es la parte que se comercializa en este molusco, represent el 6.3% del peso total, es decir que por cada 100 g de peso total se obtendran 6.3 g de talo (Fig. 9B).
100 90
Frecuencia relativa (%)
70 60 50 40 30 20 10 0 Abr May Jun Jul Ago Meses Hembras Sep Machos Oct Nov
Frecuencia relativa (%)
80
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Abr May Jun En mad. Jul Ago Meses Mad. Sep En evac. Oct Nov
Inmad.
Post -des.
Figura 6.- Proporcin sexual por meses de concha perlfera Pteria sterna, en Zorritos, Tumbes, Per (abril noviembre 2011).
Figura 7.- Variacin mensual de la madurez gondica de hembras de concha perlfera Pteria sterna, en Zorritos, Tumbes, Per (abril noviembre 2011).
184

(A)
160 140
(A)
Peso del cuerpo (g)
45 40
Peso total (g)
120 100 80 60 40 20 0 0
PT = 0.0009AV r = 0.9604 n = 522
2.629
35 30 25 20 15 10 5 0 Pc = 0.2653PT + 0.8126 r = 0.9319 n = 520
20
40
60
80
100
(B)
14 12
2.8791
(B)
Pt = 1.76E-05x r = 0.8711 n = 511
14 12
50
100
150
200
Peso talo (g)
Peso talo (g)
10 8 6 4 2 0 0
10 8 6 4 2 0 Pt = 0.0645PT - 0.1862 r = 0.9056 n = 511 0 50 100 150 200
20
40
60
80
100
Altura valvar (mm)

Figura 8.- Relaciones: A) altura valvar - peso total, y B) altura valvar peso msculo, de concha perlfera Pteria sterna, en Zorritos, Tumbes, Per (Abril Noviembre 2011).
Peso total (g)

Figura 9.- Relaciones: A) peso total - peso cuerpo, y B) peso total - peso msculo (rendimiento), de concha perlfera Pteria sterna, en Zorritos, Tumbes, Per (Abril Noviembre 2011).
Discusin Se conoce que las poblaciones ms importantes de concha perlfera en el litoral de Tumbes estn asentados en las plataformas de extraccin de petrleo ubicados a ms de 3 mn de las costas de caleta La Cruz, Zorritos y Punta Sal, a profundidades de 3 a 45 m, y cuyas densidades varan de 1 a 120 ejemplares.m-2 (Robles & Mndez 1989). La poblacin analizada en este estudio se asent en una red de cerco hundida en Zorritos que present las caractersticas idneas para su fijacin. Al respecto, Araya-Nez et al. (1991), del Ro-Portilla et al. (1992) y Monteforte (2005) sealan que debido a la tendencia oportunista de esta especie y a su tolerancia a variaciones ambientales agresivas, despliega una gran diversidad de estrategias para asegurar su permanencia. Sin embargo, la continuidad de esta poblacin depender del tiempo que demande a los pescadores locales extraer toda la relinga superior (flotadores), as como la misma red, lo que est ocurriendo actualmente. La poblacin se caracteriz por presentar ejemplares jvenes (promedios mensuales de 50.6 mm AV a 65.4 mm AV), lo que de acuerdo a Monteforte (2005) es caracterstico de una poblacin en desarrollo. Las tallas medias encontradas fueron similares a las registradas por Robles y Mndez (1989), en la plataforma de petrleo de La Cruz (56 mm AV), por Kameya et al. (1996), para el litoral de Tumbes (32 y 67.7 mm AV) y por Ordinola et al. (2010b), frente a Canoas, Cancas y Punta Sal (51 mm AV), pero diferentes a la encontrada por Robles y Mndez (1989) en la plataforma de Zorritos (115 mm AV), poblacin que ellos consideraron en su mximo desarrollo.
Aunque la formacin de esta poblacin es reciente, se detectaron cinco grupos de edad, similar a lo sealado por Kameya et al. (1996) y Robles y Mndez (1989), quienes registraron varias clases anuales durante estudios efectuados en 1995 y 1985, respectivamente. Sin embargo, el mtodo empleado no habra registrado los grupos modales ms pequeos durante abril a julio, posiblemente por la similitud de las tallas y la poca cantidad de ejemplares. En la mayora de meses evaluados se registraron ejemplares jvenes, observndose el mayor ingreso de reclutas durante abril y agosto. Al respecto, Ruiz y Cceres (1990) indican que en la Baha de la Paz, Pacfico mexicano, P. sterna muestra reclutamientos en colectores artificiales durante todo el ao, coincidiendo con la estrategia de reproduccin continua, por lo que Mrquez et al. (2000) sugieren que los factores ambientales no juegan un papel significativo en la regulacin del ciclo reproductivo de esta especie y probablemente factores endgenos se encargan de su modulacin, y recomiendan realizar estudios exhaustivos para verificar esta hiptesis. La proporcin sexual encontrada (1 H: 1 M) fue similar a la registrada por Daz y Bckle-Ramrez (1996) en Baja California, Mxico (1.2 H: 1 M), aunque diferente a la obtenida por Monteforte (2005) en ejemplares en cultivo (1 M: 0.38 H). Se registraron desoves durante seis de los siete meses estudiados. Al respecto, Daz y Bckle-Ramrez (1996) observaron que P. sterna realiz desoves parciales prcticamente todo el ao, lo que fue confirmado por Monteforte (2005), quien registr la actividad reproductiva continua de esta especie en Baha de La Paz, Mxico, observando dos ciclos de desove y reclutamiento en colectores durante verano e invierno, aspecto que se observara en
185
Ordinola et al.
las especies perleras netamente tropicales como Pinctada albina (Lamarck, 1819), P. margaritifera (Linnaeus, 1758), P. maxima (Jameson, 1901) y P. fucata (Gould, 1850). El rendimiento del msculo (talo) (6.3%) fue inferior al reportado por Kameya et al. (1996) en Tumbes (10%), y Robles y Mndez (1989) en Talara (10%) y Tumbes (8 a 11%). Luque et al. (2001) obtuvieron en Talara rendimientos similares a los observados en el presente estudio (4.3% a 7.2%). Con respecto a la relacin AVPm, los pesos estimados fueron superiores a los obtenidos por Luque et al. (2001) y Ordinola et al. (2010a), lo que indicara que la especie encontr condiciones aptas para su desarrollo. Por lo tanto, la elevada presencia de ejemplares jvenes indicara que la poblacin estudiada de P. sterna se encontraba en desarrollo. Agradecimientos Al Dr. Jorge Llanos, por las facilidades brindadas para la realizacin del presente trabajo, al Tc. William Coronado, por su apoyo en los muestreos biolgicos, al Dr. Mario MonteforteSnchez, por proporcionar informacin relevante sobre la biologa de P. sterna, as como por sus comentarios y recomendaciones, y al revisor annimo, por sus correcciones y sugerencias que permitieron mejorar la redaccin de este artculo. Literatura citada
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186
Rev. peru. biol. 20(2): 187 - 188 (Diciembre 2013) Facultad de Ciencias Biolgicas UNMSM
Registro de un par madre-cra de ballena franca austral

