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FACULTAD DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE FARMACIA
Manual de Prcticas
de Laboratorio de Farmacognosia
Isabel Rivero Cruz Rogelio Pereda Miranda Mario Alberto Figueroa Saldvar Abraham Madariaga Mazn
Mara Isabel Aguilar Laurents Mabel Fragoso Serrano Rachel Mata Essayag
Primera edicin 2014 D.R. Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Ciudad Universitaria, Delegacin Coyoacn, C.P. 04510, Mxico, Distrito Federal.
La publicacin de esta obra fue posible gracias al apoyo de la Coordinacin de Comunicacin,
a travs de los Departamentos de Editorial y de Informacin (Taller de Imprenta).
Diseo de portada: LDCV Vianey Islas Bastida. Diseo de interiores: Maricela Hernndez Casasola.
Responsable editorial: CME Brenda lvarez Carreo.
Hecho en Mxico. Prohibida la reproduccin total o parcial por cualquier medio, sin la
autorizacin escrita del titular de los derechos patrimoniales.
ISBN: 978-607-02-5508-3
DEPARTAMENTO DE FARMACIA
FACULTAD DE QUMICA, UNAM
Autores:
Isabel Rivero Cruz
Rogelio Pereda Miranda
Mario Alberto Figueroa Saldvar
Abraham Madariaga Mazn
Mara Isabel Aguilar Laurents
Mabel Fragoso Serrano
Rachel Mata Essayag
ndice
Introduccin........................................................................................................................................9
Prctica 1. Obtencin de la pinocembrina a partir de Dysphania graveolens....................................... 10
Prctica 2. Separacin del alcaloide piperina a partir de Piper nigrum................................................ 16
Prctica 3. Aislamiento de la diligustlida a partir de la raz de Ligusticum porteri................................ 22
Prctica 4. Camellia sinensis: obtencin de la cafena del t negro, pruebas de identidad
y composicin del t verde.............................................................................................. 28
Prctica 5. Control de calidad (pruebas de identidad y de composicin) de las hojas de
Psidium guajava....................................................................................................................... 38
Prctica 6. Mtodos para identificar a los compuestos marcadores de la droga
cruda y preparados de Cassia senna...................................................................................... 44
Prctica 7. Pruebas de identidad de Amphiptherygium adstringens........................................................... 52
Prctica 8. Obtencin del crudo alcaloideo a partir de la especie Datura stramonium......................... 58
Prctica 9. Preparacin de los aceites esenciales de Eugenia caryophyllus, Ligusticum porteri,
Lippia graveolens, Poliomintha longiflora y Thymus vulgaris......................................................... 64
Prctica 10. Obtencin de la hesperidina a partir del pericarpio de Citrus sinensis............................ 70
Prctica 11. Mezcla de esteroles de Glycine max.................................................................................... 74
Prctica 12. Obtencin de la cerina a partir de Quercus suber.............................................................. 80
Introduccin
Los autores
1.3Antecedentes
La especie Dysphania graveolens (Willd.) Mosyakin & Clemants (Amaranthaceae) es una planta erguida y
glandulosa, que mide aproximadamente entre 20 y 80 cm de altura. Sus tallos son ramificados, rojizos
y con rayas. Sus hojas son ovadas u oblongas, miden entre dos y seis cm de largo por uno a tres cm de ancho,
poseen lbulos oblongos o deltoides, sin pelos o con una cubierta pegajosa en el haz, cubiertas de glndulas amarillas en el envs y con peciolo delgado. Sus flores son pediceladas con numerosas cimas axilares y
muy aromticas. Esta especie se conoce popularmente como epazote de zorrillo y se encuentra ampliamente
distribuida en el continente americano, desde el Sur de los Estados Unidos hasta Argentina. En Mxico,
se localiza en el Norte del pas en los estados de Chihuahua y Coahuila, pasando por la zona centro
(Hidalgo, Estado de Mxico, Morelos y Distrito Federal) hasta el Sur (Chiapas).
La planta se utiliza en las prcticas mdicas populares de Mxico y otras regiones del mundo, por sus propiedades
antihelmnticas, estomquicas y carminativas. Uno de los constituyentes activos del epazote de zorrillo es la pinocembrina, flavanona con actividad fasciolicida, antiprotozoaria y antihelmntica (Camacho et al., 1991).
Figura 1. Dysphania graveolens (Willd.) Mosyakin & Clemants (Amaranthaceae) y estructura de la pinocembrina.
Prctica 1
00
11
12
Nm. de fraccin
Mezcla de elucin
Volumen (mL)
HexCHCl3 (9:1)
120
HexCHCl3 (8:2)
120
HexCHCl3 (7:3)
120
HexCHCl3 (6:4)
120
HexCHCl3 (1:1)
120
HexCHCl3 (4:6)
120
Prctica 100
Prctica 100
13
Figura 2. Cromatograma en capa delgada de la pinocembrina aislada a partir del epazote de zorrillo:
a) referencia de pinocembrina, b) coelucin y c) pinocembrina aislada.
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento de la pinocembrina con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo a la siguiente expresin matemtica: (A 100)/B, en donde: A representa el peso (g) de la pinocembrina
y B es el peso (g) del material vegetal seco.
1.5.2 Analice los resultados del cromatograma obtenido en el inciso 1.4.4. Calcule el factor de retencin
(Rf) de la pinocembrina (muestra de referencia y muestra aislada) en el cromatofolio.
1.6Bibliografa
- Camacho, M.R.; Snchez, B.; Quiroz, H.; Contreras, J.L.; Mata, R. J. Ethnopharmacol. 1991, 31, 383389.
Sesin 1
Material
1
matraz bola de 500 mL
1
refrigerante recto con mangueras
1
embudo Bchner
1
matraz kitasato de 500 mL
1
esptula cromo-nquel
1
varilla de vidrio
1
probeta graduada de 500 mL
Reactivos
parrilla de calentamiento
perlas de ebullicin
rotaevaporador
material vegetal (epazote de zorrillo)
hexano (C6H14)
acetona (CH3COCH3)
14
Prctica 100
Sesin 2
Material
3
vasos de precipitados de 250 mL
1
esptula cromo-nquel
1
varilla vidrio
1
probeta graduada de 100 mL
1
probeta graduada de 10 mL
1
columna cromatogrfica
2
pinzas de tres dedos con nuez
2
matraces bola de 250 mL
2
pipetas Pasteur con bulbo
1
vidrio de reloj
1
embudo de filtracin rpida
6
matraces Erlenmeyer de 250 mL
cmara de elucin
bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
balanza granataria
rotaevaporador
capilares
algodn
pliego de papel filtro
parrilla de calentamiento
placas cromatogrficas de
aluminio de 20 20 cm
Reactivos
cloroformo (CHCl3)
hexano (C6H14)
acetona (CH3COCH3)
sulfato crico amoniacal (NH4)4Ce(SO4)4 2H2O
gel de slice
Sesin 3
Material
1
esptula cromo-nquel
2
matraces bola de 250 mL
2
pipetas Pasteur con bulbo
2
vasos de precipitados de 150 mL
1
embudo de filtracin rpida
1
probeta graduada de 10 mL
pliego de papel filtro
bomba de aspersin
rotaevaporador
aspersor
cmara de elucin de 20 20 cm
balanza granataria
lmpara de luz UV
algodn
placas cromatogrficas de
vidrio de 20 20 cm
placas cromatogrficas de
aluminio de 20 20 cm
Reactivos
hexano (C6H14)
metanol anhidro (MeOH)
etanol absoluto (CH3CH2OH)
cloruro de metileno (CH2Cl2)
cloroformo (CHCl3)
sulfato crico amoniacal (NH4)4Ce(SO4)4 2H2O
Prctica 100
15
1.3Antecedentes
La pimienta, Piper nigrum L. (Piperaceae, Figura 1), es una planta perenne que emigr de la India hace
ms de 4000 aos. En la era clsica griega y durante el Imperio Romano se utiliz para pagar tributos y
como materia de contrabando. Desde tiempos inmemoriales, los frutos maduros y secos de la especie son
altamente apreciados como condimento, quizs la forma ms difundida de consumo de esta planta.
