LP 3 - CROMOSOMII UMANI

1. GENERALITI.
n celulele somatice umane (diploide) exist 2n=46 cromosomi, adic 23 de perechi de cromosomi
omologi. Cromosomii omologi sunt cromosomi identici ca morfologie (form i mrime) i coninut genic, dar
diferii ca origine (unul de origine matern, cellalt de origine patern).
Din cele 23 perechi de cromosomi:
- 22 perechi sunt identice la femeie i brbat - autosomi
- 1 pereche este diferit la cele dou sexe (XX la femeie, XY la brbat) - gonosomi.
n celulele sexuale mature (haploide) - gamei - exist n (23) cromosomi
- n ovule 22+X
- n spermatozoizi 22+X sau 22+Y.
n cazul accidentelor anafazice din mitoz sau meioz (v. LP. Diviziunea celulei) se pot nate indivizi
cu anomalii cromosomice numerice (omogene sau n mozaic). Diagnosticul acestor sindroame se face prin
metode citogenetice de laborator.
2. PRINCIPIILE TEHNICII DE LABORATOR PENTRU STUDIUL CROMOSOMILOR LA OM
Pentru a putea fi studiai cromosomii trebuie s aib un grad maxim de condensare i s fie dispui
ntr-un singur plan .Aceste condiii sunt ndeplinite n cursul metafazei care este etapa optim de studiu a
cromosomilor. Pentru obinerea de cromosomi trebuie ndeplinite urmtoarele condiii: s se obin celule n
diviziune, s se blocheze diviziunea n metafaz i s se realiyeye un preparat cromosomic care s fie
examinat la microscop.
A. Celule n diviziune pot fi analizate:
- direct n cazul esuturilor care se divid activ = mduv osoas, gonada masculin, tumori
- dup realizarea unei culturi celulare:
de scurt durat: snge periferic, limfocite T, mduv osoas roie
de lung durat: fibroblati (piele, fascii, embrioni), celule amniotice, celule din vilozitile coriale,
tumori solide.
tehnica recoltrii sngelui periferic i punerea acestuia n cultur:

constituie cea mai simpl tehnic de obinere a cromosomilor umani;

se prelev snge periferic prin puncie venoas - prelevarea trebuie realizat n condiii de asepsie
(similare cu cele necesare pentru recoltarea sngelui pentru hemocultur);
se recolteaz pe heparin, pentru a se mpiedica coagularea sngelui;
n condiii de asepsie, sngele este introdus ntr-un flacon de cultur ce conine un mediu de cultur
specific (bio Merieux, 199, RPMI1640),mbogit cu ser de viel fetal sau ser uman AB
pentru stimularea diviziunilor se utilizeaz fitohemaglutinin;
se incubeaz la 37, 72 h..
B. Blocarea diviziunilor n metafaz
Se face cu substane care inhib formarea fusului de diviziune (statmokinetice) colchicin sau
colcemid.
C. Realizarea preparatelor (lamelor) pentru studiul la microscop impune urmtoarele etape:
1. hipotonizarea celulelor (centrifugare, eliminarea supernatantului i resuspendare n soluie hipoton de
KCl): dilat celulele i disperseaz cromosomii;
2. fixarea celulelor (alcool + acid acetic) - ntrerupe activitatea vital a celulei, pstrnd morfologia acestora;
3. etalarea celulelor pe o lam microscopic pentru a dispune cromosomii n acelai plan.
4. colorarea cu soluie Giemsa sau un alt colorant specific pentru cromosomi.
5. examinarea la microscopul optic permite reperarea i analiza cromosomilor pentru evidenierea
eventualelor anomalii de numr (omogene sau n mozaic) sau anomalii de structur;
6. fotografierea i decuparea cromosomilor;
7. identificarea cromosomilor i efectuarea cariotipului.
1