ISSN-L 1561-0837
NOTA CIENTFICA Registro de un par madre-cra de ballena franca austral (Eubalaena australis) en la costa de Lima, Per
Record of mother-calf pair of southern right whales (Eubalaena australis) off the coast of Lima, Peru
Mariana Orihuela1 y Davis Cortegana-Arias2
1 Investigadora independiente, Othone Gastaeta 196, Chorrillos, Lima, Per. Email Mariana Orihuela: marorihuela1@gmail.com 2 Fundacin Ballena Azul, Jr. Los Forestales 615, La Molina, Lima, Per. Email Davis Cortegana-Arias: davis.cortegana@fbaperu.org
Resumen
Hasta el presente reporte, la distribucin de la ballena franca austral en el Pacfico Sur se extenda hasta los 1508S en la baha San Fernando, Ica. Previamente, ballenas francas australes en Per fueron registradas en noviembre de 1987 en Ilo, Moquegua y setiembre de 1996 en Atico, Arequipa. Estos registros podran corresponder a una recuperacin de la poblacin del Pacfico Sudeste, la cual ha sido declarada En Peligro Crtico por la IUCN. Aqu reportamos un par madre-cra de ballenas francas australes avistados en el distrito de Chorrillos, en Lima, el 20 de agosto de 2012, desde las 9:30 h por un perodo de 4 horas hasta la 13:30 h. Palabras Clave: Eubalaena australis, par madre-cra, Lima, Per, Pacfico Sureste.
Citacin: Orihuela M. & D. Cortegana-Arias. 2013. Registro de un par madre-cra de ballena franca austral (Eubalaena australis) en la costa de Lima, Per. Rev. peru. biol. 20(2): 187 - 188 (Diciembre 2013)
Abstract
Before this report, the distribution in the South Eastern Pacific of the Southern Right whales was knew until to 1508S in San Fernando Bay, Ica. Previously, southern right whales in Per were recorded in November 1987 in Ilo, Moquegua and September 1996 in Atico, Arequipa. These records could show the possible recovery in the southeastern Pacific of the right whale population, which has been declared Critically Endangered by the IUCN. We reported a mother-calf pair sighting on August 20, 2012 in Chorrillos district, Lima from 9:30 h to 13:30 h for 4 hours. Keywords: Eubalaena australis, mother-calf pair, Lima, Per, southeastern Pacific
El 20 de agosto de 2012, un par madre-cra de la ballena franca austral (Eubalaena australis (Desmoulins, 1822)) fue registrado en la costa del distrito de Chorrillos en Lima (121002S, 770217W), avistado a solo 15 m del espign del club Regatas Lima a las 9:30 h, la presencia de las ballenas en este punto fue descubierta por uno de los autores. Luego de permanecer en el espign del club Regatas Lima, por aproximadamente 30 minutos las ballenas procedieron a viajar en direccin sur, hasta la playa La Herradura, en la cual permanecieron 3 horas aproximadamente, hasta la 13:30 h (Fig.1), registrndose la totalidad de los avistamientos por los autores. Luego, ambas ballenas partieron en direccin NO hacia mar abierto. Esto constituye el avistamiento ms al norte tanto para el Per como para el Pacfico Sudeste. Se identific a la especie en base a la ausencia de aleta dorsal, as como a la presencia de callosidades en el rostro de ambas ballenas, segn Carwardine (2002). Se infiere que las ballenas son un par madre-cra debido a la cercana y al comportamiento protector de la ballena ms grande, as como la talla de ambas (14 m y 6 m, estimado en comparacin con el bote, de 7 m de largo). No se observ fauna asociada. Se comision un bote para hacer el seguimiento a las ballenas en su recorrido desde el club Regatas hasta La Herradura, lo cual permiti tomar algunas fotografas (Fig. 2, Fig. 3).
Las ballenas nadaron lentamente durante todo el avistamiento (<10 nudos, aproximadamente la velocidad de la embarcacin), en comparacin con la embarcacin, sin comportamiento areo (breaching, golpes de cola ni aleta ni spyhopping). La cra siempre estuvo al lado de la madre, excepto en momentos en que la curiosidad le haca
187
Orihuela & Cortegana-Arias
Peru
LIMA
129'0"S
* *
OCANO PACFICO
Espign La Herradura
1210'0"S
Chorrillos
1211'0"S
1212'0"S
ciones (Santilln et al., 2004, Van Waerebeek et al., 1992, 1998) que han ocurrido ms al norte de los lugares conocidos sustentaran esta teoria. Aguayo-Lobo et al. (2008), en su evaluacin de avistamientos de E. australis en aguas chilenas, seala una posible zona de concentracin de cras entre los 1829S y 2828S, la cual podra extenderse hasta territorio peruano, y explicara los avistamientos de pares madre-cra reportados. Asimismo, Pizarro-Neyra (2010), reporto la presencia de un ejemplar varado de E. australis en la localidad de Los Palos, Tacna, otro indicativo de la presencia de esta especie en aguas peruanas. La presencia registrada en varamientos y avistamientos en territorio peruano, proponen definir el patrn de migracin, las zonas de ocurrencia y de reproduccin de esta poblacin clasificada como En Peligro Crtico por la IUCN (Reilly et al. 2008). Agradecimientos A la gente de la Fundacin Ballena Azul por su ayuda incansable en la redaccin de esta nota, y a la Srta. Alicia F. Tyson por la elaboracin de los mapas. Literatura citada
Aguayo-Lobo A., J. Acevedo, J. Brito, C. Olavarra, R. Moraga & C. Olave. 2008. La ballena franca del sur, Eubalaena australis (Desmoulins, 1822) en aguas chilenas: anlisis de sus registros desde 1976 a 2008, Revista de Biologa Marina y Oceanografa 43: 653 668. Carwardine M. 2002. Whales, Dolphins & Porpoises, 2nd edition, London: Dorling Kindersley Pizarro-Neyra J. 2010. Varamientos de Cetceos en Tacna, Per (2002- 2010), Revista Peruana de Biologa, 17: 253 255. Reilly S.B., J.L. Bannister, P.B. Best, M. Brown, Jr. R.L. Brownell, D.S. Butterworth, P.J. Clapham, J.Cooke, G.P. Donovan, J. Urbn & A.N. Zerbini. 2008. Eubalaena australis (Chile-Peru subpopulation). In: IUCN 2012. IUCN Red List of Threatened Species. Version 2012.2. < www.iucnredlist.org>. Downloaded on08 January 2013 Santilln L., M. Roca, M. Apaza, L. Rosa de Oliveira & K. Ontn. 2004. New Record of Mother-Calf Pair of Southern Right Whale, Eubalaena australis off the Peruvian coast. Latin American Journal of Aquatic Mammals. 3: 83-84. Van Waerebeek K., J.C. Reyes & M.F. Van Bressem. 1998. Sighting of a mothercalf pair of southern right whales Eubalaena australis in Peruvian waters. Estudios Oceanolgicos 17: 105-107. Van Waerebeek K., J.C. Reyes & C. Aranda. 1992. Southern right whales (Eubalaena australis) off southern Peru. Marine Mammal Science 8(1): 86-88.
0
774'0"W
2.5 km
773'0"W 772'0"W 771'0"W
Figura 1. Puntos de avistamiento de ballena franca austral en Lima, Per.
acercarse al bote, lo cual causaba que la madre la alejara del bote, la separacin entre ambas ballenas nunca super los 20 m. La costa de Lima, debido a la cercana con la ciudad, es el foco de una gran actividad pesquera. El club Regatas est al lado del Muelle de Pescadores del distrito de Chorrillos, muelle principal pesquero de Lima, el cual provee de pescado para consumo domstico a la ciudad. El club Regatas posee una marina, la cual tiene gran trfico de embarcaciones, a motor y a remos. El Espign en cambio, est en un lugar relativamente aislado (con trfico menor a dos embarcaciones, menor a 50 veraneantes), factor que quizs influy en la eleccin como un lugar de descanso por las ballenas. La playa La Herradura, a 1.3 km al sur del club, tambin es un lugar aislado, con un escaso transito de embarcaciones (menos de dos embarcaciones por hora), confirmando la bsqueda de un punto aislado por parte de las ballenas. Van Waerebeek et al. (1992), que afirma que la poblacin de la ballena franca austral est en recuperacin y estara reclamando lugares de cra ancestrales. Nuestro avistamiento y otras observa-
Figura 3. Madre y Cra de Eubalaena australis, registrada en la costa de Lima, Per.
Figura 4. Par Madre-cra de ballena franca austral, registrado en la costa de Lima, Per.
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Flotabilidad y similitud del nado de MANTA biROSTRiS con el ciclo de vuelo de COLUMbA LiViA
ISSN-L 1561-0837
NOTA CIENTFICA Flotabilidad y similitud del nado de Manta birostris (Elasmobranchii: Myliobatidae) con el ciclo de vuelo de Columba livia (Aves: Columbidae)
Buoyancy and similarity of the swimming of Manta birostris (Elasmobranchii: Myliobatidae) with the flying cycle of Columba livia (Aves: Columbidae)
Ivn Meza Vlez
Departamento de Paleontologa de Vertebrados, Museo de Historia Natural, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Apartado 14-0434, Lima 14, Per. E-mail: imv2999@gmail.com
Resumen
Se analiz la fsica de la flotacin en la mantarraya Manta birostris y se compar el nado con el ciclo de vuelo de la paloma domstica Columba livia, con la finalidad de encontrar similitudes y diferencias en las locomociones y las leyes fsicas que intervienen. Se demostr que uno de los dos ciclos de nado estudiados de esta especie posee tres de las cuatro fases principales del ciclo de vuelo de la paloma domstica. Tambin se demostr un efecto paracadas en M. birostris, el cual le ofrece una ventaja en su locomocin. Adicionalmente, se describi cmo el concepto fsico de torque se aplica al giro de esta especie. Palabras clave: Biomecnica, torque, vuelo, locomocin, Batoidea.
Abstract
Citacin: Meza Vlez I. 2013. Flotabilidad y similitud del nado de la mantaraya Manta birostris (Elasmobranchii: Myliobatidae) con el ciclo de vuelo de la paloma domstica Columba livia (Aves: Columbidae). Rev. peru. biol. 20(2): 189 - 186 (Diciembre 2013)
The physics of flotation in Manta birostris was analysed and the swimming of this species was compared with the flight cycle of the common pigeon Columba livia, in order to find similarities and differences in their locomotion patterns and the laws of physics driving them. It was showed that the cycle of M. birostris has three of the main four stages of pigeons flying cycle. A Parachute effect was also demonstrated, which give an advantage on rays locomotion. Moreover, it was described how torque concept is applied to turn of this species. Keywords: Biomechanics, torque, flight, Locomotion, Batoidea.
Introduccin La aplicacin de conceptos y de la metodologa de la fsica a los fenmenos biolgicos, complementa el estudio y el conocimiento de los organismos. En particular, en lo relacionado a la locomocin, nos permite conocer mejor cmo es el desplazamiento, el vuelo o el nado de un animal, ya sea actual o fsil. La especialidad encargada de hacer estos estudios fsicos-biolgicos es la biomecnica, definida como el estudio del movimiento de los cuerpos vivos usando la ciencia de la mecnica (Hatze 1974). A su vez, la mecnica es la rama de la fsica dedicada a la descripcin del movimiento y cmo las fuerzas producen movimiento (Knudson 2007). Para cualquier organismo nadador se cumplen ciertos principios que deben ser considerados. Eckert et al. (1994) sealan que los animales nadadores sostienen muy poco su propio cuerpo, pues la densidad del agua de mar les ayuda a flotar, pero tambin les produce gran resistencia al avance, porque es una fuerza contraria a la direccin del movimiento. Adems, afirman que la velocidad de un animal nadador est en funcin de la relacin fuerza-resistencia y la fuerza es directamente proporcional a la masa muscular; para un animal grande y a una velocidad dada bajo el agua, la resistencia al avance por unidad de masa disminuye con la masa del cuerpo. Ello se debe a que, si la forma permanece constante, la superficie y el rea en seccin transversal (que determina la resistencia) aumentan segn una funcin del cuadrado de alguna dimensin lineal, mientras que la masa del cuerpo (que determina la fuerza disponible) aumenta segn
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una funcin de esa dimensin lineal al cubo. As, concluyen los investigadores, un animal acutico grande puede desarrollar una fuerza mucho mayor en proporcin a la que produce la resistencia al avance, por lo tanto es capaz de alcanzar mayores velocidades de natacin que un animal de igual forma pero ms pequeo. Por eso tenemos que peces y mamferos grandes nadan ms rpidos que sus congneres ms pequeos. Esta resistencia tambin depende de otras variables como las propiedades fsicas del lquido a travs del cual se desplazan los animales, as la densidad influye en la locomocin de los grandes y la viscosidad en la de los animales muy pequeos (Eckert et al. 1994). Knudson (2007) sostiene que la fuerza de resistencia del fluido (FD) depende de su densidad, del rea frontal del cuerpo proyectada en la direccin del flujo, del coeficiente de resistencia (Cd) y sobre todo, depende de la velocidad relativa del individuo (v2) con respecto al fluido. Segn Vogel (1996) el coeficiente de resistencia depende de la forma del cuerpo y del modelo flujo. A diferencia de un organismo marino ssil, un animal nadador est sometido a gran resistencia del medio y debe vencerla con la forma hidrodinmica de su cuerpo y la tasa de energa que gasta en propulsarse, que es producto de la resistencia y la velocidad (Vogel 1996). Adems, dicha energa depende en parte del modelo de flujo que hay en el medio, ya sea turbulento o laminar, siendo este ltimo el que menos resistencia ofrece (Eckert et al. 1994). El lquido que rodea inmediatamente a la superficie del cuerpo se mueve a su misma velocidad, mientras que el liquido a distancia no se mueve; entonces, si la transicin de la velocidad del liquido es suavemente continua a medida que el lquido se aparta de la superficie del cuerpo, el flujo en la capa limtrofe se dice que es laminar, y si hay bruscos gradientes de velocidad de flujo, se dice que es turbulento (Eckert et al. 1994). El modelo de flujo est determinado no solo por la densidad y viscosidad del medio, sino tambin por las dimensiones y velocidad del animal; estas cuatro variables estn consideradas en una relacin adimensional: el denominado nmero de Reynolds (Vogel 1996). La locomocin de los batoideos ha sido abordada por varios investigadores (e.g. Marey 1893, Magnan 1930, Campbell 1951, Klausewitz 1964, Roberts 1969, Daniel 1988, Heine 1992, Rosenberger & Westneat 1999, Rosenberger 2001, Wilga & Lauder 2004), quienes observaron diferentes especies para hallar patrones de movimiento de las aletas pectorales. Los batoideos tienen dos modelos bsicos de nado y estn en funcin de las aletas pectorales: la locomocin ondulatoria, llamada rajiforme (Breder 1926), y la locomocin oscilatoria, llamada mobuliforme (Webb 1994). En la ondulatoria las ondas se propagan debajo, de la parte anterior a la posterior de las aletas pectorales; en la oscilatoria, las aletas pectorales aletean de arriba hacia abajo. Este nado es considerado una forma de volar bajo el agua y el aleteo es anlogo al vuelo de las aves (Rosenberger 2001). Algunas especies como Gymnura micrura, ondula las aletas pectorales en el sustrato y las oscila en la columna de agua (Rosenberger 2001). Anatmicamente, intervienen en la locomocin la morfologa de las aletas pectorales, la cintura pectoral, el sistema esqueltico cartilaginoso, la poderosa musculatura y un sistema nervioso especializado para este tipo de nado que sincroniza todos los movimientos (Rosenberger & Westneat 1999, Rosenberger 2001). Esta investigacin tiene como objeto de estudio a la mantarraya Manta birostris y est sustentada principalmente en los
