UNIVERSIDAD AUTONOMA BENITO

JUREZ DE OAXACA.
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

EFECTO ANTIPARASITARIO SOBRE Blastocystis hominis DE CINCO

TIOSEMICARBAZONAS FLUORADAS EN ENSAYOS IN VITRO.

BORRADOR DE TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE:
LICENCIADO EN QUMICO FARMACUTICO BILOGO.

PRESENTA:
DURN HEREDIA OLGA LIBIA

TUTORES:
DRA. EN C. ADRIANA MORENO RODRGUEZ
DR. EN C. JUAN LUIS BAUTISTA MARTNEZ

OAXACA DE JUREZ, OAX.

MARZO 2015

ndice
1 INTRODUCCIN ............................................................................................. 1
2 MARCO TERICO .......................................................................................... 1
2.1 GENERALIDADES ................................................................................... 1
2.1.1 Historia ............................................................................................... 1
2.1.2 Blastocystis hominis ........................................................................... 2
2.1.3 Taxonoma ......................................................................................... 3
2.1.4 Morfologa .......................................................................................... 5
2.1.5 Ciclo biolgico .................................................................................... 9
2.1.6 Manifestaciones clnicas................................................................... 10
2.1.7 Epidemiologa................................................................................... 11
2.1.8 Mecanismos de trasmisin ............................................................... 12
2.1.9 Patognesis...................................................................................... 12
2.1.10 Estudios patognicos en humanos ................................................. 13
2.1.11 Diagnstico..................................................................................... 14
2.1.12 Sintomatologa ............................................................................... 15
2.1.13 Tratamiento .................................................................................... 16
2.1.14 Especiacin .................................................................................... 16
2.1.15 Cultivo in vitro ................................................................................. 18
2.1.16 Axenizacin .................................................................................... 18
2.2 Bases de Schiff ....................................................................................... 19
2.3 Tiosemicarbazonas ................................................................................. 20
2.3.1 Caractersticas generales ................................................................. 21
2.3.2 Reacciones de ciclacin de las tiosemicarbazonas. ......................... 22
2.3.3 Actividad Biolgica ........................................................................... 22
2.3.4 Actividad Antituberculosa ................................................................. 23
2.3.5 Actividad antivrica ........................................................................... 23

2.3.6

Actividad

antimicrobiana

(antibacteriana,

antifngica

antiparasitaria). ......................................................................................... 24
2.3.7 Actividad antitumoral ....................................................................... 26
2.3.8 Otras aplicaciones ............................................................................ 26
2.4 Sntesis de los compuestos evaluados. .................................................. 27
2.5 Caractersticas y de los compuestos evaluados. .................................... 27
3 PLATEAMIENTO DEL PROBLEMA ................. Error! Bookmark not defined.
4 JUSTIFICACIN............................................................................................ 30
5 OBJETIVOS .................................................................................................. 31
5.1 OBJETIVOS GENERALES ..................................................................... 31
5.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS ................................................................... 31
6 MATERIALES Y MTODOS ......................................................................... 32
6.1 METODOLOGIA ..................................................................................... 32
6.1.1 Preparacin del medio de cultivo Boeck-Drbohlav. .......................... 32
6.1.2 Preparacin del medio de cultivo Pavlova ........................................ 34
7 RESULTADOS Y DISCUSIN. ..................................................................... 35
7.1

Discusin de resultados ...................................................................... 39

8 CONCLUSIONES .......................................................................................... 40
9 GLOSARIO DE TRMINOS .......................................................................... 41
10 REFERENCIAS ........................................................................................... 44

NDICE DE TABLAS

Tabla 1: Clasificacin taxonmica de Blastocystis hominis. ............................... 4

Tabla 2: Caractersticas del compuesto 5 [2-(trifluorometil) feniltio]-2furaldehdo
tiosemicabazona. ............................................................................................. 27
Tabla 3: Caractersticas del compuesto 5 [3-(trifluorometil) feniltio]-2furaldehdo
tiosemicarbazona. ............................................................................................ 28
Tabla 4: Caractersticas del compuesto 5[4-(trifluorometil) feniltio]-2furaldehdo
tiosemicarbazona. ............................................................................................ 28
Tabla 5: Caractersticas del compuesto 5[2-(nitro-4(trifluorometil) feniltio]2furaldehdo tiosemicarbazona. ....................................................................... 28
Tabla 6: Caractersticas del compuesto 5[(2,3,5,6- tetrafluoro-4(trifluorometil)
feniltio]-2 furaldehdo tiosemicarbazona. .......................................................... 29
Tabla 7: Porcentaje de inhibicin del compuesto 2 ( 5-[2-(trifluorometil) feniltio]2-furaldehdo tiosemicarbazona) sobre Blastocystis hominis. .......................... 35
Tabla 8: Porcentaje de inhibicin del compuesto 3 (5-[3-(trifluorometil)feniltio]-2furaldehdo tiosemicarbazona) sobre Blastocystis hominis. ............................. 36
Tabla 9: Porcentaje de inhibicin del compuesto 4 ( 5[4-(trifluorometil)feniltio]-2furaldehdo tiosemicarbazona) sobre Blastocystis hominis. ............................. 36
Tabla

10:

Porcentaje

de

inhibicin

del

compuesto

(5-[(2-nitro-4-

(trifluorometil)fenil) tio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona) sobre Blastocystis

hominis. ............................................................................................................ 37
Tabla 11: Porcentaje de inhibicin del compuesto 7 (5-[(2,3,5,6- tetrafluoro4(trifluorometil) feniltio]-2 furaldehdo tiosemicarbazona) sobre Blastocystis
hominis. ............................................................................................................ 38
Tabla 12: Porcentaje de inhibicin de las 5 tiosemicarbazonas fluoradas sobre
Blastocystis hominis. ........................................................................................ 38

NDICE DE ILUSTRACIONES

Ilustracin 1: Forma vacuolar de Blastocystis hominis. Tincin de yodo ............ 6

Ilustracin 2: Forma granular de Blastocystis hominis. Teido con hematoxilina
frrica ................................................................................................................. 7
Ilustracin 3: Forma ameboide de Blastocystis hominis. Por microscopia
electrnica .......................................................................................................... 7
Ilustracin 4: Forma qustica

de Blastocystis hominis. Por microscopia

electrnica .......................................................................................................... 8
Ilustracin 5: Ciclo biolgico de Blastocystis hominis ......................................... 9
Ilustracin 6. Formacin de una imina. ............................................................. 19
Ilustracin 7. Protonacin del grupo carbonilo.................................................. 20
Ilustracin 8. Ataque nucleoflico de la amina primaria al grupo carbonilo
(formacin de carbinolamina). .......................................................................... 20
Ilustracin 9. Protonacin del grupo hidroxilo para transformalo en un buen
grupo saliente. .................................................................................................. 20
Ilustracin 10. Prdida de agua y formacin de la imina protonada. ................ 20
Ilustracin 11. Desprotonacin del catin. ........................................................ 20
Ilustracin 12: Tautomera tiol -Tiona. .............................................................. 21
Ilustracin 13: Deslocalizacin de la carga en la molcula de tiosemicarbazona.
......................................................................................................................... 21

1 INTRODUCCIN
Las enfermedades parasitarias constituyen un importante problema de salud pblica a
nivel mundial, afectando directamente a la poblacin econmicamente vulnerable.
Blastocystis hominis, es uno de los protozoarios ms comunes del tracto intestinal. La
infeccin tiene distribucin mundial.
Se ha encontrado generalmente en nios de 3 a 12 aos de edad, pacientes
inmunosuprimidos e inmunodeprimidos. Cuando es localizado en heces de pacientes
positivos, se encuentra acompaado de otros parsitos entre los que se encuentran
Entamoeba histololytica, Entamoeba Coli y una gran cantidad de Bacterias que de
acuerdo a Ita Rafaela Ruiz Morales en 2010 aumenta su virulencia, complicando los
episodios diarreicos en estos grupos de edad. Adems de

que los antiparasitarios

encontrados en el mercado deben administrarse a dosis elevadas, conllevando a un

mayor nmero de reacciones adversas, por lo que en base a esto se pretende aumentar
las alternativas farmacolgicas con nuevos diseos moleculares que en estudios
posteriores demuestren menor toxicidad y efectos secundarios.
El uso irracional de frmacos antiparasitarios ha originado que los microorganismos
presenten mutaciones o adquieran resistencia.
La presente investigacin pretende evidenciar los resultados que se obtengan al analizar
el efecto de cinco tiosemicarbazonas fluoradas, mismas que en su naturaleza muestran
caractersticas antiparasitarias.
La investigacin estar dividida en la historia de Blastocystis hominis, una breve
introduccin hacia lo que son las tiosemicarbazonas fluoradas, el mtodo de aislamiento
del protozoo, y los resultados de la investigacin.
Si bien, cabe mencionar la importancia de este trabajo debido a que los compuesto que
se estarn probando han sido utilizados anteriormente como antitumorales,
antibacterianos, anticancergenos, etc. Y se han obtenido buenos resultados respecto de
ellos.

2 MARCO TERICO
2.1 GENERALIDADES
2.1.1 Historia
Uno de los fenmenos ms sorprendentes de los observados en animales es el
parasitismo. El nmero de organismos conocidos de vida parasitaria es muy elevado.

Existe una gran cantidad de especies cuya supervivencia est relacionada con la de otras
y dependen, en cierta medida, de ellas. sta dependencia no implica que los parsitos
sean organismos degenerados o deficientes, al contrario, a la vida parasitaria se ha
llegado tras largo tiempo de evolucin, en el que los parsitos han ido superando
barreras y adaptndose a vivir en, o sobre sus hospederos.
En Mxico las infecciones causadas por parsitos intestinales ha sido un problema que
se mantiene constante. Una de las posibles causas de las infecciones gastrointestinales
es la amibiasis y dentro de los principales problemas que genera una amibiasis, se
encuentran las enfermedades diarreicas que, en Mxico ocupan uno de los primeros
lugares como causa de morbilidad en poblacin menor de cinco aos de edad,
generando el 20% de la demanda de consulta en los servicios de salud y el 10% de las
hospitalizaciones peditricas. Este grupo de edad presenta entre 2 y 4 episodios
diarreicos al ao.
De acuerdo a la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) anualmente, se producen
aproximadamente dos mil millones de casos de enfermedades diarreicas en todo el
mundo. Siendo la causa principal de morbilidad, mortalidad y un factor importante de
desnutricin en la niez; y por lo general son consecuencia de la exposicin a alimentos
o agua contaminados. En todo el mundo, alrededor de mil millones de personas carecen
de acceso a fuentes de agua mejoradas y aproximadamente 2 500 millones no cuentan
con acceso a instalaciones bsicas de saneamiento. La diarrea causada por agentes
virales, bacterianos y parasitarios es frecuente en pases en vas de desarrollo. En estas
regiones los nios menores de tres aos padecen en promedio 3.3 episodios de diarrea
anualmente; sin embargo en algunas reas el promedio sobrepasa los 9 episodios al ao.
La morbilidad de los afectados representa cerca de un 15% de sus das. Cerca de un
80% de las muertes ocurren en los menores de 2 aos y del total de todas defunciones,
el 18% se relacionan con la deshidratacin, la cual sucede por la prdida de lquido y
electrolitos en las heces (1).

