Targeted

Drug-Llevar
Nanomedicinas

bacterifagos

como

antibacteriano

Iftach Yacoby , Hagit Bar , y Itai Benhar *

Informacin Autor notas Artculo Derecho de Autor y la licencia para la informacin
Este artculo ha sido citado por otros artculos en PMC.

ABSTRACTO
El creciente desarrollo de la resistencia bacteriana a los antibiticos tradicionales ha
alcanzado niveles alarmantes (2 , 3 ), estimulando una fuerte necesidad de desarrollar
nuevos agentes antimicrobianos. Los enfoques clsicos a corto plazo incluyen la
modificacin qumica de los agentes existentes para mejorar la potencia o
espectro.Enfoques a largo plazo se basan en genmica bacteriana y de fagos para descubrir
nuevos antibiticos que atacan a los nuevos objetivos de protenas que son esenciales para
la supervivencia bacteriana y por lo tanto sin resistencia conocida ( 1 , 8 ). En ambos
antibiticos tradicionales y recin desarrolladas, la selectividad de destino se encuentra en
el propio frmaco, en su capacidad de afectar a un mecanismo que es nico para el
microorganismo diana y ausente en su husped. Como resultado de ello, un gran nmero de
frmacos potentes han sido excluidos de su uso como agentes teraputicos debido a la baja
selectividad. Esto trae a la mente la escasa selectividad de medicamentos contra el cncer y
los recientes esfuerzos para superarla mediante el desarrollo de estrategias teraputicas
dirigidas. Enfoques administracin dirigida de frmacos basados en anticuerpos se han
desarrollado desde la aparicin de los anticuerpos monoclonales ( 6 ). Desde entonces, se
han utilizado anticuerpos monoclonales y anticuerpos de cadena sencilla derivados de
entregar componentes citotxicos potentes para las clulas cancerosas que, una vez unidas,
internalizar y matar a la clula diana ( 7 , 12). A immunotargeting similar de bacterias no es
factible debido a la falta de un proceso de internalizacin bacteriana, haciendo que el uso de
un mecanismo de liberacin extracelular necesaria para un enfoque antibacteriana
especfica. Por otra parte, en comparacin con cncer interiorizado dispositivos de
focalizacin como inmunotoxinas y inmunoconjugados, antibiticos comunes son frmacos
menos potentes, en los que se necesita un nmero mnimo de varios miles de molculas
para inhibir o matar a una sola bacteria. Por lo tanto, una plataforma antibacteriana
especfica debe tener una capacidad de transporte del frmaco significativamente ms
grande que un anticancergeno uno.
Bacterifagos filamentosos (fagos) son el caballo de batalla de la ingeniera de anticuerpos
y estn ganando cada vez ms importancia en nanobiotecnologa ( 9 ). Aqu presentamos
apuntamos, los fagos portadores de drogas como una plataforma para la orientacin
bacterias patgenas. Debido a las modificaciones genticas y qumicas, estos fagos

representan una plataforma de transporte de frmaco dirigido modular de dimensiones

nanomtricas, donde restos de direccin y frmacos conjugados pueden intercambiarse a
voluntad.
Recientemente, hemos demostrado la factibilidad de usar fagos como vehculos de
frmacos antibacterianos especficos ( 13 ). En nuestro sistema, cloranfenicol (que rara vez
se utiliza para tratar a los pacientes debido a la toxicidad sistmica) se adjunta como un
profrmaco a las molculas de protena de la cubierta p8 en la superficie del fago
filamentoso. Los fagos fueron dirigidos para unirse a bacterias patgenas y, tras la
liberacin de cloranfenicol activo, el crecimiento bacteriano retardado. El sistema reportado
tena una capacidad limitada para la inhibicin del crecimiento bacteriano debido a una
capacidad de armado limitado de menos de 3.000 molculas de frmaco / fago. Ahora
hemos superar esta limitacin mediante el diseo de una qumica de conjugacin nico
frmaco, que comprende el uso de (hidrfilos) antibiticos aminoglucsidos como
enlazadores ramificados, potenciadores de la solubilidad. Al cambiar la qumica de armado
y una modificacin del mtodo de conjugacin de anticuerpos-fagos, nuestro sistema, como
se ilustra en la Fig. Fig.1,1 , se transform en una herramienta viable y verstil para la
focalizacin de una amplia gama de bacterias patgenas.

