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FACTORES EPIDEMIOLOGICOS ASOCIADOS A LA PREVALENCIA DE

Campilobacter jejuni EN NIOS MENORES DE CINCO AOS EN EL HOSPITAL


CARLOS MONGE MEDRANO JULIACA 2013
Responsables

: Roxana Carolem Hancco Zaga

Director de tesis

: Dra. Roxana Medina Rojas


I.

PLANTEAMIENTO DE PROBLEMA

Campylobacter jejuni se constituye como una de las principales enfermedades


bacterianas que ataca preferentemente a nios entre los primeros aos de vida
siendo este causante de las diarreas agudas acuosas e incluso llevando a la
muerte de no ser tratada a tiempo por la deshidratacin que va a sufrir el husped
Blaser (2000).
El dao al husped y las manifestaciones clnicas dependen principalmente del
inculo ingerido y el estado inmunolgico cuyo principal mecanismo de
patogenicidad es la invasin de la mucosa intestinal, produciendo generalmente
una enterocolitis inespecfica, que puede incluir degeneracin y atrofia glandular,
prdida de la produccin de mucus, abscesos de las criptas, y ulceracin de la
mucosa epitelial, frecuentemente algunos casos tienen caractersticas patolgicas
similares a las producidas por Salmonella o Shigella. (Algorta 19887), Blaser
(2000).

En nuestra regin Puno, especialmente en el Hospital Regional Carlos


Monge Medrano, se ha venido detectando enfermedades diarreicas agudas
que de acuerdo a su cuadro clnico, tienen caractersticas de pertenecer al
gnero del Campilobacter siendo este un problema de salud pblica que
afecta especialmente a nios, y que por las condiciones socio
epidemiolgicas de nuestra poblacin hacen que esta bacteria infecte a
nios y recin nacidos a travs de las evacuaciones lquidas que inclusive
puede llevarlo a la muerte.
1

Por todo ello me he propuesto formular lo siguiente:


Formulacin del problema

Cules son los Factores Epidemiolgicos Asociados a la Prevalencia de


Campilobacter jejuni en Nios Menores de cinco aos en el Hospital
Carlos .Monge Medrano Juliaca - 2013

II.

JUSTIFICACION

Campylobacter jejuni, es una bacteria muy poco conocida en nuestro medio por el
personal mdico, pasando desapercibido en muchas de las ocasiones y en la
mayora de casos se brinda tratamiento para una infeccin por Salmonelosis y/o
shiguellosis, haciendo que al no ser la bacteria de la que se sospecha,
Campylobacter jejuni pueda ir produciendo resistencia a los frmacos es aqu
donde radica la importancia del presente estudio para determinar la prevalencia
de casos producidos por esta bacteria en el laboratorio.
2

Por otro lado, queremos demostrar que los factores epidemiolgicos influyen
sobre la transmisin de esta bacteria para que con los datos obtenidos se puedan
considerar medidas especiales y preventivas, con esto estaremos ayudando al
Ministerio de Salud, especialmente a los mdicos pediatras a que se pueda dar un
mejor diagnstico y por ende mejorar el tratamiento que se brinda a la poblacin
infantil.
Al concluir nuestra investigacin, se demostrar la prevalencia de la bacteria
Campilobacter jejuni, con la cual estaremos proponiendo a que en los laboratorios
de los centros hospitalarios que realizan los diagnsticos bacterianos se
considere a Campilobacter como microorganismo a ser detectado mediante
pruebas de cultivo especficos como es el agar campi y as contribuir a la
disminucin de estas enfermedades diarreicas agudas en nuestra regin.

III.

ANTECEDENTES

4.1 Internacionales.
Camas, C. realiz su estudio en Aislamiento e identificacin de Campylobacter
spp. en muestras de heces referidas al Laboratorio Nacional de Salud,
provenientes de los centros de salud del Departamento de Guatemala en el ao
2006 con la finalidad de aislar Campilobacter jejuni para lo cual estudio 502
muestras de heces, de las cuales 367 fueron referidas de enero a diciembre de
2004 y 135 de enero a julio de 2005. De las 502 muestras analizadas, nicamente
hubo 17 aislamientos de los cuales uno correspondi a Campylobacter jejuni
(0.2%), 10 aislamientos a Salmonella spp (2.0%), 3 aislamientos a Shigella spp
(0.6%) y 3 aislamientos de E. coli O157 H7 (0.6%). En 479 muestras no se
aislaron

enteropatgenos

(95.4%),

muestras

no

fueron

transportadas

adecuadamente al laboratorio por lo que se descartaron (1.2%). Los resultados de


3

este estudio demostraron que Campylobacter spp., no es un agente muy comn


causante de diarrea en los centros de salud del rea del Departamento de
Guatemala, porque la prevalencia encontrada fue del 0.2% por lo que las
infecciones gastrointestinales bacterianas producidas por Salmonella spp,
Shigella spp. y E. coli O157 H7 en el estudio son la causa ms frecuente de
diarrea.
Hurtado, L. realiz un trabajo piloto realizado en la ciudad de la Paz Bolivia, con
el fin de identificar Campylobacter jejuni y/o Campylobacter coli como agente
causal de diarrea acuosa en el ao 1988, tomndose como grupo poblacional a
nios con edad lmite mxima de 6 aos. La investigacin se llev a cabo
tomando muestras de pacientes ambulatorios y hospitalizados del Centro de
Salud La Paz, INLASA y hospital Obrero de la Caja de Seguridad Social, grupo
que en su mayora corresponda a los estratos sociales menos favorecidos. De
161 nios que presentaban sndrome diarreico se aisl Campylobacter jejuni en
17 (10.5%), adems de haberse tomado un grupo de 21 nios danos como grupo
control en el que se encontraron portadores sanos en el 9.6%. No se encontr ni
un solo caso que corresponda a Campylobacter coli.
Larrosa. H. realiz una investigacin efectuada entre abril de 1999 y marzo de
2000 en una muestra de 288 preescolares y lactantes, atendidos en un
consultorio peditrico no institucional de la ciudad de Guadalajara, Mxico en el
ao 2002 cuyos resultados dieron como conclusin que el 43% fueron nias, se
analizaron muestras de heces, cuyos agentes causales identificados fueron:
Rotavirus 47.1%, Campylobacter jejuni 27.4%, Salmonella spp. 5.1%, Shigella
spp. 4.3%, Cryptosporidium parvum 2.8%, Giardia lamblia 2.4%, Blastocystis
hominis 1.4%, Entamoeba histolytica 0.7%.
Lpez, C. realiz un estudio en el periodo de abril de 1999 a marzo del 2000, en
un barrio de nivel socioeconmico bajo, con viviendas precarias, alto
hacinamiento y desocupacin EN LA Paz Bolivia en el ao 2002 en la cual tom
en cuenta los animales domsticos, alimentos (elaborados, semi-elaborados o
naturales destinados al consumo humano) y los casos de diarrea aguda en nios
menores de seis aos. En la Unidad Sanitaria del barrio en estudio encontraron
una tasa de incidencia de diarrea con demanda de atencin mdica de 4,41%
nios/mes y una tasa de incidencia de diarrea por Campylobacter jejuni para este
4

grupo de 0,40% nios/mes. Adems en animales domsticos slo se encontraron


casos de diarrea en caninos, de los cuales en el 15,38% de las muestras de estos
animales se aislaron Campylobacter jejuni, aunque no encontraron una asociacin
estadstica entre la diarrea y la presencia del agente.
Medeiros, M. en su estudio realizado por un periodo de 4 aos (Enero del 1994 a
diciembre del 1997), con el objetivo de caracterizar a los principales
enteropatgenos causantes de diarrea en nios en Ribeirao Preto Brasil en el
ao 2001 obtuvo los siguientes resultados, de 1836 muestras; 946 muestras de
pacientes

ambulatorios

890

muestras

de

pacientes

correspondientes a nios menores de 10 aos con

hospitalizados;

diarrea, obtuvieron que

Escherichia coli y Campylobacter sp., eran los enteropatgenos comnmente ms


asociados con otros microorganismos. Se encontr que de los enteropatgenos
aislados, de infecciones simples o mltiples, el ms frecuente fue Escherichia coli
enteropatgena (8.7%); constituyendo el agente etiolgico ms importante de
diarrea en la regin de Ribeirao Preto - SP. El segundo agente etiolgico ms
frecuentemente aislado fue Shigella sp., Campylobacter sp., fue el tercer
enteropatgeno encontrado en este estudio, siendo ms frecuente que
Salmonella sp., como causa de enteritis, adems la mayor incidencia de
Campylobacter sp., ocurri en nios entre cero y cuatro aos.
Urrestarazu, et al En Caracas, Venezuela (1988), se estudi a todos los nios
menores de dos aos de edad con diarrea aguda que acudieron a consulta en los
Hospitales de Jos Miguel de los Ros y Miguel Prez Carreo, durante el periodo
comprendido entre junio de 1982 y mayo de 1983. Cabe resaltar que ambos
hospitales atienden principalmente a personas de nivel socioeconmico bajo. La
muestra estuvo conformada por 196 nios y para propsitos de comparacin
estudiaron tambin un grupo testigo formado por 27 nios afectados por otra
enfermedad y con caractersticas similares en cuanto a edad, sexo y procedencia.
Los agentes ms frecuentemente aislados en el grupo de enfermos fueron:
Escherichia coli enterotxigenica (41,8%), Rotavirus (14,1%), Esherichia coli
enteropatgena (12,2%), Klebsiella pneumoniae (11,2%) y Campylobacter jejuni
se identific en 18 enfermos (9,2%) ocupando el quinto lugar en frecuencia, por
delante de Escherichia coli enteroinvasora (5,1%), Salmonella sp (2.0%) y
Shigella sp (2.0%). Campylobacter jejuni se encontr como agente nico en 12
5

nios (66,7%), en los cuales se identificaron como manifestaciones clnicas ms


frecuentes: la diarrea con moco y sangre, vmito, dolor abdominal y fiebre; slo
en tres casos se comprob deshidratacin. Hubo predominio de la infeccin por
Campylobacter jejuni durante la temporada de lluvia y calor.
Velazco, et al En Caracas, Venezuela (2001) se realiz un estudio con la finalidad
de conocer algunas caractersticas epidemiolgicas, clnicas y microbiolgicas de
las Campilobacterias termotolerantes asociados a la EDA, en nios menores de 5
aos, se analizaron 397 muestras de heces de nios con diarrea y 121 de nios
asintomticos como grupo control, procedentes del Instituto Autnomo Hospital
Universitario de los Andes, Mrida, Venezuela, entre junio de 1993 y diciembre de
1994. Campylobacter se encontr en 47 casos de diarrea (11.83%) y 10 controles
(8.26%). En 53.19% de los casos de diarrea se aisl como patgeno nico, y el
mayor porcentaje de asociacin fue con Rotavirus (23.40%). En los casos con
diarrea el 51.29% correspondi a C. jejuni subsp. jejuni, 33.33% a C. coli y
15.38% C. lari. Campylobacter se aisl con mayor frecuencia a partir de las heces
de los nios con diarrea y edades comprendidas entre 0-24 meses. La distribucin
segn el sexo fue similar en los nios con Campylobacter como patgeno nico.
El mayor nmero de casos en ambos grupos de estudio se registr en el perodo
de lluvia (Abril - octubre). Predomin el cuadro clnico tipo disentrico (64%).
4.2 Nacionales.
Black, et al El Instituto de Investigacin Nutricional, Lima, Per, realiz un estudio
de la epidemiologa y etiologa de la diarrea en el periodo comprendido entre(julio
de 1982 y junio de 1984), en 153 lactantes pobres que residan en una comunidad
peri urbana cerca de Lima. En el estudio se encontr cerca de 10 episodios de
diarrea en el primer ao de vida, estos episodios se asociaron con organismos
tales