principios fsicos de la locomocin del nado, para lo cual se us la biomecnica, mas no en la anatoma funcional del sistema muscular y esqueltico del animal. Los adultos de M. birostris poseen grandes aletas pectorales triangulares; a cada lado de la cabeza tienen prolongaciones, llamadas aletas ceflicas, y poseen una cola sin espina dorsal (Chirichigno 1980); crecen hasta 6.5 m de ancho de disco con un peso de 1300 kg (Figueiredo 1977). M. birostris es cosmopolita, estando distribuida sobre todo en el ocano Atlntico, y en las aguas tropicales de los ocanos Pacfico e ndico (Chirichigno 1980). Este trabajo presenta tres objetivos principales: 1) Estudiar analticamente, usando la fsica, la flotacin o flotabilidad de Manta birostris, con el fin de demostrar un efecto paracadas, y las ventajas que su forma plana ofrece en su locomocin, a diferencia de un pez con forma fusiforme. 2) Comparar cualitativamente la forma de nado de M. birostris con el ciclo de vuelo de la paloma domstica Columba livia, as como los modelos de flujo de ambas especies, y encontrar las leyes fsicas que intervienen en ellos. 3) Describir brevemente el giro dentro de su locomocin. Materiales y mtodos Flotabilidad de Manta birostris.- Para analizar la flotabilidad, se utiliz la informacin publicada de un ejemplar de M. birostris capturado en el ao 2000 en el Ro de La Plata, Uruguay, correspondiente a un macho adulto de 3,15 m de longitud total (LT), 4,2 m de ancho de disco y un peso estimado de 900 kg (Milessi & Oddone 2003). Se determin el rea (dorsal o ventral) aproximada del cuerpo de M. birostris, usando el dibujo a escala del libro de Chirichigno (1980) con los datos de ancho de disco y LT registrados por Milessi y Oddone (2003) del ejemplar adulto de Ro de La Plata. El uso de las medidas y proporciones de este individuo tiene por objetivo cuantificar la demostracin. Sobre un papel milimetrado traslcido se calc el dibujo y se contaron los cuadrados de 1 mm2 que lo cubran. El conteo arroj 789 cuadrados; adems, los 4.2 m de ancho de disco tenan una longitud de 58 mm en el papel. Entonces, por regla de tres simple, 1 mm equivale a 0.072413793 m. As se tiene que 1 mm2 = 5.243757x10-3 m2. Por ltimo, para hallar el rea se multiplic el total de mm2 que cubren a M. birostris por la anterior cifra, es decir, 789 x 5.243757x10-3 = 4.14 m2. Para hallar el peso en el agua se utiliz la Tabla 1 de LinghamSoliar (2000). En ella se presenta una relacin de diferentes animales marinos, con datos de peso en el aire (o fuera del agua) y peso en el agua de mar. Por simple inspeccin se dedujo que el peso en el agua es 1/20 del peso fuera del agua en todos los casos. Por ser una constante, se aplic esta proporcin a M. birostris. La fuerza de flotacin (FB) es una fuerza ascendente, y viene a ser la resultante de todas las presiones (o fuerzas) que el lquido ejerce sobre un objeto total o parcialmente sumergido, siendo por tanto consecuencia del Principio de Arqumedes (Resnick & Halliday 1974). As, para analizar la fuerza de flotacin (FB) de M. birostris, se utiliz este Principio, expresado como la diferencia entre el peso en el aire (W) y el peso en el agua (W), mediante la frmula FB = W W(Giancoli 1997). Se hizo un anlisis comparativo de la flotabilidad, para ello se compar el cuerpo plano de M. birostris con un cuerpo fusiforme del mismo peso. Es evidente que este cuerpo hipottico
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tendr un rea ventral (Af: rea fusiforme) menor que el rea ventral de un cuerpo plano del mismo peso, en particular el de M. birostris. Esta informacin tambin se us en la demostracin del efecto paracadas. Para demostrar el efecto paracadas de M. birostris, es decir, el efecto que produce el dispositivo destinado a amortiguar el movimiento vertical de un cuerpo en la atmsfera, se siguieron los siguientes pasos: 1) Se utiliz la velocidad terminal para flujos turbulentos (v), la cual se obtiene a partir de la frmula de fuerza de resistencia (Knudson 2007), a saber: V= (2FD / ACd) donde es la densidad del fluido, A es el rea de la seccin transversal en la direccin del movimiento, Cd es el coeficiente de arrastre o de resistencia y FD es la fuerza de resistencia o de arrastre (Jou et al. 1994). 2) Sobre un cuerpo grande que desciende en el agua actan la fuerza de flotacin (FB), la de resistencia (FD) y el peso (mg). A medida que el objeto cae y aumenta su velocidad, aumenta tambin la fuerza de resistencia, hasta que la fuerza de flotacin ms la fuerza de resistencia (las dos hacia arriba) se hacen igual al peso del objeto en el fluido, entonces se equilibran las fuerzas. En este punto la aceleracin es cero y la velocidad ya no aumenta. Esta velocidad es llamada terminal o mxima (Giancoli 1997), y tiene una frmula cuando el flujo es laminar y el objeto es pequeo (partculas en agua), y otra cuando hay turbulencia y el cuerpo es grande. A M. birostris le corresponde la segunda frmula. Cuando M. birostris, en el descenso, llega a la velocidad terminal, se tiene: FB + FD = mg (mg: peso en el aire del cuerpo o W). Se despeja: FD = mg FB. Por lo tanto, por el Principio de Arqumedes (Giancoli 1997), es decir, reemplazando FB = W W en la ecuacin de FD, se obtiene que FD es igual al peso del objeto en el agua, es decir, FD = W. Despus se usar en Resultados dos veces la frmula de v: para M. birostris y para la forma fusiforme hipottica, vM y vf respectivamente. Locomocin y comparacin del nado de M. birostris con el vuelo de la paloma domstica Columba livia Comparacin de los modelos de flujo.- Esta investigacin estudi, de manera bsica, el modelo de flujo en ambas especies. Para comparar los modelos de flujo de la locomocin de M. birostris y de la paloma domstica, se utiliz el nmero de Reynolds (Vogel 1996), que considera las diferencias fsicas entre los medios donde se desarrollan las locomociones en estudio: el aire y el agua de mar; pero solo considera la longitud del animal. Est dado por la siguiente frmula: Re = lU / Donde es densidad del medio, U es velocidad del cuerpo, l es la dimensin lineal del cuerpo y es la viscosidad dinmica del medio. Las unidades de estn expresadas en Pa.s; pero teniendo en cuenta que un Pascal = 1 Pa = 1 N/m2 y un Newton es 1 N = 1 kg.m/s2, entonces 1 PA = 1 kg/ms2 y las unidades de se pueden expresar de la siguiente forma: Pa.s = (kg/ms2).s = kg/ ms, lo que coincide con la forma dimensional ML-1T-1 de la viscosidad dinmica (Vogel 1996).
El giro de M. birostris.- Para explicar el giro de M. birostris se utiliz el concepto de torque (o momento de una fuerza) de la fsica. Se consider una fuerza F que acta en el cuerpo de la especie (actuando sobre una aleta) y que puede rotar alrededor del punto O, ubicado alrededor de la aleta opuesta. Si la proyeccin de la fuerza no pasa por O, entonces el efecto total ser la rotacin del cuerpo alrededor de O (Alonso & Finn 1999). Por la relatividad de Galileo, este punto O puede tener una velocidad relativa con respecto al fondo marino y el torque no vara. Comparacin del nado con el vuelo.- Para comparar el nado con el vuelo, se utiliz un video de Manta birostris (Mantas from Yap) de 3.62 minutos producido por Manta Visions Production (www.youtube.com/watch?v=5cP1wVZ9-dg), el cual registra imgenes submarinas captadas en las islas Yap (932N, 13808E) en Micronesia. Se seleccion este video por presentar una variada locomocin de los individuos de la especie (giro, planeo y dos ciclos de nado) y por la calidad de la filmacin. En particular, para los ciclos de vuelo se utiliz el individuo que aparece en primer plano entre los minutos 248 y 254. Para comparar el nado de M. birostris con el ciclo de vuelo de la paloma domstica descrito por Brown (1948), se utiliz el video antes descrito con la modalidad cuadro por cuadro. De los 217 segundos del total del video se identificaron 7 segundos donde se apreciaron con claridad dos ciclos de nado, es decir, un bateo completo de las aletas hasta lograr el empuje y avance. Se aplic la opcin pausa a la imagen en los instantes ms importantes para el estudio, luego se dibuj a la mantaraya esttica. Se utilizaron 13 cuadros para los dos ciclos de nado estudiados. Resultados Flotabilidad de Manta birostris.- Para este anlisis se usaron los valores del espcimen registrado por Milessi y Oddone (2003). a) Anlisis de la flotabilidad: Por el Principio de Arqumedes y su frmula, y con los valores W=900 kgF y W=900/20 = 45 kgF (se aplica 1/20), se obtiene: FB = 900 45 = 855 kgF Por el mtodo del papel milimetrado se determin un rea (A) aproximada (de un solo lado) de 4.14 m2 para la superficie corporal de la especie seleccionada. Para observar el efecto paracadas se hace el siguiente anlisis: al peso en el aire que M. birostris posee por unidad de rea se le resta la fuerza de flotacin por unidad de rea. Es decir: (900/4.14)(855/4.14) = 10.87 kgF/m2 o lo que es lo mismo W/A = 45/4.14 = 10.87. El valor de la fuerza por unidad de rea de 10.87 kgF/m2 tiene la misma direccin y sentido de la gravedad. Ahora se compara el cuerpo plano de M. birostris con uno fusiforme del mismo peso. Es evidente que este cuerpo hipottico tendr un rea ventral (Af : rea fusiforme) menor que el rea ventral de un cuerpo plano del mismo peso, en particular el de M. birostris, es decir, Af < 4.14 m2. Para el cuerpo fusiforme se calcula anlogamente el peso por unidad de rea, se obtiene: 45/Af kgF/m2. Finalmente, comparando ambos valores, 10.87 y 45/Af , y teniendo en cuenta la desigualdad Af < 4.14, obtenemos: 10.87 < 45/Af .
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Figura 1. Movimiento de giro, explicado por el concepto de torque. F: fuerza resultante (empuje) y sus componentes.
b) Demostracin del efecto paracadas: En la frmula de la velocidad terminal (ver Metodologa), la densidad del fluido es igual para ambos casos; adems, el cociente FD/A (o W/A, se demostr en la Metodologa que FD = W) de la frmula es 10.87 y 45/Af , para la mantarraya y para la forma fusiforme, respectivamente. Por otro lado, como la superficie ventral de un cuerpo fusiforme es ms o menos curva hacia el dorso, entonces su Cd es menor que el Cd de M. birostris. En la Tabla 5.1 de coeficientes de arrastres de Streeter y Wylie (1981) se confirma que los valores son menores en superficies curvas que en planas orientadas en direccin del movimiento (Vogel 1996). Por simple inspeccin de la frmula se observa que el valor de v slo vara en funcin de FD/A y de Cd. Entonces, a mayor valor de FD/A (45/Af > 10.87) y a menor valor de Cd, se demuestra con claridad que: vf es mayor que vM Locomocin y comparacin del nado de M. birostris con el vuelo de la paloma domstica Columba livia. Comparacin de los modelos de flujo.- Para Columba livia tenemos los siguientes valores: = 1.205 kg/m3, densidad del aire a 20 C y 1 atm de presin (Vogel 1996); l = 0.343 m, longitud promedio del ave obtenida del rango 33 35.5 cm (Schulenberg et al. 2010); U = 6 a 20 m/s, valor mnimo y mximo de C. livia en el tnel de viento (Tobalske & Dial 1996); = 18.08x10-6 Pa.s, viscosidad dinmica del aire a 20 C y 1 atm de presin (Vogel 1996). Con U mnima: Re = (1.205 kg/m3)(0.343 m)(6 m/s)/18.08x10-6 kg/ms Re = 137162 Con U mxima: Re = (1.205 kg/m3)(0,343 m)(20 m/s)/18.08x10-6 kg/ms Re = 457207 Para Manta birostris tenemos los siguientes valores: = 1.024x103 kg/m3, densidad del agua de mar a 20 C y 1 atm de
presin (Vogel 1996); l = 3.15 m, longitud del individuo (Milessi & Oddone 2003); U = 5.6 m/s (20 km/h), hasta esta velocidad de especimenes de M. birostris se consider para el estudio por satlite del Argos System, los individuos con mayores velocidades fueron excluidos (Graham et al. 2012); = 1.072x10-3 kg/ms, viscosidad dinmica del agua de mar a 20 C y 1 atm de presin (Vogel 1996). Re = (1.024x103 kg/m3)(3.15 m)(5.6 m/s)/1.072x10-3 kg/ms Re = 16850149 El giro de M. birostris.- Se observ a los 34 del video (Fig. 1) a un individuo de M. birostris que semigira hacia su izquierda. Luego de estar en avance y con movimiento en ambas aletas, M. birostris mantiene extendida y sin bateo la aleta pectoral izquierda. Sin embargo, bate ligeramente la aleta pectoral derecha y empieza a girar hacia la izquierda. Comparacin del nado con el vuelo.- El primer ciclo de nado se inicia en 248 (Fig. 2.1), se observ al individuo de M. birostris en un breve planeo. Este es el inicio de un ciclo de nado. Luego hace un ligero aleteo hacia arriba en 249 (Fig. 2.2), con el que toma impulso y bate suavemente las aletas hacia abajo y hacia atrs (Fig. 2.3), semejante a un ligero remado con el que se impulsa hacia adelante (Fig. 2.4). El segundo ciclo de nado empieza a los 250 (Fig. 2.4). Viene del final del ciclo anterior con un movimiento de la aleta hacia abajo, y luego un movimiento ondulante hacia atrs levantando las aletas y ofreciendo la parte ventral hacia adelante y la parte distal hacia abajo (Fig. 2.5 y 2.6). Luego, en 252 la parte distal de la aleta sube y la ventral se muestra lateralmente. Aqu la aleta es llevada hacia adelante extendindose hacia arriba (Fig. 2.7 y 2.8). Luego, en 253 levanta completamente las aletas (Fig. 2.9). Ya extendidas las aletas en vertical, las empieza a llevar hacia adelante (Fig. 2.10), para luego bajarlas con un rpido y contundente bateo hacia atrs en 254 (Fig. 2.11 y 2.12), pero con la parte distal de las aletas flexionadas hacia arriba. Finaliza el ciclo con las aletas pectorales totalmente extendidas bajo la horizontal (Fig. 2.13).
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Figura 2. Ciclos de vuelo. Primer ciclo: de 1 a 4, Segundo ciclo: de 5 a 13, FR: fuerza de reaccin, FA: fuerza de accin, a: avance (desplazamiento).
Discusin Flotabilidad de Manta birostris.- A diferencia de los animales marinos con el agua, en las aves en vuelo, el aire ofrece muy poco soporte de flotacin o flotabilidad por su baja densidad; por consiguiente, los animales voladores deben vencer la gravedad utilizando principios de sustentacin aerodinmica (Eckert et al. 1994). A diferencia de Roberts (1969), que estudi la flotabilidad y el peso en el agua y fuera de ella de especmenes de rayas elctricas (Torpedo nobiliana) en relacin a sus rganos internos
y a la densidad de sus tejidos, este estudio utiliz el Principio de Arqumedes y la velocidad terminal para analizar la fuerza de flotacin en M. birostris. Del resultado 10.87 < 45/Af se evidencia que M. birostris, que representa el valor de la izquierda de la desigualdad, reduce el peso en el agua por unidad de rea con la forma plana en vez de una fusiforme (el valor de la derecha), es decir, el agua soporta menos peso por unidad de rea, entonces le ofrece ms resistencia al animal para hundirse.
