Uso de espectrometra de

absorcin atmica en alimentos

27 de junio de 2009
J. Rodrguez Clara, Ver.
Programa
Introduccin.
Preparacin de muestras.
Absorcin atmica.
Software
Introduccin
Introduccin
ETAPAS IMPLICADAS EN UN ANLSIS
Problema
Planteamiento del
problema analtico
Seleccin del mtodo
Diseo del plan de
muestreo
Toma de muestra
Tratamiento de la
muestra
M
u
e
s
t
r
e
o
Realizacin de
medidas
Interpretacin de
resultados
Introduccin
TIPOS DE MUESTREOS
Muestreo aleatorio o probabilstico.
Muestreo aleatorio simple.
Muestreo doble.
Muestreo estratificado.
Muestreo intencional.
Muestreo por atributos.
Muestreo por variables.
Muestreos sin norma.
Muestreo sistemtico.
Introduccin
DISEO DE UN PROGRAMA DE
MUESTREO
Caracterizacin de la fuente puntual
Estudio de reconocimiento / inspeccin
Estudio intensivo
Monitoreo (estacin de monitoreo o red de
monitoreo)
Estudios especiales.
Introduccin
PUNTOS PARA DEFINIR EL ESTUDIO
Identificacin del sitio.
Matriz ambiental: agua superficial, agua subterrnea, agua
potable, suelo, sedimento, aire, etc.
Tipo de muestra: simple o compuesta.
Nmero de muestras.
Duracin del estudio.
Frecuencia de muestreo: diario, mensual, anual, etc.
Tipo de toma de muestra: manual o automtica.
Parmetros a determinar.
Mediciones de campo.
Control de calidad: cadena de custodia, blanco de campo,
duplicados.
Seguridad e higiene.
Preparacin de muestras
Tcnicas de preparacin de muestras
Muestreo: Proceso o seleccin de una porcin
de material que represente o proporcione
informacin sobre el sistema de estudio.
Recoleccin de la muestra
Conservacin
Reduccin del tamao de partcula
Homogeneizacin
Submuestreo
Preparacin de muestras
Tcnicas de preparacin de muestras
MUESTRA BRUTA
Slida Lquida Gaseosa
Tratamiento muestra
bruta.
Secado
Divisin
Pulverizacin
Homogeneizacin Obtencin
Presin muestra
Separacin de fases:
Sin cambio qumico
Con cambio qumico
Homogeneizacin
Pruebas de
homogeneidad
Preconcentracin
Precipitacin
Adsorcin
Adsorbentes lquidos
Adsorbentes slidos
Submuestreo
Por pesada
Submuestreo
Por pesada o volumen
Preparacin de muestras
Disolucin
Es la etapa previa a la mayora de los anlisis, la
disolucin consiste en convertir los analitos en una
forma qumica que permanezcan estables en
disolucin.
En la mayara de los casos el proceso implica la
eliminacin de la materia orgnica por conversin a
compuestos voltiles. Este proceso se lleva a cabo por
va seca o por va hmeda.
Preparacin de muestras
Digestin de muestras slidas
El mtodo de descomposicin debe ser
seleccionado de acuerdo al tipo y probable
composicin de la muestra, especialmente si la
muestra es compleja si se sospecha la presencia de
sulfuros, compuestos orgnicos u otras sustancias.
e.g. si son ricos en compuestos orgnicos, 1 fase -
se recomienda HNO
3
, HClO
4
o agua regia para la
oxidacin del material orgnico- y en 2 fase
adicionar HCl, HF y HNO
3
para disolver silicatos,
sulfuros, xidos, etc.
Preparacin de muestras
Fuentes de error
1.- Disolucin incompleta del elemento a analizar.
Presencia de xidos, sulfuros, sulfatos, carbonatos, etc. Los
cuales deben ser tratados de manera independiente para ser
disueltos.
2.- Prdida de los compuestos de inters en forma
de compuestos voltiles.
Como xidos, hidruros y con mayor frecuencia como
compuestos halogenados, algunos elementos voltiles pueden
estar en la muestra como organometlicos. Los compuestos
voltiles, son producidos por la accin de cidos o fundentes y
siempre se generan durante la digestin.
Preparacin de muestras
Fuentes de error
4.- Reaccin del solvente con las paredes del
recipiente.