MEDICINA
LP. 3
- diferite conferine internaionale de standardizare au stabilit criteriile de identificare i mprire a
celor 23 de perechi de cromosomi umani n 7 grupe notate de la A la G.
CARIOTIPUL reprezint dispunerea sistematizat a cromosomilor decupai ai unei singure
celule, pe baza lungimii, poziiei centromerului sau altor criterii morfologice (constricii secundare,
satelii, benzi) precis codificate prin standarde internationale.
3. IDENTIFICAREA CROMOSOMILOR UMANI
Identificarea cromosomilor umani const n stabilirea grupei i perechii din care fac parte
cromosomii studiai.
Pentru identificarea cromosomilor se folosesc criterii morfologice, autoradiografia i marcajul n
benzi.
A. CRITERII MORFOLOGICE
Aceste criterii sunt singurele aplicabile la cromosomii colorai uniform (Giemsa).
a. Criteriile cantitative:
I. Lungimea cromosomului:
se folosete - lungimea absolut a cromosomului exprimat n microni
- lungimea relativ - raportul nmulit cu 100 dintre lungimea cromosomului studiat i
lungimea total a unui set haploid.
dupa lungime cromosomii se clasific n: mari, mijlocii, mici.
II. Poziia centromerului
dup poziia centromerului cromosomii se clasific n 3 categorii; pentru aceasta se folosete uni raport
numit indice centromeric
indicele centromeric reprezint raportul nmulit cu 100 dintre lungimea braului scurt i lungimea total a
cromosomului:
Ic = p/(p+q) x 100
pe baza acestui criteriu cromosomii se clasific n:
metacentrici:
Ic = 46 - 49
submetacentrici:
Ic = 31 - 45
acrocentrici:
Ic = 17 - 30
b. Criterii calitative:
I. sateliii
sateliii reprezint mici mase de heterocromatin prezente n continuarea telomerelor braelor scurte ale
cromosomilor acrocentrici (13, 14, 15, 21, 22, cu excepia cromosomului Y)
II. constriciile secundare
reprezint segmente cromosomice despiralizate, slab colorate.
ele pot fi situate pe orice cromosom, dar sunt mai frecvent ntlnite pe braul lung a cromosomilor 1, 9, 16,
19 n apropierea centromerului.
B. AUTORADIOGRAFIA
Este o metod de studiu a cromosomilor puin utilizat. Ea const n marcarea cromosomilor cu
timidin tritiat (TH3), care se substuituie timinei n lanurile de ADN nou create n cursul fazei S a interfazei.
Adugarea markerului izotopic n partea a doua a fazei S permite identificarea zonelor de heterocromatin,
care au o replicare tardiv. Astfel, sunt identificai cromosomii cu replicare tardiv n cursul fazei S,
cromosomi bogai n heterocromatin i puin activi genetic. Acetia sunt cromosomii 8,13,18, 21 i unul din
cromosomii X la femeie.
C. MARCAJUL N BENZI
Reprezint un grup de tehnici speciale, prin care se evideniaz pe cromatide alternana de zone
colorate i necolorate, numite benzi. Acestea au o distribuie precis, determinat de structura intern a
cromosomului.