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La relacin obtenida vf es mayor que vM, significa que la velocidad de hundimiento del animal con forma fusiforme es mayor que la velocidad de hundimiento de M. birostris, ambos con el mismo peso. Entonces, debido a la forma plana y de gran rea del cuerpo, su velocidad de hundimiento disminuye, es decir, se produce un efecto paracadas, lo que favorece al planeo dentro del agua. Este efecto amortigua el movimiento vertical de un objeto en un fluido, tal como ocurre con el dispositivo que se utiliza en la atmsfera. Una consecuencia del efecto paracadas se dara en las corrientes marinas ascendentes: Manta birostris utilizara la forma plana de su cuerpo para elevarse y dejarse llevar con mayor eficiencia que los peces de formas no planas. Locomocin y comparacin del nado de M. birostris con el vuelo de la paloma domstica Columba livia Manta birostris tiene numerosos movimientos que le permiten avanzar, ascender, planear, detenerse, virar (o girar), quedarse suspendido, entre otros. Un aspecto previo a tomar en cuenta en la locomocin de M. birostris, es la resistencia al avance, que est en funcin de la altura del cuerpo, que es baja en proporcin al ancho del disco; adems, las aletas presentan una altura muy reducida. Ambas estructuras tienen una morfologa plana hidrodinmica. Esta poca rea de la seccin transversal del cuerpo en la direccin del movimiento produce una baja resistencia al avance. Esta particularidad de su morfologa plana, a diferencia de la forma fusiforme de la mayora de los peces, incide en las caractersticas de su modelo de flujo. Comparacin de los modelos de flujo.- A un bajo Re (Re<1) las fuerzas viscosas son ms importantes que las inerciales, donde el cuerpo se mover prcticamente sin inercia (Jou et al. 1994) y, adems, se produce un modelo de flujo puramente laminar al pasar el lquido por su superficie (Eckert et al. 1994). Este es el caso de una larva de insecto de 0.3 mm de longitud a 1 mm/s de velocidad, cuyo Re = 0.3 (Vogel 1996). Luego, en un rango intermedio no bien definido, tanto la viscosidad como la inercia son importantes, como sucede con el vuelo de un pequeo insecto (Re = 30; Vogel 1996); pero a Re mayores que 40, empieza a aparecer turbulencia en la estela del objeto en movimiento (Eckert et al. 1994). En general, en movimientos a altos Re, la inercia es el factor importante (Jou et al. 1994) y si Re es mayor que 1000000 el fluido en contacto con el objeto se hace turbulento (Eckert et al. 1994). En este ltimo caso se encuentra una gran liblula a 7 m/s (Re = 30000), un pato volando a 20 m/s (Re = 300000) y una gran ballena a 10 m/s (Re = 300000000; Vogel 1996). Por lo tanto, Columba livia con un Re de 137162 a 457207 y Manta birostris con Re de 16850149 se ubican en este ltimo grupo, siendo la mantarraya la que produce mayor turbulencia; adems, su inercia es ms importante para su desplazamiento que en la paloma domstica, ya que con esta inercia puede vencer la mayor densidad y viscosidad de su medio acutico. Los efectos de la inercia, debidos al momentum del animal en movimiento, son directamente proporcionales a la masa, que aumenta segn el cubo de la longitud (Eckert et al. 1994). En el valor de Re y las caractersticas del modelo de flujo, la diferencia de densidades entre el aire y el agua de mar es significativa en el modelo resultante; esto se evidencia si reemplazamos el valor de la densidad del aire en la formula de M. birostris, as obtenemos para esta un valor de Re = 19829, lo que significara un modelo de flujo menos turbulento y, por lo tanto, la mantarraya desarrollara una mayor velocidad.
El giro de M. birostris.- A los 34 del video, el individuo no batea la aleta izquierda, entonces no hay empuje, y por la inercia el lado izquierdo queda con velocidad constante y con tendencia a disminuir por la resistencia del agua; mientras tanto, bate ligeramente la aleta pectoral derecha, lo que genera un avance por ese lado. Por lo tanto, se produce un diferencial de velocidades entre ambos, por lo que el lado de mayor velocidad gira alrededor del de menor velocidad, lo que le permite a M. birostris girar hacia la izquierda. En la aleta izquierda o cerca de ella (fuera del cuerpo) se ubica el eje de rotacin, la aleta derecha en avance recibe la fuerza del empuje (Fig. 1), y el brazo de torque es la distancia entre el eje de rotacin y aquella fuerza. Si la proyeccin o lnea de accin de la fuerza no fuera perpendicular al brazo de torque, se tomar la fuerza componente que s lo es (Alonso & Finn 1999). Comparacin del nado con el vuelo.- El primer ciclo de nado, que se inicia en 248 (Fig. 2.1) y termina en 249 (Fig. 2.3), nos muestra a un individuo de M. birostris en una locomocin de breve aleteo. Las especies con un estilo de vida pelgico, como M. birostris, nadan aleteando (flapping) sus aletas pectorales de arriba hacia abajo en un modo conocido como el nado o propulsin oscilatoria (Wilga & Lauder 2004); sin embargo, la mayora de los batoideos tienen un nado ondulatorio, sobre todo las especies bentnicas y ms sedentarias (Rosenberger 2001). Daniel (1988) us la hidrodinmica para investigar cmo funcionan las aletas pectorales en Raja eglanteria durante la locomocin ondulatoria; este autor determin que la especie utiliza los efectos de inestabilidad del fluido durante la locomocin para producir el empuje, y que la forma de la aleta pectoral minimiza los costos energticos del transporte. A su vez, Rosenberger y Westneat (1999) estudiaron los patrones cinemticos de la aleta y los patrones motores de los msculos de la aleta pectoral de Taeniura lymma; determinaron cmo estos patrones cambian con la velocidad del nado y correlacionaron la funcin muscular con la cinemtica y la morfologa pectoral. Las otras especies, dentro de las cuales hay cuatro del gnero Dasyatis, se ubican a lo largo del continuum de Breder (1926) ondulatorio/oscilatorio. En el segundo ciclo del nado, el movimiento de la figura 2.4 a la 2.8 es equivalente al backward flick o golpe hacia atrs y hacia arriba del ciclo de vuelo de la paloma domstica, descrito por Brown (1948). En esta fase, el ala del ave es flexionada y movida hacia atrs y hacia adelante, al mismo tiempo es extendida. Otros investigadores ya haban advertido la similitud con el vuelo, como Rosenberger (2001), quien compar la dicotoma entre la locomocin ondulatoria y la oscilatoria entre las aletas pectorales de ocho especies de batoideos que difieren en nado, posicin filogentica y estilo de vida; hall que Rhinoptera bonasus (de morfologa similar a Manta birostris) es la nica que presenta un nado oscilatorio, es decir, mueven las aletas pectorales hacia arriba y hacia abajo similar al vuelo de las aves. En el caso de las aves, a diferencia del nado de la mantarraya, el vuelo se produce, principalmente, por la fuerza de sustentacin (Eckert et al. 1994). Los animales voladores, como las aves, murcilagos o insectos, cortan el aire con las alas y este fluye a su alrededor y crea una fuerza de sustentacin que empuja las alas hacia arriba y todo lo que est anexado (Eckert et al. 1994), es decir, produce el ascenso del animal. Este ascenso es directamente proporcional a la circulacin y densidad del aire, a la envergadura de las alas y a la velocidad del ave (Tobalske 2007). Spearman y Hardy (1985)
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afirman que, a nivel microscpico, cuando el ala se mueve a travs del aire, el borde sobresaliente desplaza molculas de aire por arriba y por debajo de la misma; y como la parte de arriba presenta una superficie curva y gruesa, sta desva y acelera las molculas, lo que deja un rea con menor presin con respecto a la que hay debajo del ala; esto crea un efecto de succin hacia arriba, que sumado a la mayor presin por debajo, producir la fuerza de sustentacin. La sustentacin se complementa con el ciclo de vuelo que genera un empuje horizontal, produciendo el avance. En cambio, la fuerza de sustentacin sobre las aletas pectorales de Manta birostris debe ser muy reducida, por carecer del tpico perfil aerodinmico de un ala de ave en seccin transversal. Por el alto grado de simetra que presenta la aleta, dorsal y ventralmente, la velocidad del flujo debe ser similar en ambas superficies, por lo tanto las presiones generadas tambin. Para M. birostris, esta fuerza es despreciable. El movimiento en 253 (Fig. 2.9), donde levanta completamente las aletas, es similar a la fase extension o ala extendida totalmente (Brown 1948), que es equivalente a la llamada upstroke (Videler 2005). Aqu, el ala de la paloma est completamente extendida hacia arriba. Hasta este punto del ciclo, las aletas han ofrecido brevemente la cara ventral hacia la direccin del movimiento (Fig. 2.5 y 2.6), lo que produce un aumento de la resistencia (drag) del agua; pero gracias a ese movimiento logra tomar impulso para la fase siguiente, que genera el empuje (thrust). Esto da mayor velocidad al animal. En general, en los peces la produccin de empuje y las estructuras que generan resistencia son inseparables (Vogel 1996). Sobre este aspecto se compar el nado ondulatorio y el oscilatorio: el modo de nado ondulatorio es mecnicamente ms eficiente a bajas velocidades y reduce la resistencia de las aletas y el cuerpo, adems ofrece una alta maniobrabilidad y control (Blake 1983a,b, Lighthill & Blake 1990, Walker & Westneat 2000, Rosenberger 2001); en contraste, el mecanismo oscilatorio, como el de M. birostris, es eficiente para velocidades de crucero por el alto empuje generado, pero produce una menor maniobrabilidad (Blake 1983b, Cheng & Zhaung 1991, Rosenberger 2001). En los animales voladores, la capacidad de maniobrabilidad y de estabilidad en el aire es de gran importancia; un ave con una alta maniobrabilidad puede responder con mayor rapidez a las perturbaciones y, por lo tanto, puede mantener su ruta durante el vuelo en condiciones turbulentas (Tobalske 2007). Pero alas morfolgicamente especializadas para una gran maniobrabilidad pueden comprometer otros rendimientos, como la capacidad de aceleracin en el despegue (Tobalske 2007). En general, los batoideos pueden usar una combinacin de resistencia (drag), fuerza de ascenso (lift) y efectos de inestabilidad para producir el empuje (thrust) durante la locomocin (Rosenberger & Westneat 1999). La mayora de las rayas usan el par de aletas pectorales como principal propulsor en el sistema basado en la fuerza de ascenso, sistema eficiente para altas velocidades (Vogel 1996). Webb (1979) indic que en un sistema basado en el ascenso, el pez necesita una gran musculatura para obtener buenas aceleraciones. Las aletas en vertical (Fig. 2.10) y el rpido y contundente bateo hacia atrs en 254 (Fig. 2.11 y 2.12), genera una fuerza en diagonal hacia atrs que produce una fuerza de reaccin en sentido opuesto pero en la misma direccin. Esta fuerza tiene dos componentes, una horizontal y otra vertical (Fig. 2.11). De esta
composicin de fuerzas, la horizontal hacia adelante genera un considerable empuje, lo que da un sostenido avance al animal; y la vertical hacia arriba produce una fuerza de ascenso (lift) que mantiene el nivel del animal con respecto al fondo, es decir, no permite el hundimiento; aqu tambin participa el efecto paracadas. As, la velocidad se incrementa hasta superar los 20 km/h (Graham et al. 2012). Esta fase (de Fig. 2.11 a 2.13) corresponde al downstroke o golpe (remada) hacia abajo (Brown 1948): empieza con las alas del ave en vertical y terminan bajo la horizontal totalmente extendidas, como la figura 2.13 de M. birostris. En esta fase se presenta una diferencia, el ave desarrolla un movimiento hacia abajo pero hacia adelante, en cambio M. birostris lo realiza hacia abajo y ligeramente hacia atrs. ste es el final del segundo ciclo. Este ciclo de la mantarraya no tiene las fases forward swing o giro hacia adelante y changeover point o punto de cambio de posicin (Brown 1948) del ciclo de vuelo de la paloma. El primero precede al downstroke, incluye la retraccin y rotacin de las manos y termina con la inclinacin del ala hacia adelante con las superficies internas paralelas (Brown 1948); en cambio, las aletas bajan hacia atrs y no pueden plegarse como el ala por carecer de una estructura sea de tres segmentos bsicos: hmero, ulna y radio, y metacarpos (mano), que hacen del ala una estructura ms cintica que la aleta. El changeover point es el pequeo intervalo entre las fases forward swing y backward flick, ms que una fase es un punto de cambio. Despus de un ciclo de nado, los individuos de M. birostris pueden iniciar un breve planeo con el avance conseguido. Gracias a la morfologa hidrodinmica en la direccin del avance y a la gran superficie corporal plana, M. birostris logra un equilibrado y sostenido planeo. El efecto paracadas tambin est involucrado en este movimiento. Rosenberger (2001) observ que Rhinoptera bonasus y Gymnura micrura se deslizaban o planeaban a travs del agua, manteniendo las aletas pectorales ligeramente dobladas hacia arriba y sin movimiento. Esta posicin de las aletas y la forma del disco de la mantarraya, segn la autora, ofrecen un ascenso al cuerpo, lo que permite que el animal mantenga su nivel y el movimiento hacia adelante. Anlogamente, muchas aves, de manera regular, usan la fase de no aleteo (planeo con las alas extendidas) para modular la potencia durante un vuelo intermitente (Tobalske 2007). Concluyendo, el segundo ciclo tiene tres de las cuatro fases principales del vuelo de la paloma descrito por Brown (1948). Las conclusiones de este trabajo terico deben ser demostradas experimentalmente con especmenes vivos y/o muertos, utilizando tecnologa adecuada para hacer mediciones, como electrodos, la electromiografa, tanques con cmaras de video de alta velocidad en 3D, etc. El principal aporte de este estudio es mostrar resultados significativos y verificables sobre los organismos, fruto del trabajo interdisciplinario entre la fsica y la biologa; en particular, la comprensin de la flotabilidad de M. birostris y la similitud del nado con el vuelo de la paloma domstica Columba livia. Estos patrones similares de movimientos nos generan otras preguntas sobre el origen ancestral de ambas locomociones. Finalmente, la conducta de un pez o un ave estn, en parte, determinadas por sus capacidades y limitaciones fsicas; de la comprensin integral de estas podremos entender mejor el comportamiento animal.
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Agradecimientos A Rafael Varas por la traduccin del resumen al ingls. Agradecimientos a Carlos Pea, Leonardo Romero, Jos Roque, Marcelo Stucchi, Walter Cabrera y Diego Montalti, por la revisin del manuscrito y/o por la bibliografa proporcionada. Tambin al fsico Luciano Stucchi, por el visto bueno a los aspectos fsicos del trabajo. Literatura citada
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CURiCTA SCORPiO STL primer registro para Costa Rica