2.1.2 Blastocystis hominis

Blastocystis hominis es un protozoo intestinal descrito por primera vez a principios del
siglo XX, cuando Alexieff en 1911 realiza la primera descripcin escrita y dibujada que
satisface los requerimientos de nomenclatura. Siendo Brumpt en 1912, quien trabaja con
material fecal humano, el que acua el nombre especifico de Blastocystis hominis.
Se le clasifica durante aos como un hongo, algunos autores sugieren tambin que
podra ser un artefacto, causante de problemas al momento de diagnosticar otro tipos de

microorganismos patgenos, por lo que se sugiere su identificacin para no confundirlo

con Entamoeba histolytica, no obstante, eventualmente surgan artculos que sugeran a
Blastocystis como causante de infeccin intestinal. (2)
El inters biomdico se produce cuando Zierdt y sus colaboradores en 1967 retoman su
estudio y

establecen su naturaleza protozoaria basndose en sus caractersticas

culturales, morfolgicas y fisiolgicas: sugiriendo adems su papel como posible

patgeno primario.
La historia de Blastocystis hominis (B. hominis) ha sido controversial en cuanto a su
clasificacin taxonmica y a su definicin como agente causal en infecciones
gastrointestinales. Las primeras descripciones con imgenes del microorganismo que
posteriormente sera llamado B. hominis fueron hechas por Brittan y Swayne, quienes
estudiaron y escribieron abundantemente sobre la epidemia de clera en Londres
durante 1849, llamndolo cuerpos de clera o clulas anulares considerndolo
causante de la epidemia; sin embargo esta informacin no es suficiente para atribuirles
el descubrimiento del parasito.
Blastocystis hominis, es un protozoario unicelular anaerobio perteneciente al reino
protista y reclasificado por Silberman dentro del reino cromista o stramenopila, el cual
se encuentra en el tracto intestinal en los seres humanos y en animales donde puede
causar patologa intestinal aunque esto es controversial. Algunos investigadores han
reportado la relacin de infecciones con sntomas especficos produciendo una reaccin
toxica alergnica no especifica de la mucosa del colon provocando sndrome y colitis
ulcerativa. Adems se conoce como el protozoo ms comn en muestras de heces de
sujetos sintomticos y asintomticos y se transmite al hombre por ruta fecal oral en
forma similar a Giardia lamblia y Entamoeba histolytica. Se ha sealado la transmisin
a travs del consumo de agua no tratada o con pobres condiciones higinico-sanitarias y
se sugiere la transmisin por los alimentos. (3)

2.1.3 Taxonoma
Aceptada la clasificacin de B. hominis como un protozoo, se propusieron diversas
posibilidades dentro del Reino Protista. Zierdt y Tan en 1976, consideran que se trata
de un esporozoario, pero estudios posteriores demuestran la presencia de pseudpodos y
divisin mediante fisin binaria, lo que supone su reclasificacin en el subphylum
Sarcodina, y la creacin del suborden Blastocystina dentro del orden Amoebida. La
observacin de fisin mltiple y endodiogenia llevaron a cabo por Jiang y He en 1993,
al proponer su inclusin entre los Apicomplexa, en el subphylum Blastocysta, de nueva

creacin. Zierdt en 1993 consideraba que B. hominis mostraba ms caractersticas

propias de los Sarcomastigophora, aunque coincida en la necesidad de crear un
subphylum independiente. (4)
Boreham y Stenzel en 1993 en una interesante revisin, insisten en la necesidad de
ahondar en los estudios moleculares, y as evitar clasificaciones basadas nicamente en
caracteres morfolgicos. Los primeros anlisis moleculares que trataron de esclarecer la
filogenia de B. hominis, se deben a Johnson et al en 1989 quienes tras analizar parte de
la secuencia del ARN de la subunidad menor ribosomal (ssARNr), y no encontrar
relaciones monofilticas con ningn eucariota, sugieren que debe ser considerado como
una especie incertae sedis; opinin compartida por autores como Hollebeke y
Mayberry en 1994. Nakamura et al en 1996, mediante el anlisis de la secuencia
aminoacdica del factor de elongacin-1 (EF-1), un gen altamente conservado
utilizado como marcador filogentico, confirman que no se trata de un hongo (5).
La taxonoma de Blastocystis hominis, todava resulta ser controversial y la historia del
parsito refleja la dificultad en definicin taxonmica, ya que ha sido considerado
previamente como levadura o como un hongo, sin embargo estudios moleculares
proponen la siguiente clasificacin en la tabla No 1:

Tabla 1: Clasificacin taxonmica de Blastocystis hominis.

Clasificacin taxonmica de Blastocystis hominis (6).

Reino:

Protista

Subreino:

Protozoa

Phylum:

Sarcomastigophora

Subphylum:

Sarcodina

Superclase:

Rhizopoda

Clase:

Lobosea

Subclase:

Gymnamoebia

Orden:

Amoebida (o Blastocystea)

Suborden:

Blastocystina

Gnero:

Blastocystis

Especie:

Hominis
Fuente: www.pacal.org

2.1.4 Morfologa
Blastocystis hominis es un microorganismo procariota polimrfico, en el que se cree que
el estado fisiolgico de las clulas y las condiciones ambientales, son las responsables
de la diversidad morfolgica observada. (7)
El conocimiento de la morfologa es fundamental en el diagnstico de esta parasitacin
(8)
Otro punto importante en el diagnstico es la cuantificacin de las clulas que aparecen
por campo microscpico, ya que la cantidad de parsitos es motivo de sntomas en
algunos pacientes.

2.1.4.1 Morfotipos celulares

En el diagnstico de Blastocystis hominis se han encontrado 4 variantes morfolgicas:
vacuolar, ameboide, granular y qustica. Algunos autores sealan la existencia de
formas avacuolares y multivacuolares pero se encuentran en menor cantidad.

Forma vacuolar.

Es el morfotipo predominante, tanto in vivo como in vitro y presenta grandes

oscilaciones de tamao. Se han descrito valores de entre 2 y 200 m de dimetro, con
una media que oscila entre 4 y 15 m (9). Por otro lado Stenzel y colaboradores en 1989

demostraron que posee vesculas recubiertas de funcin endoncitica en la membrana

plasmtica y un revestimiento superficial de espesor variable que rodea a la mayora de
las clulas. Son formas esfricas, caracterizadas por una vacuola central grande,
concntrica a la membrana externa que ocupa entre el 50 y 90 % del volumen celular. El
citoplasma se encuentra desplazado por la vacuola en una zona perifrica estrecha en
donde se encuentran tambin el ncleo y el resto de organelas: aparato de Golgi,
retculo endoplsmico rugoso rodeando a las mitocondrias y ribosomas adosados a la
membrana de la vacuola (10). Se han observado porciones de citoplasma invaginadas en
la vacuola central, con material diverso (11)

Ilustracin 1: Forma vacuolar de Blastocystis hominis. Tincin de yodo

Fuente: www.gefor.4t.com

Forma granular

Tiene un dimetro que oscila entre 3 y 80 m con un rango medio entre 15 a 25 m. Se

tiene entendido que derivan de la forma vacuolar (12) en donde la transicin puede ser
inducida por diversos factores en los que se incluyen el incremento en las
concentraciones de suero en el medio de cultivo, la transferencia de clulas a medios de
cultivos diferentes, la axenizacin y la adicin de ciertos antibiticos. Las formas
granulares se caracterizan por la presencia de numerosos grnulos en la banda estrecha
del citoplasma perifrico y ms comnmente en la parte central de la vacuola, aunque
tambin existen datos que detallan a la forma granular muy parecida a la forma vacuolar
con esta nica diferencia.
Dentro de la vacuola central existen diferentes tipos de grnulos, que pueden ser
inclusiones de tipo mielinas, pequeas vesculas, grnulos cristalinos o gotitas lipdicas.
(13)
Se han encontrado tambin evidencias de que la vacuola central puede presentar
grnulos reproductivos relacionados con mecanismos de divisin esquizognica y
endodiognica (14).

Vdovenko en el 2000 se replantea la significacin de las formas vacuolares y

granulares, y mediante la utilizacin de rojo neutro como colorante marcador de
viabilidad, concluye que estas formas representan estados secuenciales hacia la
degeneracin celular.

Ilustracin 2: Forma granular de Blastocystis hominis. Teido con hematoxilina frrica

Fuente: www.vitae.ucv.ve

Forma ameboide

La forma ameboide ha sido descrita con poca frecuencia y las descripciones

morfolgicas han causado confusin en la literatura (13). Se han observado formas
ameboides en cultivos viejos, tratados con antibiticos y en menor cantidad en muestras
fecales relacionadas con diarreas agudas (15). En 1997 Zierdt y Tan en los primeros
estudios con microscopio electrnico de trasmisin describen la forma ameboide como
oval, con uno o dos pseudpodos grandes y carentes de membrana celular. Las formas
ameboides poseen pseudpodos y son de menor tamao, tienen un dimetro que va de
entre 2.6 y 7.8 m. Algunos autores en contraposicin a los estudios de Dunn y
colaboradores que describieron las formas carentes de mitocondrias o vacuola central;
en observaciones con el microscopio electrnico de transmisin, revelaron la existencia
de vacuola central, cuerpos numerosos de Golgi, retculo endoplsmico y mitocondrias
en las extensiones pseudopdicas citoplasmticas; lo que implica a la clula en procesos
activos que requieren energa. Actualmente no se ha aclarado si las formas ameboides
aisladas de colonias son artefactos de cultivo o representan formas que tambin se
pueden encontrar in vivo. Se ha sugerido que la forma ameboide es una fase intermedia
entre la forma vacuolar y la forma qustica y que la ingestin de bacterias en esta forma
es la que provee los nutrientes para la enquistacin (16) .
En 1996 Boreham y Stenzel postularon que la forma ameboide derivaba de formas
morfolgicamente idnticas a la forma avacuolar. Se cree que el material particulado
ingerido por las formas ameboides, bien sean bacterias o restos de clulas procedentes
de la muerte de clulas vecinas desempean un papel nutritivo o regulador en esta
forma.

Ilustracin 3: Forma ameboide de Blastocystis hominis. Por microscopia electrnica

Fuente: www.vitae.ucv.ve

Forma qustica

Esta forma fue confirmada y descrita desde hace relativamente poco tiempo, es una
forma morfolgicamente distinta (17). El retraso en su descubrimiento se le atribuye a
su pequeo tamao que va de los 3 a los 5 m. Los quistes fecales son esfricos u
ovales, tienen una pared qustica multilaminada y ocasionalmente aparecen en cultivos
axnicos. En la forma qustica se pueden encontrar de 1 a 4 ncleos en el contenido
celular interno, mltiples vacuolas, depsitos lipdicos y glucognicos (18). Los quistes
suelen estar rodeados de una capa fibrilar laxa que pierden cuando maduran (18). Se han
detectado diferencias morfolgicas de los quistes de Blastocystis hominis aislados de
animales comparados con los quistes fecales de Blastocystis hominis en muestras de
personas. En 1993 Boreham y Stenzel describieron quistes de hasta 15 m de dimetro
en heces de mono, y en material fecal procedente de pollos se han visto mltiples
quistes individuales incluidos en una laminar fibrilar simple. Esta disparidad
morfolgica puede deberse a la posible existencia de especies distintas de Blastocystis.
En 1996 Moe y colaboradores analizan la viabilidad de quistes de Blastocystis hominis
revelando que sobreviven a temperatura ambiente hasta un total de 19 das,
demostrando que los quistes son la forma ms resistente del parasito; aun cuando en
condiciones mximas de frio o calor son frgiles al igual que con desinfectantes
comunes. En 1993 Suresh y colaboradores describen un mtodo de induccin a la
enquistacin para Blastocystis hominis, sin embargo los quistes que se obtuvieron por el
mtodo son morfolgicamente distintos a los que aparecen en las heces y son ms
parecidos a las formas granulares con la diferencia de que en estas se encuentra una
estructura semejante a la pared qustica, gruesa y osmifila.

