3B-2

GUIA DE PRACTICAS
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
EAP DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
MICROBIOLOGIA GENERAL
Dra Gloria Ruiz Sierra
INTRODUCCION
La Microbiologa es una ciencia que estudia a los organismos microscpicos denominados
microorganismos los cuales se definen como aquellos seres vivos unicelulares o
pluricelulares carentes de organizacin tisular y que no pueden ser visualizados al ojo
humano necesitando para ello el microscopio
Para el estudio de este tipo de seres vivos se necesita el conocimiento de tcnicas nicas
denominadas cnicas microbiolgicas
!stas cnicas han permitido el conocimiento de las diferentes estructuras y composicin
bacteriana pudiendo comprenderse como muchas bacterias se relacionan con el hombre ya
sea como integrantes de la flora normal o como agresoras para el mismo
!l estudio de la composicin bioqumica de la estructura bacteriana junto al conocimiento
de su metabolismo permite hoy la comprensin del mecanismo de accin de los diferentes
antibiticos
"oy en da los avances de la gentica bacteriana hacen posible el desarrollo de tcnicas de
#iologa molecular con aplicaciones a nivel de la investigacin cientfica y el diagnstico
donde los microorganismos cumplen un rol protagnico
!l conocimiento$ $manejo y utilizacin de los principales equipos$ instrumentos y
materiales utilizados en el laboratorio de microbiologa es indispensable para la ejecucin y
desarrollo de las pr%cticas durante el curso de microbiologa general que permitir%n al
alumno$ futuro profesional de la salud aplicar estos conocimientos en el estudio de
diferentes especialidades en el campo de la microbiologa
F-C!3-3B-" & Re#$ A%o&'o 2(""
I- PRACTICA N) "
Ma*e+o ,e lo& -ri*.i-ale& e/ui-o& e i*&'ru0e*'o&1 -re-ara.i2* ,e 0a'erial ,e #i,rio1
0a'erial au3iliar 4 &u 5or0a ,e e&'eriliza.i2*
"$" Mar.o 'e2ri.o
!n el laboratorio de Microbiologa es necesario utilizar material limpio$ sin trazas de detergente y estriles
para el aislamiento y posterior identificacin de los grmenes que se est% investigando$ se entiende por
Limpieza al proceso fsico utilizado en los objetos en uso del laboratorio para eliminar materia org%nica y
residuos$ mediante el lavado con agua con o sin detergente'
(esinfeccin !s un proceso en el que se utilizan principalmente agentes qumicos y
!sterilizacin que viene a ser la destruccin de toda forma de vida$ sta puede ser por vapor saturado
)autoclave* o por calor seco ) horno *
"$2 Co0-e'e*.ia&
Maneja y usa equipos y materiales en el Laboratorio'
!studia in Vitro a los microorganismos'
Prepara e identifica el material de vidrio y su forma de esterilizacin
"$ 3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
!quipos e instrumentos tales como+ ,utoclave$ horno$ incubadora$ ba-o Mara$ refrigeradora$$ equipo
para luz ultravioleta $ equipo de esterilizacin por filtracin$ c%mara de flujo laminar$ centrifuga y
microscopio compuesto$
Portaobjetos y cubreobjetos
Papel para lente
,ceite de inmersin
orundas de algodn
.asa
,sa de /olle
0ultivo bacteriano
Papel 1raft
ubos de prueba
Placas Petri
#alones$ vaso de precipitados$ pipetas y matraces de vidrio
0inta indicadora de esterilizacin )para autoclave*
"$ 6 Pro.e,i0ie*'o
&' !2amina cada uno de los siguientes equipos e instrumentos del laboratorio+ autoclave$ horno$ incubadora$
c%mara de flujo laminar $ ba-o mara$ equipo de esterilizacin por filtracin$ centrifuga y microscopio e
identifica sus componentes $ su aplicacin y utilizacin en el laboratorio'
3' 4bserva al microscopio las muestras que a continuacin se indican+
0ultivo bacteriano+
0oloca sobre la l%mina portaobjeto una gota de cultivo bacteriano y deja caer la l%mina cubreobjeto'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 3
5' 'Preparacin de material de vidrio y material au2iliar
0onfecciona tapones de algodn para el material de vidrio proporcionado$ estos deben ser consistentes y de
un tama-o apropiado que permita su manipulacin'
Empaqueta este material con papel 1raft$ en igual forma tambin se procede con todo el
material au2iliar que se use en el laboratorio para someterlo a un proceso de esterilizacin y luego
conservar su esterilidad 'un tiempo adecuado
Las placas Petri y los tubos de prueba )previamente taponados* se envuelven formando paquetes de
tres y seis unidades respectivamente' (ebe tenerse especial cuidado en que el papel utilizado se
encuentre ntegro y sin orificios' Para las torundas e hisopos se procede de igual forma'
!n el caso de las pipetas$ se cortan bandas largas )tiras* de papel 1raft y se las envuelve en forma
diagonal y empezando por la punta$ colocando un refuerzo de papel en esta seccin$ de esta forma la
pipeta quedar% ntegramente cubierta por el papel' ,l final de la envoltura se dejar% una porcin en la
que se escribir% en nmeros la capacidad de volumen de la pipeta'
"$ 7 Re&ul'a,o&
6e registra detalladamente cada una de las observaciones hechas 7 se realiza los esquemas
y dibujos necesarios+ !quipo de laboratorio )indicando sus componentes*' Procede de igual
forma con el material de laboratorio empleado
"$ 8 Cue&'io*ario$
& '890on qu propsito se envuelve totalmente el material a esterilizar:
3' !n un cuadro comparativo e2plicar las diferentes formas y condiciones del proceso de esterilizacin que
;''se emplea segn el tipo de material a esterilizar'
5$8 <nformar en forma concisa el uso e importancia de los equipos descritos en la practica
"$ 9 Fue*'e& ,e i*5or0a.i2*
ortora$#erdell$ =un1e 0hristine'L'0ase <ntroduccin a la Microbiologa >? !dicion' !ditorial Mdical
Panamericana !spa-a $ 3@@A
ortora .' B'C =un1e$ #' D'C 0ase$ 0' L'+ <ntroduccin a la Microbiologa$ #uenos ,ires$ >E d' !ditorial
,cribia' 3@@@
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 5
II $- PRACTICA N) 2

Pre-ara.i2* ,e 0e,io& ,e .ul'i#o 4 &u 5or0a ,e e&'eriliza.i2* Me,io& ,e .ul'i#o
1&2li,o&1 &e0i&2li,o& 4 l:/ui,o&
2$" Mar.o 'e2ri.o
!s importante aislar y observar el crecimiento de un microorganismo para su identificacin$ por lo que se
utilizan materiales alimenticios artificiales preparados en el laboratorio llamados medios de cultivo y su
desarrollo es el cultivo
6us requerimientos varan considerablemente algunos slo requieren sustancias simples ) bacterias no
e2igentes * y otros requieren de sustancias complejas ) bacterias e2igentes *
Me,io& ,e Cul'i#o
6on sustancias o compuestos nutritivos estriles que permiten el crecimiento y multiplicacin de los
microorganismos en el laboratorio$ este medio debe cumplir una serie de condiciones como son
temperatura$ grado de humedad$ y presin de o2geno adecuados$ adem%s de nutrientes y factores de
crecimiento y estar e2ento de todo microorganismo contaminante con el objeto de aislar las diferentes
especies bacterianas y proceder a su identificacin mediante estudios complementarios'
Cla&i5i.a.i2* ,e lo& 0e,io& ,e .ul'i#o
Se%;* &u .o0-o&i.i2*<
-Me,io& e0-:ri.o&'8 !2traFdos de alimentos naturales
8Me,io& &e0i-&i*'='i.o&'8 6on medios de cultivo empricos enriquecidos de ciertos compuestos qumicos
-Me,io& &i*'>'i.o&'8 Medios qumicamente definidos
Se%?* &u e&'a,o 5:&i.o Medios lquidos$ medios semislidos )con @$5 a @$GH de agar*$ medios slidos )con &
a 3H de agar*'
Se%?* &u a-li.a.i2*+
- Me,io& .o0u*e& o &i0-le&+ permiten el desarrollo de la mayora de bacterias$ sobre todo las no
e2igentes'
- Me,io& e&-e.iale&+ Medios de enriquecimiento$ medios enriquecidos$ medios de conservacin y
transporte medios selectivos y medios diferenciales'
Pre-ara.i2* ,e 0e,io& ,e .ul'i#o
!s preciso ejercer un cuidado meticuloso en su preparacin los que deber%n ser esterilizados
inmediatamente' una vez preparados
- Los tubos de ensayo que contienen los medios se tapan con tapones de algodn o tapas met%licas o
pl%sticas con el fin de evitar la penetracin de microorganismos e2tra-os$ luego se esterilizan Las placas
Petri se esterilizan por separado y luego los medios se vierten aspticamente en ellas'
2$2 Co0-e'e*.ia&
2$3 Dealiza un listado de los principales medios de cultivo y su aplicacin$ as como los indicadores mas
usados
Prepara y esteriliza diversos medios de cultivo
2$3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" I
- Probetas de &@@@ mL y frascos de 3G@$ G@@$ &@@@ mL
- 6olucin de+ Ja4" &J y "0l &J
- rpodes con rejilla met%lica
- ubos estriles y placas Petri estriles $baguetas $bea1ers
- Papel indicador de p"
- ,gar+ ripticase de 6oya )6,*$ 6<M ),zufre K <ndol K Motilidad*'!M#$gelatina
- 0aldo+ ripticase de 6oya )6#*' peptona
- 0loruro de sodio
2$6 Pro.e,i0ie*'o
- (isuelve en agua destilada los medios comerciales proporcionados$ segn la indicacin del envase$ a
los que contengan agar ser% necesario someterlos a la accin del calor hasta su completa disolucin'
- !nfria este preparado hasta apro2imadamente G@L0'
- Mide el p" del medio$ con la cinta indicadora'
- 6i es necesario$ ajusta el p" empleando Ja4" &J o "0L &J'
- !nvasa$ rotula$ se-alando el tipo de medio y la fecha de preparacin'
- !steriliza por autoclave a &G lb de presin por &G a 3@ minutos'
- 0ontrola la esterilidad del medio$ por incubacin del mismo a 5AL0 por 3I horas'
- Para el caso del caldo peptonado$ se proceder% a la disolucin de los siguientes componentes+
peptona &@ g y cloruro de sodio &@ g$ luego se completa con agua destilada hasta &@@@ mLC y se
llevar% a p" de M'M NO8 @$&'
2$ 7 Re&ul'a,o&
6e describir% su composicin y el fundamento de las diferentes clases de medios de cultivo utilizados

2$8 Cue&'io*ario'
&' 9Pue importancia tiene el uso de los medios slidos:
3' 9 Pu sustancia es la encargada de solidificar los medios de cultivo slido: 9(e dnde se e2trae:
2$9 Fue*'e& ,e i*5or0a.io*
8 Madigan$ M' 'C Martin1o$ B' M'C Par1er$ B'+ #roo1 #iologa de los Microorganismos$ &@ed' Madrid$
Prentice "all <beria' Madrid$ 3@@@'
8 Levinson$Q'! BaRetz$! Microbiologa e <nmunologa$ 3Led' !ditorial !l Manual Moderno' M2ico$3@@@
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" G
III$- PRACTICA N) 3
T>.*i.a& ,e &ie0@ra1 e&'u,io ,el ,e&arrollo @a.'eria*o e* 0e,io& l:/ui,o&1$
Se0i&2li,o& 4 &2li,o&
3$" Mar.o 'e2ri.o
"$ T>.*i.a& ,e &ie0@ra
Las muestras a analizar pueden presentar poblaciones microbianas mi2tas$ por esta razn se utilizan diversas
tcnicas para separar un microorganismo de otro y obtener as un cultivo puro que permita
identificar al microorganismo aislado'
!l diagnstico bacteriolgico se basa en el aislamiento de microorganismos a partir de una muestra$ por lo
que es indispensable tener en cuenta las m%2imas condiciones de asepsia$ desde la toma de muestra hasta la
siembra$ la cual debe efectuarse lo m%s r%pido posible'
rminos importantes+
6iembra
<nculo
0ultivo puro
0epa
6e denomina Stcnica de siembraT al procedimiento mediante el cual se pone en contacto a los
microorganismos con un medio de cultivo y despus de un perodo de incubacin se produce el desarrollo de
colonias bacterianas' !2isten varios tipos de siembra $ entre los cuales est%n los siguientes+
-6iembra por dispersin y agotamiento
-6iembra por puntura
-6iembra por estra
-6iembra por inoculacin
-6iembra por incorporacin$ en placa vertida$ en masa o en todo el medio
-6iembra por diseminacin o en superficie o con cayado
2$ De&arrollo @a.'eria*o
,lgunas veces las especies bacterianas se pueden identificar bas%ndose en el aspecto que tienen sobre o
dentro de los distintos medios de cultivo $ es as que la observacin de las caractersticas de crecimiento de
las colonias de microorganismos en medio slido )agar* y lquido )caldo*$ puede ser de gran utilidad'
E&'u,io @a.'eria*o e* 0e,io l:/ui,o
- Uelocidad de desarrollo )crecimiento*+ lento$ moderado$ r%pido'
- ,specto+ turbio$ claro o transparente$ difuso$ granulado' 6e registran las observaciones como+ presencia o
ausencia de+ turbidez$ sedimento y SpelculaT'
- Produccin de gas+ formacin de burbujas'
E&'u,io @a.'eria*o e* 0e,io &e0i&2li,o
- Movilidad
- 0ambios metablicos
E&'u,io @a.'eria*o e* 0e,io &2li,o
- 0aractersticas morfolgicas de las colonias en cuanto a+ elevacin$ forma$ borde$ superficie$ tama-o$
consistencia y color de pigmentacin'
3$2 Co0-e'e*.ia&
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" V
8 Dealizar% diversas tcnicas de siembra para su cultivo y aislamiento
8 ,plica las tcnicas de aislamiento hasta la obtencin de cultivos puros
8 (escribe sus observaciones usando la terminologa tcnica apropiada
3$3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
"$ T>.*i.a& ,e Sie0@ra e* Me,io& L:/ui,o&1 Se0i&2li,o& 4 S2li,o&
- Placas petri con agar 6,
- ubos con agar 6<M y 6, en agar inclinado
- ubos con caldo 6#
- 0ultivos de+ Escherichia coli$ Staphylococcus aureus$ Bacillus subtilis y Pseudomonas aeruginosa
3' (esarrollo bacteriano+
- Wtilizar los medios de cultivo preparados en la pr%ctica anterior y proceder a realizar los
sembrados en los distintos medios segn tcnicas
Uer figuras 58& a 58I+ 0aractersticas morfolgicas de los cultivos bacterianos'
3$6 Pro.e,i0ie*'o
"$ T>.*i.a& ,e Sie0@ra e* Me,io& L:/ui,o&1 Se0i&2li,o& 4 S2li,o&
6iguiendo la metodologa descrita segn los esquemas ane2os$ proceder tal como sigue+
- 0on el asa en aro previamente esterilizada$ tomar una asada del cultivo de microorganismos$ y
sembrar por el mtodo de dispersin y agotamiento en las placas de 6, '
- 0on el asa en punta previamente esterilizada$ tomar el inculo del cultivo de bacterias y sembrar en
agar 6<M$ por el mtodo de puntura'
- 0on el asa en aro$ toma el inculo del cultivo bacteriano y siembra en el tubo con agar en pico de
flauta o plano inclinado$ por el mtodo de estra '
- 0on el asa en aro previamente esterilizada tomar una asada del cultivo$ y sembrar por el mtodo de
inoculacin en el tubo con 6#'
2$ De&arrollo @a.'eria*o
- !fectuar% la lectura de los cultivos proporcionados por la profesora y observa'
ener sumo cuidado de no sacudir los cultivos en caldo ya que esto puede trastornar
los crecimientos superficialesC describir' "acer los esquemas de todas las
observaciones'
5'G Re&ul'a,o&
Deporta y describe
3$8 Cue&'io*ario+
&' 90on qu propsito se emplean cada una de las diferentes tcnicas de siembra:
3' (escribe las caractersticas del crecimiento de cada uno de los cultivos bacterianos proporcionados en la
pr%ctica'
3$ (escribe el mtodo de siembra por incorporacin y se-ala en que casos se emplea
3$9 Fue*'e& ,e i*5or0a.io*
Madigan$ M' 'C Martin1o$ B' M'C Par1er$ B'+ #roo1 #iologa de los Microorganismos' &@ ed$ Madrid
Prentice "all <beria'$ &>>>'
Prescott LO "arley B $O /lein ( GAVOP MG 3@@@ Madrid
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" A

F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" M
I! $- PRACTICA N) 6
MATODOS DE COLORACIBN
6$" Mar.o 'e2ri.o
"$ Colora.i2* Si0-le
,quella coloracin en la que se utiliza slo un colorante$ el cual va a permitir visualizar la morfologa de los
microorganismos'
2$ Colora.i2* Gra0
La diferenciacin de .ram se basa en el color que adquieren las bacterias cuando se tratan con el colorante
cristal violeta seguido por una solucin yodoyodurada de potasio$ para luego someterlas a una decoloracin
despus de la cual se usa una coloracin de contraste$ casi siempre safranina' Las bacterias gram8positivas
)coloracin azul o morada* son resistentes a la decoloracin y conservan el complejo cristal violeta8yodo$ los
microorganismos gram8negativos$ toman la coloracin de contraste )coloracin rosa o roja*'
3$ Colora.i2* C.i,o D Re&i&'e*'e EColora.i2* ,e FieGl Neel&e*H
!n este mtodo de tincin$ el colorante primario$ fucsina %cida$ se formula con fenol para permitir el paso a
travs de las paredes celulares de las micobacterias' !l portaobjeto se calienta para facilitar la penetracin y se
utiliza alcohol etlico como decolorante' 6in embargo$ el reactivo se prepara con %cido clorhdrico para ayudar
a la decoloracin de las clulas que no son %cido K resistentes'
6$ Colora.i2* ,e E&-ora&
Para la observacin de esporas$ es necesario que el colorante penetre la pared de la espora$ la cual es
relativamente impermeable$ razn por la que se necesita de calentamiento'
7$ Colora.i2* Ne%a'i#a
La tcnica de la tincin negativa incorpora materiales tales como la nigrosina o la tinta china$ que al estar
compuesta de partculas demasiado grandes para penetrar en una clula$ permiten observar algunos
microorganismos que permanecen sin te-ir y que resaltan sobre un fondo oscuroC se utiliza principalmente
para observar la c%psula bacteriana'
6$ 2 Co0-e'e*.ia&
0apacita y adiestra al estudiante para que )el* )la*+
8 Dealice manualmente mtodos de tincin habituales usados en la preparacin de l%minas de
observacin
8 (escriba minuciosamente sus observaciones$ al microscopio
6$3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
Cul'i#o& @a.'eria*o&
- 0ultivo de Escherichia coli
- 0ultivo de Staphylococcus aureus
- 0ultivo de Klebsiella
L%mina fijada con frotis de Mycobacterium tuberculosis
"$ Colora.i2* &i0-le
- ,zul de Metileno
2$ Colora.i2* Gra0
- Uioleta de genciana )colorante primario*
- Lugol )mordiente*
- alcohol K acetona )decolorante*
- =ucsina b%sica )colorante de contraste*
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" >
3$ Colora.i2* C.i,o D Re&i&'e*'e
- =ucsina fenicada al GH )colorante primario*
- ,lcohol K %cido )decolorante*
- ,zul de metileno )colorante de contraste*
6$ Colora.i2* ,e E&-ora&
- 6olucin de azul de metileno
- 6olucin saturada alcohlica de eosina
$7$ Colora.i2* *e%a'i#a
- inta china
6$6 Pro.e,i0ie*'o
"$ Colora.i2* &i0-le
- Prepara un frotis a partir del cultivo proporcionado'
- =ija al calor'
- 0ubre el frotis con el colorante ,zul de Metileno y deja actuar por 5 a G minutos'
- Lava con agua y deja secar'
- 4bserva al microscopio con objetivo de inmersin'
-
2$ Colora.i2* Gra0
- Prepara frotices de cultivos de E. coli y S. aureus'
- (eja secar al aire y fija con calor'
- 0ubre los frotices con reactivo de cristal violeta durante un minuto'
- Lava los portaobjetos con agua corriente durante G segundos'
- 0ubre el frotis con la solucin de lugol y deja actuar durante 3 minutos'
- Lava con agua corriente$ y aplica lentamente el alcohol K acetona y seguir% agregando hasta que
la tintura ya no fluya del frotis'
- Lava inmediatamente con agua corriente'
- 0ubrir% el frotis con la solucin de safranina durante 5@ segundos'
- Lava con agua corriente y deja secar la preparacin'
- 4bserva al microscopio utilizando el lente de inmersin'
-
3$ Colora.i2* C.i,o D Re&i&'e*'e
- 0ubre el frotis proporcionado con fucsina fenicada al GH )carbolfucsina* y dejarlo reposar de 5@
a V@ segundos antes de calentarlo'
- 0alienta la preparacin con suavidad$ haciendo pasar el mechero de alcohol por debajo del
portaobjeto' 6eguir calentando hasta que se observe el desprendimiento de vapores' !vitar que el
colorante hierva' Depetir 3 veces m%s'
- !nfra y lava con agua corriente'
- (ecolora con alcohol K %cido hasta que no arrastre colorante'
- Lava con agua corriente'
- 0ubrir% el frotis con azul de metileno$ durante & minuto'
- Lava con agua corriente'
- (eja secar al aire'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &@
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin' Las bacterias %cido K alcohol resistentes se ti-en
de rojo y los dem%s microorganismos de color azul'
-
6$ Colora.i2* ,e E&-ora&
- "aga un frotis fino y fije a la llama'
- 0ubre con azul de metileno y calienta hasta hervir en forma intermitente por & minuto'
- Lava con agua destilada'
- 0ubre con una mezcla de solucin saturada alcohlica de !osina por 5@ segundos'
- Lava con agua destilada y deja secar al aire'
- !2amina al microscopio con lente de inmersin'
7$ Colora.i2* *e%a'i#a
- 0oloca varias asadas de cultivo en un portaobjetos limpio$ cerca de uno de los bordes'
- 0oloca un volumen igual de tinta china cerca del cultivo'
- Mezcla bien con el asa y luego e2tiende la mezcla a lo largo del portaobjetos$ utilizando la
tcnica del frotis sanguneo'
- (eja secar el frotis'
- 0ubre con safranina durante &@ segundos$ luego enjuaga con cuidado y deja secar al aire'
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin' ,l e2aminar la preparacin$ la c%psula aparecer%
como una zona transparente que rodea a la pared celular'
6$7 Re&ul'a,o&
Degistra $ dibuja y colorea la morfologa de cada una de las muestras coloreadas
6$ 8 Cue&'io*ario
&' 9Pu importancia tiene la pared celular bacteriana en la coloracin de .ram:
3' 90u%les son las diferencias qumicas importantes que e2plican el estado %cido8resistente:
6$ 9 Fue*'e& ,e i*5or0a.i2*
<ngraham$ B' L' y 0','+ <ntroduccin a la Microbiologa+ Uol' & y 3' 5 ed'O!ditorial Devert$ 6',' !spa-a$
&>>M'
BaRetz$ 'CMelnlic1 y ,delberg' #roo1s .eo =$ #utel Banet 6 Microbiologa Mdica'35 ed' M2ico 3@@G
,gurto 6aenz$om%s8Damos .obe-a' Buan 0arlos 6ena$ 0humbes =ernando Microbiologa #%sica$ & ed'
Lima 3@@I
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &&
!$- PRACTICA N) 7
METABOLISMO MICROBIANO
Mar.o 'e2ri.o
!n esta pr%ctica se presentar% un panorama general de las reacciones bioqumicas
microbianas relacionadas con el metabolismo de los carbohidratos y sobre las protenas$
haciendo uso de las pruebas bioqumicas diferenciales que permiten la identificacin de
microorganismos )en especial los microorganismos patgenos*
'
7$2 Co0-e'e*.ia&
8 Manipula e identifica los microorganismos en funcin a su comportamiento bioqumico'
7$3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
- Placas con agar nutritivo con &H de almidn
- ubos con+ gelatina$ caldo peptonado$ caldo MD K UP )Dojo de Metilo K Uoges Pros1auer*$ caldo
lactosado con indicador de ,ndrade'
- ubos con medio de+ 0itrato de 6immons en plano inclinado$ Wrea$ 6< en plano inclinado y con 6,'
- 0ultivos de+ E. coli, B. subtilis,Ps. aeruginosa, Enterobacter, Proteus vulgaris, Staphylococcus. aureus,
Streptococcus viridans.
- Lugol'
- Deactivos de+ 1ovacXs$ rojo de metilo$ Uoges K Praos1auer+ alfa8naftol al GH$ en alcohol amlico$ /4" K
creatina al I@H
- iras de papel de filtro impregnadas con solucin saturada de acetato de plomo'
- Per2ido de hidrgeno al 5H'
- 0ampanas de (urham y pipetas Pasteur'
-
7$6 Pro.e,i0ie*'o&
"$ A..i2* &o@re lo& Gi,ra'o& ,e .ar@o*o
Fer0e*'a.i2* ,e Gi,ra'o& ,e .ar@o*o
Primer da
- <nocula cada tubo de caldo lactosado con !'coli$ 6'aureus$ P'vulgaris'
- oma un cuarto tubo sin sembrar como control'
- Dotula los tubos e incuba todos los tubos a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- (espus del perodo de incubacin$ compara cada uno de los tubos inoculados$ con el tubo control'
- 0uando la bacteria ha degradado el hidrato de carbono )lactosa*$ se detecta por la inclusin del indicador
de ,ndrade'
- 6i el microorganismo tiene la capacidad de desdoblar un subproducto metablico a 043 e "N se
observar% la presencia de gas$ en forma de burbujas'
Ii,r2li&i& ,el al0i,2*
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &3
Primer da
- 0on ayuda del l%piz de cera$ divida por fuera la base de la placa Petri en 5 partes'
- !n la seccin &$ siembra #' 6ubtilis$ en la seccin 3 siembra !' 0oli y en la seccin 5 siembra Ps'
aeruginosa
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- ,grega a toda la superficie del medio la solucin de lugol'
- 4bserva la reaccin alrededor del crecimiento microbiano'
-
Pro,u..i2* ,e J.i,o& 4 a.e'il-0e'il-.ar@i*ol Ea.e'o:*aH
Prue@a ,e !o%e& Pro&Kauer E!PH
Primer da
- Dotula los tubos con el nombre del microorganismo'
- Por la tcnica de inoculacin$ siembra cada cepa )!' coli y !nterobacter* en su tubo correspondiente'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- , cada tubo agrega &@ a &3 gotas de la solucin de alfa8naftol y I gotas de la solucin de /4" K creatina'
- ,gita despus de agregar las soluciones por & minuto'
- (eja en reposo durante &G minutos'
- La reaccin es positiva$ si aparece una coloracin rosada localizada en la mitad superior o en todo el tubo
dentro de los primeros &G minutos$ lo que nos indica la presencia de acetil8metil8carbinol'
- 6i la lectura se realiza despus de & hora$ los cultivos pueden presentar una coloracin cobriza$ siendo
esta una respuesta falsa positiva'
- La reaccin es negativa$ si el color inicial del medio de cultivo no cambia'
-
Prue@a ,e ro+o ,e 0e'ilo
Primer da
- Dotula los tubos con el nombre del microorganismo'
- Por la tcnica de inoculacin$ siembra cada cepa )!' coli y !nterobacter* en su tubo correspondiente'
- <ncuba a 5AL0 por IM a A3 horas'
6egundo da
- ,grega I G gotas del indicador rojo de metilo a cada tubo$ cuyo rango de viraje esta entre p" I'I )rojo*
y V'@ )amarillo*'
- La prueba es positiva si se mantiene un color rojo estable'
- La prueba es negativa si da una coloracin amarillo K naranja'
-
Pri*.i-io& @io/u:0i.o& ,e la& rea..io*e& e* TSI
Primer da
- 0on el asa de siembra$ inocula una porcin peque-a de la colonia en el centro del tubo y estra la
superficie del pico de flauta'
- Dotula e incuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- !s indispensable que la lectura se haga en el tiempo de incubacin indicada'
- Producto de "36+ ennegrecimiento en el fondo del tubo'
- =ermentacin de la glucosa nicamente )rojoOamarillo*+ esto se debe a que la glucosa )que se encuentra
en baja concentracin con respecto a los otros azucares* ha sido utilizada y la cantidad de %cido
producido no es suficiente para neutralizar los productos alcalinos generados por la utilizacin de las
peptonas' !stos procesos que son o2idativos$ ocurren en la superficie del medio$ mientras que en el
fondo$ por no estar en contacto con el o2geno$ solo hay fermentacin y el medio permanece %cido'
- =ermentacin doble o triple de carbohidratos )amarilloOamarillo*+ la fermentacin de la glucosa y alguno
)o ambos* de los otros dos azcares produce gran cantidad de %cido$ por lo que el tubo permanece
amarillo'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &5
- Jo fermentacin de carbohidratos )rojoOanaranjado*+ se presenta nicamente utilizacin o2idativa de
peptonas$ por lo que solo la superficie del tubo se alcaliniza'
- Produccin de gas+ formacin de burbujas$ grietas o desplazamiento del medio'
-
2$ A..i2* &o@re la& -ro'e:*a&
Ii,r2li&i& ,e la %ela'i*a
Primer da
- Dotula cada tubo con el nombre de la cepa correspondiente+ E. Coli y B. Subtilis'
- <nocula cada cepa en un tubo con gelatina$ haciendo uso de un asa en punta$ introduciendo de manera
vertical hasta el fondo del tubo'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- 4bserva los resultados' 4bserva la hidrlisis de la gelatina
-
Pro,u..i2* ,e i*,ol
Primer da
- Dotula sus tubos con el nombre del microorganismo+ !' coli y #' subtilis'
- <nocula cada cepa en su tubo correspondiente'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas
6egundo da
- ,grega I gotas del reactivo de /ovacXs$ dejando resbalar por la pared interna de cada tubo que
presenta desarrollo bacteriano$ luego agite suavemente'
- La reaccin es positiva$ si se forma un anillo de color rojo fucsia brillante en la zona superior del
tubo$ pocos segundos despus de haber agregado el reactivo'
- Las bacterias que a pesar de desarrollar en el medio no producen indol$ permanecer%n sin cambio
alguno )reaccin negativa*'
-
Pro,u..i2* ,e &ul5uro ,e Gi,r2%e*o
Primer da
- Por la tcnica de puntura y estra$ siembra separadamente en el medio 6, las cepas de E. coli y P.
vulgaris'
- 0oloca una tira de papel de filtro impregnada con acetato de plomo'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas
6egundo da
- 4bserva el ennegrecimiento del papel de filtro$ por la produccin del sulfuro de hidrgeno )reaccin
positiva*'
-
3$ Prue@a& @io/u:0i.a& ,i5ere*.iale&
U'iliza.i2* ,el .i'ra'o
Primer da
- 6iembra por la tcnica de estra en cada tubo con las cepas de E.coli y Enterobacter aerogenes'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas
6egundo da
- La prueba es positiva si observa crecimiento bacteriano y un color azul intenso del agar en 3I a IM
horas'
- !s negativa si no hay crecimiento ni cambio de color'
-
Ii,r2li&i& ,e la ?rea
Primer da
- Por la tcnica de estra$ siembra los tubos con medio de urea con E.coli y P.vulgaris' Jo inocular el
fondo'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &I
- Dotula e incuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- La prueba es positiva si el medio presenta un color rosado en la superficie o en todo el tubo'
- La prueba es negativa$ si el medio permanece del color original'
-
Prue@a ,e la .a'ala&a
- 0on el asa de siembra en punta$ picar el crecimiento de uno de los tubos con el cultivo de
Staphylococcus aureus o Streptococcus viridans$ y transferir el inculo a un portaobjetos limpio'
- ,-ade de & a 3 gotas de "343 al 5H'
- 4bserva si se forman burbujas o no inmediatamente despus que se a-ade el reactivo'
- (escarta la l%mina en un recipiente con desinfectante'
-
Rea..i2* ,e la .i'o.ro0o o3i,a&a
- 0on el asa de siembra en punta$ picar el crecimiento de uno de los tubos con el cultivo de E.coli o
Ps. aeruginosa$ y transferir el inculo a una tira del reactivo de o2idasa'
- 0onsidera la prueba positiva cuando los cultivos dan una coloracin azul viol%ceo intensa en la tira$
en un m%2imo de G segundos'
-
-
7$7 Re&ul'a,o&
Deporta los resultados y e2plica el fundamento bioqumico de cada una de las pruebas
' realizadas en la pr%ctica

7$8 Cue&'io*ario'
&' 90mo podra emplear las conclusiones que derivan de esta pr%ctica para clasificar a las bacterias:
7$9 Fue*'e& ,e i*5or0a.i2*
Prescott L O "arley B$ O /lein (' Microbiologa GAVOP MG$ 3@@@
Mac faddin$ Bean =' Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia clnica'
Madrid' GAI'&>3MGOI&3' 3@@5
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &G
!I PRACTICA N) 8
METODOS FISICOS Y QUIMICOS DE CONTROL MICROBIANO
8$" Mar.o 'e2ri.o
"$ A..i2* ,e lo& a%e*'e& 5:&i.o& 4 /u:0i.o& &o@re la #ia@ili,a, ,e la& @a.'eria&
La muerte microbiana se produce cuando una clula no puede volver a dividirse para formar dos nuevas
clulas o sea pierden su viabilidad
!n esta practica vamos a determinar si un tratamiento especfico mata todas las clulas$ si reduce su
nmero hasta niveles aceptables o si simplemente detienen el crecimiento durante un perodo de tiempo
limitado
Los aspectos qumicos de esta pr%ctica se limitan a los compuestos que son normalmente t2icos y que
se consideran como materiales desinfectantes o antispticos
2$ E5e.'o ,e lo& ,e&i*5e.'a*'e& /u:0i.o&
0on frecuencia se desea una r%pida desinfeccin y esterilizacin a temperatura ambiente$ sobre todo para
diferentes objetos que pueden da-arse al aplicarles calor'
!2isten varios compuestos qumicos tales como los fenlicos$ el formaldehdo$ alcoholes$ halgenos y
detergentes$ para la desinfeccin a la temperatura ambiente'
Wna pr%ctica muy comn ha consistido en considerar al etanol al A@H y el isopropanol como soluciones
esterilizantes universales'
8$2 Co0-e'e*.ia&
8 !labora un listado de productos farmacuticos cuya fabricacin sea resultado de procesos
biotecnolgicos
8 !nsaya y observa el efecto de los agentes fsicos y qumicos sobre la viabilidad de las bacterias'
8
8$3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
"$ De&arrollo @a.'eria*o
- 0ultivos de la pr%ctica anterior sembrados en los distintos medios
0aractersticas morfolgicas de los cultivos bacterianos'
-
2$ A..i2* ,e lo& a%e*'e& 5:&i.o& 4 /u:0i.o& &o@re la #ia@ili,a, ,e la& @a.'eria&
- L%mpara de luz ultravioleta
- 6olucin de+ merthiolate &O&@@@$ tintura de yodo$ cristal violeta$ fenol al GH$ 6avlon &O3@@
- (iscos de Papel filtro
- Placas con agar nutritivo
- 0ultivo de+ Escherichia coli$ Staphylococcus$ Bacillus subtilis
- #a-o maria
- =rasco con 5@ mL de caldo nutritivo
- Pipetas estriles de+ & mL y GmL
- Placas petri estriles )V por cada grupo*
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &V
- ubos estriles )M por cada grupo*
- ubos con ,gar nutritivo )I por cada grupo*
- "isopos estriles
- ,sas de siembra
8$ 6 Pro.e,i0ie*'o
3$ A..i2* ,e lo& a%e*'e& 5:&i.o& 4 /u:0i.o& &o@re la #ia@ili,a, ,e la& @a.'eria&
A..i2* ,el .alor Ella0a ,ire.'aH
- !steriliza el asa de siembra a la llama directa del mechero'
- oma el inculo y siembra en la mitad de la placa con agar nutritivo
- !steriliza el asa de siembra$ tomar otro inoculo$ somete a la accin de la llama directa y siembra en
la otra mitad del agar'
- Dotula e incuba a 5AL0 durante 3I horas'
-
A..i2* ,el .alor G?0e,o
- 0ontamina el fondo de cada uno de cuatro tubos con una gota de cultivo de Bacillus subtilis$
evitando tocar las paredes del tubo'
- 0alienta cada uno de los tubos por flameado$ desde la boca del tubo hasta unos 5 cm del fondo'
- 6umerge por &@ minutos cada uno de los tubos$ en un ba-o de agua tal como sigue+ el primer tubo a
I@L0$ el segundo tubo a A@L0$ el tercer tubo a &@@L0C el cuarto tubo servir% de control'
- ,-ade a cada uno de los tubos en condiciones aspticas G mL de caldo nutritivo'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
- Procede de manera similar con los otros I tubos$ pero usando como cepa$ el cultivo de Escherichia
coli'
-
A..i2* ,e la ra,ia.i2* ul'ra#iole'a
- Licua el agar en ba-o maria a G@L0'
6iembra en superficie+
- Uierte el contenido de un tubo de agar licuado en una placa estril y deja solidificar' "acer lo
mismo en la placa restante'
- 0oloca una gota del cultivo asignado en el centro de cada una de las 3 placas y siembra con un
hisopo estril en toda la superficie de la placa' (ejar secar 5@ minutos
6iembra en el medio+
- ransfiere @'& mL de los cultivos asignados$ en cada uno de los 3 tubos restantes'
- Mezcla por rotacin y vierte todo el contenido en su respectiva placa Petri' (eja solidificar
- !2poner las placas a la l%mpara ultravioleta en la forma siguiente+
-
Mtodo de siembra
6iembra en superficie 6iembra en todo el medio
Placa JL & Placa JL 3 Placa JL & Placa JL 3
iempo de e2posicin a la luz
ultravioleta
3 minutos G minutos 3 minutos G minutos
- <ncuba por 3I horas y anota los resultados
-
A..i2* ,e lo& a%e*'e& /u:0i.o&
- <nocula abundantemente la superficie de una placa de agar$ con 5 asadas del microorganismo en
estudio' (isemina uniformemente'
- 0on una pinza previamente esterilizada$ coloca los discos de papel embebidos con las sustancias
suministradas y equidistantes entre s'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &A
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
-
E5e.'o ,e lo& ,e&i*5e.'a*'e& /u:0i.o&
- <nocula @$& mL de Escherichia coli$ en un tubo conteniendo desinfectante'
- Depite lo anterior utilizando 6# en lugar del desinfectante )tubo control*'
- oma una asada del primer tubo a los G minutos y siembra por el mtodo de estra en un cuadrante
de la placa de agar nutritivo'
- Depite el procedimiento en los tres cuadrantes restantes a los &@$ 3@ y 5@ minutos'
- Procede de igual forma con el tubo control'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
-
8$ 7 Re&ul'a,o&
Deporta y describe+
&' Las caractersticas del crecimiento de cada uno de los cultivos bacterianos ensayados'
8$8 Cue&'io*ario
"$- El .ue&'io*ario &e -ro-or.io*ara a 0e,i,a /ue &e ,e&arrolle la -rJ.'i.a
8$9 Fue*'e& ,e i*5or0a.io*
#roo1s .' = #utel$ B'6 Morse 6', Microbiologa mdica de BaRetz$ Melnic1$ y ,delberg !ditorial !l
Manual Moderno 6', de 0'U 35E' !dicin' M2ico$ 3@@G'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &M
!II PRACTICA N) 9
EFECTOS DE LOS ANTIBIBTICOS SOBRE LAS BACTERIAS
9$" Mar.o 'e2ri.o
Los antibiticos )anti$ 8contraC bios $ 8vida* constituyen un grupo de compuestos teraputicamente tiles'
!stos compuestos qumicos se caracterizan por ser subproductos metablicos de un microorganismo$ y casi
siempre son letales para otro microorganismo no relacionado' , partir de &>I@$ se aislaron numerosos
antibiticos$ que probaron ser eficaces contra una variedad de m'o patgenos ) bacterias y hongos *
La investigacin en este campo sigue constituyendo uno de los principales objetivos de la industria
farmacutica'
La accin de los antibiticos sobre las bacterias se puede demostrar in vitro de diferentes maneras' Wn modo
preciso de ellos es por el mtodo de dilucin en tubo' !2iste tambin el mtodo del disco nico de
sensibilidad ideado por /irby y #auer'
9$ 2 Co0-e'e*.ia&
8 ,plica mtodos para evaluar la actividad antimicrobiana in 8vitro
8 4btiene la concentracin mnima inhibitoria de antibiticos en estudio
9 $ 3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
- =rasco con &@@ mL de caldo Mueller K "inton
- Placas con agar Mueller K "inton
- !scala de Mc =arland @'G
- 0ultivo de E.coli
- 0ultivo de S.aureus
- 0ultivo de Ps.aeruginosa
- (iscos de antibiticos
- "isopos estriles
- Pinzas estriles
- 6olucin de antibitico a una concentracin de &@@@ mgOmL
- ubos estriles de &V 2 &G@
- Pipetas estriles de &@ mL
- Pipetas estriles de G mL
9$ 6 Pro.e,i0ie*'o
"$ M>'o,o ,e ,i5u&i2* e* a%ar
Primer da
- Prepara una dilucin de la bacteria en estudio equivalente a @'G de la escala de Mc =arland )&'G 2 &@
M
bacterias*'
- 6iembra una placa de agar Mueller K "inton con un hisopo embebido en la dilucin anterior'
- 0oloca los discos de los antibiticos con ayuda de las pinzas estriles a 3 cm del borde de la placa y
equidistantes entre si'
- Presiona suavemente cada disco para que se adhiera al agar'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- (espus de la incubacin$ observa los halos de inhibicin alrededor de los discos de antibiticos'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" &>
- La sensibilidad del microorganismo a los antibiticos utilizados$ se establece por comparacin en una
gr%fica de tama-os de la zona'
-
2$ M>'o,o ,e ,ilu.i2* e* 'u@o
Primer da
- 0on una pipeta de &@ mL tomar el cultivo proporcionado y dejar caer una gota al frasco que contiene
&@@ mL de caldo Mueller K "inton'
- Mezcla y con la misma pipeta$ repartir% el caldo en &@ tubos estriles$ inoculando el primer tubo con
> mL y los restantes con G mL del caldo'
- Prepara una fila de diluciones del antibitico de &@@ mg a I ugC con la pipeta de G mL toma & mL de
la solucin de antibitico e inocula el primer tubo'
- Mezcla y saca G mL para el segundo tubo y as sucesivamente hasta el noveno tubo'
- (el noveno tubo$ saca G mL y elimina conjuntamente con la pipeta'
- !l tubo JL &@ no recibir% antibitico y servir% como control del desarrollo bacteriano'
- <ncuba los tubos a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- 4bserva la turbidez de los tubos compar%ndola con la del tubo control )JL >*'
- Los tubos que no presentan turbidez se debe a que la bacteria fue inhibida en su desarrollo'
- La menor concentracin de antibitico que inhibi el desarrollo bacteriano ser% la M<0'
9 $ 7 Re&ul'a,o&
&' Deporta los resultados obtenidos )di%metro de los halos* de los microorganismos empleados frente al
antibitico analizado'
9$8 Cue&'io*ario
8 6e realizar% a medida del desarrollo de la pr%ctica
9$9 Fue*'e& ,e i*5or0a.i2*
#roo1s .eo ='C #utel$ Banet' 6'$ Morse 6tephen' ,'+ Microbiologa mdica' &Aa' !dicin' M2ico$
!ditorial !l Manual Moderno$ 6',' de 0'U' 3@@3'
Madigan$ M' 'C Martin1o$ B' M'C Par1er$ B' #roo1' #iologa de los Microorganismos &@ ed' Madrid$'
Prentice "all <beria' &>>>
Damos .orbe-a Buan 0arlos 6ena 0humbes$ =ernando ,gurto 6aenz orres ' Microbiologia b%sica 0olora
ciones de bacterias y la bioqumica en los medios de cultivo 3@@I'
PRIMER ELAMEN ESCRITO
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 3@
IL PRACTICA N) M
PRINCIPALES GRUPOS BACTERIANOS DE IMPORTANCIA MEDICA E I H
M$ " Mar.o 'e2ri.o
"$ E&'u,io ,e lo& e&'a5ilo.o.o&
La patogenicidad de una especie de !stafilococo$ se determina por produccin de hemolisina$
fermentacin del manitol y produccin de las enzimas coagulasa y deso2iribonucleasa'
2$ E&'u,io ,e lo& e&'re-'o.o.o&
,grupados originalmente por su capacidad para producir lisis de los hemates$ as tenemos los
estreptococos alfa$ beta y gama hemolticos$ segn sea la lisis parcial$ total o nula'
!2isten varias pruebas especficas para el estudio de estos microorganismos como son+
- Prueba de la bacitracina$ que se usa para la diferenciacin de un estreptococo #eta hemoltico del
.rupo ,$ de los #eta hemolticos del .rupo Jo ,'
- Prueba de 0,MP$ que se usa para la diferenciacin de un estreptococo beta hemoltico .rupo ,$ del
estreptococo beta hemoltico grupo #'
- Prueba de la catalasa$ para evidenciar la presencia de esta enzima sobre el per2ido de hidrgeno'
- Prueba de 4ptochin$ para evidenciar la sensibilidad del S. pneumoniae al 4ptochin del y la
resistencia del S. viridans
- '
M$ 2 Co0-e'e*.ia&
8 !nsaya los mtodos de identificacin diagnstica in Uitro de especies representativas del gnero
Staphylococcus y Streptococcus.
M$ 3 Ma'erial 4 0>'o,o&
Placas con agar sangre
Placas con agar manitol salado
- Placas con agar (J,
- 0ultivo de+ Staphylococcus aureus y S. epidermidis Streptococcus viridans, S. pyogenes, S.
pneumoniae y S. agalactiae
- 6et de colorantes .ram
- Deactivo de coagulasa
- 6olucin "0l &J
- 6olucin de per2ido de hidrgeno al 5H
- (iscos de #acitracina
- (iscos de 4ptochin
M $ 6 Pro.e,i0ie*'o
"$ E&'u,io ,e lo& e&'a5ilo.o.o&
Colora.i2* 4 0or5olo%:a
- !fecta frotices en l%minas portaobjetos con cada una de las cepas'
- (espus de fijarlas al calor$ realiza coloraciones de .ram'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 3&
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin y anota las caractersticas morfolgicas'
I*o.ula.i2* e* a%ar &a*%re
Primer da
- oma una placa de agar sangre y lo di vide en dos sectores'
- <nocula cada sector correspondiente con cada una de las cepas de estafilococos+ S. aureus y S.
epidermidis'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- 4bserva el crecimiento en agar sangre'
-
Cre.i0ie*'o e* a%ar 0a*i'ol &ala,o
Primer da
- oma una placa de agar manitol salado y dividelo en dos sectores'
- <nocula cada sector correspondiente con las mismas cepas del ejercicio anterior'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- 4bserva el crecimiento en agar manitol salado y describe la morfologa de las colonias'
- 4bserva el viraje del color del indicador rojo de fenol$ debido a la acidez
- '
Prue@a ,e la .oa%ula&a
Primer da
- oma dos tubos que contienen @'G mL de plasma de conejo )reactivo de coagulasa*'
- <nocula cada uno de ellos con @'& mL de cada una de las dos cepas de estafilococos'
- <ncuba a 5AL0'
- 4bserva cada hora la aparicin de co%gulos$ por espacio de I horas'
- (e ser negativo el resultado$ se deja incubando y se hace una lectura final a las 3I horas'
- 6i aparece un co%gulo$ la bacteria posee la enzima coagulasa'
-
A..i2* ,e la DNA&a
Primer da
- oma una placa de agar (J, y la divide en dos sectores'
- <nocula en una mitad con el cultivo de S. aureus y la otra mitad con S. epidermidis'
- !n ambos casos$ la siembra la realiza con un solo trazo lineal perpendicular a la lnea divisoria'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas
6egundo da
- ,grega a la superficie del agar & ml de "0l &J y espera unos minutos'
- !l "0l &J precipita el (J, contenido en el medio de cultivo$ enturbi%ndolo'
- 4bserva la presencia de la enzima (J,sa$ por la aparicin de un halo transparente alrededor de la
siembra$ que indica la ausencia de (J,'
-
Prue@a ,e la .a'ala&a
- oma una asada de cada cultivo de S. aureus y S. epidermidis y lo coloca sobre un portaobjetos
limpio'
- ,-ade & a 3 gotas de "343 al 5H'
- 4bserva si se forman burbujas o no inmediatamente despus que se a-ade el reactivo'
- (escarta la l%mina en un recipiente con desinfectante'
2$ E&'u,io ,e lo& e&'re-'o.o.o&
Colora.i2* 4 0or5olo%:a
- !fecta frotis en laminas portaobjetos con cada una de las cepas'
- (espus de fijarlas al calor$ realice coloraciones de .ram'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 33
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin y anota las caractersticas morfolgicas'
-
I*o.ula.i2* e* a%ar &a*%re
Primer da
- oma una placa de agar sangre y la divide en dos sectores'
- <nocula cada sector correspondiente con cada una de las cepas de estreptococos+ S. viridans )alfa
hemoltico* y S. pyogenes )beta hemoltico*'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- 4bserva las diferencias de hemlisis en agar sangre'
-
Prue@a ,e la @a.i'ra.i*a
6e usa para la diferenciacin de un estreptococo #eta hemoltico del .rupo ,$ de los #eta hemolticos
del .rupo Jo ,'
Primer da
- oma una placa de agar sangre y divde en dos sectores'
- <nocula cada sector correspondiente con cada una de las cepas de estreptococos+ S.agalactiae y
S.pyogenes y coloca cuidadosamente y en forma estril con ayuda de una pinza$ un disco de
#acitracina en cada mitad'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- 4bserva el halo de inhibicin$ indicando la susceptibilidad a la #acitracina del S' pyogenes'
-
Prue@a ,e CAMP
6e usa para la diferenciacin de un estreptococo beta hemoltico .rupo ,$ del estreptococo beta
hemoltico grupo #'
Primer da
- <nocula con trazo lineal en una placa de agar sangre$ una colonia de 6' aureus'
- Luego perpendicular al trazo anterior$ inocula las cepas de estreptococos+ S. agalactiae y S.
pyogenes en cada mitad de la placa sin tocar la cepa de estafilococo'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- 4bserva los resultados obtenidos'
- !l estreptococo beta hemoltico .rupo # )S.agalactiae*$ produce una sustancia )factor 0,MP*$ que
agranda la zona de hemlisis producida por el estafilococo$ factor que no posee el estreptococo beta
hemoltico .rupo , )S. pyogenes*'
-
Prue@a ,e la .a'ala&a
- oma una asada del cultivo de Streptococcus pyogenes y coloca sobre un portaobjetos limpio'
- ,-ada & a 3 gotas de "343 al 5H'
- 4bserva si se forman burbujas o no inmediatamente despus que se a-ade el reactivo'
- (escarta la l%mina en un recipiente con desinfectante'
-
Prue@a ,e O-'o.Gi*
Primer da
- oma una placa de agar sangre y la divde en dos mitades'
- <nocula una mitad de la placa con S. viridans y la otra mitad con S. Pneumoniae y coloca
cuidadosamente y en forma estril con ayuda de una pinza$ un disco de 4ptochin en cada mitad'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
M$ 7 Re&ul'a,o&
4bserva y reporta los resultados
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 35
M$8 Cue&'io*ario
9Pu factores condicionan la patogenicidad del S. aureus en comparacin con otras especies de
estafilococos:
!. 9Pu enfermedades produce el S. epidermidis y el S. saprophyticus:
". !s recomendable en un paciente que presenta un cuadro de faringoamigdalistis$ hacerse un e2amen de
secrecin farngea a fin de descartar la presencia de Streptococcus pyogenes
M$ 9 Fue*'e& ,e i*5or0a.i2*
#roo1s$ .' ='C #utel$ B' 6'$ Morse$ 6' ,'+ Microbiologa mdica de BaRetz$ Melnic1 y ,delberg' $35a ed'
M2ico' !ditorial !l Manual Moderno$ 6',' de 0'U' 3@@G V&V'@&O#MIO 3@@G'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 3I
L$- PRACTICA N) N
PRINCIPALES GRUPOS BACTERIANOS DE IMPORTANCIA MEDICA E II H
N$ " Mar.o 'e2ri.o
"$ Gru-o Clo&'ri,ia
6on formadores de esporas$ anaerobios estrictos$ cuyas especies patgenas se caracterizan por producir
e2oto2inas muy importantes' !ntre las enzimas mas importantes que producen son las proteolticas'
Gru-o Ba.illu&
!l genero Bacillus$ agrupa microorganismos aerobios y anaerobios facultativos$ .ram positivos$
caracterizados por su capacidad de producir endoesporas y que pueden sobrevivir en el ambiente por
mucho tiempo'
N$ 2 Co0-e'e*.ia&
8 Manipula en el Laboratorio especies del gnero Bacillus y Clostridium
N$ 3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
- 0ultivo de+ Clostridium sporogenes y Bacillus subtilis
- ubos con gelatina
- Placas con agar sangre
- ubos con caldo tioglicolato
- ubos con 6,
- Per2ido de hidrgeno
- 6et de coloracin de esporas
- 6et de coloracin .ram
N$ 6 Pro.e,i0ie*'o
"$ Gru-o Clo&'ri,ia
Colora.i2* ,e %ra0 4 0or5olo%:a
- Dealiza frotices de los cultivos de ambos microorganismos los fja al calor y colorea segn la
tcnica de .ram'
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin y anota las caractersticas tintoreales y de
morfologa de estos microorganismos'
-
Colora.i2* ,e e&-ora&
- "ace frotices de los cultivos de ambos microorganismos los fja al calor y colorea segn la tcnica de
coloracin de esporas'
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin'
- ,nota el tipo de esporas y su ubicacin terminal$ subterminal o central de ambas especies de
grmenes
-
Cul'i#o e* a%ar &oli,i5i.a,o rJ-i,a0e*'e
Primer dia
- =undir% dos tubos de 6,'
- !nfriar% los tubos a apro2imadamente IGL0'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 3G
- <nocular% cada tubo con los cultivos provistos'
- ,gitar% el tubo golpe%ndolo ligeramente con los dedos'
- !nfriar% los tubos r%pidamente ponindolos bajo una corriente de agua fra'
- Luego limpia los tubos y rotula'
- <ncuba hasta la siguiente clase'
6iguiente clase
- (espus de la incubacin$ observa los tubos e indica las regiones donde se produjo el desarrollo'
-
I*o.ula.i2* e* .al,o 'io%li.ola'o
Primer da
- <nocula cada tubo con el medio de tioglicolato con los cultivos provistos'
- <ncuba los tubos a 5AL0 durante IM horas'
Lectura
- (espus de transcurrido el tiempo de incubacin$ observa las regiones de crecimiento en el medio'
-
Gru-o Ba.illu&
Colora.i2* 4 0or5olo%:a
- Prepara frotices del cultivo de Bacillus subtilis y colorea por la tincin de .ram'
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin'
- 4bserva los bacilos dispuestos en cadenas largas con los e2tremos rectos' Las esporas se localizan
generalmente en la parte subterminal del bacilo y aparecen como %reas no te-idas'
-
I*o.ula.i2* e* a%ar &a*%re
Primer da
- 6iembra la cepa de B.subtilis en agar sangre por el mtodo de dispersin K agotamiento'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- !n el agar sangre$ observa la beta K hemlisis producida por B.subtilis'
-
I*o.ula.i2* e* TSA
Primer da
- 6iembra la cepa de B.subtilis en 6, por el mtodo de dispersin K agotamiento'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- 4bserva las caractersticas de la colonia$ gris blanquecina$ grande$ e2tendida$ de bordes irregulares'
-
Ii,r2li&i& ,e la %ela'i*a
Primer da
- 6iembra por el mtodo de puntura en el tubo con gelatina'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- !nfria el tubo y observa la hidrlisis de la gelatina'
-
Prue@a ,e la .a'ala&a
- oma una asada del cultivo de B.subtilis y lo coloca sobre un portaobjetos limpio'
- ,-ade & a 3 gotas de "343 al 5H'
- 4bserva si se forman burbujas o no inmediatamente despus que se a-ade el reactivo'
- (escarta la l%mina en un recipiente con desinfectante'
-
Mo#ili,a,
- oma una asada del cultivo de B.subtilis y lo coloca sobre un portaobjeto limpio'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 3V
- 0oloca una laminilla encima del portaobjetos y observa la movilidad del B.subtilis utilizando el
objetivo de I@2'
-
N $7 Re&ul'a,o&
!squematiza y reporta los resultados obtenidos en cuanto a su morfologa microscpica y
las caractersticas de cada uno de los microorganismos trabajados en la practica
N$ 8 Fue*'e& ,e i*5or0a.io*
#roo1s$ .' ='C #utel$ B' 6'$ Morse$ 6' ,'+ Microbiologa mdica de BaRetz$ Melnic1 y ,delberg' 35 ed'
!ditorial !l Manual Moderno$ 6',' de 0'U'$ 3@@G'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 3A
LI$- PRACTICA N) "(
PRINCIPALES GRUPOS BACTERIANOS DE IMPORTANCIA MEDICA E III H
"( $" Mar.o 'e2ri.o
"$ Gru-o E*'ero@a.'eria&
Las diferentes especies de enterobacterias se identifican por su actividad metablica en diferentes
medios de cultivo que contienen carbohidratos$ protenas$ amino%cidos$ etc' !stos microorganismos no
producen citocromo K o2idasa$ lo que las diferencia de las Pseudomonas, #lcal$genes$ #eromonas y
Vibrios'
2$ Gru-o P&eu,o0o*a&
,lgunas especies son patgenas oportunistas para el hombre$ siendo la mas importante Pseudomonas
aeruginosa por ser la especie mas frecuentemente asociada con enfermedad humana' P'aeruginosa
desarrolla f%cilmente en los medios de cultivo$ la mayora de las especies son identificadas en base a su
olor caracterstico$ morfologa colonial$ pigmentos y otros'
3$ Gru-o !i@rio&
!n el gnero Vibrio se describen dos grupos+ un grupo comprende a Vibrio cholerae$ causante del clera
y los Vibrio no aglutinantes que pueden producir diarreas no epidmicas' 4tro grupo$ lo conforman las
especies halofilicas$ que tienen afinidad por el cloruro de sodio' !ntre estos$ V. parahaemoliticus$ que
puede producir enfermedades similares al clera pero sin ser tan severas'
"($ 2 Co0-e'e*.ia&
8 !nsaya los mtodos de identificacin diagnstica in Uitro en el laboratorio de especies
representativas+ Escherichia coli, Salmonella, Shigella , Vibrio.y Pseudomonas aeruginosa
"($ 3 Ma'eriale& 4 0>'o,o&
Gru-o E*'ero@a.'eria&
- Placas con agar+ Mc 0on1ey$ 66$ !M#$ 6<$ 0itrato de 6immons
- ubos con agar+ Wrea$ 6<M
- ubos con caldo+ UP K DM$ peptonado$ lactosado
- 0ampanas de (urham
- 0ultivo de+ E.coli, Salmonella tiphy, Shigella, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes,
Proteus vulgaris
- 6et de colorantes .ram
- Deactivos de+ /ovacXs$ Dojo de Metilo$ Uoges K Pros1auer+ )alfa K naftol al GH y /4" K creatina al
I@H*$ o2idasa
- L%minas porta y cubreobjetos
Gru-o P&eu,o0o*a&
- ubos con+ 6, y 6<
- ubos con 6#
- 0ultivo de Pseudomonas aeruginosa
- 6et de coloracin .ram
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 3M
- Deactivo de o2idasa
-
Gru-o !i@rio
- 0ultivo de Vibrio cholerae
- 0ultivo de Vibrio parahaemolyticus
- Placas con agar 0#6
- ubos con agar 6<
- Deactivo de o2idasa
- 6et de coloracin .ram
- (eso2icolato de sodio
"($ 6 Pro.e,i0ie*'o
"$ Gru-o E*'ero@a.'eria&
Colora.i2* 4 0or5olo%:a
- !n su mesa encontrar% una cepa representativa de los siguientes grupos+ Proteae$ !scherichiae$
6almonellae$ 6higellae$ y /lebsiellaeC con la cual trabajar% durante toda la pr%ctica'
- Prepara frotices de la cepa del cultivo proporcionado y colorea por tincin de .ram'
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin'
-
Mo#ili,a,
- oma una asada de la cepa del cultivo proporcionado y lo coloca sobre un portaobjetos limpio'
- 0oloca una laminilla encima del portaobjetos y observa la movilidad del microorganismo
utilizando el objetivo de I@2'
-
I*o.ula.i2* e* a%ar M. Co*Ke4
Primer da
- 6iembra la cepa proporcionada por el mtodo de dispersin K agotamiento la placa con agar Mc
0on1ey'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- La degradacin de la lactosa a %cidos se manifiesta por el viraje de color a rojo del indicador de p"
rojo neutroC siendo estas colonias$ lactosa K positivas'
- Las colonias que son lactosa K negativas son incoloras
-
I*o.ula.i2* e* a%ar EMB EEo&i*a D Azul ,e Me'ile*oH
Primer da
- 6iembra la cepa proporcionada por el mtodo de dispersin Kagotamiento en la placa con agar !M#'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- !n el medio !M# observa colonias negruzcas con brillo met%lico verdoso$ cuando metabolizan la
lactosa o sacarosa y translcidas o de color %mbar si son lactosa K negativas'
-
I*o.ula.i2* e* a%ar SS ESal0o*ella D SGi%ellaH
Primer da
- 6iembra la cepa proporcionada por el mtodo de dispersin K agotamiento en la placa con agar 66'
- <ncubar a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 3>
- !n el medio 66$ la deteccin de coliformes se comprueba cuando hay degradacin a %cido mediante
el indicador de p" rojo neutro y observar% colonias negras$ si las bacterias producen sulfuro de
hidrgeno'
Di5ere*.ia.i2* 0e'a@2li.a ,el %ru-o ,e E*'ero@a.'eria&
Primer da
- 0on la cepa asignada$ procede a inocular por los mtodos de siembra adecuados$ los siguientes
medios+
- 0aldos+ Lactosado$ peptonado y MD8UP
- ,gar+ Wrea$ 6<$ 6<M$ 0itrato
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas
6egundo da
- !l alumno anotar% los resultados de este ejercicio y efectuar% la identificacin de la cepa
proporcionada' 0omparar% los resultados con la tabla proporcionada+ Uer tabla+ &@8&'
a* 0aldo Lactosado+ despus del perodo de incubacin$ observe el resultado obtenido )cambio de
coloracin$ presencia de gas* y compare con los resultados de los dem%s alumnos de la clase'
b* ,gar Wrea+ la prueba es positiva si el medio presenta un color rosado en la superficie o en todo el
tubo y es negativa$ si el medio permanece del color original' 4bserve el resultado obtenido y compare
con los resultados de los dem%s alumnos de la clase'
c* ,gar 6<+ es indispensable que la lectura en el plazo establecido y observe+
- Produccin de "36+ ennegrecimiento en el fondo del tubo'
- =ermentacin de la glucosa nicamente )rojoOamarillo*'
- =ermentacin doble o triple de carbohidratos )amarilloOamarillo*'
- Jo fermentacin de carbohidratos )rojoOanaranjado*'
- Produccin de gas+ formacin de burbujas$ grietas o desplazamiento del medio'
d* ,gar 6<M ),zufre K <ndol K Movilidad*+
- (etecta la produccin de hidrgeno sulfurado por medio de la observacin de un precipitado negro
en el medio'
- Dealiza la prueba de produccin de indol como en )e*
- 4bserva la movilidad del microorganismo$ y realiza un e2amen macroscpico del medio por una
zona de desarrollo difuso que parte de la lnea de inoculacin'
e* 0aldo peptonado+ despus del perodo de incubacin+
- ,grega en zona I gotas del reactivo de /ovacXs$ en cada tubo que presenta desarrollo bacteriano$
luego agitar suavemente'
- La reaccin es positiva$ si se forma un anillo de color rojo fucsia brillante en la zona superior del
tubo$ pocos segundos despus de haber agregado el reactivo y es negativa si no hay cambio alguno'
f* 0aldo MD KUP )reaccin de Dojo de Metilo*+
- ,grega I G gotas del indicador rojo de metilo a cada tubo$ cuyo rango de viraje esta entre p" I'I
)D4B4* y V'@ ),M,D<LL4*'
- La prueba es positiva si se mantiene un color rojo estable y negativa si da una coloracin amarillo K
naranja'
g* 0aldo MD K UP )reaccin de Uoges K Pros1auer*+ agregar a cada tubo+
- &@ a &3 gotas de la solucin de alfa8naftol y I gotas de la solucin de /4" K creatina'
- ,gita despus de agregar las soluciones por & minuto y deja en reposo durante &G minutos'
- La reaccin es positiva$ si aparece una coloracin rosada localizada en la mitad superior o en todo el
tubo dentro de los primeros &G minutos )presencia de acetil8metil8carbinol* y negativa$ si el color
inicial del medio de cultivo no cambia'
h* ,gar 0itrato+
- La prueba es positiva si observa crecimiento bacteriano y un color azul intenso del agar en 3I a IM
horas y negativa si no hay crecimiento ni cambio de color'
%ota& para la lectura se recomienda hacer uso de las tablas de identi'icaci(n bioqu$mica que describen las
reacciones de diagn(stico clave para identi'icar los g)neros de las bacterias ent)ricas
.
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 5@
Rea..i2* ,e la Ci'o.ro0o O3i,a&a
- 0on el asa de siembra en punta$ picar el crecimiento del tubo con la cepa proporcionada$ y transferir
el inculo a una tira del reactivo de o2idasa'
- 0onsiderara la prueba positiva cuando los cultivos dan una coloracin azul viol%ceo intensa en la
tira$ en un m%2imo de G segundos'
2$ Gru-o P&eu,o0o*a&
Colora.i2* 4 0or5olo%:a
- Prepara frotices de la cepa del cultivo proporcionado y colorea por la tincin de .ram'
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin'
-
I*o.ula.i2* e* TSA
Primer da
- 6iembra la cepa de Pseudomonas aeruginosa en 6, por el mtodo de dispersin K agotamiento'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da 4bserva las caractersticas de la colonia y presencia de pigmentacin
- '
I*o.ula.i2* e* a%ar TSI
Primer da
- 0on el asa de siembra$ inocula en el centro del tubo y estra la superficie del pico de flauta'
- Dotula e incuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
Dealiza la lectura tal como se indica para las enterobacterias
'
Rea..i2* ,e la Ci'o.ro0o O3i,a&a1 proceder tal como se indica para las enterobacterias
Cul'i#o a 62)C
Primer da
- 6iembra la cepa de P. aeruginosa en los tubos de 6# por la tcnica de inoculacin'
- <ncuba a I3L0 por 3I horas
6egundo da
- 4bserva la presencia o no de crecimientomicrobiano a I3 L0$ en los tubos
-
3$ Gru-o !i@rio
Colora.i2* 4 0or5olo%:a
- Prepara frotices de la cepa del cultivo proporcionado y colorea por tincin de .ram'
- 4bserva al microscopio con lente de inmersin'
-
I*o.ula.i2* e* a%ar TCBS ETio&ul5a'o D Ci'ra'o D Sale& @iliare& DSa.aro&aH
Primer da
- (ivide la placa de 0#6 por la mitad y sembrar en cada mitad las cepas de Uibrio por el mtodo de
dispersin K agotamiento'
- <ncuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
- Las colonias de Vibrio cholerae que desarrollan en 0#6 son circulares$ con el borde ligeramente
opaco$ con un halo claro alrededor y son amarillas por que metabolizan la sacarosa'
- Las colonias de Vibrio parahaemolyticus que desarrollan en 0#6 son circulares$ pegajosas$ con
halo claro alrededor$ y son de color verde porque no degradan la sacarosa
I*o.ula.i2* e* a%ar TSI
Primer da
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 5&
- 0on el asa de siembra$ inocula en el centro del tubo y estra la superficie del pico de flauta'
- Dotula e incuba a 5AL0 por 3I horas'
6egundo da
Dealiza la lectura tal como se indica para las enterobacterias'
Rea..i2* ,e la Ci'o.ro0o O3i,a&a1 proceder tal como se indica para las enterobacterias'
Prue@a ,el 5ila0e*'o o OS'ri*% Te&'P
- (eposita una gota de la solucin de deso2icolato de sodio al @'GH sobre una lamina portaobjeto'
- !mulsiona en ella una colonia de V.cholerae o V. Parahaemolyticus con el asa de siembra'
- (etecta la presencia de filamento al levantar el asa'
"( $7 Re&ul'a,o&
&' !squematiza$ registra y reporta los resultados obtenidos$ identificando en cada caso la especie'
"( $8 Cue&'io*ario
(escriba el fundamento de las pruebas realizadas
"($ 9 Fue*'e& ,e i*5or0a.io*
/oneman$ !' Q'C ,llen$ 6' ('C (oRell Br'$ U' D'C Banda$ Q' M'C 6ommers$ "' M'C Qinn Br$ Q' 0'+ 0olor$
,tlas and e2tboo1 of (iagnostic Microbiology' B' #' Lippincott 0ompany' hird !dition' Philadelphia$
&>>A'
Madigan$ M' 'C Martin1o$ B' M'C Par1er$ B'+ #roo1' #iologa de los Microorganismos' Prentice "all <beria'
Madrid$ &>>>'
LII PRACTICA N) ""
SEMINARIO DE IN!ESTIGACION DE !IRUS
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 53
$
LIII PRACTICA N) "2
MICOLOGIA
"2$ " Mar.o 'e2ri.o
Los hongos normalmente se encuentran en la naturaleza como organismos saprofitos libres y son
principalmente patgenos oportunistas$ la mayora de los hongos no son patgenos para el hombre' 6olo
unas G@ especies causan enfermedades en el hombre y la incidencia de enfermedades fngicas graves es
muy baja$ sin embargo ciertas infecciones fngicas superficiales son bastante comunes'
6u estudio en el laboratorio$ es posible mediante un dispositivo para cultivo en 0%mara "meda sistema
esterilizado que consta de una placa petri conteniendo un disco de papel filtro y una varilla de vidrio en
SWTque soporta dos l%minas porta y cubre objetos' ,spticamente seccionar una peque-a porcin de
medio de ,gar 6abouraud y colocar sobre la l%mina porta objetos' 6embrar el hongo y cubrir la
preparacin con la otra l%mina' La placa es incubada a temperatura ambiente )3@83GL0* por I G das'
"2$ 2 Co0-e'e*.ia&
!nsaya los mtodos de estudio in vitro para la identificacin e investigacin de especies representativas del
medio ambiente y de importancia clnica'
"2$ 3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
- Placas petri con colonias de hongos aislados del medio ambiente'
- ,gua destilada estril'
- (ispositivo para cultivo en 0%mara "meda'
- Mechero de alcohol'
- 6olucin de /4" al &@H
- ,zul de metileno'
- Papel filtro'
- Uarilla de vidrio en SWT'
- ,gar 6abouraud'
- L%minas porta y cubre objetos$ aspticas'
"2$ 6 Pro.e,i0ie*'o
- Wtilizando aguja de /olle o estilete$ picar una colonia y e2trae una fraccin mnima o micelio'
- (eposita esta fraccin sobre la porcin de agar dispuesta en el portaobjeto de la c%mara hmeda'
- 0on ayuda de una pinza estril cubrir% la preparacin con la l%mina cubre objetos'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 55
- "umedece el papel filtro de la placa con agua estril' y e2amina diariamente al microscopio la
l%mina sembrada hasta verificar el completo desarrollo del hongo'
- Detira cada vez la l%mina de cultivo y observa $ y si es necesario$ a-ade m%s agua al sistema'
- 4bserva la germinacin de las esporas$ el crecimiento y ramificacin del micelio$ la aparicin de
hifas diferenciadas y el desarrollo de las estructuras de reproduccin'
- 0on ayuda de un Manual de identificacin de hongos determina el gnero correspondiente'
-
"2$ 7 Re&ul'a,o&
4bserva esquematiza e informa los resultados' !labora esquemas en cada etapa de desarrollo
"2$ 8 Cue&'io*ario
&' 90u%l es la ventaja del empleo de la c%mara hmeda en el estudio de los hongos:
3' !2iste diferencias entre hongos a nivel del crecimiento y diferenciacin del micelio:' !2plique'
"2 $ 9 Fue*'e& ,e i*5or0a.i2*
Levinson$ Q' !'C BaRetz$ !'+ Microbiologa e <nmunologa' !ditorial !l Manual Moderno' 6egunda
!dicin' M2ico$ 3@@@'
#roo1s$ .' ='C #utel$ B' 6'$ Morse$ 6' ,'+ Microbiologa mdica de BaRetz$ Melnic1 y ,delberg' &V
dicion' M2ico' !ditorial !l Manual Moderno$ 6',' de 0'U'$'&>>>'

F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 5I

LI! PRACTICA N) "3

FAGOCITOSIS
"3 $" Mar.o 'e2ri.o
La fagocitosis es la propiedad que tiene algunas clulas de englobar a las bacterias o cualquier cuerpo e2tra-o
y tratar de destruirlas por accin de enzimas es un fenmeno no especifico y se incrementa cuando intervienen
anticuerpos especificos contra bacterias u otros antgenos
!ntre las clulas fagocticas se encuentran los polimorfonucleares y los macrfagos+ monocitos libres y
clulas fijasC clulas que pertenecen al sistema retculo endotelial )D!6*'
!n la pr%ctica se comprobar%n los resultados de la prueba de fagocitosis in vivo$ obtenidos en ratones
normales y en ratones inmunizados inoculados con glbulos rojos de carnero
"3 $ 2 Co0-e'e*.ia&
8 !nsaya en el laboratorio el fenmeno de la fagocitosis
"3 $ 3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
- 6uspensin de glbulos rojos de carnero al 3H'
- Datones normales'
- Datones inmunizados con glbulos rojos de carnero'
- 0olorante de Leishman
- !quipo de diseccin'
- L%minas portaobjetos'
- orundas de algodn'
"3 $ 6 Pro.e,i0ie*'o&
- <nocula @$G mL de suspensin de glbulos rojos de carnero por va intraperitoneal$ a cada uno de los
ratones normales e inmunizados'
- (espus de 5@ minutos$ sacrifica a los ratones por dislocacin cervical'
- Previa desinfeccin con alcohol$ abre la cavidad abdominal y realiza frotices del lquido peritoneal
utilizando las torundas de algodn'
- 6eca al aire y colorea las l%minas con Leishman'
- 4bserva la presencia de glbulos rojos de carnero libres y la e2istencia de macrfagos con glbulos
rojos englobados'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 5G
"3 $ 7 Re&ul'a,o&
Deportar los resultados de las observaciones hechas en las l%minas coloreadas y comparar el promedio de
los glbulos rojos fagocitados por los macrfagos tanto de los animales normales como de los fagocitados
"3 $ 8 Cue&'io*ario
I$ 90u%les son los mecanismos de defensa de la respuesta inmune inespecfica: !2plique'
II$ 9Pu es la respuesta inmune especfica y de cuantos tipos puede ser sta:' 9Pu se requiere para que
se inicie la respuesta inmune celular:
"3$9 Bi@lio%ra5ia re.o0e*,a,a
,bbas$ ,' /'C Litchman$ ,' "'C Pober$ B' 6'+ <nmunologa 0elular y Molecular'' 5
a
ed' Madrid$ Mc.raR8
"ill <nteramericana$&>>>'
#roo1s$ .' ='C #utel$ B' 6'$ Morse$ 6' ,'+ Microbiologa mdica de BaRetz$ Melnic1 y ,delberg' 35a'
!dicin' M2ico$ !ditorial !l Manual Moderno$ 6',' de 0'U'$' 3@@G'
Qeir$ ('M'C 6teRart #6c$ B+ <nmunologa' M2ico !ditorial !l manual Moderno'$ &>>>'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 5V
LI! PRACTICA N) "6
PODER BACTERICIDA DEL SUERO
"6 $ " Mar.o 'e2ri.o
!l lquido obtenido de la sangre que se deja coagular se conoce como &uero' !ste comprende varias
molculas$ pero no clulas ni factores de coagulacin el suero de un animal inmunizado de manera adecuada
contiene sustancias neutralizantes especificas 6e caracterizan por ser termol%biles y no dializables
Por capacidad de anteponerse a las to2inas bacterianas$ se les denomin anticuerpos o inmunoglobulinas'
(esde hace A@ a-os se conoce un componente srico con capacidad de lisar eritrocitos$y destruir bacterias
.ramnegativas' ,ctualmente se sabe que el complemento es un grupo de protenas sricas en concentraciones
bajas en el suero normal las cuales se SactivanT para formar una cascada enzim%tica'
"6$2 Co0-e'e*.ia&
8 (emuestra in8vitro el poder bactericida del suero'
"6 $ 3 Ma'eriale& 4 e/ui-o&
- Muestra de sangre de un paciente con hemocultivo positivo$ para la obtencin del suero'
- ubos de prueba
- 6uspensiones bacterianas de+ Salmonella typhi y Satphylococcus aureus.
- !scala de Mc =arland
- 6olucin salina estril'
- ,gar Mueller "inton
- Placas Petri estriles'
"6$ 6 Pro.e,i0ie*'o
- 4btiene una muestra de sangre procedente de un paciente con hemocultivo positivo$ luego separa el
suero aspticamente y lo almacena a K3@L 0'
- 0oloca @$G ml de suero en cuatro tubos )luego de descongelarlo y homogenizarlo*'
- Dotula los tubos con los nmeros &$ &Y$ 3 y 3Y'
- Los tubos & y &Y deben permanecer tal cual y los tubos 3 y 3Y$ deben ser sometido a calor )GVL 0 por
5@Y*
- rabaja paralelamente un blanco )@$G mL de solucin salina*'
- Prepara las suspensiones bacterianas de los microoganismos de estudio$ a una concentracin similar al
tubo @$G de la escala de Mc =arland'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 5A
- Mezcla el contenido de cada uno de los tubos &$ &Y$ 3$ 3Y y blanco )cada uno contiene un volumen de
@$G mL* con @$G mL de las suspensiones bacterianas preparadas'
- <ncuba los tubos conteniendo las mezclas$ a 5AL 0 por & hora'
- 6iembra por duplicado$ por el mtodo de incorporacin'
"6 $7 Re&ul'a,o&
4bserva $reporta y e2plica acerca del crecimiento microbiano en cada placa
"6$8 Cue&'io*ario
<' 90u%les son los mecanismos de defensa de la respuesta inmune inespecfica: !2plique'
<<' 9Pu es la respuesta inmune especfica y de cuantos tipos puede ser sta:' 9Pu se requiere para que
se inicie la respuesta inmune celular:
"6$7 Fue*'e& ,e i*5or0a.i2*
,bbas$ ,' /'C Litchman$ ,' "'C Pober$ B' 6'+ <nmunologa 0elular y Molecular'' 5
a
ed' Madrid$ Mc.raR8
"ill <nteramericana$&>>>'
#roo1s$ .' ='C #utel$ B' 6'$ Morse$ 6' ,'+ Microbiologa mdica de BaRetz$ Melnic1 y ,delberg' 35a'
!dicin' M2ico$ !ditorial !l Manual Moderno$ 6',' de 0'U'$' 3@@G'
Qeir$ ('M'C 6teRart #6c$ B+ <nmunologa' M2ico !ditorial !l manual Moderno'$ &>>>'
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 5M
F-C!3-3B-" RE!$ AGOSTO 2("" 5>