EFECTOS DEL MTODO DE TRATAMIENTO PREVIO SOBRE LA HIDRLISIS ENZIMTICA Y FERMENTACIN DE ETANOL DE

LA FRACCIN CELULSICA DE PASTO ELEFANTE

a b s t r a c t

El pasto elefante (Pennisetum purpureum) es un material lignocelulsico que tiene un alto potencial para la
produccin de etanol en los pases tropicales, debido a su alta disponibilidad y capacidad de adaptacin.
Pretratamientos qumicos y fsico-qumicas como catin alcalino deslignificado, hidrlisis cida diluida, explosin de
vapor, perxido alcalino y amoniaco acuoso se realizaron con el fin de determinar su efecto sobre la hidrlisis y la
fermentacin de la fraccin celulsica de este material. En una primera seleccin de los mtodos, el tratamiento
previo alcalino con NaOH produjo la mayor concentracin de azcares reductores (34,4 g /L) y etanol (15,1 g / L). Se
llev a cabo un estudio ms detallado de los efectos de las condiciones de pretratamiento alcalinas (temperatura,
relacin de slido a lquido, la concentracin de NaOH y tiempo de residencia) en la fermentacin de la hierba de
elefantes. Los resultados mostraron que en las condiciones de pretratamiento de 120 C durante 1 h con 2 p.%. NaOH
y una relacin de slido a lquido de 1: 20 Se obtuvo el mayor rendimiento de etanol, es decir, 26,1 g / L (141,5 mg de
etanol / g de biomasa seca, 95% del rendimiento terico). Adems, este pretratamiento permite la eliminacin de la
mayor parte de la lignina presente en este material, es decir, 88% de eliminacin de la lignina. Adems, este
pretratamiento permite una alta recuperacin de la fraccin celulsica en el slido.



