Ilustracin 4: Forma qustica de Blastocystis hominis. Por microscopia electrnica

Fuente: www.vitae.ucv.ve

Otras formas

Adems de las formas ya mencionadas algunos autores han descritos otras formas
aisladas de material fecal fresco procedente directamente del intestino. Las primeras
muestras detectadas fueron obtenidas de un paciente con diarrea profusa y se las
denomin avacuolares al carecer de vacuola central (19).

Stenzel y colaboradores en 1991 describieron formas multivacuolares en material fecal

humano. Son clulas rodeadas de una cubierta externa gruesa y contiene mltiples
vacuolas de tamao y contenido variable, su dimetro oscila entre 5 y 8 m. Aunque
est pendiente de confirmar Boreham y Stenzel en 1993 sugieren que las formas
avacuolares y multivacuolares representan el estado in vivo del parasito, mientras que
la forma de vacuola grande y granulares predominan en los cultivos. Las formas
multivacuolares tras la coalescencia formaran la vacuola grande central

2.1.5 Ciclo biolgico

Los estudios realizados por el grupo de Zierdt en 1973, como los realizados en
coordinacin con Williams en 1974, y por ltimo en 1976 en conjunto con Tan;
diferenciaron cuatro formas asexuales de divisin de Blastocystis hominis: biparticin,
plasmotoma, esquizogonia y endodiogenia. La reproduccin ms frecuentemente
observada en el husped es la biparticin.
En la actualidad el ciclo de vida de Blastocystis hominis no est bien establecido,
aunque existen varios y complejos ciclos de vida propuestos por diferentes
investigadores. La ruta ms probable de transmisin es la va fecal-oral por alimentos o
agua contaminada. Como su ciclo vital no se ha establecido, se mencionan dos
propuestas de posibles ciclos biolgicos para Blastocystis hominis.
La primera propuesta empieza por la ingesta de quistes avacuolares con agua y
alimentos contaminados con heces que contienen al quiste de Blastocystis hominis, las
cuales viajan a travs del epitelio intestinal, encontrndose el protozoo en el intestino
hay una ruptura del quiste inducida por el pH del estmago, por mitosis se genera la
forma vacuolar y esta se va por dos caminos:
1.- Provocar una autoinfeccin generada por la forma multivacuolar o trofozoto que
pasa a prequiste y por medio de una esquizogonia genera un quste avacuolar.
2.- El otro camino es la multiplicacin de la forma vacuolar dando origen a la forma
ameboidea, dentro de esta sucede el fenmeno de mitosis que pasa a la forma de
prequiste y por esquizogonia da origen al quiste avacuolar, que sale del husped, esta
forma de B. hominis es la que se presume responsable de la patogenia en el husped y
con la relacin de la contaminacin de agua y alimentos (6).

Ilustracin 5: ciclo biolgico de Blastocystis hominis.

Fuente: www.pacal.org

2.1.6 Manifestaciones clnicas

La infeccin por Blastocystis hominis es responsable de un cuadro clnico denominado
Blastocistosis, que por Garavelli y colaboradores fue conocida como enfermedad de
Zierdt-Garavelli. En las infecciones sintomticas por este organismo la manifestacin
clnica ms frecuente es la diarrea, el cuadro clnico puede ser leve y autolimitado,
agudo o crnico, puede tener un periodo entre 3 a 10 das, aunque hay casos en los que
persiste por meses. Otras manifestaciones clnicas posibles son: dolor abdominal,
flatulencias, nauseas, vmitos y molestias abdominales inespecficas. (20)
Varios estudios refieren eosinoflia perifrica en pacientes parasitados con Blastocystis
hominis. Otros autores sin embargo no encontraron aumento de eosinoflia en sus series.
(21).
Otros estudios han mostrado que la aparicin de cuadros diarreicos crnicos persistentes
o recidivantes es ms comn en pacientes inmunocomprometidos, por lo que algunos
autores plantean la posibilidad de que se trate de un patgeno oportunista (22); mientras
otros afirman lo contrario (7).
Existen pocas referencias que asocien a Blastocystis con cuadros extraintestinales. En
1999 Le y colaboradores comunicaron un caso de artritis en la que se visualiz B.
hominis en el lquido sinovial, responsabilizando al estado de inmunodepresin por el
tratamiento antiinflamatorio de la diseminacin hematgena del parsito.
Tambin se han descrito reacciones alrgicas como urticaria, angioedema, prurito,
rinitis, asma bronquial, rinoconjuntivitis, artralgias, asociadas a la presencia de
Blastocystis en heces (7)
Adems se han descrito diversos signos y sntomas generales e inespecficos tales como
fiebre, cefalea, insomnio, mareo, laxitud, anorexia, prdida de peso, deshidratacin,
tenesmo, prurito y en algunos casos se ha descrito tambin estreimiento (7). Se ha
asociado la parasitacin por Blastocystis hominis con clon irritable. En 1997 Hussain
y colaboradores demostraron que los pacientes con clon irritable tenan ttulos
significativamente elevados de IgG2frente a antgenos carbohidratados de B. hominis.
No se ha podido confirmar que sea Blastocystis el agente etiolgico primario del
sndrome de colon irritable, quiz sea la flora microbiana de estos pacientes la que
favorece la proliferacin de Blastocystis hominis.

2.1.7 Epidemiologa
Blastocystis hominis es un parsito intestinal de distribucin cosmopolita, y el que se
detecta con ms frecuencia en cualquier parte del mundo. Los datos de prevalencia son
dispares, entre el 3 y el 16% en los pases desarrollados hasta el 50%, en pases en vas
de desarrollo (7). Los datos de menor prevalencia son los publicados en Japn por
Horiki et al en 1997, quienes tras analizar una poblacin de 6422asintomticos, tan slo
encuentran parasitacin en 30 de ellos (0,5%).
Estudios recientes afirman que afecta a toda la poblacin, ya sean adultos, ancianos o
nios, encontrando mayor predominio en adultos jvenes. Los factores de riesgo de
transmisin son aun en parte desconocidos, ya que no se ha establecido un patrn para
Blastocystis hominis. Uno de los posibles factores que se sealan es la falta de higiene
(6).
La carencia de agua, alcantarillado y un incorrecto tratamiento delas aguas residuales,
aumentan los riesgos de contraer la infeccin (23). El incremento delriesgo de infeccin
se asocia tambin con el lugar de trabajo. En un estudio realizado en Malasia por Rajah
Salim y colaboradores en 1999 analizando la prevalencia en manipuladores de animales,
encuentran que el 41% estaba parasitado por Blastocystis, con un ratio de un 17%
respecto al grupo control. Los autores sugieren que probablemente adquieran la
infeccin por va oral-fecal.
Herwaldt y colaboradores en 2001 comprueban, con un grupo de voluntarios en
Guatemala, que el riesgo de adquirir la infeccin es significativamente mayor cuando se
trabaja en reas en las que este parsito es endmico.
No se han encontrado diferencias significativas de prevalencia entre ambos sexos, slo
un ligero predominio en el sexo femenino segn estudios realizados por Garca y
colaboradores en 1984; Reinthaler et al en 1987; Qadri et al. En 1989; Sun et al en
1989; Senay y MacPherson en 1990; Grossman et al en 1992; Nimri en 1993; Carbajal
et al en 1997. Pero si hay un mayor un predominio de B. hominis en poblacin adulta
sobre la poblacin infantil de acuerdo a los datos obtenidos por Kain y colaboradores en
1987; Qadri et al en 1989; Doyle et al en 1990; Senay y MacPherson en 1990; Carbajal
et al en 1997; Wang et al en 2002.
Sheehan y colaboradores en 1986; Kain et al en 1987; Yamada et al en 1987; Babb y
Wagener en 1989; Narkewicz et al en 1989; Guglielmetti et al en 1989; Pinel et al en
1999; Harms et al en 2002. Afirman que los viajes a pases tropicales y subtropicales se
han asociado con mayor riesgo de adquirir la parasitosis. El clima tambin puede

favorecer la incidencia de la infeccin informan Babcock et al en 1985, en Nepal,

describieron un marcado incremento de B. hominis (del 10% al 24,7%) en los meses de
Abril, Mayo y Junio. Adems, Boreham y Stenzel en 1993 indicaron que se daba un
aumento de la prevalencia en los meses calurosos y hmedos del verano. Por el
contrario, otros autores como Garavelli y Scaglione en 1989, no han observado ninguna
variacin estacional.
En cuanto a la parasitosis en inmunosuprimidos, la prevalencia no difiere de la
poblacin normal en el caso de pacientes con el sndrome de inmunodeficiencia
adquirida sugieren Borrs y colaboradores en 1991, aunque Devera y colaboradores en
1998apuntan lo contrario. La parasitacin ha resultado ser especialmente relevante en
inmunodeprimidos aquejados de hemopatas malignas (7)

2.1.8 Mecanismos de trasmisin

La va de transmisin de la parasitacin por Blastocystis hominis es la fecal-oral.
Diversos autores sealan la correlacin existente entre la parasitacin y las aguas no
tratadas (24). Garavelli y Scaglione en 1989 afirmaron que Blastocystis hominis se
transmite por medio de la ingestin de agua, frutas o vegetales contaminados con
excremento de animales. Adems de la existencia de reservorios animales, consideraron
la probabilidad de transmisin interhumana por manos sucias, relacin orogenital y
oroanal. Otro de los motivos por los que se piensa que la transmisin es fecal-oral es
porque en instituciones cerradas y en familias ha habido brotes de epidemia (25). En el
2000 Taamasri y colaboradores realizaron estudios a soldados, en los cuales
relacionaron la infeccin por Blastocystis hominis con la calidad del agua utilizada para
las bebidas. En un estudio realizado en viviendas en las que se criaban cerdos,
demostraron que en todas las viviendas en las que los cerdos estaban parasitados por
Blastocystis spp. haba casos en humanos; argumentando que los cerdos podran actuar
como reservorios de la infeccin.

2.1.9 Patognesis
La patogenicidad de este microorganismo es controvertida por diferentes razones.
Narkewicz y colaboradores en 1989 confirmaron que no detectaban diferencias de
prevalencia entre la poblacin sintomtica y asintomtica en parasitados por B. hominis.
Datos similares son referidos en 1990 por Senay y MacPherson y Grossman et al en
1992 y Udkow y Markellen 1993. Steinmann y colaboradores en 1990 refieren datos de
prevalencia similares en tres grupos de estudio: pacientes inmunocompetentes con
diarrea, portadores asintomticos y pacientes VIH con diarrea. Sin embargo, Nimri en

1993, Carbajal y colaboradores en 1997 comunicaron prevalencias mayores en

poblacin sintomtica.
Otro aspecto que apoya la idea de que B. hominis es un organismo comensal, se debe a
los casos en los que se produce la resolucin de los sntomas sin la administracin de
tratamiento especfico previo; tal y como publican Kainen 1987, Miller y Minshew en
1988 o Sun y colaboradores.
Sin embargo, son muchas ms las publicaciones que implican a B. hominis como causa
de enfermedad, que las que lo exoneran. Investigaciones realizadas por Sheenan y
colaborares en 1986; Pikula en1987; Dellers y colaboradores en 1992 sugieren que B.
hominis es un organismo anaerobio estricto que reconoce un hbitat colnico primario;
aunque Vannatta y colaboradores publicaron en 1985 que tambin se ha detectado en el
duodeno y en el ciego de pacientes inmunocompetentes y en inmunosuprimidos segn
Narkewicz y colaboradores en 1989.
No se conocen cules son los determinantes de patogenicidad, pero existen diferentes
hiptesis. Garavelli y colaboradores en 1991 indicaron que la infeccin por B. hominis
depende de la interaccin entre el sistema inmune y el microambiente en el intestino del
hospedador y propusieron una accin txico-alrgica que dara lugar a una inflamacin
inespecfica de la mucosa colnica.
Lee en 1991 detect niveles bajos de Escherichiacoli y Lactobacillus, un pH fecal
elevado y sobrecrecimiento de Cndida, en casos crnicos de Blastocistosis. Ante estos
hechos, sospech que B. hominis podra tener una dbil patogenicidad que contribuira a
la enfermedad como parte de un gran cuadro que incluira otros componentes
nutricionales y digestivos. Cook en 1987; Llibre et al en 1989; Ayadi y colaboradores
en 1992 consideran que se comporta como patgeno en pacientes inmunodeprimidos.

