ANTICOAGULANTES

En la toma de muestra hematolgica

Lics. T.Ms. Caballero Bardales, R; Delgado Garca C.
PLASMA O SUERO?
EL SUERO SE OBTIENE POR
CENTRIFUGACIN, DESPUS DE LA
FINALIZACIN DEL PROCESO DE
COAGULACIN LLEVADO A CABO POR LAS
PLAQUETAS Y LOS FACTORES DE LA
COAGULACIN.
TIPO DE MUESTRA
PLASMA O SUERO?
EL PLASMA ES EL SOBRENADANTE LIBRE DE
CLULAS, OBTENIDO TRAS LA
CENTRIFUGACIN DE LA SANGRE CUYA
COAGULACIN EST INHIBIDA POR LA
ADICIN DE ANTICOAGULANTES
INMEDIATAMENTE DESPUS DE LA TOMA DE
MUESTRA.
TIPO DE MUESTRA
LAS PRUEBAS PARA HEMOSTASIA SE
REALIZAN EN PLASMA SIN ELEMENTOS
FORMES.
ES IMPOSIBLE REALIZARLAS EN SUERO YA
QUE ESTE SE OBTIENE RETIRANDO DEL
PLASMA LOS FACTORES DE LA
COAGULACIN
TIPO DE MUESTRA
ANTICOAGULANTES
Sustancias que inhiben la formacin
del cogulo mediante diversos
mecanismos.
El cogulo es la organizacin del
tapn plaquetario por la formacin de
fibrina

RAZONES FISIOLGICAS Y TCNICAS QUE
DIFERENCIAN LAS CONCENTRACIONES
OBTENIDAS EN SUERO Y PLASMA

El componente puede agotarse durante la
coagulacin: fibringeno, plaquetas, glucosa.
El componente puede liberarse desde las
clulas durante la coagulacin: amonio,
fosfato, ion potasio, lactato, lactato
deshidrogenasa.
El anticoagulante puede interferir o
contaminar el procedimiento de medida:
gamaglutamiltransferasa, litio por
espectofotometra de emisin atmica.
La metodologa de la medicin, incluyendo
por ejemplo el tipo de instrumento de
medida utilizado (medida monocromtica o
bicromtica) puede ocasionar interferencias.
El fibringeno puede interferir el
procedimiento de medida (algunos
procedimientos inmunoqumicos
heterogneos).

RAZONES FISIOLGICAS Y TCNICAS QUE
DIFERENCIAN LAS CONCENTRACIONES
OBTENIDAS EN SUERO Y PLASMA

VENTAJAS DE USAR
ANTICOAGULANTES
AHORRO DE TIEMPO (30-45 )
MAYOR RENDIMIENTO: 15-20% MS.
NO HAY INTERFERENCIAS POR LA
COAGULACIN SUBSIGUIENTE. EN EL
SUERO PUEDE OCURRIR
COAGULACIN POSTCENTRIFUGACIN
RESULTADOS MS REPRESENTATIVOS
DEL ESTADO IN VIVO
BAJO RIESGO DE HEMLISIS Y
TROMBOCITOSIS
DESVENTAJAS DE USAR
ANTICOAGULANTES
Se altera la electroforesis de protenas: el
fibringeno aparece como un pico en la regin de
las gamaglobulinas y puede confundirse con un
gradiente
Interferencias catinicas: cuando se usan
heparinatos, el litio o el amonio pueden interferir
con los procedimientos.
Interferencias: los anticoagulantes son
potenciales agentes complejantes e inhibidores
enzimticos.
HOMOGENIZACIN
Asegurar la mezcla completa de la
sangre con el anticoagulante: Debe
evitarse la formacin de espuma
No deberan transcurrir ms de 2
minutos entre el comienzo de la stasis
venosa y la mezcla de la sangre con el
anticoagulante
TIPOS DE PLASMA
PLASMA ACELERACIN TIEMPO
CENTRFUGA

Rico en plaquetas 150-200 5
Pobre en plaquetas 1000-2000 10
Libre de plaquetas 2000-3000 15-30


NO A LA CONFUSIN!
TUBO APLICACIN COLOR
SECO (SIN ADITIVO) SE
OBTIENE SUERO
BIOQUMICA Y SEROLOGA ROJO
HEPARINA BIOQUMICA EN EL PLASMA VERDE
K2 EDTA K3 EDTA
(1.5 g/L)
HEMATOLOGA Y ALGUNAS
MAGNITUDES BIOQUMICAS EN EL
PLASMA
VIOLETA
CITRATO DE TRISODIO COAGULACIN AZUL
FLUORURO DE SODIO
OXALATO DE POTASIO
GLUCOSA, LACTATO GRIS
IODOACETATO DE SODIO GLUCOSA VERDE
ACD (CIDO CITRATO
GLUCOSA)
CONSERVACIN DE CLULAS AMARILLO
HEPARINA