El fruto de la pimienta contiene un aceite esencial (12.5%) constituido por ms de 273 componentes,
incluyendo al -pineno, al linalol, a la damascenona, el eugenol, al m-cresol, el guayacol, el escatol, el
piperonal, el -cariofileno, el 3-careno, el -felandreno, el -copaeno, el -elemeno, el -humuleno, el
-bisaboleno y el limoneno, principalmente. Otros constituyentes presentes pertenecen a la categora de
los esteroides, los lignanos, los flavonoides, algunos cidos orgnicos, compuestos fenlicos de tipo C6C3 y
ms de 100 alcaloides, que en su mayora son derivados de tipo amida de la piperidina. La pimienta debe
su olor caracterstico al aceite esencial y su sabor picante a los alcaloides. El principal alcaloide de la planta
es la piperina, una amida generada a partir de la condensacin de la piperidina y el cido piprico. Este
alcaloide posee propiedades depresoras del sistema nervioso central, antiinflamatorias y hepatoprotectoras;
tambin se ha utilizado para incrementar la biodisponibilidad de medicamentos, ya que facilita la absorcin intestinal.
La pimienta negra tambin se valora por sus propiedades medicinales. Son muchas las investigaciones
cientficas que han demostrado la eficacia de sus frutos y algunos de sus constituyentes como agentes bactericidas, fungicidas, insecticidas, rubefacientes, antialrgicos y estornutatorios.
2
Prctica 00
17
18
Prctica 00
2
Procedimiento: (1) Se aplica sobre la superficie de la placa, a un cm de distancia del extremo inferior del
cromatofolio, la muestra y la referencia en forma de puntos con la ayuda de un capilar, en carriles independientes. (2) Se realiza el proceso de elucin cromatogrfica con la fase mvil indicada. Al trmino, se seca
la cromatoplaca bajo una corriente de aire y se examina bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se
marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la solucin reveladora hasta
cubrir la cromatoplaca sin sobresaturarla para permitir la aparicin de color. Las bandas correspondientes
a la muestra y a la referencia deben de coincidir en su posicin (Rf) y coloracin.
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento de la piperina con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo a
la siguiente expresin matemtica: (A 100)/B, en donde: A es el peso (g) de la piperina y B es el peso (g)
del material vegetal seco.
1.5.2 Analice los resultados del cromatograma obtenido en el inciso 1.4.3. Calcule los correspondientes
factores de retencin (Rf) de la muestra y de la referencia.
1.5.3 Elabore un diagrama de flujo que esquematice el proceso experimental de obtencin de la piperina.
1.6Bibliografa
Evans, W. Trease and Evans Pharmacognosy. Edit. W.B. Saunders. 15ta Edicin, Londres, Inglaterra, 2009,
pp 353355.
Ikan, R. Natural Products: A Laboratory Guide. Edit. Academic Press, 2da Edicin, San Diego, California,
1991, pp 233236.
Scott, I.; Puniani, E.; Jensen, H.; Livesey, J.; Poveda, L.; Snchez, P.; Durst, T.; Arnason, J. J. Agric. Food
Chem. 2005, 53, 19071913.
Srinivasan, K. Crit. Rev. Food Sci. 2007, 47, 735748.
Wei, K.; Wei, L.; Koike, K.; Chen, Y.; Nikaido, T.; Nigramides, A. J. Org. Chem. 2005, 70, 11641176.
Prctica 00
2
19
Sesin 1
Material
1
rotaevaporador
1
extractor Soxhlet
1
esptula cromo-nquel
1
embudo Bchner
2
vasos de precipitados de 100 mL
1
pipeta graduada de 10 mL
1
probeta graduada de 10 mL
2
pipetas Pasteur con bulbo
1
vidrio de reloj
1
vaso de precipitados de 250 mL
Reactivos
etanol absoluto (EtOH)
metanol anhidro (MeOH)
hidrxido de potasio (KOH)
papel aluminio
algodn
papel filtro
frascos viales
propipeta
material vegetal (pimienta negra)
Sesin 2
Material
1
esptula cromo-nquel
1
embudo Bchner
1
propipeta
1
probeta graduada de 10 mL
1
pipeta Pasteur con bulbo
1
vidrio de reloj
2
vasos de precipitados de 250 mL
Reactivos
acetato de etilo (AcOEt)
benceno (C6H6)
hexano (C6H14)
cloroformo (CHCl3)
acetona (CH3COCH3)
reactivo de Dragendorff
20
Prctica 200
1.3Antecedentes
La especie medicinal, Ligusticum porteri Coulter & Rose (Apiaceae) (Figura 1), se conoce popularmente con
los nombres de chuchupate, osha, raz de anglica, raz del cochino, yerba del cochino, entre otros. Los tarahumaras la
designan como wasia. Los preparados de esta planta (infusin, decoccin o esencia) se emplean para aliviar
dolores de estmago y para tratar la tos, insomnio, resfriados, diarrea y otros desrdenes gastrointestinales.
Tambin se ha reportado su uso como agente antisptico, carminativo, antidiabtico y como antdoto contra la picadura de alacrn. La planta se puede utilizar en combinacin con otras plantas medicinales como
Croton niveus, Angelica archangelica, Juliana adstringens y Brickellia cavanillesii, por mencionar algunas.
Esta especie presenta tallos firmes, caulescentes y ramificados que miden entre 50 y 100 cm de altura. Sus
races son fibrosas, axonomrficas, perennes y presentan pocas races de tipo adventicio desde la corona.
Las hojas son ovadas, pecioladas y trenado-pinnadas, miden entre 15 y 28 cm de largo y entre 12 y 20 cm
de ancho, con lbulos obtusos o agudos y dentados. Sus inflorescencias en forma de sombrilla son blancas.
Sus frutos son esquizocrpicos y oblongos, entre 5 y 8 mm de largo y entre 2 y 4 mm de ancho. Sus semillas
son aplanadas dorsalmente en la seccin transversal y acanaladas bajo los tubos.
Desde el punto de vista qumico, la especie L. porteri ha sido objeto de numerosas investigaciones que han
permitido el aislamiento y la caracterizacin de diversos metabolitos secundarios que incluyen: ftlidas,
terpenoides, compuestos de tipo fenlico y cumarinas (Delgado et al., 1988, 1992; Ros et al., 1992; Zschoke
et al., 1998; Hou et al., 2004; Cgiela-Carlioz et al., 2005).
Las ftlidas, Z-ligustlida y diligustlida han sido caracterizadas como los principios mayoritarios con propiedades neuroprotectoras, relajantes de la musculatura lisa, antibacterianas, hipoglucemiantes y antispticas
del extracto ntegro de la planta.
Prctica 00
3
23
Figura 1. Ligusticum porteri Coulter & Rose (Apiaceae) y estructuras de la Z-ligustlida y la diligustlida.
Prctica 300
Mezcla de elucin
Volumen (mL)
HexCH2Cl2 (9:1)
120
HexCH2Cl2 (8:2)
120
HexCH2Cl2 (7:3)
120
HexCH2Cl2 (6:4)
120
HexCH2Cl2 (1:1)
120
HexCH2Cl2 (4:6)
120
Prctica 300
25
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento de la diligustlida con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo
a la siguiente expresin matemtica: (A 100)/B, en donde: A es el peso (g) de la diligustlida y B es el peso
(g) del material vegetal seco.
1.5.2 Analice los resultados de los cromatogramas obtenidos. Calcule los correspondientes factores de
retencin (Rf) de las muestras y de las referencias utilizadas.
1.5.3 Compare las constantes fsicas y cromatogrficas generadas experimentalmente con las descritas
previamente en la literatura especializada.
1.6Bibliografa
Cgiela-Carlioz, P.; Bessiere, J.M.; David, B.; Mariotte, A.M.; Gibbons, S.; Dijoux-Franca, M.G. J.
Flavour Fragr. 2005, 20, 671-675.
Martnez, M. Las plantas medicinales de Mxico. Edit. Botas, 6ta Edicin, Mxico, 1989.
Delgado, G.; Reza-Garduo, R.G.; Toscano, R.A.; Bye, R.; Linares, E. Heterocycles, 1988, 27,
1305-1312.
Delgado, G.; Reza-Garduo, R.G.; Ros, M.Y.; Del Ro, F. Planta Med. 1992, 58, 570-571.
Hou, Y.Z.; Zhao, G.R.; Yang, J.; Yuan, Y.J.; Zhu, G.G.; Hiltunen, R. Life Sci. 2004, 75, 17751786.
Zschoke, S.; Liu, J.H.; Stuppner, H.; Bauer, R. Phytochem. Anal. 1998, 9, 283290.
Sesin 1
Material
1 matraz Erlenmeyer de 1000 mL
1 varilla de vidrio
material vegetal (raz de chuchupate)
Reactivos
metanol anhidro (MeOH)
1
1
esptula cromo-nquel
probeta graduada de 1000 mL
26
Prctica 300
Sesin 2
Material
3
vasos de precipitados de 250 mL
cmara de elucin
1
esptula cromo-nquel
bomba de aspersin
1
varilla de vidrio
aspersor
1
probeta graduada de 100 mL
lmpara de luz UV
1
probeta graduada de 10 mL
balanza granataria
1
columna cromatogrfica
rotaevaporador
2
pinzas de tres dedos con nuez
capilares
2
matraces bola de 250 mL
algodn
2
pipetas Pasteur con bulbo
pliego de papel filtro
1
vidrio de reloj
parrilla de calentamiento
1
embudo de filtracin rpida
placas cromatogrficas de
aluminio de 20 20 cm
6
matraces Erlenmeyer de 250 mL
Reactivos
cloruro de metileno (CH2Cl2)
hexano (C6H14)
sulfato crico amoniacal (NH4)4Ce(SO4)4 2H2O
gel de slice
Prctica 300
27
4.
5.
Aplicar la tcnica de decoccin para la obtencin del extracto acuoso del t negro.
Separar y purificar a la cafena presente en el extracto acuoso, mediante la combinacin de
mtodos qumicos y procesos de reparto.
Establecer la identidad de la cafena presente en la muestra analizada mediante la reaccin
de la murxida y por comparacin de sus propiedades fsicas y cromatogrficas con aquellas
de una muestra autntica.
Obtener una mezcla de flavan-3-oles a partir de la infusin del t verde, mediante un proceso
de reparto.
Establecer la identidad de los derivados de flavan-3-oles presentes en las muestras analizadas,
mediante la comparacin de sus propiedades cromatogrficas con aquellas de una muestra
autntica y la determinacin del contenido de derivados de catequinas utilizando el mtodo
de Folin-Ciocalteu.
1.3Antecedentes
El t, Camellia sinensis (L.) Kuntze (Theaceae), es un arbusto originario de las regiones tropicales y subtropicales
de Asia. La especie es un rbol de hoja perenne y elptica, con flores blancas y frutos capsulares con tres semillas negras (Figura 1). En estado silvestre el rbol puede alcanzar hasta 10 m de altura, aunque las plantas
cultivadas se podan constantemente para limitar su altura a 1.5 m del suelo, circunstancia que favorece la
formacin de hojas ms grandes y as se facilita su cosecha. Existen cuatro tipos principales de t (blanco,
verde, rojo y negro) que dan origen a ms de 3000 variedades en todo el mundo. El t verde est constituido
por las hojas jvenes desecadas de la especie C. sinensis. Los constituyentes activos en hojas son las metilxantinas [cafena, teofilina y teobromina], los derivados de catequinas [(-)-epi-galocatequina, (+)-catequina,
(-)-epi-catequina, (-)-galato de epi-galocatequina y (-)-galato de epi-catequina]; los flavonoles (apigenina y
3-vincenina) y la amida teanina (Figura 2).
Se ha demostrado que el t verde contiene una gran cantidad de compuestos antioxidantes (flavan-3-oles),
que ayudan a disminuir los efectos de los radicales libres. En consecuencia, el t es un agente que ayuda a
prevenir enfermedades que involucran el estrs oxidativo y reduce los efectos propios del envejecimiento.
Prctica 00
4
29
Figura 2. Estructuras de los principales metabolitos presentes en las hojas de Camellia sinensis.
30
4
Prctica 00
Prctica 00
4
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Prctica 00
4
y se examina bajo una lmpara de luz UV a 254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de
fluorescencia. (3) Enseguida, se roca la solucin reveladora sobre la cromatoplaca y se calienta hasta la
aparicin de manchas coloridas. Las bandas correspondientes a las muestras, a la referencia y a la coelucin desarrollan una coloracin roja intensa y deben de coincidir en su posicin (Rf).
4
Prctica 00
33
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados en los distintos anlisis cromatogrficos realizados a lo largo del procedimiento
experimental. Calcule los correspondientes factores de retencin (Rf) de los constituyentes mayoritarios
presentes en las muestras analizadas.
1.5.2 Elabore un diagrama de flujo que sintetice el proceso de obtencin de la cafena y de los derivados de
catequina a partir del t negro y del t verde, respectivamente. En particular, analice el uso del carbonato
de sodio durante el proceso de extraccin de la cafena.
1.5.3 Indique, mediante reacciones qumicas, el fundamento de la prueba de identidad de la murxida.
1.5.4 Explique el fundamento del ensayo de Folin-Ciocalteu utilizado para la realizacin de la prueba de
composicin del t verde.
1.5.5 Determine y analice el contenido de fenoles totales presentes en las muestras analizadas. Exprese los
resultados en equivalentes de cido glico por microgramo de muestra.
1.6Bibliografa
British Pharmacopoeia. Her Majestys Stationery Office, London, 2002, pp 2441-2443.
Bruneton, J. Farmacognosia, Fitoqumica, Plantas Medicinales. Edit. Acribia, 2da Edicin, Zaragoza, 2001,
pp 422-425.
Cheng, Z.; Moore, J.; Yu, L. J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 7429-7436.
Heinrich, M.; Barnes, J.; Gibbons, S.; Williamson, E. Fundamentals of Pharmacognosy and Phytotherapy,
2nd Edition. Churchill Livingstone, Londres, 2012, pp 340.
Kozuca, H.; Koyama, M.; Okitsu, T. Chem. Pharm. Bull. 1982, 20, 941-945.
Sharangi, A.B. Food Res. Int. 2009, 42, 529-535.
WHO, Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials. World Health Organization, Gneva, 1999,
pp 250-258.
34
4
Prctica 00
Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
3 pipetas graduadas de 1 mL
1 matraz bola de 250 mL
2 vasos de precipitados de 250 mL
1 probeta graduada de 100 mL
1 esptula cromo-nquel
1 propipeta
2 embudos de filtracin rpida
material vegetal (t negro)
Reactivos
cloruro de metileno (CH2Cl2)
1 cpsula de porcelana
1 embudo de separacin de 500 mL
balanza granataria
bomba de aspersin
lmpara de luz UV
papel filtro
placas cromatogrficas de
aluminio de 20 20 cm
parrilla de calentamiento
Sesin 2
Material
1 rotaevaporador
3 pipetas graduadas de 5 mL
3 pipetas graduadas de 1 mL
1 matraz bola de 100 mL
2 vasos de precipitados de 250 mL
1 probeta graduada de 100 mL
1 esptula cromo-nquel
1 propipeta
2 embudos de filtracin rpida
1 matraz Erlenmeyer de 250 mL
1 embudo de separacin de 500 mL
4
Prctica 00
35
Reactivos
acetato de etilo (AcOEt)
etanol absoluto (CH3CH2OH)
metanol anhidro (MeOH)
tolueno (C6H5CH3)
acetona (CH3COCH3)
carbonato de sodio (Na2CO3)
cido sulfrico (H2SO4)
cido frmico (HCOOH)
reactivo de Folin-Ciocalteu
cido glico (C6H2(OH)3)COOH
vanillina (C8H8O3)
36
Prctica 00
4
1.3Antecedentes
El guayabo, Psidium guajava L. (Myrtaceae), es un rbol o arbusto pequeo que mide entre 4 y 10 m de
altura, con extensas ramas, su corteza es caf, lisa y delgada. Las hojas perennes son duras, ms anchas
en su punta que en el centro, con envs velloso y de nervadura realzada. Las flores son solitarias, blancas o
cremosas y olorosas, con numerosos estambres. Sus frutos son globosos de aroma caracterstico con
numerosas semillas y pulpa amarilla o rosada (Figura 1; Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional
Mexicana, 2009).
Psidium guajava se encuentra ampliamente distribuida en Centro y Sudamrica, Europa, frica y Asia.
Crece en reas tropicales y subtropicales, y se adapta a diferentes condiciones climticas, pero prefiere los
climas secos. Sus usos medicinales para el tratamiento de la diarrea, enfermedades infecciosas de la piel y
de la cavidad bucal, paludismo, tos, cncer, enfermedades antiinflamatorias, diabetes, hipertensin, dolor
y fiebre, entre otros, se encuentran bien documentados (Prez-Gutirrez et al., 2008).
Las hojas del guayabo contienen un aceite esencial rico en mono- y sesquiterpenos [-pineno, -pineno,
limoneno, mentol, acetato de terpenilo, alcohol isoproplico, -cariofileno, -bisaboleno, cineol, xido de
cariofileno, -copaneno, farneseno, humuleno, curcumeno y nerolidol]. Tambin se ha demostrado que las
hojas contienen compuestos de tipo flavonoides, saponinas, esteroles, cidos triterpnicos, taninos, fenilpropanoides y otros compuestos aromticos simples de tipo C6-C1, por mencionar a los ms importantes. Los
flavonoides activos y mayoritarios presentes en la planta son la miricetina, la quercetina, el 3--galactsido
de quercetina, la luteolina, la luecocianidina, la guaijaverina y el campferol (Figura 2).
En Mxico, las hojas del guayabo se comercializan para el tratamiento de la colitis y otros padecimientos
estomacales. El producto ms conocido elaborado con hojas del guayabo, comercializado bajo la forma de
cpsulas, es el QG-5, un extracto acuoso estandarizado que contiene 1 mg de quercetina por cada 500 mg
de extracto seco, cuya eficacia ha sido comprobada cientficamente (Astudillo et al., 2009).
5
Prctica 00
39
Figura 2. Estructuras de los principales flavonoides presentes en las hojas del guayabo.
40
Prctica 500
Figura 3. Cromatograma en capa delgada del extracto orgnico obtenido a partir de las hojas
del guayabo: a) extracto de MeOH de la droga cruda, b) extracto de MeOH del preparado
fitofarmacutico, c) referencia de avicularina, d) referencia de quercetina.
Prctica 00
5
41
Figura 4. Curva de calibracin para la cuantificacin de fenoles totales presentes en las hojas del guayabo.
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados en los distintos anlisis cromatogrficos realizados a lo largo del procedimiento
experimental. Calcule los correspondientes factores de retencin (Rf) de los constituyentes mayoritarios
presentes en las muestras analizadas. Compare los valores observados para las muestras de referencia e
indicar si los preparados comerciales analizados contienen en su formulacin hojas de guayabo como ingrediente activo.
1.5.2 Explique el fundamento del ensayo de Folin-Ciocalteu utilizado para la realizacin de la prueba de
composicin de las hojas del guayabo.
1.5.3 Determine y analice el contenido de fenoles totales presentes en las muestras analizadas. Exprese los
resultados en equivalentes de cido glico por microgramo de extracto orgnico analizado.
42
Prctica 00
5
1.6Bibliografa
Astudillo, A.; Mata, R.; Navarrete, A. Rev. Latinoam. Quim. 2009, 37, 7-43.
Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional Mexicana (2009), disponible en
http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx.
Cheng, Z.; Moore, J.; Yu, L. J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 7429-7436.
Prez-Gutirrez, R.; Mitchell, S.; Vargas, B. J. Ethnopharmacol. 2008, 117, 127.
Sesin 1
Material
1
extractor Soxhlet
3
pipetas graduadas de 5 mL
3
pipetas graduadas de 1 mL
1
matraz bola de 100 mL
1
matraz bola de 500 mL
2
vasos de precipitados de 250 mL
1
probeta graduada de 100 mL
1
esptula cromo-nquel
1
propipeta
1
embudo de filtracin rpida
1
rotaevaporador
Reactivos
cloruro de metileno (CH2Cl2)
tubos de ensayo
balanza granataria
bomba de aspersin
lmpara de luz UV
papel filtro
placas cromatogrficas de
aluminio de 20 20 cm
parrilla de calentamiento
celdas para espectrofotmetro
material vegetal (hojas de guayabo)
Prctica 00
5
43
Aplicar la tcnica de reflujo para la obtencin de los extractos acuosos a partir de las hojas
de sen y preparados herbolarios.
2. Establecer la identidad qumica de las antraquinonas presentes en los extractos de sen
mediante la prueba de Bortrnger y por cromatografa en capa delgada.
3. Cuantificar a los sensidos presentes en la droga cruda utilizando un mtodo espectrofotocolorimtrico.
1.3Antecedentes
El sen, Cassia senna L. (sinnimo Cassia angustifolia) (Leguminosae) (Figura 1), es un arbusto originario de
las regiones tropicales de frica y la India. Sus hojas estn compuestas por cuatro u ocho pares de foliolos
oblongos o lanceolados con fuerte nervadura en el envs verde amarillento. Sus flores son amarillas reunidas en racimos terminales largamente peciolados. Sus frutos son vainas o legumbres, oblongas, planas y
membranosas, marrn griscea que miden aproximadamente 1.5 cm de ancho por un centmetro de largo.
Las hojas de sen contienen alrededor del 2 al 5% de derivados de antraquinonas; siendo los componentes
ms importantes los sensidos A-D (Figura 1). Estos productos, o los extractos estandarizados de las hojas,
se utilizan en la teraputica como agentes laxantes y purgantes.
Prctica 600
45
Figura 1. Cassia senna L. (Leguminosae) y estructuras de los compuestos marcadores presentes en las hojas de sen.
46
6
Prctica 00
47
La solucin acuosa tratada se filtra y se trasfieren 10 mL de sta a un matraz bola de 100 mL y se tratan
con 20 mL de FeCl3 calentando a reflujo durante 20 min. Al cabo de este tratamiento, se enfra la solucin,
se adiciona 1 mL de HCl 1 N y se calienta durante otros 20 min agitando suavemente para evitar la formacin de un precipitado. La solucin as tratada se enfra y se somete a un proceso de reparto con ter etlico
(3 30 mL). Las fases orgnicas combinadas, finalmente se lavan con agua (3 60 mL) y se trasfieren a un
matraz volumtrico de 100 mL y se afora a este volumen. Las capas etreas se combinan y se lavan con dos
porciones de agua (2 60 mL). Se transfieren 10 mL de la solucin etrea a una cpsula de porcelana y se
evaporan a sequedad. El residuo obtenido se suspende en 10 mL de Mg(CH3COO)2 (5 mg/mL en metanol) y
enseguida se determina la absorbancia a una longitud de onda de 515 nm, utilizando metanol como blanco.
El contenido de los derivados de hidroxiantraceno, expresados como sensido B, se calcula mediante la
siguiente expresin matemtica: 1.25 A/m en donde: A es la absorbancia a 515 nm y m la masa en gramos
del material examinado.
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados obtenidos en los distintos cromatogramas. Calcule los correspondientes factores de retencin (Rf) de los constituyentes mayoritarios presentes en las muestras analizadas. Compare
los valores observados para las muestras de referencia e indicar si los preparados comerciales analizados
contienen en su formulacin hojas de sen como ingrediente activo.
1.5.2 Determine el contenido de sensidos en las muestras analizadas.
1.6Bibliografa
Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos (FHEUM). 2da Edicin. Secretara de Salud, Comisin Permanente de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 2013.
WHO, Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials. World Health Organization Gneva, 1999,
pp 250-258.
British Pharmacopoeia. London, Her Majestys Stationery Office, 2002, pp 2441-2443.
Heinrich, M.; Barnes, J.; Gibbons, S.; Williamson, E. Fundamentals of Pharmacognosy and Phytotherapy,
2nd Edition. Churchill Livingstone, Londres, 2012, pp 340.
Shao-Wen, S.; Hsiu-Ting, S. J. Pharm. Biomed. Anal. 2002, 29, 881-894.
48
Prctica 00
6
Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
3 pipetas graduadas de 5 mL
3 pipetas graduadas de 10 mL
2 matraces bola de 100 mL
2 matraces bola de 500 mL
2 refrigerantes rectos con mangueras
2 vasos de precipitados de 250 mL
1 probeta graduada de 100 mL
1 esptula cromo-nquel
2 embudos de filtracin rpida
1 embudo de separacin de 250 mL
Reactivos
hexano (C6H14)
Prctica 00
6
49
Sesin 2
Material
3
pipetas graduadas de 5 mL
pipetas graduadas de 10 mL
preparados fitofarmacuticos
embudos de separacin de 50 mL
tubos de ensayo
balanza granataria
bomba de aspersin
lmpara de luz UV
papel filtro
esptula cromo-nquel
propipeta
placas cromatogrficas de
aluminio de 20 20 cm
parrilla de calentamiento
perlas de ebullicin
cpsula de porcelana
Reactivos
cloroformo (CHCl3)
metanol anhidro (MeOH)
ter etlico (CH3CH2)2O
cido clorhdrico (HCl)
bicarbonato de sodio (NaHCO3)
cloruro frrico (FeCl3)
acetato de magnesio Mg(CH3COO)2
50
Prctica 600
1.3Antecedentes
El cuachalalate, Amphiptherygium adstringens Schiede ex Schlech. (Julianaceae), es un rbol de aproximadamente
seis metros de altura; su corteza es gris marrn. Sus hojas estn compuestas por cinco hojuelas ssiles, aserradas, con dientecillos redondeados, abovedadas, verde opaco en el anverso y verde grisceo en el reverso. Sus
frutos son nueces alongadas, abultadas, aladas de 2.5 a 5 cm de largo y verde plido (Figura 1). La especie es
originaria de la selva baja caducifolia de los estados de Michoacn, Guerrero, Puebla y Oaxaca y es utilizado
ampliamente en las prcticas mdicas populares de Mxico y otras regiones del mundo, como desintoxicante
sanguneo por sus propiedades astringentes. La infusin de la corteza se utiliza como enjuague bucal para el
tratamiento de lceras bucales, dolor de muelas y estomatitis, y junto con el rnica y otras hierbas, es utilizada
para curar la inflamacin del estmago, gastritis crnica y lcera gstrica. Finalmente, es bien conocido el uso
de la corteza como agente antiinflamatorio, cicatrizante, analgsico e hipoglucemiante.
La corteza de cuachalalate est constituida principalmente por triterpenoides de tipo tirucalano; los ms
abundantes son el cido masticadiennico y el cido 3-hidroxi masticadiennico. Estudios farmacolgicos realizados in vivo han permitido establecer la actividad hipocolesterolemiante, antitumoral, inhibitoria
de las secreciones gstricas y antiinflamatoria del extracto de la planta y sus productos mayoritarios (Navarrete et al., 1998; Olivera et al., 1999).
Prctica 700
53
Prctica 700
de manchas coloridas. Las bandas correspondientes a las muestras y referencias deben de coincidir en su
posicin (Rf) y coloracin.
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados del cromatograma obtenido a lo largo del procedimiento experimental. Calcule los factores de retencin (Rf) de los cidos masticadiennico y 3-hidroxi masticadiennico. Compare
los valores observados para las muestras de referencia e indicar si los preparados comerciales analizados
contienen en su formulacin corteza de cuachalalate como ingrediente activo.
1.6Bibliografa
Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos (FHEUM). 2da Edicin, Secretara de Salud, Comisin
Permanente de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 2013.
Argueta, A. Atlas de las Plantas de la Medicina Tradicional Mexicana I. 1ra Edicin, Instituto Nacional Indigenista, Mxico D.F., 1994, pp 542543.
Navarrete, A.; Martnez, U.; Reyes, B. Phytother. Res. 1998, 12, 14.
Olivera, G.; Soto, M.; Martnez, M. J. Ethnopharmacol. 1999, 68, 109113.
Prctica 700
55
Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
2 matraces bola de 500 mL
2 refrigerantes rectos con mangueras
1 parrilla de calentamiento
2 anillos metlicos
4 pinzas de tres dedos con nuez
1 probeta graduada de 100 mL
2 vasos de precipitados de 250 mL
1 vidrio de reloj
3 pipetas Pasteur con bulbo
1 esptula cromo-nquel
Reactivos
cloroformo (CHCl3)
hexano (C6H14)
metanol anhidro (MeOH)
sulfato crico amoniacal
(NH4)4Ce(SO4)4 2H2O
56
Prctica 00
7
Aplicar la tcnica de maceracin alcalina para elaborar un extracto orgnico de las partes
areas (frutos, semillas, hojas y tallos) del toloache.
2. Obtener el crudo de alcaloides a partir del extracto orgnico del toloache mediante la
aplicacin de un proceso de reparto cido-base.
3. Establecer la identidad de los componentes mayoritarios presentes en el crudo de alcaloides
(atropina y escopolamina) mediante la prueba de Vitali Morin y por la comparacin de sus
propiedades cromatogrficas con aquellas de muestras autnticas.
1.3Antecedentes
El toloache, Datura stramonium L. (Solanaceae), es una especie vegetal de origen americano que se ha utilizado con un sinfn de propsitos desde antes de la llegada de los espaoles al nuevo mundo. D. stramonium es
una planta herbcea de 50 cm a 1 m de altura; presenta un tallo verde-morado y de olor fuerte; las hojas
son alargadas y con bordes divididos; las flores son solitarias y nacen en la horqueta del tronco, su color
oscila del blanco al azuloso. El fruto de forma esfrica est cubierto de prolongaciones espinosas (Figura 1).
El toloache contiene del 0.2 al 0.45% de alcaloides; siendo la hiosciamina y la escopolamina los componentes mayoritarios. Ambos alcaloides son de tipo tropnico y se biosintetizan a partir del aminocido
ornitina, la ruta de los polictidos y la del cido siqumico. La escopolamina es un agente anticolinrgico
y es el alcaloide ms utilizado en la teraputica por sus propiedades narcticas, antiespasmdicas y en la
prevencin de ataques de asma.
Aunque el toloache posee propiedades narcticas y txicas, se le da un importante uso medicinal en gran
parte del pas donde se emplea para calmar diversos problemas como dolores musculares, de cabeza, de
cintura, de espalda y de muelas. Tambin se usa para tratar padecimientos reumticos, erisipela y comezn, paperas, resfriado, gota, almorranas, para lavar heridas, y como agente antihelmntico y tranquilizante para conciliar el sueo. Tambin, se emplea en curas psicolgicas como sustos y enamoramientos.
59
cpsula de porcelana utilizando una parrilla de calentamiento. Al residuo obtenido se le adicionan 0.5 mL
de HNO3 fumante y se evapora a sequedad en una parrilla de calentamiento. Posteriormente, se adicionan
10 mL de acetona y, gota a gota, una solucin en etanol de KOH (3%, p/v). El desarrollo de una coloracin
violeta es indicativo de una prueba positiva para la identificacin de alcaloides tipo atropina.
escopolamina
atropina
Figura 1. Datura stramonium L. (Solanaceae) y estructuras de los principales alcaloides presentes en el toloache.
Prctica 00
8
254 y 365 nm. Se marcan en el cromatograma las zonas de fluorescencia. (3) Enseguida, se roca con la solucin reveladora la cromatoplaca hasta la aparicin de color. Las bandas correspondientes a las muestras
y referencias deben de coincidir en su posicin (Rf) y coloracin.
1.5Resultados
1.5.1 Indique mediante una serie de reacciones qumicas el fundamento de la prueba de Vitali Morin,
prueba farmacopica ampliamente utilizada como ensayo de identidad de las drogas crudas utilizadas para
la obtencin de atropina y de escopolamina.
1.5.2 Analice el resultado del cromatograma obtenido. Calcule los correspondientes factores de retencin
(Rf) de los alcaloides mayoritarios presentes en el toloache y de las referencias utilizadas.
1.5.3 Elabore un diagrama de flujo que esquematice el proceso de obtencin del crudo de alcaloides a
partir del toloache. Analice el fundamento del mtodo de fraccionamiento utilizado.
1.5.4 Indique el fundamento de la reactividad de los alcaloides frente al reactivo de Dragendorff.
1.6 Bibliografa
Evans, W. Trease and Evans. Pharmacognosy. Edit. W.B. Saunders, 15ta Edicin, Londres, 2002.
Martnez, M. Las plantas medicinales de Mxico. Edit. Botas, 6ta Edicin, Mxico, 1989.
Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos (FHEUM). 2da Edicin, Secretara de Salud,
Comisin Permanente de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 2013.
Prctica 8
00
61
Sesin 1
Material
1 matraz Erlenmeyer de 1000 mL
1 esptula cromo-nquel
1 varilla de vidrio
1 probeta graduada de 1000 mL
material vegetal (toloache)
Reactivos
cloruro de metileno (CH2Cl2)
hidrxido de potasio (KOH)
Sesin 2
Material
1 rotaevaporador
1 cpsula de porcelana
1 esptula cromo-nquel
1 pipeta graduada de 10 mL
1 pipeta graduada de 5 mL
1 propipeta
1 probeta graduada de 50 mL
1 embudo de filtracin rpida
1 embudo de extraccin de 1000 mL
3 vasos de precipitado de 250 mL
1 vidrio de reloj
Reactivos
cloruro de metileno (CH2Cl2)
cloroformo (CHCl3)
ter etlico (C4H10O)
etanol absoluto (CH3CH2OH)
metanol anhidro (CH3OH)
acetona (CH3COCH3)
sulfato de sodio anhidro (Na2SO4)
hidrxido de amonio (NH4OH)
hidrxido de potasio (KOH)
cido clorhdrico (HCl)
cido sulfrico (H2SO4)
acido ntrico (HNO3)
reactivo de Dragendorff
62
Prctica 00
8
Obtener el aceite esencial de las especies Eugenia caryophyllus, Ligusticum porteri, Lippia graveolens,
Poliomintha longiflora y/o Thymus vulgaris mediante una hidrodestilacin simple.
Determinar la presencia del principio activo mayoritario en cada una de las esencias mediante
una cromatografa en capa delgada.
1.3Antecedentes
La especie, Eugenia caryophyllus (Sprengel) Bullock & Harr. (sinnimo: Syzygium aromaticum; Figura 1) es un
rbol aromtico de hasta 15 m de altura que pertenece a la familia de las mirtceas y se cultiva principalmente en Indonesia, Madagascar, Tanzania, Sri Lanka, Malasia y la Isla de Granada. El clavo posee
un aroma fuerte y agradable, con sabor acre y picante. Sus hojas son parecidas al laurel y sus flores son
amarillas formadas por cinco ptalos. La esencia de la planta contiene un aceite esencial rico en eugenol
(80%), el cual es el constituyente mayoritario, es utilizada en la teraputica como agente antisptico local y
como analgsico suave y adicionalmente se emplea con frecuencia para aliviar el dolor de muelas. Otros
componentes importantes presentes son el acetileugenol y el -cariofileno.
El clavo es una especie muy apreciada con fines medicinales y se utiliza principalmente en Mxico y en
otras partes del mundo, como agente carminativo y estimulante digestivo para aliviar sntomas como el
vmito, las flatulencias y las nuseas. Debido a sus propiedades digestivas, el clavo es una de las especias
ms utilizadas en la culinaria, principalmente en la elaboracin de postres.
En Mxico, un nmero importante de hierbas aromticas se designan con el nombre comn de organos;
estas plantas pertenecen a varios gneros de las familias Lamiaceae (Calamintha, Hedeoma, Hyptis, Mesosphaerum,
Monarda, Origanum, Plectranthus y Poliomintha) y Verbenaceae (Lantana y Lippia), as como algunas especies de las
familias Asteraceae (Brickellia) y Fabaceae (Dalea). De todas stas, las ms importantes desde el punto de vista
comercial son las especies de Origanum vulgare, O. majorana, Poliomintha longiflora y Lippia graveolens.
P. longiflora y L. graveolens son los organos mexicanos mas importantes por su frecuencia de uso; la primera
especie arbustiva, es pequea de hasta 1 m de altura, bisexual y perenne que habita en climas ridos o
semisecos. Sus hojas son ovaladas o rmbicas, miden entre 6 y 9 mm de largo por 45 mm de ancho, con
base atenuada, aguda en el pice, verde oscuro, pecolos delgados de hasta 1 mm, de venacin inconspicua.
Las flores solitarias miden 3 mm de largo y entre uno y cuatro mm de ancho y son rosadas con cliz amrficos, con pedicelos delgados de 3 mm de largo, con tallos ramosos, glabrosos y tomentosos (Figura 1).
P. longiflora es el organo ms comercializado en el norte de Mxico (Alans Flores et al., 2008). L. graveolens,
Prctica 00
9
65
especie dominante del complejo organo, es un arbusto delgado restringido a zonas ridas del CentroNorte de Mxico. Los usos medicinales y en la culinaria de esta especie datan desde el siglo XVIII.
Las hojas y las inflorescencias de la planta se utilizan como condimento para la elaboracin de una gran
variedad de platillos mexicanos; se exportan alrededor del mundo como saborizantes de pizzas y salchichas. Las aplicaciones medicinales ms comunes de L. graveolens incluyen el tratamiento de enfermedades
de las vas respiratorias y digestivas (Rivero-Cruz et al., 2011).
Desde el punto de vista farmacolgico, las especies P. longiflora y L. graveolens han sido estudiadas para establecer su potencial antibacteriano, antinociceptivo, espasmoltico y antidiabtico (Rivero-Cruz et al., 2011).
El carvacrol y el timol son los principios activos mayoritarios en P. longiflora y L. graveolens, respectivamente
(Figura 1). Otros compuestos de inters identificados en ambas especies son el -terpineno, el limoneno,
el p-cimeno, el eucaliptol, el -terpineno y el acetato de carvacrilo.
Thymus vulgaris (Lamiaceae) es un arbusto perenne, aromtico, de aproximadamente 30 cm de alto y con
tallos rgidos. Sus hojas son estrechas y lanceoladas. Las flores tienen corolas bilabiadas con coloraciones
distintas, del blanco hasta prpura; se agrupan en espiguillas o racimos terminales densos (Figura 1). Esta
especie es originaria de la cuenca mediterrnea occidental y se encuentra en forma silvestre en las laderas
secas y soleadas de las montaas del Continente Euroasitico, desde el norte de China hasta la pennsula
arbiga, alcanzando zonas de frica oriental como Etiopa. Tambin, se cultiva exitosamente en el Continente Americano.
Al igual que otras especies de la familia Lamiaceae, el tomillo se utiliza ampliamente en las prcticas mdicas populares de Mxico y otras regiones del mundo para aliviar la tos, trastornos digestivos (e. g. la flatulencia y las digestiones pesadas) y la inapetencia. Es un remedio eficaz contra la diarrea leve, el mal aliento
y los parsitos intestinales. Por va externa, esta planta es un buen desinfectante. Debido a sus propiedades
aromticas, el tomillo es una de las hierbas ms utilizadas como condimento en la culinaria.
El aceite esencial del tomillo (1.5-2.5%) es rico en compuestos aromticos y terpenoides. Los constituyentes
principales son el timol y el carvacrol. Los antecedentes correspondientes a la especie L. porteri se proporcionan en el protocolo experimental correspondiente a la Prctica 3.
66
Prctica 00
9
Prctica 00
9
67
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento del aceite esencial con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo
a la siguiente expresin matemtica: (A 100)/B en donde: A representa el peso (g) de la esencia y B es el
peso (g) del material vegetal seco.
1.5.2 Analice los resultados del cromatograma obtenido. Calcule los correspondientes factores de retencin (Rf) de los componentes mayoritarios presentes en las esencias analizadas y de las referencias utilizadas.
1.6Bibliografa
Alans Flores, G.; Alans Fuentes, I.; Caldern Vargas, E. Los organos de Nuevo Len, Mxico. Planta, 2008, 6,
1617.
Heinrich, M.; Barnes, J.; Gibbons, S.; Williamson, E. Fundamentals of Pharmacognosy and Phytotherapy,
2nd Edition. Churchill Livingstone, Londres, 2012, pp 340.
Caigueral, S.; Vila, R.; Wichtl, M. Plantas Medicinales y Drogas Vegetales para infusin y tisana. Un manual
de base cientfica para Farmacuticos y Mdicos. OEMF Internacional, Miln, 1998, pp 133-135, 521-524.
Rivero-Cruz, I.; Duarte, G.; Navarrete, A.; Bye, R.; Linares, E.; Mata, R. J. Food Sci. 2011, 76,
309317 y referencias all citadas.
68
Prctica 9
00
1 vidrio de reloj
3 pipetas Pasteur con bulbo
3 pinzas de tres dedos con nuez
placas cromatogrficas de
aluminio de 20 20 cm
bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
algodn
papel aluminio
capilares
agitador
piedras de ebullicin
material vegetal (clavo, tomillo, organo)
Reactivos
hexano (C6H14)
cloruro de metileno (CH2Cl2)
sulfato de sodio anhidro (Na2SO4)
sulfato crico amoniacal (NH4)4Ce(SO4)4 2H2O
Prctica 00
9
69
1.3Antecedentes
El naranjo dulce, Citrus sinensis (L.) Osbeck. (Rutaceae), es un rbol pequeo que mide aproximadamente hasta
cinco metros de altura. Sus hojas son perennes, elpticas alargadas, con el borde entero y el pecolo claramente
alado en la parte superior. Sus flores son perfumadas, blancas, con simetra radiada, compuestas por cinco ptalos punteados (cavidades secretoras con esencia) y numerosos estambres, cuyos filamentos estn soldados en la
base formando anchos haces. Sus frutos son una baya plurilocular, llamado hesperidio (Figura 1).
El naranjo dulce es ampliamente cultivado en Europa Meridional y en zonas de clima subtropical. La decoccin
de las hojas de la especie es utilizada ampliamente en las prcticas mdicas populares de Mxico y otras regiones
del mundo, como tnico para la prdida del apetito y como agente tranquilizante, antiespasmdico y febrfugo.
El pericarpio del naranjo dulce contiene un aceite esencial (0.2-0.5%) constituido principalmente por el
antranilato de metilo. Tambin est constituido por flavonoides de tipo flavanona, siendo la hesperidina
el principio activo y componente mayoritario. Estudios farmacolgicos han permitido establecer el potencial
antibacteriano y su uso en el tratamiento de la fragilidad capilar de la hesperidina presente en la especie.
Prctica 10
00
71
72
Prctica 10
00
1.5Resultados
1.5.1 Analice los resultados obtenidos en el anlisis cromatogrfico realizado a lo largo del procedimiento
experimental. Calcule el factor de retencin (Rf) de la hesperidina (muestra de referencia y muestra aislada)
en el cromatograma.
1.5.2 Elabore un diagrama de flujo que sintetice el proceso de obtencin de la hesperidina.
1.6Bibliografa
Martnez, M. Las plantas medicinales de Mxico. Edit. Botas, 6ta Edicin, Mxico, 1989.
Ikan, R. Natural Products: A Laboratory Guide. Edit. Academic Press. 2da Edicin, San Diego, California,
1991, pp 912.
Caigueral, S.; Vila, R.; Wichtl, M. Plantas Medicinales y Drogas Vegetales para infusin y tisana. Un manual de
base cientfica para Farmacuticos y Mdicos. OEMF Internacional, Miln, 1998, pp 9192.
Heinrich, M.; Barnes, J.; Gibbons, S.; Williamson, E. Fundamentals of Pharmacognosy and Phytotherapy,
2nd Edition. Churchill Livingstone, Londres, 2012, pp 340.
Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
1 matraz bola de 1 L
1 refrigerante recto con mangueras
1 parrilla de calentamiento
2 anillos metlicos
2 pinzas de tres dedos con nuez
1 vidrio de reloj
2 pipetas Pasteur con bulbo
1 probeta graduada de 100 mL
Reactivos
hexano (C6H14)
cloruro de metileno (CH2Cl2)
metanol anhidro (MeOH)
hidrxido de sodio (NaOH)
cido actico (CH3COOH)
Prctica 10
00
73
Obtener el crudo de esteroles a partir del aceite de soya mediante un reflujo en condiciones
bsicas.
2. Establecer la presencia de esteroides en el crudo mediante la prueba de LiebermannBurchard.
3. Identificar a los esteroides mayoritarios a partir de un crudo de esteroles bajo la forma de
derivados acetilados mediante tcnicas cromatogrficas.
1.3Antecedentes
La soya es una planta perenne que pertenece a la familia de las leguminosas, es de origen asitico y cuenta
con ms de 300 variedades cultivadas principalmente en pases como China, India, Estados Unidos y Mxico. Sus tallos son ramificados y pubescentes, las hojas son alternas y compuestas por tres folios. Las flores
son blancas, amarillas o violceas dependiendo de la variedad (Figura 1).
Las semillas contienen alrededor del 15 al 22% de aceites y del 0.2 al 0.5% de esteroles. Los aceites poseen
una gran importancia en la industria alimenticia debido a su elevado valor nutricional. En la industria
cosmtica se utilizan ampliamente en la elaboracin de glicerina, pinturas, jabn y lubricantes. Los esteroles presentes, en forma libre (40%) y en forma de glucsidos o steres de cidos grasos, se emplean como
materia prima en la semisntesis de esteroides con aplicacin teraputica, siendo los mayoritarios el estigmasterol, el -sitosterol y el campesterol.
El aceite de soya se utiliza popularmente en Mxico y otras partes del mundo, principalmente como agente
hipocolesterolemiante, para aliviar los sntomas de la arteriosclerosis y prevenir algunas enfermedades del
corazn, la hiperplasia prosttica y el desarrollo de las neoplasias de mama, endometrio y colon, entre otras.
