Informe de Genetica (1) de Jesus

Laboratorio de Gentica
Informe de cruces en la drosophila melanogaster

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INTRODUCCIN
La transmisin de la informacin biolgica de los progenitores a progenie ha sido un factor
esencial en desarrollo de los organismos, esta transmisin ha requerido de la evolucin de
mecanismos genticos, que garanticen la fidelidad de este proceso. Debido a su fundamental
importancia estos mecanismos, fueron establecidos desde muy temprano en la historia de la vida,
de manera que en la actualidad son compartidos por muchos grupos taxonmicos. Para
comprender los principios genticos, es posible entonces estudiar organismos muy diferentes y
llegar a conclusiones generales. La seleccin de un organismo especfico, para realizar estudios
genticos, depende de las ventajas que ste presente para la realizacin de estos estudios.
La mosca de la fruta Drosophila melanogaster, ofrece grandes ventajas para la realizacin de
diversos estudios en gentica. Ha sido utilizada ampliamente como material experimental desde
que fue utilizada por W.E.Castle, en 1906, y sent las bases para las cruzas llevadas a cabo por T.H.
Morgan y sus colaboradores en1909.
Las principales ventajas como organismo modelo se centran fundamentalmente en un tiempo de
generacin corto, una abundante descendencia y un fcil mantenimiento debido a sus reducidas
dimensiones. Debido al exhaustivo estudio de Drosophila durante el ltimo siglo, ha sido posible la
acumulacin de gran cantidad de informacin.
Uno de los avances ms importantes se produjo en el ao 2000 cuando la secuencia completa del
genoma de Drosophila fue publicada. Este hecho, junto con la disponibilidad de multitud de
tcnicas y herramientas moleculares para su anlisis, ha permitido consolidar a Drosophila como
organismo modelo en los estudios de la Gentica del Desarrollo.
Otra de las grandes ventajas de Drosophila se basa en la facilidad para introducir y combinar
mutaciones en su genoma. De esta forma, el fenotipo mutante nos permite inferir la posible
funcin del gen durante el desarrollo. El genoma de Drosophila contiene poco ADN repetitivo y la
mayora de los genes sonde copia nica, evitndose as los inconvenientes de la redundancia
funcional. Esta particularidad, junto con la posibilidad de insertar nuevo material gentico en el
genoma de Drosophila ha permitido la generacin de diversas colecciones de mutantes, que
constituyen un poderoso medio para analizar procesos biolgicos complejos.


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OBJETIVOS
Determinar las caractersticas morfolgicas externas de la Drosophila Melanogaster.
Comprobar las proporciones mendelianas.
Comparar las diferencias anatmicas entre hembras y machos de la Drosophila
Melanogaster.
Identificar presencia de mutaciones en las muestras recogidas.

MARCO TERICO
Biologa de drosophila melanogaster

Fuente: http://explorerbiogen.blogspot.com/2011/06/drosophila-melanogaster-como-
modelo.html
Ciclo de vida
El desarrollo de la mosca de fruta presenta 2 fases:
la embrionaria y la post embrionaria. La secuencia
de duracin de los diferentes estadios en el ciclo
de vida es:
Huevo (1 da), larva de primer, segundo y tercer
estadio (1 da), pupa (4 a 5 das). As la duracin del
ciclo de vida completo es de 9 a 10 das en
condiciones controladas de temperatura y
humedad relativa. En su hbitat natural la duracin
del ciclo es ms variable como resultado de los
cambios climticos y la adversidad del ambiente.

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Morfologa externa
Cabeza
En la estructura general de los insectos la cabeza se forma por 6 segmentos: 1)
labrum, 2) clipeus, 3) antenal-ocular, 4) mandibular, 5) maxilar y 6) labial.
En la cabeza se encuentran sobre todo los rganos de los sentidos.
Los ojos compuestos son relativamente grandes, estn separados con amplitud y
son del mismo tamao y forma en los dos sexos, presentan setas pequeas y
rgidas que surgen de cada ngulo de unin de los aproximadamente 750
omatidios.
Los tres ocelos se encuentran juntos en un arreglo triangular en la parte superior
de la cabeza.
Entre los ojos estn las antenas, que se encuentran muy cercanas entre s.
En la regin ventral de la cabeza se encuentran las partes bucales: el labrum y el
clipeus, que estn altamente modificadas con respecto al plan general de los
insectos ya que forman un aparato chupador o proboscis.
Trax
El trax se forma de tres segmentos: el protrax o segmento anterior, el
mesotrax o segmento medio y el metatrax o segmento posterior. Todos los
segmentos del trax de Drosophila se encuentran fusionados formando una caja
casi slida.
El protrax por s mismo es muy reducido y slo sirve de soporte para el primer
para de patas.
Se presenta un marcado alargamiento del mesotrax y una reduccin del
metatrax, por los que las alas mesotorcicas tienen la funcin total del vuelo,
mientras que las alas metatorcicas se han reducido a los halterios (balancines)
que funcionan como rganos de equilibrio.


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Abdomen
La hembra muestra ser ms generalizada; el 8 segmento no tiene espirculos ni
esternito definido. Despus de ste slo se encuentra un pequeo segmento
donde aparece el ano, este segmento presenta una placa dorsal y una ventral; la
abertura genital se encuentra entre los segmentos 8 y 9.
En el macho la situacin es ms complicada. El 7 segmento desaparece
aparentemente y queda representado slo por su espirculo y el 8 slo por una
placa pequea en cada lado, el 9 est fuertemente modificado, muestra un
terguito muy grande y un esternito muy pequeo y el 10 se representa por un par
de placas situadas al lado del ano.


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Especies mutantes en Drosophila melanogaster
MUTANTE NOMENCLATURA
PARTE DEL CUERPO
AFECTADA
Yellow Y Cuerpo amarillo
White eyes W Ojos blancos
Carmine eyes Cm Ojos carmn
Vermillion wing V Ojos bermelln
Miniatura wing M Alas miniatura
Forked bristies F Quetas en forma de tenedor
Bar eyes B Ojos en forma de barra
Helout Ho Alas extendidas en 45
Dumpy wing Dp Alas regordetas
Cinnabar eyes Cu Ojos color cinabrio
Vestigial wing Vg Alas vestigiales
Brown eyes Bw Ojos pardos
Sepia eyes Se Ojos color sepia
Hairless H Sin quetas o pelos
Ebony body E Cuerpo color bano
Eyeless Ey Ojos reducidos a la mitad
Jaunti J
Alas con extremos doblados
hacia arriba

A continuacin presentaremos algunas caractersticas de las mutaciones con las que hemos
trabajado:
White w (I, 1.5): de origen espontneo. Descubierto por Morgan. Fenotipo: ojos color
blanco puro. Los ocelos, la cubierta de los testculos del adulto y los tubos de Malpighi de
las larvas son incoloros.


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Vestigial vg (II, 67.0): de origen espontneo. Descubierto por Morgan. Fenotipo: alas
reducidas a vestigios; por lo general dispuestas en ngulo recto respecto al cuerpo. Las
venas de las alas ligeramente visibles.

Miniatura m (I, 36.1): de origen espontneo, descubierto por Morgan. Su fenotipo: el
tamao de las alas est reducido. Alas de color gris oscuro y menos transparente que lo
normal.

Yellow y (I, 0.0): de origen espontneo. Descubierto por E.M Wallace. Fenotipo: cuerpo
color amarillo; pelos y cerdas cafs con puntas amarillas. Venas y pelos de las alas color
amarillo.


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PARTE EXPERIMENTAL
Preparacin de los tapones de algodn
Corte la gasa de tal manera que la abertura del frasco sea ms chica que el pedazo cortado.
Formar una bola de algodn un poco dura que abarque el dimetro de la boca del frasco; que
deber colocar sobre la gasa para luego recoger los extremos y envolver con la misma, probar
nuevamente en la boca del frasco de tal manera que ajuste perfectamente. Amarrar la gasa con
pabilo, cortar los sobrantes, tapar el frasco para su posterior esterilizacin.
Los frascos con sus respectivos tapones deben ser esterilizados. Para ello, lleve los frascos a la
estufa por 30 minutos a 100C. Dejar enfriar para agregar el medio de cultivo.

Preparacin del medio de cultivo
Existen diversas frmulas de preparar el medio de cultivo de Drosophila melanogaster nosotros
emplearemos las siguientes proporciones:
Agar (20 gr) Levadura (20 gr) Azcar (30 gr) Ac. Propinico (5 ml)

Para la preparacin se disuelve el azcar en 800 ml de agua corriente y se hace hervir, luego
agregar poco a poco el agar en tiras. La levadura se disuelve en restantes 200ml de agua tibia.
Cuando todo el agar esta disuelto agregue la solucin que contiene levadura lentamente y dejar
hervir por unos minutos, a esta solucin final agregue los 5ml de cido propinico. Agregue en los
frascos esterilizados de 1 a 1,5 cm de medio de cultivo. Dejar enfriar durante 24 horas.
Preparacin del eterizador
El eterizador es un frasco que deber tener el mismo dimetro de abertura que los que contienen
el medio de cultivo y cuyo tapn deber estar limpio y esterilizado. En este frasco se narcotizan a
las moscas con cloroformo para el recuento.


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Recomendaciones en general
En todo momento los frascos con medio, solamente se destapan para el recuento de las moscas,
no halar sobre ellos para evitar la contaminacin con las bacterias. Los frascos con medio de
cultivo no pueden ser expuestos directamente al sol. Todo frasco con medio de cultivo viejo o
contaminado debe ser inmediatamente separado y luego lavado. Al utilizar el eterizador no se
debe embeber el tapn en demasa.

CLCULOS
(1) MONOHIBRIDISMO
Frasco 1:
P: vg vg x ++
F1: todas heterocigotos de fenotipo silvestre +/vg
vg vg
+ +vg +vg
+ +vg +vg

En segundo frasco cruzamos la F1, es decir F1XF1, para obtener la F2, esquematizando tenemos:
+ vg
+ ++ +vg
vg +vg vg vg

Obteniendo la siguiente proporcin genotpica 1(++):2(+vg):1(vg vg) y como consecuencia de esto
la siguiente proporcin fenotpica 3/4 silvestre(15) y (4) vestigial.


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Frasco 2:
P: ++ x vg vg
F1: todas heterocigotos de fenotipo silvestre +/vg (19)
+ +
vg +vg +vg
vg +vg +vg

En segundo frasco cruzamos la F1, es decir F1XF1, para obtener la F2, esquematizando tenemos:
+ vg
+ ++ +vg
vg +vg vg vg

Obteniendo la siguiente proporcin genotpica 1(++):2(+vg):1(vg vg) y como consecuencia de esto
la siguiente proporcin fenotpica 3/4 silvestre(25) y vestigial(10).
ANLISIS DEL CHI CUADRADO
Para el frasco 1:
Proporcin
esperada
fenotipos Observado
(o)
Esperado
(e)
Desviacin
(o-e)
Desviacin
2

(d
2
)
Desviacin
2
/esperado
(d
2
/e)
3/4 silvestre
1/4 vestigial
total X
2
=
Grados de libertad (gl)=1 P=%-%

Para el frasco 2:
Proporcin
esperada
fenotipos Observado
(o)
Esperado
(e)
Desviacin
(o-e)
Desviacin
2

(d
2
)
Desviacin
2
/esperado
(d
2
/e)
3/4 silvestre
1/4 vestigial
total X
2
=
Grados de libertad (gl)=1 P=%-%

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CHI CUADRADO DE HOMOGENEIDAD PARA FRASCO 1 DE MONOHIBRIDISMO (GRUPO: MARTES 4-
8 PM)

Fenotipos Silvestres Vestigiales Grado de libertad X
2

1
Observado
Esperado
O-E
D
2
/E

53

18

1

4,69 x 10
-3 53,25 17,75
-0,25 0,25
1,17 x 10
-3
3,52 x 10
-3
2
Observado
Esperado
O-E
D
2
/E

