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Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina, el Caribe, Espaa y Portugal
Sistema de Informacin Cientfica
E. L. Ramos, S. Ravelo. E. Bordallo, V. Len
Determinacin de polisacridos por filtracin por gel de celulosa
ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caa de Azcar, vol. XXXIX, nm. 3, septiembre-diciembre, 2005, pp. 35-
39,
Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar
Cuba
Cmo citar? Fascculo completo Ms informacin del artculo Pgina de la revista
ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caa de
Azcar,
ISSN (Versin impresa): 0138-6204
revista@icidca.edu.cu
Instituto Cubano de Investigaciones de los
Derivados de la Caa de Azcar
Cuba
www.redalyc.org
Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
ICIDCA No. 3, 2005 35
E. L. Ramos
1
, S. Ravelo. E. Bordallo
2
, V. Len
1. Instituto Cubano de Investigaciones Azucareras, ICINAZ,
Carretera del central M. Martnez Prieto, Km 2 1/2 Boyeros, C. de La Habana, Cuba
e.mail:elramos@icinaz.co.cu
2.Unin de Investigacin-Produccin de la Celulosa del Bagazo Cuba-9. Pablo Noriega
Apdo.: 8, CP: 33500, Quivicn, La Habana, Cuba
e-mail: direcc9@enet.cu
RESUMEN
Se valora el uso de la filtracin por geles de celulosa para la determinacin de polisac-
ridos en la caa y sus productos. Los geles se preparan por entrecruzamiento de la celu-
losa para obtener el grado de porosidad necesario y lograr la exclusin de las fracciones
polisacridas mayores de 5 000 ua. Se logra separar de manera eficiente a los polisac-
ridos y especialmente a las dextranas desde las soluciones de alto contenido de sacaro-
sa que son frecuentes en la industria azucarera. Se demuestra la capacidad de uno de
los geles obtenidos, que se ha nombrado CELEF3, de aislar cuantitativamente a las dex-
tranas nativas desde soluciones de sacarosa al 10 %. El estudio estadstico de los resul-
tados de la determinacin del contenido de dextranas en jugos de caa y azcares crudo,
usando simultneamente CELEF3 o Sephadex G-50, demuestra que no se observan dife-
rencias significativas. Se oferta a CELEF3 como un sustituto del Sephadex G-50 para el
control de calidad de la caa y sus productos.
Palabras clave: cromatografa, gel, filtracin, CELEF, polisacridos, dextranas.
ABSTRACT
In this work the use of cellulose gel for the determination by gel filtration of polysaccha-
rides in sugarcane products is evaluated. The gels were obtained by cross-linking of cellu-
lose in such way of obtaining the necessary porosity to achieve the exclusion of polysac-
charides with a molecular weight bigger than 5 000 ua. This way it is possible to isolate
the polysaccharides and especially the dextrans from the solutions of high sucrose con-
tents that are frequent in the sugar industry. The capacity of one of the obtained gels,
which has been named CELEF3, of isolating quantitatively from sucrose solutions the
native dextrans is shown. The statistical study of the results of the determination of the
dextran contents in cane juices and raw sugars using CELEF3 and Sephadex G-50 simul-
INTRODUCCIN
La capacidad de la filtracin por gel
para separar molculas segn su tamao se
basa en un riguroso control del tamao de
los poros de matrices o geles, preparados
por entrecruzamiento de diferentes polisa-
cridos.
Los azcares de alto peso molecular,
como los polisacridos, no entran en los
poros del gel por lo que slo pueden difun-
dir a travs de la fase lquida que se encuen-
tra entre las partculas del gel (volumen
externo), y por consiguiente, eluirn prime-
ro al correr una columna cromatogrfica.
Por el contrario, los azcares que poseen un
tamao lo suficientemente pequeo para
que puedan penetrar en los poros se inclu-
yen en la matriz y pueden as estar tanto en
la fase mvil, que est dentro de las partcu-
las del gel como en aqulla que las rodea,
retardndose de este modo la salida de tales
azcares de la columna. Los de mediano
peso molecular podrn difundirse parcial-
mente en la fase lquida interna, saliendo en
orden decreciente de su peso molecular. La
siguiente ecuacin describe este comporta-
miento:
donde Vr es el volumen de retencin del
azcar, Vo es el volumen de la fase mvil
entre las partculas presentes en la columna
(muerto o externo), Vi es el volumen de la
fase mvil dentro de las partculas (interno),
y K es el coeficiente de particin (AMERS-
HAMBIOSCIENCES).
La cromatografa por filtracin por gel se
ha empleado por ms de 40 aos y puede
usarse para: la separacin de mezclas com-
plejas de polisacridos o protenas; la elimi-
nacin de molculas de mayor o menor
peso molecular que impurifiquen estas sus-
tancias y la desalinizacin o el cambio de
buffer.
