UNIVERSIDAD RICARDO PALMA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

CORDADOS
1. TITULO :
Efecto antimicrobiano de la tnica de Ciona instestinalis Ascidia en
la baha de Samanco-Chimbote, Per.
2. INVESTIGADOR RESPONSABLE:
Nombre y Apellidos: PEDRO HUAMN MAITA
3. CO-INVESTIGADOR/ LABORADORES

Nombre y Apellidos: CHUMACERO LIVIAS, MILAGROS

Telfono celular: 969611132

Correo-e: milagroschumacero1@gmail.com

Nombre y Apellidos: POLANCO CALDERON, JOSE

Telfono celular: 989694050

Correo-e: joseluis.pc@hotmail.com

Nombre y Apellidos: YNILUPU MATTOS, LESLY

Telfono celular: 994088027

Correo-e: leslynilupu@gmail.com

Nombre y apellidos: YSLA GARCIA, EDWARD

Telfono celular: 981062885

Correo-e: marvinisla13@hotmail.com

4.

UNIDAD ACADMICA DONDE SE DESARROLLARA EL

PROYECTO

Facultad de Ciencias Biolgicas Laboratorio de Microbiologa

5. TIPO Y DISCIPLINAS DE BASE:

Marcar tipo

Indicar Disciplina(s) de base

Bsica

Aplicada

(Microbiologa, Cordados)

6. DURACIN
Periodo 7 de Mayo del 2012 al 19 de Junio del 2012

7. MONTO DE GASTOS
Requerimientos de la URP

S/.508.80

8. FUNDAMENTACIN
Todos los animales necesitan protegerse contra los debilitantes
efectos microbianos si quieren sobrevivir y colonizar su habitad.
Sabemos que los invertebrados carecen de anticuerpos especficos y
respuesta inmunitaria, entonces estos animales usan una variedad de
actividades como la produccin de ciertos compuestos, fluidos
corporales, entre otros. La eficiente proteccin antibacteriana es
especialmente importante para aquellos animales que carecen de un
exoesqueleto duro en donde se depende de un ptimo
funcionamiento de circulacin de los fluidos a travs de los tejidos
para su posterior alimentacin. Muchos estudios de inmunidad
antibacteriana se han realizado para los invertebrados pero estos
tienden a centrarse solamente en grupos importantes tales como los
insectos, moluscos y crustceos.
Por lo que menos atencin se le ha dado a otros grupos, como el
Ascidaceae, los cuales son ssiles, cuerpo suave, filtradores de
partculas y ampliamente distribuidos por todo el ambiente marino.
As, los urocordados son particularmente un grupo significativo de
investigacin ya que estos animales llevan una cercana relacin
filogentica con los vertebrados. La actividad antimicrobiana de las
ascidias solitarias ha sido notado por pocos trabajos, en algunos
casos, llegando a prestar
potencial atencin farmacolgica, sin
embargo, la precisa ubicacin
y la naturaleza de los factores
responsables han sido pocos estudiados y mucho menos es conocido
la relacin de los agentes antimicrobianos a otros aspectos de
defensa celular.

CARACTERISTICAS
La
Ciona
intestinalis
es
una especie de urocordado de
la clase Ascidiacea, parientes lejanos de los vertebrados. Alcanza
entre 2 a 10cm de longitud. Su cuerpo es alargado, cilndrico y
retrctil, de textura gelatinosa, fijado al sustrato por la base o por el
lado izquierdo. El sifn inhalante terminal, con 8 lbulos, y el
exhalante ms corto, justo debajo del inhalante. Manto transparente,
con tonos verdosos o amarillentos.
Desde la poca de Darwin, las ascidias se han reconocido
posiblemente como el ms cercano de los invertebrados en relacin
con los seres humanos. Su genoma completo ha sido secuenciado,
comparte el 80% de sus genes con los seres humanos. Durante el
siglo 21 se ha convertido en un importante modelo experimental para
los desarrollos biolgicos.
El cuerpo de la Ciona es en forma de bolsa y est cubierto por una
tnica, que es una secrecin de las clulas epidrmicas. El cuerpo
est unido a una base permanente situada en la parte posterior, y la
parte anterior tiene dos aberturas, el sifn oral y el atrial. El agua se
introduce en la ascidia a travs del sifn oral y sale del sifn atrial.
Ecologa
Ciona intestinalis es considerado como una especie invasora y crece
sobre cualquier sustrato flotante o sumergido, sobre todo en las
estructuras artificiales como los pilotes, la acuicultura, boyas y cascos
de barcos, en la parte intermareal inferior a las zonas sub-mareales.
Importancia como un organismo modelo
Estos tunicados tienen algunos de los genomas bilaterales ms
pequeos: el contenido haploide es slo aproximadamente 0,196 pg
de ADN.
Muchas caractersticas de la Ciona es un modelo muy manejable: La
Ciona tiene slo 2.500 clulas en el ltimo estado larval; el destino
celular se determina muy temprano en la embriognesis en
comparacin con las de otros animales, y los genes de desarrollo han
alterado las funciones de forma equivalente en la morfognesis del
embrin.
Existen sorprendentes paralelismos entre el tunicado, Ciona
intestinalis y el nemtodo, Caenorhabditis elegans, en trminos de
reduccin del genoma del ncleo, la rpida evolucin del genoma