2.1.10 Estudios patognicos en humanos

Existe consenso sobre Blastocystis hominis como causa de enfermedad cuando se
confirma la ausencia de cualquier otro patgeno conocido y aparece en un nmero
elevado en heces. (26). Aunque hay autores que no encuentran correlacin entre el
nmero de Blastocystis encontrados en las heces y la aparicin de la enfermedad. (27).
As mismo otros autores sealan a Blastocystis como patgeno potencial,
independientemente del recuento y del hospedador. (28).
Sheenany colaboradores en 1986, Kainy colaboradores en

1987 y Carbajal y

colaboradores en 1997, coinciden en que un gran nmero de parsitos en las heces

asocia ms frecuentemente con formas agudas aunque no es predictivo de diarrea

necesariamente.
Los estudios anatomopatolgicos coinciden en que la parasitacin por Blastocystis
hominis no es una infeccin entero-invasiva. (29)
Otra de las razones por las que se apoya la patogenicidad de este microorganismo es la
remisin de la sintomatologa y la aclaracin de las heces despus de el tratamiento con
antibiticos (30)
Sin duda la hiptesis que sigue cobrando ms fuerza es la existencia de poblaciones de
Blastocystis hominis con diferente potencial patgeno. (31).

2.1.11 Diagnstico
El diagnostico de Blastocystis hominis en humanos y animales se ha logrado con
tinciones histolgicas de muestras de heces para cultivos in vitro. Y los recientes
progresos de ensayo para la determinacin del genotipo mediante el uso de
amplificacin por PCR con genes diana especficos. Metodologas simples y sensibles
son inspeccionadas para detectar el parasito en muestras.
Una de las tcnicas ms utilizadas para el diagnstico de Blastocystis hominis es
mediante la observacin directa de muestras frescas con lugol, as como el examen
directo.
Cuando se tiene experiencia en la identificacin de Blastocystis hominis, se puede hacer
el diagnstico en muestras de materia fecal frescas, aunque el mtodo de eleccin son el
frotis y las tinciones permanentes. Se puede usar el mtodo de concentracin fijando
previamente las muestras para las preparaciones permanentes (6)
Aun con las tcnicas que se han utilizado anteriormente, ha resultado difcil la
identificacin de Blastocystis hominis, por lo que se han implementado otras tcnicas
que han mostrado efectividad para la determinacin de B. hominis, como ha sido la
tincin con tinta china modificada.
Para detectar la presencia de B. hominis en heces, los mtodos apropiados son: el
examen microscpico directo con solucin salina al 0,85% o con lugol y la preparacin
permanente coloreada con hematoxilina frrica 69,70.
Hay opiniones contrarias sobre la aplicacin de los mtodos de concentracin, los
mtodos ms apropiados serian, el de Faust y colaboradores y el de Lutz, si se utilizan
muestran con formol tamponado al 10% 124,70.

Fueron investigadas diversas tinciones utilizando colorantes como el Giemsa, Wright y

tricrmico de Wheatley, hematoxilina-eosina, mertiolato-yodo-formol (MIF). Suresh et
al. (1994) utilizan la naranja de acridina para diferenciar entre distintos estadios de B.
hominis. Khalifa (1999), comparando 5 tcnicas diferentes de tincin directa indica que
los mejores colorantes para observar B. hominis seran: Azul metileno - safranina y la de
Zielhl-Neelsen modificado, permitiendo identificar en forma rpida y fcil quistes y
formas ameboides.
Sin embargo el cultivo in vitro de B. hominis ha aumentado la sensibilidad de la
deteccin, en relacin al mtodo directo, el cual es rutinariamente aplicado en la
mayora de los laboratorios. As, Termmathurapoj et al. (2004), utilizaron los cultivos in
vitro como gold standar para la deteccin de B. hominis en muestras de heces,
obtuvieron para los mtodos de observacin simple y la tincin tricrmica una
sensibilidad de 16.75 y 40.2% y una especificidad de 94% y 80.4% respectivamente.
Los cultivo in vitro tambin permiten aplicar el mtodo de PCR para la deteccin de B.
hominis en muestras de heces, y adems son tiles para posteriores estudios moleculares
del parasito.
La cuantificacin de los parsitos que aparecen por campo microscpico, estara
relacionada con la aparicin de sntomas. Para determinar el nmero de clulas de B.
hominis, se debe contar 10 campos con objetivo de 40x, estando distribuidos sobre la
preparacin de la siguiente forma: dos en cada una de las esquinas, para un total de 8, y
dos en el centro de la lmina, posteriormente se obtiene el promedio de las clulas
observadas en esos campos, se informa el resultado como ms de cinco clulas por
campo o menos de cinco clulas por campo. Las cifras inferiores a cinco clulas por
campo, no se las debe desdear o considerar insignificantes.

2.1.12 Sintomatologa
Los sntomas atribuidos a la infeccin de Blastocystis hominis son inespecficos, la
presencia de sntomas parece estar asociado a tres factores:
1.- El nmero de parsitos.
2.- La inmunosupresin y pacientes inmunocomprometidos.
3.- La relacin con otros factores.
Debido a los factores antes mencionados los pacientes pueden presentar una variedad de
sntomas, que podran confundir al mdico con otra enfermedad diarreica.

Generalmente se presenta malestar abdominal, incluyendo inflamacin y flatulencia

excesiva, distencin abdominal, clicos y estreimiento alternado con diarrea, con
menos frecuencia se presentan otros sntomas como, vmitos, mareos, prdida de peso,
diarrea acuosa y prurito perianal, dolor/calambres abdominales, tenesmo, vrtigo y
anorexia, fiebre, esteatorrea y leucocitos en heces, hepatoesplenomegalia, rash cutneo
y colitis, entre otros.
En la mayora de los individuos inmunocomprometidos la infeccin por Blastocystis
hominis se presenta como diarrea crnica grave. (6)

2.1.13 Tratamiento
Debido a la controversia sobre su patogenicidad, no existe consenso sobre la necesidad
teraputica en la parasitacin por B. hominis, salvo en el caso de los portadores
asintomticos en el que todos coinciden en no tratar.
Los mismos medicamentos que se utilizan para la amibiasis intestinal y a la misma
dosis, son empleados en la Blastocystocis; sin embargo se han hecho estudios in vitro
para determinar la susceptibilidad de este organismo a diferentes drogas, siendo en
orden de efectividad las siguientes: El metronidazol se encuentra en primer lugar,
siendo el frmaco de eleccin en el mercado, se utiliza como segundo lugar la
Furazolidona, observndose una buena efectividad, otro frmaco que ha mostrado
buenos resultados ha sido la Trimetroprim-sulfametoxazol, siguindole a ella el 5-cloro
8-hidroxi-7-iodoquinolina (enterovio-formo), y por ltimo se tiene a la Pentamidina.
A continuacin se mencionar un esquema de quimioterapia revisado por Stenzel:
Metronidazol:
a) 25 a 750 mg tres veces al da durante 5 a 10 das
b) 200 mg cuatro veces al da durante 7 das.
c) 2 g por da durante 5 das
Iodoquinol:
a) 300 mg tres veces al da por diez das.
b) 650 mg tres veces al da durante 20 das.

2.1.14 Especiacin
Mediante la investigacin basada en la ubicacin de Blastocystis hominis en el reino
animal, se ha demostrado que se encuentra en un amplio rango de hospedadores

describindose en primates, ungulados, gatos, perros, cerdos, roedores, pjaros, aves de

corral, reptiles, anfibios e incluso insectos como la cucaracha (32).
En 1987 Yamada y colaboradores informan que la morfologa y el tamao de las formas
detectadas en los animales tienen similitud a las encontradas en humanos. No obstante,
en lo que se refiere a criterios morfolgicos y culturales se han descrito nuevas especies:
Blastocystis galli en pollos, B. anatis en patos, B. anseri en ocas. Se requeriran estudios
de biologa molecular para confirmar que podran ser especies distintas ya que se han
demostrado variaciones en la morfologa de los organismos a causa de condiciones de
ecolgicas desfavorables (33) y durante la adaptacin al cultivo (34).
En 1991 Teow y colaboradores describen una nueva especie, Blastocystis lapemi,
procedente de la serpiente de mar, por la diferencia en la temperatura de crecimiento y
el perfil cariotpico en relacin con Blastocystis hominis. Singh y colaboradores en 1996
de igual manera usan el anlisis cariotpico para la descripcin de nuevas especies en
reptiles como son: Blastocystis geocheloni, en tortuga; Blastocystis cyrcluri, en iguana y
Blastocystis phytoni, en serpiente pitn.
En 1998 Yoshiwa y colaboradores indican que las diferencias cariotpicas no son
suficientes para determinar especiacin en Blastocystis aislados de reptiles, abogando
por el uso de tcnicas de PCR-RADP para distinguir entre especies y cepas de
Blastocystis.
En oposicin a lo anterior se tienen otros estudios en los que se confirma la utilidad de
los cariotipos en la especiacin de Blastocystis. Entre el 2000 y 2001 Ho y
colaboradores realizan un estudio de comparacin en la secuencia de aminocidos de la
regin codificante del gen EF-1 en 7 aislados de Blastocystis procedentes de ratas y
reptiles; poniendo en evidencia las diferencias entre unos y otros y de ambos con
referencia a Blastocystis hominis.
De todo esto se desprende que Blastocystis no es especfico de un hospedador, ya que
puede dar lugar a infecciones cruzadas con otros hospedadores. Resultados similares se
han son referidos por Abe y colaboradores en 2003, despus de la caracterizacin
molecular de aislados de primates y de aves.
Del mismo modo, diferencias cariotpicas, utilizadas conjuntamente con otros mtodos
discriminatorios, resultan tiles a la hora de designar especies.

2.1.15 Cultivo in vitro

En 1974 Zierdt y Williams constataron que entre los medios de cultivo idneos para
Blastocystis hominis, el medio bifsico de Boeck-Drbohlav, que anteriormente haba
sido descrito para Entamoeba histolytica, proporcionaba un adecuado crecimiento para
Blastocystis hominis, adems los medios pre-reducidos durante 48 horas mostraron
mejores resultados, con una fase liquida constituida por solucin de Locke y suero
inactivo, que puede ser de bovino, caballo, conejo o humano al 30 % e incubados a 37
C en atmosfera anaerobia.
Upcroft y Colaboradores en 1989 ensayaron diversos medios monofsicos lquidos, ya
que para estudios de biologa molecular y quimioterapia es preferible evitar el exceso de
protenas. Ho y colaboradores en 1993 demostraron que el medio Dulbecco modificado
por Iscove, permita un crecimiento superior al de los medios MEM, RPM-1640 Y
BME, comparado con el medio de Boeck-Drbohlav.
La capacidad de crecer en medio solido o semislido en forma de colonias como
poblaciones clonales, resulta til para estudios bioqumicos, genticos y de viabilidad.
Tan y colaboradores describieron la formacin de Blastocystis hominis en agar blando
en condiciones de anaerobiosis. Con una mezcla de Bacto agar al 0.36%, IMD y suero
de caballo al 10%, se observan colonias con un dimetro que oscila entre 1 y 3 mm, por
debajo de la superficie del agar, entre los 5 y 10 das. Las colonias individuales
obtenidas son replicadas en cultivos lquidos. (35)
El crecimiento en colonias se utiliza principalmente en la investigacin de anticuerpos
monoclonales reactivos en superficie para estudios de citotoxicidad y para la
axenizacin de especies de Blastocystis aisladas de humanos, reptiles o ratas de
laboratorio. (36).
Ms recientemente se describi un medio en agar solido que aumenta la eficacia del
crecimiento clonal de B. hominis (37). Las colonias se exponen en la superficie del agar,
esto facilita el recuento y la manipulacin. Crecen a los 7 das despus de la
inoculacin, alcanzando 2 mm de dimetro, en medios slidos las colonias son viables
14 das, por lo que los subcultivos se realizan cada dos semanas.

2.1.16 Axenizacin
Blastocystis spp se caracteriza porque no puede ser axenizado directamente, primero se
ha de establecer el cultivo con flora bacteriana compleja y no definida (38). La
axenizacin de Blastocystis spp. Se ha conseguido con la adicin de antibiticos (39),

(40), (41), ya que la fragilidad de la clula impide el empleo de mtodos fsicos tales
como la centrifugacin o la filtracin. (42)
En algunos casos no se logra la axenizacin (2) (43) (44), lo que indica que el parsito
puede requerir de la presencia de bacterias para sobrevivir.
(44) Lanuza y colaboradores consiguen axenizar con xito 25 de 81 aislados de B.
hominis, gracias a la combinacin de un gradiente de ficoll-cido metrizico y la
adicin progresiva de antibiticos. (36) Ng y Tan en 1999 proponen otro mtodo
recientemente empleado para lograr cultivos puros, consiste en una reduccin inicial de
la carga bacteriana usando antibiticos, seguida de crecimiento de colonias en medio
semislido. (5).

2.2 Bases de Schiff

La formacin de las bases de Schiff se logra con una reaccin de condensacin, en
donde en condiciones adecuadas, el amoniaco o una amina primaria reaccionan con una
cetona o un aldehdo, para de esa forma crear una imina.

Ilustracin 6. Formacin de una imina.

Las iminas son anlogos nitrogenados de las cetonas y aldehdos, con un doble enlace
carbono-nitrgeno en lugar del grupo carboxilo. Las iminas al igual que las aminas son
bsicas, por lo tanto a las iminas sustituidas se les denomina bases de schiff. En las
reacciones de condensacin dos o ms compuestos orgnicos se combinan con la
perdida de agua o de otra molcula pequea.
Una carbinolamina se transforma en una imina mediante la prdida de agua y la
formacin de un doble enlace: deshidratacin. Esta deshidratacin sigue el mismo
mecanismo que la deshidratacin de un alcohol mediante catlisis acida. La protonacin
del grupo hidroxilo lo transforma en un buen grupo saliente (agua). (45)

Ilustracin 7. Protonacin del grupo carbonilo.

Ilustracin 8. Ataque nucleoflico de la amina primaria al grupo carbonilo (formacin de

carbinolamina).

Ilustracin 9. Protonacin del grupo hidroxilo para transformarlo en un buen grupo saliente.

Ilustracin 10. Prdida de agua y formacin de la imina protonada.

El catin resultante est estabilizado por una estructura de resonancia con todos los
octetos completos y con la carga positiva localizada en el nitrgeno. La prdida del
protn da lugar a la imina.

Ilustracin 11. Desprotonacin del catin.

Un pH adecuado es crucial para la formacin de una imina. La segunda parte es una

catlisis acida, por lo que la solucin ha de ser cida; sin embargo, si la solucin es
demasiado cida, la amina atacante se protona y deja de ser nucleoflica, lo que hace que
el primer paso se inhiba. (45)

2.3 Tiosemicarbazonas
La bsqueda de nuevos compuestos con aplicaciones en medicina est impulsando
importantes avances teraputicos y genera una nueva rea cientfica multidisciplinar
donde confluyen, qumica, farmacia y biomedicina aparte de otras especialidades; entre
estos nuevos compuestos se encuentran las tiosemicarbazonas. Estas sustancias
orgnicas exhiben una interesante actividad biolgica que viene siendo estudiada desde
hace aproximadamente 60 aos (46). Destacndose en este sentido, los trabajos
desarrollados en la lucha contra el cncer. A mediados de los aos sesenta algunos de
estos derivados mostraron una importante actividad antitumoral en ensayos celulares y

tambin en estudios realizados sobre organismos superiores (ratones y perros

principalmente) (47).
Tambin se identificaron los blancos moleculares sobre los que actan estas sustancias:
fundamentalmente, procesos celulares de oxidacin-reduccin y mltiples sistemas
enzimticos (topoisomerasas, deshidrogenasas, polimerasas, nuclesido y kinasas) (48)
(49) (50) (51).Entre estos ltimos destaca la inhibicin de las ribonucletido
reductasas(RNRs), familia de enzimas que cataliza la conversin de ribonuclesido
difosfatos en desoxirribonuclesido difosfatos, paso previo a la formacin de las
unidades constituyentes del ADN (52).

2.3.1 Caractersticas generales

Las semicarbazonas (X = O) y tiosemicarbazonas (X = S) son compuestos derivados de
hidrazona que responden a una frmula general C=N4NHC=XNH2, siendo posibles dos
formas tautmeras, que podemos observar en la siguiente ilustracin.

Ilustracin 12: Tautomera tiol-Tiona.

La mayora de las tiosemicarbazonas se disuelven en cidos y forman complejos

metlicos en disolucin cida, eso sugiere la importancia de formas aninicas en
disolucin. Debido a la deslocalizacin de carga que presentan, pueden considerarse
sistemas planos, como se aprecia en la ilustracin 13.

Ilustracin13: Deslocalizacin de la carga en la molcula de tiosemicarbazona.

Exhiben una capacidad coordinativa muy variada, comportndose usualmente como

ligandos monodentados a travs del tomo de azufre tiocarbonilo (I), o bidentados
quelatantes, a travs de los tomos de nitrgeno azometna (N1) y azufre (II)
Desde el punto de vista coordinativo, las tiosemicarbazonas pueden actuar como
ligandos bidentados, tanto neutros (en forma de tiona) como monoaninicos (por
perdida de protn de tiol), pudiendo dar lugar a la formacin de complejos neutros,
aninicos o catinicos. As pues, en estado neutro las tiosemicarbazonas actan
fundamentalmente en forma de tiona, aunque se han podido aislar complejos en los que
existen ambas formas tautomricas de la tiosemicarbazona.

Entre las tiosemicarbazonas con mayor denticidad debido a la presencia de

heterotomos dadores en la molcula, cabe destacar la importancia biolgica de aquellas
que poseen heterociclos, en particular de las orto sustituidas, es decir, las que estn
unidas a travs del anillo por su posicin 2. De ellas, piridina e isoquinolina son los dos
sistemas de heterociclos que ms se han investigado por su relacin estructuraactividad.
West

y colaboradores realizaron numerosos estudios con tiosemicarbazonas

heterocclicas, en especial las derivadas de piridina (53) y pirazina (54), comprobando la

existencia de distintos ismeros conformacionales de estas tiosemicarbazonas
heterocclicas.
En cuanto a las propiedades biolgicas evaluadas, la 2-acetilpiridina 4N(2acetoxietoximetil) tiosemicarbazona y la 3-(N-metil) isatin 2-tiofencarbonilhidrazona
han mostrado, la mayor actividad inhibitoria contra el crecimiento de algunos
microorganismos Gram positivos y Gram negativos.

2.3.2 Reacciones de ciclacin de las tiosemicarbazonas.

Aparte de las reacciones con sales metlicas para dar lugar a complejos de coordinacin,
las tiosemicarbazonas pueden dar lugar a procesos de ciclacin.

2.3.2.1 Reacciones de ciclacin

La sntesis de anillos por ciclacin de compuestos orgnicos lineales adecuados es uno
de los mtodos ms utilizados para preparar heterociclos. As, por ejemplo, las semi y
tiosemicarbazonas derivadas de aldehdos son sustratos idneos para la preparacin de
heterociclos de cinco y seis miembros que contengan tres heterotomos por la accin de
cidos, bases, oxidantes y radiacin (55), demostrndose que tanto la naturaleza de la
tiosemicarbazona ciclada como la del agente inductor de la ciclacin empleado
condicionan el producto obtenido.
Aunque la formacin de anillos heterocclicos de 6 miembros no es un fenmeno
extrao en la ciclacin de tiosemicarbazonas, es ms frecuente la formacin de anillos
de cinco miembros en los que estn involucrados ataques intramoleculares entre tomos
exclusivamente pertenecientes a la molcula de tiosemicarbazona (56).

2.3.3 Actividad Biolgica

Las tiosemicarbazonas (TSC) presentan un amplio perfil farmacolgico y constituyen
una clase de compuestos, cuyas propiedades han sido estudiadas extensamente en la

Qumica

Medicinal, particularmente

en

la Qumica

Medicinal

Inorgnica,

presentan actividad antitumoral, antiviral, antifngica, etc.

Las TSC heterocclicas, se encuentran entre los inhibidores ms potentes de la enzima
ribonucletido reductasa, que cataliza la sntesis de desoxirribonucletidos, responsable
de mantener un suministro equilibrado de los desoxirribonucletidos necesarios para la
sntesis y replicacin del ADN. La qumica de los complejos de metales de transicin
con tiosemicarbazonas, ha tenido una atencin considerable por su amplio perfil
farmacolgico que permite una diversa variedad de compuestos con diferentes
actividades biolgicas. Estas propiedades biolgicas de las TSC son a menudo
relacionadas con la coordinacin de iones metlicos.

2.3.4 Actividad Antituberculosa

Domagk y colaboradores describen que algunas TSC poseen actividad in vitro o in vivo
en algunos casos contra la tuberculosis, despus de muchos estudios con diferentes
tiosemicarbazonas, concluyeron que las TSC derivadas de benzaldehdos con
sustituyentes en la posicin para del anillo aromtico, presentan actividad contra el
Mycobacterium tuberculosis. Uno de los compuestos utilizados clnicamente es la pacetoamidobenzaldehido tiosemicarbazona conocida como tiacetazona.