La contaminacin permisible en la solucin proveniente de la
reaccin entre el solvente y las paredes del recipiente depende
del nivel del anlisis.
Importante trabajar con una misma marca de cristalera
Preparacin de muestras
Fuentes de error
5.- Cambio del estado de oxidacin del elemento de
inters durante la disolucin.
Durante la disolucin, los iones de elementos polivalentes
sufren cambio de valencia a travs de la interaccin con el
soluto o por oxidacin con la interaccin con el oxgeno
atmosfrico.
Fe(III)/Fe(II), Mo(III), Mn(II), U(VI)/U(IV), Ti(IV)/Ti(III),
Ce(IV)/Ve(III).
Preparacin de muestras
Recipientes usados
Recipiente de Pt y sus aleaciones
Recipientes de Zr
Recipientes de Ni
Recipientes de Fe, Mo y Ta
Recipientes de carbn vidriado
Recipientes de cuarzo
Recipientes de borosilicato y porcelana
Recipientes de polmeros orgnicos polipropileno
Recipientes de polmeros fluorados
Preparacin de muestras
cidos usados
cido ntrico (HNO
3
)
cido clorhdrico (HCl)
Agua regia
cido fluorhdrio (HF)
cido perclrico (HClO
4)
fuera de uso-
cido sulfrico (H
2
SO
4
)
cido fosfrico (H
3
PO
4
)
Con especificaciones ACS por la American Chemical Society
Preparacin de muestras
Pre-tratamiento de muestras
Rocas y minerales, molidas hasta malla 150.
Vegetales, picados, pelados y lavados, con fines
de eliminar toda contaminacin por suelo, las
hojas externas son removidas.
En peces y carnes, retirar hueso y piel.
El desangrado es recomendado cuando el
analito es insoluble en solventes no polares. Los
lpidos interfieren, por lo que se recomienda
eliminarlos con hexano, la remocin de grasa
tambin ayuda.
Digestin de muestras
Sistemas abiertos
Placa de calentamiento
Fusin uso de mufla y fundentes e.g. carbonato
de sodio o de potasio.
Calcinacin seguida de digestin cida.
Se usa para muestras grandes (> 5 g)
Digestin de muestras
Sistemas cerrados
Bomba de presin
Autoclave
Microondas
Digestin de muestras
Sistemas cerrados vs abiertos
Vaso abierto Vaso cerrado
Comienzo independiente de la digestin
para cada muestra.
Se realizan todas las digestiones al
mismo tiempo.
Control individual de temperatura de
cada celda.
Mismas condiciones para todos los
recipientes.
Mismo tipo de contaminacin externa
que en placa calefactora.
Elimina toda contaminacin externa.
Enfriamiento muy rpido debido al
pequeo volumen del lquido.
Enfriamiento lento.
El uso de recipientes transparentes
permite ver la muestra durante la
digestin.
No se observa nada.
Posibilidad de prdida de voltiles. 100% recuperacin de voltiles.
Recipientes frgiles. Recipientes irrompibles.
Espectroscopia de absorcin atmica
ThermoElemental
Con aditamentos para flama y horno grafito
Espectroscopia de absorcin atmica
La absorcin atmica es una tcnica capaz de
detectar y determinar cuantitativamente la
mayora de los elementos del sistema peridico.
Sus campos de aplicacin son, por tanto, muy
diversos. Se emplea en el anlisis de aguas,
anlisis de suelos, bioqumica, toxicologa,
medicina, industria farmacutica, industria
alimentaria, industria petroqumica, etc.
Espectroscopia de absorcin atmica
La absorcin atmica (AA) utiliza la
espectroscopia de absorcin de la luz para medir
la concentracin en fase gaseosa de tomos.
Dado que las muestras suelen ser lquidos o
slidos, los tomos del analito o iones deben ser
vaporizados por una llama u horno de grafito.
Espectroscopia de absorcin atmica
La concentracin del analito se determina a partir
de la cantidad de absorcin de tomos libres de
un elemento a una longitud de onda especfica de
este elemento, de esta manera cada
concentracin de metales puede ser medido.
Espectroscopia de absorcin atmica
Cuando una muestra es
quemada en una flama, los
tomos individuales son
liberados en forma de una
nube dentro de la flama u
horno.
Para cada electrn en cada
tomo existe un arreglo
discreto de energa, diferente
entre electrones de otros
tomos.