1. Introduccin

Debido a la crisis mundial de la energa, la biomasa lignocelulsica se ha convertido en una importante materia prima
prometedora para la obtencin de biocombustibles de segunda generacin. Materiales lignocelulsicos tienen un alto
potencial para la produccin de etanol, ya que son abundantes recursos renovables, no compiten con la produccin de
alimentos, podra dar lugar a la utilizacin de grandes cantidades de desechos agroindustriales cuya eliminacin es
problemtica para el medio ambiente, y se poda utilizar marginal o degradado las tierras agrcolas para la produccin
de cultivos energticos.
La mayora de los pases tropicales, como Colombia, tienen un alto potencial, en trminos de disponibilidad y variedad,
de la biomasa lignocelulsica, debido a su alta radiacin solar, la diversidad de zonas climticas y biodiversidad. Estas
ventajas permiten una fcil adaptacin de las diferentes especies y el desarrollo de los cultivos energticos, como los
pastos y forrajes. Entre estos, pasto elefante (Pennisetum purpureum) tiene un muy alto rendimiento de produccin
de material seco, es decir, 40-50 toneladas / hectreas / ao [1,2], en condiciones ptimas de crecimiento y de
gestin.
Debido a su composicin qumica, la biomasa lignocelulsica es muy diferente de la biomasa con alto contenido de
azcares o almidn que se utiliza habitualmente en la industria de biocombustibles. La estructura de estos materiales
antiguos, compuesta principalmente por celulosa, hemicelulosa y lignina, requiere que el proceso para la produccin
de biocombustibles se debe ajustar para cada tipo de biomasa, de acuerdo con sus caractersticas de los componentes.
Por lo tanto, una etapa de pretratamiento se debe introducir para obtener fracciones hidrolizables que pueden ser
convertidos en azcares y posteriormente fermentadas a etanol.
Diferentes tipos de mtodos de pretratamiento, bajo una gran variedad de condiciones, han sido estudiados para
mejorar la fermentabilidad y la digestibilidad de varias variedades de hierbas como bermuda, pasto varilla, napiergrass
y la hierba de plata. Diluir pretratamiento cido de bermuda a 121 C (carga de slidos del 10% en peso, La
concentracin de cido sulfrico de 1.2% a 60 min) presenta glucano 70% de conversin en glucosa con una
produccin total de azcar reductor (TRS) de 204,1 mg / g de biomasa a las 48 h de hidrlisis enzimtica. Del mismo
modo, diluir el cido del pretratamiento de silvergrass a 121 C durante 30 minutos, lo que da una alta recuperacin
de xilano (70-75%) en comparacin con la paja de arroz y bagazo de caa de azcar. Adems, silvergrass hidrolizados
dieron un mayor nivel de fermentacin de bagazo de caa, porque se forma cido actico, frente a la obtencin de un
rendimiento de etanol de 64,3% del terico en 48 h de fermentacin. El pretratamiento alcalino de pasto Bermuda se
evalu usando NaOH y Ca (OH) 2 para mejorar la recuperacin de azcares fermentables. Este estudio mostr que a
121 C NaOH es eficiente de Ca (OH) 2 para mejorar el rendimiento reduciendo el azcar, logrando el 86% del
rendimiento terico (ca. 500 mg de azcares reductores totales / g de biomasa). Un reciente estudio inform una
remocin de lignina de 86% y un rendimiento de azcares reductores totales de 71% de los tericos (440 mg de
azcares reductores totales / g bio-masa) en condiciones ptimas de pretratamiento de pasto bermuda (15 min y 0.75
en peso.% de NaOH a 121 oC) sin evaluacin de la fermentabilidad hidrolizada. El material de Switchgrass se trat
previamente al sumergirlo en amoniaco acuoso a temperatura ambiente durante 5-10 das, el contenido de
hemicelulosa disminuy ms al-50%. Relacin de slido a lquido y tiempo de remojo afectados ligeramente la
eliminacin de lignina pero no caus cambios significativos en los rendimientos globales de etanol en altas cargas de
enzimas suficientemente. El efecto del pretratamiento con Ca (OH) 2 en modera las temperaturas (50 C y 21 C)
tambin fue investigado para mejorar la digestibilidad enzimtica de interruptor de hierba.
Los rendimientos de la glucosa y la xilosa de 239,6 y 127,2 mg / g de biomasa, respectivamente, se lograron a 55 C
durante 72 h, utilizando celulasa y celobiosa cargas de 35 FPU / g de biomasa y 61,5 CBU / g de biomasa,
respectivamente. Este estudio pone de manifiesto que los iones de calcio cruzan ampliamente molculas de lignina
vinculados bajo condiciones alcalinas de lnea, que disminuyeron sustantivamente la lignina solubilizada durante el pre
tratamiento. El alto contenido de lignina en la biomasa pre tratada no afect la digestibilidad enzimtica. Tambin se
inform de que el pre-tratamiento inico lquido de switch grass disminuye la cristalinidad de celulosa, aumenta la
superficie y disminuye el contenido de lignina, mejorara la velocidad de hidrlisis enzimtica de la fraccin celulsica.
Niacal nia- fi bra-explosin (AFEX) pretratamiento se ha evaluado en Miscanthus x giganteus hierba y diversas
variedades de Panicum virgatum para obtener azcares fermentables utilizando hidrlisis enzimtica a 50 C durante
168 h con cargas celulasa de 15 FPU / g glucano y b-glucosi - cargas DAse de 40 UI / g glucano, obteniendo
conversiones glucano de 90 a 96% de etanol y rendimientos de 0,2 g / g de biomasa en 96 h de proceso SSF Hasta el
momento, no hay informes que comparan el efecto de diferentes tratamientos previos en la hidrlisis y la
fermentacin de la hierba de elefantes. Los informes existentes son especficamente centrados en el pre tratamiento y
fermentacin de las variedades de pasto elefante, pero en estas condiciones experimentales diferentes que hacen la
comparacin de los resultados. El pre tratamiento con enzimas (celulasas + esterasa) de pasto elefante dio 113 mg
azcares / g bio-masa [4]. El pre tratamiento biolgico de lignificacin de una especie colombiana de Penisetum sp,
usando basidiomicetos ligninolticas (Ganoderma spp) permiti una remocin de lignina de 10,7 a 55,9%. En cuanto a
la capacidad de fermentacin, los rendimientos de etanol de 45,5 mg / g biomasa, utilizando la cepa Klebsiella oxytoca
THLC0409 y 97- 107 mg / g de biomasa, utilizando la cepa Saccharomyces cerevisiae D5A, se ha informado de dos
genotipos diferentes de pasto elefante.
Adems, se ha informado de la fermentacin de pentosas y hexosas de pasto elefante pretratadas solamente por
(pretratamiento fsico). Despus de este pretratamiento fsico, la fermentacin con Saccharomyces cerevisiae
NBRC2044 durante 72 h dio 113 g de etanol / g de biomasa a partir de hexosas mientras que la fermentacin con E.
coli K011 durante 48 h produjo 31,4 g etanol / g de biomasa a partir de pentosas.
Los estudios informados no se han llevado a cabo bajo condiciones comparativas que permitan la seleccin del mejor
pre tratamiento. En este manuscrito, los efectos de los pre tratamientos fisicoqumicas diluir el cido, el tratamiento
previo alcalino con NaOH, perxido alcalino, explosin de vapor y de remojo acuosa de amoniaco en la hidrlisis y la
fermentacin de etanol de la fraccin celulsica de pasto elefante se presentan en una forma comparable. Adems, las
condiciones para el mejor tratamiento previo encontrados fueron optimizados con el fin de maximizar el rendimiento
de etanol.