FIG. 1.
Representacin esquemtica de los bacterifagos portadores de drogas.(A) Dibujo de un
solo bacterifago fUSE5 ZZ-exhibicin. Las pequeas esferas de color turquesa
representan importantes monmeros p8 protena de la cubierta. Esfera prpura y palos
representan las 5 copias de la protena de cubierta menor ...
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MATERIALES Y MTODOS
Todos los productos qumicos utilizados fueron de grado analtico y se adquirieron de
Sigma (Israel). A menos que se indique lo contrario, las reacciones se llevaron a cabo a
temperatura ambiente (aproximadamente 22 C).
Sntesis y evaluacin de profrmaco cloranfenicol.

Un profrmaco cloranfenicol, cloranfenicol donde est vinculado a travs de un enlace de

ster lbil a un N hidroxisuccinimida (NHS) -ster para la conjugacin a grupos amina Se

prepar y evalu como se ha descrito previamente ( 13 ). La tasa de liberacin del frmaco

cuando se utilizan las esterasas de suero es de aproximadamente 15% de la cloranfenicol
conjugado liberado desde el soporte despus de 1 h de incubacin en suero a 37 C con
una cintica lineal ( 13 ).
Preparacin de los fagos de dominio de mostrar ZZ.

Phage fUSE5-ZZ, que muestra el dominio de unin a Fc ZZ-de la protena A en todas las
copias de la protena de cubierta menor del fago p3, se construy como se ha descrito
previamente ( 13 ).
Preparacin de los fagos para la conjugacin de drogas.

fUSE5-ZZ fagos filamentosos ( 13 ) se propagaron rutinariamente en clulas DH5a F

'utilizando tcnicas estndar de fagos como se ha descrito previamente ( 5 ). Los fagos se
suele recuperarse de los cultivos de 1 litro durante la noche de bacterias portadoras. Las
bacterias se eliminaron por centrifugacin, y el sobrenadante que contiene el fago se filtr a
travs de un filtro de 0,22-micras. Los fagos se precipitaron mediante la adicin de 20%
(peso / vol) de polietilenglicol 8000 a 2,5 M NaCl, seguido por centrifugacin como se ha
descrito previamente ( 5 ). El sedimento de fagos se suspendi en Milli-Q agua bidestilada
estril a una concentracin de 10 13 PFU / ml y se almacen a 4 C.
Conjugacin de los aminoglucsidos al cloranfenicol o a FITC.

Solid neomicina o higromicina y una solucin madre de 100 mM cloranfenicol profrmaco

en sulfxido de dimetilo o de isotiocianato de fluorescena (FITC) en sulfxido de dimetilo
se utilizaron en todas las conjugaciones. Se mezclaron dentro de 0,1 M deNaHCO3, pH 8,5, en
una relacin molar de 1: 2 para el cloranfenicol profrmaco-neomicina o en una relacin
molar de 1:10 de FITC-higromicina. La reaccin se agit durante la noche. A continuacin,
el aducto de la neomicina-cloranfenicol preparado se purific por cromatografa lquida de
alto rendimiento de fase inversa (HPLC). Una columna de fase inversa C 18 se us en una
mquina de aguas con una (solucin madre de 80% [p / p] en agua) gradiente de 0% a
100% de acetonitrilo y agua (100% de agua a 0%) en el mvil fase, a un caudal de 1 ml /
min. En estas condiciones, el aducto de neomicina-cloranfenicol eluy 18 min despus de
la inyeccin de la muestra, mientras que el cloranfenicol-profrmaco intacto eluy 24 min
despus de la inyeccin de la muestra (Fig.2a y b ). Tras la validacin asistida por matriz de
ionizacin de desorcin de lser de tiempo de vuelo espectrometra de masas (MS)
(Fig. (Fig.2c),2c ), el aducto de neomicina-cloranfenicol purificado se liofiliz y conjugado
con nanopartculas de fagos de anticuerpos complejado por el 1 etil-3- [3dimetilaminopropil] carbodiimida procedimiento (EDC).