Espectroscopia de absorcin atmica
En un tomo no excitado, cada electrn se encuentra
en un estado basal (fundamental).
Al excitar el tomoqu sucede?
La energa puede ser suministrada por fotones o por
colisiones debido al calor.
Aquellos electrones mas alejados del ncleo
requieren menos energa para llegar del estado basal
al primer nivel de energa E1.
De esta manera:
E = E1 - Eo
Espectroscopia de absorcin atmica
Esta energa E para realizar esta transicin puede ser
suministrada por un fotn de luz con una energa dada
por:
E=hv
donde h= constante de Planck
Esto a la vez corresponde a la relacin entre frecuencia y
longitud de onda ():
= hc / E
donde c= velocidad de la luz en el vaco.
Espectroscopia de absorcin atmica
Si se enva una luz en un rango de muy estrecha,
centrada en esa energa (hc / E1-Eo), hacia una nube
de varios tomos, solamente los tomos de un
elemento particular podrn absorber fotones. Aqu la
selectividad de la tcnica de absorcin atmica.
Espectroscopia de absorcin atmica
La ley de Beer-Lambert es la relacin lineal entre la
absorbancia y la concentracin de una absorcin de
las especies. La ley de Beer-Lambert puede escribirse
como:
A = * b * c
donde:
A= absorbancia medida adimensional-
= absortividad molar, depende de la luz [M
-1
cm
-1
]
b = camino ptico distancia- [cm]
c = concentracin del analito [M mol L
-1
]
Espectroscopia de absorcin atmica
Mediciones experimentales se hacen en trminos de
transmitancia, i.e. la fraccin de luz incidente que
pasa a travs de una muestra.
T = P / Po
Io I
Por lo que, T puede valer entre 0 y 1 y el porcentaje
de transmitancia puede valer entre 0 y 100%.
Muestra
Espectroscopia de absorcin atmica
La absorbancia se define:
A = log (Io / I) = - log T
I/Io %T A
1 100 0
0.1 10 1
0.01 1 2
Espectroscopia de absorcin atmica
Las limitaciones de la ley de Beer-
Lambert
La linealidad est limitada por factores qumicos e
instrumentales, las causas son:
Desviaciones en el coeficiente de absortividad a
concentraciones elevadas (>0.01M), debido a las
interacciones electrostticas entre las molculas prximas.
Dispersin de la luz debido a partculas en la muestra.
Fluorescencia o fosforescencia de la muestra.
Cambios en el ndice de refraccin a alta concentracin del
analito.
Cambios en equilibrios qumicos (funcin de la
concentracin).
Espectroscopia de absorcin atmica
Elementos que se pueden determinar
Espectroscopia de absorcin atmica
Anlisis por flama
Temperatura de flama de varios gases
Aire/Acetileno 2200
o
C
Oxido nitroso 2800
o
C
Horno de grafito 3000
o
C
Plasma argn 10000
o
C
Espectroscopia de absorcin atmica
Anlisis por flama
Tipos de flama
A partir de diferentes mezclas de gases se
obtienen diferentes tipos de flamas. La mas
empleada es la mezcla aire/acetileno. Dentro de
ellas se distinguen:
i. Flama estequiomtrica. Misma cantidad de
gases combustible y oxidante
ii. Flama oxidante (pobre). Hay un exceso de
oxidante en la flama.
iii. Flama reductora (rica). Hay un exceso de
combustible en la flama.
Espectroscopia de absorcin atmica
Flama aire/acetileno
Oxidante. La flama es pobre, con un cono azul
interior pequeo.
Estequiomtrica. Flama reductora luminosa con un
cono azul ms grande.
Luminosa. Flama luminosa, con un cono azul an
prominente.
Reductora. Flama rica, extremadamente luminosa.
Espectroscopia de absorcin atmica
Seleccin de la flama
La seleccin de un tipo de flama depende de la
temperatura.
A temperaturas altas, si hay exceso de oxgeno,
algunos metales forman xidos que se vuelven a
disociar en tomos.
Para evitar la formacin de xidos, la condicin de
la flama debe modificarse a una flama reductora
no oxidante.