2.3.5 Actividad antivrica

Desde que en 1950 por Hamre y al. (57) Descubrieron que derivados de benzaldehdo
tiosemicarbazona eran activas contra la infeccin del virus neurovaccinia en ratones, se
han llevado a cabo numerosos estudios con tiosemicarbazonas heterocclicas,
demostrndose que los derivados de isatin-3- tiosemicarbazona son especialmente
activos contra el virus vaccinia (58) y rous sarcoma virus (59), aunque la aplicacin
ms importante de estas tiosemicarbazonas ha sido el uso de la 1-metilisatin-3tiosemicarbazona, conocido como METISAZONA contra el adenovirus de la viruela
(58). Diversos estudios con derivados de isatin tiosemicarbazona y otras
tiosemicarbazonas (60) heterocclicas han demostrado que las modificaciones
estructurales en las cadenas laterales de estos compuestos tienen gran importancia en su
actividad antivrica. As, en el tratamiento contra el herpes simplex (HSV), se ha
demostrado que las tiosemicarbazonas activas han de tener un anillo heterocclico en
posicin alfa respecto a la tiosemicarbazona, y tambin se ha comprobado que derivados
de la 2-acetilpiridina tiosemicarbazona son potentes inhibidores de las lneas de HSV-1
y HSV-2 del virus herpes, inhibiendo la replicacin de los virus en mucha mayor
extensin que la sntesis de ADN celular y protenas (57). Tambin se han sintetizado

complejos de bis-tiosemicarbazonas con Pd (II) que presentan actividad in vitro contra

lneas celulares de herpes resistentes al acyclovir (61).
Por otra parte tambin hay estudios de actividad de tiosemicarbazonas frente a
retrovirus, siendo sometida la isatin -tiosemicarbazona a modificaciones sistemticas
en un intento de desarrollar frmacos con propiedades contra el SIDA (62), teniendo
algunos compuestos un ndice teraputico elevado y mostrndose efectivos contra el
retrovirus M-MuLV.
Estas propiedades antivricas suelen estar asociadas a la habilidad de las
tiosemicarbazonas para inhibir ribonuclesido Difosfato Reductasa RDR, pero tambin
puede deberse a la inhibicin de otros enzimas, tal como sucede en el Rous sarcoma
virus (RSV), donde se inhibe la ADN polimerasa dependiente de ARN (59).

2.3.6 Actividad antimicrobiana (antibacteriana, antifngica y antiparasitaria).

La p-acetamidobenzaldehdo tiosemicarbazona (tiacetazona), tiene actividad biolgica
contra muchos microorganismos, ha sido usada contra Mycobacterium leprae, el
microorganismo bacteriano responsable de la lepra, con una actividad muy similar a la
observada en el tratamiento contra la tuberculosis. Asimismo, otras tiosemicarbazonas
derivadas de 2-acetilpiridina presentan tambin actividad anti antileprtica la cual se
relaciona con la gran capacidad quelante de las tiosemicarbazonas tridentadas (58).
Tambin es conocida la actividad de diversas tiosemicarbazonas (N)-heterocclicas y
sus complejos metlicos presentan un amplio espectro de actividad antimicrobiana (63),
inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas tales como Neisseria gonorreae,
Straphylococcus fecalis, entre otras y Gram negativas como Klebsiella-Enterobacter,
Escherichia coli,muchas de ellas resistentes a la penicilina, siendo normalmente ms
efectivas contra cultivos de bacterias Gram positivas que Gram negativas (63). En
muchas de estas tiosemicarbazonas el anillo heterocclico presente es piridina, y parece
que la sustitucin sobre el nitrgeno tioamida (64) y la formacin de complejos planocuadrados diamagnticos con un ligando lbil pueden favorecer dicha actividad
antibacteriana de estos compuestos (65).
Para el caso de TSC y sus complejos metlicos con actividad anti-fngica se resalta la
actividad contra una variedad de hongos patgenos como Macrophomina phaseolina,
Fusarium oxysporum, Aspergillus niger (66), Aspergillus fumigatus (67), Aspergillus
terreus (68) entre otros.

La actividad antifngica de las tiosemicarbazonas parece estar considerablemente

afectada por los sustituyentes unidos a la molcula de tiosemicarbazona. As, la mayor
actividad se da en derivados de piridina 2-sustituidos, como 2-folmilpiridina, 2acetilpiridina o 2-benzoilpiridina. El tamao de los sustituyentes sobre el nitrgeno
tioamida y el metal involucrado en la formacin de los complejos metlicos tambin
influye en la capacidad inhibidora contra los hongos. En el caso de los complejos de Cu
(II) con los ligandos derivados de piridina, el potencial de reduccin del ligando en el
complejo, la magnitud del campo ligando y varias propiedades espectrales pueden
correlacionarse con la actividad antifngica (69). En estudios realizados por West y
colaboradores con derivados de 2-acetilpiridina tiosemicarbazonas, se ha observado que
la presencia de un tomo de hidrogeno sobre el tomo de nitrgeno tioamida y la
densidad electrnica del enlace C6-N2, que puede incrementarse por tautomerizacin o
desprotonacin al formarse los complejos, son factores importantes para que los
compuestos puedan inhibir el crecimiento de A. niger (66), y tambin se ha comprobado
que los complejos de Cu (II) suelen ser ms activos que los ligandos de partida de P.
variotii (70).
Otra utilidad biolgica tanto in vivo como in vitro de las tiosemicarbazonas es la de
actuar contra los protozoos parsitos como Plasmodium berghei (64) y Plasmodium
falciparum (64)(responsables de la malaria), Tripanosoma cruzi (71) (relacionado con la
enfermedad de Chagas) y Tripanosoma brucei (71) (asociado con la enfermedad del
sueo transmitida por la mosca Tse-tse). La forma de actuacin de las
tiosemicarbazonas frente a estos parsitos es inhibiendo la accin de cistena proteasas
vitales para el ciclo de vida de los parsitos, como son, respectivamente, falcipana-2,
rodesna y cruzana.
Algunas tiosemicarbazonas tambin han mostrado poseer actividad antiamobica in
vitro contra el protozoo Entamoeba histolytica, que provoca disentera amobica y
flemn del hgado. Las tiosemicarbazonas activas frente a este protozoo son derivados
de 2-carboxaldehdo tiosemicarbazonas con grupos tiofeno (72) o nitrofurano (73),
aumentando la actividad antiamobica con la presencia de grupos voluminosos unidos
al nitrgeno tioamida (74) y resultando la mayor actividad biolgica de los complejos
respecto a los ligandos, lo que puede ser debido a que la coordinacin del metal hace
que se reduzca la polaridad del centro metlico, a repartir su carga con el ligando, lo que
favorece la permeabilidad de los complejos a travs de la capa lipdica de la membrana
celular de los parsitos (74).

2.3.7 Actividad antitumoral

Las bis (tiosemicarbazonas) y N-heterociclo tiosemicarbazonas comprenden dos
interesantes series experimentales de agentes quimioteraputicos, sobre todo aquellos
derivados de 1-formilisoquinolina y 2-formilpiridina tiosemicarbazona, presentando los
derivados de 2-formilpiridina tiosemicarbazona la ventaja de poseer una mayor
solubilidad en agua (75). As, diversas tiosemicarbazonas derivadas de 2-formilpiridina
presentan actividad frente al sarcoma 180 de clulas ascticas en ratones (76), aunque
resultan txicas a niveles teraputicos, lo que ha dado lugar a la sntesis de otras
tiosemicarbazonas heterocclicas aromticas en busca de potenciales agentes
antitumorales para el ser humano.
French y Blanz llevaron a cabo estudios sistemticos de la actividad de 2-formil
tiosemicarbazonas con distintos anillos heterocclicos, que revelaron que la cadena
lateral de las tiosemicarbazonas debe estar adyacente al N-heterocclico y que un
ligando tridentado (NNS) conjugado es esencial para que se presente actividad
anticancergena contra diversos tipos de clulas tumorales en ratones (75).
Las tiosemicarbazonas heterocclicas presentan un gran potencial antineoplsico, en
particular

los derivados de

la 1-formilisoquinolina

(77)

y 2-formilpiridina

tiosemicarbazonas, comprobndose que su actividad se basa en bloquear la sntesis de

ADN en las clulas de mamferos inhibiendo la enzima ribonuclesido difosfato
reductasa (RDR) (78).
No obstante no se puede afirmar con absoluta certeza que la inhibicin de RDR es el
nico mecanismo de la actividad antitumoral de las tiosemicarbazonas, ya que diversas
tiosemicarbazonas heterocclicas han demostrado alterar la actividad de otras enzimas
como IMP deshidrogenasa, dihidrofolato reductasa, nuclesido quinasa o DNA
polimerasa en clulas leucmicas murinas y humanas (79).

2.3.8 Otras aplicaciones

En relacin a su capacidad para mejorar el ciclo celular e interferir en los procesos de
sntesis y rotura de ADN, se ha comprobado la actividad nucleasa in vitro de diversas
tiosemicarbazonas en plsmidos de ADN, comprobndose que inducen rotura de ADN
(80).
El estudio de tiosemicarbazonas tridentadas(N,N,S) derivadas de pirazina para
comprobar su capacidad de actuar como potenciales agentes teraputicos para evitar el
exceso de hierro en el tratamiento de pacientes con anemia de Cooley tambin est

relacionado con las propiedades de las tiosemicarbazonas comentadas con anterioridad,

obtenindose buenos resultados in vivo e in vitro (81).
Tambin se han comprobado las actividades anticonvulsionantes de benzotiazolil-2tiosemicarbazonas (82) en ratones, provocando poca neurotoxicidad.
En

radiofarmacia,

se

ha

empleado

cobre

(II)

diacetil-bis

(4N-

metiltiosemicarbazona)64Cu-ATSM, para administrar una alta dosis local de terapia de

radiacin despus de la absorcin por parte de las clulas tumorales, siendo mejores los
resultados obtenidos mediante la administracin conjunta junto con 2-desoxiglucosa (2DG). As, la utilizacin de 2-DG en ratones contra el carcinoma EMT-6 parece que
produce unos cambios metablicos en las clulas tumorales, lo que aumenta la eficacia
radioteraputica de 64Cu-ATSM (83).

2.4 Sntesis de los compuestos evaluados.

Para la sntesis de las tiosemicarbazonas que utilizamos en esta tsis: se pesan para cada
uno de los compuestos 0.125 gr de tiosemicarbazida y se disuelven en 20 ml de una
mezcla etanol-agua (1:1) a 80C. Por otra parte se pesa el aldehdo previamente
sintetizado y se disuelve en etanol. Se mezclan ambas disoluciones y se agrega1 ml de
cido actico para que se lleve a cabo la reaccin de sntesis colocndose en un sistema
Vigreaux, bajo agitacin constante. La reaccin es monitoreada cada 4 horas mediante
CCF con fase mvil cloroformo-metanol 80:20. Cuando la CCF muestra el fin de la
reaccin, se filtra el precipitado obtenido, se coloca en un vaso de precipitados con 10
ml de metanol y se disuelve; a esta disolucin se le agrega carbn activado (10 % del
volumen total) y se coloca en agitacin constante por 2 horas. Una vez transcurrido el
tiempo de agitacin, la mezcla se filtra hasta eliminar por completo el carbn activado y
se deja recristalizar tapado y protegido de la luz, durante 4 das.

2.5 Caractersticas de los compuestos evaluados.

Tabla
2:
Caractersticas
tiosemicarbazona.

Estructura

del

compuesto

Peso
molecular
(g/mol)

5 [2-(trifluorometil)

Punto de
fusin
(C)

feniltio]-2furaldehdo

Frmula condensada

345.365

Tabla
3:
Caractersticas
tiosemicarbazona.

Estructura

del

compuesto

112-114

C13 H10 F3 N 3 O S2

5 [3-(trifluorometil)

feniltio]-2furaldehdo

Peso molecular (g/mol) Punto de fusin (C) Frmula condensada

F

345.365

152-153

C13 H10 F3 N 3 O S2

N
NH

H2N

Tabla 4: Caractersticas del compuesto 5[4-(trifluorometil)feniltio]-2furaldehdo tiosemicarbazona.

Estructura

Peso molecular Punto de fusin (C) Frmula condensada

(g/ mol)

F
F
F

345.365

164-165

C13 H10 F3 N 3 O S2

N
NH

H2N

Tabla 5: Caractersticas
tiosemicarbazona.