FIG. 2.
De fase inversa purificacin por HPLC y anlisis de MS del aducto-cloranfenicol
neomicina. (A) El anlisis por HPLC de cloranfenicol-NHS antes de la conjugacin a la
neomicina. El profrmaco cloranfenicol-NHS se separ usando un gradiente de acetonitrilo
en agua ...
Qumica EDC.

El fago importante p8 protena de la cubierta contiene 3 aminocidos carboxlicos (glu2,

asp4, asp5) que pueden estar conjugados por aplicacin de la qumica EDC, una reaccin
rpida realiza a un pH ligeramente cido (4.5 a 5.5) ( 11 ). Aqu, todas las conjugaciones se
realizaron dentro de un volumen total de 1 ml de 0,1 M de tampn Na-citrato, pH 5, NaCl
0,75 M, 2,5 10 -6 mol del aminoglucsido, 10 12 fagos conjugado con una inmunoglobulina
G (IgG). La reaccin se inici por la adicin de 2,5 10 -6 mol de EDC, que se repiti dos
veces ms a intervalos de tiempo de 30 min. Las reacciones se llevaron a cabo a
temperatura ambiente con agitacin suave (10 rpm) en tubos Eppendorf de 2 ml para un
total de 2 h. Las nanopartculas de fagos portadores de frmacos dirigido se separaron de
los reactivos por dos etapas de dilisis de 16 h cada uno contra 1000 volmenes de solucin
salina tamponada con fosfato estril (PBS).
La cuantificacin de molculas ligado cloranfenicol-fago.

Molculas de fagos cloranfenicol Vinculados se cuantificaron esencialmente como se

describe anteriormente ( 13 ). Brevemente, cloranfenicol conjugado fue liberado de los
fagos mediante incubacin en suero de conejo (como fuente de esterasas) a 37 C durante
48 h.El cloranfenicol libre se separ de los fagos mediante el uso de cartuchos de
ultrafiltracin de 10 kDa-corte (Millipore), y el nmero de molculas de cloranfenicol
liberados se calcul utilizando una curva de calibracin de absorbancia cloranfenicol libre
que se registr a 280 nm.
Evaluacin de ttulos en suero mediante ELISA usando bacterias completas como
antgenos.

Ensayo de inmunoabsorcin (ELISA) placas ligado a enzimas (fondo plano; Nunc, Suecia)
se revistieron con bacterias como sigue. Las clulas de un cultivo de una noche fresco se
recogieron por centrifugacin y se suspendieron en PBS a aproximadamente 10 8 clulas /

ml. Una parte alcuota de 100 l de la suspensin celular se aplic a cada pocillo de la placa
que se hace girar en una centrfuga a 4000 rpm durante 5 min a 4 C. El sobrenadante se
retir cuidadosamente, y 100 l de glutaraldehdo al 3% en PBS se aadi a cada pocillo y se
deja fijar las clulas durante 1 h. A continuacin, la placa se bloque con suero bovino
50%. Sueros ensayados se aadieron en diluciones seriadas, las placas se incubaron durante
1 h a temperatura ambiente (aproximadamente 22 C), se lav tres veces con PBS y se
incubaron con anticuerpos de cabra peroxidasa de rbano conjugada anti-humanos o anticonejo (Jackson ImmunoResearch Laboratories ) durante 1 h. Despus las placas se lavaron
cuatro veces y se desarrollaron con 3,3 ', 5,5'-tetrametil bencidina (Dako). Las reacciones se
terminaron con 1 MH 2 SO 4. La placa se ley en un lector de ELISA a 450 nm.
Experimentos de inhibicin de crecimiento.