Espectroscopia de absorcin atmica
Curvas de calibracin
Mtodos del estndar externo
Mtodos del estndar interno
Mtodo de Adicin de estndares
Espectroscopia de absorcin atmica
Mtodos del estndar externo
Es el mtodo tradicional en donde se emplean al
menos tres estndares para construir la grfica de
concentracin.
Las soluciones estndares se preparan a
concentraciones cercanas a las concentracin
esperada. Como es usual esta debe prepararse lo
ms parecida a las muestras en su composicin
qumica.
Espectroscopia de absorcin atmica
Mtodos del estndar externo
Existen algunas opciones para que una muestra
entre en nuestra escala de absorbancia:
1. Dilucin de la muestra.
2. Acortando la longitud de la trayectoria de la
muestra para obtener una mayor absorbancia
de la muestra.
3. Seleccionando una lnea de resonancia menos
sensible. Esto permite mediciones cien veces
mas concentradas.
Espectroscopia de absorcin atmica
Mtodos del estndar interno
Involucra la adicin de un estndar interno en las
soluciones de calibracin y en las muestras.
El estndar interno es un compuesto diferente del
analito, pero que puede ser analizado con bastante
resolucin.
El estndar interno puede compensar los cambios
de concentracin debido a variaciones
instrumentales.
Espectroscopia de absorcin atmica
Mtodo Adicin de patrn o estndar
Es difcil igualar las soluciones de referencia con las
de la muestra en los principales componentes de la
matriz. Sin embargo, podemos con frecuencia
compensar las interferencias fsicas y qumicas
mediante el mtodo de adiciones.
Espectroscopia de absorcin atmica
Beer-Lambert
Espectroscopia de absorcin atmica
Interferencias
Son debidas al traslape de la radiacin. La radiacin
interferente puede ser debida a una lnea de
emisin de otro elemento o compuesto, o
generalmente proviene del fondo de la flama, del
solvente o de la muestra analtica.
Esto sucede por lo regular cuando se determina
sodio con presencia de magnesio, hierro con cobre
e hierro con nquel.
Espectroscopia de absorcin atmica
Interferencias
Formacin de compuestos que no se disocian en la
flama, e.g. formacin de fosfatos de calcio y
estroncio.
Ionizacin. Reduce la seal del analito y es comn
cuando se analiza bario, calcio, estroncio, sodio y
potasio.
Interferencia de matriz. Se debe a las diferencias de
tensin superficial y viscosidad entre las muestras y
los estndares.
Espectroscopia de absorcin atmica
Lmites de cuantificacin
Es una medida que nos indica que tan sensible es el
mtodo de absorcin atmica para la
determinacin de un metal, usando una lnea
espectral especfica.
y
blanco
+ 10s
Espectroscopia de absorcin atmica
Lmites de deteccin
Es la menor cantidad de analito que es
significativamente distinto del blanco.
El lmite de deteccin es la ms baja concentracin
de un elemento que puede ser detectado con un
95% de confiabilidad. Este valor se determina
estadsticamente.
Espectroscopia de absorcin atmica
Incertidumbre
La incertidumbre es una medida de la duda que se
tiene sobre el valor de una medicin, la cual nunca es
cero. La incertidumbre proporciona informacin de
gran utilidad en el empleo de resultado de la medicin.
Existen diferentes parmetros:
Incertidumbre en el modelo, de calibracin, en la
preparacin de muestras y estndares, en el anlisis,
en el equipo, en la adquisicin de la informacin, en la
interpretacin.
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
NOM 117 SSA1 1994. Determinacin de Cd,
As, Pb, Sn, Cu, Fe, Zn y Hg, en alimentos, agua
potable y agua purificada por espectrometra
de adsorcin atmica.
Trabajos prcticos
Preparacin de curva de calibracin para Cu.
Preparar tres soluciones estndares (1, 2.5 y 5 mg L
-1
50 mL c/u) a partir de una solucin stock de 100 mg L
-1
en HNO
3
0.1% (v/v).
Analizar concentracin de Cu en un complejo
vitamnico el cual contiene 2mg por tableta.
Trabajos prcticos
Estndar de Cu.
Disulvase 0.100 g de cobre metlico en 2 mL de HNO
3
conc., adase 10 mL de HNO
3
conc. y dilyase con
agua hasta 1000 mL.
1.00 mL = 100 g Cu
Trabajos prcticos
Manejo de software SOLAAR
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Trabajos prcticos
Gracias por su atencin.