mitocondrial, la adquisicin de un desarrollo determinado y la

simplificacin de la estructura corporal.
Gentica
C. intestinalis es uno de los animales cuya plena genoma ha sido
secuenciado. Posee un genoma relativamente pequeo (unos 160
Mbp) que consta de 14 pares de cromosomas con unos 16000 genes.
El anlisis del proyecto genoma han identificado nueve genes Hox,
que son Ci-Hox1, 2, 3, 4, 5, 6, 10, 12 y 13. La Ciona savignyi, el
pariente ms cercano de Ciona intestinalis, tambin tienen el mismo
conjunto de genes Hox. La organizacin de los genes Hox es conocida
slo por C. intestinalis . Los nueve genes Hox estn ubicados en dos
cromosomas; CI-Hox1 a 10 en un cromosoma y Ci-Hox12 y 13 en otro.
Las distancias TBP dentro de los genes Hox de Ciona son
extraordinariamente largas. Siete genes Hox Ci-Hox1 a 10, se
distribuyen, que abarca aproximadamente la mitad de la longitud del
cromosoma. De las comparaciones a las expresiones de genes Hox y
ubicaciones en otras especies, es probable que los genomas de
coloracin sean bajo condiciones de dispersin.
Su clasificacin taxonmica es de la siguiente manera:
CLASIFICACION TAXONOMICA
Reino

Animalia

Filo

Chordata

Subfilo

Urochordata

Clase

Ascidaceae

Orden

Enterogona

Familia

Cionidae

Genero

Ciona

Especie

C. intestinalis

En el presente estudio se investigar las propiedades de la actividad

antimicrobiana en la tnica de la ascidia solitaria, Ciona intestinalis.

9. OBJETIVOS

General: Determinar propiedades antimicrobianas de la Tnica de

Ciona intestinalis Ascidia.
Especficos: Establecer los efectos del Principio activo antibacterial
sobre la proliferacin bacteriana Gram Positivas y Negativas.
10.

ANTECEDENTES

The Draft Genome of Ciona intestinalis: Insights into Chordate

and Vertebrate Origins en 1998, menciona que los primeros cordados
aparecen en el registro fsil en el momento de la explosin del
Cmbrico, cerca de 550 millones de aos. El moderno renacuajo
ascidia representa una aproximacin plausible a estos cordados
ancestrales. Para iluminar los orgenes de los cordados y vertebrados,
se ha empleado la porcin de la protena codificada del genoma de la
ascidia ms estudiado, Ciona intestinalis. El Genoma de C. intestinalis
contiene ~ 16.000 genes que codifican protenas, de forma similar al
nmero de otros invertebrados, pero slo la mitad de la que se
encuentra en los vertebrados. Genes de familias de vertebrados se
encuentran tpicamente en forma simplificada en C. intestinalis, lo
que sugiere que las ascidias contiene el complemento bsico
ancestral de genes implicados en la sealizacin celular y el
desarrollo. El genoma de ascidia tambin ha adquirido una serie de
linajes especficos de innovaciones, incluyendo un grupo de genes
que participan en el metabolismo de celulosa que se relacionan con
los de las bacterias y los hongos.