ISSN-L 1561-0837
NOTA CIENTFICA Ampliacin del rango geogrfico del Escorpin de Agua Curicta scorpio Stl, (Hemiptera: Nepidae) y primer registro para Costa Rica
Geographic range extension of the Waterscorpion Curicta scorpio Stl, (Hemiptera: Nepidae) and first record for Costa Rica
Federico Herrera
Escuela de Biologa, Oficina de Posgrado en Biologa, Universidad de Costa Rica, 11501-2060 San Pedro, Montes de Oca, San Jos Costa Rica. Email: federico.herrera@ucr.ac.cr
Resumen Se registra por primera vez para Costa Rica la presencia de Curicta scorpio Stl. Este registro confirma la presencia del gnero en Costa Rica y la ampliacin de su distribucin sur. Palabras clave: nuevo registro; biodiversidad; Centro Amrica. Abstract Curicta scorpio Stl.c is registered for first time to Costa Rica. With this record this genus is confirmed in Costa Rica and its southern range distribution in turn is expanded. Keywords: first record; biodiversity; Central America.
Citacin: Herrera F. 2013. Ampliacin del rango geogrfico del Escorpin de Agua Curicta scorpio Stl, (Hemiptera: Nepidae) y primer registro para Costa Rica. Rev. peru. biol. 20(2): 197 - 198 (Diciembre 2013)
La Familia Nepidae est representada en el continente americano por los gneros Telmatotrephes Stl, Ranatra Fabricius, Curicta Stl y Nepa Linnaeus (tys & Jansson 1988). Para la regin centroamericana slo se han registrado dos gneros, Curicta y Ranatra (Champion 1901). Springer (1998, 2004) reporta para Costa Rica el gnero Curicta pero sin especificar la especie; mientras que Ranatra cuenta con una especie reportada para el pas, Ranatra pittieri Montandon (Montandon 1910, Herrera 2013). Por otra parte, el gnero Curicta posee hasta el momento dos especies en Centroamrica, Curicta scorpio Stl que se encuentra distribuida desde la parte sur de los estados de Mississippi (Lago 2000) Luisiana y Texas, en Estados Unidos hasta Nicaragua y Curicta carinata Kuitert que se distribuye en Argentina, Paraguay, Bolivia, Per, Ecuador, Colombia, Trinidad y Panam (Keffer 1997, Mazzucconi et al. 2009b). Se registra por primera vez para Costa Rica la presencia de C. scorpio. Para su identificacin se utiliz la clave provista por Keffer (1997). Los tres especmenes hembra examinados (montados en seco) se encontraban depositados dentro de la coleccin entomolgica de enseanza, de la Escuela de Biologa de la Universidad de Costa Rica, Sede Rodrigo Facio; este material seco se traslad a la Coleccin de Entomologa del Museo de Zoologa de la Universidad de Costa Rica (MZUCR). Mientras que el espcimen macho (conservado en etanol 70%) se encuentra depositado en la Coleccin de Entomologa Acutica del MZUCR. Material examinado: Provincia de Alajuela: San Ramn, 1000 m.s.n.m. 18-III2008. Col. E. Villegas (). Provincia de Guanacaste: Caas, 600 m.s.n.m. 29-II2008. Col. P. Gutirrez (); Bagaces, Palo Verde, en canales de arrozales, 50 m.s.n.m. 06-XI-1999. Col. M. Springer (); Parque Nacional Palo Verde. 20 m. 13-III-2003. Col. C. Snchez ().
Las especies de este gnero se encuentran habitualmente en ambientes lnticos poco profundos o pequeos arroyos, vegetados, con fondo de barro y entre la hojarasca del fondo. Sus hembras depositan los huevos en las orillas y los cubren de barro (Menke 1979, Keffer 1997, Mazzucconi et al. 2009a). Este gnero realiza vuelos nocturnos
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Herrera
de dispersin (Sites & Polhemus 1994). Wiley (1924) y Keffer y colaboradores (1994) describieron los cinco estadios ninfales de C. scorpio. El proceso de cpula para esta misma especie fue descrita por Wiley (1922) y Keffer & McPherson (1993). Curicta scorpio es la nica especie del gnero hasta el momento con distribucin en Norte- y Centroamrica (Keffer 1997). Con estos cuatro individuos se confirma la presencia de la primera especie de ste gnero en Costa Rica; lo que a su vez conlleva a una ampliacin hacia el sur del rango de distribucin de la misma. Agradecimientos Un agradecimiento a IdeaWild.org por su apoyo con equipo de laboratorio; a Paul Hanson y a Monika Springer por permitir el acceso a la coleccin de enseanza y a la Coleccin de Entomologa Acutica del MZUCR respectivamente; a Robert W. Sites y Jean-Michel Maes por facilitar literatura. Esta publicacin es una contribucin al MZUCR. Literatura citada
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Rev. peru. biol. 20(2): 000 - 000 (Noviembre 2013)
Electro bioremediacin de fondos de tanques petroleros