2. Materiales y mtodos
2.1. Materiales
El pasto elefante se cultiva en fincas ubicadas en Antioquia (Colombia). Esta hierba se sec al aire para fcil manejo y
transporte, y luego fue molido a tamao de partcula de menos de 3 mm y se seca de nuevo para lograr un contenido
de humedad de menos de 10 %. El material se caracteriz para determinar celulosa, hemicelulosa, lignina, extractos y
contenidos de ceniza en el slido (Tabla 2).

2.2. Mtodos
2.2.1. Pre tratamientos
2.2.1.1. Delignificacin alcalina con NaOH: Se pesaron 20,0 g de material y se sumergi en solucin diluida de NaOH
(1%) Y una tapa a la proporcin de lquido de 1 g de biomasa / 15 g de solucin de NaOH. El reactor fue cerrado
hermticamente y se calienta a 120 C (5 C / min) y mantenida a esta temperatura durante 30 min. Luego, el reactor
se enfri a temperatura ambiente y el slido se separa del licor negro por filtracin. La fraccin slida se lav con agua
hasta pH neutro y despus se seca y se almacena en un congelador.

2.2.1.2. Dilucin hidrlisis cida: 100 g de material lignocelulsico se mezcl con solucin de cido sulfrico (2 en peso.
%), Con un slido a lquido tio racional de 1 g de biomasa solucin / ml. La suspensin se agit a 90 oC durante 90 min.
La mezcla se filtr para separar el licor negro y el material tratado previamente. El material slido se lav con agua
hasta pH neutro y despus se seca y se almacena en un congelador.























2.2.1.3. Remojo amoniaco acuoso: Este pretratamiento consisti en sumergir el material lignocelulsico en una
solucin acuosa de amoniaco (15 %), Utilizando 8 ml de solucin de amonaco por gramo de material, a 60 C durante
6 h. A continuacin, la suspensin se filtr para separar el slido y las fracciones lquidas. La fraccin slida se lav
hasta pH neutro, se seca y se almacena en un congelador durante la hidrlisis y la fermentacin posterior.

2.2.1.4. Explosin de vapor: Explosin de vapor pretratamiento Se ha ejecutado en el equipo casero. El proceso se
llev a cabo mediante la carga de 150 g de la materia prima en el contenedor y ponerlo en contacto con vapor
saturado a 180 C durante 5 min. Despus de la explosin de vapor, el material se filtr para volver a cubrir el lquido y
las fracciones slidas. Entonces, la fraccin slida se lav hasta pH neutro, se seca y se almacena en un congelador
para su posterior hidrlisis y fermentacin.

2.2.2. La hidrlisis enzimtica
Se llev a cabo con la enzima comercial Accellerase 1500 (Genecor). 30 FPU / g de biomasa y se utiliz hidrlisis se
lleva a cabo a 50 C, 180 rpm y citrato de sodio (50 mM) a pH 4,8. Las mezclas se trataron en autoclave a 121 C
durante 15 min antes de aadir la enzima. La hidrlisis se sigui durante 45 h por el anlisis de los azcares reductores
totales (TRS) de contenido.

2.2.3. Simultnea de cationes sacchari fi y fermentacin (SSF)
Simultnea de cationes fi sacchari y fermentacin (SSF) fue realizaron con la enzima comercial Accellerase 1500
(Genecor) y la levadura Saccharomyces cerevisiae comerciales Etanol rojas. Despus de 12 h de hidrlisis enzimtica a
50 C, 180 rpm y pH 4,8, la levadura se inocul en una cantidad para permitir que una concentracin de 2 g / l de
levadura seca en el caldo de fermentacin. La fermentacin se realiz a 37 C y 150 rpm, en condiciones anaerbicas.
La fermentacin fue seguida por la prdida de peso y la concentracin de etanol final en los medios de comunicacin
se determin por cromatografa de gases acoplado a un sistema (SPME) en fase slida micro-extraccin.