Prctica 00
11
75
Figura 1. Glycine max L. (Leguminosae) y estructuras de los principales esteroles presentes en el aceite de soya.
1.4.2Ensayo de identidad
1.4.2.1 Reaccin de Liebermann-Burchard
Se mezcla 1 mL de anhdrido actico y 1 mL de cloroformo. Esta solucin se enfra a 0C y se adiciona
una gota de cido sulfrico concentrado. Posteriormente, se adicionan 5 mg del crudo de esteroles (inciso
1.4.1) y se agita suavemente. El desarrollo de una coloracin azul o verde, al cabo de 30 min, es indicativo
de una prueba positiva para la identificacin de esteroles.
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11
Prctica 00
1.4.2.2Reaccin de acetilacin
Se pesan 50 mg del crudo de esteroles (inciso 1.4.1) en un matraz bola de 250 mL y se adicionan 1 mL
de anhdrido actico y 1 mL de piridina. La mezcla de reaccin se somete a un proceso de reflujo por 1 h.
Al trmino de la reaccin, la mezcla obtenida se reconstituye en 15 mL de agua y se somete a un proceso
de reparto con 15 mL de AcOEt (3 15 mL). Posteriormente, la solucin orgnica resultante se lava consecutivamente con HCl 1 N (3 45 mL), con una solucin de NaHCO3 (10%, p/v) (3 45 mL) y finalmente
con agua destilada. Al trmino de este proceso, los restos de humedad en la fase orgnica se eliminan mediante un tratamiento con Na2SO4 anhidro y la solucin resultante se concentra a presin reducida hasta
sequedad.
1.5Resultados
1.5.1 Elabore un diagrama de flujo que sintetice el proceso de obtencin del crudo de esteroles a partir del
aceite de soya. Analizar el uso del KOH en etanol al inicio del proceso de extraccin.
1.5.2 Analice los resultados del cromatograma obtenido en el inciso 1.4.3. Calcule el factor de retencin
(Rf) del estigmasterol y del b-sitosterol en el cromatofolio.
1.5.3 Explique brevemente mediante reacciones qumicas el fundamento de la prueba de LiebermannBurchard, reaccin ampliamente utilizada como ensayo de identidad de las drogas crudas que contienen
esteroles.
Prctica 00
11
77
1.6Bibliografa
Bruneton, J. Farmacognosia, Fitoqumica, Plantas Medicinales. Edit. Acribia. 2a Edicin, Zaragoza, Espaa,
2001, pp 679680.
Ikan, R. Natural Products: A Laboratory Guide. Edit. Academic Press. 2a Edicin, San Diego, California,
1991, pp 136139.
Piironen, V.; Lindsay, D.G.; Miettinen, T.A.; Toivo, J.; Lampi, A.M. J Sci. Food Agric. 2000, 80,
939966.
Sesin 1
Material
1 rotaevaporador
1 matraz bola de 250 mL
1 refrigerante recto con mangueras
1 embudo de separacin de 1000 mL
2 matraces Erlenmeyer de 125 mL
1 agitador magntico
1 pinza de tres dedos con nuez
1 anillo metlico
1 embudo Bchner
Reactivos
acetato de etilo (AcOEt)
etanol (CH3CH2OH)
ter de petrleo
sulfato de sodio anhidro (Na2SO4)
hidrxido de potasio (KOH)
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1
1
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Prctica 00
Sesin 2
Material
1 matraz bola de 50 mL
1 refrigerante recto con mangueras
2 matraces Erlenmeyer de 125 mL
1 pinza de tres dedos con nuez
2 tubos de ensayo
1 embudo de filtracin rpida
1 esptula cromo-nquel
1 propipeta
1 pipeta graduada de 10 mL
1 pipeta graduada de 5 mL
1 parrilla de agitacin y calentamiento
1 embudo de separacin de 1000 mL
1 rotaevaporador
Reactivos
placas cromatogrficas de
aluminio de 20 20 cm
parrilla de calentamiento
bomba de aspersin
aspersor
lmpara de luz UV
papel filtro
papel aluminio
algodn
capilares
equipo de medicin de punto de fusin
11
Prctica 00
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1.3Antecedentes
Quercus suber L. (Fagaceae) es un rbol mediano, de hoja perenne, nativo de Europa y del norte de frica
que vive entre 150 y 250 aos. Sus hojas miden de 4 a 7 cm de longitud, pueden ser lobuladas o aserradas,
verde oscuro en el haz y ms claras por el envs. Su fruto es una bellota de 2 a 3 cm de longitud. Tiene una
corteza gruesa y rugosa de la que se obtiene el corcho. La recoleccin del corcho no daa en absoluto al
rbol, ya que puede volver a producir una nueva capa, haciendo el recurso totalmente renovable. El rbol
se cultiva ampliamente en Espaa, Portugal, Argelia, Marruecos, Francia, Italia y Tnez. La industria europea del corcho produce 340,000 toneladas al ao, por un valor de 2.5 millones de euros.
El desarrollo del corcho parece ser fruto de la evolucin de la especie para la proteccin contra el fuego,
frecuente en climas de veranos muy secos. Una parte importante de la industria de corcho reside en Espaa, en donde se obtiene alrededor del 30% de la produccin mundial.
El corcho es altamente apreciado por su corteza suberificada, la cual se utiliza en la industria de tapones,
artculos de pesca, aislantes sonoros y trmicos; la industria del calzado, etc. La corteza es rica en taninos y
goza de mucho prestigio para curtir cueros. El corcho es un material muy complejo formado por suberina
(45%), polifenoles como la lignina y taninos (33%), celulosa (12%), ceras (5%) y otros compuestos de tipo
triterpenoide como la cerina y la friedelina con propiedades antimicrobianas importantes.
HO
O
cerina
Figura 1. Quercus suber L. (Fagaceae) y estructura de la cerina presente en el corcho.
Prctica 12
00
81
1.5Resultados
1.5.1 Determine el rendimiento de la cerina con base en el peso seco del material vegetal de acuerdo a la
siguiente expresin matemtica: (A 100)/B en donde: A representa el peso (g) de la cerina y B es el peso
(g) del material vegetal seco.
1.5.2 Analice los resultados del cromatograma obtenido en el inciso 1.4.3. Calcule el factor de retencin
(Rf) de la cerina (muestra de referencia y muestra aislada) en el cromatofolio.
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Prctica 12
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1.6Bibliografa
Ikan, R. Natural Products: A Laboratory Guide. Edit. Academic Press. 2da Edicin, San Diego, California,
1991, pp 217220.
Castola, V.; Bighelli, A.; Rezzi, S.; Melloni, G.; Gladiali, S.; Desjobert, J.M.; Casanova, J. Ind. Crops Prod.
2002, 15, 1522.
Ghosh, P.; Mandal, A.; Chakrabortya, M.; Saha, A. J. Chem. Pharm. Res. 2010, 2, 714721.
Coquet, C.; Ferr, E.; Peyronel, D.; Dal Farra, C.; Farnet. A.M. C. R. Biologies, 2008, 331, 853858.
Sesin 1
Material
1
rotaevaporador
1
extractor Soxhlet
1
esptula cromo-nquel
1
embudo Bchner
2
vasos de precipitados de 100 mL
1
pipeta graduada de 10 mL
1
probeta graduada de 10 mL
2
pipetas Pasteur con bulbo
1
vidrio de reloj
1
vaso de precipitado de 250 mL
Reactivos
hexano (C6H14)
cloroformo (CHCl3)
metanol anhidro (MeOH)
acetato de etilo (AcOEt)
cloruro de metileno (CH2Cl2)
cido sulfrico (H2SO4)
anisaldehdo (C8H8O2)
Prctica 12
00
papel aluminio
algodn
papel filtro
frascos viales
propipeta
material vegetal (corcho)
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