MEDICINA
LP. 3
Metodele de marcaj n benzi au aprut relativ recent, n anii '70 i au determinat o revoluie n
citogenetic, deoarece au o mare valoare practic:
Marcajul n benzi reflect structura discontinu a cromosomilor, respectiv alternana de
eucromatin i heterocromatin, de ADN i proteine.
Modelul benzilor este identic n toate celulele unui organism i la toi indivizii aceleiai specii, de
aceea efectuarea marcajului n benzi permite identificarea precis a unei specii.
Marcajul n benzi permite identificarea precis a perechilor de cromosomi omologi, deoarece
acetia sunt identici din punct de vedere genetic i au acelai model de benzi.
Marcajul n benzi permite identificarea precis a fiecrui cromosom, deoarece cromosomii,
aparinnd unor perechi diferite, au alte gene i deci alt model al benzilor.
Metodele de marcaj n benzi permit un diagnostic citogenetic foarte precis n multe anomalii de
structur (deleii, inversii) care nu se evideniaz sau se evideniaz foarte greu n coloraia
obinuit.
Denumirea benzilor se face n raport cu metoda folosit sau localizarea benzilor:
benzi Q = quinacrin (fluorescente) n lumin UV;
benzi G = colorare Giemsa, dup tratament cu alcali, enzime proteolitice sau soluii saline
concentrate; benzile Q fluorescente au aceeai dispoziie cu benzile G colorate;
benzi R = "reverse", obinute prin denaturare termic a ADN sau prin colorare cu acridin orange
dispoziie invers benzilor Q i G;
benzi C = centromerice - evideniate n zona centromerului;
benzi T = telomerice. - evideniate n zona telomerelor;
Pe fiecare cromosom se pot observa o serie de repere, elemente importante pentru identificarea unui
cromosom (benzi net conturate, centromerul, telomerele). Reperele delimiteaz regiuni. Fiecare
regiune are mai multe benzi, iar benzile pot avea subbenzi.
Nomenclatura benzilor:: regiunile i benzile se numeroteaz de la centromer spre telomere pentru
fiecare din brae; ex: 1q21.1 - cromosomul (1), braul lung (q), regiunea (2), banda (1), subbanda (1).
Cromosomii metafazici prezint 400 - 500 benzi, n timp ce cromosomii aflai n profaza timpurie prezint
1800-2000 benzi (metode de nalt rezoluie).
4. CLASIFICAREA CROMOSOMILOR UMANI
Pe baza criteriilor morfologice cantitative (lungimea i poziia centromerului) i calitative (satelii i
constricii secundare) cromosomii se grupeaz n perechi de omologi i se clasific n 7 grupe, notate de la A la
G cariotip:
grupa A (cromosomi mari, metacentrici) - perechile 1-3 - sunt cei mai mari cromosomi,
cromosomul 1 poate prezenta constricie secundar, cromosomul 2 este usor submetacentric
grupa B (mari, submetacentrici) - perechile 4-5
grupa C (mijlocii, submetacentrici) - perechile 6-12 i cromosomul X; sunt 16 la femeie i 15 la
brbat; cromosomii 8, 9, 10 i 12 sunt mai submetacentrici; cromosomii 6, 7, 11 i X sunt mai puin
submetacentrici; cromosomul 9 prezint constricie secundar pe braul lung (9qh+)
grupa D (mijlocii, acrocentrici) - perechile 13-15; pot prezenta satelii
grupa E - cromosomul E 16 este metacentric mijlociu; cromosomii E 17-18 sunt submetacentrici
mici
grupa F (mici, metacentrici) - perechile 19-20
grupa G (mici, acrocentrici) - perechile 21-22 i Y; cromosomii 21 i 22 pot prezenta satelii;
cromosomul Y nu prezint satelii; cromosomii grupei G ajut la determinarea sexului - n cazuri
normale: la femei sunt 4 acrocentrici mici (2 crs 21 + 2 crs 22) / la brbai sunt 5 acrocentrici mici
(2 crs 21+ 2 crs 22 + Y)

MEDICINA
LP. 3
LUNGIMEA
CROMOSOMILOR

METACENTRICI

SUBMETACENTRICI

ACROCENTRICI

MARI

A 1-3

B 4-5

MIJLOCII

E 16

C 6-12, X

D 13-15

MICI

F 19-20

E 17-18

G 21-22, Y

5. NOMENCLATURA CROMOSOMILOR UMANI

Are la baz un sistem internaional de standardizare, care permite formularea cariotipului normal sau
anormal cu ajutorul unor simboluri i semne, care redau numrul de cromosomi i eventualele anomalii de
structur - deficit, surplus sau rearanjamente ale materialului cromosomic.
1. CARIOTIPUL NORMAL - se scrie numrul total de cromosomi urmat de o virgul, dup care se
scrie structura gonosomilor: femeia normal - 46,XX sau brbatul normal - 46,XY.
2. CARIOTIPURI ANORMALE
a. anomalii numerice:
- ale autosomilor: se scriu numrul total al cromosomilor, gonosomii, iar dup o alt virgul, precedat
de + (cromosomul n exces) sau - (pierderea unui cromosom) se scrie numrul cromosomului implicat;
- ale gonosomilor: se scrie numrul total de cromosomi, urmat dup virgul, de gonosomii respectivi.
b. anomalii structurale - exist 2 sisteme pentru desemnarea anomaliilor structurale:
- prescurtat - natura rearanjamentului i punctele de ruptur sunt identificate prin banda sau regiunea
n care se produc;
- detaliat - se definete fiecare cromosom anormal dup structura sa n benzi. Exemple:
46,XX,del(1)(q21q31) sau 46,XX,del(1)(pter->q21::q31->qter) Deleie a benzii 2 a braului
lung al crs.1.
46,XY,r(2)(p21q31) sau 46,XY,r(2)(p21->q31) Cromosom 2 inelar; punctele de ruptur sunt
pe braul scurt n banda p21 i pe braul lung n banda q31.
46,XX,inv(2)(p21q31)
sau
46,XX,inv(2)(pter->p21::q31->p21::q31->qter)
Inversie
pericentric a segmentului cuprins ntre banda p21 i banda q31 ale cromosomului 2.
46,XY,t(2;5)(q21;q31) sau 46,XY,t(2;5)(2pter->2q21::5q31->5qter; 5pter->5q31::2q21>2qter) Translocaia reciproc a segmentelor distale de banda q21, respectiv q31 ale
cromosomilor 2, respectiv 5.
46,X,i(Xq) sau 46,X,i(X)(qter->cen->qter) Isocromosom de brae lungi al cromosomului X.
6. VARIAII ALE CARIOTIPULUI LA PERSOANE CU FENOTIP
NORMAL. POLIMORFISMUL CROMOSOMIC.
Exist uneori o serie de abateri de la regulile generale stabilite la punctul 3, care determin unele
variante (variaii) particulare rare, dar care nu reprezint anomalii cromosomice.
A. VARIAII NUMERICE
I. la femeie - dup vrsta de 60 ani, pn la 7% din celulele organismului pot pierde unul din cromosomii X,
devenind 45,X;
II. la brbat - dupa vrsta de 70 ani, pn la 2% din celule pot pierde cromosomul Y i devin 45,X.