ISSN-L 1561-0837
NOTA CIENTFICA Electro bioremediacin de fondos de tanques petroleros

Electro bioremedation of oil bottoms tank
Graciela N. Pucci, Adrin J. Acua y Oscar H. Pucci
Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco. Centro de Estudios e Investigacin en Microbiologa Aplicada (CEIMA). Ruta Provincial N 1, km 4, Comodoro Rivadavia (CP 9000). Chubut, Argentina. Email Graciela Pucci: granapu@yahoo.es Email Adrin Acua: ajcuna@unpata.edu.ar Email Oscar Pucci: ceima@unpata.edu.ar
Resumen
El objetivo de este estudio fue utilizar una diferencia de voltaje para aumentar la biodisponibilidad de los hidrocarburos presentes en los sedimentos del fondo de tanques petroleros. El experimento se realiz en una cuba de vidrio con tres compartimento comunicadas por puentes salinos de buffer fosfato que permitieron la diferencia de voltaje y mantener el pH del suelo en valores ptimos para la vida bacteriana. Despus de 4 das se aumento en un 18.8% los hidrocarburos biodisponibles en la zona cercana al nodo y 5.5% en la zona cercana al ctodo. Palabras claves: tanque de petroleo; electrobioremediacin; biodisponibilidad; biorremediacion
Abstract
Citacin: Pucci G.N., A.J. Acua & O.H. Pucci. 2013. Electro bioremediacin de fondos de tanques petroleros. Rev. peru. biol. 20(2): 199 - 201 (Diciembre 2013)
The aim of this study was to use a voltage difference to increase the bioavailability of hydrocarbons presents in the bottom sediments of oil tank. This experiment was carried out in a glass cuba with three compartment communicated by phosphate-buffered saline bridges that allowed the voltage difference and maintained the soil pH at optimum values for bacterial life. After several 4 days the bioavailability of hydrocarbon was increased by 18.8% in the area near the anode and 5.5% in the area near the cathode. Keywords : Oil tank;electrobioremedation; hydrocarbon bioavailability; bioremediation
Introduccin La industria petrolera utiliza tanques de almacenamiento en varias etapas de su industrializacin generando un residuo denominado fondos de tanques (bottom tank). El fondo de tanque es el producto acumulado en el sedimento de los tanques de almacenamiento de petrleo. Este residuo es tratado con tensoactivos a temperaturas entre 60 y 80 C para recuperar el petrleo. Como resultado de este tratamiento se obtiene un residuo slido formado por fracciones de arena, arcilla, algunos metales pesados como hierro y nquel (Bojes & Pope 2007), mezclado con hidrocarburo. El hidrocarburo se encuentra fuertemente adsorbido a las partculas de suelo que limita su biodisponibilidad. En otras partes del mundo los fondos de tanques se mezclan con suelos para su tratamiento biolgico (Riser-Roberts 1998, Speight 2001), ya que la composicin de los mismos es compatible con los procesos de biodegradacin (Gallego et al. 2007). El objetivo de este trabajo fue completar el tratamiento de fondos de tanques en una etapa posterior al lavado para reducir las cantidades de hidrocarburo utilizando la tcnica de electrobiorremadiacin. Materiales y mtodos Se trabaj con fondos de tanques de la industria petrolera que haban sido tratados previamente con lavado, que redujo el contenido de hidrocarburo. Tabla 1.
Experiencia de electrobiorremediacin.- El sistema experimental se ensambl segn trabajos previos (Acua et al. 2010, Acua et al. 2009, Acua et al. 2012). Las dimensiones de la celda de vidrio utilizada fueron de 58 cm de largo, 15 cm de alto,
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Pucci et al.
Tabla 1. Caractersticas fsico qumicas iniciales del fondo de tanque utilizados en el experimento de electro biorremediacin. Cap. Ret. Agua: capacidad de retencin del agua, % mat. Orgnica: porcentaje de materia orgnica. HC: hidrocarburos totales de petrleo. Parmetro pH Cl - (ppm) Ca + +(ppm) Mg + + (ppm) CO3 -- (ppm) NO2 - (ppm) NO3 - (ppm) NH4 + (ppm) PO4 --- (ppm) SO4 --(ppm) Fe + + (ppm) Valor 7.96 1210.8 384.4 155.1 0 0.1 0.6 5.9 <0.1 <1.5 2099 0.78 Parmetro Cap. Ret. agua Densidad real Densidad aparente porosidad % mat. orgnica %mat. inorgnica Conductividad uS/cm Humedad % % HC soxhlet % ARENA %LIMO %ARCILLA Valor 39% 1.76g/cm3 0.9 g/cm3 0.48 34 66 1558 7.04 5.05 72.4 4.7 22.9 Figura 1. Esquema de la Cuba electroqumica utilizada en el experimento de biorremediacin de fondos de tanque.
Ctodo ()
nodo (+)
Puente salino
15cm
SUELO SUELO
38cm 58cm Buf f er f osfato Buf f er f osfato pH 5.8 pH 7.8 Localizacin de la toma de muestras
HCO3 - (ppm)
15 cm de ancho. El interior de esta estuvo dividido en tres compartimientos, dos de ellos de 10 cm de largo, 15 cm de alto y 15 cm de ancho, ubicados uno a cada extremo de las cubas donde se colocaron las soluciones buffer. El tercer compartimiento fue el central, de 38 cm de largo, 15 cm de alto y 15 cm de ancho, donde se coloc el suelo para las experiencias de electrobioremediacin (EBR) (Fig. 1). Se utiliz una solucin de buffer 1 M (K2HPO4/KH2PO4) ajustado a pH 7.8 para el compartimiento del nodo y a pH 5.8 para el del ctodo. En estas soluciones fueron sumergidos los electrodos de platino y el paso de corriente a travs del suelo se logr por la unin de ste, con las soluciones buffer, utilizando puentes salinos de fosfato de amonio. La experiencia se prolong por 9 das, con un voltaje aplicado al suelo fue de 0.5 Vcm-1 con una humedad entre 12 15%. Al inicio y al final de la experiencia se realizaron anlisis de hidrocarburos libres y recuentos de bacterias. Anlisis del recuento de microorganismo y mineralizacin de hidrocarburos.- Los recuentos de bacterias hetertrofas y de degradadoras de petrleo se realizaron por la tcnica de diseminacin utilizando diluciones seriadas en los medios R2A (Reasoner & Geldreich 1985) para bacterias hetertrofas (extracto de levadura 0.5 g; peptona proteasa 0.5 g; casamino cido 0.5 g; glucosa 0.5 g; almidn 0.5 g; piruvato de sodio 0.3 g; K2HPO4 0.3 g; MgSO4.7H2O 0,05 g; agar 15 g; agua destilada 1000 mL); TSA para bacterias totales (triptena 15 g, peptona de soya 5 g, NaCl 5 g, K2HPO4 2,5 g glucosa 5 g, agar 15 g, agua destilada 1000 mL, pH 7.2) y MM-PGO (Pucci & Pucci 2003) para bacterias degradadoras de hidrocarburos [NaCl 5 g; K2PO4H 0.5 g; NH4PO4H2 0.5 g; (NH4)2SO4 1 g; MgSO4 0.2 g; KNO3 3 g; FeSO4 0.05 g; SL10B (HCl(25 %) 7.7 mL; FeSO4.7H2O 1.5 g; ZnCl2 0.07 g; MnCl2.4H2O 0.1 g; H3BO3 0.3 g; CoCl2.6H2O 0.19 g; CuCl2.2 H2O 0.002 g; NiCl2.6 H2O 0.024 g; Na2MoO4.2H2O 0.036 g; agar 15 g; agua destilada 1000 mL)] adicionado con 30 L de una mezcla
de petrleo de la cuenca del Golfo San Jorge y gasoil 1:1. La incubacin de las placas se realiz en oscuridad durante 20 das a 28 C. La mineralizacin se determin por una modificacin de los mtodos de hlinger (1996) y de Lear et al. (2004), que cuantifican el dixido de carbono producido por fijacin del mismo en NaOH, el cual se titula con HCl. Anlisis de hidrocarburos por Soxhlet y de hidrocarburos libres.- Los hidrocarburos totales del petrleo (TPH) se midieron por gravimetra (EPA 1664) utilizando extraccin en soxhlet mediante hexano como solvente durante 24h. Los hidrocarburos libres se determinaron empleando hexano como solvente y agitndose en un shaker a 80 rpm durante 4h. Resultados y discusin La utilizacin de los puentes salinos mantiene el pH del suelo sin modificaciones (Fig. 2), permitiendo un normal desempeo bacteriano (Acua et al. 2010). Los valores de los recuentos de bacterias totales en los medios R2A y en TSA permanecen sin modificaciones, los recuentos de bacterias degradadoras de petrleo (MM-PGO) no presentan modificaciones significativas (p > 0.05) como se puede observar en la Figura 3. La temperatura solo vari en 1 C a lo largo de toda la cuba, esto coincide con Lear et al. (2004). Se detect modificaciones en la mineralizacin, en concordancia con Lear et al. (2004), se detecto una mayor actividad en la zona del nodo y que este valor disminuy al aumentar la distancia. El valor final de la zona cercana al nodo es similar al del suelo antes de comenzar con el experimento. La ventaja de esta tcnica es que aumenta la biodisponibilidad de los hidrocarburos que pueden ser utilizados por los microorganismos. Los hidrocarburos adsorbidos por las arcillas se extraen por mtodos drsticos como soxhlet que determinan el valor total, pero no es el porcentaje de hidrocarburo que est disponible para las bacterias (Reid et al. 2000), por ello se utiliza algo ms simple que es la extraccin solo con hexano y agitacin
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Electro bioremediacin de fondos de tanques petroleros