Una parte alcuota de 100-l de cultivo bacteriano durante la noche se recogi por
centrifugacin y se lav en 1 ml de PBS fro. Las clulas se recogieron de nuevo y se
resuspendieron en 100 l de PBS fro. Diez microlitros de bacterias lavadas (10 7 clulas) se
incubaron con 100 a 500 l de apuntado neomicina-cloranfenicol nanopartculas de fagos
llevar (octubre 10-10 11 partculas) para 1 h en hielo. A continuacin, se aadi un volumen
igual de suero de conejo (100 a 500 l) y se incub durante 3 h a 37 C. Uno a quinientas
microlitros de esta mezcla se diluy en 3 ml de medio de crecimiento (Staphylococcus
aureus, caldo de soja trptico; Streptococcus pyogenes, caldo de Todd-Hewitt; Escherichia
coli, 2 YT [16 g / litro de Bacto-triptona, 10 g / litros de extracto de Bacto-levadura, 5 g /
litro de NaCl, agua bidestilada completa a 1 litro]) que contiene 50% de suero de conejo en
tubos de 13 ml con agitacin a 250 rpm a 37 C. El crecimiento se registr mediante el
control de la absorbancia a 600 nm.
Clculo del factor de mejora de la potencia dirigido contra la droga libre.

El clculo del factor de mejora de la potencia se basa en 10 10 fagos cloranfenicol-Llevar,

cada uno con 10 4 molculas de frmacos, que inhiben el crecimiento de 10 7 clulas tan
eficazmente como 15 g de cloranfenicol libre. El porcentaje de fagos pertinentes se basa en
el ~ 5% de IgG especfica de la diana en el suero policlonal. La estimacin de que el 30%
del frmaco se libera durante el experimento se basa en la referencia 13 .
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RESULTADOS
Conjugacin de cloranfenicol a los fagos a travs de enlazadores aminoglucsidos.

Como una solucin a la eficiencia de armado limitada que se debi principalmente a la

hidrofobicidad de drogas ( 13 ), se aplic antibiticos aminoglucsidos como potenciadores
de la solubilidad enlazadores ramificados. Esto dio lugar a la superacin de la barrera
hidrofbica en soluciones acuosas por un lado y aument significativamente el potencial de

carga de molculas de frmaco por partcula de fago en el otro. El primer ejemplo fue la
conjugacin de cloranfenicol a la neomicina aminoglucsido. Cada molcula de neomicina
tiene 6 aminas primarias, 1 de los cuales se vinculan a una molcula de cloranfenicol,
mientras que las otras aminas se dejaron durante ms conjugacin con restos carboxilo de
las protenas de la cubierta del fago mediante qumica EDC ( 11 ) (Fig. (Fig.3a) .3a ).El uso
de fagos residuos carboxilo abrigo para la conjugacin de drogas en lugar de los residuos
de amina multiplica la capacidad potencial directo de transporte de drogas a ~11,400
molculas por fagos (3800 p8 protena de la cubierta copias en nuestro fago fUSE5-ZZ con
un tamao del genoma de 9200 bases 3 residuos carboxilo accesibles en cada monmero
p8).

FIG. 3.
Representacin esquemtica de las reacciones qumicas que se utilizan para preparar la
droga para la conjugacin. (A) Preparacin de un aducto de la neomicina-cloranfenicol. (1)
Se utilizaron dos pasos qumicos para modificar cloranfenicol para la conjugacin con
grupos amina. En el primer paso, ...
La cuantificacin de la carga til.