MEDICINA
LP. 3
B. VARIAII STRUCTURALE
I. lungimea i forma - cromosomii omologi nu sunt ntotdeauna egali ca lungime; variaiile n lungime
intereseaz n special braele scurte ale cromosomilor D, G (mai ales partea heterocromatinian) de exemplu
Y metacentric.
II. sateliii - mare variabilitate n numr, form i mrime; se gsesc obinuit pe cromosomii acrocentrici, cu
excepia cromosomului Y, dar pot fi observai i pe ali crs. - ex. 17, 18;
III. constriciile secundare - zone decondensate, situate n regiunile proximale ale braelor lungi ale
cromosomilor 1, 9, 16 i Y; uneori poate apare o mrire exagerat a constriciilor secundare.
C. IMPORTANA PRACTIC A POLIMORFISMULUI CROMOSOMIC
Polimorfismele de bandare (benzile Q, G i C) sunt reprezentate de diferene n ceea ce privete
mrimea i aspectul zonelor cromosomice; cel mai frecvent, polimorfismele implic regiunile centromerice,
braele scurte i sateliii cromosomilor D i G, zona de constricie secundar de pe braul lung al cromosomului
Y.
Semnificaia polimorfismului: nu este bine cunoscut; polimorfismul se transmite dominant dup
modelul mendelian, nu modific expresia fenotipic deoarece pare limitat numai la regiunile
heterocromatiniene, inactive genetic (produce modificri cantitative ale ADN repetitiv).
Polimorfismul cromosomic este folosit:
1. - ca marker pentru evidenierea transmiterii unor caractere de la prini la copii (ex. cercetarea paternitii);
2. - pentru determinarea originii parentale a nedisjunciei n aneuploidii (ex. originea crs. suplimentari n
trisomii);
3. - pentru identificarea cromosomilor care conin gene marker;
4. - stabilirea unor grupe de nlnuire (linkage) genic;
5. - creterea frecvenei unor variante n unele forme de leucemii i la copiii cu anomalii congenitale.

7. APLICAII PRACTICE:
- Examinai etapele de obinere a cariotipului uman (plana).
- Examinai la microscop un preparat cromosomic.
- Recunoatei tipurile de cromosomi metafazici (fotografii).
- Pe o metafaz cu marcaj n benzi recunoatei reperele cromosomice, fiecare cromosom, perechile de
omologi.
- Realizai un cariotip i stabilii diagnosticul de sex.
- Identificai extracromosomii sau cromosomii lips / anomaliile de structur de pe cariotipuri cu marcaj.
8. VERIFICAREA CUNOTINELOR

1. Definii urmtorii termeni:

CARIOTIP
BENZI G
CONSTRICII SECUNDARE
BENZI R
STATMOKINETIC
BENZI Q
SATELII
GONOSOM
AUTOSOM
2. ntrebri:
- Care sunt etapele obinerii unui cariotip?
- De ce este utilizat marcajul n benzi?
- Ce se nelege prin polimorfism de bandare?
- Ce variaii numerice ale cromosomilor se pot ntlni la persoane cu fenotip normal?