Estructura

Peso
(g/mol)

del

compuesto

5[2-(nitro-4(trifluorometil)feniltio]-2furaldehdo

molecular Punto
(C)

de

fusin Frmula
condensada

F
F
NO 2
F

390.36

193.5-195C

C13H9F3N4O3S2

N
NH

H2N

Tabla 6: Caractersticas del compuesto 5[(2,3,5,6- tetrafluoro-4(trifluorometil) feniltio]-2

furaldehdo tiosemicarbazona.

Estructura
F

Peso molecular
(gr/ mol)

Punto de fusin
(C)

Frmula
condensada

417.327

141-143

C13 H6 F7 N 3 O S2

F
F
F

S
F
O

N
NH

H2N

3 PLATEAMIENTO DEL PROBLEMA

Los protozoarios constituyen un grupo numeroso e importante dentro de los parsitos
intestinales, variando su prevalencia y patogenicidad de acuerdo a ciertos factores
propios del agente o del hospedero (OMS, 1981).
La parasitacin ha resultado ser especialmente relevante en inmunodeprimidos
aquejados de hemopatas malignas (7)
En los ltimos aos, con el advenimiento del Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida
(SIDA), nuevos protozoarios han ocupado muchas pginas de la literatura mundial, son
los llamados patgenos emergentes o reemergentes. Sin embargo, otros, siempre han
estado presentes, pero es slo ahora cuando se les reconoce como causantes de
enfermedad humana; Blastocystis hominis es uno de ellos, se trata de un
microorganismo muy complejo, confundido por mucho tiempo con artefactos o quistes
de otros protozoarios, del cual an persisten muchas controversias e incgnitas. (84)
Se conoce muy poco acerca de su transmisin y existen discrepancias respecto a su
patogenicidad. Debido a la controversia sobre su patogenicidad, no existe consenso

sobre la necesidad teraputica en la parasitacin por B. hominis, salvo en el caso de los

portadores asintomticos en el que todos coinciden en no tratar.
Respecto a estas discrepancias se plantea la manera de encontrar algn frmaco que se
pueda utilizar en parsitos de este tipo, con la informacin obtenida de las propiedades
de las tiosemicarbazonas fluoradas se indaga ms a fondo para encontrar nuevas
propiedades, ms teniendo en cuenta que diversos frmacos que existen en el mercado
actualmente estn perdiendo efectividad debido a la resistencia creada por los
microorganismos.
De acuerdo a las propiedades de las tiosemicarbazonas, se platea la siguiente pregunta:
las tiosemicarbazonas tienen actividad antiparasitaria contra Blastocystis hominis en
ensayo in vitro?

4 JUSTIFICACIN
Los microorganismos tienen una facilidad enorme de crear resistencia a frmacos, por
ello es que muchos frmacos que se encuentran en el mercado van perdiendo
efectividad, el metronidazol es un claro ejemplo, a pesar de ser el medicamento de
eleccin para diversas parasitosis.
Blastocystis hominis es un protozoo que se ha investigado desde 1894, a pesar de tener
varias dcadas de estudios, no se conoce su naturaleza, por lo tanto los investigadores
no se han preocupado por crear un tratamiento especfico.
En los ltimos aos ha ido en aumento la cantidad de Blastocystis hominis encontradas
en muestras de pacientes, por ello en la facultad de ciencias qumicas de la UABJO, se
han estado estudiando las propiedades de las tiosemicarbazonas fluoradas con este
microorganismo, en este trabajo se probara la efectividad de5-[2(trifluorometil)feniltio]2-furaldehdo

tiosemicarbazona,

tiosemicarbazona,

5-[4(trifluorometil)feniltio]-2-furaldehdo

[(2,3,5,6-tetrafluoro-4(trifluorometil]

5-[3(trifluorometil)feniltio]-2-furaldehdo

feniltio]-2-furaldehdo

tiosemicarbazona,

5-

tiosemicarbazona,

5-

[2nitro-4(trifluorometil) feniltio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona.

5 OBJETIVOS
5.1 OBJETIVOS GENERALES
Evaluar el efecto antiparasitario de 5 tiosemicarbazonas fluoradas en Blastocystis
hominis, en ensayos in vitro.

5.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Axenizar a Blastocystis hominis mediante medio de cultivo Boeck-Drbohlav de

pacientes positivos.

Evaluar

el

5-[2(trifluorometil)

[3(trifluorometil)

feniltio]-2-furaldehdo

feniltio]-2-furaldehdo

feniltio]-2-furaldehdo

tiosemicarbazona,

feniltio]-2-furaldehdo

tiosemicarbazona,

tiosemicarbazona,

tiosemicarbazona,

5-[4(trifluorometil)

5-[(2,3,5,6-tetrafluoro-4(trifluorometil]
5-[2nitro-4(trifluorometil)

feniltio]-2-

furaldehdo tiosemicarbazona con Blastocystis hominis, en ensayo in vitro.

5-

Determinar la CMI de las tiosemicarbazonas fluoradas.

6 MATERIALES Y MTODOS
6.1 METODOLOGIA
Se utilizaron dos medios de cultivo, el medio Boeck-Drbohlav modificado por Lanuza y
colaboradores en 1997 y el medio Pavlova modificado.

6.1.1 Preparacin del medio de cultivo Boeck-Drbohlav.

6.1.1.1 Fase Lquida
El medio Boeck-Drbohlav modificado (MBDM) es un medio bifsico, compuesto por
una fase slida, obtenida mediante coagulacin de una ovosuspensin preparada con
solucin de Locke, y una fase lquida que contiene suero y la citada solucin.
1. Se utiliz la solucin de Locke modificada por Lanuza et al. 1997, que contiene en su
composicin glucosa; cloruro sdico; cloruro clcico; cloruro potsico, cloruro
magnsico, Na2PO4, bicarbonato sdico; fosfato monopotsico.
2. Los diferentes componentes fueron disueltos en agua bidestilada mediante calor y
agitacin.
3. La solucin se dej en reposo 18 horas a temperatura ambiente para posteriormente
filtrar dicha solucin con papel Whatman n 1.
4. Posteriormente se esteriliz en autoclave a 121C, durante 15 minutos para ser
utilizada.

6.1.1.2 Fase slida

La fase slida es preparada mediante la coagulacin de una ovosuspensin en solucin
de Locke modificada.

1. Primeramente el contenido de huevos completos, se lavaron con agua jabonosa y

alcohol de 96 para eliminar microorganismos del exterior y evitar la contaminacin del
medio.
2. Se emulsion mediante agitacin manual con solucin de Locke hasta la obtencin de
una mezcla homognea.
3. La suspensin fue colada y dispensada en tubos de vidrio de 13x 100 mm, con tapn
de rosca, a razn de 5 ml por tubo.
4. Procediendo a la coagulacin en bao termostatizado a 80C durante 30 minutos, de
forma que qued una lengeta de 3 a 4 cm de longitud.
5. Los tubos se esterilizaron en autoclave a 121C durante 15 minutos y conservados a
4C, hasta su utilizacin.

6.1.1.3 Preparacin del medio de cultivo.

1. Se dispens la cantidad suficiente de Suero humano en un tubo de 16 x 160 para
inactivarlo a 56C durante 30 minutos.
2. Para terminar la preparacin del medio MBDM, se adicionan sobre la fase slida 4
ml de la fase lquida preparada extemporneamente mediante la mezcla (1:1, v/v) de
solucin de Locke y suero humano.

6.1.1.4 Axenizacin del medio.

Se tom una alcuota de 500 l de las suspensiones fecales en solucin salina isotnica
al 0.9 % de cloruro de sodio, en las que la observacin microscpica haba revelado la
existencia de Blastocystis hominis, posteriormente se

inocularon en dos tubos de

MBDM, previamente pre-reducidos; uno de ellos con solucin antibitica bsica.

Los cultivos se incubaron a 37C en atmosfera anaerbica, obtenidas mediante la
adicin de 1 ml de parafina lquida estril.
Una vez adaptado el parsito a las condiciones in vitro, que se constatan mediante
examen microscpico, realizando semanalmente subcultivos en medio MBDM prereducido.

6.1.2 Preparacin del medio de cultivo Pavlova

Para 2750 mL de medio de cultivo:
Se prepararon 500 mL de medio base, compuesto por 8.95 gr de Fosfato cido de
sodio12 H2O, 1.15 gr de Fosfato de potasio, 20.00 gr de Cloruro de sodio, previamente
pesados y esterilizados a 121 C por 15 minutos. Los componentes fueron disueltos en
2250 mL de agua destilada esterilizada para luego agregar 2.75 gr de almidn de arroz
estril, 4.00 gr de extracto de levadura, 290 mg de estreptomicina, 3000000 UI de
penicilina G sdica y posteriormente se agregaron37.5 mL de suero de caballo
inactivado a 56C por 30 minutos.

6.1.2.1 Siembra de la muestra

El medio de cultivo es distribuido en tubos con tapa de rosca o viales hermticamente
sellados, son mantenidos refrigerados a 4C hasta su utilizacin. Posterior a la siembra
se lleva a la estufa a 36C para el ptimo crecimiento de Blastocystis.
Paralelo al examen microscpico se tom un inoculo de la muestra previamente
axenizada, se sembr en tubos de tapa de rosca o viales, conteniendo el medio de
cultivo se tap y se llev a 36C por 48 horas.
Se prepar una solucin stock de 10 mg/ml y mediante dilucin se obtuvieron
concentraciones 1.6 g/mL, 0.8 g/mL, 0.4 g/mL, 0.2 g/mL, 0.1 g/mL y 0.05 g/mL
y

0.025

g/mL

incluyendo

al

Metronidazol

como

control

positivo,

Las

tiosemicarbazonas fluoradas fueron diluidas en Dimetilsulfxido al 2%.

Se realizaron microcultivos en el medio pavlova modificado en placas de fondo plano
de 96 pocitos con 200 L de medio sin control y con antiparasitarios en concentraciones
de 1.6g/mL-0.25 g/mL. Se colocaron cada una de las tiosemicarbazonas fluoradas en
los pocitos que contena 1x105cel/mL de

Blastocystis hominis previamente

contabilizados en cmara de Neuvauer del cultivo axenizado e incubndose a 36C por

48 horas. Se determin la CMI para verificar la inhibicin del parasito mediante la

influencia de las tiosemicarbazonas fluoradas.

7 RESULTADOS Y DISCUSIN
Posterior al cultivo de Blastocystis hominis se realizaron las pruebas con
tiosemicarbazonas, como indica la metodologa, de las que obtuvimos los siguientes
resultados:
Tabla 7: Concentracin mnima inhibitoria y porcentaje de inhibicin del compuesto 2. 5-[2(trifluorometil)feniltio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona sobre Blastocystis hominis.

Compuesto 2: 5-[2-(trifluorometil)feniltio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona

Conc. g/mL

compuesto 2

1.6

100%

0.8

100%

0.4

96%

0.2

94%

0.1

92%

0.05

64%

0.025

0%

Metronidazol
100%
100%
100%
95%
93%
80%
70%

Tabla 8: Concentracin mnima inhibitoria y porcentaje de inhibicin del compuesto 3.5-[3(trifluorometil)feniltio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona sobre Blastocystis hominis.

Compuesto 3: 5-[3-(trifluorometil)feniltio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona

F

Conc. g/mL

compuesto 3

1.6

100%

0.8

97%

0.4

94%

0.2

90%

0.1

28%

0.05

0%

0.025

0%

N
NH

H2N

Metronidazol
100%
100%
100%
95%
93%
80%
70%

Tabla 9: Concentracin mnima inhibitoria y porcentaje de inhibicin del compuesto 4. 5[4(trifluorometil)feniltio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona sobre Blastocystis hominis.