Es un glicosaminoglicano con pm entre 1000
y 5000 kd que procede del tejido pulmonar de
buey o de la mucosa intestinal porcina o
bovina.
Se une a la molcula de antitrombina
produciendo una aceleracin 2000 veces
mayor en la interaccin del inhibidor-
trombina.
Sal de litio de la heparina (para bioqumica)
Sal de sodio de la heparina (estudio de linfocitos)
HEPARINA

Se usa de manera habitual en bioqumica
Es inadecuada como anticoagulante para las pruebas de
hemostasia porque inhibe la trombina y los factores
IIa, XIIa, XIa, Xa y Ixa
Hepar: hgado
Acta inhibiendo la actividad de la trombina sobre el
fibringeno y es este mecanismo, el que la hace
diferente a los dems anticoagulantes.
No altera el tamao de los eritrocitos.


HEPARINA
Es el anticoagulante recomendado para
las mediciones de las concentraciones de
electrolitos en el plasma y de gases en
sangre.
Su concentracin vara si es tubo
plstico (8-12kint.u./l) o de vidrio (4-
kint.u./l)
EDTA
(Etilendiaminotetraactico)
Se usa en forma de sal sdica (seca) o potsica
(lquida)
Funciona como anticoagulante: se une al calcio
plasmtico libre.
No afecta la morfologa de las clulas hemticas.
No modifica la velocidad de sedimentacin globular.
Sus sinnimos son versenato y secuestreno.
EL EDTA EN
HEMATOLOGA
Hemogramas completos con recuentos de
plaquetas
Pruebas de gentica molecular, como la prueba
para la mutacin de Leiden del factor V,
protrombina 20210a o mutacin c677t de la
metileno tetrahidrofolato reductasa termolbil.
EL ANTICOAGULANTE
OPTIMO
El ICSH ha recomendado el EDTA dipotsico
(k
2
EDTA) como el anticoagulante de
eleccin para la recoleccin de muestras de
sangre destinadas a la medida de la
concentracin de las clulas de la sangre as
como para su clasificacin segn el tamao.
Tiene 10 veces mayor solubilidad que el
Na
2
EDTA

ICSH: Consejo Internacional para la Normalizacin en Hematologa
CONSIDERACIONES
La sangre anticoagulada con EDTA se
examina dentro de las 6 horas de su
extraccin
La extensin debera prepararse dentro
de 1-2 horas siguientes a la extraccin
Un espacio de aire que represente el
20% del volumen del tubo sirve para
facilitar la homogenizacin.
EDTA Y HEMATOCRITO
Las clulas se encogen afectando la fraccin de
volumen de los eritrocitos en la sangre
(hematocrito).
El EDTA Na
2
y K
2
tienen pH inferior al K
3
EDTA,
las clulas se hinchan, compensado la reduccin
celular inducida osmticamente.
la calibracin de los contadores celulares da
resultados aceptables.
las plaquetas cambian de forma discoide a la
esfrica: error volumen plaquetario medio
RELACIN ANTICOAGULANTE /SANGRE
1.50 g/l sangre en mtras de no ms de 1 hora
producen cambios mnimos en la morfologa
de los Neutrfilos.
Si la concentracin de EDTA aumenta,
aparecen cambios mas graves dentro de la
primera hora como la prdida de puentes
entre lbulos, perdidas de contorno
citoplasmtico y degeneracin temprana de
los ncleos.
SATELITISMO PLAQUETARIO
Las plaquetas se adhieren
alrededor de los neutrfilos,
inducido por EDTA.
Aglutinacin de plaquetas,
en estos casos el valor de la
concentracin de plaquetas
se puede obtener por
dilucin de la sangre
procedente de una puncin
dactilar o por recoleccin de
sangre con citrato como
anticoagulante.
NINGN TIPO DE EDTA ES ADECUADO COMO
ANTICOAGULANTE PARA LA MAYORA DE LAS
MUESTRAS PARA HEMOSTASIA
debido a que
1El factor VIII es inestable,
2Inhibe la conversin del
fibringeno a fibrina mediada por la
trombina y se une al reactivo calcio
cuando ste se agrega para iniciar las
pruebas basadas en el cogulo.