10 8 pH y Hidrocarburos libres 6 4 2 0 Inicio 3 15 26 0.45 0.4 0.35 mg CO2 /g de suelo seco 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0
1.00E+09 1.00E+08 1.00E+07 1.00E+06

Log UFC/g
1.00E+05 1.00E+04 1.00E+03 1.00E+02 1.00E+01 1.00E+00 inicio 3 15 26
Distanica del nodo (cm) pH HD libre dioxido de carbono
Distancia del nodo MBM-PGO TSA R2A
Figura 2. Respiracin intrnseca del suelo inicial al final de la experiencia, del valor de pH y del hidrocarburo libre extrado con hexano.
Figura 3. Recuento de las bacterias al inicio y al final del experimento, los datos del final son de la distancia en que se tom la muestra utilizando como referencia el nodo. Gallego J.L., M.J. Garca-Martnez, J.F. Llamas, et al. 2007. Biodegradation of oil tank bottom sludge using microbial consortia. Biodegradation 18:269281. DOI: 10.1007/s10532-006-9061-y Harbottle M.J, G. Lear, G.C. Sills, et al. 2009. Enhanced biodegradation of pentachlorophenol in unsaturated soil using reversed field electrokinetics. Journal of Environmental Management 90: 18931900. DOI: 10.1016/j.jenvman.2008.12.012 Lear G., M.J. Harbottle,C.J. van der Gast, et al. 2004. The effect of electrokinetics on soil microbial communities. Soil Biology & Biochemistry 36: 17511760. DOI: 10.1016/j.soilbio.2004.04.032 Li T., S. Guo, B. Wu, et al. 2010. Effect of electric intensity on the microbial degradation of petroleum pollutants in soil. Journal of Environmental Sciences 22: 13811386. DOI: 10.1016/S1001-0742(09)60265-5 hlinger R. 1996. Soil respiration by titration. In: Schinner, F., hlinger, R., Kandeler, E., Margesin, R. (Eds.), Methods in Soil Biology. Springer, London, pp. 9598. Pucci G.N. & O.P. Pucci OH. 2003. Biodegradabilidad de componentes de mezclas naturales de hidrocarburo previamente sometidas a Landfarming. Revista Argentina de Microbiologa 35:62-68. Reasoner D.J. & E.E. Geldreich. 1985. A New Medium for the Enumeration and Subculture of Bacteria from Potable Water. Applied and Environmental Microbiology 49:1-7. Reid B.J., J.D. Stokes, K.C Jones, et al. 2000. Nonexhaustive Cyclodextrin-Based Extraction Technique for the Evaluation of PAH Bioavailability. Environ. Sci. Technol. 34: 31743179. DOI: 10.1021/es990946c Riser-Roberts E. 1998. Remediation of petroleum contaminated soils. CRC Press, Lewis Publishers, New York pp 35 Speight J.G. 2001. Handbook of petroleum analysis. John Wiley, Sons, New York pp 45 Tao S.,F. Xu,W. Liu, et al. 2006. A Chemical Extraction Method for Mimicking Bioavailability of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons to Wheat Grown in Soils Containing Various Amounts of Organic Matter. Environ. Sci. Technol. 40: 22192224. DOI: 10.1021/es051967b Wick L.Y., L. Shi & H. Harms. 2007. Electro-bioremediation of hydrophobic organic soil-contaminants: A review of fundamental interactions. Electrochimica Acta 52: 34413448. DOI: 10.1016/j.electacta.2006.03.117
(Tao et al. 2006), de aqu se obtuvo el dato que ms importa. La disponibilidad de hidrocarburo aument en la zona cercana al nodo en un 14.8%, en el centro de la cuba (15 cm) fue de 8.4% y en la zona del ctodo (26 cm) en un 5.5% ms de lo que posea el fondo de tanque en el inicio de la experiencia. La biodegradacin de suelos empetrolados en la Patagonia es una tcnica ampliamente utilizada (Pucci & Pucci 2003, Acua et al. 2010) y de buenos resultados, los resultados mejoran mucho cuando la contaminacin del suelo es reciente y no antigua dada la composicin del petrleo de la zona. La electrobioremedacin de suelos empetrolados proporciona buenos resultados (Acua et al. 2009, Li et al. 2010) produciendo una disminucin en todas las fracciones del hidrocarburo y cuando el amperaje y el voltaje se dan en valores bajos no afectan las poblaciones bacterianas presentes en suelo (Wick et al. 2007, Harbottle et al. 2009, Lear et al. 2004). Los resultados obtenidos para fondos de tanques son prometedores para que su utilizacin permita un mejor destino, en lugar del almacenaje para siempre de estos sedimentos contaminados en la provincia de Chubut - Argentina. Literatura citada
Acua A.J., O.H. Pucci & G.N. Pucci. 2012. Electrobioremediation of hydrocarbon contaminated soil from Patagonia Argentina. Oil Industry Intehc pp 29-48. DOI: 10.5772/50872 Acua A.J., G.N. Pucci, M.J. Morales, et al. 2010. Biodegradation of petroleum and its derivatives by the bacterial community in the soil of the Argentinean Patagonia. Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiologa 30: 29-36. Acua A.J., N.L. Tonn, G.N. Pucci GN, et al. 2010. Electrobioremediation of an unsaturated soil contaminated with hydrocarbon after landfarming treatment. Portugaliae Electrochimica Acta 28: 253-263. DOI: 10.4152/pea.201004253 Bojes H.K., P.G. Pope. 2007. Characterization of EPAs 16 priority pollutant polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in tank bottom solids and associated contaminated soils at oil exploration and production sites in Texas. Regulatory Toxicology and Pharmacology 47 288295. DOI: 10.1016/j.yrtph.2006.11.007
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Pucci et al.
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Colofn
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Suscripciones y Canje Subscriptions and Exchange programs La Revista Peruana de Biologa es publicada en abril. agosto y diciembre y esta dedicada a la publicacin de los resultados de investigaciones originales e inditas en las reas de Biodiversidad, Biotecnologa, Manejo ambiental, Ecologa y Biomdicas. Los trabajos recibidos son evaluados por rbitros segn criterios internacionales de calidad, creatividad, originalidad y contribucin al conocimiento. The Revista Peruana de Biologa is published in April, August and December, the aims is to disseminate the results of original research in Biodiversity, Biotechnology, Environmental management, Ecology and Biomedical areas. Papers in Spanish or English are peer-reviewed using international criteria of quality, creativity, originality and the knowledge contribution. Revista Peruana de Biologa Suscripcin anual, costo incluye envo. Annual subscription, mailing is included. Per 300 nuevos soles Other countries US$ 250
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PAUTAS PARA LA PRESENTACIN DE LOS ARTCULOS EN LA REVISTA PERUANA DE BIOLOGA Julio 2013 IDENTiDAD Y PROPSiTO La Revista Peruana De Biologa es una publicacin cientfica arbitrada producida por el Instituto de Investigaciones de Ciencias Biolgicas Antonio Raimondi, Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Per; es publicada tres veces al ao y los nmeros aparecen en abril, agosto y diciembre, tanto en su versin impresa como Online. La Revista Peruana De Biologa publica artculos completos, originales e inditos que contribuyan al conocimiento cientfico en los temas de biodiversidad, biotecnologa, ecologa, manejo ambiental y biomedicina elaborados segn las normas indicadas en las presentes pautas. Los trabajos que cumplan con las pautas solicitadas sern incluidos en el la lista para evaluacin. Un editor ser encargado de conducir el proceso enviando el trabajo a rbitros. El trabajo ser evaluado segn criterios internacionales de calidad, creatividad, originalidad y contribucin al conocimiento. El artculo ser aceptado luego del proceso de revisin por rbitros y de realizadas las modificaciones indicadas. El artculo aceptado ser editado y una prueba enviada al autor para la aceptacin y consentimiento de publicacin.
EVALUACiN DE LOS TRABAJOS
SUMiSiN PARA EDiCiN Y LiCENCiA DE USO 1. Consideraciones sobre la edicin El envo de trabajo mencionado a la Revista Peruana de Biologa, implica el consentimiento de los autores para la revisin por pares, la correccin, la edicin y posteriormente el CONSENTiMiENTO DE LA PUBLiCACiN del trabajo tal como se presentara despus de la prueba final del trabajo. Los autores reconocen que la Revista Peruana de Biologa se adhiere a la poltica de ACCESO ABiERTO dando inmediato acceso libre a su contenido bajo el principio de: hacer disponible gratuitamente la investigacin al pblico fomenta un mayor intercambio de conocimiento global. Los autores garantizan la calidad del trabajo mediante una CARTA DE PRESENTACiN, la carta ser considerada una declaracin jurada y debe afirmar que:
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PRESENTACiN DE LOS TRABAJOS
(a) La identificacin debe contener: Ttulo (en ingls y castellano), nombre y apellido del autor o los autores, afiliacin institucional de los autores, correo electrnico de cada uno de los autores, y direccin postal del autor para correspondencia. Resumen no mayor de 250 palabras (en ingls y castellano), 5 palabras clave (en ingls y castellano). Informacin adicional. Debe incluirse informacin sobre la contribucin de cada uno de los autores y de no incurrir en conflicto de intereses. Fuente de financiamiento. Debe indicarse la fuente de financiamiento del trabajo, e incluir el cdigo o numero de referencia.
(b) El cuerpo del trabajo. variar segn la seccin de la Revista: TRABAJOS ORiGiNALES. Son artculos primarios, inditos que exponen los resultados de trabajos de investigaciones completas y finales, y que constituyen aportes al conocimiento. Aqu tambin se incluyen las descripciones de especies nuevas, que cumplan con las Normas y caractersticas de la informacin en los trabajos (ver abajo). El cuerpo est organizado en: Introduccin, Material y mtodos, Resultados, Discusin y Agradecimientos. Debe abarcar un texto promedio de 30 pginas, las ilustraciones (Tablas y Figuras) deben ser slo las necesarias para una mejor exposicin de los resultados. NOTAS CiENTFiCAS. Son artculos primarios, se incluyen aqu: (a) Trabajos de inters taxonmico como reportes de distribucin, inventarios taxonmicos, notas taxonmicas, con la informacin necesaria para cubrir los estndares de Darwin core. Tambin se incluyen resultados de ensayos de laboratorio, cuya informacin es de inters para la comunidad cientfica. La extensin del texto no ser mayor de 15 pginas. El cuerpo de la Nota puede estar organizada: Introduccin, Material y mtodos, Resultados y Discusin y Agradecimientos. COMENTARiOS. Son artculos donde se discute y exponen temas o conceptos de inters para la comunidad cientfica. Se incluyen aqu ensayos de opinin y monografas. Deben contar con las siguientes partes: cuerpo del comentario y Agradecimientos. Todo el artculo debe tener un texto promedio de 10 pginas. COMENTARiOS DE LiBROS. Son artculos que comentan recientes publicaciones de inters para la comunidad cientfica. Puede solicitarse al Comit Editor la elaboracin de un comentario enviando dos copias del libro a la direccin postal de la Revista Peruana de Biologa. LOS AGRADECiMiENTOS. Deben dedicarse solamente a las personas e instituciones que colaboraron directamente en la realizacin del trabajo. CiTACiN. Las citas en el texto deben incluir el apellido del autor y ao sin comas que los separen (ejemplo: (Carrillo 1988) o ... de acuerdo a Snchez (1976) Cuando dos autores son citados en el texto se usa la conjuncin y: la concentracin de nitrgeno fue medida segn Chvez y Castro (1998). Cuando son citados entre parntesis se usa el smbolo &: de nitrgeno se midi por el mtodo colorimtrico (Chvez & Castro 1998). Citas de varias referencias entre parntesis, van separadas por comas, en secuencia de importancia: la diversidad de especies es considerada elevada (Simoniz 1968, Perez 2012, Aquino 1988). Si hay varios trabajos de un autor en un mismo ao, se citar con una letra en secuencia adosada al ao (ejemplo: Castro
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1952a). Citas de leyes y normas: "tal como se indica en la Ley N. 26821..." Cuando hay ms de dos autores se citar al primer autor y se colocar et al. sin itlicas: (e.g. Smith et al. 1981) o segn Smith et al. (1981)). Citas directas o literales se deben hacer entre comillas dentro del texto cuando son menos de 40 palabras, idiomas diferentes al texto en itlicas, indicar pgina del extracto: Finalmente, despus de revisar la distribucin de Lu. felina, se estableci un rea entre el Estrecho de Magallanes, Patagonia, Chile y Per, pero incurri en un error al extender los limites hasta el Ecuador mencionando It has been found, in Per, and in Ecuador it has been recorded from San Lorenzo (Thomas 1889, p: 198). En realidad esta era la localidad tipo de L. peruviensis que Gervais (1841) indico como procur, San-Lorenzo du Prou, une portion de crne trouve sur la plage, et qui provient incontestablement d'une Loutre (p: 15). Citas directas o literales de ms de 40 palabras, deben separarse del texto en un prrafo sangrado, la cita como en el ejemplo anterior.
(c) La LiTERATURA CiTADA incluir todas las referencias citadas en el texto dispuestas solamente en orden alfabtico y sin numeracin. La cita se inicia con el apellido del primer autor a continuacin, sin coma, las iniciales del nombre separadas con puntos y sin espacio. El segundo y tercer autor deben de tener las iniciales de los nombre y a continuacin el apellido. El ltimo autor se diferenciara por que le antecede el smbolo &. Si hubiesen ms de tres autores pueden ser indicados con la abreviatura et al. Los nombres de las publicaciones peridicas (revistas) pueden ir en la abreviatura oficial considerada segn su cdigo ISSN. El cdigo DOI debe ser colocado al final de la referencia. En la literatura citada solamente se usa letra tipo normal, no itlica, no versalita. Ejemplos:
Andrn H., & H. Andren. 1994. Effects of Habitat Fragmentation on Birds and Mammals in Landscapes with Different Proportions of Suitable Habitat: A Review. Oikos 71(3):355-366. doi:10.2307/3545823. Dormann C., J.M. McPherson, M.B. Arajo, etal. 2007. Methods to Account for Spatial Autocorrelation in the Analysis of Species Distributional Data: a Review. Ecography 30(5):609628. doi:10.1111/j.2007.0906-7590.05171.x. Buhrnheim C.M. & L.R. Malabarba. 2006. Redescription of the type species of Odontostilbe Cope, 1870 (Teleostei: Characidae: Cheirodontinae), and description of three new species from the Amazon basin. Neotrop. ichthyol. 4 (2): 167-196. Laub B.G. & Palmer M.A., 2009. Restoration Ecology of Rivers, in: G.E. Likens (Ed.), Encyclopedia of Inland Waters. Academic Press, Oxford, pp. 332341. dx.doi.org/10.1016/B978-012370626-3.00247-7 Rohde, K., 2002. Ecology and biogeography of marine parasites, in: Advances in Marine Biology. Academic Press, pp. 183. dx.doi.org/10.1016/S00652881(02)43002-7, McLachlan A. & A.C Brown. 2006. The Ecology of Sandy Shores. Elsevier Science & Technology Books. 373pp. Crawford D.J. 1983. Phylogenetic and systematic inferences from electrophoretic studies. In: S.D. Tanksley and T.J. Orton, eds. Isozymes in Plant Genetics and Breeding, Part A. Elsevier, Amsterdam. Pp. 257-287. Pianka E.R. 1978. Evolutionary ecology. 2nd edn. New York: Harper & Row. Carroll S.B. 2005. Evolution at Two Levels: On Genes and Form. PLoS Biol 3(7): e245. <http://biology. plosjournals.org/archive/1545-7885/3/7/pdf /10.1371_journal.pbio.0030245-S.pdf >. Acceso 31/07/2005. Food and Drug Administrations (FDA). 2001. Fish and Fishery Products Hazards and Controls Guidance. Third Edition June 2001. <http://www.cfsan. fda.gov/~comm/haccp4.html> (acceso 24/12/07). CONAM. 2005. (en lnea). Informe nacional del estado del ambiente 2001. <http://www.conam.gob.pe /sinia/INEA2001.shtml>. Acceso 31/07/2005. IMARPE. 2002. (en lnea). Segundo informe del BIC Jos Olaya Balandra. Paita Salaverry. 24 febrero- 05 Marzo 2002. <http://www.imarpe.gob.pe / imarpe/informeolaya02-032002.php>. Acceso 01/07/2005. Solari S.A. 2002. Sistemtica de Thylamys (mammalia: didelphimorphia: marmosidae). Un estudio de las poblaciones asignadas a Thylamys elegans en Per. Tesis, Magster en Zoologa, mencin Sistemtica y Evolucin. Facultad de Ciencias Biolgicas Universidad Nacional Mayor de San Marcos. <http://www.cybertesis.edu.pe/sisbib/2002/solari_ts /html/index-frames.html>. Acceso 31/07/2005 Ley N. 26821. 1997. Ley orgnica para el aprovechamiento sostenible de los recursos naturales. Compendio de la legislacin ambiental peruana. Volumen I. Marco normativo general. Ministerio del Ambiente MINAM, Editado por la Direccin General de Polticas, Normas e Instrumentos de Gestin Ambiental del Ministerio del Ambiente. Actualizado al 30 de junio de 2010. pp: 85-91 DS N. 012-2001-PE. 2001. Aprueban el Reglamento de la Ley General de Pesca, Ministerio de la Produccin. 13 de marzo de 2001. El Peruano Normal Legales: 199905-199921 DS N .179-2004-EF. 2004. Texto nico ordenado de la ley del impuesto a la renta. 08 de diciembre de 2004. El Peruano Normas Legales: 281912-281940
Las citas de artculos en prensa deben incluir el volumen, el ao y el nombre de la revista donde saldrn publicados; de lo contrario debern ser omitidos. No se aceptan las citas a resmenes de eventos acadmicos (congresos y otros). NORMAS Y CARACTERSTiCAS DE LA iNFORMACiN EN LOS TRABAJOS La Revista Peruana de Biologa se gua de los conceptos ticos de autora mencionados en los Uniform Requirements for Manuscripts Submitted to Biomedical Journals (http://www.icmje.org/). La revista asume la veracidad de la carta de presentacin y de la carta de consentimiento de publicacin. Cuando el artculo exponga sobre experimentos con humanos y animales, los procedimientos deben de ceirse a la Declaracin de Helsinki de 1975 y a las leyes peruanas vigentes (Ley 27265). Deben ser presentadas las declaraciones pertinentes y mencionadas en el texto. Cuando el artculo exponga sobre nuevas especies, nuevos registros, ampliaciones biogeogrficas o inventarios taxonmicos
207
debe tomarse en cuenta la informacin requerida en el Darwin Core. Tambin debe indicarse el depsito de los ejemplares en una institucin taxonmica reconocida, comprometida en la preservacin del material, que permita el libre acceso al material, publique constantemente la relacin del material que posee en custodia y que brinde la informacin necesaria sobre los ejemplares cuando sea requerido. No son consideradas las colecciones particulares. Los nombres cientficos del gnero y especie irn en cursivas. La primera vez que se cita un organismo deber hacerse con su nombre cientfico completo (gnero, especie y autor); posteriormente podr citarse solamente la inicial del nombre genrico y el nombre especfico completo. Para el caso de las abreviaturas de autores en nombres botnicos pueden referirse a la base de datos TROPICOS (http://www.tropicos.org/) y AlgaeBase (http://www.algaebase.org/). Las localidades y puntos de colecta deben ser referenciadas geogrficamente, usando coordenadas cartesianas sexagesimales, tanto en el texto como en las ilustraciones. Deben usarse los smbolos de las unidades del Sistema Internacional de Medidas. Si fuera necesario agregar medidas en otros sistemas, las abreviaturas correspondientes deben ser definidas en el texto. Debe usarse el punto decimal (ejemplo correcto: 0.5; incorrecto: 0,5). Las cifras mantenerse juntas (ejemplo correcto: 1994, 30302; incorrecto: 1,994; 30 302). Las Figuras (mapas, esquemas, diagramas, dibujos, grficos, fotos, etc.) sern numeradas correlativamente con nmeros arbigos; de igual manera las Tablas. Las leyendas de las Figuras y Tablas deben presentarse a continuacin del texto y ser suficientemente explicativas. Las figuras escaneadas deben guardarse en un archivo TIFF, tamao del original, 300 dpi. Las grficas deben de enviarse en formato nativo editable (achivo.xls, archivo.wmf, archivo.svg, archivo.eps), no como imgenes (JPGE, TIFF, PNG). Los mapas pueden enviarse en formatos SHP. Fotos de cmaras digitales en formato JPGE mayor a 3 Mpixel. Otros archivos de imgenes en TIFF, BMP, JPGE de alta resolucin y tamao, y figuras vectoriales en Ai, PSD. Formatos procedentes de software como R, en formatos editables de PDF, EPS (Postscript). Costos por ilustraciones a color sern asumidos por el autor. Los archivos deben presentarse por separado, esto es, un archivo con el texto y leyendas en formato MS-Word. Otro archivo para las tablas en MS-Excel o como tablas en MS-Word. Otros archivos en formatos nativos, no como imgenes insertadas en otros archivos (por ejemplo no enviar imgenes pegadas en una hoja de MS-Word o Excel). El autor responsable recibir una prueba del trabajo en formato PDF, el cual deber revisarlo cuidadosamente, y consultarlo con los otros autores. Una vez solucionados errores de edicin, el autor responsable enviara una carta o email confirmando que el trabajo fue revisado por todos los autores y estn conformes, y mencionar explcitamente su consentimiento para la publicacin del trabajo como artculos de la Revista Peruana de Biologa y estan de acuerdo con la LICENCIA de uso. Este es un requisito para la publicacin del trabajo. Con la prueba, el autor responsable recibir el COSTO POR PUBLiCACiN en los casos que corresponda. El costo por publicacin se refiere a gastos extras por manipulacin, edicin extraordinaria (v.g. elaboracin de ilustraciones, traducciones, etc.) y por impresin de ilustraciones a color. El pago por publicacin se realiza en las oficinas de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, o en coordinacin con el Editor Jefe. El autor principal podr solicitar cuatro ejemplares de la revista en las oficinas de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
ILUSTRACiONES
CONSENTiMiENTO DE PUBLiCACiN
COSTO POR PUBLiCACiN.
Comit Editor Email: editor.revperubiol@gmail.com Correo postal: Leonardo Romero (Editor Jefe) Revista Peruana de Biologa UNMSM-FCB Apartado 11-0058 Lima 11 Per
208
171 Siete nuevos registros de Arctiini (Lepidoptera: Erebidae: Arctiinae) para Per Seven new records Arctiini (Lepidoptera: Erebidae: Arctiinae) to Peru Juan Grados, Carlos Espinoza, Juan Jos Ramrez y Pedro Centeno Brachionidae (Rotifera: Monogononta) from El Paraso albufera and report of Brachionus ibericus in Peru Emily Toscano y Ruperto Severino Biological characteristics of one Pteria sterna population (Bivalvia: Pteriidae) from Zorritos, Tumbes, Peru Elmer Ordinola, Solange Alemn y Manuel Vera Record of mother-calf pair of southern right whales (Eubalaena australis) off the coast of Lima, Peru Mariana Orihuela y Davis Cortegana-Arias
177 Brachionidae (Rotifera: Monogononta) de la albufera El Paraso y el reporte de Brachionus ibericus en el Per
181 Caractersticas biolgicas de una poblacin de Pteria sterna (Bivalvia: Pteriidae) en Zorritos, Tumbes, Per
187 Registro de un par madre-cra de ballena franca austral (Eubalaena australis) en la costa de Lima, Per
189 Flotabilidad y similitud del nado de Manta birostris (Elasmobranchii: Myliobatidae) con el ciclo de vuelo de Columba livia (Aves: Columbidae) Buoyancy and similarity of the swimming of Manta birostris (Elasmobranchii: Myliobatidae) with the flying cycle of Columba livia (Aves: Columbidae) Ivn Meza Vlez
197 Ampliacin del rango geogrfico del Escorpin de Agua Curicta scorpio Stl, (Hemiptera: Nepidae) y primer registro para Costa Rica Geographic range extension of the Waterscorpion Curicta scorpio Stl, (Hemiptera: Nepidae) and first record for Costa Rica Federico Herrera Electro bioremedation of oil bottoms tank Graciela N. Pucci, Adrin J. Acua y Oscar H. Pucci
199 Electro bioremediacin de fondos de tanques petroleros
REVISTA PErUANA DE BIOLOGA