Compuesto 4: 5-[4-(trifluorometil)feniltio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona

F
F

Conc. g/mL

Comp. 4

1.6

97%

0.8

94%

0.4

92%

0.2

92%

0.1

90%

0.05

70%

N
NH

H2N

Metronidazol
100%
100%
100%
95%
93%
80%

0.025

60%

70%

Tabla 10: Concentracin mnima inhibitoria y porcentaje de inhibicin del compuesto O.5-[(2nitro-4-(trifluorometil) feniltio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona sobre Blastocystis hominis.

Compuesto O: 5-[(2-nitro-4-(trifluorometil)fenil) tio]-2-furaldehdo tiosemicarbazona.

F
F
NO 2

Conc. g/mL

Comp. O

1.6

100%

0.8

98%

0.4

96%

0.2

94%

0.1

75%

0.05

40%

0.025

0%

N
NH

H2N

Metronidazol
100%
100%
100%
95%
93%
80%
70%

Tabla 11:Concentracin mnima inhibitoria y porcentaje de inhibicin del compuesto 7. 5-[(2,3,5,6tetrafluoro-4(trifluorometil) feniltio]-2 furaldehdo tiosemicarbazona sobre Blastocystis hominis.

Compuesto 7: 5-[(2,3,5,6- tetrafluoro-4(trifluorometil]fenil)tio]-2 furaldehdo tiosemicarbazona.

F

F
F
F

S
F
O

Conc.
g/mL

Comp. 7

1.6

99%

0.8

98%

0.4

93%

0.2

70%

0.1

70%

0.05

50%

0.025

30%

Metronidazol
100%
100%
100%

NH
H2N

95%
93%
80%
70%

Tabla 12: Concentracin mnima inhibitoria y porcentaje de inhibicin de las 5 tiosemicarbazonas

fluoradas sobre Blastocystis hominis.

CONC. g/mL
1.6
0.8
0.4
0.2
0.1
0.05
0.025

Comp. 2
100%
100%
96%
94%
92%
64%
0%

Comp. 3
100%
97%
94%
90%
28%
0%
0%

Comp. 4
97%
94%
92%
92%
90%
70%
60%

Comp. O
100%
98%
96%
94%
75%
40%
0%

Comp. 7
99%
98%
93%
70%
70%
50%
30%

Metronidazol
100%
100%
100%
95%
93%
80%
70%

Las muestras con DMSO al 2%, SSI y el parasito en medio de cultivo solo, muestran un crecimiento
ptimo.

7.1 Discusin de resultados

De las 5 tiosemicarbazonas en estudio, se observa que el compuesto 4 a una
concentracin de 0.025 nos da un 60 % de inhibicin contra Blastocystis hominis,
teniendo una diferencia de 10% con el frmaco que se utiliz como control, ambos a
una misma concentracin. Tambin se observa que el compuesto O tiene un
comportamiento similar al compuesto 2, lo que indica que la posicin de los
sustituyentes en la molcula tiene que ver con la forma de actuar del compuesto.
En el caso de las tiosemicarbazonas en estudio, utilizamos un rango de 1.6 g/mL a
0.025 g/mL, esto debido a que pruebas anteriores nos indicaron que una
concentracin mayor a 1.6 g/mL presentaba un 100% de inhibicin en todos
compuestos y una concentracin menor a 0.025 g/mL no mostraba efecto
antiparasitario contra Blastocystis hominis, lo que nos indica que una concentracin
mayor a 1.6 g/ml de tiosemicarbazonas fluoradas puede causar ser toxicidad tanto
al microorganismo como al agente hospedador y una concentracin menor a 0.025
g/mL no producira ningn efecto.

8 CONCLUSIONES
A lo largo de la presente investigacin logr demostrarse que las tiosemicarbazonas en
evaluacin tienen efecto antiparasitario en cierto grado. En el compuesto 4 la
concentracin mnima inhibitoria fue de 0.025 g/mL con un 60% de inhibicin, el
compuesto 7 mostr una concentracin mnima inhibitoria de 0.025 g/mL con un 30 %
de inhibicin, siendo estos dos compuestos los de mayor efecto antiparasitario,
continuando con el compuesto 2, con una concentracin mnima inhibitoria de 0.05
g/mL y un 64% de inhibicin, el siguiente compuesto fue el O con concentracin
mnima inhibitoria de 0.05 g/mL y 40% de inhibicin y por ltimo el compuesto 3, con
una concentracin mnima inhibitoria de 0.1 g/mL y un porcentaje de inhibicin de
28%. Todos estos comparados con el metronidazol, que tiene una concentracin mnima
inhibitoria de 0.025 g/mL y un porcentaje de inhibicin de 70%.

9 GLOSARIO DE TRMINOS
ADN Polimerasa: Es la principal enzima de la replicacin.
Angioedema: Es una hinchazn, similar a la urticaria, pero que se presenta bajo la piel
en lugar de darse en la superficie.
Apicomplexa: Es un extenso grupo de protistas caracterizado por la presencia de
un orgnulo nico denominado complejo apical. Son unicelulares, forman esporas y
exclusivamente parsitos de
animales.
Las
estructuras
mviles
tales
como flagelos o pseudpodos estn ausentes excepto en ciertas etapas de los gametos.
Artefacto: El trmino artefacto, es utilizado en la ciencia, medicina y procesamiento de
datos, para indicar cualquier distorsin percibida y/o cualquier otro error
de datos causado por un instrumento de la observacin o medicin, el cual puede
provocar una mala interpretacin o resultados errneos.
Artralgias: Significa literalmente dolor de articulaciones: es un sntoma de lesin,
infeccin, enfermedades como las reumticas o reaccin alrgica a medicamentos.
Azometna: Es un grupo funcional que contiene un enlace doble carbono-nitrgeno con
el tomo de nitrgeno conectado a un grupo arilo o alquilo, pero sin hidrgeno.
Biparticin: Es una forma de reproduccin asexual que se lleva a cabo en
arqueobacterias, bacterias, levaduras de fisin, algas unicelulares y protozoos. Consiste
en la divisin del ADN, seguidas de la divisin del citoplasma (citocinesis), dando lugar
a dos clulas hijas.
Catlisis cida: Es el proceso por el cual una reaccin qumica es catalizada (aumento
de la velocidad de una reaccin qumica) debido a la participacin de un cido.
Carcinoma: Tumor maligno que se forma a partir del tejido epitelial de los rganos.
Citotoxicidad celular: Consiste en la capacidad para interaccionar con otras clulas y
destruirlas.

Cistena: Es un aminocido no esencial que puede ser fabricado a partir de la

metionina, siempre que haya suficiente. Acta conjuntamente con otro aminocido
llamado cistina, creado mediante dos cistenas.
Cistena proteasas: La familia de las cistena proteasas engloba a todas aquellas
proteasas que presentan un residuo de cistena en su centro cataltico.
Cultivo axnico: Un cultivo axnico consiste en una sola especie microbiana,
proveniente de una sola clula.
Deshidrogenasas: Son las enzimas responsables del inicio de las reacciones de
oxidacin biolgicas, en las que se transfieren tomos de hidrgeno.
Distensin abdominal: La hinchazn abdominal con frecuencia es provocada por
comer en exceso ms que por una enfermedad grave.
Endodiogenia: Mediante un proceso de brote interno, se forman dos clulas hijas
completas que al crecer, ocupan todo el citoplasma de la clula madre, la cual termina
por desaparecer.
Eosinoflia: Es la presencia de una cantidad anormalmente alta de eosinfilos en
la sangre.
Esporozoarios: Comprenden un grupo grande de protozoarios que no poseen organelas
de locomocin. Se les da el nombre de esporozoarios por que la mayora de ellos
producen esporas durante su ciclo de vida.
Esquizogonia: Tipo de reproduccin asexual que se observa en el ciclo de la
generacin alternante de los esporozoos y que consiste en la divisin del ncleo celular
en gran nmero de ncleos secundarios que se rodean de protoplasma.
Esteatorrea: Cantidades de grasa anormalmente elevadas en heces.
Filogenia: Es la historia del desarrollo evolutivo de un grupo de organismos.
Hemopatas: Proviene de las palabras griegas "hemo" (sangre) y "pata" (enfermedad)
y designa las enfermedades de la sangre y de sus compuestos (glbulos rojos, glbulos
blancos y plaquetas).
Hepatoesplenomegalia: Es el crecimiento anormal del hgado y el bazo.
Hidrazonas: Compuesto orgnico que se obtienen por reacciones de aldehdos o
cetonas con hidracinas.
Incertae sedis: Se usa en taxonoma para sealar la incapacidad para ubicar
exactamente un taxn (por ejemplo una especie o gnero) dentro de la clasificacin.
Invaginacin: Es la formacin del repliegue de una membrana, capa de tejido u hoja
blastodrmica que se dirige hacia el interior de una pared intestinal.
Kinasas: Son un grupo de enzimas que catalizan el intercambio de grupos fosfato entre
compuestos fosforilados ricos en energa y otros sustratos.
Laxitud: Defecto de tensin y de resistencia en las fibras musculares, conjuntivas o
elsticas.

Nuclefilo: Son molculas cargadas negativamente o molculas neutras que tienen

pares de electrones no compartidos y pueden cederlos a tomos deficientes de
electrones.
Osmosis: Es un fenmeno fsico relacionado con el movimiento de un solvente a travs
de una membrana semipermeable. Tal comportamiento supone una difusin simplea
travs de la membrana, sin gasto de energa. La smosis del agua es un fenmeno
biolgico importante para el metabolismo celular de los seres vivos.
Plasmotoma: Consiste en la separacin fsica del citoplasma en dos clulas hijas
durante la divisin celular.
Protonacin: En qumica es la adicin de un protn a un tomo, molcula o de iones
que forma el cido conjugado.
Prurito: Es un hormigueo o irritacin de la piel que provoca el deseo de rascarse en el
rea afectada. El prurito o picazn puede ocurrir en todo el cuerpo o solamente en un
lugar.
Pseudopodos: Un pseudpodo (del griego , pseuds, falso y , pos,
pie) es una prolongacin del citoplasma de algunos organismos unicelulares como
las amebas, en la cual una serie de protenas van a fluir en un sentido mediante las fibras
de miosina. Esto servir al organismo para desplazarse o alimentarse.
Rinitis: Es un trastorno que afecta a la mucosa nasal y que produce estornudos, picor,
obstruccin, secreciones nasales y en ocasiones falta de olfato.
Sarcomastigophora: Los sarcomastigforos son un grupo que se caracteriza por un
anillo de cromatina nuclear alrededor de una regin central libre de cromatina, y que son
mviles gracias a la existencia de flagelos (orgnulos persistentes para la locomocin),
en nmero variado, seudpodos (orgnulos temporales para el movimiento, mediante
expansiones transitorias de diferente grosor del citoplasma celular) o ambos tipos de
rganos locomotores.
Tautomera: Es un tipo especial de isomeras en la que existe transposicin de un
tomo entre las dos estructuras.
Topoisomerasas: Son las enzimas encargadas de mantener la estructura terciaria del
ADN durante todo el ciclo vital, siendo las encargadas del enrollamiento y
desenrollamiento de las hebras del ADN durante la sntesis, replicacin y condensacin,
etc.
Tenesmo: Es la sensacin de que usted necesita defecar, aunque los intestinos ya estn
vacos. Esto puede estar acompaado de dolor, clicos y esfuerzo para defecar.
Urticaria: La urticaria es una enfermedad de la piel caracterizada por lesiones
cutneas edematosas, de contornos delimitados y con un halo eritematoso, generalmente
evanescentes y cambiantes.

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