como

Campylobacter

jejuni,

Escherichia

coli

enteropatgena

enterotoxignica, Shigella, Rotavirus y Cryptosporidium. Estos organismos


parecen ser transmitidos a los lactantes en el hogar a travs de las heces de los
animales, a travs del agua y de alimentos contaminados y por contacto directo
de persona a persona. Un hecho importante es que la va de transmisin puede
haber sido los alimentos de destete, que a menudo son contaminados por la
preparacin inadecuada y la falta de limpieza de los utensilios. Finalmente,
6

consideran que la mejora en las prcticas de alimentacin, conjuntamente


evitando el contacto con las heces de animales y la mejora de la higiene personal
y domstica son importantes intervenciones para reducir la elevada incidencia de
la diarrea en los lactantes en pases en desarrollo.
Murga, et al En un estudio realizado por el Instituto Nacional del Nio(1993), en
Lima con nios menores de 10 aos mostr que Campylobacter jejuni es uno de
los principales agentes etiolgicos de diarrea, siendo los lactantes de un ao de
edad, o ms jvenes, los ms susceptibles. Adems se describe a la enfermedad
como moderadamente grave a pesar que ms del 50% de los pacientes
necesitaron terapia de lquidos intravenosos. Campylobacter sp, tambin result
ser ms frecuente en pacientes desnutridos, que provienen de grupos socioeconmicamente desfavorecidos, con el hacinamiento, las malas condiciones de
salubridad y un contacto frecuente con aves domesticas y los animales. El
comportamiento estacional sugiere que la diarrea causada por Campylobacter es
endmica en esta zona.
Perales, et al Entre abril y octubre del 2001, se realiz un trabajo transversal
analtico donde incluyeron a todos los nios menores de dos aos con diarrea
aguda acuosa atendidos en cuatro centros de salud del distrito de La Victoria,
obteniendo un total de 248 casos de los cuales 48 (19,4%) coprocultivos fueron
positivos: 33 (13,3%) a Campylobacter sp., 12 (4,8%) a Shigella sp. y 3 (1,2%)a
Salmonella sp.. No encontraron diferencias entre los grupos etreos para
presentar diarrea acuosa de origen bacteriano, sea Campylobacter o Shigella.
Tampoco encontraron diferencias en la etiologa de la diarrea bacteriana respecto
al sexo del menor, al grado de instruccin u ocupacin de la madre o responsable
y presencia o no de hacinamiento en el hogar .

Hurtado, et al En un estudio en pacientes ambulatorios menores de cinco aos con


diarrea aguda en dos hospitales: Hospital de Emergencias Peditricas y Hospital
Materno-Infantil San Bartolom; ubicados en el Distrito Cercado de Lima, en el
perodo correspondiente a octubre del 2005 hasta enero del 2006, en el cual se
evaluaron 405 muestras, obtenindose una incidencia de 0.091 (37 casos positivos)
para Campylobacter sp., siendo el grupo etreo mas vulnerable los nios menores
de un ao con 20 casos positivos, encontrndose mayor nmero de casos positivos
7

en los meses de octubre para el hospital de Emergencias Peditricas y diciembre


para el Hospital Materno Infantil San Bartolom (2008).
La Universidad Peruana Cayetano Heredia, el Instituto de Investigacin Nutricional
y PRISMA Proyectos en Informtica, Salud, Medicina y Agricultura,
desarrollaron un estudio en dos pueblos jvenes: Huscar, Canto Grande y en Las
Pampas de San Juan, en San Juan de Miraflores, en Lima. En estos pueblos jvenes
la mayora careca de instalaciones elctricas y el agua era un recurso escaso. En
Huscar se observ; para el estudio; a 21 nios menores de cinco aos, adems
todas las familias contaban con al menos un nio menor de 2 aos y con aves de
corral no acorralados, la mayor parte del da. Se utilizaron tcnicas de observacin
directa para medir la frecuencia con que los nios fueron contaminados con las
heces de las aves de corral en los barrios mencionados. El nmero medio de aves de
corral fue de 5,4 con 10 defecaciones de estas aves por cada doce horas. Los nios y
el contacto directo con heces de aves de corral se produjo con una ocurrencia de 2,9
por cada doce horas. Una media de 3,9 episodios de heces a la boca por hora
engrupo familiar/12 horas, producido tanto de manera directa a la boca e
indirectamente por la contaminacin de algn objeto que luego es introducido a la
boca. Adems recogieron heces de pollos infectados y encontraron 68 de estas
muestras con Campylobacter jejuni viables durante un mximo de 48 horas despus
de la deposicin. Sin embargo una encuesta a 108 familias destac que la libre
crianza de aves de corral era considerada como un factor de riesgo para la salud de
los nios del grupo familiar.

IV.

MARCO TEORICO

Caractersticas del gnero Campylobacter


El gnero Campylobacter deriva de las voces griegas (campylo = curvo) y (bacter
= bacteria). Actualmente se han incorporado nuevas especies y se ha creado la
familia Campylobacteriaceae, la cual est compuesta por dos gneros:
Campylobacter y Arcobacter; y un gnero de afiliacin incierta Helicobacter. En la
actualidad al gnero Campylobacter, se le ha asociado a enfermedades como la
gastroenteritis y la septicemia en el ser humano (Murray, et al 2009).
Se encuentran en el aparato reproductor, tubo gastrointestinal y cavidad oral de
hombres y animales, a los que ocasionan accin patgena (Hurtado, et al 2008).
Las especies de Campylobacter en general, presentan una forma espiralada,
curva,

en forma de s, (Fig. 01) o ala de gaviota. Todas son bacilos gram-

negativos, no formadores de esporas, las especies de este gnero poseen un


flagelo polar en uno o ambos

extremos, que les confiere

motilidad (Brooks, et al 2005).

Fig. 01. Morfologa de Campylobacter jejuni, de www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?term=Campylobacter+Jejuni&lang=2 Riva


(2011).

Clasificacin segn el Manual Bergey


Super reino: Prokaryotae
Reyno: Monera
Sub-Reyno: Eubacteria
Divisin: Gracilicutes
Grupo: Gramnegativos
Filo: Proteobacteria
Clase: Proteobacteria epsilon (bacterias espirales y curvas)
Orden: Campylobacteriales
Familia: Campylobacteriaceae
Gnero: Campylobacter
Especie: jejuni.

Las especies de Campylobacter son las siguientes:


C. coli,C.concisus, C.curvus,
C.faecalis,C.gracilis,C.helviticus,C.hominis,C.hyointestinalis,
C.insulaenignae, C.lanienae, C.lari, C.mucosalis,C.rectus, C.shorwae,C.sputorum,
C.upsaliensis. Siendo las mas conocidas las especies: C.jejuni y C.fetus

Morfologa de Campylobacter jejuni:


Se trata de bacilos gram - negativos, curvados en espiral, con una o ms espiras,
o en forma de S, no esporuladas, cuyo tamao oscila de 0,2 a 0,5 um de
anchura por 0,5 a 5 um de longitud. (Pumarola, Garcia, Angulo (1995). Tambin se
ha usado su pequeo tamao para recuperar las bacterias por filtracin de las
heces. Estos microorganismos pasan a travs de filtros de 0,45 um, mientras que
otras bacterias quedan retenidas (Murray et al 2009).
10

Son mviles (a modo de sacacorchos) por medio de un nico flagelo polar sin
vaina (Koneman, et al 2008).
En cultivos de varios das (ms de tres) expuestos al aire por mucho tiempo
pueden mostrar una morfologa cocoide (Malbran 2001).

Estructura de la pared celular


El C. jejuni muestra varias estructuras en la superficie celular, incluyendo muchos
polisacridos, que tienen un papel vital en la biologa del C. jejuni, en particular las
interacciones bacteria hospedadora. La cpsula, el polisacrido muy variable, es
importante para la virulencia, la adhesin de las clulas epiteliales y la invasin. El
lipooligosacrido (LOS) Tambin es muy variable y tiene un papel en la resistencia
de suero, la adhesin de las clulas epiteliales y la invasin. La estructuras de
LOS del C. jejuni puede mostrar mimetismo molecular de los ganglisidos
neuronal, que est relacionado con el sndrome de Guillain-Barr y el sndrome de
Miller-Fisher. El flagelo se requiere para la colonizacin, la virulencia y la invasin
de las clulas epiteliales y tambin acta como un aparato de secrecin de
antgenos en la invasin. La flagelina es modificada por la O-glicosilacin. Esta
modificacin es necesaria para el montaje del flagelo y es, por ello, importante
para la movilidad, la virulencia y la adherencia de las clulas epiteliales y la
invasin. La N-glicosilacin ligado al sistema modifica algunas protenas
periplsmicas y la membrana externa. Los glicanos unidos a N tambin es
importante en la colonizacin y adherencia de las clulas epiteliales y la invasin,
pero el papel de este glicano en estos procesos no est claro (Young, et al 2007).

.
11

Fig. 02. Estructura de la pared celular de Campylobacter jejuni. Obtenido de Nature Reviews/Microbiology

Caractersticas fisiolgicas de Campylobacter jejuni


a.

Temperatura de crecimiento:

Todas las especies de Campylobacter son capaces de desarrollar a 37C, pero


Campylobacter jejuni presenta una temperatura ptima de crecimiento de 42C, lo
cual facilita el aislamiento selectivo del principal patgeno humano del gnero.
Son organismos de lento crecimiento, por lo que para su aislamiento a partir de
materias fecales se requieren medios de cultivo selectivos que inhiban esta flora
normal entrica (Malbran 2001).

b.

Atmsfera

Campylobacter jejuni es sensible al oxgeno y slo puede desarrollarse en


condiciones de reduccin de oxgeno, habitualmente en atmsfera microaerfila
(5-10% de oxgeno) y concentraciones mayores de hidrgeno y dixido de
carbono (10%) (Koneman, et al 2008).
c.

Metabolismo:

Estos microorganismos tienen un metabolismo no fermentador y no oxidativo,


obtienen energa del uso de aminocidos y los intermediarios de cuatro y seis
carbonos del ciclo de Krebs (Koneman, et al 2008).
El gnero Campylobacter no fermenta carbohidratos pero pueden ser distinguidos
unos de otros por una variedad de pruebas bioqumicas y caractersticas de
crecimiento ya que son microorganismos oxidasa positivos (Camas 2006).
Fisiopatologa de la infeccin por Campylobacter jejuni.
El dao al husped y las manifestaciones clnicas dependen principalmente de
dos factores: el inculo ingerido y el estado inmunolgico del husped (Hurtado,
et al 2008).
En un estudio experimental de enfermedades asociadas

con infecciones por

Campylobacter jejuni, han revelado que una dosis baja de los organismos (500800) es suficiente para causar diarrea y que el nmero de personas que incurren
en la enfermedad aumenta con dosis ms altas (Konkel, et al 2001).
12

Segn Konkel (2001), lps mecanismos de patogenicidad no se conocen con


certeza, pero consta de cuatro etapas principales, las cuales sern descritas a
continuacin:
1.