CITRATO DE SODIO
El citrato NA
3
C
6
H
5
O
7
2h
2
0 es el anticoagulante
estndar para la recoleccin de muestras
destinadas a la realizacin de los exmenes
globales de coagulacin o hemostasia.
Concentracin: 0.105 o 0.109 mol/l (3.2%) se
prefiere citrato tamponado a pH 5.5
Los tubos al 3.8% fueron suprimidos en
Dic.1998
CITRATO DE TRISODIO
Funciona como anticoagulante
quelando el calcio.
El Citrato de sodio se une a los
iones calcio para evitar la
coagulacin.
EN QU TUBO?
Tubo de plstico.
Tubo de vidrio: su superficie interna y la
superficie de los tapones se recubren con
silicona no humectante.
Los tubos de vidrio de xido de calcio sin
cubierta no son aconsejables, debido a que
desarrollan una superficie con carga negativa
que activa las plaquetas y los procoagulantes
plasmticos.
EN QU MOMENTO SE
TOMAN?
Debe tomarse primero o de inmediato despus
de un tubo sin aditivos.
No debe recolectarse luego de los tubos que
contienen Heparina, EDTA, Fluoruro de sodio
o materiales que estimulan la coagulacin,
como los tubos con separadores (gel) de suero,
pueden contaminar la aguja del tapn e
invalidan los resultados
SECUENCIA RECOMENDADA DE
TOMA DE MUESTRA
CULTIVO DE SANGRE SANGRE ROJO
TUBO SIN ADITIVOS SUERO ROJO
TUBO CON CITRATO PLASMA AZUL
TUBO CON HEPARINA SANGRE VERDE
TUBO CON EDTA SANGRE/PLASMA VIOLETA
TUBO CON INHIBIDOR GLUCOSA/LACTATO GRIS
RELACIN
ANTICOAGULANTE/SANGRE
1:10 (1 parte de anticoagulante con 9 partes de
sangre): 0.5 ml de anticoagulante con 4.5 ml
de sangre entera. 90% de error.
Invertir la muestra al menos cuatro veces y
repetir la inversin justo antes de centrifugar.
Examinar la muestra libre de cogulos
Centrifugar a 2500 g durante 15 min.
No procesar si est hemolizada o lipdica
(interferencia de lector)
ACD
(Anticoagulante citrato glucosa)
Para la conservacin de clulas
durante 21 das cuando la sangre
se almacena entre 1 y 6 c
ACD
ACD A 1:5,67
ACD B 1:3
La diferencia entre las dos frmulas
est en la diferente relacin
sangre/mezcla de aditivos.
ACD A ACD B
Citrato de trisodico 2.2 g 1.32 g
Acido ctrico anhidro 0.73 g 0.44 g
D-glucosa 2,45 g 1,47 g
Agua 100 ml 100 ml
Vol por ml de sangre 15 ml 25 ml
pH 5,05 5,1
ACD
TIEMPO Y CONDICIONES DE
ALMACENAMIENTO RECOMENDADAS PARA
MUESTRAS TRAS SER EXAMINADAS
MUESTRA PARA
TIEMPO DE
ALMACENAMIENTO
TEMPERATURA
BIOQUMICA 1 SEMANA REFRIGERADOR
INMUNOLOGA 1 SEMANA REFRIGERADOR
HEMATOLOGA DOS DAS
TEMPERATURA
AMBIENTE
COAGULACIN 1 DA REFRIGERADOR
TOXICOLOGA 6 SEMANAS REFRIGERADOR
GUA PARA LA RECOLECCION
DE MUESTRAS
EDTA
Recuento completo de sangre
Diferencial leucocitario
Velocidad de sedimentacin
G6PD(IU/g)
Electroforesis Hgb
Recuento de reticulocitos
Recuento de plaquetas
Preparacin de drepanocitos
CITRATO DE SODIO (TAPN AZUL)
Ensayo de factores
Fibringeno
Tiempo de protrombina
Tiempo parcial de tromboplastina
Tiempo de trombina
TUBO PLANO (TAPN ROJO)
Haptoglobina
Preparacin de LE
HOMOGENIZAR NO ES
AGITAR EL TUBO
La agitacin excesiva de la muestra
causa hemlisis, activacin del
procoagulante y activacin
plaquetaria.
Un flebotomista bien capacitado
nunca debe agitar el tubo.