Para cuantificar indirectamente los residuos carboxilo reactivos en la superficie del fago, se
prepar un conjugado de FITC-higromicina (Fig. (figura 3b).3b ). La higromicina
aminoglucsido es similar a la neomicina en la estructura pero difiere en el nmero de
grupos aminas. Una molcula de higromicina contiene 2 aminas primarias; uno se puede
unir a la tintura fluorescente FITC, mientras que el segundo se deja para ms conjugacin
con restos carboxilo libres en la cubierta del fago por la qumica EDC. Desde higromicina
sirve como un enlazador directa, permite una verdadera estimacin de eventos-conjugacin
a fago. Por una curva de calibracin lineal de la intensidad de fluorescencia como una
funcin de la concentracin de FITC, hemos deducido el nmero de molculas de FITC y,
por lo tanto, la de las molculas higromicina que estaban vinculados a los fagos en ~10,000,
que es comparable al nmero de residuos carboxilo reactivos por fago segn lo calculado
anteriormente.
Para cuantificar directamente la cloranfenicol que se conjug a travs de la enlazador
neomicina, se publican las molculas de cloranfenicol conjugados mediante la incubacin
de los fagos portadores de drogas con suero como se describi previamente ( 13 ). Se
calcul aproximadamente 10.000 molculas de cloranfenicol por fago. Debido a las aminas

primarias adicionales disponibles en la neomicina, una carga til de drogas incluso ms

grande podra obtenerse mediante la manipulacin de las concentraciones de reactivos y
tiempos de incubacin, y que se poda obtener ms de 40.000 molculas de cloranfenicol /
fago sin comprometer la integridad del fago.
Mejorar la eficiencia de la focalizacin.

Nos acomplejado los fagos con anticuerpos policlonales que sirvieron como los restos de
direccin en nuestra plataforma de transporte de frmaco dirigido. Se utiliz suero humano
contra estafilococos y estreptococos y un conejo, protena A-IgG purificada
contra E. coli O78. Todos los ttulos en suero, como se determina por ELISA en bacterias
enteras inmovilizados, estaban en el rango de 1: 10.000 a 1: 100.000 (Fig. (Fig.4) 4.). Para
facilitar el clculo exacto de la mejora en la potencia, que mide la fraccin de IgG
especficos diana dentro de los sueros. Se encontr que la concentracin de IgG total en el
suero fue ~ 15 mg / ml, de los cuales 4 a 5% era el objetivo especfico.

FIG. 4.
Los ttulos de los sueros policlonales. Los ttulos de anti-humanoStaphylococcus
aureus (SA) y - Streptococcus pyogenes (SP) y sueros de conejo anti-E. IgG coli se
analizaron por ELISA con bacterias fijadas como antgenos, ttulos superiores a 1: 50.000
se registraron para todos ...
En nuestro estudio anterior, acomplejado los fagos con los anticuerpos dirigidos siguientes
Conjugacin de drogas ( 13 ). Aqu, los fagos complejado con los anticuerpos dirigidos
antes de la conjugacin de drogas. Como resultado, adems de que une el frmaco a la
cubierta del fago, la qumica EDC aplicada reticulado los anticuerpos dirigidos a los fagos
(datos no mostrados). Esto es importante cuando se considera en aplicaciones in vivo,
donde los anticuerpos no especficos residentes pueden competir a cabo el anticuerpo
dirigido desde el dominio ZZ.
La inhibicin del crecimiento de bacterias diana por fagos portadores de drogas.