Table 1
Experimental design for the optimization of the alkaline pretreatment.

Experiment Experimental conditions
Table 2
Solid-phase composition of elephant grass before and after pretreatments (wt.%, based on dry matter).

Material Cellulose Hemi-cellulose Lignin Extractives Ash Others
Non pretreated 22.6 20.9 19.4 9.9 11.1 16.1
Alkaline pretreatment with NaOH 31.2 21.9 6.8 3.1 5.4 31.5
Dilute acid pretreatment 24.0 13.5 13.4 9.4 10.5 29.3
Aqueous ammonia soaking 35.5 25.4 9.2 3.04 8.3 18.5
Steam explosion 31.3 29.0 15.8 6.7 8.7 8.5
Alkaline peroxide 39.2 10.5 11.0 11.8 10.7 16.8



2.2.4. Optimizacin del catin delignificado alcalina con NaOH
Pre tratamiento alcalino se llev a cabo en un autoclave durante los experimentos a temperaturas superiores al punto
de ebullicin del agua, y en reactores agitados atmosfricas para temperaturas por debajo de 90 C. Las condiciones
evaluadas fueron: temperatura entre 80 y 120 C, tiempo de residencia entre 30 y 180 min, relacin de slido a lquido
1:15 y 1:20. Y la concentracin de NaOH entre 1% y 2%. Un diseo compuesto central Draper-Lin, con tres puntos
centrales, se utiliza para optimizar las condiciones de pre tratamiento y maximizar el rendimiento de etanol. Los datos
mostraron en figuras y tablas se corresponden con el valor medio de tres experimentos con una desviacin estndar
relativa de menos del 5% en todos los casos. Condiciones experimentales detalladas se muestran en la Tabla 1
Hidrlisis y fermentacin de estos materiales pretratados se hicieron usando el procedimiento descrito anteriormente,
con la enzima comercial Acceller- ASE 1500 (Genecor) y la levadura comercial Etanol Red (Saccharomyces cerevisiae).

2.2.5. Anlisis
Los materiales se caracterizan siguiendo los protocolos de la Organizacin de las Laboratorio de Energa Renovable
Nacional (NREL) para la determinacin de las cenizas, humedad y extractivos en la biomasa [26-28]. Celulosa,
hemicelulosa y lignina contenidos en los materiales-pretratados no pretratados y se determinaron por espectroscopia
UV-vis tras la hidrlisis cida con el 72% de H2SO4. Azcares reductores totales se determinaron utilizando el mtodo
de cido 3,5-dinitrosaliclico (DNS) y la glucosa se determin usando el kit de oxidasa / peroxidasa de Biosystems.
Monitoreo de fermentacin fue realizada por la prdida de peso. El sistema SSF ma fue seguida durante 26 h. La
concentracin final de etanol se determin por cromatografa de gases utilizando un cromatgrafo Agilent 7890 con
detector FID empleando una columna HP-INNOWax acoplado a la fase slida micro-extraccin (SPME) con un
polyacry- finales de fi bra de 85 lm.
Inhibidores como xilitol, cido succnico, cido lctico furfural, hidroxi metil furfural (HMF), cido actico y glicerol,
formado durante el proceso de pretratamiento, se determinaron por HPLC usando una columna HPX-87H Biorad
Aminex. Las muestras lquidas se filtraron a travs de 0.25 pelcula filtro previo al anlisis por HPLC .