Adhesividad: La adhesin toma lugar con la ayuda de un nmero de

protenas, que median la unin del Campylobacter jejuni con las clulas epiteliales
del

hospedador,

dichas

protenas

son

producidas

por

la

bacteria.

El

Campylobacter jejuni es capaz de unirse a las clulas de origen humano (INT 407,
HEP-2, y 293) y de origen no humano (vero, CHO-K1, y MDCK) con la misma
eficacia, la unin de Campylobacter jejuni a INT 407 (lnea de clulas epiteliales
intestinales) y Caco-2 (lnea de clulas humanas del colon).
Dentro de las protenas involucradas tenemos:
-

CadF (adhesin de Campylobacter a la fibronectina)


Lipoproteina A,
Cap A (Campylobacter adhesina protena A)
Peb1, media la unin del Campylobacter jejuni a las clulas epiteliales
MOMPs (protenas de la membrana externa Omp E)
Otras molculas que pueden actuar como adhesinas son: La flagelina, la

protena P95, lipopolisacridos. La importancia de los lipopolisacridos no solo es


el mantenimiento estructural de la bacteria sino tambin se involucra en la
adherencia, y puede variar su estructura para evitar el sistema inmunolgico del
hospedador, esto se explica en la estructura del lipopolisacrido, especficamente
en el lpido A, el cual contiene la mayor cantidad de disacridos encontrados, sin
embargo estos disacridos varan con los patrones de fosforilacin, el ncleo
polisacrido es sustituido y contendr una estructura terminal homologa a los
gangliosidos humanos GM1a y GM2a, los cuales se encuentra en la superficie de
la membrana externa de clulas cerebrales y en menor cantidad en hgado bazo y
eritrocitos.
Rol de los lipo-oligosacaridos del C. jejuni mediada en la enfermedad, segn
Konkel (2001
Los Lipo-oligosacridos son importantes para la colonizacin en gran variedad de
hospedadores y nichos intestinales, tambin es ventajoso para la supervivencia
en entornos no intestinales.
La variacin en la sntesis gentica del lipo-oligosacarido facilitar la capacidad de
C jejuni para adaptarse a entornos dinmicos y hostiles.
13

Los Lipo-oligosacridos participan en la adhesin e invasin de clulas del


hospedador, mediante el mimetismo molecular muy evidente
La similitud de las estructuras de los lipo-oligosacridos con los glanglisidos del
hospedador y la posterior capacidad para generar anticuerpos cross-reacting
constituye la base patolgica asociada al sndrome Guillan Barre, (GBS) sin
embargo tambin interviene el mimetismo de ganglisidos asociados con la
generacin de anticuerpos anti-ganglisidos, aunque en algunas infecciones
entricas que expresan ganglisidos no produce Sndrome de Guillain Barr, por
lo que otros factores bacterianos son tambin esenciales, los cuales son
desconocidos.

Fig. 03. Ilustracin de las cuatro principales Glicoestructuras superficiales en Campylobacter jejuni, que son:
polisacrido capsular, lipo-oligosacrido y Oligosacridos vinculados a la glicosilacin todos varan con la
cepa. N-glicosilacin se conserva: Del crculo rojo representa al Di-N-acetil bacilosamina; el crculo azul
representa a la N-acetil-galactosamina y el crculo amarillo representa a la glucosa (Kay, et al 2011).

2.

Colonizacin: La motilidad ya que requiere para nadar a travs del moco

intestinal por eso el C. jejuni presenta un flagelo juega un papel muy importante
en la colonizacin que se compone de un cuerpo basal, gancho y filamento; el
filamento flagelos se compone de dos protenas llamadas Fla A y Fla B
relacionndose la movilidad con la sntesis de la protena Fla A.
El estado inicial de infeccin o colonizacin est involucrado por el movimiento
hacia las clulas superficiales, este movimiento es similar al de sacacorchos, lo
cual le permite penetrar mediante el moco intestinal al epitelio intestinal. El flagelo
presenta dos genes que los codifican, tales como el Fla A y Fla B, pudiendo
14

recombinarse entre si y generar antgenos diversos. El flagelo est constituido por


multmeros de flagelina A y B (las cuales son protenas) el mayor componente es
la flagelina A con una pequea cantidad de flagelina B. cuando la flagelina A es
mutante se detiene la formacin del filamento y se constituye solo de flagelina B,
esto produce una reduccin en la motilidad. En cambio cuando es mutante la
flagelina B se forma el flagelo completo con una aparente alteracin estructural y
tambin hay una reduccin en la motilidad. Por ltimo el flagelo presenta una
doble funcin que es la motilidad y la secrecin selectiva de protenas.
3.

Invasividad: es un proceso de endocitosis, en el cual un microorganismo

sintetiza protenas necesarias para promover su internalizacin a clulas


hospedadoras. En C. jejuni, la invasin de la lmina propia se observa tanto a
nivel del intestino delgado como del colon, y el resultado es generalmente una
enterocolitis inespecfica, que puede incluir los siguientes hallazgos: degeneracin
y atrofia glandular, prdida de la produccin de mucus, abscesos de las criptas y
ulceracin de la mucosa epitelial y en otros casos, las caractersticas patolgicas
son similares a las observadas en las infecciones por Salmonella y Shigella
Hurado (1988). La invasin de C. jejuni, parece depender de las cepas (ya que los
aislados clnicos presentaron mayor invasin que los aislados ambientales) una
vez internalizado el C. jejuni puede sobrevivir durante largos periodos de tiempo
dentro de las clulas epiteliales y finalmente inducir una respuesta citotxica.
El C. jejuni sintetiza protenas de entrada las cuales son requeridas para la
invasin, llegando a sintetizar hasta 14 protenas, de las cuales 9 son
inmunognicas (por ejemplo, en bucles leon de conejo, se identific dos
protenas recin sintetizadas con una masa molecular aparente de 84 y47 KDa);
mediante la expresin de ciertos genes despus de encontrarse con el
microambiente clula epitelial. La capacidad para producir la enfermedad y el
dao al colon se relaciona con la capacidad de invadir las clulas epiteliales del
tracto intestinal, para lo cual se ha confirmado la existencia de cepas invasivas y
una fuerte relacin con la presencia de enfermedad, sobre todo con diarrea
inflamatoria. El mecanismo principal de dao al colon y las enfermedades
diarreicas se relaciona con la capacidad del organismo para invadir las clulas
epiteliales del colon, las cuales son evidenciadas en el citoplasma de las clulas
daadas (Konkel, et al 2001).
15

Fig.

4.

Fisiopatologa comparativa de C. jejuni en el epitelio intestinal del ser humano y el pollo. El C. jejuni evita la
capa de moco en los seres humanos e interacta con las clulas epiteliales intestinales que producen la
interleucina (IL) -8 la cual se une y es internalizado por las clulas epiteliales. La induccin de IL-8 causa el
reclutamiento de clulas dendrticas (DC), los macrfagos y neutrfilos, que interactan con C. jejuni. Estas
interacciones dan como resultado, una masiva respuesta proinflamatoria y el aumento de las citocinas. Por el
contrario, principalmente C. jejuni se encuentra en la capa mucosa de los intestinos del pollo, la cual puede
estimular la produccin de IL-1, IL-6 y xido ntrico sintetasa intracelular de los macrfagos y las clulas
epiteliales, pero la respuesta del husped no suele conducir a la diarrea inflamatoria en los pollos ya que la
invasin de clulas epiteliales no se expresa. Imagen tomada de Nature Reviews/Microbiology (Young, et al
2007).

4.

Toxigenicidad: La enterotoxina, producida por Campylobacter es una

protena grande, termolbil, con una masa molecular de 60-70 megadaltons,


regulada por cromosomas. Comparte algunas propiedades funcionales e
inmunolgicas con las toxinas del clera y la toxina termolbil de E.coli. Algunos
aislamientos de Campylobacter jejuni elaboran una citotoxina que es toxica para
un nmero de clulas de mamferos. La citotoxina es termolbil, parcialmente
sensible a la tripsina, no deslizable, con peso molecular de 12000 - 14000 daltons,
y no es neutralizada por suero inmune a la toxina de shiga o a la citotoxina de
Clostridium difficile, por lo que es inmunolgicamente distinta. El efecto citoletal de
la citotoxina del Campylobacter jejuni es diferente al efecto citoptico producido
por la citotoxina de Clostridium difficile (Konkel, et al 2001).
16

La capacidad de producir enfermedad parece estar relacionado con la produccin


de enterotoxinas. Las cepas fuertemente productoras de toxina fueron ms
probablemente aisladas de individuos con diarrea, aunque la produccin de toxina
es solo un aspecto del total de la virulencia potencial de los patgenos entricos.
Su produccin juega un importante papel en la patognesis de la diarrea (Konkel,
et al 2001).
5.7. Factores de virulencia de Campylobacter jejuni:
Campylobacter jejuni, expresa varios factores de virulencia, los cuales se
mencionan a continuacin:
Flagelo: C. jejuni lo requiere para la motilidad y la quimiotaxis en la colonizacin
del intestino, lo cual lo ayuda a penetrar la barrera mucosa. Tambin est
involucrado en la adhesin y la invasin de las clulas epiteliales, mediante la
sntesis de protenas que facilitan la penetracin a la clula husped (Vliet, et al
2001).
Pili: Tambin ayuda en la adherencia, pero en menor proporcin que el flagelo.
(Vliet, et al 2001).
Toxinas: Son protenas sintetizadas por Campylobacter jejuni, presentan efecto
citoptico (Vliet, et al 2001). En recientes estudios se han clasificado al menos 6
clases de toxinas. Hurtado y Rojas(2005), una de ellas es la toxina de distensin
citoletal (CDT). Dicha toxina provoca una distensin progresiva en las clulas,
caracterizada por la elongacin e hinchazn casi cinco veces su tamao normal,
lo cual provoca una detencin irreversible de la fase de transicin del ciclo celular;
esto evita que la clula entre en la fase de mitosis, mediante el impedimento de la
desfosforilacin de la subunidad cataltica de la quinasa dependiente de ciclina
(CDC2), causndole la muerte o la desintegracin celular (Konkel, et al 2001). La
toxina de distensin citoletal resulto ser codificada por tres genes adyacentes
CdtA, CdtB y CdtC, las cuales codifican protenas de aproximadamente 30,29 y
21Kda, respectivamente, su produccin no es interferida por ambientes
modificados (alteraciones en el hierro, temperatura, fase de crecimiento).Siendo
su subunidad activa la CdtB, presenta homologa con la DNasa de mamferos;
tambin se puede reconstituir a partir de la recombinacin de las protenas CdtA,
CdtB y CdtC y dicha toxina reconstituida presenta actividad biolgica. Las tres
17