Probamos la capacidad de las nanopartculas de fagos portadores de frmaco dirigido para

inhibir el crecimiento de las tres cepas diferentes de bacterias patgenas comunes. Dos eran
gram positivos: el resistente a la meticilinaStaphylococcus aureus COL y un aislamiento
clnico de Streptococcus pyogenes. El tercero era un gramnegativos, aviar levemente
patgena E. coli O78 (781) ( 14 ).
Los experimentos de inhibicin del crecimiento con estafilococos se realizaron con la
mnima cantidad de fagos que dieron la inhibicin de crecimiento total, 10 10 partculas de

fago por 10 7 bacterias. Los controles negativos eran bacterias no tratadas, as como
bacterias tratadas con IgG humana no inmune o bacterifagos Fc complejado humanos
conjugados con la misma cantidad de antibitico. Los resultados se compararon con la
inhibicin del crecimiento resultante de diversas concentraciones de cloranfenicol libre. Se
encontr que 10 10 fagos portadores de frmaco dirigido inhibieron el crecimiento
bacteriano, as como 15 g de cloranfenicol libre (Fig. 5a y b ).Experimentos de inhibicin
de crecimiento similares se llevaron a cabo con los otros objetivos bacterianas donde
tambin pudimos observar la inhibicin del crecimiento (Fig. 5c y d ). El perfil de
inhibicin del crecimiento de SPy E. coli O78 por cloranfenicol libre fue similar a la de las
clulas SA (no mostrado). La inhibicin del crecimiento parcial observada para E. coli O78
que se trat con fagos portadores de drogas nontargeted (Fig. (Fig.5d)5d ) se esperaba
debido al bajo nivel de unin no especfica de fagos filamentosos a esta E. coli cepa que se
inform anteriormente ( 13 ).

FIG. 5.
Curvas de inhibicin del crecimiento. Tres cepas de bacterias patgenas comunes fueron
probados: Staphylococcus
aureus (SA)
COL,Streptococcus
pyogenes (SP),
11
y E. coli O78. (A) Curva de crecimiento de SA trat con 10 (tringulos rellenos) o
10 10 (cuadrados rellenos) dirigidos ...
Clculo de potencia mejora en comparacin con el frmaco libre.

Se calcul el factor de mejora de la potencia del presupuesto de que la fraccin de fagos

relevantes (que se unen las bacterias diana) es igual a la fraccin de IgG objetivo relevante
dentro de los sueros. Como se muestra en la Fig. Fig.5,5 , 10 10 fagos portadores de
cloranfenicol dirigidos inhibieron el crecimiento bacteriano tan eficazmente como lo hizo
15 g de cloranfenicol libre.Teniendo en cuenta que, sobre la base de la fraccin de IgG
especfica de la diana en el suero, ~ 5% de los fagos estn dirigidos, que para 10 7 bacteria
produce 50 fagos portadores de drogas que realmente se unen cada bacteria diana. Cada
fago lleva ~ 10 4 molculas de cloranfenicol, de los cuales 30% (3000) se liberan durante el

curso de tiempo del experimento (basado en la cintica de liberacin reportados en

referencia 13 ). Esto produce 150.000 molculas de frmacos liberados para cada bacteria
diana.
Durante 10 7 bacterias diana, 15 g de cloranfenicol libre corresponde a ~ 3
10 9 molculas / bacteria. Por lo tanto, el factor de mejora de la potencia en comparacin
con el frmaco libre es de aproximadamente 20.000 [3 10 9 libre / 150000 dirigidos].
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DISCUSIN
La aparicin de resistencia a los medicamentos bacteriana exige medidas creativas para
superarla. El uso de algunos agentes antibacterianos extremadamente potentes est limitado
por su falta de selectividad. Una solucin a este problema puede ser proporcionada en la
forma de terapia dirigida ( 12 ). Una plataforma de administracin dirigida de frmacos
eficiente debe satisfacer los criterios de unin a la diana de selectividad, de gran capacidad
de transporte de la droga, y la liberacin del frmaco a tiempo a la meta.
Ofrecemos apuntamos, las nanopartculas de fagos como una manera verstil para satisfacer
estos criterios, como se muestra aqu con la inhibicin del crecimiento de bacterias
patgenas gram-positivas y gram-negativas portadoras de drogas. Como frmaco modelo,
se utiliz el cloranfenicol antibitico bacteriosttico que normalmente se limita a la
aplicacin tpica debido a la toxicidad para las clulas de la sangre ( 10 ). El fago
representa aqu una partcula de tamao nanomtrico que, debido a el ensamblaje modular
de su capa, ofrece una excelente capacidad de transporte de drogas para su tamao. La
disposicin de frmaco que se conjuga en el exterior de la partcula objetivo es nica en
comparacin con las partculas portadoras de dispositivos de drogas tales como liposomas o
partculas similares a virus. Una innovacin adicional se introdujo mediante el uso de los
aminoglucsidos a base de azcar como aminocidos ramificados, enlazadores hidrfilos,
que prev la solvatacin de los materiales hidrfobos tales como cloranfenicol, FITC, o ZPhe (no mostrado). Esto haba resuelto un obstculo importante al permitir la conjugacin a
una entidad biolgica (fagos) en soluciones acuosas, lo que nos permite conjugar una
cantidad bastante grande de molculas hidrofbicas a cada fago. De hecho, podramos
conjugar ms de 40.000 molculas cloranfenicol / fago sin comprometer la integridad del
fago. Sin embargo, trabajar en un nivel conjugacin de 10.000 molculas / fago fue
suficiente para obtener una inhibicin completa del crecimiento, mientras que el ahorro en
reactivos preciosos.
La neomicina se utiliz como el enlazador aminoglucsido es en s mismo un antibitico al
cual las bacterias analizadas son sensibles. Sin embargo, desde que fue vinculado a la
cubierta del fago mediante un enlace no lbiles, no poda ser puesto en libertad y contribuir

a la inhibicin del crecimiento bacteriano. Uno puede imaginar un diseo Conjugacin ms

elegante donde los aminoglucsidos estn vinculados a los fagos mediante un enlace lbil
sujeto a liberacin controlada, en cuyo caso se podran haber obtenido un efecto aditivo o
sinrgico de drogas.
Nuestro estudio demostr un factor de mejora de 20.000 en comparacin con el frmaco
libre. En nuestro estudio anterior, hemos podido demostrar una inhibicin del crecimiento
limitado con un factor de potenciacin mucho menor. Esta mejora drstica no puede
probablemente ser explicado sobre la base de aumentar la carga til de frmaco a partir de
3000 a 10000 solo. Ms bien, debe ser un efecto sinrgico resultante de la mejora de la
qumica que probablemente afecta a la solubilidad general de toda la plataforma de
transporte de drogas, y el nuevo enfoque de focalizacin en el que los anticuerpos se
complejan a los fagos antes de la conjugacin frmaco con reticulacin concomitante de los
anticuerpos a los fagos portadores de drogas.
Nuestros resultados de la inhibicin del crecimiento se obtuvieron dentro de un sistema
cerrado artificial y seguramente no reflejan una aplicacin in vivo, que ofrecer desafos
adicionales a nuestro enfoque, como los que se enfrentan otros nanolgicos potenciales
( 4 ). Por un lado, el uso de suero policlonal como lo hicimos en el sistema modelo
presentado no ser adecuado para el tratamiento sin una purificacin por afinidad antes de
IgG-bacteria especfica porque nos "perdemos" ~ 95% de nuestros fagos portadores de
drogas que no son el blanco .De hecho, los anticuerpos pueden no ser las molculas de
direccionamiento ideales para fagos portadores de drogas, porque las bacterias diana
pueden estar ya opsonizadas por anticuerpos de pacientes. En tal caso, se puede considerar
otros mtodos de focalizacin, como lo hicimos con los fagos de pptidos se presentan en
nuestro estudio anterior ( 13 ). Esperamos que este trabajo podra conducir a mtodos ms
creativos y verstiles para luchar contra nuestros enemigos ms antiguos e ntimos, las
bacterias patgenas.
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AGRADECIMIENTOS
Agradecemos Ehud Gazit (Universidad de Tel Aviv) para la lectura crtica del
manuscrito. Damos las gracias a Marina Shamis y Doron Shabat para preparar el
compuesto de cloranfenicol-NHS.
IY fue apoyado por un Ph.D. beca del Instituto de Investigacin de Sistemas Gertner
nanomdicos, la Universidad de Tel-Aviv, y por la beca Dan David para jvenes
investigadores en dimensin futuro.
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NOTAS AL PIE

publicado antes de impresin el 2 de abril de 2007.