Fine Structure of the Tunic of Ciona intestinalis L. II. Tunic

morphology, cell distribution and their functional importance en el
2003 menciona acerca de la arquitectura de la tnica de C.
intestinalis y la distribucin de clulas fueron investigados en
microscopio electrnico. Las observaciones mostraron que la cubierta
de ascidia est formada por una cutcula delgada exterior, una
subcuticular de ancho variable y una gran capa nica de sustancia
fundamental. Grnulo grande, mrula, los fagocitos y granulocitos son
los tipos celulares encontrados, que aparecen principalmente en los
estados altamente vacuolados y se distribuyen a lo largo de toda la
tnica. Las Clulas Granulosas grande, sin embargo, se presentan
principalmente en la capa de la cutcula y las clulas mrula aparecen
principalmente en la zona exterior de la sustancia fundamental. El
papel de estas clulas en la construccin tnica, la reparacin y
regeneracin, as como su funcin de barrido se discuten.

An exceptional salt-tolerant antimicrobial peptide derived from a

novel gene family of haemocytes of the marine invertebrate Ciona

intestinalis en 2007 menciona una nueva familia de genes que

codifica pptidos antimicrobianos fue identificado en EST (etiquetas
de secuencias expresadas) de base de datos de C. intestinalis, y uno
de estos genes de sus sub especies se clon molecularmente en el
norte de Europa. La hibridacin in situ y el anlisis
inmunocitoqumicos revel que el pptido natural se sintetiza y se
almacena en un tipo distinto de hemocitos, el granulocito univacuolar
no refrctil. Por RT-PCR semicuantitativa (transcripcin reversa -PCR),
se demostr que la expresin del gen es marcadamente regulada en
hemocitos. Para evaluar la potencia antimicrobiana de la supuesta
protena defensa, se sintetiz un pptido correspondiente a su regin
de ncleo catinico. El pptido fue altamente eficaz contra las
bacterias Gram-negativas y Gram-positivas, incluyendo varias
patgenos humanos y marinos, as como la levadura Candida
albicans. En particular, la actividad antibacteriana del pptido fue
retenida en concentraciones de sal de hasta 450 mM de NaCl. Usando
dos mtodos diferentes se ha demostrado que el pptido mata Las
bacterias Gram-negativas y Gram-positivas permeabilizando sus
membranas citoplasmtica. CD espectroscopia revel que, en
presencia de liposomas fosfolpidos compuestos de carga negativa, el
pptido se somete a un cambio
conformacional y adopta una
estructura -helicoidal. Adems, el pptido era prcticamente no
citoltico de los eritrocitos de mamferos. Por lo tanto, el diseo
pptido antimicrobiano tolerante a la sal puede representar un
modelo valiosa para el desarrollo de nuevos antibiticos.

HENNING FEDDERS, A reverse search for antimicrobial peptides

in Ciona intestinalis: Identification of a gene family expressed in
hemocytes and evaluation of activity. En la bsqueda de ppticos
antimicrobianos en la tnica de Ciona intestinalis, se uso el
recientemente proyecto genoma y el numero se secuencias
expresadas (EST), por este medio, se logro identificar a un gen
putativo que muestra varios rasgos estructurales tpicos de ppticos
antimicrobianos. El pptido sintetizado posee una potente actividad
antimicrobiana contra una variedad de bacterias y tambin contra el
hongo Candida albicans. Adems se pudo concluir que usando una
clula fluorescente permeable se evidencio que los pptidos mata
directamente las bacterias permeabilizando sus membranas
citoplasmticas. Ciona intestinalis, posee entonces un pptido que
representa un potencial arsenal para combatir infecciones
microbianas.

Las

CAMERON FINDLAY, Antimicrobial factors in solitary ascidians.