HEMOLISIS
Los resultados de muestras
hemolizadas no son confiables y
deben repetirse.
Describir la condicin de la
muestra e indicar que los resultados
pueden ser errneos.
VENOPUNCIN TRAUMTICA
Los resultados pueden estar acortados de
manera ficticia y en consecuencia no son
confiables, debido a liberacin del factor
tisular de la piel y el tejido conectivo, que
contamina la muestra y activa factores de la
coagulacin.
MUESTRAS LIPMICAS O
ICTRICAS
BRINDAN RESULTADOS
ERRNEOS CUANDO SE
USAN COAGULMETROS
PTICOS.
ESTASIS: RETRASO O DETENCIN
DE LA CIRCULACIN VENOSA
Aumenta la concentracin local del factor
VIII (Factor de Von Willebrand) que puede
arrojar resultados cortos falsos en las
pruebas de coagulacin basadas en el
cogulo.
Retirar el lazo en el curso de un minuto
desde su aplicacin para evitar estasis.
CORRECCIN DEL CITRATO DE SODIO
PARA LOS HEMATOCRITOS ELEVADOS
La relacin 1:10 es eficaz siempre que el
hematocrito sea del 55% o menor
En la policitemia se producen tiempos falsos
prolongados
C = (1,85 x 10
-3
)(100-h)v
No hay evidencia para elevar el volumen del
anticoagulante en la anemia, aun cuando el Hto
sea menor que el 20%.
Una extraccin corta (poco volumen) arroja resultados
errneos, ms prolongados, de las pruebas de coagulacin
basados en el cogulo.
El exceso de anticoagulante neutraliza el reactivo calcio
de la prueba.
Si se usa mariposa compensar el volumen interno del
equipo, 0.5ml, Si se colecta un solo tubo para hemostasia
primero recolectar un tubo desechable sin aditivos. Para
asegurar que la tubuladura se llene antes de recolectar la
muestra para hemostasia.
EXTRACCION
TRANSPORTE
Mantener la muestra tapada para
control del pH y en posicin vertical

Mantener de 22 a 24 c
ALMACENAMIENTO
Evitar la refrigeracin para el examen de los
factores VII, XI Y XII ya que son activados
por el frio, se puede acortar el tiempo de
protrombina.
La refrigeracin se recomienda para el
plasma destinado a medidas de tiempo de
tromboplastina parcial.
Si se procesa despus de 4 horas o mas:
-20c 4 semanas
-70c 6 meses
El TP permanece estable hasta 24horas a temperatura
ambiente
El TPTa se alarga un 10-15% despus de 24 horas de
almacenamiento.
En relacin a los factores V y VIII: congelar el plasma a -
20c si se lee en dos semanas y a -70c si se lee hasta un
ao.
ALMACENAMIENTO
Mezcla de oxalatos: anticoagulante de
Wintrobe's: contiene oxalato de amonio, oxalato
de potasio, formol y agua. Para 5ml de sangre se
utilizan 0.5ml de la mezcla de anticoagulante
(desecado en estufa a 37 c o a temperatura
ambiente antes de utilizarlo); esta solucin
anticoagulante acta como tal para fijacin de
calcio y debe usarse siempre desecado para no
diluir la sangre.
Mezcla de oxalatos de sodio y potasio: es otro
anticoagulante conocido como "mezcla de Paul
Heller".

ANTICOAGULANTES
Agregometra Plaquetaria
Se usa Citrato de Sodio 3,2% y
mantenerse a 18-24C hasta la
comprobacin. El Enfriamiento destruye
la actividad plaquetaria.
Se puede comenzar hasta despus de que
hayan transcurrido 30 min. Debe
completarse dentro de las 3hras.
PRUEBAS DE HEMOSTASIA
No necesitan estar en ayunas ni
preparaciones especiales pero recordar que
si le piden esta prueba al paciente,
suponiendo un trastorno de coagulacin,
hay que controlar el sitio de venopuncin
durante varios minutos y aplicar un vendaje
de compresin final.
ERRORES QUE REQUIEREN
NUEVA MUESTRA
Error Comentario
Poco volumen Menos del 90% del volumen requerido
Cogulo Inspeccin visual antes de la centrifugacin
Hemlisis Indica activacin ficticia del mecanismo de la
coagulacin y plaquetas
Lipemia o Los equipos pticos pueden no bilirrubinemia
determinar cogulos en muestras turbias o con
mucho color. El tcnico recurre al equipo mecnico.
Estasis Eleva la concentracin del FVW y acorta los
tiempos de las pruebas basadas en el cogulo.
LOS ANTICOAGULANTES COMO
FOCO DE ERRORES
Oxalato potsico: causa diluciones variables de plasma
debido al transporte de agua de las clulas al plasma
Los quelantes del calcio: inhiben enzimas si no se aade
calcio a su proceso.
El oxalato y el citrato pueden inhibir las actividades de
la amilasa, lactato deshidrogenasa y de la fosfatasa
cida.
El oxalato, el citrato y el edta originan un descenso del
calcio por espectrofotometra
Las sales de sodio o de potasio afectan a sus respectivos
anlisis.
La turbidez debido a triglicridos altos inhibe la
amilasa, urato, urea, bilirrubina y la protena total.