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REFERENCIAS
1. Barrett, JF 2005. Puede biotecnolgicos ofrecer nuevos antibiticos? Curr. Opin. .
Microbiol. 8: 498-503[ PubMed ]
2. Bax, RP, y. N. Mullan 1999. Respuesta de la industria farmacutica para resistencia a
los antimicrobianos.Balliere Clin. Infect. Dis. 5: 289-304.
3. Coates, A., Y. Hu, R. Bax, y C.. Pgina 2.002. Los retos de futuro de cara al desarrollo
de nuevos frmacos antimicrobianos. Nat. Rev. Drogas Discov 1:.. 895-910 [ PubMed ]
4. Duncan, R. 2006. Conjugados polimricos como
cncer. Nat. Cncer de Apocalipsis6:. 688-701 [ PubMed ]

nanomedicina

contra

el

5. Enshell-Seijffers, D., y JM Gershoni. 2002. Seleccin de fagos visualizacin y anlisis

de eptopos Ab vinculantes, p. 9.8.1-9.8.27. En JC Colligan (ed.), Los protocolos actuales
en inmunologa. John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, Nueva Jersey.
6. Khler, G., y C.. Milstein 1975. Cultivos continuos de clulas fusionadas que secretan
anticuerpos de especificidad predefinida Nature 256: 495-497.. [ PubMed ]
7. Kreitman, RJ 1999. Las inmunotoxinas en la terapia del cncer. Curr. Opin. .
Immunol. 11: 570-578[ PubMed ]
8. Payne, D. y A.. Tomasz 2004. El reto de las bacterias patgenas resistentes a los
antibiticos: la necesidad mdica, el mercado y las perspectivas de nuevos agentes
antimicrobianos Curr.. Opin. . Microbiol. 7: 435-438[ PubMed ]
9. Sarikaya, M., C. Tamerler, AK Jen, K. Schulten, y F.. Baneyx 2003. Biomimtica
moleculares: la nanotecnologa a travs de la biologa Nat.. . Mater. 2: 577-585 [ PubMed ]
10. Skolimowski, IM, DA Rowley, RC Knight, y. DI Edwards 1981. Reduccin del dao
inducido cloranfenicol al ADN. J. Antimicrob. . Chemother. 7: 593-597 [ PubMed ]
11. Staros, JV, RW Wright, y. DM Swingle 1986. Enhancement por Nhidroxisulfosuccinimida de reacciones de acoplamiento mediada por carbodiimida soluble
en agua. Anal. Biochem., 156:. 220-222 [ PubMed ]
12. Trail, PA, HD Rey, y. GM Dubowchik 2003. Inmunoconjugados monoclonales
frmaco de anticuerpos para el tratamiento especfico de cncer. Cancer Immunol. .
Immunother. 52: 328-337 [ PubMed ]

13. Yacoby, I., M. Shamis, H. Bar, D. Shabat, y yo. Benhar 2006. Targeting agentes
antibacterianos mediante el uso de bacterifagos filamentosos de transporte de
drogas. Antimicrob. .
Agentes
Chemother. 50:2087-2097 [ PMC
libres
artculo ] [ PubMed ]
14. Yerushalmi, Z., NI Smorodinsky, MW Naveh, y. EZ Ron 1990. La adhesin pili de
cepas aviares de Escherichia coli O78. Infect. Immun. 58:. 1129-1131 [ PMC libres
artculo ] [ PubMed ]

Artculos de Agentes Antimicrobianos y Quimioterapia se proporcionan aqu por cortesa de la

Sociedad Americana de Microbiologa (ASM)