Rev. peru. biol. ISSN 1561-0837
Volumen 20
Diciembre, 2013 CONTENIDO
Nmero 2
OBITUARIO
117 In memoriam Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez: Noviembre 1926 - octubre 2013 In memoriam Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez: November 1926 - October 2013 Leonardo Romero
TRABAJOS ORIGINALES
121 Blakea nareliana (Melastomataceae), a new species from the upper Huallaga in Northern Peru 45 Blakea nareliana (Melastomataceae), una nueva especie del Alto Huallaga, en el norte del Per Rainer W. Bussmann Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae) a new record for the Flora of Peru Eric F. Rodrguez Rodrguez, David A. Neill, Sandra J. Arroyo Alfaro y Jos R. Campos de la Cruz Revisin del gnero Lolliguncula Steenstrup, 1881 (Cephalopoda: Loliginidae) frente a la costa del Pacfico de Amrica del Sur Franz Cardoso1 and Frederick G. Hochberg2 Composicin del zooplancton en cinco lagos de la parte alta del ro Juru, Estado de Acre, Brasil Maria Jos Alencar dos Santos, Erlei Cassiano Keppeler, Lisandro Juno Soares Vieira, Alzenira Jacob Serra and Antonio Sergio Ferraudo Biodegradacin del explosivo tetranitrato de pentaeritritol (PETN) por bacterias aisladas de ambientes mineros Biodegradation of the explosive pentaerythritol tetranitrate (PETN) by bacteria isolated from mining environments Yerson Durn, Christian Andrade, Armando Martnez, Tito Snchez, Fernando De la Cruz, Pablo Ramrez
125 Maxillaria jostii Dodson (Orchidaceae) un nuevo registro para la Flora del Per
129 Revision of the genus Lolliguncula Steenstrup, 1881 (Cephalopoda: Loliginidae) off the Pacific Coast of South America
137 Zooplankton composition in five oxbow lakes from the Upper Juru River, Acre State, Brazil
151 Estudio bioqumico del veneno de Tityus kaderkai (Scorpiones: Buthidae) con notas sobre su distribucin y hbitat en el Per Biochemical study of Tityus kaderkai (Scorpiones: Buthidae) venom with notes on its distribution and habitat in Peru Enrique Escobar, Rosalina Tincopa y Jos A. Ochoa Isolation and characterization of Escherichia coli O157:H7 from ground beef cattle in Lima-Peru Carmen R. Mndez, Germn Vergaray, Hilda Y. Morante, Paulo R. Flores y Roger A. Gamboa La deteccin de Bartonella spp. y Rickettsia spp. en pulgas, garrapatas y piojos recolectados en las zonas rurales de Per Abraham G. Cceres, Carlos P. Padilla Rojas, Javier Arias Stella Gerardo Huatuco Crisanto, Antero Gonzales Prez
159 Aislamiento y caracterizacin de Escherichia coli O157:H7 a partir de carne molida de bovino en Lima-Per
165 Detection of Bartonella spp. and Rickettsia spp. in fleas, ticks and lice collected in rural areas of Peru
(Contina...)

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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACuLTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

Rev. peru. biol. ISSN 1561-0837

REVISTA PERuANA DE BIOLOGA

REVISTA PErUANA DE BIOLOGA

Diciembre, 2013 CONTENIDO

199 Electro bioremediacin de fondos de tanques petroleros

IN MEMORiAM Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez

Rev. peru. biol. 20(2): 117 - 120 (December 2013)

IN MEMORiAM Doctor Pedro G. Aguilar Fernndez

Rev. peru. biol. 20(2): 117 - 120 (December 2013)

Rev. peru. biol. 20(2): 117 - 120 (Diciembre 2013)

BLAKEA NARELiANA a new species from the upper Huallaga

Presentado: Aceptado: Publicado online:

09/04/2013 17/05/2013 09/12/2013

Rev. peru. biol. 20(2): 121 - 124 (December 2013)

BLAKEA NARELiANA a new species from the upper Huallaga

Rev. peru. biol. 20(2): 121 - 124 (December 2013)

Rev. peru. biol. 20(2): 121 - 124 (Diciembre 2013)

MAXiLLARiA JOSTii un nuevo registro para la Flora del Per

Rev. peru. biol. 20(2): 125 - 128 (December 2013)

MAXiLLARiA JOSTii un nuevo registro para la Flora del Per

Rev. peru. biol. 20(2): 125 - 128 (Diciembre 2013)

the genus LOLLiGUNCULA off the Pacific Coast of South America

Presentado: Aceptado: Publicado online:

20/02/2013 13/08/2013 09/12/2013

Rev. peru. biol. 20(2): 129 - 136 (December 2013)

Cardoso & Hochberg

the genus LOLLiGUNCULA off the Pacific Coast of South America

Rev. peru. biol. 20(2): 129 - 136 (December 2013)

Cardoso & Hochberg

Rev. peru. biol. 20(2): 129 - 136 (Diciembre 2013)

the genus LOLLiGUNCULA off the Pacific Coast of South America

Cardoso & Hochberg

the genus LOLLiGUNCULA off the Pacific Coast of South America

Rev. peru. biol. 20(2): 129 - 136 (December 2013)

Cardoso & Hochberg

Rev. peru. biol. 20(2): 129 - 136 (Diciembre 2013)

Zooplankton composition in oxbow lakes from the Upper Juru River

Presentado: Aceptado: Publicado online:

18/06/2013 08/10/2013 09/12/2013

Rev. peru. biol. 20(2): 137 - 144 (December 2013)

Zooplankton composition in oxbow lakes from the Upper Juru River

Cladocera Copepoda Diptera

Cigana Novo Moju

Kercoch Ascov Keramer Klenz Polvul Filinpe

14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000

0 May/2009 October/2009 February/2010 May/2010 6000

10000 8000 6000 4000 2000

y = 138.67x 2 - 366264x + 2E+08

5000 4000 3000 2000 1000

0 May/2009 October/2009 February/2010 May/2010

0 October/2009 February/2010 May/2010

y = 8.0763x 2 - 21452x + 1E+07 R 2 = 0.688

14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000

Lake Santo Elias

0 october/2009 February/2010 May/2010 October/2011

0 May/2009 October/2009 February/2010 May/2010

Rev. peru. biol. 20(2): 137 - 144 (Diciembre 2013)

Zooplankton composition in oxbow lakes from the Upper Juru River

Rev. peru. biol. 20(2): 137 - 144 (Diciembre 2013)

Zooplankton composition in oxbow lakes from the Upper Juru River

Rev. peru. biol. 20(2): 137 - 144 (Diciembre 2013)

Biodegradacin de PETN por bacterias aisladas de ambientes mineros

Presentado: Aceptado: Publicado online: