ETIOLOGA Y CONTROL, IN VITRO CON Trichoderma harzianum DE LA PUDRICIN

RADICULAR DE CEBOLLA (Allium cepa L.) EN EL VALLE DE

LOCUMBA, PROVINCIA JORGE BASADRE.
ETIOLOGY AND CONTROL IN VITRO, OF ONION'S ROOT ROT (Allium cepa L. )
WITH Trichoderma harzianum IN THE LOCUMBA VALLE, JORGE BASADRE
PROVINCE.
UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN
FACULTAD CIENCIAS
Escuela Acadmico Profesional de Biologa Microbiologa
Bach. Alejandra Stefanie Jara Almonte Girn
Email. ajaraalmonte@gmail.com

RESUMEN
El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la etiologa y el control, in vitro, con
Trichoderma harzianum sobre los agentes etiolgico causantes de la pudricin radicular
en el cultivo de Allium cepa L.(Cebolla) en el valle de Locumba, Provincia Jorge
Basadre.
Se obtuvo como resultado al Agente etiolgico de la pudricin radicular al hongo
fitopatgeno Pyrenochaeta terrestris, en asociacin de Fusarium oxysporum y
Fusarium solani. El antagonismo se evalu por el mtodo del Cultivo Dual,
confrontando a los agentes etiolgicos aislados con el antagonista Trichoderma
harzianum, en presentacin comercial Tricho D, obteniendo como resultado los
porcentaje de inhibicin de crecimiento PIC de 74,83% sobre Pyrenochaeta terrestris,
52,38% sobre Fusarium oxysporum y de 49.33 % en el caso de Fusarium solani. De
igual modo se obtuvo un grado 4 en cuanto a la Capacidad Antagnica de
Micoparasitismo para los 3 Agentes aislados.
Palabras clave: Agente etiolgico, Antagonista, Control Biolgico, Porcentaje de
Inhibicin de Crecimiento, Micoparasitismo.
ABSTRACT
This study aimed to determine the etiology and control, in vitro, with Trichoderma
harzianum on the etiologic agents causing root rot in the cultivation of Allium cepa L.
(Onion) in the valley of Locumba, Jorge Basadre Province.
It was obtained as a result the etiologic agent of root rot the pathogenic fungus
Pyrenochaeta terrestris, in association with Fusarium oxysporum and Fusarium solani.
The antagonism was assessed by dual culture method, confronting the isolated fungus
with the antagonist Trichoderma harzianum, in the commercial form Tricho D, obtaining
as result the percentages of growth inhibition PIC 74.83% on Pyrenochaeta terrestris,
52.38% on Fusarium oxysporum and finally 49.33% in Fusarium Solani.

Trichoderma harzianum is promising as an alternative for biocontrol of Pyrenochaeta

terrestris, Fusarium oxysporum and Fusarium solani; however, it is necessary to
evaluate it under field conditions.
Keywords: Causal agent, antagonist, Biological Control, Percentages of growth
inhibition, Mycoparasitism.

INTRODUCCIN
La produccin de cebolla en el Per ha
ido
incrementndose
de
manera
significativa en los ltimos diez aos. Es
un excelente producto agroexportable.
La adaptabilidad de las variedades de
cebolla a las condiciones ambientales
locales es un factor muy importante
para el xito en su produccin.
El
problema
fitosanitario
ms
importante del cultivo de cebolla es la
pudricin radical, la cual es producida
por
hongos
fitopatgenos
como
Fusarium
oxysporum,
Sclerotium
cepivorum, Pyrenochaeta terrestris y
Pythium spp. El establecimiento de
estos patgenos en las races, puede
ser por penetracin directa o por
aberturas
naturales
y
heridas,
produciendo
sntomas
como
amarillamiento en el follaje, marchitez y
muerte de la planta; dependiendo del
patgeno tambin manifiesta como
coloracin caf a rojiza. (MontesBelmont et al., 2003).
En el valle de Locumba, de la Regin
Tacna, el cultivo de cebolla presenta
serios problemas de pudricin radical.
Esta situacin ha impactado en la
economa de los productores de la
regin, obligndolos a realizar prcticas
culturales y la aplicacin constante de
fungicidas para el manejo fitosanitario
lo cual continuamente produce muchas
prdidas (Pulido-Herrera et al., 2008).
Estas enfermedades afectan a la
cebolla durante las distintas fases de
desarrollo del cultivo en campo,

reduciendo la produccin y la calidad

del producto. (Awuah y Lorbeer, 1988)
El uso de Trichoderma harzianum ha
sido estudiado mundialmente por sus
excelentes
caractersticas
como
biocontrolador de hongos del suelo y
reconocido como agente de control
biolgico
contra
enfermedades
causadas por hongos fitopatgenos
(Harman, 2006).
Su empleo se justifica por las relaciones
antagonistas
que
establece
fundamentalmente, con los hongos
fitopatgenos que viven en el suelo,
adems de la influencia que ejerce
sobre el crecimiento vegetativo de
algunas
plantas
de
importancia
econmica (Windham et al., 1986,
Andre et al., 1992).
Con base en lo anterior, el objetivo de
la presente investigacin es determinar
la etiologa y control in vitro, de
Trichoderma harzianum
sobre el
agente
causante de la pudricin
radicular en el cultivo Allium cepa L.
(Cebolla)
en el valle de Locumba,
Provincia Jorge Basadre.

MATERIALES Y MTODOS
La investigacin se realiz en el
laboratorio de Botnica de la
Facultad de Ciencias de la
Universidad
Nacional
Jorge
Basadre Grohmann (UNJBG).
Material Biolgico
Se utiliz como material experimental
40 muestras de cebolla (Allium cepa L.)

variedad Ilabaya, en estadio de bulbeo;

proveniente del Anexo de Sagollo,
Distrito de Locumba, Provincia Jorge
Basadre.
Como
antagonista
se
utiliz
Trichoderma harzianum en presentacin
comercial Tricho D.

Las muestras desinfectadas se

colocaron en cmara hmeda,
para acelerar la esporulacin de
los hongos aislados y se
mantuvo
la
humedad
adicionando
agua
destilada
diariamente. (Perdomo, 2007).

Diseo de la Investigacin
Se
emple
un
diseo
no
experimental - descriptivo.

Purificacin del Hongo

Se desarrollaron los hongo en cmara
hmeda, y de procedi al sembrado en
medio de cultivo Agar Papa Dextrosa
(PDA) y se incub a temperatura
ambiente (+/-25C). Al crecer las
colonias se hizo el repique a placas Petri
con Agar Papa Dextrosa (PDA) para su
posterior
identificacin
(Perdomo,
2007).

Toma de muestra
Se tom la muestra de cebolla
en estadio de bulbeo y con
sntomas de la enfermedad
haciendo el cavado alrededor del
bulbo, con un permetro de 5 a
10 cm aproximadamente de
radio a cada bulbo, para lograr
sacar las races sin causarles
algn
dao.
Se
coloc
individualmente las muestras en
una bolsa de papel cerrada
hermticamente para evitar la
desecacin del material.
Se rotul y se transport al
Laboratorio
manteniendo
la
temperatura
ambiente
(Newbiotecnich,
Diagnstico
Fitopatolgico).
Siembra en medio de cultivo
Las plntulas se lavaron con
agua corriente, se seleccion las
races con sintomatologa, se
desinfect con hipoclorito de
sodio al 10% por cinco minutos,
luego se lav con agua destilada
estril, y se retir el exceso de
agua.
Posteriormente se colocaron en
cpsulas de Petri con medio de
cultivo Agar Papa Dextrosa (PDA)
para su crecimiento (Perdomo,
2007).
Cmara hmeda

Identificacin de los Hongos

Para
la
identificacin
se
realiz
montajes con
lactofenol + fucsina
cida como liquido de montaje. Se
observ
las
caractersticas
macroscpicas y microscpicas del
agente aislado y se identific en base a
las claves de Barnett & Hunter, Ellis
(Barnet, H, 1972).

Prueba de Patogenicidad de Koch

Se realiz la Prueba de Patogenicidad
de Koch con la finalidad de confirmar la
patogenicidad del agente causal. Se
hicieron 5 repeticiones por agente
hallado en sustrato estril (tierra de
chacra, arena lavada y humus) en una
proporcin de 2:1:1 respectivamente
con una suspensin de 107 conidias/ml
del agente.
Se evalo peridicamente hasta la
aparicin de sntomas y finalmente se
reaisl los patgenos.
Evaluacin
mediante el
Dual

de
antagonismo
Mtodo del Cultivo

Las pruebas del Cultivo Dual se

realizaron en el Medio de Cultivo Agar
Papa Dextrosa (PDA) colocndose en un
extremo de la placa Petri un disco de
agar de 4 mm con micelio del agente
causal aislado y en el extremo opuesto
el disco de 4 mm con micelio de
Trichoderma harzianum en presentacin
comercial Tricho D a una distancia de 05
cm., y se incub a 25 C. (Howell, 2010)
Para evaluar la eficacia de Trichoderma
harzianum
se midi el crecimiento
radial del patgeno como testigo y del
antagonista cada 24 horas hasta que la
colonia del testigo llen toda la
superficie de la placa Petri.
Para la evaluacin de la capacidad
biocontroladora se emple el clculo del
Porcentaje de Inhibicin del crecimiento
radial (PICR), que se obtiene a partir del
crecimiento de cada patgeno en
cultivo dual, junto con sus respectivos
testigos, empleando la frmula utilizada
por Surez et al. (2008):

Donde R1 es el radio mayor (radio

patgeno-testigo) y R2 es el radio
menor (radio del patgeno en cultivo
dual).

Evaluacin de Antagonismo por

micoparasitismo.
El antagonismo se comprob midiendo
el grado de micoparasitismo de cada
antagonista, el cual se determin por la
escala que proponen Ezzyyyani et l
(2004). La evaluacin se realiz en un
microscopio binocular con aumento de
40x.
Cuadro 1.- Escala para evaluacin de
la capacidad antagnica.

Anlisis estadstico
Se realiz el anlisis descriptivo de las
variables y la prueba de T Student de
muestras
relacionadas
para
las
comparaciones de medias entre grupos,
utilizando el programa estadstico SPSS
(Statistical Package for the Social
Sciences) Versin 19.0

RESULTADOS
Aislamiento e identificacin de
agente etiolgico del Cultivo de
Cebolla
Se identific como agente etiolgico
causante de la pudricin radicular del
cultivo de cebolla
a
Pyrenochaeta
terrestris
asociado
a
Fusarium
oxysporum y Fusarium solani.
De igual modo se logr aislar 14
especies
diferentes
del
genero
Fusarium.
Incidencia de los hongos patgenos
De la totalidad de las muestras se
obtuvo Pyrenochaeta terrestris en 38
aislados, Fusarium sp. en 33 aislados,
Fusarium
oxysporum
en
22
oportunidades, Fusarium solani en 9 y
finalmente Rhizoctonia solani en 1
oportunidad.
Cuadro 2. Incidencia
patgenos aislados
Hongos Patgenos
aislados
Pyrenochaeta terrestris
Fusarium oxysporum
Fusarium solani
Fusarium spp.
Rhizoctonia solani

de

hongos

Nro. de
Incidenci
as
38
22
9
33
1

Asociacin de Hongos patgenos

aislados
Se
obtuvo
la
asociacin
entre
Pyrenochaeta terrestris y Fusarium sp.
con 15 incidencias y
Pyrenochaeta
terrestris con Fusarium solani .
Prueba de Antagonismo mediante
el Mtodo del Cultivo Dual
Se obtuvo como resultado el Porcentaje
de
inhibicin
por
Trichoderma
harzianum:

diferencias significativas entre el PIC de

Fusarium oxysporum y Fusarium solani
con un nivel de confianza del 95% lo cual
acepta la Hiptesis alterna con un 95%
de confiabilidad.
Capacidad antagnica por
micoparasitismo
Se obtuvo la capacidad antagnica Grado
4 con 100% de micoparasitismo en todos
los hongos patgenos aislados.

Cuadro 3: Porcentaje de inhibicin de

crecimiento de Trichoderma harzianum
Agente
etiolgico y
asociados
Pyrenochaeta
terrestris
Fusarium
oxysporum
Fusarium solani

Porcentaje
de inhibicin
74,83%
52,38%
49.33 %

Pyrenochaeta.
oxysporum.

terrestris

Fusarium

Figura 1: Porcentaje de Inhibicin de

Crecimiento - PIC
74.83%
80.00%
70.00%
60.00%
50.00%
40.00%
30.00%
20.00%
10.00%
0.00%

52.38%

49.33%

Fusarium solani.
P. terrestrisF. oxysporum F. solani

Prueba
de
T
para
muestras
relacionadas
A travs de esta prueba se determin
que existe diferencias significativas en el
PIC (porcentaje de inhibicin
de
crecimiento)
entre
Pyrenochaeta.
terrestris con un 74.83% y Fusarium
oxysporum 52.38%
con un nivel de
confianza del 95%.
Se encontr diferencias significativas en
el PIC de Pyrenochaeta terrestris
y
Fusarium solani con un nivel de confianza
de 95% y del mismo modo existe

DISCUSIN
Se identific como agente etiolgico
causante de la pudricin radicular del
cultivo de cebolla
a
Pyrenochaeta
terrestris
asociado
a
Fusarium
oxysporum y Fusarium solani.
Cervantes y Das (2010) en su estudio de
biocontrol de la pudricin radicular
concuerda con los resultados obtenidos,
teniendo como agente de la pudricin a
los hongos patgenos Pyrenochaeta
terrestris y Fusarium oxysporum a los
cuales realiza pruebas de biocontrol con

Trichoderma harzianum logrando una

alta accin antagnica in vitro e in vivo
considerando que aislamientos nativos
de Trichoderma en suelos sembrados con
cebolla seran agentes promisorios en el
control
biolgico.
De
igual
modo
Crdenas (2003) aisl el agente causal
de la Raz Rosada (RR) de la cebolla,
identificndose como P. terrestris.
El
antagonismo
de
Trichoderma
harzianum en presentacin comercial
Tricho D se evalu por el mtodo del
cultivo dual, confrontando a los agentes
etiolgicos aislados con el antagonista
Trichoderma
harzianum,
obteniendo
como resultado el PIC de 74,83% sobre
Pyrenochaeta terrestris, 52,38% sobre
Fusarium oxysporum y de 49.33 % en
Fusarium solani.
Un estudio de Hernndez et al., (2006),
de evaluaciones in vitro del antagonismo
de especies de Trichoderma sobre
hongos fitopatgenos que afectan las
vitroplantas de pia determinaron (PIC)
de la colonia Fusarium spp. con T.
harzianum fue de un 48%.
De igual modo Velzquez (2006),
encontr una eficiente inhibicin del
crecimiento micelial de T. harziamun
frente a otros patgenos del cultivo de
mango,
incluyendo
Fusarium
subglutinans y Fusarium oxysporum,
agentes causales de la escoba de
bruja, obtenindose un PIC de 42,02 y
62,9%, respectivamente.
Fernndez
(2009)
describe
el
comportamiento de los cultivos duales de
Trichoderma harzianum y F. oxysporum
con la reduccin del crecimiento de F.
oxysporum en el dcimo da, entre sus 2
cepas
comerciales
con
el
mayor
porcentaje de PIC con un 65,91%,
seguido por 64,61% sin diferencias
significativas entr los tratamientos.

Das, 2010 en su estudio de biocontrol de

la pudricin radicular en cebolla reporta
que el porcentaje de inhibicin de
crecimiento de Pyrenochaeta terretris de
58 % a los 7 das de confrontacin, de
igual modo observ que la cepa de
Trichoderma inhibi el crecimiento de F.
oxysporum hasta un 70% a las 168 h de
exposicin; corroborando los resultados
obtenidos en el presente estudio.
Cervantes Daz (2010) indica en su
estudio de biocontrol con Trichoderma
que
se
observ
una
capacidad
antagnica de tipo hiperparastica en
cuanto Trichoderma coloniz toda la
superficie del medio y redujo la colonia
de los patgeno a
P. terrestris y
F. oxysporum.
Zago, 2006 resalta el micoparasitismo de
Trichoderma
harzianum sobre
F.
oxysporum con un grado 4 de la escala
de Ezzyyani et l (2004). En el caso de
Suarez et al. (2008) en su estudio de
Antagonismo in vitro de T. harzianum
Rifai sobre F. solani destaca que observa
micoparasitismo en grado 4 para los
aislamiento
de
F.
solani
en
los
tratamientos con
T. harzianum TA-5
y TA-6. Todos estos resultados similares a
los obtenidos en el presente estudio.
CONLUSIONES
El agente etiolgico de la pudricin
radicular de la cebolla es Pyrenochaeta
terrestris
asociado
a
Fusarium
oxysporum y Fusarium solani.
Trichoderma harzianum tuvo control in
vitro sobre el desarrollo de Pyrenochaeta
terrestris con un porcentaje de inhibicin
de crecimiento de 74,83%, Fusarium
oxysporum 52,38% y de 49,33% en el
caso de Fusarium solani.
Las tres especies fueron positivos a la
Prueba de Patogenicidad.

RECOMENDACIONES
Realizar el control de la pudricin
radicular de cebolla con el biocontrolador
Trichoderma harzianum en campo en
localidades donde se produce cebolla en
la Regin Tacna. Asimismo se recomienda
hacer los estudios sobre recuento de
poblacin fngica en el suelo del campo
de cultivo de cebolla en el Valle de
Locumba, Provincia Jorge Basadre.

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