Resultados

3.1. Caracterizacin

El material se caracteriz antes y despus de los pre tratamientos para determinar el contenido de celulosa,
hemicelulosa, lignina, cenizas, extractos en el slido. Los resultados de estas caracterizaciones se muestran en la Tabla
2. La fraccin '"otros"' puede incluir algunos compuestos Orgnicos, tales como grupos acetilo y cidos urnicos, y
componentes traza incluyendo minerales, ceras, grasas, resinas y gomas. Estos componentes no son fermentables por
la levadura. Para este tipo de materias primas, es decir, la biomasa lignocelulsica, es difcil de exactamente
determinar la composicin qumica completa. Es por eso que se utilizan habitualmente tcnicas de caracterizacin
especficos tales como la extraccin con disolventes. Los resultados con esta tcnica dependen del disolvente
utilizado. En nuestro caso hemos utilizado etanol como disolvente para determinar '' extractivas '' porque este es el
ms comn para estos materiales.
En el caso del pre tratamiento alcalino, los cambios en la composicin se deben principalmente a la eliminacin de la
lignina y en una menor proporcin a la hidrlisis de celulosa y fracciones de hemicelulosa, lo que conduce a una
disminucin en el peso del slido recuperado despus del pre tratamiento. El anlisis por HPLC de las fracciones
lquidas obtenidas en los diferentes pre tratamientos mostr la presencia de azcares tales como celobiosa, glucosa,
xilosa y arabinosa, as como la presencia de compuestos inhibidores tales como xilitol, glicerol, cido actico y furfural
formado durante la hidrlisis. En los pre tratamientos usando cido y explosin de vapor diluir los cambios en las
composiciones de las fases slidas son debido a la hidrlisis de la hemicelulosa y en menor proporcin a la hidrlisis de
la celulosa. Esto se evidenci por la presencia de glucosa, xilosa, arabinosa, cido actico, furfural y furfural
hidroximetilo en la fraccin lquida obtenida despus de los tratamientos previos.

En general, se logr un aumento en el contenido de celulosa de la fase slida en la hierba despus de los
pretratamientos evaluados, a expensas de la hidrlisis parcial de la hemicelulosa y la lignina. Particularmente, los
pretratamientos alcalinas (NaOH, NH3 y alcalina de perxido) permite una alta eliminacin de lignina debido al efecto
de tales pretratamientos sobre los enlaces ster y cadenas glicosdicos. Este ef ciente fi-eliminacin de lignina se ha
relacionado con aumento de la porosidad de la biomasa y la accesibilidad de la celulosa [7,29]. En el caso de la
explosin de vapor, el efecto fue ms marcado en el contenido de hemicelulosa, ya que bajo las condiciones de
funcionamiento y con la presencia de cido sulfrico como catalizador se favoreci la autohidrlisis de grupos acetilo,
disminuyendo el contenido de hemicelulosa en la fase slida . Adems, se ha informado de que este pretratamiento
tambin per- mite una hidrlisis parcial de la lignina, a travs de la ruptura homoltica de bo-4 enlaces ter y otros
restos de cidos inestables, produciendo una serie de derivados de alcohol de cinamilo y subproductos de
condensacin.
La hidrlisis cida de esta hierba disminuy el contenido de hemicelulosa en la fase slida debido a la solubilizacin. Se
ha informado de que la hidrlisis cida de materiales lignocelulsicos solubiliza la fraccin de hemicelulosa mediante
la alteracin de los enlaces covalentes, enlaces de hidrgeno y fuerzas de Van de Paredes de esta fraccin [16]. Este
proceso tambin conduce a la formacin de compuestos de degradacin que puede tener un efecto inhibitorio sobre
la hidrlisis enzimtica y fermentacin. La tabla 2 muestra una disminucin de contenido de lignina en la fase slida de
la hierba de elefante pretratada por cido diluido; esto podra ser posiblemente debido a una hidrlisis parcial de los
enlaces inestables de algunos grupos cidos presentes en la lignina en esta hierba.