protenas estn asociadas a la membrana y tienen que ver en la estimulacin proinflamatoria (Kay, et al 2001).
Siderforos: Son sistemas de adquisicin de hierro frrico y ferroso del husped,
el cual contribuye en la patognesis bacteriana. Campylobacter jejuni es capaz de
utilizar los compuestos del grupo hemo para adquirir hierro, mediante la hemlisis.
Estos sistemas de captacin de hierro estn presentes en todas las cepas
analizadas hasta la fecha (Vliet, et al 2001).
Lipopolisacridos: Se encuentra en la membrana externa de la pared celular,
estn implicados en la resistencia de suero, en la toxicidad y la adhesin. Tambin
se cree que es responsable de la mmica estructural de los ganglisidos humanos
y produce la formacin de autoanticuerpos que lleva a la desmielinizacin, lo cual
est involucrado al sndrome de Guillain Barre (Vliet, et al 2001).
Protenas de defensa frente a perxidos: Cuando C. jejuni tiene que hacer frente a
metabolitos de oxgeno txico liberadas durante el metabolismo normal o al entrar
en contacto con las defensas inmunitarias del husped, sintetiza dos protenas, el
hidroperxido de catalasa y alquil-reductasa; cuyo mecanismo consiste en
convertir el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno mediado por la catalasa y
por lo tanto se elimina el perxido de hidrgeno (Vliet, et al 2001).
Protenas de choque trmico 50S: Tiene un funcin importante en la
termotolerancia, el cual le da la capacidad de responder a un cambio de
temperatura desde 4C en agua, leche y carne, 37C en el hombre y 42C en el
intestino aviar (Vliet, et al 2001).
5.8. Infecciones Extraintestinales:
Adems del tracto gastrointestinal, el Campylobacter jejuni tambin puede afectar
a otras partes del cuerpo, como son las infecciones extra intestinales que se
presentan ms probablemente en pacientes con factores pre disponentes o que
estn en las etapas extremas de la vida, como son los nios, ancianos y personas
inmunodeprimidas; estas personas pueden sufrir las siguientes complicaciones a
partir de haber sufrido un proceso diarreico Fundacin once (2011). Aunque
generalmente no hay complicaciones posteriores, pero en un 15 - 20% de los
casos pueden haber recadas y en un porcentaje mucho menor, algunas secuelas
ms graves (Romero, et al 2002), las cuales son:
18

Bacteremias: que son raras, es cuando, las bacterias pueden circular en el


torrente sanguneo. Esto es ms comn en la infancia y en los ancianos, y en
aquellos

con

enfermedades

crnicas

sistemas

inmunitarios

dbiles.

Dependiendo del paciente, este trastorno puede resolverse sin sntomas o puede
afectar a una serie de rganos y dentro de sus complicaciones se incluyen
colecistitis, infeccin del tracto urinario, sndrome de Reiter y meningitis
(Fundacion once 2011).
Meningitis: Es una infeccin bacteriana de las membranas que cubren el cerebro
y la mdula espinal (meninges (Medineplus 2011), que parece presentarse
secundariamente a la infeccin, tambin ha sido informado en prematuros
(Romero, et al 2002).
La artritis reactiva: es un proceso que se presenta en un 1% de los pacientes con
campylobacteriosis. Se trata de un proceso estril post infeccioso que se
manifiesta normalmente entre los 7 y 14 das despus del comienzo de los
sntomas. La duracin de la artritis oscila desde varias semanas hasta un ao y
aunque puede llegar a ser incapacitante, el pronstico suele ser bueno. Cuando la
artritis forma parte de una triada de sntomas acompandose de uretritis y
conjuntivitis, el proceso se denomina sndrome de Reiter (Garcia, et al 2006).
En el embarazo: Las infecciones por Campylobacter jejuni han sido relacionadas
con aborto espontneo, bitos prematuros y sepsis neonatal. Aunque la infeccin
tiende a ser benigna, puede tener complicaciones serias al feto o neonato,
especialmente si se presenta en el tercer trimestre del embarazo. Recientemente
se ha informado un caso de aborto sptico debido a C. jejuni, el cuadro se
present en una mujer con diarrea, la presencia de corioamnionitis puede
incrementar la posibilidad de infeccin ascendente ms que difusin septicmica.
(Romero, et al 2002).
Sindrome de Guillian Barre: aproximadamente 1 de cada 1000 pacientes con
enteritis por Campylobacter desarrolla un problema neurolgico que ocasiona
parlisis, llamado sndrome de Guillain - Barr. Los sntomas iniciales de este
sndrome incluyen sensacin de ardor y entumecimiento muscular que pueden
progresar a una parlisis flcida. Aunque la mayor parte de los afectados se
recuperan, aproximadamente el 15% fallecen y otro 15% sufre complicaciones
crnicas (Garcia, et al 2006). La parlisis se asocia con la desmielinizacion de los
19

nervios perifricos. Presentndose tres semanas despus de producirse la diarrea


(Romero, et al 2002).
5.9. Epidemiologa
La campylobacteriosis constituye una zoonosis de distribucin mundial, en la que
una gran variedad de animales actan como reservorios (Murray, et al 2009), y
que afecta con mayor incidencia a los pases en vas de desarrollo. Estas
bacterias parece que constituyen la principal causa de gastroenteritis en el
hombre por bacterias, por delante incluso de salmonelas y shigelas, Pumarola
et,al(1995). Varias especies del gnero Campylobacter se asocian con patologas
humanas, pero Campylobacter jejuni es con mucho la ms frecuente (Mims, et al
1999). Campylobacter jejuni es agente causal de diarreas, siendo considerado el
ms virulento por su mayor resistencia a la fagocitosis (Malbran 2001).
La enteritis, causada por Campylobacter, es la forma ms frecuente de diarrea
aguda. Esta enfermedad es muy comn en pases industrializados, as como en
los pases en desarrollo, en los cuales se ha encontrado que afecta a la gente de
todas las edades, teniendo una distribucin binomial en nios menores de 4 aos
y adultos jvenes de 15 a 44 aos de edad (Cervantes, et al 2007).
En los pases desarrollados, la enfermedad surge habitualmente en el primer ao
de vida y tambin en gente joven comprendida entre los 10 y los 30 aos de edad,
en tanto que en los pases en vas de desarrollo aparece a lo largo de los
primeros 5 aos de vida (Pumarola, et al 1995).
El ser humano adquiere la infeccin por C. Jejuni tras consumir alimentos, leche
o agua contaminada; las aves de corral contaminadas son las responsables de
ms de la mitad de las infecciones por Campylobacter en los pases
desarrollados. Los productos alimentarios que neutralizan los cidos gstricos (p.
ej., la leche) reducen de forma importante la dosis infecciosa necesaria para el
establecimiento de la infeccin (Murray, et al 2009).
La incidencia actual de las infecciones por Campylobacter jejuni no se conoce
porque la enfermedad no es de declaracin obligatoria. Sin embargo, se ha
calculado que ocurren anualmente ms de 2 millones de infecciones en EE.UU., y
que estas infecciones son ms frecuentes que las infecciones por Salmonella y
Shigella juntas (Murray, et al 2009); mientras que en pases subdesarrollados, en
particular en Amrica Latina, la realidad parece ser diferente; estudios de aos
20

recientes en nios con diarrea muestran que, con frecuencias variables


dependiendo de la regin y el origen de poblacin estudiada, Campylobacter se
encuentra en un porcentaje menor que otras bacterias; principalmente
Escherichia coli enteropatgena y Shigella suelen predominar (Camas 2006).
Se ha observado que las infecciones por estas bacterias son de tipo estacional,
sobre todo en climas templados donde ocurre dos veces al ao en verano e
invierno (Cervantes, et al 2007), por lo que la enfermedad es ms frecuente en los
meses clidos (Murray, et al 2009),reportndose adems que produce dos tipos
de diarrea: la diarrea inflamatoria con fiebre, moco y sangre en el excremento con
un gran contenido de leucocitos, y la diarrea sin inflamacin con excremento
acuoso y ausencia de leucocitos y sangre (Cervantes, et al 2007).
Reservorios animales:
Campylobacter jejuni se encuentran como comensales en el tracto gastrointestinal
de animales salvajes y domsticos as como en los rganos reproductivos de
diversas especies animales (Forbes, et al 2009), por lo que muchos de los casos
de enteritis humana han sido asociados al contacto con animales, agua
contaminada o alimentos de origen animal (Malbran, 2001).
Como en el caso de las salmonelas, hay un amplio reservorio animal de
Campylobacter jejuni en vacas, ovejas, roedores, aves de corral y aves silvestres.
Las infecciones se adquieren mediante el consumo de alimentos contaminados,
especialmente carne de aves, leche o agua. Estudios recientes han puesto de
manifiesto una relacin entre la infeccin y el consumo de leche de botellas cuyas
tapas haban sido picoteadas por aves silvestres. Los animales domsticos, como
perros y gatos, pueden infectarse y transmitir la infeccin a sus dueos, sobre
todo a nios pequeos (Mims, et al 1999).
Campylobacter jejuni se transmite a los humanos a travs de alimentos
contaminados, ms frecuentemente aves, cerdo, almejas crudas, otros bivalvos, o
en aguas superficiales no sujetas a cloracin. C. jejuni es un residente normal del
intestino de las aves, y por ello virtualmente todos los pollos y pavos o portan. Por
el contrario, la ternera es raramente un vehculo transmisor (Madigan, et al 2004).
Reservorios humanos:
Desde hace tiempo se sabe que causan enfermedad diarreica en animales, pero
tambin son una de las causas ms frecuentes de diarrea en los seres humanos,
21

(Roit). La difusin de persona a persona por la va fecal-oral es poco frecuente, al


igual que la transmisin a partir de manipuladores de alimentos (Mims, et al
1999): pero es importante la transmisin fecal-oral en lactantes, que no controlan
esfnteres (Malbran 2001).
Reservorios ambientales:
Campylobacter jejuni se encuentra asociada con ms frecuencia a infecciones
humanas y por lo general se transmiten a travs de alimentos, leche o agua
contaminada por lo que el agua contaminada, puede ser la fuente de brotes de
Campylobacteriosis, sobre todo por el consumo de la misma y en vinculacin con
actividades recreacionales. A diferencia de otros agentes de gastroenteritis
transmitida por alimentos, como Salmonella, Campylobacter no se multiplica en el
alimento (Forbes, et al 2009).
En los pases industrializados el microorganismo se transmite principalmente a
travs de alimentos de origen animal por ejemplo en Dinamarca constituye la
causa ms comn de enfermedad zoontica transmitida por alimentos, con 82
casos por cada 100,000 habitantes, mientras que en los pases menos
desarrollados predominan la transmisin por alimentos y aguas contaminadas con
excretas as como el contacto directo con personas o animales enfermos (Camas
2006).