ascidias solitarias poseen un amplio rango de agente

antimicrobianos en su sangre y otros tejidos, un numero de ellos han

sido purificados y caracterizados con una vista de desarrollar
potentes productos farmacolgicos, sin embargo, para todas las
especies de tunicados se sabe muy poco a cerca de la actividad,
localizacin del tejido o modo de accin de estos componentes y no
existen detalles de sus biosntesis o regulacin interna. Los ltimos
trabajos relacionados a la actividad microbiana de Ciona intestinalis
revelan una amplia variedad de actividad ante bacterias Gram
positiva y Gram negativa dentro de las clulas sanguneas
principalmente en las clulas de la mrula. Las clulas de la mrula
son conocidas por participar en una variedad de respuestas en
defensa del hospedero, puede existir una pequea duda de que estas
protenas ayudan en la neutralizacin de bacterias y posiblemente de
otros microorganismos. Adems, en algunas especies, los pptidos
con propiedades antibiticas han demostrado tener efectos biolgicos
in Vitro como por ejemplo proteccin ante predacion, digestin o
prevencin de epibiosis.
CAMERON FINDLAY AND VALERIE J. SMITH mencionan acerca de que
trabajos recientes sobre Ciona intestinalis han demostrado que la
actividad antibacteriana es potente contra una amplia gama de
bacterias Gram positivas y bacterias Gram negativas, las cuales
residen dentro de las clulas sanguneas circulantes, principalmente
las clulas de mrula. La actividad es constitutiva, y no se encuentra
relacionada a la lisozima y esto hace que no implique aglutinacin o
lisis directa de la pared celular bacteriana. Debido a que las clulas
mrula participan en una variedad de receptores celulares
en
respuesta de defensa, no puede haber duda de que estas protenas
ayudan en la neutralizacin de las bacterias, y posiblemente en la
neutralizacin otros microorganismos, que pueden tener acceso a los
tejidos.

11.

METODOLOGA

Recoleccin de la muestra

Ubicacin del lugar de recoleccin: La baha de Samanco se ubica

entre las coordenadas geogrficas de 78o 28' a 78 34 LW y 09 10' a
09 16' LS, comprende un rea de aproximadamente 6000 has.
Polticamente esta baha, incluye los distritos de Nuevo Chimbote y de
Samanco, Provincia de Santa, Regin Ancash, Per.

Especmenes de C. intestinalis fueron colectadas en el Concesionario

Barrera- Baha de Samanco, a condiciones:
Transparencia (del mar) 3,5 m
Oxigeno (mg/l) 4,08
Temperatura 19,4
Salinidad (ppm) 34,8
PH 8,19
Color del mar: verde oscuro
Viento: moderado
Mar: calmo (moderado)

El tamao de la muestra obtenida fue de 100 individuos, todos

sacados de una misma linterna, los individuos se colectaron
indistintamente de su madurez, peso y ubicacin.
Se colocaron en bolsas ziplok y stas a su vez en un cooler para su
preservacin.

Preparacin del Extracto

Con el uso de las manos se procedi a aplastar y vaciar todo el

contenido de las acidias quedndonos slo con el rgano de inters,
la Tnica. Luego de eliminar todo residuo, las muestras se sometieron
a un licuado simple. Obtenido el extracto se almacenaron en frascos
de dilucin autoclavados.
stos a su vez se prepararon a dos diluciones diferentes:
Dilucin A: al 50% (1:2)
Dilucin B: al 30% (3:10)

Preparacin del cepario

Se prepar el medio TSA, para poder mantener las cepas de las

bacterias que utilizaramos para el trabajo. Posteriormente inclinaron
los tubos tipo pico de flauta hasta que solidifique, luego se llev a la
estufa para realizar la prueba de esterilidad y posteriormente, al da

siguiente se hizo el sembrado en el cepario, para esto usamos 3

bacterias previamente aisladas: Escherichia coli, Staphylococcus
aureus y Klebsiella pneumoniae, luego del sembrado se procedi a
dejarlas en la estufa a 37 C por 24 horas y consecuentemente se las
refriger para su conservacin y posterior uso.

Preparacin de medio de cultivo y Sembrado

Se prepararn 200mL el medio Agar TSA (agar Caso), segn el

protocolo y se servirn en 6 placas autoclavadas. Listas las placas, se
proceder al sembrado de las sepas aisladas e inmediatamente
despus separar el rea en 4 cuadrantes para, en cada una de ellas
aplicar perforaciones de papel filtro embebidos en el extracto
problema, segn el protocolo del Antibiograma.

12.

RESULTADOS

Evaluacin de la accin bactericida

*Efecto Bactericida son los sistemas que s matan a
microorganismos que causan enfermedades. Por ejemplo
purificadores UV son los bactericidas ms eficientes.

los
los

Para establecer el efecto de la accin bactericida se registr el

dimetro (en milmetros) del halo de inhibicin bacteriana
formado 24 horas despus de haber
sembrado las
muestras
aisladas.
En el cuadro presentado se observan los promedios de los dimetros
obtenidos de los cuatro cuadrantes de cada placa, utilizando el
extracto de la tnica.

Tabla 1: Dimetro promedio del halo inhibitorio en relacin

con la especie de bacteria usada y el extracto de tnica de
Ciona intestinalis.

ESPECIE
SEMBRADA
Escherichia coli
Klebsiella

N
PLACA
1
5

EXTRACTO DE
TUNICA DE
Ciona
intestinalis
DILUCION A
23mm
25mm

pneumoniae

ESPECIE
SEMBRADA
Escherichia coli
Klebsiella
pneumoniae

N
PLACA
2
6

EXTRACTO DE
TUNICA DE
Ciona
intestinalis
DILUCION B
21mm
23mm

Siendo: 1 Dilucin B y 2 Dilucin A

Finalmente para comprobar el efecto Bactericida, se procedi a
preparar un cepario en el que sembraron las colonias circundantes al
halo resultantes de la exposicin al extracto. Al cabo de 24 horas no
hubo crecimiento en los tubos de verificacin.
Evaluacin de la accin bacteriosttica
* Efecto Bacteriosttico se refiere a filtros que no permiten la
reproduccin de microorganismos. Esto no quiere decir que los
destruya, solo que no permite su reproduccin, es decir, si al filtro
entran 50 bacterias, no se podrn desarrollar ms, pero en ningn
caso las elimina.
Para
establecer
la
accin
bacteriosttica
se
evalu
longitudinalmente el crecimiento in vitro de cepas de Staphylococcus
aureus expuesta a dos situaciones experimentales, durante cuatro
tiempos de exposicin.
En el extracto de tnica de la ascidia el promedio de las colonias en el
minuto uno fue de 98, en el minuto tres fue de 82, en el minuto 5 de

72 y en el minuto quince fue de 70. Luego de ello el nmero de

colonias se mantuvo constante.

Grfico 1: Promedio de crecimiento bacteriano por tiempo

de exposicin segn el agente evaluado.

Finalmente para comprobar el efecto Bacteriosttico, se procedi a

preparar un cepario en el que se sembraron las colonias circundantes
al halo resultantes de la exposicin al extracto. Al cabo de 24 horas
hubo s crecimiento en los tubos de verificacin.
13.

CONCLUSIONES

Su efectividad antibacteriana es relativamente eficiente debido a que

los halos de inhibicin producidos en los cuadrantes de las placas
petri fueron entre 21 y 25 mm de dimetro.
El efecto bacteriosttico de Staphylococcus aureus frente al extracto
problema fue comprobado debido al crecimiento de las colonias
circundantes al halo en el cepario de verificacin. Esto indica que el
crecimiento de las colonias fue suprimido, mas stas no fueron
eliminadas.
La accin bacteriosttica frente a Staphylococcus aureus es eficiente
ya que el nivel poblacional de bacterias disminuye paulatinamente
conforme va pasando el tiempo, y llega mantenerse constante en un
determinado momento.
El efecto bactericida de E. coli y Klebsiella frente al extracto problema
fue comprobado debido a la ausencia de crecimiento de las colonias
circundantes al halo en el cepario de verificacin. Esto indica que el
crecimiento de las colonias fue suprimido debido a que stas fueron
eliminadas.

La accin bactericida de E. coli y Klebsiella es eficiente ya que el halo

de inhibicin formado fueron de dimetros relativamente favorables.

14.

DISCUSIONES

Como se sabe en la tnica de Ciona intestinalis poseen un poder

antibacteriano posiblemente debido a las clulas mrula ya que estos
participan en una variedad de receptores celulares en respuesta de
defensa, por eso, no puede haber duda de que estas protenas
ayudan en la neutralizacin de las bacterias, y posiblemente en la
neutralizacin otros microorganismos, que pueden tener acceso a los
tejidos.
Para comprobar el efecto bactericida y Bacteriosttico se tuvo que
corroborar los resultados en un sembrado de las colonias en un
cepario de verificacin.

15.

AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a todas las personas que nos brindaron su
apoyo para poder realizar este proyecto, nuestras familias;
en especial al profesor Pedro Huaman Maita y al Blgo.
Guillermo Alvarez Bejar quienes nos dieron muchas
facilidades para poder movilizarnos hasta el concesionario
Barrera, ya que sin ellos no hubisemos logrado
movilizarnos y poder colectar las ascidias.

16.

ANEXOS

FIG 1.
Baha de Samanco, Chimbote, se observa a los
trabajadores alistando la lancha para el traslado hacia el
concesionario Barrera. .

FIG 2: Lancha lista para el abordo para ir hasta el concesionario

Barrera.