3.1.1. La hidrlisis enzimtica
Resultados en la hidrlisis enzimtica de la hierba pretratada utilizando la enzima Accellerase 1500 se muestran en la
figura. 1. Los mejores resultados de hidrlisis se obtuvieron con los pre tratamientos alcalinas, es decir, 146,9 y 133,6
mg de llamadas / g de biomasa pretratada despus de 45 h para los pre tratamientos de NaOH y amoniaco,
respectivamente. Estos resultados estn de acuerdo con otros estudios que muestran que la hidrlisis de la celulosa se
mejora por la eliminacin de la lignina porque lignina forma una barrera fsica que evita el ataque de la enzima
[22,31,32] y porque la lignina slida puede absorber la disminucin de enzimas de celulasa el rendimiento de hidrlisis
[33,34].
El tratamiento previo con cido sigue el pre tratamiento alcalino con respecto a la reduccin de la produccin de
azcar. Se sabe que el tratamiento cido previo mejora la hidrlisis de la celulosa pero no tiene efecto sobre la lignina.
El rendimiento de azcares reductores totales depende de la composicin inicial y la estructura molecular de la
biomasa, as como en las condiciones para el pre tratamiento y la hidrlisis enzimtica. Por lo tanto, los rendimientos
obtenidos se DIF culto fi para comparar con los obtenidos para otros tipos de materiales lignocelulsicos.
3.3.1. Pre caracterizacin de materiales
Fracciones lquidas y slidas obtenidas despus del pretratamiento de NaOH se caracterizaron para determinar el
contenido de celulosa, hemicelulosa y lignina. A partir de estos resultados, se calcularon los porcentajes de
recuperacin de combustibles slidos, celulosa y hemicelulosa, as como el porcentaje de eliminacin de lignina.
En las condiciones experimentales de la Tabla 1, el tratamiento previo de NaOH pasto elefante permiti la
recuperacin de celulosa de 96,5 a 99%, la eliminacin de lignina de 76,2 a 88,4% y la recuperacin de slidos de 40,4
a 53,9%. A partir de estos resultados se concluye que las mejores condiciones del pretratamiento NaOH, en trminos
de eliminacin de lignina, son 100 oC, 2 h, 0,7% en peso de NaOH y una relacin de slido a lquido de 1:17,5.
Los anlisis de HPLC de las fases lquidas obtenidas despus de los tratamientos previos de NaOH mostraron la
presencia de cido actico, cido frmico y furfural (en pretratamientos en 120 a 133,6 C) que se conocen para ser
formado en la degradacin de la hemicelulosa y azcares. Estos compuestos tienen un fuerte efecto inhibidor sobre la
fermentacin con Saccharomyces cerevisiae, cido actico y furfural especialmente que disminuyen la velocidad fi
especfico de crecimiento de los microorganismos y, por lo tanto, el rendimiento volumtrico de etanol [42-44]. Por lo
tanto, la ejecucin de una etapa adicional de neutralizacin de materiales pre tratados en muy importante para
mitigar el efecto de estos compuestos que inhiben y mejorando as demostrar el rendimiento de etanol. Tambin se
han detectado azcares monomricos, producidos por la hidrlisis de la celulosa y hemicelulosas, como la glucosa,
xilosa y arabinosa.

3.3.2. La hidrlisis enzimtica
La hidrlisis enzimtica de materiales pretratados Se realiz utilizando la enzima Accellerase 1500 (Genecor) a 50 oC
con una carga enzimtica de 30 FPU / g de biomasa y una relacin de slido a lquido de 10:90 (w / w), durante 26 h .
En virtud de las diferentes condiciones de pre tratamiento evaluados (ver Tabla 1), entre 422,5 y 711,2 mg de llamadas
/ g de biomasa fueron obtenidos en la hidrlisis enzimtica de pasto elefante, como se muestra en la figura. 3. Las
mayores producciones de azcares reductores se lograron a temperatura ms alta (100 oC), obteniendo ms del 82%
ef deficiencia en la conversin de los polisacridos en azcares fermentables. Una relacin directa entre las variables
experimentales y de produccin de azcares no se puede establecer a partir de los resultados experimentales. La
mayor cantidad de azcares reductores de pasto elefante, es decir, 711,2 mg de llamadas / g de masa biolgica, se
obtuvo bajo condiciones de pre tratamiento de 100 C, 2 h, 1,5 en peso.% De NaOH y relacin de slido a lquido de 1 g
de material por 17,5 g de solucin. Las absorciones muy altos de lignina obtenidos con los pre tratamientos alcalinas
no se pueden correlacionar con la cantidad de azcares reductores obtenidos en la hidrlisis enzimtica. La dispersin
de la lignina restante afecta directamente el ataque enzimtico. Una lignina remanente altamente disperso, incluso en
bajos contenidos, podra Hin- der el acceso de la enzima a las porciones amorfas de celulosa que componen las fibras
de hierba fi, lo que afecta la enzimtica hidroelctrica ef lisis deficiencia.
Eliminacin de lignina fue en general muy alta. Esto significa que el contenido de lignina residual en los slidos que
estaban hidrolizada y fermentada eran bajos. Por lo tanto, los resultados observados no deben ser debido a la forma
de esta lignina residual. Los resultados no pueden explicarse tanto por la recuperacin de celulosa, ya que tambin fue
muy elevada en todos los casos. La forma de la celulosa que queda en el slido podra ser un parmetro importante
que afecta a los resultados. El mtodo de tratamiento previo puede modificar las propiedades estructurales de slidos
mediante el aumento de la superficie y la disminucin de la cristalinidad. Adicionalmente aliado, en este trabajo se
utilizaron solamente las enzimas celulolticas, por lo tanto, no son capaces de atacar a la fraccin de hemicelulosa. Se
ha informado de que la hemicelulosa proporciona la barrera clave a la descomposicin por las enzimas de celulosa
[49]. En base a esto, el contenido y la forma de hemicelulosa tambin deben desempear un papel importante en la
hidrlisis de la celulosa.