Factores de riesgo
La infeccin por Campylobacter constituye una zoonosis de distribucin mundial.
Las especies de Campylobacter son habitantes microaerobios del tubo digestivo
de varios animales como las aves de corral. En un estudio se recolect muestras
fecales de pollos escogidos al azar en carniceras de la ciudad de Nueva York
para analizarlas en busca de Campylobacter, en el 83% de las muestras se
detectaron ms de 106 unidades formadoras de colonias por g de heces (Forbes,
et al 2009).
Son especialmente sensibles las personas jvenes (15 - 24 aos) y los nios de
corta edad (1 - 4 aos). En un brote que se present en una escuela en Inglaterra
causado por contaminacin de un depsito de agua con excrementos de pjaro,
22

se calcul que la dosis infecciosa haba sido de 500 microorganismos y en otro


estudio diferente, una dosis parecida en la leche caus enfermedad en un
voluntario. La movilidad, la quimiotaxia y la forma de sacacorchos de las clulas
son, todos ellos, factores importantes en la virulencia de Campylobacter,
permitindole atravesar el moco viscoso que cubre la superficie del epitelio del
intestino. Estudios realizados con Campylobacter jejuni han puesto de manifiesto
una respuesta quimiotctica hacia el azcar L-fucosa, hacia varios aminocidos y
hacia el moco intestinal de ratones y cerdos. Aunque Campylobacter no posee
fimbrias, posiblemente posee otras adhesinas que le permiten adherirse a las
clulas del epitelio intestinal una vez ha sido atravesada la barrera de la mucosa
(Camas 2006).
En personas infectadas con VIH/SIDA la diarrea puede ser causada por diversos
agentes oportunistas entre ellos Campylobacter el cual se asocia a la liberacin
de toxinas cuya funcin es estimular la secrecin intestinal de agua, cloro y sodio.
(Camas 2006).
Campylobacter jejuni es causa importante de diarrea aguda en viajeros que
visitan zonas en vas de desarrollo. No soportan durante mucho tiempo
situaciones de desecacin o congelamiento, caracterstica que limita su
transmisin. Sobreviven en la leche, otros alimentos o el agua a 4C durante una
semana. La desinfeccin con cloro y la pasteurizacin destruye al microorganismo
(Malbran 2001).
Va de transmisin:
La transmisin se realiza de manera principal por la ingestin de alimentos o de
agua contaminada a partir de heces de animales, pero tambin por manipuladores
portadores. Tienen particular inters la leche no higienizada y las carnes, y puede
haber contagio directo por contacto con animales y tambin interhumano por va
fecal u oral. La madre transmite el microorganismo al feto y recin nacido, por va
placentaria o vaginal (Pumarola, et al 1995).
El microorganismo se adquiere por va oral (ingestin de comidas y bebidas
contaminadas) o por contacto con animales infectados. Campylobacter es
sensible al pH gstrico, por lo que debe ingerirse un inculo de 10 4-6 para que se
produzca la infeccin, sin embargo en algunos casos es altamente infectivo,
provocando la infeccin con dosis del orden de 500 microorganismos. El periodo
23

de incubacin es de 1 a 10 das con una media de 2 a 5 das. La infeccin afecta


tanto intestino delgado como grueso (Malbran 2001).

Fig. 05. Mecanismo de transmisin de Campylobacter jejuni en el hombre. Imagen obtenida de Revista
Nature Reviews Microbiology (Pallen, et al 2007).

5.12. Diagnstico de Laboratorio


a.

Muestra:

La muestra habitual es una evacuacin diarreica (Brooks, et al 2005). Las


muestras habitualmente utilizadas en los procedimientos diagnsticos son las
heces o hisopos rectales. Cuando se sospeche bacteriemia, se tomar sangre y
las muestras adecuadas en infecciones localizadas (Pumarola, et al 1995).
b.

Recoleccin, transporte y procesamiento de las muestras

Campylobacter jejuni se encuentra en las heces a 25C por pocas horas, pero
sobrevive por lo menos 2 semanas a 4C en heces, leche, agua y orina. As, los
especmenes en el hospital que no pueden ser procesados en pocas horas,
pueden ser colocados en un refrigerador un da o dos. Los microorganismos que
se encuentran en hisopados pueden ser inoculados en un medio llamado CaryBlair, el cual se almacena a 4C. Los cultivos puros de Campylobacter jejuni
deben ser almacenados a una temperatura adecuada en un caldo semislido
Brucella enriquecido con sangre de oveja en un 10% (Camas 2006).
No se requieren consideraciones especiales para la recoleccin, el transporte y el
procesamiento de las muestras clnicas de heces con ms de dos horas de
24

retraso debe colocarse en el medio de transporte de Cary-Blair o en Campy to,


un caldo base de tioglicolato con agar al 0.16%. El medio de transporte de CaryBlair tambin es adecuado para otros patgenos entricos; las muestras recibidas
en este medio de transporte deben ser procesadas de inmediato o conservadas a
4C hasta su procesamiento (Forbes, et al 2009).
c.

Examen microscpico directo:

El examen directo de las heces es una herramienta de utilidad en la investigacin


inicial del paciente con enteritis. La microscopia de campo oscuro o de contraste
de fases, sobre todo en la fase aguda de la enfermedad, puede revelar la
movilidad caracterstica de Campylobacter que aporta un diagnstico presuntivo
en forma rpida. Tambin puede observarse frotis teidos por tcnica de Gram
modificado para observar bacilos Gram-negativos sugestivos del germen, pero la
sensibilidad de este mtodo es del 50 - 75%. La microscopia directa tambin sirve
para demostrar hemates y polimorfonucleares que estn presentes en las heces
de la mayora de pacientes con eventos por Campylobacter (Hurtado, et al 2008).
El gnero Campylobacter se compone de microorganismos delgados que no
pueden observarse con facilidad cuando se tien las muestras. Las clulas, con
sus caractersticos movimientos rpidos, se pueden detectar en un microscopio
de campo oscuro o de contraste de fase en muestras recogidas en fresco (Murray,
et al 2009). Dada su morfologa microscpica caracterstica, es decir bacilos
pequeos y curvos o en alas de gaviota que se tien dbilmente como gran
negativos, las especies de Campylobacter algunas veces pueden detectarse con
la tincin de Gram directa en la materia fecal (Forbes, et al 2009).
d.

Aislamiento:

El diagnostico se confirma mediante el aislamiento del germen en medios


especiales. Se debe sealar que el cultivo cobra especial importancia en el
diagnstico de enfermedad sistmica ya que es la nica forma de demostrar
bacteremia (Hurtado & Rojas 2008). El diagnstico definitivo se hace mediante
aislamiento del organismo causante. Las propiedades que se utilizan para el
aislamiento selectivo de Campylobacter jejuni en muestras de heces, son: el
microorganismo crece mejor en atmsferas con concentraciones bajas de oxgeno
(5%-7%, microaerfilos) y elevadas de dixido de carbono (5% - 10%). Adems,
C. jejuni crece con mayor facilidad a 42C que a 37C.Tambin se ha usado su
25

pequeo tamao (0,2 a 0,5 um de dimetro) para recuperar las bacterias por
filtracin de las heces. Estos microorganismos pasan a travs de filtros de 0,45
um, mientras que otras bacterias quedan retenidas (Murray, et al 2009).
Puede utilizarse un mtodo de filtracin junto con un medio de cultivo no selectivo,
en el cual se coloca un filtro (acetato de celulosa con poros de 0.65 mm) sobre la
superficie del agar y se agrega una gota de material fecal sobre l. La placa se
incuba con la tapa hacia arriba. Despus de 60 minutos a 37C se extrae el filtro y
se vuelve a incubar la placa en una atmsfera microaerobia. Dado que los
microorganismos pueden moverse a travs del filtro, el microorganismo se elimina
de manera eficaz de la flora contaminante de materia fecal y crecen colonias
sobre la superficie del agar (Forbes, et al 2009).
d. Mtodos de aislamiento:
El aislamiento exitoso de C. jejuni de las heces depende del uso de medios
selectivos (p. ej., Campy-Thio, Campy-BAP), la incubacin a temperatura
ambiente (42 C) y la atmsfera apropiada de incubacin (oxgeno al 5%, CO 2 al
10%, nitrgeno al 85%). Se ha comunicado que una tcnica de filtracin de
membrana que se utiliza con placas de agar sangre no selectivas es tan eficaz
como el uso de medios selectivos para el aislamiento de C. jejuni. Este mtodo
tiene la ventaja de permitir el aislamiento de campylobacterias sensibles a los
antibiticos (Koneman, et al 2008).
d.1.1 Cultivo:
Las caractersticas del cultivo son muy importantes para el aislamiento y la
identificacin de C. jejuni. Se requieren medios selectivos, y la incubacin debe
efectuarse en atmsfera con O 2 reducido (5% O2) y adicin de CO2 (10% CO2)
(Brooks, et al 2005). Los medios selectivos deben contener sangre o carbn con
el fin de eliminar los radicales txicos de oxgeno, y se aaden antibiticos para
evitar el crecimiento de los microorganismos contaminantes. Campylobacter son
microorganismos que crecen con lentitud y generalmente necesitan un perodo de
incubacin comprendido entre 48 y 72 horas o, incluso ms (Murray, et al 2009).
Una manera relativamente sencilla de producir la atmsfera de incubacin es
colocar las placas en copiadores de incubacin anaerbica sin el catalizador y
producir el gas con un paquete generador o por intercambio gaseoso. La
incubacin de las placas primarias debe ser a 42C; aunque el C. jejuni crece bien
26

entre 36 a 37C, la incubacin a 42C impide el crecimiento de la mayor parte de


las otras bacterias presentes en las heces y simplifica as la identificacin del C.
jejuni (Brooks, et al 2005).
Para el aislamiento de especies de Campylobacter a partir de heces, es
fundamental usar medios selectivos y condiciones ptimas de incubacin (Forbes
et al 2009). Estn en amplio uso varios medios selectivos, los que se basan en
agar sangre y antibiticos; los ms usados son Skirrow, Butzler y Campy-BAP.
(Brooks, et al 2005).
En general no se recomienda el uso sistemtico del caldo Campy de
enriquecimiento ya que los individuos enfermos excretan grandes cantidades de
bacterias (106 - 109) por g de materia fecal. Los caldos de enriquecimiento
pueden ser beneficiosos si las muestras de heces se retardan en el trnsito o si
se dejan a temperatura ambiente demasiado tiempo (Koneman, et al 2008).
En los casos de enfermedad extraintestinal el aislamiento de Campylobacter que
producen septicemia crece en la mayora de los medios para hemocultivos; no
requiere medios selectivos, aunque pueden requerirse tiempos de incubacin tan
prolongados hasta dos semanas, para que se observe desarrollo (Forbes, et al
2009).
Se han creado varios medios selectivos para permitir el aislamiento de C. jejuni en
heces. Los nombres de estos medios, su composicin, se presentan en el
siguiente cuadro:

FRMULAS PARA MEDIOS SELECTIVOS PARA EL AISLAMIENTO DE


Campylobacter jejuni
Medio
Butzler

MEDIO
selectivo

de

BASE
Medio de tioglicolato lquido

ADITIVOS

Agar 3%
Sangre de carnero (10%)
Bacitracina (25 000 UI/L)
Novobiocina (5mg/L)
Colistina (10 000 UI/L)
Cefalotina (15mg/L)

27

Agar sangre de Skirrow

Base de agar sangre 2

Actidiona (50mg/L)
Sangre de caballo lisada (7%)
Vancomicina (10 mg/L)
Polimixina B (2 500UI/L)

Medio de Blaser (Campy-

Base de agar para brucelas

Bar)

Trimetoprim (5 mg/L)
Sangre de carnero (10%)
Vancomicina (10 mg/L)
Trmetoprim (5 mg/L)
Polimixina B (2 500 UI/L)
Cefalotina (15 mg/L)

Medio

selectivo

Campylobacter

para
de

Preston

Caldo de nutrientes 2

Anfotericina B (2 mg/L)
Sangre de caballo lisada

Agar de Nueva Zelanda al

saponina

1.2%

Trmetoprim (10 ug/mL)

con

Polimixina B (5 UI/L)
Rifampicina (10 ug/mL)
Medio sin sangre para

Caldo de nutrientes 2

Cicloheximida (100 ug/mL)


Carbn bacteriolgico

Campylobacter Preston

Agar de Nueva Zelanda al

Desoxicolato de sodio

1.2%

Sulfato ferroso
Piruvato de sodio
Hidrolizado de casena

Medio para Viriones de

Base de agar de Columbia

Butzler

Cefoperazona (32mg/L)
Sangre de carnero desfibrinada
Cefoperazona (15 mg/L)
Rifampicina (10 mg/L)
Colistina (10 000 UI/L)
Anfotericina B (2 mg/L)

Fuente: Datos tomados de Koneman y Allen 2008.

e.