FIG 3: Concesionario Barrera. Se observan a los trabajadores

colectando conchas de abanico.

FIG 4: Coordinando con el responsable del concesionario para poder

colectar las ascidias de las linternas de conchas de abanico.

FIG 5: Linternas con numerosas ascidias impregnadas, se procedi a

la coleccin de stas para su posterior estudio.

FIG 6: En esta foto nos encontramos tres de los cuatro integrantes

del proyecto junto con el Sr. Guillermo quien nos dio las facilidades en
Chimbote para ir hasta el Concesionario Barrera.

15.

REFERENCIAS

Cameron F. and Valeries, J. 1995. Antibacterial activity in the

blood cells of the Ciona intestinalis Solitary ascidian in vitro. The
Journal of experimental zoology. Vol 273- 434-444p.
Cameron F. and Valeries, J. 1995. Antimicrobial factors in solitary
ascidians. School of Biological and Medical Sciences, Gatty Marine

Laboratory,University of St Andrews, Fife, KY16 8LB, Scotland, U.K.

645-658p.
Fedders, H. and Leippe, M. 2006. A reverse search for
antimicrobial peptides in Ciona intestinalis. Department of
Zoophysiology, Zoological Institute, University of Kiel, Olshausenstr.
Fedders,H.;
Matthias, M.; Joachim,P.; Leippe, M. 2008. An
exceptional salt-tolerant antimicrobial peptide derived from a novel
gene family of haemocytes of the marine invertebrate Ciona
intestinalis. Department of Zoophysiology, Institute of Zoology,
University of Kiel, Olshausenstr.
Paramvir D.; et al. 2002. The Draft Genome of Ciona intestinalis:
Insights into Chordate and Vertebrate Origins
Giacomo L.; Eleonora P.; Giovanni F.; 2010. Structure of the Tunic
of Ciona intestinalis L. II. Tunic morphology, cell distribution and their
functional importance.

16. PRESUPUESTO (En nuevos soles enteros)

Gastos

URP

TOTAL

Medios de cultivo: Proporcionado por el

TSA
laboratorio
de
Agar nutritivo
Microbiologa de la
facultad de Ciencias
Biolgicas
de
la
Universidad Ricardo
Material
de Palma.
laboratorio:
Tubos
tapa
rosca Proporcionado por el
pyrex de 13 x 100
laboratorio
de
Placas Petri
Microbiologa de la
Asa de siembra
facultad de Ciencias
Pipetas
Biolgicas
de
la
Balanza
Universidad Ricardo
Palma.
Material biolgico:
Tnica
de
Ciona
intestinalis

BIENES

Otros materiales:
Cooler
Hielo seco
Gel refrigerante
Impresiones

Se colecto en
la
Bahia de Samanco,
en la Ciudad de
Nuevo Chimbote.
S./
S./
S./
S./

40.00
15.00
6.00
28.00

Costo del viaje de

Lima a Chimbote para
tres personas.
Ida:
S./150.00
Vuelta:
S./120.00
MEDIOS
TRANSPORTE

DE
Costo de la gasolina
para la lancha de la S./ 64.80
Universidad Ricardo
Palma

Costo del transporte

en la ciudad de
Nuevo
Chimbote(taxis)
Estada en la ciudad Desayuno
Chimbote
Almuerzo
Cena

S./ 20.00

S./15.00
S./35.00
S. /15.00

TOTAL

S./ 508.80

17. CRONOGRAMA APROXIMADO DE GASTO (En nuevos soles

enteros)
Actividad/tie
Marzo
mpo
Recoleccin
S./8.00
de
datos
(papers,
libros)
Compra
de
materiales
que
se
necesitaran
para
el
proyecto
Viaje
al
centro
de
recoleccin
de la muestra
Impresin del
proyecto

Abril

Mayo

Junio

S./ 61.00

S./419.80

S./20.00

18.
CRONOGRAMA APROXIMADO DE ACTIVIDAD
Actividad/Tie
Marzo
Abril
Mayo
Junio
mpo
Presentacin
xxxxxxx
del proyecto
Elaboracin y Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
bsqueda de x
x
antecedentes
y bibliografa
Viaje
a
x
Chimbote
para
la
obtencin de
la muestra
Preparacin
xxxxxxxx
del
material
de laboratorio
para
las
pruebas
respectivas
Culminacin
Xx xxx x

del proyecto
Entrega
del
proyecto

xx
xxxx