Los geles ms usados se preparan por
entrecruzamiento de dextranas o agar, aun-
que la celulosa se ha empleado tambin con
este fin, obtenindose un amplio espectro
de porosidades en las matrices obtenidas.
Estos tipos de geles se producen y comer-
cializan por varias firmas (IONTOSORB,
CHISSO CORPORATION).
En la industria azucarera es imprescin-
dible contar con este tipo de cromatografa
dada la necesidad de conocer los niveles
de concentracin de varios polisacridos
que son extremadamente dainos para la
fbrica de azcar, los que disminuyen la
eficiencia y la calidad de los azcares que
se producen. Dentro de estos polisacridos
las dextranas sobresalen por su vincula-
cin a las prdidas de sacarosa por dete-
rioro de la caa y sus jugos, entre el corte
y la molida (1 y 2). Estos polisacridos ele-
van la viscosidad de los productos inter-
medios de la fbrica (mieles y masas)
retardando la velocidad de cristalizacin y
diminuyendo el tamao medio de los cris-
tales de sacarosa.
La filtracin por gel permite separar con
alta capacidad y rapidez el grupo de com-
puestos formado por polisacridos de aque-
llos otros constituidos por azcares de bajo
peso molecular como la sacarosa, otros oli-
gosacridos y los monosacridos (glucosa y
fructosa, principalmente) (3).
Durante aos en Cuba 9 se ha venido tra-
bajando en el desarrollo de geles a partir de la
celulosa, preparndose geles con partculas
esfricas de diversos dimetros (30-250 m)
que cubren un amplio espectro de porosida-
des en funcin de las condiciones de su pre-
paracin, productos que se conocen bajo el
nombre comercial de CELEF
7
. En este traba-
jo se estudia la factibilidad del empleo de
ICIDCA No.3, 2005 36
taneously demonstrates that significant differences are not observed. CELEF3 is offered at
as a substitute of Sephadex G-50 gel for the control of quality of sugarcane and its indus-
trial products.
Key words: chromatography, gel, filtration, CELEF, polysaccharides, dextrans.
KVi Vo Vr + =
estos geles para la determinacin de polisa-
cridos en los productos de la industria azu-
carera, de manera que se pueda contar con
una fuente alternativa de estos materiales
cromatogrficos, que son imprescindibles
para el control de la calidad de la caa y sus
productos.
MATERIALES Y MTODOS
La preparacin de los geles CELEF se
realiz a partir de celulosa con un grado de
polimerizacin promedio viscosimtrico
(GPv = 900), material que se prepar con
diferentes tamaos de las partculas esfri-
cas y grado de entrecruzamiento, para
lograr altos flujos durante las separaciones
cromatogrficas en columnas de vidrio de
2,5 x 25 cm (con un lecho de gel de 100 cm
3
)
y la necesaria separacin entre los grupos
de azcares de bajo y alto pesos moleculares
presentes en los productos de la industria
azucarera.
Las columnas, luego de los primeros
ensayos sobre las propiedades hidrodinmi-
cas de las partculas, se llenaron con geles
con un dimetro promedio de 100 m, lo
que permiti que se pudieran correr a una
velocidad de flujo de 1 cm
3
por minuto con
solucin de NaCl al 1 %. La determinacin
del contenido de azcares en los eluatos se
realiz por el mtodo colorimtrico de
antrona-sulfrico. A las columnas se aplica-
ron 2 cm
3
de las soluciones de las diferentes
dextranas a una concentracin de 1000 ppm
o de soluciones a esta misma concentracin
de dextranas conteniendo un 15 % de saca-
rosa. El procedimiento analtico para la
determinacin de polisacrido que se
emplea como referencia en este trabajo
corresponde al mtodo empleado general-
mente en la industria azucarera, que se basa
en el uso de la filtracin por Gel con
Sephadex G-50
6
.
RESULTADOS Y DISCUSIN
La cromatografa de filtracin por gel
para la separacin de grupos de molculas o
para la desalinizacin no discrimina entre
las molculas de bajo peso molecular o las
de alto peso molecular permitiendo slo la
separacin de los dos grupos de molculas
de diferentes tamaos, es por ello que se
pueden usar columnas pequeas, gruesas y
altos flujos sin prdidas de resolucin. No
obstante, su uso analtico obliga a evitar
cualquier solapamiento entre los azcares
de diferente peso molecular, pues introduci-
ra serias interferencias en la determinacin
de polisacridos en soluciones que son
naturalmente de muy altos contenidos de
sacarosa.
En la figura 2 se comparan dos de las
mejores variantes obtenidas del gel CELEF,
resultando evidente que el CELEF 3 posee
las mejores propiedades para la determina-
cin de dextranas, ya que se logra la mayor
separacin entre las dextranas y la sacarosa,
con mezclas que contienen una proporcin
de estos azcares semejante a la de los
jugos.
ICIDCA No. 3, 2005 37
Figura 1. Propiedades de los geles de celulosa.
Separacin de las dextranas de la sacarosa.
Figura 2. Separacin de dextranas y sacarosa.
Para determinar el peso molecular mni-
mo en que las dextranas son excluidas total-
mente de la matriz del gel se realizaron
separaciones de dextranas de diferentes
pesos moleculares. Como se observa en la
figura 3, las dextranas con peso molecular
mayor de 5000 ua salen en el volumen de
exclusin de la columna. Segn este resul-
tado el Gel CELEF-3 resulta comparable en
sus propiedades con las del Gel Sephadex
G-25, gel que se usa normalmente para la
desalinizacin de biopolmeros.
En las tablas 1 y 2 se presentan los resul-
tados obtenidos al comparar el nivel de dex-
tranas en muestras de jugo y azcar crudo
usando columnas de dimensiones similares
de Sephadex G-50 y CELEF-3. Como se
observa, no existen diferencias significati-
vas en los valores obtenidos por ambas vas
para cada producto. Estos resultados indi-
can que puede usarse el Gel CELEF-3 para la
determinacin de dextranas en los produc-
tos de la industria, cubrindose un amplio
espectro de valores de la relacin dextra-
nas/sacarosa (0,1- 2 % sacarosa) en los pro-
ductos, sin presentarse diferencia significa-
tiva entre los resultados obtenidos usando
ambos geles.
CONCLUSIONES
1. Se ha desarrollado, producto de la cola-
boracin de especialistas de los Institutos
Cuba- 9 e ICINAZ, un gel de celulosa
nombrado CELEF-3, que cumple con todos
los requisitos para usarse en la determina-
cin de polisacridos en los productos de
la industria azucarera.
ICIDCA No. 3, 2005 38
Figura 3. Separacin por CELEF 3 de dextranas
de diferentes pm.
Tabla 1. Valoracin del uso de CELEF -3 para la determinacin de polisacridos

DETERMINACION DE POLISACARIDOS EN AZCAR (% Bx)
# DE MUESTRAS CELEF 3 GEL 50 DIFERENCIAS (d)
1 0.357 0.346 0.011
2 0.430 0.423 0.007
3 0.218 0.218 0.000
4 0.350 0.346 0.004
5 0.350 0.346 0.004
6 0.150 0.153 -0.003
7 0.350 0.349 0.001
8 0.558 0.547 0.011
9 0.463 0.465 -0.002
10 0.274 0.270 0.004
PROMEDIO 0.350 0.346 0.004
DESVEST(d) 0.005
DESVEST 0.112 0.109
FISHER 0.947 Probabilidad de que sean iguales las disper siones
TSTUDENT 0.020 Probabilidad de que sean diferentes las medias
Se aplic 2 ml de una a solucin a 10
0
Bx de los azcares
2. El gel desarrollado es equivalente al
Sephadex G-25 en sus propiedades, al
excluir las dextranas con pesos molecula-
res mayores de 5000 ua.
3. No se observa interferencia de la sacaro-
sa, ni diferencias significativas en los
resultados de la determinacin de polisa-
cridos en azcares crudos por filtracin
por gel usando columnas de dimensiones
similares de Sephadex G-50 y CELEF-3.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Leal J. E. y Kara-Murza, S. Determinacin
de polisacridos en jugos de caa y en los
productos de la industria azucarera. ICID-
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Azcar (La Habana) (2): p.25-30, 1972.
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the factory. Int. Sugar J. (Inglaterra) 93,
(1109): p. 82-86, 1991.
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Comparison of the main methods of pre-
dicting sugarcane deterioration.
International Sugar Journal (Inglaterra) 93
(1109): p. 99-102, 1991.
ICIDCA No. 3, 2005 39
Tabla 2. Valoracin del uso de CELEF-3 para la determinacin de
polisacridos.
Determinacin de polisacridos en jugos (% Bx)
# de MTRAS CELEF 3 Sephadex G-50 DIFERENCIAS (d)
1 0.55 0.53 -0.02
2 0.96 0.92 -0.04
3 0.84 0.82 -0.02
4 0.52 0.49 -0.03
5 0.52 0.51 -0.01
6 0.7 0.65 -0.05
7 0.29 0.27 -0.02
8 0.4 0.37 -0.03
9 0.55 0.51 -0.04
10 0.3 0.28 -0.02
PROMEDIO 0.563 0.535 -0.028
DESVEST (d) 0.012
DESVEST 0.207 0.202
FISHER 0.947 Probabilidad de que sean iguales las dispersiones
TSTUDENT 0.000 Probabilidad de que sean diferentes las medias