Identificacin:

Dados los medios selectivos y las condiciones de incubacin para crecimiento, la


aparicin de colonias en uno de los medios selectivos con agar para
Campylobacter que ha sido incubado a 42C en la atmsfera descrita antes ya
constituye una prueba presuntiva de que el crecimiento pertenece a una de las
especies de Campylobacter termfilos (principalmente C. jejuni) (Koneman, et al
2008).
e.1 Identificacin preliminar
28

La identificacin preliminar de las cepas se basa en el crecimiento en unas


condiciones seleccionadas y en su caracterstica morfologa microscpica.
(Murray, et al 1993).
e.1.1 Caractersticas del crecimiento:
Luego de la incubacin, las colonias pueden apreciarse en las placas en 24 - 48
horas, aunque a veces pueden ser necesarias 72 - 96 horas. Estas placas deben
examinarse en busca de las colonias caractersticas, que son de color gris rosado
o gris amarillento y con aspecto mucoide; algunas colonias pueden exhibir un
efecto de extensin junto a la lnea de estra. Sin embargo, tambin se observan
con frecuencia otras morfologas de colonias, lo que depende de los medios de
cultivo utilizados (Forbes, et al 2009).
La morfologa de las especies de Campylobacter en agar selectivo vara desde
colonias grises, planas y de forma irregular que pueden ser secas o hmedas
hasta colonias redondeadas, convexas y brillantes con bordes definidos. Las
colonias tienden a formar un crecimiento confluente a lo largo de las lneas de
siembra sobre la superficie del agar. La identificacin puede confirmarse adems
realizando pruebas rpidas de catalasa y citocromo oxidasa de C. jejuni, C. coli y
C. lari dan pruebas positivas en caldo (Koneman 2008),
e.1.2 Morfologa microscpica en Tincin gram de colonias de Campylobacter.
Para la identificacin en frotis teido, la tincin con carbolfucsina como colorante
de contraste es mejor que la tincin con safranina. El diagnstico definitivo se
realiza por aislamiento microbiolgico e identificacin por bioqumica bacteriana.
(Romero 2007).
Una vez aisladas, el C. jejuni puede identificarse con facilidad dado que estas
campylobacterias son las nicas que hidrolizan el hipurato. Adems esta especie
es resistente a la cefalotina y suele ser sensible al cido nalidxico, aunque en
ocasiones se observan cepas resistentes (Koneman 2008).
e.2 Identificacin definitiva
La morfologa de las colonias y las caractersticas de tincin de Gram de C. jejuni,
segn se describieron antes, tambin corresponden a la mayora de las otras
especies de Campylobacter. Sin embargo la identificacin definitiva de las
29

especies, depende de la determinacin de las caractersticas fenotpicas que se


presentan a continuacin segn Koneman (2008):
PROPIEDADES FENOTPICAS DE Campylobacter jejuni
CARACTERSTICAS
C. jejuni
Oxidasa
+
Catalasa
+
Reduccin de nitratos
+
Ureasa
Hidrlisis de:
Hipurato
Indoxil acetato

+
+

Crecimiento a:
25C
37C
42C
Crecimiento en 1% de glicina
Sensibilidad a:
cido nalidxico
Cefalotina

+
+
+
S
R

Fuente: Modificado de Murray PR et al, editors, 2009.

+, reaccin positiva;-, reaccin negativa; R, resistente; S, sensible.


5.13 Prevalencia e incidencia:
Desde su primer aislamiento en materia fecal de individuos con diarrea,
Campylobacter sp, ha comenzado a reconocerse como una de las principales
causas de gastroenteritis en el mundo. Desde luego, considerando las diferentes
vas de transmisin, hay que discriminar entre los pases industrializados y los
subdesarrollados.
Debido a que la vigilancia de este germen es generalmente incompleta, su
incidencia no se conoce en la mayora de los pases del mundo. No obstante, es
posible realizar estimaciones en base a registros de laboratorios. Por ejemplo, en
EEUU (donde se estiman ms de 2 millones de infecciones anuales por esta
bacteria (Blaser 2000) y en otros pases desarrollados, estos registros indican que
Campylobacter jejuni se asla en heces de pacientes con diarrea con mayor
frecuencia que Salmonella y Shigella.
En Inglaterra, los aislamientos reportados de Campylobacter sp. superan a los de
Salmonella y Shigella en conjunto (Blaser 2000). En Dinamarca constituye la
30

causa ms comn de enfermedad zoontica transmitida por alimentos, con 82


casos/100000 habitantes (Danmap 2001).
En pases subdesarrollados, en particular en Amrica Latina, la realidad parece
ser diferente. Estudios de aos recientes en nios con diarrea (De Almeida 1988).
muestran que, con frecuencias variables dependiendo de la regin y el origen de
poblacin estudiada, Campylobacter se encuentra en un porcentaje menor que
otras bacterias; principalmente Escherichia coli enteropatgeno (EPEC) y Shigella
suelen predominar. Slo en uno de estos estudios se encuentra que
Campylobacter es la principal causa de diarrea bacteriana (Urrestarazu, et al
1999). En cuanto a la prevalencia en personas sanas, asintomticas, en EE UU
se reporta que es menor al 1 %. En cambio en pases en desarrollo es mucho
mayor, encontrndose en algunos casos que la frecuencia de Campylobacter en
nios con diarrea y en controles sin diarrea es similar (Notario, et al 1996).
La enteritis por campilobacterias se parece a otras diarreas bacterianas agudas,
en particular a la disentera por Shigella. Las fuentes de infeccin pueden ser
alimentos (p. ej., leche, aves poco cocidas), contacto con animales o humanos
infectados y sus excretas. Los brotes originados de una fuente comn, por
ejemplo leche no pasteurizada, a veces requieren medidas de salud pblica para
su control (Brooks, et al 2005).
5.14 Manifestaciones clnicas, segn Romero (2007)
Las manifestaciones clnicas de la infeccin por Campylobacter dependen de las
especies involucradas. El sndrome ms comn producido por las especies de
Campylobacter es la enteritis producida por Campylobacter jejuni (61 a 100% de
los aislamientos), seguido por Campylobacter coli.
La infeccin por Campylobacter jejuni, despus de un periodo de incubacin de
tres a cinco das, produce desde formas asintomticas hasta una enfermedad
muy severa. La enteritis por Campylobacter jejuni tiende a adoptar dos variantes
clnicas: un sndrome diarreico secretor con heces lquidas abundantes y vmitos,
acompaados de deshidratacin, una enfermedad parecida a la disentera, con
fiebre, dolor abdominal, cefalea y vmito en el 25% de los casos.
Las heces con moco y sangre, son comunes con abundantes leucocitos
polimorfonucleares en el examen del moco fecal. La frecuencia de sangre es ms
frecuente en pacientes peditricos, ya que ambos cuadros ms graves de ambos
31

sndromes se han observado en nios menores de doce meses de edad. En la


mayora de los casos de las dos variantes clnicas de enteritis se presenta un
prdromo de fiebre (que dura de pocas horas a das) acompaada de malestar
general, cefalea, dorsalgia, mialgias y debilidad. En pases en vas de desarrollo
la enfermedad es ms leve y la presentacin ms frecuente es la diarrea de tipo
acuoso, sobre todo en menores de cinco aos de edad y raramente entre los
adultos. Tambin han sido reportados en neonatos, la cual es benigna o
asintomtica. Sin embargo, las heces pueden contener sangre, moco y pus; la
fiebre con frecuencia est ausente.
5.2

Marco conceptual:

Agente etiolgico: Entidad biolgica, fsica o qumica

capaz de causar

enfermedad (Losz 2005).


Campylobacter:

Gnero de bacterias que se encuentran en los rganos de la

reproduccin, el tracto gastrointestinal y la cavidad oral de animales y del hombre.


Algunas especies son patgenas (Riva del Garda 2011). Gnero de bacteria que
es considerado por muchos la causa principal de la enfermedad entrica. Es
Gram negativa, por lo que no puede retener un tinte violeta cristalino durante el
proceso de tincin Gram. Las bacterias Gram-negativas aparecen rosadas o rojas
bajo el microscopio. Es una bacteria que es una causa comn de diarrea. Se la
asocia con aves de corral y con el agua sin tratar. Se transmite principalmente a
travs de alimentos contaminados y por el contacto con aves sin cocinar. Puede
causar el Sndrome Guillain - Barr, una enfermedad neuromuscular, en raras
ocasiones (Ayudin 2011).
Edad: Tiempo trascurrido desde el nacimiento, en el que se considera cuatro
estadios: infancia, adolescencia o juventud, madures y senectud. Dentro de los
cuales los ms susceptibles a las infecciones se encuentran en los estadios de
la infancia y la senectud (Redondo 2002).
Epidemiologa: La epidemiologa es la disciplina cientfica que estudia la
frecuencia y distribucin de las enfermedades y los trastornos de la salud, as
como sus causas y sus factores de riesgo en grupos de poblacin, en
comparacin del total u otros grupos, su curso consecuencias sociales y
econmicas. Tambin comprende el estudio del valor de los mtodos
32

diagnsticos, de las medidas profilcticas y de su representacin estadstica


(Redondo 2002).
Factores de riesgo: Variable asociada a la aparicin de una enfermedad o de un
fenmeno sanitario. Esta puede ser endgena (propia del individuo), exgena
(ligada al ambiente), predisponente (que hace vulnerable al sujeto) y precipitante
(que inicia el fenmeno patolgico) (Losz 2005).
Frecuencia: Frecuencia es una medida que se utiliza generalmente para indicar
el nmero de repeticiones de cualquier fenmeno o suceso peridico en la unidad
de tiempo (Redondo 2002).
Ganglisido: glucolpido complejo rico en hidratos de carbono; formado por cidos
grasos, esfingosina, hexosas, hexosaminas, y cido silico. Se encuentra en la
superficie externa de las membranas celulares sobre todo del cerebro y en menor
cantidad en el hgado, bazo y eritrocitos (Redondo 2002).
Husped susceptible: ser vivo que no tiene inmunidad especifica suficiente para el
agente infeccioso determinado y que al entrar en contacto con el puede
desarrollar una enfermedad. Hay factores del husped que afectan la
susceptibilidad al desarrollo de enfermedades aumentndola o disminuyndola y
son: estado nutricional, uso de drogas inmunosupresoras, enfermedades
crnicas, inmunidad natural y artificial, factores genticos, factores generales de
resistencia alterados, prdida de continuidad de la piel y mucosas (Wikiteka 2011).
Incidencia: Es el nmero de casos nuevos de una enfermedad, un sntoma,
muerte o lesin que se presenta durante un perodo de tiempo especfico, como
un ao. La incidencia muestra la probabilidad de que una persona en esa
poblacin resulte afectada por la enfermedad (Medlineplus 1997). Nmero de
nuevos casos de una enfermedad, en una poblacin, en determinado perodo de
tiempo (Woo 2011).
Infeccin: penetracin al organismo de microorganismos nocivos como bacterias,
virus, rickettsias, hongos y protozoos y su posterior multiplicacin y difusin por l
(Redondo 2002).
Infeccin aguda:

Es el trmino clnico que se refiere a la colonizacin del

hospedador, siendo estas de curso

severo, penetrante, que comienza

abruptamente, por lo que se califica al microorganismo como patgeno (Woo


2011).
33

Infectividad: Es la capacidad del germen de instalarse y multiplicarse en el


organismo, produciendo, o no, la enfermedad. Existe una dosis infectante mnima
para que se produzca la entrada e instalacin en el organismo (Cruz 2009).
Inmunologa: La inmunologa es una ciencia que estudia la inmunidad y todos los
fenmenos relacionados con los mecanismos de defensa de nuestro cuerpo,
tienen como funcin reconocer elementos extraos o ajenos dando una respuesta
(Redondo 2002).
Inculo: sustancia empleada para el aporte de sustancias inmunolgicas o de
suero inmune en el organismo con el propsito de producir inmunizacin.
(Redondo 2002).
Nutricin y estado de salud del husped: La interaccin o sinergismo de la
malnutricin y la infeccin es la causa principal de morbilidad y mortalidad de los
nios. La presencia simultnea de malnutricin e infeccin es el resultado de una
interaccin que tiene consecuencias ms serias sobre el husped de lo que
tendra el efecto aditivo si las dos se presentaran de modo independiente. Las
infecciones empeoran la malnutricin y sta aumenta la gravedad de las
enfermedades infecciosas (Cruz 2000).
Patogenicidad: Es la

capacidad de que se provoque la enfermedad en los

infectados, y depende del nmero de agentes que entran, de su virulencia, de la


capacidad de penetrar, multiplicarse e invadir y, sobre todo, de la mayor o menor
susceptibilidad del husped (Cruz 2009).
Prevalencia: Nmero de veces en que una enfermedad o evento de salud ocurre
en una poblacin y un tiempo determinados (Losz 2011).
Sndrome: Conjunto de sntomas, indicios, signos, seales, manifestacin o
manifestaciones que aparecen de manera simultnea, independientemente de las
causas que los producen y que ayudan a identificar un padecimiento. Es decir un
sndrome, es un conjunto de manifestaciones que puede deberse a varias causas
(Babylon 2011).

V.
V.1.

OBJETIVOS

Objetivo General
34

Determinar la prevalencia de Campylobacter sp. y los factores epidemiolgicos


asociados a la infeccin en nios menores de 5 aos atendidos en el Hospital
Carlos Monge Medrano de Juliaca.
V.2. Objetivos especficos
Identificar Campylobacter sp. a partir de muestras diarreicas en nios menores de
5 aos atendidos en el laboratorio del hospital Carlos Monge Medrano de Juliaca
mediante las pruebas de observacin directa y cultivo en agar campi.
Determinar la prevalencia de Campylobacter sp en diarrea aguda acuosa en nios
menores de cinco aos.
Identificar los factores socio epidemiolgicos asociados a Campylobacter sp en
nios menores de cinco aos.
VI.

HIPOTESIS:

Hiptesis General
Existe

relacin

significativa

entre

Campylobacter

jejuni

los

factores

epidemiolgicos en nios menores de cinco aos con enfermedades diarreicas


agudas en pacientes del Hospital Carlos Monge Medrano de Juliaca.
Hiptesis especficas
Se lograra aislar Campylobacter jejuni en cuadros de diarrea aguda acuosa en
nios menores de cinco aos atendidos en el enero - abril 2013, en una
proporcin del 40 %.
La incidencia de Campylobacter jejuni en diarrea aguda acuosa en nios menores
de cinco aos es significativa.
Los factores socio epidemiolgicos asociados a Campylobacter jejuni como
agente etiolgico en diarreas agudas en nios menores de cinco aos son
altamente significativos.
8.2.

Variables.

Incidencia de Campylobacter jejuni, asociados a Factores Socio Epidemiolgicos


en nios de cero a cinco aos que acuden al Hospital Regional Carlos Monge
Medrano de Juliaca.
Variable independiente
Aspectos Socio epidemiolgicos
35

Variable dependiente
Incidencia de Campylobacter jejuni

IX.

METODOLOGIA:

9.1 Tipo de investigacin:


El estudio de investigacin es descriptiva ya que es Observacional, analtico de
corte transversal. Descriptiva, porque, exhibe el conocimiento de la realidad tal
como se presenta en una situacin de espacio y de tiempo dado. Aqu se observa
y se registra, o se pregunta y se registra. Observacional, porque pretende
determinar las variables de estudio en un conjunto poblacional y transversal,
porque se tomar como referencia la prevalencia de la Campilobacter en universo
poblacional de rea de estudio.
9.2 Poblacin y muestra:
9.2.1. Poblacin
La poblacin de estudio estar constituida por los nios menores de cinco aos
que acuden al servicio de laboratorio del Hospital Carlos Monge Medrano de
Juliaca, entre enero a abril del 2013.
Criterios de Inclusin:
Nio menor de 5 aos de edad que acude al servicio de laboratorio del Hospital
Carlos Monge Medrano de Juliaca.
Nios que sean residentes del distrito donde se realizar el estudio.
Nio al cual se pueda tomar muestra de laboratorio para la identificacin de la
bacteria.
Criterios de Exclusin
Madre que no acepte que su hijo ingrese al estudio.
Nio en muy mal estado general
9.2.2. Muestra
Se realizar de acuerdo a los registros estadsticos del servicio de laboratorio del
Hospital Regional Carlos Monge Medrano de Juliaca
9.2.3. Mtodo Estadstico
36

Se utilizara la estadstica descriptiva e inferencial, para la recoleccin,


presentacin, descripcin, anlisis e interpretacin de los datos, que resulten de
Determinar los factores epidemiolgicos que condicionan la prevalencia de
Campylobacter jejuni en nios con enfermedades diarreicas agudas del Hospital
Carlos Monge Medrano de Juliaca
La estadstica Descriptiva se usara para resumir o describir los resultados de la
poblacin en estudio, mientras que la Estadstica Inferencial se utilizara para
obtener conclusiones en base a los datos aportados. En sus particularidades la
Inferencia distinguir la Estimacin y la Contrastacin de Hiptesis; como
estimacin se usaran las caractersticas de la muestra para hacer inferencias
sobre las caractersticas de la poblacin. Como contrastacin de hiptesis se
usara la informacin de la muestra para responder a interrogantes sobre la
poblacin en estudio.
En cuanto al mtodo de representacin de datos; se usar la distribucin de
frecuencias, que es una forma de sintetizar los datos y consiste en valerse de una
tabla para clasificar los datos segn su magnitud, en ella se seala el nmero de
veces que aparece cada uno de los valores, en este caso se usara una tabla de
doble entrada para interceptar los datos de la Variable dependiente que es
Incidencia de Campylobacter jejuni y la Variable independiente que son los
Aspectos Socio epidemiolgicos, segn los objetivos especficos trazados.
Tambin se usar el Grafico de caja y bigotes donde se dibujar una caja
extendindose del cuartl inferior de la muestra al cuartl superior, que es un
intervalo cubierto por la mitad de los datos (50%), los valores sern ordenados de
menor a mayor, y una lnea vertical que corresponder a la mediana (mitad de los
datos), los bigotes se dibujaran de los extremos de la caja a los valores ms
grandes y pequeos de los datos que se obtendrn, si llegan a existir valores
inusuales muy lejanos a la caja (Tukey los llamaba puntos atpicos) estos puntos
atpicos, son aquellos puntos ms all de 1.5 veces el rango intercuartil (ancho de
caja), se indicar un punto smbolo. Cualquier punto ms all de 3 veces el rango
intercuartil por arriba o debajo de la caja son llamados puntos extremos, y se
indicar por un punto smbolo con un signo ms (+) sobrepuesto encima de el.
Los bigotes se dibujaran entre los valores ms grandes y pequeos de los datos
que se obtendrn.
37

Para dar la validacin de los resultados se utilizara la Prueba de Ji Cuadrado


(X), con el objetivo de determinar si las variables referidas en la poblacin estudio
estn relacionadas, en base a la frmula siguiente:

Regin de decisin
= Se rechaza la Ho, caso contrario se acepta la Ho.
Dnde:
= Cuadrado calculada
= Ji cuadrado de tablas (tabular)

F= Numero de filas
C= Numero de columnas.

38

9.4 Operacionalizacin de variables


TIPO

DE

VARIABLE

VARIABLE

INDICADORES

INDICES

Presencia
Ausencia
Incidencia
de
Variable
Aislamiento de Positivo
Campylobacter
dependiente
Campilobacter Negativo
jejuni
Incidencia

sp.

ESCALA

%
Campilobacter
sp.

Crianza de Dentro de la casa


Nominal
Fuera de la casa
aves
No cra aves
2.
Hbitos Consume carne de aves
Nominal
Consume verduras crudas
alimenticios
Consume agua cruda
Se lava las manos antes de
1.

Hbitos comer
Se lava las manos despus
higinicos
de ir al bao
Variable
Factores Socio
Asea sus prendas de dormir
independie epide
4.
Tipo de Con material noble
nte
miolgicos
Con barro
vivienda
Estera
Recin nacido (0-5 das)
1 ao
2 aos
1.
Edad
3 aos
4 aos
5 aos
Femenino
2.
Sexo
3.

Masculino

9.5

Nominal

Nominal

Ordinal

Nominal

Mtodos y materiales:

9.5.1. Mtodos
Toma de muestra del tracto gastrointestinal (Instituto Nacional de Salud 1999)
En el servicio de laboratorio del Hospital Carlos Monge Medrano de Juliaca se
prepararn potes de boca ancha, bien limpios, adems esptulas de madera de
10 por 3 cm., limpias.
39

Estos potes debidamente rotulados y las esptulas, sern entregados a la madre


para que tome la muestra de heces en la casa.
Para la toma de muestra la madre debe tener en cuenta:
Abrir el pote, coger la esptula de madera con ella coger aproximadamente 5 cm 3
de heces del paal del nio, cuidando que la esptula entre en contacto con el
paal, depositar la muestra de heces en el pote y cerrar hermticamente,
desechar la esptula en la basura y lavarse las manos con agua y jabn.
La muestra debe ser llevada al laboratorio en las primeras horas de la maana del
da siguiente de haber sido tomada.
Rotulo del Pote:
Cdigo.
Nombres y Apellidos...
Edad: . Aos ... Meses .
Sexo ... Procedencia .
Fecha / / 2011

Procesamiento en el laboratorio
Todo el procedimiento de anlisis se realizar en el laboratorio ORION de la
ciudad de Puno donde se proceder a realizar los extendidos en lmina mediante
el mtodo de gram y cultivo en agar campi. El laboratorio ORION es el nico
laboratorio que realiza estos tipos de diagnsticos en la ciudad de Puno. Luego se
realizar un anlisis estadstico descriptivo de todos los datos recolectados y de
los resultados de diagnstico de las muestras en estudio para determinar la
incidencia de Campylobacter jejuni, en la poblacin elegida.
Toma de muestra
Para la toma de muestra se le entregar a la mam del paciente un potecito
colector para heces en la cual se le indicar la cantidad de muestra a obtener
para su procesamiento que ser de unos cinco mg aproximadamente de heces
lquidas y/o pastosas.
Procesamiento de muestra
Para el procesamiento de la muestra se utilizar el mtodo de la coloracin gram.