Los resultados obtenidos en la hidrlisis enzimtica de pasto elefante, despus de diferentes condiciones de pre
tratamiento alcalinas, son similares a muchos informaron de resultados para pastos con respecto a la cantidad de
azcares reductores producidos por gramo de biomasa alimentada al proceso. Varios estudios sobre la hidrlisis de
switchgrass y pasto bermuda costera, previamente tratadas bajo condiciones alcalinas, informe entre 400 y 600 mg / g
de biomasa TRS [46-49]. En nuestro caso, los mejores rendimientos de azcares reductores fueron 711,2 mg / g de
biomasa TRS (108,0 g / L) para el pasto elefante. Vale la pena sealar que el tiempo se requiere para este alto
rendimiento de azcares reductores, es decir, 24 h de hidrlisis enzimtica, es bastante corto en comparacin con el
tiempo reportado para la hidrlisis de Panicum virgatum, bermuda grass y alfalfa fi bra, es decir, 72-168 h
[19,37,44,47].

3.3.3. Simultnea de cationes sacchari fi y fermentacin (SSF)
Las concentraciones de etanol obtenidos en el proceso de SSF de pasto elefante se muestran en la figura. 4. El anlisis
estadstico de los datos obtenidos por fermentacin de la hierba elefante bajo diferentes condiciones de pre
tratamiento (no mostrado) indica que el factor con ms significativo efecto estadstico es la concentracin de NaOH, y
que las variables experimentales estudiados (en el pretratamiento alcalino) explicar 90,27% de la variabilidad en la
capacidad de fermentacin.
Para pasto elefante, concentraciones de etanol entre 10 y 26 g / L, correspondiente a etanol rendimientos de 62,2 y
141,5 mg etanolamina de biomasa seca alimentado al proceso, respectivamente, se obtuvieron despus de 24 h de
fermentacin. La concentracin de etanol ms alta obtenida para pasto elefante (26 g / L) corresponde a las
condiciones de pretratamiento 120 C, 2% de NaOH, relacin de slido a lquido de 1:20 y el tiempo de residencia de
60 min.

El mayor rendimiento de etanol, es decir, 149,3 mg de etanol / g de biomasa, se corresponde a 95,1% del rendimiento
terico mximo. Este resultado indica una muy alta e fi ciencia en el uso de la fraccin celulsica para la
transformacin de este tipo de biomasa en etanol. Los rendimientos de etanol de 92% y 89,2% del mximo terico se
han portado re en la literatura para materiales como el pasto varilla y Corn Stover. Para una variedad de hierba
elefante, despus de fina molienda, rendimiento del 44,2% con respecto a la xilosa y glucosa terica y se han
comunicado. Nuestros resultados son, por lo tanto, superior a los reportados hasta el momento.






4. Conclusiones

Pre tratamiento alcalino con NaOH produjo las ms altas concentraciones de azcares reductores y etanol a partir de
pasto elefante, en comparacin con los resultados obtenidos con cido diluido, explosin de vapor, remojo amonaco
acuoso y pre tratamientos de perxido alcalino. Optimizacin de la alcalina delignificacin con NaOH permiti una
eliminacin de lignina de 88,4%, azcares reductores rendimiento total de 711,2 mg / g de biomasa despus de la
hidrlisis enzimtica (82% del terico) y la concentracin etanolamina de 26,05 g / L, que corresponde al rendimiento
mximo terico de 95% (36 h de SSF a 37 oC usando 30 FPU / g de masa biolgica de Accellerase 1500 y una
concentracin de etanol Red de 2 g / L). Aunque se lograron el traslado de alto contenido en lignina, que es un factor
importante para promover la hidrlisis enzimtica, una relacin directa entre los resultados y condiciones evaluadas
no se puede establecer. A lo mejor de nuestro conocimiento, estos resultados son superiores a los reportados para
materiales similares