79

29

1

0,197
81 27
-2 2
0,049 0,148
3
Observado
Esperado
O-E
D
2
/E

107

37

1

0,037
108 36
-1 1
9,26 x 10
-3
0,028
Total 239 84 3 0,239


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DATOS ACUMULADOS

Observado 239 84

1

0,175
Esperado 242,25 80,75
O E -3,25 3,25
D
2
/E 0,044 0,131

En la tabla anterior se han obtenido los resultados para el total de los individuales para el X
2

acumulado.
El X
2
de homogeneidad se determina entonces de la siguiente manera:

X
2
Grados de libertad
X
2
total 0,239 3
X
2
ac 0,175 1
X
2
h 0,064 2

El X
2
h obtenido es 0,064, mayor del 5% (entre 90 95 %), entonces s pueden sumarse.


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CHI CUADRADO DE HOMOGENEIDAD PARA FRASCO 2 DE MONOHIBRIDISMO (GRUPO: MARTES 4-
8 PM)

Fenotipos Silvestres Vestigiales Grado de libertad X
2

1
Observado
Esperado
O-E
D
2
/E

134

43

1

0,047
132,75 44,25
1,25 -1,25
0,012 0,035
2
Observado
Esperado
O-E
D
2
/E

99

28

1

0,591
95,25 31,75
3,75 -3,75
0,148 0,443
3
Observado
Esperado
O-E
D
2
/E

122

48

1

0,749
127,5 42,5
-5,5 5,5
0,237 0,712
Total 355 119 3 1,387


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DATOS ACUMULADOS

Observado 355 119

1

2,81 x 10
-3
Esperado 355,5 118,5
O E -0,5 0,5
D
2
/E 7,03 x 10
-4
2,11 x 10
-3

En la tabla anterior se han obtenido los resultados para el total de los individuales para el X
2

acumulado.
El X
2
de homogeneidad se determina entonces de la siguiente manera:

X
2
Grados de libertad
X
2
total 1,387 3
X
2
ac 2,81 x 10
-3
1
X
2
h 1,384 2

El X
2
h obtenido es 1,384, mayor del 5% (entre el 30 50 %), entonces s pueden sumarse.


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(2) HERENCIA LIGADA AL SEXO
Frasco 1: P: XY x X
W
X
W

F1: 1/2White, 1/2silvestres. Es la proporcin de los fenotipos esperados.
De acuerdo a esto, los datos fueron:
fenotipo

total
Silvestre 16 16
White 10 10

Para F2, F1XF1, tenemos lo siguiente: F1: X
W
Y x XX
W

F2: 1/4White, 1/4 Silvestre, 1/4White y 1/4 silvestres. Estas son las proporciones
esperada de los cuatro fenotipos del frasco I.
En efecto, los datos de laboratorio fueron los siguientes:
fenotipo

total
Silvestre 11 13 24
White 9 8 17

X
W

(1/2)

X
W

(1/2)

X
(1/2)
XX
W

(1/4)

XX
W

(1/4)

Y
(1/2)
X
W
Y
(1/4)

X
W
Y
(1/4)

X
(1/2)

X
W

(1/2)

X
W

(1/2)

XX
W

(1/4)

X
W
X
W

(1/4)

Y

(1/2)

XY

(1/4)

X
W
Y

(1/4)


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Frasco 2: P: X
W
Y x XX (gametos)

F1: 1/2sivestres, 1/2silvestres. Luego, los datos de laboratorio fueron los siguientes:
fenotipo

total
silvestre 23 15 38

Para F2: F1XF1, tenemos lo siguiente: F1: XY x X

X
w

F2: 1/4White, 1/4silvestres, 1/2silvestres; esto es la proporcin esperada de los dos
fenotipos del frasco II.
Los datos de laboratorio fueron los siguientes:
fenotipo

total
Silvestre 21 45 66
White 25 25

X
(1/2)

X
(1/2)

X
W

(1/2)

XX
W

(1/4)

XX
W

(1/4)

Y

(1/2)

XY

(1/4)

XY
(1/4)

X
(1/2)

X
W

(1/2)

X

(1/2)

XX
(1/4)

XX
W

(1/4)

Y

(1/2)

X Y
(1/4)

X
W
Y

(1/4)


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ANLISIS DEL CHI CUADRADO:
Frasco 1:
Proporcin
esperada
fenotipos Observado
(o)
Esperado
(e)
Desviacin
(o-e)
Desviacin
2

(d
2
)
Desviacin
2
/esperado
(d
2
/e)
1/4 White 9 10,25 -1,25 1,56 0,15
1/4 Silvestre 11 10,25 0,75 0,56 0,05
1/4 White 8 10,25 -2,25 5,06 0,49
1/4 silvestres 13 10,25 2,75 7,56 0,74
Total 41 41 X
2
=1,43
Grado de libertad (gl)=3 P=50%-70%

Frasco 2:
Proporcin
esperada
fenotipos Observado
(o)
Esperado
(e)
Desviacin
(o-e)
Desviacin
2

(d
2
)
Desviacin
2
/esperado
(d
2
/e)
1/4 White 25 22,75 2,25 5,06 0,22
1/4 Silvestre 21 22,75 -1,75 3,06 0,13
1/2 silvestre 45 45,50 -0,50 0,25 0,01
total 91 91 X
2
=0,36
Grado de libertad (gl)=2 P=70%-90%


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(3) LIGAMIENTO
Se usarn moscas con las mutaciones Yellow y ( I, 0.0), White w (I,1.5) y Miniatura m (I, 36.1).
Pero por indicaciones del profesor, solo tomaremos en cuenta las mutaciones White (ojos) y
miniatura (alas).
Frasco I:
Macho silvestre x hembra white- miniatura
P: ++/++ x ww/mm
F1: silvestres (18) y white miniatura (12)

F2:
wm Y
Gametos parentales
wm wm / wm (2) wm / Y (1)
++ ++ / wm (11) ++ / Y (8)
Gametos
recombinantes
w+ w+ / wm (7) w+ / Y (5)
+m +m / wm (6) +m / Y (4)
Hembras (26) Machos (18)

Frasco 2:
Macho white-miniatura x hembra silvestre
P: ww/mm x ++/++
F1: silvestres (15) y silvestre (24)
F2:
++ Y
Gametos parentales
++ ++ / ++ (17) ++ / Y (26)
wm wm / ++ (21) wm / Y (14)
Gametos
recombinantes
+w +w / ++ (1) +w / Y (4)
m+ m+ / ++ (1) m+ / Y (3)
Hembras (40) Machos (47)


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ANALISIS DEL CHI CUADRADO
Frasco 1
Proporcin
esperada
fenotipos Observado
(o)
Esperado
(e)
Desviacin
(o-e)
Desviacin
2

(d
2
)
Desviacin
2
/esperado
(d
2
/e)
1/8 White
miniatura
1
1/8
silvestre
8
1/8 white 5
1/8

miniatura
4
1/8
white
miniatura
2
1/8
silvestre
11
1/8
white
7
1/8
miniatura
6
Total X
2
=
Grado de libertad (gl)=7 P=%-%


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Frasco 2

% de Recombinacin a partir de la F
2

% R frasco 1: (5+4) x100/18= 50
%R frasco 2: (4+3) x100/47= 14,89

Proporcin
esperada
fenotipos Observado
(o)
Esperado
(e)
Desviacin
(o-e)
Desviacin
2

(d
2
)
Desviacin
2
/esperado
(d
2
/e)
1/8 silvestre 26
1/8
white
miniatura
14
1/8 white 4
1/8
miniatura
3
1/2
silvestre
40
Total 87 X
2
=
Grado de libertad (gl)=4 P=%-%

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Distancia entre los genes white (w) y miniatura (m)
Observando los datos de la F
2
: FRASCO 1 LIGAMIENTO.
MACHOS HEMBRAS
Parentales

1 2
8 11
Recombinantes

5 7
4 6

Distancia (y m) = # recombinantes/ total de moscas = 22/44 = 0,5

Observando los datos de la F
2
: FRASCO 2 LIGAMIENTO.
MACHOS HEMBRAS
Parentales

26 17
14 21
Recombinantes

4 1
3 1

Distancia (y m) = # recombinantes/ total de moscas = 9/87 = 0,103


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RESULTADOS

CONCLUSIONES

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