40

Fundamento: La diferencia entre una bacteria Gram positiva y una Gram negativa
radica fundamentalmente en la pared celular. Las Gram positiva poseen ms del
60% de su pared celular compuesta por murena (peptidoglucano) y el resto, est
representado por los cidos teicicos y otros componentes menos importantes.
Esta armazn murenica impide que el decolorante (alcohol-acetona) penetre la
pared, y por lo tanto, disuelva la unin salina formada entre el Cristal Violeta y el
Yodo con los componentes cidos (ribosomas y cido desoxirribonucleico del
filamento cromosmico).
No sucede lo mismo con las bacterias Gram negativa, cuya murena representa
menos del 10 % de los componentes de la pared. Actualmente, se conoce la
compleja estructura de las bacterias Gram negativa, las cuales tienen una pared
con gran cantidad de componentes grasos, especialmente lipoprotenas y
lipopolisacridos. Estos ltimos son los componentes fundamentales de la
llamada membrana externa, la cual es el lmite externo del espacio periplasmtico
de la pared. Aqu es donde radica la gran diferencia con las Gram positiva. La
escasa murena y la abundancia de lpidos, permiten una accin disolvente
poderosa del alcohol, slo o mezclado con la acetona. La disolucin de la pared
permite que el alcohol llegue a la intimidad del citoplasma bacteriano, llevndose
el colorante violeta y la bacteria queda decolorada.
El otro colorante empleado, la safranina, aadido posteriormente en la ltima
etapa de la coloracin, teir de rojorosado a las bacterias previamente
desteidas. No obstante, ninguna composicin qumica exclusiva de la pared
bacteriana parece explicar la coloracin con Gram; ya que las gruesas paredes de
las clulas de levadura, que tambin se tien como Gram positiva, tienen una
composicin qumica y una estructura diferente de las bacterias Gram positiva.
Tcnica de Gram
Se proceder a elaborar un frotis y fijarlo al calor. Se colocar la lmina que
contiene el extendido sobre un soporte adecuado para mantenerlo en posicin
horizontal.
1.

Cubrir la lmina con cristal violeta. Dejar actuar por un minuto. (Este es el

colorante primario que se une a la pared celular bacteriana).


2.

Lavar con agua corriente.


41

3.

Cubrir la lmina con lugol. Dejar actuar por un minuto. (Acta como

mordiente para la unin del colorante).


4.

Lavar con agua corriente.

5.

Sobre la lmina, deje correr el decolorante orgnico (alcohol-acetona)

hasta que la solucin de lavado no salga teida con el colorante violeta. Si lo


prefiere, puede mantener la lmina sujeta entre el dedo pulgar e ndice y colocarla
de manera que se obtenga un ngulo de 45. Por lo general, el tiempo requerido
para la decoloracin no sobrepasa los 10 segundos.
6.

Lavar de nuevo con agua corriente.

7.

Cubrir el frotis con una solucin de safranina (colorante de contraste). Dejar

actuar por 30 segundos.


8.

Lavar con agua corriente.

9.

Colocar la lmina con el frotis en posicin vertical para escurrir el exceso

de agua y permitir que seque espontneamente al aire. En su defecto, se puede


emplear papel secante.
10.

Colocar una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin y observar al

microscopio con objetivo de 100X y ocular de 10X, lo cual resulta en un aumento


total de 1.000X.
Cultivo en Agar Campi
Fundamento
Este medio favorece el crecimiento de especies de Campylobacter dado su
contenido de peptonas, dextrosa, extracto de levadura y sangre. Las peptonas
proveen compuestos de nitrgeno, carbono, azufre y trazas de otros ingredientes.
El extracto de levadura es una fuente de vitaminas del complejo B.
La sangre de carnero aporta otros nutrientes. La adicin de los agentes
antimicrobianos

anfotericina

B,

cefalotina,

polimixina

B,

trimetoprima

vancomicina suprime el crecimiento de la flora microbiana normal en muestras


fecales, facilitando as el aislamiento de C. jejuni y otras especies de
Campylobacter resistentes a la cefalotina, como el C. coli y C. lari.
Componentes
Frmula por litro de agua destilada
Componentes de Agar campy
Componentes

Cantidad (g)
42

Digerido pancretico de casena


Digerido pptico de tejido animal
Glucosa
Extracto de levadura
Cloruro sdico
Bisulfito sdico (sulfito hidrogenado de sodio)
Agar
Anfotericina B
Cefalotina
Trimetoprim
Vancomicina
Polimixina B
Sangre de carnero, desfibrinada
pH 7.2 +/- 0.2

10,0
10,0
1,0
2,0
5,0
0,1
15,0
2,0 mg
15,0 mg
5,0 mg
10,0 mg
2 500 UI/L
10%

9.5.2. Materiales:
Equipo y material para el trabajo en laboratorio:
EQUIPOS
Microscopio ptico revelation 3
Refrigerador LG 13 lts
Estufa Memer
Computadora LG 512 memoria ram
Impresora hp laser jet 1020
Cmara digital Sony 7mpx
MATERIALES
Lminas porta objetos x 50 unid
Potes colectores de heces de30 cc
Baguetas de madera x 100 uni.
Asa de colle
Mechero de alcohol
Soportes de laminas
REACTIVOS
Agar campi x 500 g
Batera de coloracin gran
Alcohol etlico de 96
Aceite de inmersin x 50 ml
MATERIAL DE BIOSEGURIDAD
Guantes x 50 pares
Mascarilla x 50 uni
Mandil
Leja clorox
Jabn lquido desinfectante
Bolsa de descarte
Alcohol
VII.

Cantidad
1
1
1
1
1
1
Cantidad
2
100
1
2
1
2
Cantidad
1
1
1
1
Cantidad
2
1
1
1
1
1
1

Unidad
Equipo
Equipo
Equipo
Equipo
Equipo
Equipo
Unidad
Cajitas
Unidades
Paquete
Unidad
Unidad
Unidad
Unidad
Frasco
Kit
Litro
Frasco
Unidad
Cajas
Caja
Unidad
Litro
Litro
Paquete
Litro

PRESUPUESTO

RECURSOS HUMANOS
43

PERSONAL
Ejecutor
TOTAL

C/U
Cantidad
2800.00 1

Unidad
Persona

Total
2800.00
2800.00

MATERIAL DE ESCRITORIO
INSUMO
Papel bond A-4 80 gr
Tinta para impresora
Lapiceros
Tablero
TOTAL

C/U
23.00
15.00
3.50
5.00

Cantidad
1
1
1
1

Unidad
Millar
Unidad
Unidad
Unidad

Total
23.00
33.00
3.50
5.00
64.50

SERVICIOS DE TERCEROS
RUBRO
Impresin de fotografas
Anillado
TOTAL

C/U
0.60
3.00

Cantidad
24
12

Unidad
Unidad
Unidad

Total
14.40
36.00
50.40

EQUIPOS
RUBRO
Microscopio ptico
Refrigerador
Estufa
Computadora
Impresora
Cmara digital
TOTAL

C/U
3800.00
750.00
1200.00
1000.00
180.00
900.00

Cantidad
1
1
1
1
1
1

Unidad
Equipo
Equipo
Equipo
Equipo
Equipo
Equipo

Total
3800.00
750.00
1200.00
1000.00
180.00
900.00
7830.00

RUBRO

C/U

Cantidad Unidad

Total

Lminas porta objetos

6.00

Cajita

12.00

Potes colectores de heces

0.50

100

Unidades

50.00

Baguetas de madera x 100 uni.

5.00

Paquete

5.00

Asa de colle

6.00

Unidad

12.00

Mechero

18.00

Unidad

18.00

Soportes

2.50

Unidad

5.00

MATERIALES

TOTAL
REACTIVOS
RUBRO
Agar campi x 100 gr

102.00

C/U
Cantidad Unidad
325.00 1
Frasco

Total
325.00
44

Batera de coloracin gram


Alcohol etlico de 96
Aceite de inmersin x 100 ml
TOTAL

350.00 1
18.00 1
85.00 1

MATERIALES DE BIOSEGURIDAD
RUBRO
C/U
Guantes x 50 pares
16.00
Mascarilla x 50 uni
25.00
Mandil
32.00
Leja
3.50
Jabn lquido desinfectante
21.00
Bolsa de descarte
5.00
Alcohol
18.00
TOTAL

Cantidad
1
1
1
1
1
1
1

Kit
Litro
Frasco

350.00
18.00
85.00
778.00

Unidad
Caja
Caja
Unidad
Litro
Litro
Paquete
Litro

Total
16.00
25.00
32.00
3.50
21.00
5.00
18.00
120.50

PRESUPUESTO GLOBAL 1
Recursos humanos
Material de escritorio
Servicios de terceros
Equipos
Materiales
Reactivos
Materiales de bioseguridad
TOTAL

2800.00
64.50
50.40
7830.00
102.00
778.00
120.50
11,745.40

PRESUPUESTO GLOBAL 2
Recursos humanos
500.00
Material de escritorio
64.50
Servicios de terceros
50.40
Equipos
En existencia
Materiales
102.00
Reactivos
778.00
Materiales de bioseguridad
120.50
TOTAL
1,614.90

XI.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES.

ACTIVIDADES
Revisin bibliogrfica
Elaboracin del proyecto
Redaccin del Proyecto
Correcciones del proyecto

I
X
X
X
X

II

MESES
III
IV

VI

45

Presentacin del proyecto


Aprobacin del proyecto
Ejecucin del proyecto
Obtencin de la muestra
Procesamiento de la investigacin
Procesamiento y anlisis de resultados
Elaboracin del informe de tesis
Redaccin de la tesis
Revisin del informe de tesis
Sustentacin
Publicacin

XII.

X
X
X
X
X

X
X
X
X

X
X
X
X
X
X
X
X
X

FINANCIAMIENTO.El presente trabajo ser autofinanciado.

46

XIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.

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WOO

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51

ANEXOS

ANEXO 01. FICHA Y/O ENCUESTA


Cod. _________
Apellidos y Nombres
Edad

aos ..

meses

Sexo ()

Fecha . /.. / 2011


Procedencia
Dpto.
Zona Urbana

Prov.

Distrito. ...........

Zona urbna perifrica

Zona rural

TIPO DE VIVIENDA
Material noble
Adobe
Esteras

)
(

52

Otros

SERVICIO DE AGUA
Potable

Pozo

Otro

)
(

CRIANZA DE ANIMALES
Cra animales

( SI )

( NO )

Que tipo

Aves

..

Mamferos

..

Otro

..

HABITOS HIGIENICOS
Se lava las manos antes preparar los alimentos del nio

( SI ) ( NO )

Se lava las manos antes de dar sus alimentos al nio

( SI ) ( NO )

Se lava las manos despus de ir al bao

( SI ) ( NO )

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO


FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
Escuela Profesional de Biologa

PROYECTO DE INVESTIGACION

Ttulo: PREVALENCIA DE Campilobacter jejuni Y FACTORES


EPIDEMIOLGICOS ASOCIADOS A LA INFECCION EN NIOS MENORES DE
CINCO AOS ATENDIDOS EN EL LABORATORIO DEL HOSPITAL CARLOS
MONGE MEDRANO JULIACA ENERO-ABRIL 2013

Responsables : Roxana Carolem Hancco Zaga

53

Puno Puno
2012

54

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